CN101775048A

CN101775048A - 一种从红景天中制备红景天苷的方法

Info

Publication number: CN101775048A
Application number: CN201010103137A
Authority: CN
Inventors: 刘东锋; 郭琴; 杨成东
Original assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2010-02-01
Filing date: 2010-02-01
Publication date: 2010-07-14

Abstract

本发明涉及一种从红景天中制备红景天苷的方法，工艺以红景天药材为原料，热水提2-3次，加ZTC1+1澄清剂除去鞣质，离心所得上清液加入大孔吸附树脂，采用水及不同浓度乙醇梯度洗脱，分离产物经中压硅胶柱进行分离，浓缩洗脱液，静置结晶，丙酮加热溶解粗晶，冷却重结晶得高纯度红景天苷。采用该法生产品操作简单，纯度高，所采用的大孔吸附树脂和中压硅胶柱均可反复使用，用于洗脱的有机相回收后亦可重复利用，可扩大工业化生产。

Description

一种从红景天中制备红景天苷的方法

技术领域：

本发明涉及一种从红景天中制备红景天苷的方法，尤其是一种热水提，树脂和中压硅胶柱分离纯化等工序制备红景天苷的方法。

背景技术：

红景天苷(Salidroside)，又名毛柳苷、柳得洛苷。

分子式：C₁₄H₂₀O₇

化学名：对羟基苯乙醇吡喃葡萄糖苷

分子量：300.30

分子结构式：

物理性质：为无色透明针状结晶，熔点165.5℃-166.5℃，溶于水、乙醇、甲醇、丁醇，难溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯。

红景天的药理活性主要表现在抗缺氧、抗疲劳、抗微波辐射、清除体内自由基，调节和恢复人体内代谢平衡。红景天苷能恢复受微波辐射后小鼠脑内的单胺类递质，对脾脏及胸腺内环磷酸腺苷，淋巴细胞转化率，血清溶血素等出现的抑制性变化，具有扶正作用；能显著降低肝脏血清LPO的浓度，具有较强抗脂质过氧化作用，能降低酸性磷酸酶活性，促进DNA合成，提高巨噬细胞吞噬功能；能显著降低肾上腺素性高血糖。对叠氮钠诱导的线粒体损伤有保护作用，能够改善线粒体功能，这可能是其抗老年痴呆的机制之一。

红景天苷主要来源于景天科植物大花红景天Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba的干燥根及根茎，红景天中红景天苷的含量为0.5％-2％。

国内目前制备红景天苷的方法，主要是醇提水沉硅胶吸附法、水提醇沉大孔树脂吸附法、微波破壁提取法、生物合成转化法等。如专利CN1522746“一种红景天药物制剂的制备方法”，公开了二次醇沉、大孔树脂吸附的方法，红景天苷含量较低；如专利CN1534040“一种红景天有效成分提取物的制备方法”，公开了醇提，有机溶剂萃取，D101大孔吸附树脂纯化分离，水和10％-90％乙醇梯度洗脱等工序的制备方法，红景天苷含量低，未分离得到单体；郭建鹏等公开发表了“高山红景天酶解工艺研究”，文献中采用酶解法，提取率高，耗时短，但苷元含量较高。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种制备方法，能有效提取高纯度的红景天苷。为了解决上述技术问题，本发明提取技术方案如下：

1)水提取：将红景天药材干燥，粉碎后置热水中，料液比1∶15-30；

2)除鞣质：将上述所得提取物过滤、浓缩，浓缩液加入适量ZTC澄清剂，离心；

3)树脂吸附：将上述所得上清液加入大孔吸附树脂，采用水和不同浓度乙醇梯度洗脱，TLC检测；

4)硅胶柱层析：将上述红景天苷流分加入中压硅胶柱，先用氯仿洗脱，再用氯仿-甲醇洗脱，TLC和HPLC同时跟踪检测；

5)结晶：将上述洗脱液浓缩，静置结晶；

6)重结晶：上述粗结晶物，丙酮加热溶解，冷却结晶，过滤干燥即得产品。

所述除鞣质方法：加入ZTC1+1澄清剂。优选加入顺序为先加入ZTC组分B再加入ZTC组分A；澄清剂A和B用量分别为1.2g/L和0.6g/L。

所述大孔吸附树脂：大孔吸附树脂可选用HPD-100、AB-8、NKA-9、S-8、CAD-40型等，洗脱溶液中乙醇的含量为0-50％，按0、20％、50％的次序依次洗脱，药材与树脂用量比为1∶1-1∶2(kg/L)。优选HPD-100大孔吸附树脂。

所述中压硅胶柱层析条件：填充硅胶粒径为45-75μm，硅胶用量为样品量的15-20倍，采用氯仿、氯仿-丁醇(7∶3)洗脱，负载量为35g/kg。

所述重结晶条件：丙酮加热溶解粗结晶，冷却静置析晶，养晶时间10-16小时，结晶2-3次。

综上所述，本发明存在以下优点：

1)ZTC1+1澄清剂除鞣质，不影响红景天苷含量；

2)大孔吸附树脂和中压硅胶柱层析纯化分离，可提高提取效率和产品含量。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

下述实施例中红景天苷的洗脱跟踪检测采用薄层色谱法(参照2005年版中国药典红景天鉴别项)，具体方法如下：

薄层板：羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板；

展开剂：三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)的下层溶液为展开剂；

展开，展距18cm，取出，晾干，置碘蒸气中熏。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

下述实施例中红景天苷的含量测定采用高效液相色谱法(参照翟旭峰等“大花红景天中红景天苷的含量测定”文献)，具体方法如下：

高效液相色谱条件：

色谱柱：C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；

流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸钠溶液(9∶91)；

流速：1.0mL/min；

检测波长：220nm；

柱温：30℃；

进样量：10μl。

实施例1：

取药材红景天，干燥粉碎成20目，取50kg加入装有1000L70℃水的提取罐中，恒温提取30min，提取3次，合并提取液3000L，过滤，浓缩至300L；加入360g澄清剂B，再加入180g澄清剂A，离心，取上清液，加入HPD-100大孔吸附树脂，先用4BV水洗脱，再依次用20％、50％乙醇梯度洗脱，洗脱速度为3BV/h，TLC检测；将红景天苷流分回收试剂，丁醇再溶解泵入中压硅胶柱，先用4BV氯仿脱，再用氯仿-丁醇(7∶3)洗脱，洗脱速度2BV/h，TLC和HPLC同时检测，至无红景天苷成分，收集含红景天苷流分部分，回收试剂至体积的1/3，放置结晶，养晶，滤出粗结晶物1053g，含量90％。粗结晶物用丙酮加热饱和溶解，低温放置结晶，养晶15小时，结晶2次，干燥即得产品689g，含量98.4％。

实施例2：

取药材红景天，干燥粉碎成10目，取10kg加入装有250L80℃水的提取罐中，恒温提取30min，提取2次，合并提取液500L，过滤，浓缩至50L；加入60g澄清剂B，再加入30g澄清剂A，离心，取上清液，加入HPD-100大孔吸附树脂，先用4BV水洗脱，再依次用20％、50％乙醇梯度洗脱，洗脱速度为4BV/h，TLC检测；将红景天苷流分回收试剂，丁醇再溶解泵入中压硅胶柱，先用5BV氯仿洗脱，再用氯仿-丁醇(7∶3)洗脱，洗脱速度1.5BV/h，TLC和HPLC同时检测，至无红景天苷成分，收集含红景天苷流分部分，回收试剂至体积的1/4放置结晶，养晶，滤出粗结晶物212g，含量87％。粗结晶物用丙酮加热饱和溶解，低温放置结晶，养晶12小时，结晶3次，干燥即得产品148g，含量98.1％。

实施例3：

取药材红景天，干燥粉碎成20目，取5kg加入装有80L90℃水的提取罐中，恒温提取30min，提取3次，合并提取液240L，过滤，浓缩至48L；加入29g澄清剂B，再加入14g澄清剂A，离心，取上清液，加入HPD-100大孔吸附树脂，先用6BV水洗脱，再依次用20％、50％乙醇梯度洗脱，洗脱速度为5BV/h，TLC检测；将红景天苷流分回收试剂，丁醇再溶解泵入中压硅胶柱，先用5BV氯仿洗脱，再用氯仿-丁醇(7∶3)洗脱，洗脱速度2BV/h，TLC和HPLC同时检测，至无红景天苷成分，收集含红景天苷流分部分，回收试剂至体积的1/3放置结晶，养晶，滤出粗结晶物98g，含量92％。粗结晶物用丙酮加热饱和溶解，低温放置结晶，养晶10小时，结晶3次，干燥即得产品61g，含量98.6％。

实施例4：

取药材红景天，干燥粉碎成10目，取2kg加入装有56L80℃水的提取罐中，恒温提取30min，提取2次，合并提取液112L，过滤，浓缩至11L；加入13.2g澄清剂B，再加入6.6g澄清剂A，离心，取上清液，加入HPD-100大孔吸附树脂，先用5BV水洗脱，再依次用20％、50％乙醇梯度洗脱，洗脱速度为3BV/h，TLC检测；将红景天苷流分回收试剂，丁醇再溶解泵入中压硅胶柱，先用8BV氯仿洗脱，再用氯仿-丁醇(7∶3)洗脱，洗脱速度1.5BV/h，TLC和HPLC同时检测，至无红景天苷成分，收集含红景天苷流分部分，回收试剂至体积的1/4放置结晶，养晶，滤出粗结晶物47g，含量91％。粗结晶物用丙酮加热饱和溶解，低温放置结晶，养晶16小时，结晶2次，干燥即得产品29g，含量98.2％。

Claims

1.一种从红景天中制备红景天苷的方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

1)水提：将红景天药材干燥，粉碎后置热水中，料液比1∶15-30；

4)硅胶柱层析：将上述红景天苷流分加入中压硅胶柱，先用乙醚洗脱、再用氯仿-甲醇洗脱，TLC和HPLC同时跟踪检测；

5)结晶：将上述洗脱液浓缩，静置结晶；

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述提取条件：热水温度为70～90℃，提取时间为30min，提取2-3次；

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述除鞣质方法：加入ZTC1+1澄清剂，优选加入顺序为先加入ZTC组分B再加入ZTC组分A；澄清剂A和B用量分别为1.2g/L和0.6g/L。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述大孔吸附树脂：大孔吸附树脂可选用HPD-100、AB-8、NKA-9、S-8、CAD-40型等，药材与树脂用量比为1∶1-1∶2(kg/L)。洗脱溶液中乙醇的含量为0-50％，按0、20％、50％的次序依次洗脱。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述中压硅胶柱层析条件：填充硅胶粒径为45-75μm，硅胶用量为样品量的15-20倍，采用氯仿、氯仿-丁醇(7∶3)洗脱，负载量为35g/kg。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述重结晶条件：丙酮加热溶解粗结晶，冷却静置析晶，养晶时间10-16小时，结晶2-3次。