CN101600475A - 修正蛋白质错误折叠的小型化合物及其使用 - Google Patents

Abstract

本发明的特色为包括至少一种选自蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂或组蛋白去乙酰酶抑制剂的化合物的组成物和方法，其通过在活体内修正错误折叠的蛋白质而适于治疗或预防对象的蛋白质构象疾病。所述的组成物和方法可进一步包括11－顺式－视黄醛或9－顺式－视黄醛化合物。蛋白质构象病症和/或疾病的例子可包括视网膜色素变性、老年黄斑变性、青光眼、角膜营养不良、视网膜劈裂症、斯特格病变(Stargardt’s disease)、常染色体显性玻璃膜疣(autosomal dominant druzen)、贝斯特黄斑营养不良、α1－抗胰蛋白酶缺乏症、囊状纤维症、亨廷顿病、帕金森氏症、阿尔茨海默症、肾源性尿崩症、癌症和/或Jacob－Creutzfeld病。

Description

修正蛋白质错误折叠的小型化合物及其使用

相互参照的相关申请案

本申请案以2005年7月27日所申请的美国第60/703,068号临时申请案主张优先权，其内容在此并入作为参考。

联邦政府赞助研究所完成发明的权利说明

本工作是由国家眼科研究所赞助支持，批准号为EY016070-01。政府可拥有本发明的一定权利。

背景技术

蛋白质必须折叠成正确的三维构象以达到其生物功能。一条多肽的天然构象编码在其初级的氨基酸序列中，而且即使只是在一条氨基酸序列中的单一突变，也会损害蛋白质完成其适当构象的能力。当蛋白质无法正确折叠时，其在生物上和临床上的作用会因而受到破坏。蛋白质的聚集和错误折叠是造成许多人类疾病的主要原因，例如常染色体显性视网膜色素变性、阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease)、α1-抗胰蛋白酶缺乏症、囊状纤维症、肾源性尿崩症和朊介导感染等。在特定的生化途径中缺乏所需功能的蛋白质量，会导致如囊状纤维症的疾病，其中，发生在囊状纤维化跨膜传导调节蛋白(CFTR)，也就是在上皮细胞顶端膜上所表达的cAMP激活氯离子通道的突变，会影响其形成、加工和运送至需要其功能的细胞质膜的能力。在其他蛋白质折叠的疾病中，由于错误折叠蛋白质的细胞毒性作用所导致的疾病，有如因淀粉样斑的聚集而造成神经元损伤的阿尔茨海默症。

发明内容

本发明的特色为通过在活体内修正错误折叠的蛋白质，因而适于治疗或预防蛋白质构象疾病的组成物和方法，以及在真核细胞中增加表达具有生化功能构象的重组蛋白质的方法。

一方面，本发明的特色大体而言是治疗以患有蛋白质构象疾病(PCD)(例如α1-抗胰蛋白酶、囊状纤维症、亨廷顿病(Huntington’sdisease)、帕金森氏症(Parkinson’s disease)、阿尔茨海默症、肾源性尿崩症、癌症和Jacob-Creutzfeld病)为对象(例如人类的哺乳动物)的方法。所述方法包括投予任何一种或更多种的下列化合物：蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂，其中，所述对象被投予有效剂量的前述化合物以进行治疗。在一个具体例中，所述的PCD是选自由视网膜色素变性、老年黄斑变性、青光眼、角膜营养不良、视网膜劈裂症、斯特格病变(Stargardt’s disease)、常染色体显性玻璃膜疣和贝斯特黄斑营养不良(Best’s macular dystrophy)所组成群组的眼部PCD。在另一个具体例中，所述方法进一步涉及投予所述对象11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体。至少一种前述化合物和11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体的组合，特别适于治疗视网膜色素变性和老年黄斑变性。

在其他具体例中，所述的PCD为囊状纤维症，则前述方法进一步涉及投予选自由抗生素、维生素A、D、E和K的补充剂、沙丁胺醇支气管扩张、链道酶和布洛芬所组成群组的试剂；所述的PCD为亨廷顿病，则前述方法进一步涉及投予选自由氟呱啶醇、吩噻嗪、利血平、丁苯那嗪、金刚烷胺和辅酶Q10所组成群组的试剂；所述的PCD为帕金森氏症，则前述方法进一步涉及投予选自由左旋多巴、金刚烷胺、溴隐停、培高利特、阿扑吗啡、苄丝肼、麦角乙脲、美舒麦角、麦角脲、麦角腈、美金刚胺、甲麦角林、吡贝地尔、酪胺、酪氨酸、苯丙氨酸、甲磺酸溴隐亭、甲磺酸培高利特、抗组胺剂、抗抑郁药和单胺氧化酶抑制剂所组成群组的试剂；所述的PCD为阿尔茨海默症，则前述方法进一步涉及投予选自由多奈呱齐、利斯的明、加兰他敏和他克林所组成群组的试剂；所述的PCD病为肾源性尿崩症，则前述方法进一步涉及投予选自由氯噻嗪/氢氯噻嗪、阿米洛利和吲哚美辛所组成群组的试剂；所述的PCD是癌症，则前述方法进一步涉及投予选自由阿比特龙醋酸、六甲蜜胺、脱水长春碱、auristatin、贝沙罗汀、比卡鲁胺、BMS184476、2，3，4，5，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧苯基)苯磺酰胺、博来霉素、N，N-二甲基-L-缬氨酰-L-缬氨酰-N-甲基-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-脯氨酸-t-丁酰胺、肿瘤坏死因子、西马多丁、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、3′，4′-二脱氢基-4′-脱氧-8′-去甲长春碱、多西紫杉醇、多西他赛、卡铂、卡莫司汀(BCNU)、顺铂、自念珠藻环肽、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪(DTIC)、放线菌素、柔红霉素、海兔毒素、多柔比星(阿霉素)、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、非那雄胺、氟他胺、羟基脲和羟基脲紫杉烷、异环磷酰胺、利阿唑、氯尼达明、洛莫司汀(CCNU)、甲二氯甲二乙胺(氮芥)、美法仑、羟乙基磺酸米伏布林、根瘤菌素、sertenef、链脲佐菌素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、尼鲁米特、奥那司酮、紫杉醇、泼尼莫司汀、丙卡巴肼、RPR109881、磷酸雌二醇氮芥、他莫昔芬、他索那明、紫杉醇、维甲酸、长春碱、长春新碱、硫酸长春地辛碱和长春氟宁所组成群组的试剂

在一个相关的方面中，本发明的特色是治疗以被诊断患有视网膜色素变性为对象的方法，前述方法涉及投予所述对象11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛；以及投予至少一种额外选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的化合物，其中，11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和前述化合物是以有效的剂量同时或在14天内相互投予所述对象以进行治疗。

在前述方面的多个具体例中，11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和前述化合物是在24小时内，5、10或14天内相互投予；或是同时投予。在前述方面的其他具体例中，11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和前述化合物是投予眼部(例如眼内)。在前述方面的其他具体例中，11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和前述化合物各别混入提供其长期释放的组成物中(例如微球体、纳米球体或纳米乳剂)或使用给药装置以达到其长期的释放。在前述方面的其他具体例中，前述方法进一步包括投予维生素A的补充剂。

在又一个方面中，本发明的特色为在细胞内提高具有生化功能构象的蛋白质量的方法，所述方法涉及将细胞与至少一个选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的有效量化合物接触；以及识别前述具有生化功能构象的蛋白质量的提高。在一个具体例中，前述方法进一步涉及将所述细胞与11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体接触。在另一个具体例中，所述细胞(例如活体外或活体内的哺乳动物或人类细胞)包括形成聚集体或纤维蛋白质的突变蛋白质(例如视蛋白、肌纤蛋白、脂褐质蛋白、β-H3)。

在又另一个方面中，本发明的特色是一种用于治疗眼部PCD的药学组成物，其是在药学上可接受的赋形剂中包含有有效剂量的11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和至少一个额外选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的有效量化合物。

在又另一个方面中，本发明的特色是一种用于治疗视网膜色素变性的药学组成物，其是在药学上可接受的赋形剂中包含有有效剂量的11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和至少一个额外选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的有效量化合物。

在另一个方面中，本发明的特色是一种用于治疗眼部PCD的试剂盒，所述试剂盒包括有效剂量的11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和至少一个额外选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的有效量化合物。

在又另一个方面中，本发明的特色是一种用于治疗视网膜色素变性的试剂盒，所述试剂盒包括有效剂量的11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和至少一个额外选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的有效量化合物。

在又另一个方面中，本发明的特色是一种识别适用于治疗以患有眼部PCD为对象的化合物的方法，所述方法涉及在活体外将表达错误折叠蛋白质的细胞与候选化合物接触；以及确定从所述细胞中恢复成正确折叠的蛋白质相对于对照细胞的产量，其中，通过在所述被接触细胞内正确折叠蛋白质产量的提高，识别适用于治疗以患有PCD为对象的化合物。

在又另一个方面中，本发明的特色是一种识别适用于治疗以患有视网膜色素变性为对象的化合物的方法，所述方法涉及在活体外将表达错误折叠蛋白质的细胞与(i)11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛，以及(ii)候选化合物接触；以及确定从所述细胞中恢复成正确折叠的蛋白质相对于对照细胞的产量，其中，通过在所述被接触细胞内正确折叠蛋白质产量的提高，识别适用于治疗以患有视网膜色素变性为对象的化合物。在一个具体例中，所述的错误折叠蛋白质(例如视蛋白)包含有突变(例如P23H突变)。

在又另一个方面中，本发明的特色是一种治疗以患有蛋白质构象疾病(PCD)为对象的方法。本发明涉及投予所述对象有效剂量的蛋白酶体抑制剂或自噬抑制剂以治疗所述对象。

在又另一个方面中，本发明的特色是一种治疗以患有视网膜色素变性为对象的方法，所述方法涉及投予所述对象有效剂量的蛋白酶体抑制剂或自噬抑制剂(例如3-甲基腺嘌呤)以治疗所述对象。在一个具体例中，前述的蛋白酶体抑制剂是可逆性的蛋白酶体抑制剂(例如MG132)。在另一个具体例中，前述的自噬抑制剂选自由3-甲基腺嘌呤、3-甲基腺苷、腺苷、冈田酸、N⁶-巯基嘌呤核糖核苷(N⁶-MPR)、胺基硫化腺苷类似物、5-氨基-4-咪唑甲酰胺核糖核苷(AICAR)和巴佛洛霉素A1所组成的群组。

在又另一个方面中，本发明的特色是一种用于产生具有生化功能构象的重组蛋白质的方法，前述方法涉及将表达前述重组蛋白质的细胞(例如，真核细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞)与选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的化合物接触；以及从所述细胞中分离前述的重组蛋白质，其中，所述方法产生具有生化功能构象的重组蛋白质。在一个具体例中，所述方法进一步包括测量前述蛋白质的生物活性。在另一个具体例中，前述的生物活性是通过使用酶分析或分光光度法测得。在另一个具体例中，所述方法进一步涉及将前述细胞与11-顺式-视黄醛(例如11-顺式-视黄醛的7环固定异构体)接触。

在任何前述方面的多个具体例中，所述的蛋白酶体抑制剂(例如可逆性的蛋白酶体抑制剂)是任何一种或更多种的MG132、乳胞素、分裂乳胞素-β-内酯、PSI、MG-115、MG-101、N-乙酰基-亮氨酸-亮氨酸-蛋氨酸-醛、N-羧苯甲酰基-甘氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-醛、N-羧苯甲酰基-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-醛、N-羧苯甲酰基-亮氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-醛及其盐或类似物；所述的自噬抑制剂是任何一种或更多种的3-甲基腺嘌呤、3-甲基腺苷、腺苷、冈田酸、N⁶-巯基嘌呤核糖核苷(N⁶-MPR)、5-氨基-4-咪唑甲酰胺核糖核苷(AICAR)、巴佛洛霉素Al及其盐或类似物；所述的溶酶体抑制剂是任何一种或更多种的亮抑酶肽、反式-环氧琥珀酰-L-亮氨酰胺-(4-胍基)丁烷、L-蛋氨酸甲酯、氯化铵、甲胺、氯喹及其盐或类似物；所述的内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂是布雷菲德菌素A及其盐或类似物；所述的Hsp90伴侣分子抑制剂是一种或更多种的苯醌安莎霉素类抗生素、格尔德霉素、17-丙烯胺基-17-脱甲氧基格尔德霉素、根赤壳菌素、新生霉素和结合于Hsp90ATP/ADP袋的Hsp90抑制剂及其盐或类似物；所述的热休克反应激活剂是选自由雷公藤红素、雷公藤红素甲酯、二氢雷公藤红素二乙酸、雷公藤红素丁酯和二氢雷公藤红素所组成的群组；所述的糖苷酶抑制剂是任何一种或更多种的盐酸australine、栗精胺、6-乙酰胺-6-脱氧-栗精胺、盐酸脱氧岩藻糖野尻霉素(DFJ)、脱氧野尻霉素(DNJ)、盐酸脱氧半乳糖野尻霉素(DGJ)、盐酸脱氧甘露糖野尻霉素(DMJ)、2R，5R-双(羟甲基)-3R，4R-二羟基吡咯烷(DMDP)、盐酸1，4-二脱氧-1，4-亚氨基-D-甘露醇、盐酸3R，4R，5R，6R-3，4，5，6-四羟基氮杂环庚烷、1，5-二脱氧-1，5-亚氨基-木糖醇、Kifunensine、N-丁基脱氧野尻霉素(BDNJ)、N-壬基DNJ(NDNJ)、N-己基DNJ(HDNJ)、N-甲基脱氧野尻霉素(MDNJ)及其盐或类似物；所述的组蛋白去乙酰酶抑制剂是任何一种或更多种的Scriptaid、APHA化合物8、Apicidin、丁酸钠、(-)-Depudecin、Sirtinol、曲古菌素A及其盐或类似物。在任何前述方面的多个具体例中，所述的眼部PCD是任何一种的老年黄斑变性、视网膜色素变性、青光眼、角膜营养不良、视网膜劈裂症、斯特格病变、常染色体显性玻璃膜疣或贝斯特黄斑营养不良，或任何其他以眼部细胞内的蛋白质聚集体或纤维沉积为特征的眼部疾病。在多个方面中，形成这些聚集体或纤维的突变蛋白质是视蛋白、肌纤蛋白、脂褐质蛋白或BIGH3β-H3。在任何前述方面的其他具体例中，所述对象包括影响蛋白质折叠的突变(例如在视蛋白中的P23H突变)。

附图说明

图1A和1B分别显示MG132和11-顺式-视黄醛对P23H突变和野生型视紫质作用的吸收光谱吸光度。

图2A和2B显示3-甲基腺嘌呤和11-顺式-视黄醛对P23H突变和野生型视紫质作用的吸收光谱吸光度。

图3A和3B显示氯化铵和11-顺式-视黄醛对P23H突变和野生型视紫质作用的吸收光谱吸光度。

图4A和4B显示布雷菲德菌素A和11-顺式-视黄醛对P23H突变和野生型视紫质作用的吸收光谱吸光度。

图5A和5B显示格尔德霉素和11-顺式-视黄醛对P23H突变和野生型视紫质作用的吸收光谱吸光度。

图6A和6B显示雷公藤红素和11-顺式-视黄醛对P23H突变和野生型视紫质作用的吸收光谱吸光度。

图7A和7B显示二氢雷公藤红素和11-顺式-视黄醛对P23H突变和野生型视紫质作用的吸收光谱吸光度。

图8A和8B显示Scriptaid和11-顺式-视黄醛对P23H突变和野生型视紫质作用的吸收光谱吸光度。

具体实施方式

定义

“蛋白质构象疾病”是指一种病理涉及错误折叠蛋白质存在的疾病或病症。在一个具体例中，蛋白质构象疾病是因错误折叠的蛋白质干扰细胞、组织或器官的正常生物活性所造成。

“蛋白酶体抑制剂”是指一种降低如泛醌蛋白降解的蛋白酶体活性的化合物。

“自噬抑制剂”是指一种在细胞成分所在的细胞中降低其成分降解的化合物。

“溶酶体抑制剂”是指一种降低通过溶酶体在细胞内消化大分子的化合物。在一个具体例中，溶酶体抑制剂降低溶酶体的蛋白质水解活性。

“内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂”是指一种降低蛋白质从内质网向高尔基体或从高尔基体向内质网运输的化合物。

“Hsp90伴侣分子抑制剂”是指一种降低Hsp90伴侣活性的化合物。在一个具体例中，所述抑制剂改变蛋白质结合到Hsp90的ATP/ADP袋。

“热休克反应激活剂”是指一种提高热休克途径成分的伴侣活性或表达的化合物。热休克途径成分包括，但不局限于，Hsp100、Hsp90、Hsp70、Hsp60、Hsp40和小型的HSP家族成员。

“糖苷酶抑制剂”是指一种降低糖苷键分裂酶活性的化合物。

“组蛋白去乙酰酶抑制剂”是指一种降低组蛋白去乙酰化酶活性的化合物。

“降低”或“增加”是指至少分别为10％、25％、50％、75％或100％的负向或正向改变。

“生化功能的构象”是指使蛋白质具有其生物活性的三级结构。当突变蛋白质呈现生化功能的构象时，其生物活性提高。因此，具有生化功能构象的突变蛋白质可在某种程度上功能性地取代野生型蛋白质。

发明方法

在一个具体例中，本发明提供治疗疾病和/或病症或其症状的方法，其包括投予所述对象(例如人类的哺乳动物)包含前述配方的化合物且在治疗上有效剂量的药学组成物。因此，一个具体例为一种治疗以患有或易受蛋白质构象疾病或病症或其症状影响为对象的方法。所述方法包括在前述疾病或病症被治疗的情况下，投予哺乳动物医疗上有效的剂量且足以治疗前述疾病或病症或其症状的化合物。

在此的方法包括投予所述对象(包括经识别需接受前述治疗的对象)在此所描述有效剂量的化合物或组成物，以产生所述效果。可经由所述对象或健康护理专业者的判断和可主观地(例如观点)或客观地(例如通过测试或诊断方法测量)识别需接受前述治疗的对象。

在此所使用的术语“治疗”及其类似者是指降低或改善病症和/或与其相关的症状。可被理解的是，尽管治疗的病症或状态未被排除，仍不需要所述病症、状态或其相关症状被完全消除。

在此所使用的术语“预防”、“预防治疗”及其类似者是指降低所述对象发展疾病或状态的可能性，其中，所述对象虽未患有，但仍存在有发展疾病或状态的风险或易受其影响。

本发明的治疗方法(包括预防治疗)通常包括投予有效剂量的前述化合物，如投予所述对象(例如，动物，人类)包括哺乳动物，尤其为人类，其所需的配方化合物。所述治疗将适合投予遭受、患有、易受影响于或对疾病、病症或其症状存在风险的所述对象，尤其为人类。对于确定“存在风险”的对象可通过任何诊断测试或所述对象或专业健康护理提供者(例如基因测试、酶或蛋白质标记、标记(如在此所定义)、家族史及其类似者)的观点予以客观或主观地确定。所述的化合物也可用于治疗任何其他涉及蛋白质折叠(包括错误折叠)的疾病。

本发明的特征是在活体内修正错误折叠蛋白质的组成物和方法。错误折叠的蛋白质可干扰正常的细胞功能，并可导致人类的蛋白质构象疾病(PCD)。PCD包括α1-抗胰蛋白酶缺乏症、囊状纤维症、亨廷顿病、帕金森氏症、阿尔茨海默症、肾源性尿崩症、癌症和朊相关疾病(例如Jacob-Creutzfeld病)。本发明的组成物和方法尤其适用于预防或治疗眼部的PCD，包括视网膜色素变性、老年黄斑变性、青光眼、角膜营养不良、视网膜劈裂症、斯特格病变、常染色体显性玻璃膜疣、贝斯特黄斑营养不良和角膜营养不良。本发明的组成物可用于治疗前述的PCD，用以减缓受影响细胞的死亡、减轻由前述PCD所引起的症状或从初始阶段预防PCD。

本发明大致上是基于发现11-顺式-视黄醛与蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂或组蛋白去乙酰酶抑制剂的组合可用于修正视蛋白错误折叠的构象或增加细胞内正确折叠蛋白质的量。特别的是，11-顺式-视黄醛与蛋白酶体抑制剂MG132、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤、溶酶体抑制剂氯化铵、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂布雷菲德菌素A、Hsp90伴侣分子抑制剂格尔德霉素、热休克反应激活剂雷公藤红素或组蛋白去乙酰酶抑制剂Scriptaid的组合使视蛋白的P23H突变呈现生化功能的构象，并结合11-顺式-视黄醛以形成视紫质。另外，蛋白酶体抑制剂MG132和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤各自独立地使用以修正P23H视蛋白突变的构象，并使其形成视紫质。

蛋白酶体抑制剂

26S蛋白酶体是将泛醌蛋白质分裂为短肽的多催化性蛋白酶。蛋白酶体抑制剂是一类可单独或与11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体组合使用以治疗PCD的化合物。MG-132是可单独或与11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体组合使用的蛋白酶体抑制剂。MG-132尤其适合治疗视网膜色素变性和其他涉及蛋白质聚集或蛋白质错误折叠的眼部疾病。本发明方法中所使用的其他蛋白酶体抑制剂包括乳胞素(LC)、分裂乳胞素-β-内酯、PSI(N-羧苯甲酰基-异亮氨酸-谷氨酸-(叔丁酯)-丙氨酸-亮氨酸-醛)、MG-132(N-羧苯甲酰基-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-醛)、MG-115(N-羧苯甲酰基-亮氨酸-亮氨酸-正缬氨酸-醛)、MG-101(N-乙酰基-亮氨酸-亮氨酸-正亮氨酸-醛)、ALLM(N-乙酰基-亮氨酸-亮氨酸-蛋氨酸-醛)、N-羧苯甲酰基-甘氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-醛、N-羧苯甲酰基-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-醛、N-羧苯甲酰基-亮氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-醛及其盐或类似物。其他蛋白酶体抑制剂和其使用例示描述在美国第6,492,333号专利案中。

自噬抑制剂

自噬作用是一种在细胞质内降解细胞内成分的进化保守机制，在饥饿细胞内并作为一种细胞存活的机制。在细胞质片段被封入细胞膜内的自噬过程中，形成最终与溶酶体融合的自噬小体，以将其成分降解。自噬抑制剂可单独使用或与11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体组合以治疗PCD。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤尤其适于治疗视网膜色素变性或其他涉及错误折叠蛋白质或蛋白质聚集的眼部疾病。本发明方法所使用的自噬抑制剂包括，但不局限于，3-甲基腺嘌呤、3-甲基腺苷、腺苷、冈田酸、N⁶-巯基嘌呤核糖核苷(N⁶-MPR)、胺基硫化腺苷类似物、5-氨基-4-咪唑甲酰胺核糖核苷(AICAR)、巴佛洛霉素Al及其盐或类似物。

溶酶体抑制剂

溶酶体是细胞蛋白质降解的主要场所。通过质膜蛋白质受体所介导的内吞作用或胞饮作用进入细胞，使蛋白质的降解在溶酶体内发生。如氯化铵、亮抑酶肽、反式-环氧琥珀酰-L-亮氨酰胺-(4-胍基)丁烷、L-蛋氨酸甲酯、氯化铵、甲胺、氯喹及其盐或类似物的溶酶体抑制剂与11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体组合使用以治疗PCD。

内质网-高尔基体运输抑制剂

新合成的蛋白质在内质网中进入生物合成-分泌途径。为了从内质网中离开，蛋白质必须恰当地折叠，错误折叠的蛋白质则被留滞于内质网中。内质网-高尔基体运输抑制剂适于治疗PCD。布雷菲德菌素A是一个适于本发明方法使用的内质网-高尔基体运输抑制剂的实例。

HSP90伴侣分子抑制剂

热休克蛋白90(Hsp90)的作用为伴护涉及细胞信号传递、增生和存活的蛋白质，是许多蛋白质构象的稳定性和功能所必须的。HSP90抑制剂与11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体组合使用以治疗PCD。HSP90抑制剂包括如格尔德霉素和17-丙烯胺基-17-脱甲氧基格尔德霉素(17-AGG)的苯醌安莎霉素类抗生素，其特异性地结合Hsp90，改变其功能，并促进底物蛋白质的蛋白质水解。其他的HSP90抑制剂包括，但不局限于，根赤壳菌素、新生霉素和任何结合于Hsp90ATP/ADP袋的Hsp90抑制剂。

热休克反应激活剂

雷公藤红素是一种启动人类热休克反应的醌甲基三萜，与11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体组合，使得雷公藤红素和其他热休克反应激活剂适于治疗PCD。热休克反应激活剂包括，但不局限于，雷公藤红素、雷公藤红素甲酯、二氢雷公藤红素二乙酸、雷公藤红素丁酯和二氢雷公藤红素及其盐或类似物。

组蛋白去乙酰酶抑制剂

基因表达的调控是通过数个机制所介导，包括通过动态的乙酰化和去乙酰化所进行的组蛋白翻译后修饰。进行可逆性乙酰化/去乙酰化过程的酶相对应地是组蛋白乙酰化转移酶(HAT)和组蛋白去乙酰酶(HDAC)。组蛋白去乙酰抑制剂包括Scriptaid、APHA化合物8、Apicidin、丁酸钠、(-)-Depudecin、Sirtinol、曲古菌素A及其盐或类似物。

糖苷酶抑制剂

糖苷酶抑制剂是一类用于治疗蛋白质构象疾病的化合物，尤其是与11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体组合投予时。栗精胺是一种从植物来源所分离出抑制酶糖苷键水解的多羟基生物碱。栗精胺及其衍生物尤其适用于治疗如视网膜色素变性的PCD。本发明方法所使用的其他糖苷酶抑制剂包括盐酸australine、有效的氨基己糖苷酶抑制剂6-乙酰胺-6-脱氧-栗精胺、盐酸脱氧岩藻糖野尻霉素(DFJ)、抑制糖苷酶I和II的脱氧野尻霉素(DNJ)、抑制α-D-牛乳糖的盐酸脱氧半乳糖野尻霉素(DGJ)、盐酸脱氧甘露糖野尻霉素(DMJ)、公知为2，5-二脱氧-2，5-亚氨基-D-甘露醇的2R，5R-双(羟甲基)-3R，4R-二羟基吡咯烷(DMDP)、盐酸1，4-二脱氧-1，4-亚氨基-D-甘露醇、抑制b-N-乙酰葡糖胺糖苷酶的盐酸3R，4R，5R，6R-3，4，5，6-四羟基氮杂环庚烷、抑制β-葡糖苷酶的1，5-二脱氧-1，5-亚氨基-木糖醇和为甘露糖苷酶1抑制剂的Kifunensine。也可使用N-丁基脱氧野尻霉素(BDNJ)、N-壬基DNJ(NDNJ)、N-己基DNJ(HDNJ)、N-甲基脱氧野尻霉素(MDNJ)和其他公知技艺中的糖苷酶抑制剂与9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的组合。糖苷酶抑制剂可从市场上购得，例如从IndustrialResearch Limited(Wellington，New Zealand)及使用如美国第4,894,388、5,043,273、5,103,008、5,844,102和6,831,176号专利案和美国第20020006909号专利公开案中所描述的方法。

眼部蛋白质构象疾病

本发明的组成物尤其适用于治疗任何实质上为眼部蛋白质的构象疾病(PCD)，所述疾病是以在眼内积聚蛋白聚聚集或纤维的错误折叠蛋白质为特征。视网膜色素变性是一种与视蛋白错误折叠(例如P23H视蛋白)(GenBank编号NM_000539和NP_000530)及与碳酸酐酶IV(CA4)突变(GenBank编号NM_000171和NP_000708)相关的眼部PCD实例(Rebello et al.，Proc Natl Acad Sci USA.2004Apr 27；101(17)：6617-22)。CA4是在人类眼部脉络膜毛细血管内高度表达的糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白质。R14W的突变造成CA4蛋白质的错误折叠，且具有此突变的病人受常染色体显性视网膜色素变性所苦。本发明的组成物提高具有生化功能构象的CA4量，适于治疗与CA4多肽突变相关的常染色体显性视网膜色素变性。

X连锁的青年性视网膜劈裂症(RS)是另一种眼部PCD。RS是男性常见造成青年黄斑变性的原因。RS1的突变(NM_000330，NP_000321)或视网膜劈裂症是造成X连锁视网膜劈裂症的原因，其为在男性所常见的早发性黄斑变性，会导致视网膜内层分裂和严重的视力损失。RS1的突变破坏了蛋白质的折叠(J Biol Chem.2005Mar 18；280(11)：10721-30)。本发明的组成物提高具有生化功能构象的RS1量，适于治疗视网膜劈裂症。

青光眼是一种与肌纤蛋白突变相关的眼部PCD。肌纤蛋白在许多包括眼部的人类器官中广泛表达，是具有未知功能的分泌型糖蛋白。在肌纤蛋白内的突变造成一种世界上主要致盲原因的青光眼类型。肌纤蛋白的突变为积聚在转染细胞内质网中的不溶性聚积物(Aroca-Aguilar et al.，Biol Chem.2005Jun 3；280(22)：21043-51；GenBank编号NM_000261和NP_000252)。本发明的组成物提高具有生化功能构象的肌纤蛋白的量，适于治疗与肌纤蛋白相关的青光眼。

斯特格样黄斑变性是一种与ELOVL4突变相关的眼部PCD。ELOVL4(Elongation of very long chain fatty acid 4)是ELO家族的成员中参与非常长链脂肪酸生物合成的蛋白质。ELOVL4的突变已在患有常染色体显性斯特格样黄斑变性(STGD3/adMD)的病人中被识别出。ELOVL4的突变蛋白质为积聚在转染细胞内的大型聚集物(Grayson etal.，J Biol Chem.2005Jul 21；Epub)(GenBank编号NM_022726和NP_073563)。本发明的组成物提高具有生化功能构象的ELOVL4的量，适于治疗斯特格样黄斑变性。

Malattia Leventinese(ML)和多恩蜂窝状视网膜营养失调(DHRD)是指两种以公知为玻璃膜疣的黄白色沉淀积聚在视网膜色素上皮(RPE)下为特征的常染色体显性PCD。EFEMP1参与视网膜玻璃膜疣的形成，并涉及黄斑变性的病因(Stone et al.，Nat Genet.1999Jun；22(2)：199-202)(GenBank编号NM_004105和NP_004096)。EFEMP1突变为错误折叠，并滞留在细胞内。本发明的组成物提高具有生化功能构象的EFEMP1的量，适于治疗常染色体显性玻璃膜疣。

贝斯特黄斑营养不良是一种由VMD2突变(hBEST1)所引起的常染色体显性PCD，其编码一种名为Bestrophin的氯离子通道(Gomez et al.，DNA Seq.2001Dec；12(5-6)：431-5)(GenBank编号：NM_004183和NP_004174)。Bestrophin的突变可能造成蛋白质的错误折叠。本发明的组成物提高正确折叠的bestrophin的量，适于治疗贝斯特黄斑营养不良。

5q31连锁的角膜营养不良是一种以在角膜内随着年龄逐渐沉积蛋白质沉淀，并随后造成视力损伤为特色的常染色体显性PCD。BIGH3基因(GenBank编号NM_000358)，也称为TGFBI(β转化生长因子所诱导的)的突变，据发现是病因的所有条件。通过涉及在角膜组织内蛋白质周转改变的特别聚集途径，Arg-124和其他残基的取代导致编码蛋白质的角膜特异性沉淀(GenBank编号NP_000349)。本发明的组成物提高正确折叠的TGFBI蛋白质量，适于治疗5q31连锁的角膜营养不良。

在一个具体例中，本发明提供监控治疗进程的方法。所述方法包括确定诊断标记(Marker)量的步骤(例如任何在此所描述通过前述化合物、蛋白质或其指示剂等所调控的目标)或诊断测定(例如筛检、分析)患有或易受蛋白质折叠(包括错误折叠)相关疾病或其症状影响的对象，其中所述对象被投予具有疗效剂量的前述化合物，足以治疗前所述的疾病或其症状。以前所述方法所确定的标记量可用于和健康正常的对照组或其他患病病人的已知标记量做比较，以确定所述对象的疾病状态。在优选的具体例中，所述对象的第二标记量是在确定第一量后进行确定，且前述的第二量被用于比较以监控所述疾病的过程或治疗的效果。在某些优选的具体例中，所述对象的标记预治疗量在开始根据本发明的治疗前已被确定；此标记的预治疗量可随后和所述对象在开始治疗后的标记量做比较，用以确定治疗的效果。

药学组成物

本发明的特征为包括化合物与药学上可接受的载体的药学制备物，其中，所述化合物用以产生具有生化功能构象的突变蛋白质。如此制备物具有治疗和预防的应用。在一个具体例中，包括11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛与至少一种额外的化合物组合的药学组成物，前述的额外化合物为蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂或组蛋白去乙酰酶抑制剂。11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和前述第二化合物为共同或分开调配。在另一个具体例中，包括蛋白酶体抑制剂或自噬抑制剂的药学组成物。本发明的化合物可作为药学组成物的一部分予以投药。前述组成物应为无菌的，且包含以适当的重量或体积单位投予所述对象在治疗上有效剂量的多肽。本发明的组成物和组合可为药学包装的部分，且其中每一化合物以个别的剂量存在。

本发明所投予用于预防或治疗的药学组成物无菌的。消毒可通过无菌过滤膜过滤(例如0.2μm膜)、伽马放射或任何其他所属领域的技术人员所熟知的适当手段轻易完成。治疗的多肽组成物通常放置在具有消毒进出口的容器内，例如静脉内溶液包或具有可由皮下注射针头刺穿的塞子的小瓶。前述的组成物一般以单元或多重剂量的容器储存，例如密封于安瓿或小瓶内，作为水溶液或可于水中恢复的干冻配方。

前述化合物可选择地与药学上可接受的赋形剂组合。在此所使用的术语“药学上可接受的赋形剂”是指一种或更多种适合投予人类，且相容的固体或液体填充物、稀释物或封装物质。术语“载体”是指天然或合成的有机或无机成分，可使其活性成分可被混合以便于投予。前述药学上组成物的成分也可与本发明所述的分子，在不发生实质上破坏理想药学功效作用的情形下，相互间共同混合。

本发明的化合物可包含在药学上可接受的赋形剂内。前述的赋形剂优选地含有少量的添加剂，例如增强等张性和化学稳定性的物质。前述物质在使用的剂量和浓度下，对接受者不具有毒性，并且包括如磷酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、醋酸盐、乳酸盐、酒石酸盐和其他有机酸或其盐类的缓冲溶液，；三羟基甲基氨基甲烷(TRIS)、二碳酸盐、碳酸盐和其他有机碱及其盐类；如抗坏血酸的抗氧化剂；如多精氨酸、多赖氨酸、多谷氨酸或多门冬氨酸的低分子量(例如少于约10个残基)多肽；如血清蛋白、明胶或免疫球蛋白的蛋白质；如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚丙二醇(PPG)和聚乙二醇(PEG)的亲水聚合体；如甘氨酸、谷氨酸、门冬氨酸、组氨酸、赖氨酸或精氨酸的氨基酸；单糖、双糖和其他包括纤维素或其衍生物、葡萄糖、甘露糖、蔗糖、糊精或如肝磷脂、硫酸软骨素或硫酸右旋糖酐的硫酸化碳水化合物衍生物的碳水化合物；如包括钙离子、镁离子和锰离子二价金属离子的多价金属离子；如乙二胺四乙酸(EDTA)的螯合剂；如甘露醇或山梨糖醇的糖醇；如钠或铵的抗衡离子；及/或如聚山梨醇酯或泊洛沙姆的非离子表面活性剂。其他添加剂可包括以常规量存在的稳定剂、抗菌剂、惰性气体、液体和营养补充剂(也就是Ringer右旋糖)、电解质补充剂及其类似者等。

前述的组成物可以有效的剂量投予。所述的有效剂量取决于投药的方式、特定的治疗条件和所期望的结果，也可取决于条件的阶段、所述对象的年龄和身体状态、协同治疗的性质和任何如果可能医药人员所熟知的类似因素。对于治疗的应用而言，所述的剂量足以实现医药上所期望的结果。

对于患有蛋白质构象疾病或病症的对象而言，有效的剂量是指足以提高细胞内正确折叠蛋白质的量。对于患有涉及错误折叠蛋白质的疾病或病症的对象而言，有效的剂量是指足以稳定、减缓或降低与病理相关症状的用量。一般而言，本发明化合物的剂量从大约每天0.01mg/kg到1000mg/kg。可以被预期的是，剂量范围从约50到2000mg/kg也将适合。如静脉注射的特定投药形式将导致更低的剂量。在前述对象对初始使用剂量的反应不足的情况下，更高的剂量(或通过不同、更局部的投药路径投予更高的有效剂量)可在病人可承受的范围内使用。每天多重的剂量可预期用以达到本发明组成物所适合的全身剂量。

有多种的投药途径可供使用。一般来说，本发明方法所使用任何医药上可接受的投药形式皆可被实施，也就是指任何产生活性化合物的有效剂量而不会引起临床上无法接受的副作用的形式。在一个优选的具体例中，本发明的组成物是在眼内投药。其他的投药方式包括经由口的、直肠的、局部的、眼内的、口腔的、阴道内的、脑池内的、脑室内的、气管内的、鼻内的、经皮肤的、植入物内/上或肠胃外的途径。术语“肠胃外的”包括皮下的、囊内的、静脉内的、肌肉内的、腹膜内的或灌注。包含本发明组成物的组成物可被添加入如玻璃体内体液的生理液中。对于CNS的投药，多种技术可用于促进治疗剂经过血液脑屏障的传送，包括通过手术或注射的破坏、暂态打开CNS脉管系统内皮细胞间粘合接触的药物，以及促进通过所述细胞迁移的化合物。口腔投药由于其对于病人的便利性和作为定量给药的方案，可优选地用于预防治疗。

本发明的药学组成物只要其在投予所述对象时不会引起副作用，可选择性地进一步包含一种或更多种额外所需的蛋白质，包括血浆蛋白质、蛋白酶和其他生物物质。合适的蛋白质或生物物质可通过任何公知和所属领域技术人员可得到的纯化方法，从人类或哺乳动物的血浆内得到；依照标准的重组DNA技术从包含可表达人类或哺乳动物血浆蛋白质基因的重组组织培养物的上清液、萃取物或溶解产物和病毒、酵母、细菌或其类似物已被引用；或依照标准的转基因技术从包含可表达人类血浆蛋白基因的液体(例如血液、乳汁、淋巴液、尿液或其类似物)或转基因动物已被引用。

本发明的药学组成物可包括一种或更多种的pH缓冲化合物，以保持配方的pH在预期反映的生理pH程度，如在约5.0到8.0的范围内。前述用于水溶液配方的pH缓冲化合物可为氨基酸或氨基酸混合物，如组氨酸或如组氨酸和甘氨酸的氨基酸混合物。前述pH缓冲化合物可选择地优选为维持配方的pH值在预期如约5.0到8.0的范围内的程度，且不与钙离子螯合的试剂。前述的pH缓冲化合物实例包括，但不局限于，咪唑和醋酸离子。所述的pH缓冲化合物可以任何适合维持配方在预期程度pH值的量存在。

本发明的药学组成物也可包含一种或更多种的渗透调节剂，也就是调节配方的渗透性质(例如张力、渗透度及/或渗透压)至可被接受个体的血液和血液细胞能接受程度的化合物。前述的渗透调节剂可为不与钙离子螯合的试剂。前述的渗透调节剂可为任何公知或所属领域技术人员可调节其配方渗透性质的化合物。所属技术领域人员可依经验决定在本发明配方中所提供使用的渗透调节剂的合适度。合适类型的渗透调节剂实例包括，但不局限于，如氯化钠和醋酸钠的盐类；如蔗糖、右旋糖和甘露糖的糖类；如甘氨酸的氨基酸；及一种或更多种前述试剂和/或试剂类型的混合物。前述渗透调节剂可以任何足以调节配方渗透性质的浓度存在。

包含本发明化合物的组成物可含有如钙离子、镁离子和/或锰离子的多价金属离子。任何帮助稳定组成物并对接受个体无副作用的多价金属离子皆可被使用。基于此二标准，所属领域中具有技术的人员可凭经验决定合适的金属离子，且这些金属离子的合适来源已为公知，且包括无机和有机盐。

本发明的药学组成物也可为非水性液体配方。任何合适的非水性液体只要其提供在此所包含活性剂的稳定性也可被使用。前述非水性配方优选地为亲水性溶液。合适的非水性溶液实例包括：甘油；二甲基亚砜(DMSO)；聚二甲基硅烷(PMS)；如乙二醇、二甘醇、三甘醇、聚乙二醇(“PEG”)200、PEG300和PEG400的乙二醇类；以及如二丙二醇、三丙二醇、聚丙二醇(PPG)425、PPG725、PPG1000、PPG2000、PPG3000和PPG4000的丙二醇类。

本发明的药学组成物也可为混合的水性/非水性液体配方，只要其提供在此所包含化合物的稳定性，任何如前所述合适的非水性液体配方可与任何如前所述的水性配方共同使用。前述配方中的非水性液体优选地是亲水性液体。合适的非水性液体实例包括：甘油；DMSO；PMS；如PEG200、PEG300和PEG400的乙二醇；和如PPG425、PPG725、PPG1000、PPG2000、PPG3000和PPG4000的丙二醇。

合适的稳定配方可允许在冷冻或未冷冻的液体状态下储存前述的活性剂。稳定的液体配方可储存于至少为-70℃的温度下，但也可取决于前述组成物的性质，储存在至少为0℃的更高温度，或在约0.1℃与42℃之间。所属技术领域的人员通常知道蛋白质和多肽对pH、温度和多种其他可影响治疗效果因素的改变相当敏感。

在某些具体例中，所需的投药途径可通过肺部气溶胶。制备包含多肽的气溶胶给药系统技术是所属技术领域人员所熟知的。一般而言，前述系统应利用不会显著破坏抗体生物性质的成分，如不会破坏抗体决定簇的结合能力(参阅如Sciarra和Cutie，“Aerosols”在Remington’s Pharmaceutical Sciences，18th edition，1990，pp 1694-1712；并入作为参考)。所属领域技术人员可容易地修改多种制造多肽气溶胶的参数和条件，而不用依靠过度的试验。

其他的给药系统可包括时释、延释和缓释的给药系统。前述的系统可避免重复投予本发明的组成物，提高对所述对象和医生的方便性。许多释放给药系统的类型已可得，且为所属领域的技术人员所公知，其包括基于聚合体的系统，如聚乳酸(美国第3,773,919号专利；欧洲第58,481号专利)、共聚草酸、聚己内酯、聚酯酰胺、聚原酸酯、如聚-D-(-)-3-羟基丁酸的聚羟基丁酸(欧洲第133,988号专利)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物(Sidman，K.R.et al.，Biopolymers 22：547-556)、聚(2-羟基乙基甲基丙烯酸酯)或乙烯-醋酸乙烯(Langer，R.et al.，J.Biomed.Mater.Res.15：267-277；Langer，R.Chem.Tech.12：98-105)和聚酸酐。

其他缓释型组成物的实例包括在有形物件内的半渗透性聚合体基材，例如薄膜或微胶囊。给药系统也包括非聚合体系统：包括如胆固醇和胆固醇酯的固醇和如单、双和三酸甘油酯的脂肪酸或中性脂肪；如生物来源的生物再吸收水凝胶的水凝胶释放系统(也就是几丁质水凝胶或壳聚糖水凝胶)；液体硅系统；基于多肽的系统；蜡涂层；使用常规结合剂和赋形剂的压缩药片；部分融合的植入物；及其类似物。特定的实例包括，但不局限于：(a)侵蚀系统，其中所述试剂包含在如美国第4,452,775、4,667,014、4,748,034和5,239,660号专利所述的基材形态中及(b)扩散系统，其中活性成分以控制的速率从如美国第3,832,253和3,854,480号专利所述的聚合体渗透。

其他本发明方法和组成物可用的给药系统类型是胶体分散系统。胶体分散系统包括水包油乳化剂、胶束、混合胶束和脂质体等基于脂质的系统。脂质体是人工膜管，可作为活体外或活体内的给药载体。大小范围介于0.2到4.0μm的大型单片管(LUV)可于水性的内部封入大型的巨分子，并以生物活性的形式送至细胞(Fraley，R.，和Papahadjopoulos，D.，Trends Biochem.Sci.6：77-80)。

脂质体已通过与特异性配体耦合被定位至特定组织，如与单克隆抗体、糖、糖脂或蛋白质耦合。商业上的脂质体可购自Gibco BRL，例如LIPOFECTIN^TM和LIPOFECTACE^TM，其由如N-[1-(2，3二油氧基)-丙基]-N，N，N-三甲基氯化铵(DOTMA)和二甲基双十八烷基溴化铵(DDAB)的阳离子脂质所形成。制备脂质体的方法为所属技术领域所熟知，并于许多公开文献中描述，例如在DE 3,218,121；Epstein et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)82：3688-3692(1985)；Hwang et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)77：4030-4034(1980)；EP 52,322；EP 36,676；EP 88,046；EP 143,949；EP 142,641；日本第83-118008号专利申请案；美国第4,485,045和4,544,545号专利；及EP 102,324。脂质体也已经由Gregoriadis，G.，Trends Biotechnol.，3：235-241所回顾。

其他的载体类型为适合植入哺乳动物受体的生物可相容性微粒或植入物。依照所述的方法，可用的代表性生物可侵蚀植入物描述于PCT第PCT/US/03307号国际申请案(标题为”聚合体的基因传送系统”的第WO/95/24929号公开案)。PCT/US/03307所描述的生物相容性，优选为包含在合适启动子控制下的外源基因的生物可降解聚合体基材。前述聚合体基材可用于达到在所述对象体内缓释前述外源基因或基因产物。

前述的聚合体基材优选为如微球体的微粒形式(其中试剂分散遍布于固体聚合体基材)或微胶囊(其中试剂储存于聚合体壳的核内)。前述含有药物的聚合体微胶囊描述于如美国第5,075,109号专利案。其他包含试剂的聚合体基材形式包括薄膜、涂层、胶体、植入物和支架。前述聚合体基材装置的大小和组成，以在组织内产生有利的释放动力进入基材所引入的位置做选择。前述聚合体基材的大小进一步依照使用的给药方法选择。当使用气溶胶途径时，前述聚合体基材和组成物优选地被包含在表面活性剂的载体中。前述聚合体基材可选择具有较佳降解速率和形成生物可附着的物质，以进一步提高传送的效果。前述的基材组成物也可选择是不降解的，而是经过一段延长的时间后通过扩散而释放。前述的给药系统也可为适合局部和位点特异性给药的生物可相容性微球体。前述的微球体被揭示于Chickering，D.E.，et al.，Biotechnol.Bioeng.，52：96-101；Mathiowitz，E.，et al.，Nature 386：410-414。

非生物可降解的和生物可降解的聚合体基材皆可用于投予所述对象本发明的组成物。前述的聚合体可为天然或合成的聚合体。前述的聚合体是基于所需释放的时间做选择，通常为数小时至一年或更久。释放的时间范围典型地从数小时至3到12个月为最理想。前述的聚合体可选择地为水凝胶的形式，其可在水中吸收大约90％的自身重量，进一步可选择与多价离子或其他聚合体交联。

具代表可用于形成生物可降解给药系统的合成聚合体包括：聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯烃、聚醚类、聚环氧烷、聚对苯二甲酸亚烷基酯、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚乙烯卤化物、聚乙烯吡咯酮、聚羟基乙酸、聚硅氧烷、聚氨酯及其共聚物、烷基纤维素、羟烷基纤维素、纤维素酯、纤维素醚、硝基纤维素、丙烯酸和甲基丙烯酸醚的聚合体、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维素、醋酸纤维素、丙酸纤维素、丁酸乙酸纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素、羧乙基纤维素、三醋酸纤维素、纤维素硫酸钠盐、聚(甲基甲基丙烯酸酯)、聚(乙基甲基丙烯酸酯)、聚(丁基甲基丙烯酸酯)、聚(异丁基甲基丙烯酸酯)、聚(己基甲基丙烯酸酯)、聚(异癸基甲基丙烯酸酯)、聚(月桂基甲基丙烯酸酯)、聚(苯基甲基丙烯酸酯)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(异丙基丙烯酸酯)、聚(异丁基丙烯酸酯)、聚(十八烷基丙烯酸酯)、聚乙烯、聚丙烯、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(对苯二甲酸乙二酯)、聚(乙烯醇)、聚乙酸乙烯酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙烯吡咯酮及乳酸和乙醇酸的聚合体、聚酸酐、聚(正)醚、聚(丁酸)、聚(戊酸)、及聚(交酯-共己内酰酮)、及天然聚合体，如藻酸盐和其他包括右旋糖和纤维素的多糖、胶原质、其化学衍生物(化学基团的取代和添加，例如烷基，烯基、羟基化、氧化和其他所属领域技术人员常规制作的修饰)、血清蛋白和其他亲水性蛋白质、玉米蛋白和其他醇溶谷蛋白和疏水蛋白质、及其共聚物和混合物。一般而言，这些物质通过活体内酶水解或暴露于水后，经由表面或大量的侵蚀而降解。

眼部给药的方法

本发明的组成物(例如蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂或组蛋白去乙酰酶抑制剂)特别适合治疗眼部蛋白质构象的疾病，如青光眼、视网膜色素变性、老年黄斑变性、青光眼、角膜营养不良、视网膜劈裂症、斯特格病变、常染色体显性玻璃膜疣和贝斯特黄斑营养不良。

在一种方法中，本发明所述的组成物通过适合直接移植入眼内玻璃体的眼部装置投予。本发明的组成物可以缓释的组成物提供，例如描述于如美国第5,672,659和5,595,760号的专利案。据发现，前述装置提供多种组成物的持续控制释放以治疗眼部，而不会产生有害的局部和全身副作用的风险。前述眼部给药方法的目的是在延长植入物的持续时间而最小化眼内装置或植入物尺寸时，使所包含的药物量能最大化。参阅如美国第5,378,475、6,375,972和6,756,058号专利案及美国第20050096290和200501269448号专利公开案。所述植入物可以为生物可降解的和/或生物可相容的植入物，或可为非生物可降解的植入物。生物可降解的眼部植入物描述于如美国第20050048099号专利公开案。所述植入物对前述活性剂可以为具渗透性或不具渗透性，并且可插入于如前部或后部的眼腔内，或可植入巩膜、经脉络膜空间或玻璃体外部的非血管区域。作为储存本发明组成物的接触镜也可选择地用于药物给送。

在一个优选具体例中，前述的植入物可定位于如巩膜上的非血管区域，用以使药物经巩膜扩散至所需治疗的位点，例如眼内空间和眼部的黄斑。经巩膜扩散的位点进一步优选为在临近黄斑处。用于投送组成物的植入物实例包括，但不局限于，描述于美国第3,416,530；3,828,777；4,014,335；4,300,557；4,327,725；4,853,224；4,946,450；4,997,652；5,147,647；5,164,188；5,178,635；5,300,114；5,322,691；5,403,901；5,443,505；5,466,466；5,476,511；5,516,522；5,632,984；5,679,666；5,710,165；5,725,493；5,743,274；5,766,242；5,766,619；5,770,592；5,773,019；5,824,072；5,824,073；5,830,173；5,836,935；5,869,079,5,902,598；5,904,144；5,916,584；6,001,386；6,074,661；6,110,485；6,126,687；6,146,366；6,251,090；和6,299,895以及WO 01/30323和WO 01/28474专利案中的装置，其所有内容并入于此作为参考。

实例包括，但不局限于以下的：包括一个内部储存库的缓释药物给药系统，其包括有效剂量的试剂足以有效获得所需的局部或全身生理或药学的效果；一种对试剂的通过为非渗透性的内管，所述内管具有第一和第二末端，并且覆盖于至少一部分的前述内部储存库，所述内管以能使其承受自身重量的大小和材质制定，一种位于内管第一末端的非渗透性成分防止前述试剂经由所述内管的第一末端流出前述的储存库，和一种位于所述内管第二末端的渗透性成分允许前述试剂经由所述内管的第二末端流出前述的储存物；一种投予本发明化合物至眼部部位的方法，所述方法包括的步骤为植入投送本发明化合物的缓释装置至眼部玻璃体或植入投送本发明化合物的可植入缓释装置至眼部部位；一种缓释的给药装置，包括：a)药核，其包括至少一种可有效获得诊断效果或有效获得所需的局部或全身生理或药学效果在治疗上有效剂量的第一试剂；b)至少一种实质上对周围所述试剂的通过为不具渗透性，且定义内部空间以接受前述药核的单元杯，所述的单元杯包括开放式顶端，并具有至少一个嵌壁式凹槽环绕在至少一部分所述单元杯的开放式顶端；c)对于前述试剂的通过为具渗透性的可渗透性塞子，其位于前述单元杯的开放式顶端，其中前述凹槽与所述渗透性塞子相互作用，以维持其位置并关闭其开放式顶端，所述的可渗透性塞子允许试剂通过可渗透性塞子，流出药核和前述单元杯的开放式顶端；以及d)至少一种可有效获得诊断效果或有效获得所需的局部或全身生理或药学效果的第二试剂；或一种缓释的药物给予系统，其包括：一种包含有效量试剂的内核，其具有所需的溶解度和聚合体涂层，所述的聚合体层对前述的试剂为可渗透的，其中所述的聚合体涂层完全覆盖在内核上。

其他的眼部给药方法包括使用脂质体以定位本发明的化合物至眼部，优选地为至视网膜色素上皮细胞和/或Bruch膜。例如前述的化合物可以所述的手段与脂质体复合，且将所述的化合物/脂质体复合物通过静脉注射导引所述的化合物至患有眼部PCD病人所期望的眼部组织或细胞。直接注射脂质体复合物至视网膜色素上皮细胞或Bruch膜邻近区域也可提供一些眼部PCD形式的复合物定位。在一个特定的具体例中，前述的化合物是通过在眼内缓释投送(如VITRASERT或ENVISION)。在一个特定的具体例中，前述的化合物是通过结膜后注射。在另一个特定的具体例中，含有本发明化合物的微乳剂颗粒被投于眼部组织，以吸收来自Bruch膜、视网膜色素上皮细胞或两者的脂质。

纳米颗粒是一种胶质载体系统，据显示其通过延长血清半衰期而改善封装药物的功效。聚氰基丙烯酸烷基酯(PACAs)纳米颗粒是一种临床上正在发展的聚合体胶质药物投予系统，如Stella et al.，J.Pharm.Sci.，2000.89：p.1452-1464；Brigger et al.，Int.J.Pharm.，2001.214：p.37-42；Calvo et al.，Pharm.Res.，2001.18：p.1157-1166；以及Li et al.，Biol.Pharm.Bull.，2001.24：p.662-665所描述。生物可降解的聚(羟基酸)，如聚(乳酸)(PLA)和聚(交酯-共乙交酯)(PLGA)的共聚物已被广泛地应用于生物医药，并已得到FDA批准在特定的临床应用。另外，PEG-PLGA纳米颗粒具有许多理想的载体特性，包括(i)封装的试剂包含在总载体系统中合理高的重量分数(负载)；(ii)用于封装过程第一步的试剂量在合理高的水平并入最终载体(捕获效率)；(iii)前述的载体具有冻干的能力，且再置于溶液中并无聚集；(iv)前述的载体为生物可降解的；(v)前述的载体系统为小型的；以及(vi)前述的载体增进颗粒的持续性。

纳米颗粒使用任何实质上所属技术领域所公知的生物可降解外壳合成。在一个具体例中，使用如聚(乳酸)(PLA)或聚(交酯-共乙交酯)(PLGA)的聚合体。前述的聚合体为生物可相容且生物可降解的，并可以理想地进行提高所述纳米颗粒光化学功效和循环周期的修饰。在一个具体例中，前述的聚合体通过末端羧酸基(COOH)的修饰以提高所述颗粒的负电荷，因此，局限其与具负电荷的核酸适体相互作用。纳米颗粒也可以聚乙二醇(PEG)进行修饰，其也提高所述颗粒在循环中的半衰期和稳定性。前述的COOH基团可选择地转换为N-羟基丁二酰亚胺(NHS)酯，以共价结合胺修饰的适体。

本发明的组成物和方法中所使用的生物可相容性聚合体包括，但不局限于，聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯烃、聚醚类、聚环氧烷、聚对苯二甲酸亚烷基酯、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚乙烯卤化物、聚乙烯吡咯酮、聚羟基乙酸、聚硅氧烷、聚氨酯及其共聚物、烷基纤维素、羟烷基纤维素、纤维素酯、纤维素醚、硝基纤维素、丙烯酸和甲基丙烯酸酯的聚合体、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维素、醋酸纤维素、丙酸纤维素、丁酸乙酸纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素、羧乙基纤维素、三醋酸纤维素、纤维素硫酸钠盐、聚(甲基甲基丙烯酸酯)、聚(乙基甲基丙烯酸酯)、聚(丁基甲基丙烯酸酯)、聚(异丁基甲基丙烯酸酯)、聚(己基甲基丙烯酸酯)、聚(异癸基甲基丙烯酸酯)、聚(月桂基甲基丙烯酸酯)、聚(苯基甲基丙烯酸酯)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(异丙基丙烯酸酯)、聚(异丁基丙烯酸酯)、聚(十八烷基丙烯酸酯)、聚乙烯、聚丙烯、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(对苯二甲酸乙二酯)、聚(乙烯醇)、聚乙酸乙烯酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙烯吡咯酮、聚透明质酸、酪蛋白、凝胶、明胶、聚酸酐、聚丙烯酸、藻酸盐、壳聚糖、聚(甲基甲基丙烯酸酯)、聚(乙基甲基丙烯酸酯)、聚(丁基甲基丙烯酸酯)、聚(异丁基甲基丙烯酸酯)、聚(己基甲基丙烯酸酯)、聚(异癸基甲基丙烯酸酯)、聚(月桂基甲基丙烯酸酯)、聚(苯基甲基丙烯酸酯)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(异丙基丙烯酸酯)、聚(异丁基丙烯酸酯)、聚(十八烷基丙烯酸酯)及其任何的组合。在一个具体例中，本发明的纳米颗粒包括PEG-PLGA聚合体。

本发明的组成物也可为局部投药。对于局部投药，前述的组成物可以任何可用于眼部投药的药学上可接受赋形剂提供。前述的组成物优选地以滴剂的形式投予眼部表面。对于一些应用，前述组成物的投予是根据所述化合物通过角膜至眼内的扩散而定。

所属领域的技术人员可知，使用本发明的化合物治疗眼部PCD的最佳治疗方案可直接被确定。其并不是实验的问题，而是一种常规地为药学领域所操作的优化。裸鼠的活体内研究经常提供开始优化剂量和给药方案的起始点。如一些已实施在小鼠的研究中，注射的频率初始可为一周一次，然而，这样的频率可依初始临床实验所获得的结果和特定病人的需要，而可优化地调整为从一天至每两周至每月。

人类的用药剂量可初始地通过从前述化合物于小鼠的使用剂量推算得到，所属领域的技术人员可知，通过比较动物模型修正人类的剂量为所属领域的常规方法。在某些具体例中，据推算所述剂量的差异可从约1mg化合物/Kg体重至约5000mg化合物/Kg体重；或从约5mg/Kg体重至约4000mg/Kg体重或从约10mg/Kg体重至约3000mg/Kg体重；或从约50mg/Kg体重至约2000mg/Kg体重；或从约100mg/Kg体重至约1000mg/Kg体重；或从约150mg/Kg体重至约500mg/Kg体重。在其他的具体例中，前述的剂量可为约1、5、10、25、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2500、3000、3500、4000、4500，5000mg/Kg体重。在其他的具体例中，更高的剂量可预期被使用，如剂量可在约5mg化合物/Kg体重至约20mg化合物/Kg体重的范围内。在其他的具体例中，前述的剂量可为约8、10、12、14、16或18mg/Kg体重。当然，前述的剂量可依初始临床实验所获得的结果和特定病人的需要，如前述治疗方案的常规操作而上调或下调。

筛选分析

正如在此所讨论的，错误折叠的蛋白质通常会干扰具有正常生物功能的细胞，并造成PCD。在许多情况下，错误折叠蛋白质的蛋白质聚集体累积，将造成细胞伤害和细胞毒性。合适的化合物通过提高具有生化活性构象的突变蛋白质量，以修正或防止蛋白质的错误折叠。多种方法可用于进行识别前述化合物的筛选分析。在一个方法中，一个不能转变为野生型蛋白质构象的突变蛋白质在细胞中表达(例如活体外或活体内的细胞)；前述细胞与候选化合物接触；以及通过使用任何所属领域的公知技术或在此所述的方法分析前述化合物对所述突变蛋白质构象的作用。当一个化合物相较于未与化合物接触的对照组细胞，能在被接触的细胞中提高正确折叠蛋白质出现的收率，则被考虑为适用于本发明的方法。正确折叠蛋白质量的提高可通过如测量所述蛋白质在特有波长(例如视紫质为500nm)的吸收、测量细胞内蛋白质聚集的减少、测量细胞毒性的降低、测量PCD相关显性的减轻或使用任何标准方法测量所述蛋白质生物活性的提高(例如酶活性、配体的结合)来加以分析。在一个相关的方法中，是在11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或其类似物或衍生物存在下进行筛选。适用的化合物提高具有生化功能构象的蛋白质量至少10％、15％或20％，或优选地为25％、50％或75％；或最优选地为至少100％、200％、300％或甚至400％。

若需要，前述被识别化合物的功效分析在患有PCD的动物模型内进行(例如患有视网膜色素变性、囊状纤维症、亨廷顿病、帕金森氏症、阿兹阿尔茨海默症、肾源性尿崩症、癌症(例如涉及p53突变的癌症)和朊相关疾病(例如Jacob-Creutzfeld病)。

测试化合物和萃取物

一般而言，能提高细胞内正确折叠蛋白质量的化合物，是依照所属领域所公知的技术从大型天然产物或合成(或半合成)萃取物文库或化学文库中加以识别。药物的发现和发展领域中的技术人员可理解到，测试萃取物或化合物的精确来源并非本发明筛选过程的关键。据此，事实上任何数目的化学萃取物或化合物可使用在此所述的方法以进行筛选。前述的萃取物或化合物实例包括，但不局限于，以植物、真菌、原核或动物为基础的萃取物、发酵液、合成化合物，以及存在化合物的修饰。多种方法也可用于产生随机或直接合成任何数量的化学化合物，包括，但不局限于，以醣、脂、肽和核酸为基础的化合物。合成化合物的文库可商业地购自Brandon Associates(Merrimack，N.H.)和Aldrich Chemical(Milwaukee，Wis.)。细菌、真菌、植物和动物萃取物形式的天然化合物文库，可商业上选择地购自一些包括Biotics(Sussex，UK)、Xenova(Slough，UK)、Harbor Branch Oceangraphics Institure(Ft.Pierce，Fla.)和PharmaMar，U.S.A.(Cambridge，Mass.)的来源。另外，若需要，天然和合成制造的文库可依照所属领域中的公知技术产生，例如通过标准的萃取和分离方法。更进一步，若需要，任何文库或化合物可使用标准化学、物理或生化方法轻易地修改。

另外，药物的发现和发展领域中的技术人员可轻易地理解，用于去重复(如分类的去重复、生物的去重复和化学的去重复，或任何其组合)的方法或消除物质的复制或重复以修正错误折叠蛋白质的活性为已知，并在可能的情况下使用。

当发现粗萃取物可修正错误折叠蛋白质的构象时，进一步的正向萃取物的分离为分离产生所观测到效果的化学组成物所必须的。因此，萃取、分离和纯化过程的目的是在可提高正确折叠蛋白质产量的粗萃取物中仔细地特性描述和识别化学本质。所述异源萃取物的分离和纯化方法为所属技术领域所公知的。若需要，所显示为适用于治疗任何涉及错误折叠的蛋白质或蛋白质聚集病理的试剂，可依照所属技术领域所公知的方法进行化学修饰。

组合治疗

本发明用于治疗PCD(例如视网膜色素变性、亨廷顿病、帕金森氏症、阿兹阿尔茨海默症、肾源性尿崩症、癌症和如Jacob-Creutzfeld病的朊相关疾病)的组成物，若需要，可与任何公知技术中的标准治疗组合投予。对于视网膜色素变性，标准治疗包括维生素A的补充剂。至于帕金森氏症，标准治疗包括投予任何一种或更多种以下的多巴胺受体激动剂：左旋多巴/卡比多巴、金刚烷胺、溴隐停、培高利特、阿扑吗啡、苄丝肼、麦角乙脲、美舒麦角、麦角脲、麦角腈、美金刚胺、甲麦角林、吡贝地尔、酪胺、酪氨酸、苯丙氨酸、甲磺酸溴隐亭、甲磺酸培高利特；其他标准治疗包括抗组胺剂、抗抑郁药、多巴胺激动剂和单胺氧化酶抑制剂。对于亨廷顿病，标准治疗包括投予任何一种或更多种以下的氟呱啶醇、吩噻嗪、利血平、丁苯那嗪、金刚烷胺和辅酶Q10。对于阿尔茨海默症，标准治疗包括投予任何一种或更多种以下的多奈呱齐(艾里赛特)、利斯的明(艾斯能)、加兰他敏(Razadyne)和他克林(Cognex)。对于肾源性尿崩症，标准治疗包括投予任何一种或更多种以下的氯噻嗪/氢氯噻嗪、阿米洛利和吲哚美辛。对于癌症，标准治疗包括投予任何一种或更多种以下的醋酸阿比特龙、六甲蜜胺、脱水长春碱、auristatin、贝沙罗汀、比卡鲁胺、BMS184476、2，3，4，5，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧苯基)苯磺酰胺、博来霉素、N，N-二甲基-L-缬氨酰-L-缬氨酰-N-甲基-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-脯氨酸-t-丁酰胺、肿瘤坏死因子、西马多丁、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、3′，4′-二脱氢基-4′-脱氧-8′-去甲长春碱、多西紫杉醇、多西他赛、环磷酰胺、卡铂、卡莫司汀(BCNU)、顺铂、自念珠藻环肽、阿糖胞苷、达卡巴嗪(DTIC)、放线菌素、柔红霉素、海兔毒素、多柔比星(阿霉素)、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、非那雄胺、氟他胺、羟基脲和羟基脲紫杉烷、异环磷酰胺、利阿唑、氯尼达明、洛莫司汀(CCNU)、甲二氯甲二乙胺(氮芥)、美法仑、羟乙基磺酸米伏布林、根瘤菌素、sertenef、链脲佐菌素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、尼鲁米特、奥那司酮、紫杉醇、泼尼莫司汀、丙卡巴肼、RPR109881、磷酸雌二醇氮芥、他莫昔芬、他索那明、紫杉醇、维甲酸、长春碱、长春新碱、硫酸长春地辛碱和长春氟宁。

试剂盒

本发明提供用于治疗或预防PCD或其症状的试剂盒。在一个具体例中，所述的试剂盒包括含有有效剂量的11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和任何一种或更多种以下的蛋白酶体抑制剂(如MG132)、自噬抑制剂(如3-甲基腺嘌呤)、溶酶体抑制剂(如氯化铵)、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂(如布雷菲德菌素A)、Hsp90伴侣分子抑制剂(如格尔德霉素)、热休克反应激活剂(如雷公藤红素)、糖苷酶抑制剂(如栗精胺)和组蛋白去乙酰酶抑制剂(如Scriptaid)的药学包装。前述的组成物优选以单元剂量的型式存在。在一些具体例中，前述的试剂盒包括含有治疗或预防组成物的无菌容器；所述的容器可为盒、安瓿、瓶、小瓶、试管、袋、小袋、泡沫包装或其他所属技术领域所公知的合适容器形式。前述的容器可由塑胶、玻璃、片层纸、金属箔或其他合适用于保存药物的物质所制成。

若需要，本发明的组成物或其组合与投予患有或有发展为PCD风险的对象的指导说明共同提供。前述的指导说明通常包括使用治疗或预防PCD的化合物的资讯。在其他具体例中，所述的指导说明包括至少一种的以下内容：所述化合物的说明或化合物的组合；治疗PCD或其症状的剂量计划表和投药；预防；警告；指示；反向指示；过度剂量的资讯；副作用；动物药理学；临床研究；和/或参考文献。前述的指导说明可直接印刷于容器上(若存在)，或以标签贴于容器上，或在容器内或与容器一起提供的单独纸张、小册子、卡片或文件夹。

以下所提供的实例目的在于说明本发明，而非限制。所属领域技术人员可理解以下所提供的特定解释可以多种方式改变，当保持前述化合物或其组合的关键性质时，则与前述的发明相一致。

重组多肽的表达

由于本发明的组成物提高恢复具有生化活性构象的重组多肽，因此，经常用于增强任何公知技术中重组多肽实质上的表达。本发明的组成物特别地适用于增强恢复倾向于形成非活性蛋白质的聚集或形成包涵体的生物活性多肽。为了增强恢复所述蛋白质生物活性的形态，至少一种或更多种本发明的组成物被添加入当蛋白质合成被诱导后表达所述蛋白质的重组细胞(如真核细胞、哺乳动物细胞或酵母细胞)培养液中。前述的组成物包括蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、糖苷酶抑制剂、热休克反应激活剂或组蛋白去乙酰酶抑制剂。为了提高重组或突变视蛋白的表达，11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛可在诱导时被添加入培养液中。

一般而言，重组多肽的产生是通过将在合适表现载体中全部或部分编译多肽的核酸分子或其片段转化入合适的宿主细胞中。分子生物学领域的技术人员可理解任何广泛多样的表达系统可被使用以提供前述的重组蛋白质。具体的宿主细胞使用并非本发明的关键。重组多肽可实质地在任何真核宿主细胞(如Saccharomyces cerevisiae、如Sf21细胞的昆虫细胞或如NIH3T3、HeLa或优选地为COS细胞的哺乳动物细胞)内产生。前述的细胞可得自多种来源(例如American Type CultureCollection，Rockland，Md.；另参见如Ausubel et al.，Current Protocol inMolecular Biology，New York：John Wiley和Sons，1997)。转染的方法和表达载体的选择将取决于所选择的宿主系统。转化方法描述于如Ausubel et al.(supra)中；表达载体可选自如Cloning Vectors：ALaboratory Manual(P.H.Pouwels et al.，1985，Supp.1987)所提供。

有多种表达系统存在以产生重组多肽。用于产生所述多肽的表达载体包括，但不局限于，源自于染色体、游离体和病毒的载体，例如源自于细菌质粒、噬菌体、转位子、酵母游离体、插入因子、酵母染色体因子、如杆状病毒、SV40的乳多空病毒、牛痘病毒、腺病毒、禽痘病毒、伪狂犬病病毒和逆转录病毒的病毒的载体，以及源自于其组合的载体。

一旦前述的重组多肽被表达，将使用如亲和层析予以分离。在一个实施例中，所产生对抗前述多肽的抗体(例如在此所描述产生)可被附着于管柱上，并用于分离所述的重组多肽。多肽锚定细胞的溶解和分离先于通过标准方法实现的亲和层析(如参阅Ausubel et al.，supra)。一旦经分离，若需要，所述的重组蛋白质可进一步通过如高效液相色谱分析纯化(如参阅Fisher，Laboratroy Techniques In Biochemistry andMolecular Biology，eds.，Work和Burdon，Elsevier，1980)。

实施例

视网膜色素变性包括导致杆状光受体死亡的遗传性视网膜疾病的异源组。视网膜色素变性的病人，其光受体的死亡将导致起因于外周视力的逐渐损失所造成的夜盲和之后的管状视野。20至25％患有常染色体显性视网膜色素变性(ADRP)的病人，其视紫质基因具有突变，最常见的突变为P23H。所述的P23H突变造成无法与11-顺式-视黄醛结合的错误折叠视蛋白。错误折叠的P23H蛋白质滞留于细胞内，并形成聚集(Saliba et al.，2002.JCS 115：2907-2918；Illing et al.，2002.JBC 277：34150-34160)。所述的聚集反应将一些RP突变予以分类，包括作为蛋白质构象疾病(PCD)的P23H。

尽管以下的实施例直接使用P23H突变蛋白以识别降低错误折叠蛋白质聚集和提高正确折叠蛋白质产量的化合物，本发明并非局限于此。所识别用于在细胞内提高正确折叠P23H产量的化合物，不单单仅用于治疗视网膜色素变性。前述的化合物可能提高任何错误折叠蛋白质的产量，通常实质上也用于治疗任何蛋白质构象的疾病。

特异性的药学上伴侣分子，越来越多已显示可用于挽救错误折叠和聚集的蛋白质。竞争性酶抑制剂也已被用于作为药学上的伴侣分子，有时在包括法布瑞氏症(Fabry’s)、GM1-神经节苷脂沉积症、戈谢病(Gaucher)、家族黑蒙性痴呆(Tay-sachs)和RP17，称为特异性的化学伴侣分子。为了确定是否通过一般所使用的蛋白质折叠、运输和降解细胞的抑制过程，可提高细胞内恰当折叠蛋白质的产量，以下分类的代表性化合物被测试：蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂。

先前的研究显示，天然的11-顺式-视黄醛伴侣分子可在数量上促进活体内P23H视蛋白的折叠和稳定性，如同9-顺式-视黄醛和11-顺式-视黄醛的7环固定异构体(Noorwez et al.，J.Biol.Chem.2003 Apr 18；278(16)：14442-50)。如同野生型的蛋白质，前述被挽救的P23H突变蛋白质形成色素，并获得完全的糖基化被运输至细胞表面。在本研究中，多种细胞酶的抑制剂效果和可参与细胞内P23H视蛋白命运的途径被分析。

实施例1：使用表达P23H视蛋白的细胞株分析蛋白质的折叠

P23H突变和野生型视蛋白在11-顺式-视黄醛和多种抑制剂存在下分别在四环素诱导的稳定HEK293细胞株内表达。在第48小时，前述的折叠蛋白质通过免疫亲和纯化，并通过UV-可见光光谱分析定量。视蛋白的总量在280nm下进行分析。具有生化功能构象的视紫质的量在500nm下进行分析。免疫萤光显微镜也被用于确定所述蛋白质的细胞位置。

实施例2：蛋白酶体的抑制提高恢复成正确折叠的P23H

一种可逆性的蛋白酶体抑制剂MG132，在诱导时被添加入描述于实施例1中的HEK293细胞株的培养基中。如图1A所示，蛋白酶体抑制造成多于200-250％视紫质的恢复。相比下，野生视紫质的产量仅提高35-40％(图1B)。

实施例3：自噬的抑制提高恢复成正确折叠的P23H

通过在诱导时在培养基中加入3-甲基腺嘌呤，实施例1中HEK293细胞的自噬作用被抑制。这导致P23H视紫质的恢复提高350-400％，而野生型的视紫质仅有50-60％恢复(图2A和2B)。

实施例4：溶酶体的抑制提高恢复成正确折叠的P23H

一种溶酶体抑制剂氯化铵在P23H蛋白质被诱导合成时添加入实施例1中的HEK293细胞培养基中。令人感兴趣的是，溶酶体的抑制造成P23H视紫质的恢复提高30％，而在野生型视紫质的恢复则提高10％(图3A和3B)。

实施例5：阻止内质网至高尔基体的运输提高正确折叠P23H的产量

蛋白质从内质网至高尔基体顺行性的运输，在诱导时通过在实施例1中的HEK293细胞内添加布雷菲德菌素A而被阻止。前述的治疗导致P23H视紫质的产量提高2倍(图4A)，所相应在野生型视紫质的产量则提高约60％(图4B)。

实施例6：Hsp90的抑制提高恢复成正确折叠的P23H

特定的Hsp90伴侣分子抑制剂格尔德霉素在诱导时被添加入实施例1中所描述的HEK293细胞培养基中。投予表达野生型和P23H视蛋白的细胞格尔德霉素，导致P23H视紫质的恢复提高60％(图5A)，在野生型视紫质的恢复则仅有为不足道的提高(图5B)。

实施例7：热休克反应的启动提高正确折叠P23H的产量

热休克反应在诱导时通过添加雷公藤红素于实施例1中的HEK293细胞时被启动。前述的治疗造成P23H视紫质40％的提高(图6A)，雷公藤红素对野生型视紫质的恢复效果相对而言甚小(～5-7％)(图6B)。

实施例8：二氢雷公藤红素提高恢复成野生型和P23H的视紫质

一种雷公藤红素的衍生物二氢雷公藤红素对P23H视紫质的恢复作用，在实施例1的HEK293细胞中被分析。二氢雷公藤红素对野生型和P23H视紫质的恢复提高约5-10％(图7A和7B)。

实施例9：组蛋白去乙酰酶的抑制提高野生型和P23H视紫质的恢复

在诱导时添加入一种组蛋白去乙酰酶抑制剂Scriptaid至实施例1中的HEK293细胞培养基中，Scriptaid对野生型和P23H视紫质的恢复提高约30％(图8A和8B)。

实施例10：11-顺式视黄醛在抑制剂存在下增强对视蛋白的挽救

如表1所示，以下的每一种抑制剂在11-顺式-视黄醛存在下提高恢复成折叠的视紫质：葡糖苷酶1和2(栗精胺)、从内质网至高尔基体顺行性的运输(布雷菲德菌素A)、Hsp90(格尔德霉素)、蛋白酶体(MG132)、自噬作用(3-MA)和溶酶体(氯化铵)。MG132和3-甲基腺嘌呤在前述折叠视紫质的恢复上显示最为显著的效果。

表1：抑制剂在视紫质恢复上的效果

化合物	P23H(恢复提高的％)	野生型(恢复提高的％)
			MG132	230	140
3MA	400	159
			氯化铵	138	115
布雷菲德菌素A	210	160
			格尔德霉素	170	115
雷公藤红素	150	115
			二氢雷公藤红素乙酸	123	105
Scriptaid	131	130

为了确定抑制剂的效果是否需要特定的伴侣分子11-顺式-视黄醛的存在，每一种抑制剂皆被单独测试。MG132为一种在11-顺式-视黄醛不存在的情况下，提高150％恢复成正确折叠的P23H视紫质的蛋白酶体抑制剂。3-甲基腺嘌呤为在11-顺式-视黄醛不存在的情况下提高200％恢复成正确折叠的P23H视紫质的自噬抑制剂。当细胞在其他抑制剂存在，但未添加11-顺式-视黄醛时生长，则有较低恢复量的正确折叠P23H视蛋白。

P23H的突变使视蛋白变得不稳定，并导致其在细胞内聚集。不正确折叠的P23H不能结合其天然的配体11-顺式-视黄醛。添加11-顺式-视黄醛至表达P23H突变的细胞培养基内，使得配体可接近早期折叠的视蛋白中间体，并达到提高5-6倍视紫质的产量。前述的效果为突变所特有，并未发现在表达野生型视蛋白的细胞培养基中添加11-顺式-视黄醛有效果。11-顺式-视黄醛和每一种蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂或组蛋白去乙酰酶抑制剂的组合可提高恢复具有生化功能构象的P23H。

具有生化功能构象的P23H蛋白在功能分析上，显示其野生型蛋白质的生物活性，例如P23H蛋白当如同在此所述的表达时，能通过光启动转化为变视紫红素II。前述的转化通过光谱分析监视。另外，P23H蛋白当如同在此所述的表达时，可被分离成为细胞膜的一部分。当传递蛋白被添加入含有P23H的分离膜时，所述的P23H蛋白能启动异三聚体G蛋白传递蛋白，并通过传递蛋白的α亚基引发GDP转换为GTP。在视网膜色素变性的动物模型中，投予本发明的组成物(如11-顺式-视黄醛与任合一种或更多种的蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂或组蛋白去乙酰酶抑制剂组合)可期待将功能性的挽救或改善与视网膜色素变性显性相关的症状。

材料和方法

细胞株和细胞状态

稳定的野生型和表达P23H视蛋白的HEK293细胞株由Flp-InT-Rex系统(Invitrogen)产生。所述的HEK293细胞在37℃、8％CO2存在下，生长于DMEM的高葡萄糖培养液中，并补充10％牛胎血清、抗生素-抗真菌素溶液、5μg/ml杀稻瘟菌素和潮霉素。

视蛋白产生的诱导和抑制剂的添加

表达视蛋白的HEK293细胞株允许被汇集，并在改变培养液后以1μg/ml的四环素诱导。在红光下诱导后立即加入10μM的11-顺式视黄醛，同时加入如表2(下文)所示浓度的抑制剂。

表2

使用的抑制剂	使用的浓度
		MG132	250nM
3-甲基腺嘌呤	10mM
		氯化铵	30mM
布雷菲德菌素A	100ng/ml
		格尔德霉素	750mM

雷公藤红素	1μM
		二氢雷公藤红素	1μM
Scriptaid	4μM
		Kifunensine	20μM

细菌盘经过48小时的培养，在红光下第一次应用后，提供10μM的视网膜24小时。

细胞的收集和视紫质的纯化

在诱导和投予抑制剂后48小时，所述的HEK293细胞被收集，且视紫质本质上如Noorwez et al.(J Biol Chem.2004 Apr16；279(16)：16278-84)所描述被纯化。使用Varian Cary 50光谱分析仪进行光谱分析扫描。

其他具体例

由前述说明可明显知道，变化和修正可用于在此所描述的本发明，以使其适用于多种使用和条件。所述具体例也可在以下权利要求的范围内。

列举的文件列表在任何变数的定义中，在此包括所述变数作为所列元素的任何单一元素或组合(或次组合)的定义。在此所列举的具体例包括作为任何单一具体例或与任何其他具体例或其部分组合的具体例。

所有本说明书提到的专利和刊物于此以相同范围并入参考，如同每一个独立的专利和刊物具体且单独地被指明以并入参考。

Claims (113)

1、治疗患有蛋白质构象疾病(PCD)的对象的方法，所述方法包括投予至少一种选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的化合物，其中，所述化合物是以有效的剂量投予以治疗所述对象。

2、如权利要求1所述的方法，其中，所述PCD是选自由视网膜色素变性、老年黄斑变性、青光眼、角膜营养不良、视网膜劈裂症、斯特格病变(Stargardt’s disease)、常染色体显性玻璃膜疣(autosomaldominant druzen)和贝斯特黄斑营养不良(Best’s macular dystrophy)所组成群组的眼部PCD。

3、如权利要求2所述的方法，其中，所述方法进一步包括投予治疗对象11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体。

4、如权利要求2所述的方法，其中，所述眼部PCD是视网膜色素变性或老年黄斑变性。

5、治疗被诊断患有视网膜色素变性的对象的方法，所述方法包括

a)投予所述对象11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛；以及

b)投予至少一种额外选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的化合物，其中，所述11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和所述化合物是以有效的剂量同时或在14天内分别投予所述对象。

6、如权利要求5所述的方法，其中，所述11-顺式-视黄醛是11-顺式-视黄醛的7环固定异构体。

7、如权利要求1或5所述的方法，其中，所述对象包括影响蛋白质折叠的突变。

8、如权利要求7所述的方法，其中，所述突变发生在视蛋白内。

9、如权利要求8所述的方法，其中，所述视蛋白包括P23H突变。

10、如权利要求1或5所述的方法，其中，所述蛋白酶体抑制剂选自由MG132、乳胞素(lactocystin)、分裂乳胞素-β-内酯(clasto-lactocystin-beta-lactone)、PSI、MG-115、MG-101、N-乙酰基-亮氨酸-亮氨酸-蛋氨酸-醛、N-苄酯基-甘氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-醛(N-carbobenzoyl-Gly-Pro-Phe-Leu-CHO)、N-苄酯基-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-醛、N-苄酯基-亮氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-醛及其盐或类似物所组成的群组。

11、如权利要求10所述的方法，其中，所述蛋白酶体抑制剂是可逆性蛋白酶体抑制剂。

12、如权利要求11所述的方法，其中，所述可逆性蛋白酶体抑制剂是MG132。

13、如权利要求1或5所述的方法，其中，所述自噬抑制剂选自由3-甲基腺嘌呤、3-甲基腺苷、腺苷、冈田酸、N⁶-巯基嘌呤核糖核苷(N⁶-MPR)、5-氨基-4-咪唑甲酰胺核糖核苷(AICAR)、巴佛洛霉素A1及其盐或类似物所组成的群组。

14、如权利要求13所述的方法，其中，所述自噬抑制剂是3-甲基腺嘌呤。

15、如权利要求1或5所述的方法，其中，所述溶酶体抑制剂选自由亮抑酶肽、反式-环氧琥珀酰-L-亮氨酰胺-(4-胍基)丁烷(trans-epoxysaccinyl-L-leucylamide-(4-guanidino)butane)、L-蛋氨酸甲酯、氯化铵、甲胺、氯喹及其盐或类似物所组成的群组。

16、如权利要求15所述的方法，其中，所述溶酶体抑制剂是氯化铵。

17、如权利要求1或5所述的方法，其中，所述内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂是布雷菲德菌素A及其盐或类似物。

18、如权利要求1或5所述的方法，其中，所述Hsp90伴侣分子抑制剂选自由苯醌安莎霉素类抗生素、格尔德霉素、17-丙烯胺基-17-脱甲氧基格尔德霉素、根赤壳菌素、新生霉素和结合于Hsp90ATP/ADP袋的Hsp90抑制剂及其盐或类似物所组成的群组。

19、如权利要求18所述的方法，其中，所述Hsp90伴侣分子抑制剂是格尔德霉素。

20、如权利要求1或5所述的方法，其中，所述热休克反应激活剂选自由雷公藤红素、雷公藤红素甲酯、二氢雷公藤红素二乙酸、雷公藤红素丁酯和二氢雷公藤红素所组成的群组。

21、如权利要求20所述的方法，其中，所述热休克反应激活剂是雷公藤红素。

22、如权利要求20所述的方法，其中，所述热休克反应激活剂是二氢雷公藤红素。

23、如权利要求1或5所述的方法，其中，所述糖苷酶抑制剂选自由盐酸australine、栗精胺、6-乙酰胺-6-脱氧-栗精胺、盐酸脱氧岩藻糖野尻霉素(DFJ)、脱氧野尻霉素(DNJ)、盐酸脱氧半乳糖野尻霉素(DGJ)、盐酸脱氧甘露糖野尻霉素(DMJ)、2R，5R-双(羟甲基)-3R，4R-二羟基吡咯烷(DMDP)、盐酸1，4-二脱氧-1，4-亚氨基-D-甘露醇、盐酸3R，4R，5R，6R)-3，4，5，6-四羟基氮杂环庚烷、1，5-二脱氧-1，5-亚氨基-木糖醇、Kifunensine、N-丁基脱氧野尻霉素(BDNJ)、N-壬基DNJ(NDNJ)、N-己基DNJ(HDNJ)、N-甲基脱氧野尻霉素(MDNJ)及其盐或类似物所组成的群组。

24、如权利要求20所述的方法，其中，所述糖苷酶抑制剂是栗精胺。

25、如权利要求1或5所述的方法，其中，所述组蛋白去乙酰酶抑制剂选自由Scriptaid、APHA化合物8、Apicidin、丁酸钠、(-)-Depudecin、Sirtinol、曲古菌素A及其盐或类似物所组成的群组。

26、如权利要求25所述的方法，其中，所述组蛋白去乙酰酶抑制剂是Scriptaid。

27、如权利要求3或5所述的方法，其中，所述11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和所述化合物在10天内分别投予。

28、如权利要求27所述的方法，其中，所述11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和所述额外的化合物在5天内分别投予。

29、如权利要求28所述的方法，其中，所述11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和所述额外的化合物在24小时内分别投予。

30、如权利要求29所述的方法，其中，所述11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和所述化合物为同时投予。

31、如权利要求30所述的方法，其中，所述11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和所述化合物是投予到眼部。

32、如权利要求31所述的方法，其中，所述投药为眼内投药。

33、如权利要求30至32中任一项所述的方法，其中，所述11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和所述化合物各自混入提供其长期释放的组成物中。

34、如权利要求30所述的方法，其中，所述组成物是微球体、纳米球体或纳米乳剂。

35、如权利要求34所述的方法，其中，所述长期释放是通过给药装置。

36、如权利要求5至36中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括投予维生素A补充剂。

37、如权利要求1所述的方法，其中，所述PCD选自由α1-抗胰蛋白酶缺乏症、囊状纤维症、亨廷顿病、帕金森氏症、阿尔茨海默症、肾源性尿崩症、癌症和Jacob-Creutzfeld病所组成的群组。

38、如权利要求37所述的方法，其中，所述PCD是囊状纤维症，并且所述方法进一步包括投予选自由抗生素、维生素A、D、E和K补充剂、沙丁胺醇支气管扩张、链道酶和布洛芬所组成群组的试剂。

39、如权利要求38所述的方法，其中，所述PCD是亨廷顿病，并且所述方法进一步包括投予选自由氟呱啶醇、吩噻嗪、利血平、丁苯那嗪、金刚烷胺和辅酶Q10所组成群组的试剂。

40、如权利要求37所述的方法，其中，所述PCD是帕金森氏症，并且所述方法进一步包括投予选自由左旋多巴、金刚烷胺、溴隐停、培高利特、阿扑吗啡、苄丝肼、麦角乙脲、美舒麦角、麦角脲、麦角腈、美金刚胺、甲麦角林、吡贝地尔、酪胺、酪氨酸、苯丙氨酸、甲磺酸溴隐亭、甲磺酸培高利特、抗组胺剂、抗抑郁药和单胺氧化酶抑制剂所组成群组的试剂。

41、如权利要求37所述的方法，其中，所述PCD是阿尔茨海默症，并且所述方法进一步包括投予选自由多奈呱齐、利斯的明、加兰他敏和他克林所组成群组的试剂。

42、如权利要求37所述的方法，其中，所述PCD是肾源性尿崩症，并且所述方法进一步包括投予选自由氯噻嗪/氢氯噻嗪、阿米洛利和吲哚美辛所组成群组的试剂。

43、如权利要求37所述的方法，其中，所述PCD是癌症，并且所述方法进一步包括投予选自由阿比特龙醋酸、六甲蜜胺、脱水长春碱、auristatin、贝沙罗汀、比卡鲁胺、BMS184476、2，3，4，5，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧苯基)苯磺酰胺、博来霉素、N，N-二甲基-L-缬氨酰-L-缬氨酰-N-甲基-L-缬氨酰-L-脯氨酰-1-L-脯氨酸-t-丁酰胺、肿瘤坏死因子、西马多丁、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、3′，4′-二脱氢基-4′-脱氧-8′-去甲-长春碱(3′，4′-didehydro-4′-deoxy-8′-norvin-caleukoblastine)、多西紫杉醇、多西他赛、环磷酰胺、卡铂、卡莫司汀(BCNU)、顺铂、自念珠藻环肽、阿糖胞苷、达卡巴嗪(DTIC)、放线菌素D、柔红霉素、海兔毒素、多柔比星(阿霉素)、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、非那雄胺、氟他胺、羟基脲和羟基脲紫杉烷、异环磷酰胺、利阿唑、氯尼达明、洛莫司汀(CCNU)、甲二氯二乙胺(氮芥)、美法仑、羟乙基磺酸米伏布林、根瘤菌素、sertenef、链脲佐菌素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、尼鲁米特、奥那司酮、紫杉醇、泼尼莫司汀、丙卡巴肼、RPR109881、磷酸雌二醇氮芥(stramustinephosphate)、他莫昔芬、他索那明、紫杉醇、维甲酸、长春碱、长春新碱、硫酸长春地辛碱和长春氟宁(vinflunin)所组成群组的试剂。

44、在细胞内提高具有生化功能构象的蛋白质的量的方法，所述方法包括：

a)将细胞与至少一个选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的有效量化合物接触；以及

b)识别所述具有生化功能构象的蛋白质的量的提高。

45、如权利要求44所述的方法，其中，所述方法进一步包括将所述细胞与11-顺式-视黄醛、9-顺式-视黄醛或11-顺式-视黄醛的7环固定异构体接触。

46、如权利要求45所述的方法，其中，所述细胞包括形成聚集体或纤维的突变蛋白质。

47、如权利要求46所述的方法，其中，所述细胞包括突变视蛋白。

48、如权利要求46所述的方法，其中，所述细胞包括突变肌纤蛋白。

49、如权利要求46所述的方法，其中，所述细胞包括突变脂褐质蛋白。

50、如权利要求46所述的方法，其中，所述细胞包括突变β-H3蛋白。

51、如权利要求44至50中任一项所述的方法，其中，所述细胞是在体外的。

52、如权利要求44至50中任一项所述的方法，其中，所述细胞是在体内的。

53、如权利要求44至52中任一项所述的方法，其中，所述细胞是哺乳动物细胞。

54、如权利要求53所述的方法，其中，所述细胞是人类细胞。

55、用于治疗眼部PCD的药学组成物，是在药学上可接受的赋形剂中包括有效量的11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和至少一个额外选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的有效量化合物。

56、用于治疗视网膜色素变性的药学组成物，是在药学上可接受的赋形剂中包括有效量的11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛和至少一个选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂，Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的有效量化合物。

57、如权利要求55或56所述的组成物，其中，所述蛋白酶体抑制剂选自由MG132、乳胞素、分裂乳胞素-β-内酯、PSI、MG-115、MG-101、N-乙酰基-亮氨酸-亮氨酸-蛋氨酸-醛、N-苄酯基-甘氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-醛、N-苄酯基-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-醛、N-苄酯基-亮氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-醛及其盐或类似物所组成的群组。

58、如权利要求57所述的组成物，其中，所述蛋白酶体抑制剂是可逆性蛋白酶体抑制剂。

59、如权利要求55或56所述的组成物，其中，所述可逆性蛋白酶体抑制剂是MG132。

60、如权利要求55或56所述的组成物，其中，所述自噬抑制剂选自由3-甲基腺嘌呤、3-甲基腺苷、腺苷、冈田酸、N⁶-巯基嘌呤核糖核苷(N⁶-MPR)、5-氨基-4-咪唑甲酰胺核糖核苷(AICAR)、巴佛洛霉素A1及其盐或类似物所组成的群组。

61、如权利要求60所述的组成物，其中，所述自噬抑制剂是3-甲基腺嘌呤。

62、如权利要求55或56所述的组成物，其中，所述溶酶体抑制剂选自由亮抑酶肽、反式-环氧琥珀酰-L-亮氨酰胺-(4-胍基)丁烷、L-蛋氨酸甲酯、氯化铵、甲胺、氯喹及其盐或类似物所组成的群组。

63、如权利要求62所述的组成物，其中，所述溶酶体抑制剂是氯化铵。

64、如权利要求55或56所述的组成物，其中，所述内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂是布雷菲德菌素A及其盐或类似物。

65、如权利要求55或56所述的组成物，其中，所述Hsp90伴侣分子抑制剂选自由苯醌安莎霉素类抗生素、格尔德霉素、17-丙烯胺基-17-脱甲氧基格尔德霉素、根赤壳菌素、新生霉素和结合于Hsp90ATP/ADP袋的Hsp90抑制剂及其盐或类似物所组成的群组。

66、如权利要求65所述的组成物，其中，所述Hsp90伴侣分子抑制剂是格尔德霉素。

67、如权利要求55或56所述的组成物，其中，所述热休克反应激活剂选自由雷公藤红素、雷公藤红素甲酯、二氢雷公藤红素二乙酸、雷公藤红素丁酯和二氢雷公藤红素所组成的群组。

68、如权利要求67所述的组成物，其中，所述热休克反应激活剂是雷公藤红素。

69、如权利要求67所述的组成物，其中，所述热休克反应激活剂是二氢雷公藤红素。

70、如权利要求55或56所述的组成物，其中，所述糖苷酶抑制剂是选自由盐酸australine、栗精胺、6-乙酰胺-6-脱氧-栗精胺、盐酸脱氧岩藻糖野尻霉素(DFJ)、脱氧野尻霉素(DNJ)、盐酸脱氧半乳糖野尻霉素(DGJ)、盐酸脱氧甘露糖野尻霉素(DMJ)、2R，5R-双(羟甲基)-3R，4R-二羟基吡咯烷(DMDP)、盐酸1，4-二脱氧-1，4-亚氨基-D-甘露醇、盐酸3R，4R，5R，6R-3，4，5，6-四羟基氮杂环庚烷、1，5-二脱氧-1，5亚氨基-木糖醇、Kifunensine、N-丁基脱氧野尻霉素(BDNJ)、N-壬基DNJ(NDNJ)、N-己基DNJ(HDNJ)、N-甲基脱氧野尻霉素(MDNJ)及其盐或类似物所组成的群组。

71、如权利要求70所述的组成物，其中，所述糖苷酶抑制剂是栗精胺。

72、如权利要求55或56所述的组成物，其中，所述组蛋白去乙酰酶抑制剂选自由Scriptaid、APHA化合物8、Apicidin、丁酸钠、(-)-Depudecin、Sirtinol、曲古菌素A及其盐或类似物所组成的群组。

73、如权利要求72所述的组成物，其中，所述组蛋白去乙酰酶抑制剂是Scriptaid。

74、如权利要求55至73中任一项所述的组成物，其中，所述眼部PCD选自由老年黄斑变性、视网膜色素变性、青光眼、角膜营养不良、视网膜劈裂症、斯特格病变、常染色体显性玻璃膜疣和贝斯特黄斑营养不良所组成的群组。

75、治疗眼部PCD的试剂盒，所述试剂盒包括有效量的11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛；以及

至少一个额外选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的有效量化合物。

76、治疗视网膜色素变性的试剂盒，所述试剂盒包括

有效量的11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛；以及

至少一个额外选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的有效量化合物。

77、如权利要求75或76所述的试剂盒，其中，所述蛋白酶体抑制剂选自由MG132、乳胞素、分裂乳胞素-β-内酯、PSI、MG-115、MG-101、N-乙酰基-亮氨酸-亮氨酸-蛋氨酸-醛、N-苄酯基-甘氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-醛、N-苄酯基-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-醛、N-苄酯基-亮氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-醛及其盐或类似物所组成的群组。

78、如权利要求75或76所述的试剂盒，其中，所述蛋白酶体抑制剂是可逆性蛋白酶体抑制剂。

79、如权利要求78所述的试剂盒，其中，所述可逆性蛋白酶体抑制剂是MG132。

80、如权利要求75或76所述的试剂盒，其中，所述自噬抑制剂选自由3-甲基腺嘌呤、3-甲基腺苷、腺苷、冈田酸、N⁶-巯基嘌呤核糖核苷(N⁶-MPR)、5-氨基-4-咪唑甲酰胺核糖核苷(AICAR)、巴佛洛霉素A1及其盐或类似物所组成的群组。

81、如权利要求80所述的试剂盒，其中，所述自噬抑制剂是3-甲基腺嘌呤。

82、如权利要求75或76所述的试剂盒，其中，所述溶酶体抑制剂选自由亮抑酶肽、反式-环氧琥珀酰-L-亮氨酰胺-(4-胍基)丁烷、L-蛋氨酸甲酯、氯化铵、甲胺、氯喹及其盐或类似物所组成的群组。

83、如权利要求82所述的试剂盒，其中，所述溶酶体抑制剂是氯化铵。

84、如权利要求75或76所述的试剂盒，其中，所述内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂是布雷菲德菌素A及其盐或类似物。

85、如权利要求75或76所述的试剂盒，其中，所述Hsp90伴侣分子抑制剂选自由苯醌安莎霉素类抗生素、格尔德霉素、17-丙烯胺基-17-脱甲氧基格尔德霉素、根赤壳菌素、新生霉素和结合于Hsp90ATP/ADP袋的Hsp90抑制剂及其盐或类似物所组成的群组。

86、如权利要求85所述的试剂盒，其中，所述Hsp90伴侣分子抑制剂是格尔德霉素。

87、如权利要求75或76所述的试剂盒，其中，所述热休克反应激活剂选自由雷公藤红素、雷公藤红素甲酯、二氢雷公藤红素二乙酸、雷公藤红素丁酯和二氢雷公藤红素所组成的群组。

88、如权利要求87所述的试剂盒，其中，所述热休克反应激活剂是雷公藤红素。

89、如权利要求87所述的试剂盒，其中，所述热休克反应激活剂是二氢雷公藤红素。

90、如权利要求75或76所述的试剂盒，其中，所述糖苷酶抑制剂选自由盐酸australine、栗精胺、6-乙酰胺-6-脱氧-栗精胺、盐酸脱氧岩藻糖野尻霉素(DFJ)、脱氧野尻霉素(DNJ)、盐酸脱氧半乳糖野尻霉素(DGJ)、盐酸脱氧甘露糖野尻霉素(DMJ)、2R，5R-双(羟甲基)-3R，4R-二羟基吡咯烷(DMDP)、盐酸1，4-二脱氧-1，4-亚氨基-D-甘露醇、盐酸3R，4R，5R，6R-3，4，5，6-四羟基氮杂环庚烷、1，5-二脱氧-1，5-亚氨基-木糖醇、Kifunensine、N-丁基脱氧野尻霉素(BDNJ)、N-壬基DNJ(NDNJ)、N-己基DNJ(HDNJ)、N-甲基脱氧野尻霉素(MDNJ)及其盐或类似物所组成的群组。

91、如权利要求90所述的试剂盒，其中，所述糖苷酶抑制剂是栗精胺。

92、如权利要求75或76所述的试剂盒，其中，所述组蛋白去乙酰酶抑制剂选自由Scriptaid、APHA化合物8、Apicidin、丁酸钠、(-)-Depudecin、Sirtinol、曲古菌素A及其盐或类似物所组成的群组。

93、如权利要求92所述的试剂盒，其中，所述组蛋白去乙酰酶抑制剂是Scriptaid。

94、识别适用于治疗患有眼部PCD的对象的化合物的方法，所述方法包括

a)将在体外表达错误折叠的蛋白质的细胞与候选化合物接触；以及

b)确定从所述细胞中恢复成正确折叠的蛋白质相对于对照细胞的收率，其中在所述接触细胞内正确折叠蛋白质收率的提高识别适用于治疗患有PCD的对象的化合物。

95、识别适用于治疗患有视网膜色素变性的对象的化合物的方法，所述方法包括

a)将在体外表达错误折叠蛋白质的细胞与

(i)11-顺式-视黄醛或9-顺式-视黄醛，以及

(ii)候选化合物接触；以及

b)确定从所述细胞中恢复成正确折叠的蛋白质相对于对照细胞的收率，其中在所述接触细胞内正确折叠蛋白质收率的提高识别适用于治疗患有视网膜色素变性的对象的化合物。

96、如权利要求94或95所述的方法，其中，所述11-顺式-视黄醛是11-顺式-视黄醛的7环固定异构体。

97、如权利要求94或95所述的方法，其中，所述错误折叠蛋白质包括突变。

98、如权利要求94或95所述的方法，其中，所述错误折叠蛋白质是视蛋白。

99、如权利要求98所述的方法，其中，所述视蛋白包括P23H突变。

100、用于治疗患有蛋白质构象疾病(PCD)的对象的方法，所述方法包括投予所述对象有效量的蛋白酶体抑制剂或自噬抑制剂以治疗所述对象。

101、用于治疗患有视网膜色素变性的对象的方法，所述方法包括投予所述对象有效量的蛋白酶体抑制剂或自噬抑制剂以治疗所述对象。

102、如权利要求100或101所述的方法，其中，所述蛋白酶体抑制剂是可逆性蛋白酶体抑制剂。

103、如权利要求102所述的方法，其中，所述可逆性蛋白酶体抑制剂是MG132。

104、如权利要求100或101所述的方法，其中，所述自噬抑制剂选自由3-甲基腺嘌呤、3-甲基腺苷、腺苷、冈田酸、N⁶-巯基嘌呤核糖核苷(N⁶-MPR)、胺基硫化(aminothiolated)腺苷类似物、5-氨基-4-咪唑甲酰胺核糖核苷(AICAR)和巴佛洛霉素A1所组成的群组。

105、如权利要求104所述的方法，其中，所述自噬抑制剂是3-甲基腺嘌呤。

106、用于产生具有生化功能构象的重组蛋白质的方法，所述方法包括

a)将表达所述重组蛋白质的细胞与选自由蛋白酶体抑制剂、自噬抑制剂、溶酶体抑制剂、内质网至高尔基体蛋白质运输抑制剂、Hsp90伴侣分子抑制剂、热休克反应激活剂、糖苷酶抑制剂和组蛋白去乙酰酶抑制剂所组成群组的化合物接触；以及

b)从所述细胞中分离所述重组蛋白质，其中所述方法产生具有生化功能构象的重组蛋白质。

107、如权利要求106所述的方法，进一步包括测量所述蛋白质的生物活性。

108、如权利要求107所述的方法，其中，所述生物活性是通过酶分析测得。

109、如权利要求107所述的方法，其中，所述生物活性是通过分光光度法测得。

110、如权利要求107所述的方法，进一步包括将所述细胞与11-顺式-视黄醛接触。

111、如权利要求107所述的方法，其中，所述细胞是真核细胞。

112、如权利要求111所述的方法，其中，所述细胞是酵母细胞。

113、如权利要求111所述的方法，其中，所述细胞是哺乳动物细胞。

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