CN102838455A - 一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，它具体包括将原药材虎杖粉碎、酶解、提取、离心、上柱和干燥等步骤制得白藜芦醇产品，本发明纯化工艺简单，克服了以前需要反复结晶或者高成本的柱层析，一次上柱就能得到高含量的白藜芦醇，既提高了产品收率，又降低了生产成本，此外，本发明采用酿酒曲对原料进行酶解，24小时就能酶解完全，大大缩短了生产周期，并且所用溶剂为乙醇和水，无污染，生产安全。
Description
技术领域
本发明涉及一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法。
背景技术
白藜芦醇(resveratrol，Res．)，化学名称为3，4’，5-三羟基-二苯乙烯(3，4’，5-trihydroxystilbene)。其别名为虎杖甙元，又称芪三酚，分子式为C14H12O3，其相对分子质量为228．25，纯品为无色针状结晶，熔点为256-258℃，在261℃以上易升华。
目前，提取白藜芦醇的方法及报道很多，但都采用有机溶剂提取，萃取或者柱层析提纯工艺，生产成本高,产品收率低、不适用于工业化大生产。
中国专利201010127142.6一种高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，采用先发酵酶解，再有机混合溶剂提取，经浓缩、醇沉、水沉、过滤、醇溶、柱层析、纯化等步骤，精制得98％的产品。该方法生产周期长，由于发酵酶的不同选择，酶解那块就需4-10天时间，柱层析采用硅胶或者氧化铝，生产成本高，再者加入有机溶剂，增加生产安全风险，不适用于大生产。
中国专利200310112538.3虎杖苷和白藜芦醇的新制备方法，采用聚酰胺层析法分离纯化虎杖苷和/或白藜芦醇，此方法采用聚酰胺树脂进行分离，生产成本高，对生产设备要求高，再者因为没有对白藜芦醇苷进行转化，如生产白藜芦醇收率非常低，不适用于大生产。
中国专利99115156.9一种从中药虎杖中提取白藜芦醇的工艺，采用在原料中加入复合酶在恒温下进行酶解反应４８～７２小时获得酶解原料；再用溶剂萃取、浓缩获得含白藜芦醇的半成品，再经精制即得。此发明利用溶剂进行萃取，白藜芦醇转化低，生产成本高，不适用于大生产。
发明内容
本发明为解决现在技术中的问题，提供一种生产成本低、生产周期短、产品收率高，且未加入任何有机溶剂，更适用于大规模生产的从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法。
本发明采用以下技术方案予以实现：
本发明一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，它包括以下步骤；
a. 粉碎：将原药材虎杖用药材粉碎机粉碎成5-20目的细小颗粒。
b. 酶解：将步骤a粉碎好的虎杖颗粒加入其1-5倍重量的水润湿，并加入相当于原药材虎杖0.1-1%重量的酶解物，充分搅拌均匀，于30-40℃下酶解24小时，所述酶解物为酵母、酿酒曲、植物水解酶、纤维素酶的一种或几种混合。
c. 提取：将步骤b酶解好后的药材虎杖每次加入其4-10倍重量、浓度为50-90%的乙醇，加热回流提取1小时，提取三次，合并三次提取药液，经回收乙醇，浓缩至药液量为原药材重量的1-10倍，静置放冷。
d. 离心：将步骤c静置放冷后的药液经三足离心或者管式离心过滤，得滤液。
e. 上柱：将步骤d的滤液直接上树脂柱，先用水洗脱干净，然后用3-10倍量树脂体积的浓度为40-90%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为原药材重量的0.5-5倍，静置放冷，产生浅黄白色结晶。
. 干燥：将步骤e的结晶体用水冲洗干净后，置于60℃真空干燥箱进行干燥1-5小时，干燥完后即得白色产品，白藜芦醇含量在90%以上。
优选的，所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，所述步骤b为：将步骤a粉碎好的虎杖颗粒加入5倍量水浸泡药材，并加入相当于原药材的0.5%重量的酶解物，充分搅拌均匀，于35-40℃酶解24小时，最佳酶解温度为38℃，最佳酶解物为酿酒曲。
优选的，所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，所述步骤c为：
将步骤b酶解好后的药材虎杖每次加入其重量的5-8倍量、浓度为60-80%的乙醇，加热回流提取1小时，提取三次，合并三次提取药液，经回收乙醇，浓缩至药液量为原药材重量的3-6倍，静置放冷。
更优选的，所述步骤c中，乙醇浓度为75% ，药液浓缩至药液量为原药材重量的5倍。
本发明方案中，优选的步骤e为：
将步骤d的滤液直接上树脂柱，当进完药液后，先用纯化水洗至无色透明，然后用4-7倍量树脂体积的浓度为50-70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为原药材重量的1.5-3.5倍，静置放冷，产生浅黄白色结晶，所述树脂为D-101，AB-8，XC-7或LX-17中的一种。
所述步骤e最佳为：将步骤d的滤液直接上树脂柱，当进完药液后，用纯化水洗至无色透明后，用5倍量树脂体积的65%浓度乙醇解吸，收集65%乙醇洗脱液，经回收乙醇后，所述药液减压浓缩至药液量为原药材重量的2倍。所述树脂最佳为XC-7大孔吸附树脂。
本发明一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，最佳具体方案为以下步骤：
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材重量0.5%的酿酒曲，温度控制在38℃，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为75%的乙醇回流提取三次，每次提取1小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的XC-7大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%的乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为200公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60℃真空干燥箱，干燥4小时，得产品白藜芦醇。
本发明与现有技术相比具有以下显著的优点：
（1）本发明纯化工艺简单，一改以前需要反复结晶或者高成本的柱层析，一次上柱就能得到高含量的白藜芦醇，既提高了产品收率，又降低了生产成本。
（2）本发明采用酿酒曲对原料进行酶解，24小时就能酶解完全，大大缩短了生产周期。
（3）所用溶剂为乙醇和水，无污染，生产安全。
（4）且未加入任何有机溶剂，更适用于大规模生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加300公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材0.5%的酵母，温度控制在35℃，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤浓度为65%的乙醇回流提取三次，每次提取1小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为400公斤，静置放冷后，经三足离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的XC-7大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%的乙醇洗脱干净，收集65%乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为200公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60℃真空干燥箱，干燥4小时，称重得产品1公斤，白藜芦醇含量为90.52%。
实施例2
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成15目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材重量0.5%的酿酒曲，温度控制在38℃，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为75%的乙醇回流提取三次，每次提取1小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的XC-7大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%的乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为200公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60℃真空干燥箱，干燥3小时，得，称重得产品1.1公斤，白藜芦醇含量为92.68%。
实施例3
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材0.5%的酿酒曲，温度控制在39℃，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为80%的乙醇回流提取三次，每次提取1小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的AB-8大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为100公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60℃真空干燥箱，干燥4小时，称重得产品1.1公斤，白藜芦醇含量为85.12%。
实施例4
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成18目粗粉，加300公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材0.5%的酵母，温度控制在35℃，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为60%的乙醇回流提取三次，每次提取1小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的D-101大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为100公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60℃真空干燥箱，干燥2小时，称重得产品0.9公斤，白藜芦醇含量为86.12%。
实施例5
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材0.5%的纤维素酶，温度控制在35℃，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为70%的乙醇回流提取三次，每次提取1小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的LX-17大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为100公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60℃真空干燥箱，干燥4小时，称重得产品1.0公斤，白藜芦醇含量为90.52%。
实施例6
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材0.5%的植物水解酶，温度控制在40℃，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为85%的乙醇回流提取三次，每次提取1小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的XC-7大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为100公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60℃真空干燥箱，干燥5小时，称重得产品1.1公斤，白藜芦醇含量为91.65%。
本发明的方案中，所述酶解物优选为酿酒曲，用不同酶解物对虎杖原药材进行对比酶解实验，结果表明，在24小时内酶解最完全的为酿酒曲，见表1。
表1 不同酶解物酶解情况
| 酶解物 | 酶解时间 | 酶解温度 | 酶解后原药材中虎杖苷含量 | 酶解后原药材中白藜芦醇含量 |
| 酵母 | 24小时 | 38℃ | 0.25% | 1.12% |
| 酿酒曲 | 24小时 | 38℃ | 0.03% | 1.23% |
| 纤维素酶 | 24小时 | 38℃ | 0.85% | 0.82% |
| 植物水解酶 | 24小时 | 38℃ | 0.54% | 0.96% |
在本发明的方案中，所述的吸附树脂优选为XC-7大孔吸附树脂。用不同树脂对虎杖提取药液中白藜芦醇的除杂纯化比较，结果表明，XC-7大孔吸附树脂对白藜芦醇纯化最好，结果见表2。
表2不同树脂对白藜芦醇纯化结果
| 树脂型号 | 药液量 | 树脂体积 | 上柱流速 | 白藜芦醇含量 |
| D-101 | 500ml | 100ml | 2BV/h | 28.25% |
| AB-8 | 500ml | 100ml | 2BV/h | 32.17% |
| XC-7 | 500ml | 100ml | 2BV/h | 50.58% |
| LX-17 | 500ml | 100ml | 2BV/h | 20.46% |
Claims (10)
1.一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，它包括以下步骤；
a. 粉碎：将原药材虎杖用药材粉碎机粉碎成5-20目的细小颗粒；
b. 酶解：将步骤a粉碎好的虎杖颗粒加入其1-5倍重量的水润湿，并加入相当于原药材虎杖0.1-1%重量的酶解物，充分搅拌均匀，于30-40℃下酶解24小时，所述酶解物为酵母、酿酒曲、植物水解酶、纤维素酶的一种或几种混合；
c. 提取：将步骤b酶解好后的药材虎杖每次加入其4-10倍重量、浓度为50-90%的乙醇，加热回流提取1小时，提取三次，合并三次提取药液，经回收乙醇，浓缩至药液量为原药材重量的1-10倍，静置放冷；
d. 离心：将步骤c静置放冷后的药液经三足离心或者管式离心过滤，得滤液；
e. 上柱：将步骤d的滤液直接上树脂柱，先用水洗脱干净，然后用3-10倍量树脂体积的浓度为40-90%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为原药材重量的0.5-5倍，静置放冷，产生浅黄白色结晶；
f. 干燥：将步骤e的结晶体用水冲洗干净后，置于60℃真空干燥箱进行干燥1-5小时，干燥完后即得白色产品白藜芦醇。
2.如权利要求1所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述步骤b为：将步骤a粉碎好的虎杖颗粒加入5倍量水浸泡药材，并加入相当于原药材的0.5%重量的酶解物，充分搅拌均匀，于35-40℃酶解24小时。
3.如权利要求2所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述酶解温度为38℃。
4.如权利要求2所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述酶解物为酿酒曲。
5.如权利要求1所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述步骤c为：
将步骤b酶解好后的药材虎杖每次加入其重量的5-8倍量、浓度为60-80%的乙醇，加热回流提取1小时，提取三次，合并三次提取药液，经回收乙醇，浓缩至药液量为原药材重量的3-6倍，静置放冷。
6.如权利要求5所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，
所述步骤c中，乙醇浓度为75% ，药液浓缩至药液量为原药材重量的5倍。
7.如权利要求1所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述步骤e为：
将步骤d的滤液直接上树脂柱，当进完药液后，先用纯化水洗至无色透明，然后用4-7倍量树脂体积的浓度为50-70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为原药材的1.5-3.5倍，静置放冷，产生浅黄白色结晶，所述树脂为D-101，AB-8，XC-7或LX-17中的一种。
8.如权利要求7所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述步骤e为：
将步骤d的滤液直接上树脂柱，当进完药液后，用纯化水洗至无色透明后，用5倍量树脂体积的65%浓度乙醇解吸，收集65%乙醇洗脱液，经回收乙醇后，所述药液减压浓缩至药液量为原药材重量的2倍。
9.如权利要求7或8所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，所述树脂为XC-7大孔吸附树脂。
10.如权利要求1所述的一种从虎杖中提取高含量白藜芦醇的新方法，其特征是，它还可以具体为以下步骤：
取100公斤虎杖原料，用药材粉碎机粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡药材，并加入相当于原药材重量0.5%的酿酒曲，温度控制在38℃，酶解24小时，酶解完后，加入500公斤、浓度为75%的乙醇回流提取三次，每次提取1小时，合并三次提取液，经回收乙醇，减压浓缩至药液量为500公斤，静置放冷后，经管式离心机过滤，滤液直接上已处理好的100L体积的XC-7大孔型树脂柱，药液上完后，先加水洗脱至树脂柱流出液呈浅黄色，再加500L、浓度为65%的乙醇洗脱干净，收集浓度为65%的乙醇洗脱液，经回收乙醇后，减压浓缩至药液量为200公斤，静置放冷后，完全析出浅黄白色晶体，取晶体经水洗脱至无颜色，晶体置于60℃真空干燥箱，干燥4小时，得白藜芦醇产品。
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| CN107162888A (zh) * | 2017-05-31 | 2017-09-15 | 湖北中鑫生物科技有限公司 | 从虎杖中制备白藜芦醇和大黄素的生产方法 |
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