KR20080033463A

KR20080033463A - 단백질 미스폴딩을 보정하는 작은 화합물 및 그의 용도

Info

Publication number: KR20080033463A
Application number: KR1020087004687A
Authority: KR
Inventors: 샬레쉬 카우샬; 씨에드 모하메드 놀웨즈
Original assignee: 유니버시티 오브 플로리다 리서치 파운데이션, 아이엔씨.
Priority date: 2005-07-27
Filing date: 2006-07-27
Publication date: 2008-04-16
Also published as: EP2374451A3; IL189032A; EP1909812A4; US20100004156A1; NZ565953A; CN101267779A; EP2374451A2; CN101600475A; EP1909812A2; WO2007014327A2; IL189032A0; BRPI0615962A2; AU2006272497A1; WO2007014327A3; AU2006272497B2; JP2009502954A; CA2616537A1

Abstract

본 발명은 생체내에서 미스폴딩 (misfolding)된 단백질의 보정에 의하여 대상 내에서 단백질 입체구조 질환 (Protein Conformation Disease)을 치료 또는 예방에 있어서 유용한 조성물 및 방법을 특징으로 한다. 추가로, 본 발명은 재조합 단백질을 생화학적 기능성 입체구조로 발현시킴에 있어서 유용한 조성물 및 방법을 제공한다.

Description

단백질 미스폴딩을 보정하는 작은 화합물 및 그의 용도 {SMALL COMPOUNDS THAT CORRECT PROTEIN MISFOLDING AND USES THEREOF}

본 발명은 생체내에서 미스폴딩 (misfolding)된 단백질의 보정에 의하여 단백질 입체구조 질환 (Protein Conformation Disease)을 치료 또는 예방하기 위한 조성물 및 방법, 및 진핵세포 내에서 생화학적 기능성 입체구조로 발현되는 재조합 단백질의 발현을 증대시키는 방법을 특징으로 한다.

본 출원은, 본 명세서에 그 내용이 원용에 의해 포함되어 있는 2005년 7월 27일 출원된 미국 가출원 제 60/703,068 호의 우선권을 주장한다.

본 연구는 국립안연구소 (National Eye Institute) 그랜트, 그랜트 제 EY016070-01 호에 의해 지원되었다. 정부는 본 발명에 대하여 일정한 권리를 보유할 수 있다.

단백질이 그의 생물학적 기능을 완수하기 위해서는 정확한 3-차원 입체구조로 폴딩 (folding) 되어야 한다. 폴리펩티드의 천연 입체구조는 그의 아미노산 일차 서열에 암호화 되어 있으므로, 아미노산 서열의 단일 돌연변이 만으로도 단백질이 그의 적절한 입체구조를 형성하는 능력이 손상될 수 있다. 단백질이 정확하게 폴딩되지 못하면 생물학적 및 임상적 효과가 완전히 파괴될 수 있다. 단백질 응집 및 미스폴딩은, 상염색체 우성 망막색소변성증 (autosomal dominant retinitis pigmentosa), 알츠하이머병, α1-항트립신 결핍증, 낭포성 섬유증, 신성 요붕증 및 프리온-매개 감염 (prion-mediated infection)과 같은 다수의 인간 질환의 주요 요인이 된다. 상피세포의 막첨부 (apical membrane)에 발현되는 cAMP-활성화 클로라이드 채널인 낭포성 섬유증 막횡단 전도 조절자 (cytic fibrosis transmembrane conductance regulator) (CFTR) 내의 돌연변이에 의해 그의 생산, 가공 및 그 기능을 필요로 하는 원형질막으로의 수송을 위한 능력이 손상되는 낭포성 섬유증에서와 같이, 특정한 생화학적 경로에 필요한 기능을 가진 단백질의 농도 (level) 부족이 질환을 야기할 수 있다. 다른 단백질-폴딩 장애에서는, 아밀로이드 플라크 (amyloid plaque)의 응집이 신경 손상을 일으키는 알츠하이머병에서와 같이, 미스폴딩된 단백질의 세포독성 효과로 인해 질환이 발생한다.

발명의 요약

본 발명은 한 태양에서 단백질 입체구조 장애 (protein conformation disorder) (PCD) (예를 들어 α1-항트립신 결핍증, 낭포성 섬유증, 헌팅톤병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 신성 요붕증, 암 및 야콥-크로이츠펠트병)를 가진 대상 (예를 들어 인간과 같은 포유류)을 치료하는 방법을 일반적인 특징으로 한다. 이러한 방법은 하기 화합물 중 임의의 하나 이상을 대상의 치료에 충분한 양으로 투여함을 포함한다: 프로테아좀 저해제 (proteasomal inhibitor), 자가소화 저해제 (autophagy inhibitor), 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 (chaperone) 저해제, 열 충격 반응 활성화제 (heat shock response activator), 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 (histone deacetylase) 저해제. 한 구체예에서, PCD는 망막색소변성증, 연령-관련 황반변성, 녹내장, 각막이영양증, 망막분리증, 스타르가르트병, 상염색체 우성 드루젠 (druzen) 및 베스트 황반 이영양증 (Best's macular dystrophy)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 안 PCD (ocular PCD)이다. 또 다른 구체예에서, 상기 방법은 대상에게 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체 (7-ring locked isomer)를 투여함을 추가로 포함한다. 상기 화합물 중 적어도 하나와 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체의 배합물은 망막색소변성증 및 연령-관련 황반변성의 치료에 특히 유용하다.

다른 구체예에서, PCD가 낭포성 섬유증인 경우, 상기 방법은 항생제, 비타민 A, D, E 및 K 보충제, 알부테롤 기관지확장제, 도르나제 (dornase) 및 이부프로펜으로 구성된 그룹으로부터 선택된 약제의 투여를 추가로 포함하고; PCD가 헌팅톤병인 경우, 상기 방법은 할로페리돌, 페노티아진, 레세르핀, 테트라베나진, 아만타딘 및 코엔자임 Q10으로 구성된 그룹으로부터 선택된 약제의 투여를 추가로 포함하며; PCD가 파킨슨병인 경우, 상기 방법은 레보도파, 아만타딘, 브로모크립틴, 페르골리드, 아포몰핀, 벤세라지드, 라이수리드 (lysuride), 메술레르긴, 리수리드 (lisuride), 레르고트릴, 메만틴, 메테르골린, 피리베딜, 티라민, 티로신, 페닐알라닌, 브로모크립틴 메실레이트, 페르골리드 메실레이트, 항히스티민제, 항우울제 및 모노아민 옥시다아제 저해제로 구성된 그룹에서 선택된 약제의 투여를 추가로 포함하고; PCD가 알츠하이머병인 경우, 상기 방법은 도네페질, 리바스티그민, 갈란타민 및 타크린으로 구성된 그룹으로부터 선택된 약제의 투여를 추가로 포함하며; PCD가 신성 요붕증인 경우, 상기 방법은 클로로티아지드/하이드로클로로티아지드, 아밀로리드 및 인도메타신으로 구성된 그룹으로부터 선택된 약제의 투여를 추가로 포함하고; PCD가 암인 경우, 상기 방법은 아비라테론 아세테이트, 알트레타민, 안하이드로빈블라스틴, 아우리스타틴, 벡사로텐, 비칼루타미드, BMS184476, 2,3,4,5,6-펜타플루오로-N-(3-플루오로-4-메톡시페닐)벤젠 술폰아미드, 블레오마이신, N,N-디메틸-L-발릴-L-발릴-N-메틸-L-발릴-L-프롤릴-L-프롤린-t-부틸아미드, 카켁틴, 세마도틴, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 3',4'-디데하이드로-4'-데옥시-8'-노르빈- 칼류코블라스틴, 도세탁솔, 독세탁셀, 카르보플라틴, 카르무스틴 (BCNU), 시스플라틴, 크립토피신, 사이클로포스파미드, 사이타라빈, 다카르바진 (DTIC), 닥티노마이신, 도노루비신, 돌라스타틴, 독소루비신 (아드리아마이신), 에토포시드, 5-플루오로우라실, 피나스테리드, 플루타미드, 하이드록시우레아 및 하이드록시우레아탁산, 이포스파미드, 리아로졸, 로니다민, 로무스틴 (CCNU), 메클로레타민 (니트로젠 머스타드), 멜팔란, 미보불린 이세티오네이트, 리족신, 세르테네프, 스트렙토조신, 미토마이신, 메토트렉세이트, 닐루타미드, 오나프리스톤, 파클리탁셀, 프레드니무스틴, 프로카르바진, RPR109881, 스트라무스틴 포스페이트, 타목시펜, 타소네르민, 탁솔, 트레티노인, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 설페이트 및 빈플루닌으로 구성된 그룹으로부터 선택된 약제의 투여를 추가로 포함한다.

관련된 태양에서, 본 발명은 망막색소변성증으로 진단 받은 대상을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 대상에게 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날의 투여; 및 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 화합물의 투여를 포함하며, 여기에서 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 화합물은 동시에 또는 상호간 14 일 이내에 대상의 치료에 충분한 양으로 투여된다.

상기 태양의 다양한 구체예에서, 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 화합물은 상호간 24 시간 이내, 상호간 5, 10 또는 14 일 이내에 투여하거나; 동시에 투여된다. 상기 태양의 다른 구체예에서, 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 화합물은 눈에 투여된다 (예를 들어 안구내). 상기 태양의 다른 구체예에서, 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 화합물은, 그의 장기간 방출을 제공하거나 약물 전달 장치를 이용하여 장기간 방출을 달성하는 조성물에 각각 혼입된다. 상기 태양의 다른 구체예에서 상기 방법은 비타민 A 보충제의 투여를 추가로 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 세포 내 단백질의 생화학적 기능성 입체구조의 양을 증가시키는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 화합물의 유효량을 세포에 접촉시키고; 단백질의 생화학적 기능성 입체구조의 양의 증가를 확인함을 포함한다. 한 구체예에서, 상기 방법은 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체를 세포에 접촉시킴을 추가로 포함한다. 다른 구체예에서, 세포 (예를 들어, 시험관내 또는 생체내의 포유류 또는 인간 세포)는 응집체 또는 원섬유 단백질을 형성하는 돌연변이 단백질 (예를 들어, 옵신, 미오실린, 리포푸신, βigH3)을 함유한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 약제학적으로 허용되는 부형제 내에 유효량의 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 화합물의 유효량을 포함하는, 안 PCD 치료용 약제학적 조성물을 특징으로 한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 약제학적으로 허용되는 부형제 내에 유효량의 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 화합물의 유효량을 포함하는, 망막색소변성증 치료용 약제학적 조성물을 특징으로 한다.

다른 태양에서, 본 발명은 안 PCD 치료용 키트를 특징으로 한다. 키트는 유효량의 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 화합물의 유효량을 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 망막색소변성증 치료용 키트를 특징으로 한다. 키트는 유효량의 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 화합물의 유효량을 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 안 PCD를 가진 대상의 치료에 유용한 화합물을 확인하는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 시험관내에서 미스폴딩된 단백질을 발현하는 세포를 후보 화합물과 접촉시키고; 세포로부터 회수된 정확하게 폴딩된 단백질의 수율을 대조군 세포에 비교하여 결정함을 포함하며, 여기에서 접촉된 세포 내의 정확하게 폴딩된 단백질의 수율 증가에 의해 PCD를 가진 대상의 치료에 유용한 화합물이 확인된다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 망막색소변성증을 가진 대상의 치료에 유용한 화합물을 확인하는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 시험관내에서 미스폴딩된 단백질을 발현하는 세포를 (i) 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 (ii) 후보 화합물과 접촉시키고; 세포로부터 회수된 정확하게 폴딩된 단백질의 수율을 대조군 세포에 비교하여 결정함을 포함하며, 여기에서 접촉된 세포 내의 정확하게 폴딩된 단백질의 수율 증가에 의해 망막색소변성증을 가진 대상의 치료에 유용한 화합물이 확인된다. 한 구체예에서, 미스폴딩된 단백질 (예를 들어 옵신)은 돌연변이 (P23H 돌연변이와 같은)를 포함한다 .

또 다른 태양에서, 본 발명은 단백질 입체구조 장애 (PCD)를 가진 대상을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 대상에게 프로테아좀 저해제 또는 자가소화 저해제를 대상을 치료하기에 충분한 양으로 투여함을 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 망막색소변성증을 가진 대상을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 대상에게 프로테아좀 저해제 또는 자가소화 저해제 (예를 들어 3-메틸아데닌)를 대상을 치료하기에 충분한 양으로 투여함을 포함한다. 한 구체예에서, 프로테아좀 저해제는 프로테아좀의 가역적 저해제이다 (예를 들어 MG132). 또 다른 구체예에서, 자가소화 저해제는 3-메틸아데닌, 3-메틸 아데노신, 아데노신, 오카다산, N⁶-머캅토퓨린 리보사이드 (N⁶-MPR), 아미노티올화된 아데노신 유사체, 5-아미노-4-이미다졸 카르복사미드 리보사이드 (AICAR) 및 바필로마이신 A1으로 구성된 그룹으로부터 선택된다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 생화학적 기능성 입체구조를 가진 재조합 단백질을 생산하는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 재조합 단백질을 발현하는 세포 (예를 들어, 진핵세포, 효모 세포, 포유류 세포)를 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 화합물과 접촉시키고; 세포로부터 재조합 단백질을 분리하며, 여기에서 상기 방법은 생화학적 기능성 입체구조를 가진 재조합 단백질을 생산함을 포함한다. 한 구체예에서, 상기 방법은 단백질의 생물학적 활성 측정을 추가로 포함한다. 또 다른 구체예에서, 생물학적 활성은 효소 활성조사 또는 분광광도법을 이용하여 검출한다. 또 다른 구체예에서, 상기 방법은 세포를 11-시스-레티날 (예를 들어 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체)과 접촉시킴을 추가로 포함한다.

임의의 상기 태양의 다양한 구체예에서, 프로테아좀 저해제 (예를 들어 프로테아좀의 가역적 저해제)는 MG132, 락토시스틴, 클라스토-락토시스틴-베타-락톤, PSI, MG-115, MG-101, N-아세틸-Leu-Leu-Met-CHO, N-카르보벤조일-Gly-Pro-Phe-Leu-CHO, N-카르보벤조일-Gly-Pro-Ala-Phe-CHO, N-카르보벤조일-Leu-Leu-Phe-CHO, 및 그의 염 또는 유사체 중의 임의의 하나 또는 그 이상이고; 자가소화 저해제는 3-메틸아데닌, 3-메틸 아데노신, 아데노신, 오카다산, N⁶-머캅토퓨린 리보사이드 (N⁶-MPR), 5-아미노-4-이미다졸 카르복사미드 리보사이드 (AICAR), 바필로마이신 A1, 및 그의 염 또는 유사체 중의 임의의 하나 또는 그 이상이며; 리소좀 저해제는 류펩틴, 트란스-에폭시삭시닐-L-류실아미드-(4-구아니디노)부탄, L-메티오닌 메틸 에스테르, 암모늄 클로라이드, 메틸아민, 클로로퀸, 및 그의 염 또는 유사체 중의 임의의 하나 또는 그 이상이고; ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제는 브레펠딘 A 및 그의 염 또는 유사체이며; Hsp90 샤페론 저해제는 벤조퀴논 안사마이신 항생제, 겔다나마이신, 17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신, 라디시콜, 노보비오신, 및 Hsp90 ATP/ADP 포켓에 결합하는 Hsp90 저해제, 및 그의 염 또는 유사체 중의 하나 또는 그 이상이고; 열 충격 반응 활성화제는 셀라스트롤, 셀라스트롤 메틸 에스테르, 디하이드로셀라스트롤 디아세테이트, 셀라스트롤 부틸 에스테르 및 디하이드로셀라스트롤로 구성되는 그룹으로부터 선택되며; 글리코시다아제 저해제는 아우스트랄린 하이드로클로라이드, 카스타노스페르민, 6-아세트아미도-6-데옥시-카스타노스페르민, 데옥시푸코노지리마이신 하이드로클로라이드 (DFJ), 데옥시노지리마이신 (DNJ), 데옥시갈락토노지리마이신 하이드로클로라이드 (DGJ), 데옥시만노지리마이신 하이드로클로라이드 (DMJ), 2R,5R-비스(하이드록시메틸)-3R,4R-디하이드록시피롤리딘 (DMDP), 1,4-디데옥시-1,4-이미노-D-만니톨 하이드로클로라이드, 3R,4R,5R,6R)-3,4,5,6-테트라하이드록시아제판 하이드로클로라이드, 1,5-디데옥시-1,5-이미노-자일리톨, 키푸넨신, N-부틸데옥시노지리마이신 (BDNJ), N-노닐 DNJ (NDNJ), N-헥실 DNJ (HDNJ), N-메틸데옥시노지리마이신 (MDNJ), 및 그의 염 또는 유사체 중의 하나 또는 그 이상이고; 히스톤 데아세틸라제 저해제는 스크립타이드, APHA 화합물 8, 아피시딘, 소듐 부티레이트, (-)-데푸데신, 시르티놀, 트리코스타틴 A, 및 그의 염 또는 유사체 중의 하나 또는 그 이상이다. 임의의 상기 태양의 다양한 구체예에서, 안 PCD는 연령-관련 황반변성, 망막색소변성증, 녹내장, 각막이영양증, 망막분리증, 스타르가르트병, 상염색체 우성 드루젠 또는 베스트 황반 이영양증 또는 눈의 세포 내에 단백질 응집체 또는 원섬유가 침전되는 특성을 지닌 임의의 다른 안 질환 중의 임의의 하나이다. 다양한 태양에서, 이러한 응집체 또는 원섬유를 형성하는 돌연변이 단백질은 옵신, 미오실린, 리포푸신 또는 BIGH3βigH3이다. 임의의 상기 태양의 다른 구체예에서, 대상은 단백질 폴딩에 영향을 미치는 돌연변이 (예를 들어, P23H 돌연변이와 같은 옵신 내의 돌연변이)를 포함한다.

발명의 상세한 설명

정의

"단백질 입체구조 질환"은 미스폴딩된 단백질의 존재와 관련된 병리를 가진 질환 또는 장애를 의미한다. 한 구체예에서, 단백질 입체구조 질환은 미스폴딩된 단백질이 세포, 조직 또는 기관의 정상적인 생물학적 활성을 방해할 때 유발된다.

"프로테아좀 저해제"는 유비퀴틴-결합된 (ubiquinated) 단백질의 분해와 같은 프로테아좀 활성을 감소시키는 화합물을 의미한다.

"자가소화 저해제"는 세포 구성성분이 그 구성성분이 속하는 세포에 의해 분해됨을 감소시키는 화합물을 의미한다.

"리소좀 저해제"는 리소좀에 의한 거대분자의 세포내 소화를 감소시키는 화합물을 의미한다. 한 구체예에서, 리소좀 저해제는 리소좀의 단백질 가수분해 활성을 감소시킨다.

"ER-골지 단백질 수송 저해제"는 ER에서 골지로의, 또는 골지에서 ER로의, 단백질 수송을 감소시키는 화합물을 의미한다.

"Hsp90 샤페론 저해제"는 Hsp90의 샤페론 활성을 감소시키는 화합물을 의미한다. 한 구체예에서, 저해제는 Hsp90 ATP/ADP 포켓에의 단백질 결합을 변경시킨다.

"열 충격 반응 활성화제"는 열 충격 경로 구성성분의 샤페론 활성 또는 발현을 증가시키는 화합물을 의미한다. 열 충격 경로 구성성분은 Hsp100, Hsp90, Hsp70, Hsp60, Hsp40 및 작은 HSP 계열의 일원들을 포함하나, 이로 한정되지는 않는다.

"글리코시다아제 저해제"는 글리코시드 결합을 절단하는 효소의 활성을 감소시키는 화합물을 의미한다.

"히스톤 데아세틸라제 저해제"는 히스톤을 탈아세틸화 시키는 효소의 활성을 감소시키는 화합물을 의미한다.

"감소시키는" 또는 "증가시키는"은 각각 음성 또는 양성의, 적어도 10%, 25%, 50%, 75% 또는 100%의 변경을 의미한다.

"생화학적 기능성 입체구조"는 단백질이 그 단백질의 생물학적 활성을 가지도록 허용하는 3차 구조를 취함을 의미한다. 돌연변이 단백질이 생화학적 기능성 입체구조를 취하면 그의 생물학적 활성은 증가한다. 따라서 생화학적 기능성 입체구조를 가진 돌연변이 단백질은 야생형 단백질을 어느 정도 기능적으로 대체할 수 있다.

발명의 방법

한 구체예에서, 본 발명은 대상 (예를 들어 인간과 같은 포유류)에게 본 명세서의 처방에 따른 화합물을 포함하는 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 투여함을 특징으로 하여 질환 및/또는 장애 또는 그의 증상을 치료하는 방법을 제공한다. 따라서 한 구체예는 단백질 입체구조 질환 또는 장애 또는 그의 증상을 앓고 있거나 그에 대해 취약한 대상을 치료하는 방법이다. 이러한 방법은 질환 또는 장애를 치료하는 조건 하에서 본 명세서의 화합물을 질환 또는 장애 또는 그의 증상의 치료에 충분한 양의 치료적 양으로 포유류에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 명세서의 방법은 상기 효과를 발생시키기 위하여 본 명세서에 기술된 조성물 또는 본 명세서에 기술된 화합물의 유효량을 대상 (상기 치료를 필요로 함이 확인된 대상을 포함)에게 투여함을 포함한다. 상기 치료를 필요로 하는 대상의 확인은 대상 또는 의료 전문가의 판단에 따를 수 있으며, 이는 주관적 (예를 들어 소견) 또는 객관적 (예를 들어 검사 또는 진단방법에 의해 측정 가능)일 수 있다.

본 명세서에서, 용어 "치료하다 (treat)", "치료함 (treating)", "치료 (treatment)" 등은 장애 및/또는 그에 연관된 증상의 경감 또는 개선을 의미한다. 배제되지는 않으나, 장애 또는 질병 (condition)의 치료는 장애, 질병 또는 그와 연관된 증상이 완전히 제거될 것을 요구하지 않음이 이해될 것이다.

본 명세서에서, 용어 "예방하다 (prevent)", "예방함 (preventing)", "예방 (prevention)", "예방적 치료 (prophylactic treatment)" 등은 장애 또는 질병을 앓고 있지는 않으나 그의 발병에 대하여 취약하거나 위험도가 높은 대상 내에서 장애 또는 병의 발병 가능성을 감소시킴을 의미한다.

본 발명의 치료적 방법 (예방적 치료를 포함함)은 일반적으로 본 명세서의 처방에 따른 화합물과 같은 화합물의 치료적 유효량을, 포유류, 특히 인간을 포함하여, 그를 필요로 하는 대상 (예를 들어 동물, 인간)에게 투여함을 포함한다. 이러한 치료는 질환, 장애 또는 그의 증상을 겪거나, 앓거나, 그에 대해 취약하거나, 또는 그에 대해 위험도가 높은 대상, 특히 인간에게 적당하게 시행할 수 있다. "위험도가 높은" 대상의 결정은 대상 또는 의료 공급자의 진단적 검사 또는 소견 (유전자 검사, 효소 또는 단백질 표지자, 표지자 (본 명세서에서 정의함), 가족력 등)에 의한 임의의 객관적 또는 주관적 결정에 따라 이루어질 수 있다. 본 명세서의 화합물은 단백질 폴딩 (미스폴딩을 포함함)과 연루될 수 있는 임의의 다른 장애의 치료에도 사용될 수 있다.

본 발명은 생체내에서 미스폴딩된 단백질의 보정에 유용한 조성물 및 방법을 특징으로 한다. 미스폴딩된 단백질은 정상적 세포 기능을 방해할 수 있으며, 인간 단백질 입체구조 질환 (PCD)을 유발할 수 있다. PCD는 α1-항트립신 결핍증, 낭포성 섬유증, 헌팅톤병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 신성 요붕증, 암 및 프리온-관련 장애 (예를 들어 야콥-크로이츠펠트병)를 포함한다. 본 발명의 조성물 및 방법은 망막색소변성증, 연령-관련 황반변성, 녹내장, 각막이영양증, 망막분리증, 스타르가르트병, 상염색체 우성 드루젠, 베스트 황반 이영양증 및 각막이영양증을 포함하는 안 PCD의 예방 또는 치료에 있어서 특히 유용하다. 본 발명의 조성물은 PCD의 치료, 손상된 세포의 사멸의 지연, PCD에 기인하는 증상의 완화 또는 PCD 발병의 사전 예방에 사용될 수 있다.

본 발명은 일반적으로 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제 또는 히스톤 데아세틸라제 저해제와 배합된 11-시스-레티날이 미스폴딩된 옵신 단백질의 입체구조를 보정하거나 세포 내에서 정확하게 폴딩된 단백질의 양을 증가시키기 위해 사용될 수 있다는 발견에 기초한다. 특히, 프로테아좀 저해제 MG132, 자가소화 저해제 3-메틸아데닌, 리소좀 저해제 암모늄 클로라이드, ER-골지 수송 저해제 브레펠딘 A, Hsp90 저해제 겔다나마이신, 열 충격 반응 활성화제 셀라스트롤 또는 히스톤 데아세틸라제 저해제 스크립타이드와 배합된 11-시스-레티날은 돌연변이 P23H 옵신 단백질이 생화학적 기능성 입체구조를 취하여 11-시스-레티날과 결합하여 로돕신을 형성하도록 하였다. 추가로, 프로테아좀 저해제 MG132 및 자가소화 저해제 3-메틸 아데닌은 각가 독립적으로 돌연변이 P23H 옵신의 입체구조를 보정하여 로돕신을 형성하도록 하였다.

프로테아좀 저해제

26S 프로테아좀은 유비퀴틴-결합된 단백질을 짧은 펩티드로 절단하는 다중촉매 프로테아제이다. 프로테아좀 저해제는 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체와의 배합으로, 또는 독립적으로, PCD의 치료에 사용될 수 있는 일군의 화합물이다. MG-132는 프로테아좀 저해제의 하나로서 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체와의 배합으로, 또는 독립적으로 사용될 수 있다. MG-132는 망막색소변성증 및 단백질 응집 또는 단백질 미스폴딩과 관련된 다른 안 질환에 대하여 특히 유용하다. 본 발명의 방법에서 유용한 다른 프로테아좀 저해제는 락토시스틴 (LC), 클라스토-락토시스틴-베타-락톤, PSI (N-카르보벤조일-Ile-Glu-(OtBu)-Ala-Leu-CHO), MG-132 (N-카르보벤조일-Leu-Leu-Leu-CHO), MG-115 (N-카르보벤조일-Leu-Leu-Nva-CHO), MG-101 (N-아세틸-Leu-Leu-norLeu-CHO), ALLM (N-아세틸-Leu-Leu-Met-CHO), N-카르보벤조일-Gly-Pro-Phe-Leu-CHO, N-카르보벤조일-Gly-Pro-Ala-Phe-CHO, N-카르보벤조일-Leu-Leu-Phe-CHO, 및 그의 염 또는 유사체를 포함한다. 다른 프로테아좀 저해제 및 그의 용도는 예를 들어 미국특허 제 6,492,333 호에 기술되어 있다.

자가소화 저해제

자가소화는 세포질 내의 세포 구성성분 분해를 위한 진화적으로 보존된 메커니즘으로서, 결핍 세포 (starving cell)에서 세포 생존 메커니즘으로 작용한다. 자가소화 중에 세포질의 조각들은 세포막에 의해 캡슐화 (encapsulate)되어 자가탐식공포 (autophagic vacuole)를 형성하고, 이는 결국 리소좀과 융합되어 그의 내용물이 분해된다. 자가소화 저해제는 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체와의 배합으로, 또는 독립적으로, PCD 치료를 위해 사용될 수 있다. 자가소화 저해제 3-메틸 아데닌은 망막색소변성증, 또는 미스폴딩된 단백질 또는 단백질 응집과 관련된 다른 안 질환의 치료에 있어서 특히 유용하다. 본 발명의 방법에서 유용한 자가소화 저해제는 3-메틸아데닌, 3-메틸 아데노신, 아데노신, 오카다산, N⁶-머캅토퓨린 리보사이드 (N⁶-MPR), 아미노티올화된 아데노신 유사체, 5-아미노-4-이미다졸 카르복사미드 리보사이드 (AICAR), 바필로마이신 A1, 및 그의 염 또는 유사체를 포함하나, 이에 한정되지는 않는다.

리소좀 저해제

리소좀은 세포 단백질 분해의 주된 장소이다. 수용체-매개 세포흡수작용 (endocytosis) 또는 음세포작용 (pinocytosis)에 의해 세포 내에 들어온 단백질 및 원형질막 단백질의 분해는 리소좀에서 일어난다. 암모늄 클로라이드, 류펩틴, 트란스-에폭시삭시닐-L-류실아미드-(4-구아니디노)부탄, L-메티오닌 메틸 에스테르, 암모늄 클로라이드, 메틸아민, 클로로퀸, 및 그의 염 또는 유사체와 같은 리소좀 저해제는 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체와의 배합으로, 또는 독립적으로, PCD 치료에 있어서 유용하다.

ER -골지 수송 저해제

새로 합성된 단백질은 ER 내의 생합성- 분비 경로에 진입한다. ER로부터 나오기 위해서는, 단백질이 적절히 폴딩되어야 한다. 미스폴딩된 단백질들은 ER 내에 잔류한다. ER-골지 수송 저해제는 PCD 치료에 유용하다. 브레펠딘 A는 본 발명의 방법에서 유용한 ER-골지 수송 저해제의 일례이다.

HSP90 샤페론 저해제

열 충격 단백질 90 (Hsp90)은 세포 신호, 증식 및 생존에 관련되는 단백질 샤페론을 담당하며, 다수의 단백질의 입체구조 안정성 및 기능에 있어서 필수적이다. HSP-90 저해제는 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체와의 배합으로 PCD 치료에 있어서 유용하다. HSP-90 저해제는 겔다나마이신 및 17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신 (17-AAG)과 같은 벤조퀴논 안사마이신 항생제를 포함하며, 이들은 Hsp90에 특이적으로 결합하여 그 기능을 변경시키고, 기질 단백질의 단백질 가수분해를 촉진한다. 다른 HSP-90 저해제는 라디시콜, 노보비오신, 및 Hsp90 ATP/ADP 포켓에 결합하는 임의의 Hsp90 저해제를 포함하나 이에 한정되지는 않는다.

열 충격 반응 활성화제

퀴논 메티드 트리테르핀의 일종인 셀라스트롤은 인간 열 충격 반응을 활성화시킨다. 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체와의 배합으로, 셀라스트롤 및 다른 열 충격 반응 활성화제는 PCD 치료에 있어서 유용하다. 열 충격 반응 활성화제는 셀라스트롤, 셀라스트롤 메틸 에스테르, 디하이드로셀라스트롤 디아세테이트, 셀라스트롤 부틸 에스테르, 디하이드로셀라스트롤, 및 그의 염 또는 유사체를 포함하나, 이에 한정되지는 않는다.

히스톤 데아세틸라제 저해제

유전자 발현의 조절은 동적 (dynamic) 아세틸화 및 탈아세틸화에 의한 히스톤의 번역후 개질 (post-translational modification)을 포함하는 몇 가지 메커니즘에 의해 매개된다. 가역적인 아세틸화/-탈아세틸화 과정을 담당하는 효소는 각각 히스톤 아세틸트란스페라제 (HATs) 및 히스톤 데아세틸라제 (HDACs)이다. 히스톤 데아세틸라제 저해제는 스크립타이드, APHA 화합물 8, 아피시딘, 소듐 부티레이트, (-)-데푸데신, 시르티놀, 트리코스타틴 A, 및 그의 염 또는 유사체를 포함한다.

글리코시다아제 저해제

글리코시다아제 저해제는, 특히 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체와의 배합으로 투여할 때, 단백질 입체구조 질환의 치료에 있어서 유용한 일군의 화합물이다. 카스타노스페르민은 식물에서 분리된 폴리하이드록시 알칼로이드로서 효소적 글리코시드 가수분해를 저해한다. 카스타노스페르민 및 그의 유도체는 망막색소변성증과 같은 PCD 치료에 특히 유용하다. 아우스트랄린 하이드로클로라이드, 헥소사미니다아제의 강력한 저해제인 6-아세트아미도-6-데옥시-카스타노스페르민, 데옥시푸코노지리마이신 하이드로클로라이드 (DFJ), 글루코시다아제 I 및 II를 저해하는 데옥시노지리마이신 (DNJ), α-D-갈락토시다아제를 저해하는 데옥시갈락토노지리마이신 하이드로클로라이드 (DGJ), 데옥시만노지리마이신 하이드로클로라이드 (DMJ), 2,5-디데옥시-2,5-이미노-D-만니톨로도 알려진 2R,5R-비스(하이드록시메틸)-3R,4R-디하이드록시피롤리딘 (DMDP), 1,4-디데옥시-1,4-이미노-D-만니톨 하이드로클로라이드, b-N-아세틸글루코사미니다아제를 저해하는 3R,4R,5R,6R)-3,4,5,6-테트라하이드록시아제판 하이드로클로라이드, β-글루코시다아제를 저해하는 1,5-디데옥시-1,5-이미노-자일리톨, 만노시다아제 1의 저해제인 키푸넨신을 포함하는 다른 글리코시다아제 저해제들도 본 발명의 방법에서 유용하다. N-부틸데옥시노지리마이신 (BDNJ), N-노닐 DNJ (NDNJ), N-헥실 DNJ (HDNJ), N-메틸데옥시노지리마이신 (MDNJ), 및 당업계에 공지된 다른 글리코시다아제 저해제들도 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날과의 배합으로 유용하다. 글리코시다아제 저해제들은 예를 들어 인더스트리얼 리서치 리미티드 (Industrial Research Limited) (Wellington, New Zealand)로부터 상업적으로 이용 가능하며, 그들의 사용방법은 예를 들어 미국특허 제 4,894,388 호, 제 5,043,273 호, 제 5,103,008 호, 제 5,844,102 호 및 제 6,831,176 호; 및 미국특허 공개 제 20020006909 호에 기술되어 있다.

안 단백질 입체구조 장애

본 발명의 조성물은 사실상 모든 안 단백질 입체구조 장애 (PCD)의 치료에 있어서 특히 유용하다. 상기 장애는 단백질 응집체 또는 원섬유로 미스폴딩된 단백질이 안 내에 축적된다는 특징을 가지고 있다. 망막색소변성증 (retinitis pigmentosa)은 카르보닉 안하이드라제 IV (CA4)의 돌연변이 (GenBank Accession Nos. NM_000717 and NP_000708) (Rebello et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 Apr 27;101(17):6617-22)와 함께 옵신의 미스폴딩 (예를 들어 P23H 옵신) (GenBank Accession Nos. NM_000539 and NP_000530)과도 관련된 안 PCD의 일례이다. CA4는 글리코실포스파티딜이노시톨-고정된 단백질로서 인간 눈의 맥락막모세혈관층 (choriocapillaris)에서 고발현된다. R14W 돌연변이는 CA4 단백질의 부정확한 폴딩을 유발하며 이러한 돌연변이를 가진 환자는 상염색체 우성 망막색소변성증을 앓게 된다. 생화학적 기능성 입체구조를 취하는 CA4의 양을 증가시키는 본 발명의 조성물은 CA4 폴리펩티드의 돌연변이와 관련된 상염색체 우성 망막색소변성증의 치료에 있어서 유용하다.

또 다른 안 PCD는 X-연결된 유년기 망막분리증 (X-linked juvenile retinoschisis) (RS)이다. RS는 남성의 유년기 황반변성의 일반적 원인이다. 레티노쉬신 (retinoschesin) 또는 RS1의 돌연변이 (NM_000330, NP_000321)는 X-연결된 망막분리증, 일반적인, 망막 내막의 분리 및 심한 시각 상실을 야기시키는 남성의 조기-발병 황반변성 (early-onset macular degeneration)의 원인이다. RS1의 돌연변이는 단백질 폴딩을 붕괴시킨다 (J Biol Chem. 2005 Mar 18;280(11):10721-30). 생화학적 기능성 입체구조를 취하는 RS1의 양을 증가시키는 본 발명의 조성물은 망막분리증의 치료에 있어서 유용하다.

녹내장 (glaucoma)은 미오실린의 돌연변이와 관련된 안 PCD이다. 미오실린은 눈을 포함하는 다수의 인간 기관 어디에서나 발현되는 미확인 기능의 분비성 당단백질이다. 미오실린 단백질의 돌연변이는 녹내장의 한 형태를 유발하며, 전세계적으로 실명의 주원인이다. 돌연변이 미오실린은 트란스펙션된 (transfected) 세포의 세포질 망상체에 불용성 응집체로서 축적된다 (Aroca-Aguilar et al., Biol Chem. 2005 Jun 3;280(22):21043-51; GenBank Accession Nos. NM_000261 and NP_000252). 생화학적 기능성 입체구조를 취하는 미오실린의 양을 증가시키는 본 발명의 조성물은 미오실린-관련 녹내장의 치료에 있어서 유용하다.

스타르가르트-유사 황반변성 (Stargardt-like mucular degeneration)은 ELOVL4의 돌연변이와 관련된 안 PCD이다. ELOVA4 (Elongation of very long chain fatty acids 4)은 아주 긴 사슬의 지방산의 생합성에 참여하는 ELO 계열 단백질의 일원이다. ELOVL4의 돌연변이는 상염색체 우성 스타르가르트-유사 황반변성 (STGD3/adMD)을 가진 환자에서 확인되었다. ELOVL4 돌연변이 단백질은 트란스펙션된 세포 내에 큰 응집체로서 축적된다 (Grayson et al., J Biol Chem. 2005 Jul 21; Epub) (GenBank Accession Nos. NM_022726 and NP_073563). 생화학적 기능성 입체구조를 취하는 ELOVL4의 양을 증가시키는 본 발명의 조성물은 스타르가르트-유사 황반변성의 치료에 있어서 유용하다.

말라티아 레벤티니즈 (Malattia leventinese) (ML) 및 도인 벌집형 망막위축증 (Doyne honeycomb retinal dystrophy) (DHRD)은 드루젠으로 알려진 황-백색 침전물이 망막색소상피 (RPE) 아래에 축적되는 특징을 가진 두 가지 상염색체 우성 PCD를 의미한다. EFEMP1은 망막 드루젠 형성에 있어서 한 역할을 담당하며 황반변성의 병인에 관련된다 (Stone et al., Nat Genet. 1999 Jun;22(2):199-202) (Genbank Accession Nos NM_004105 and NP_004096). 돌연변이 EFEMP1은 미스폴딩되어 세포 내에 잔류한다. 생화학적 기능성 입체구조를 취하는 EFEMP1의 양을 증가시키는 본 발명의 조성물은 상염색체 우성 드루젠의 치료에 있어서 유용하다.

베스트 황반 이영양증 (Best's macular dystrophy)는, Cl(-) 채널인 베스트로핀을 암호화하는 VMD2 (hBEST1)의 돌연변이 (Gomez et al., DNA Seq. 2001 Dec;12(5-6):431-5) (GenBank Accession Nos: NM_004183 and NP_004174)에 기인하는 상염색체 우성 PCD이다. 베스트로핀의 돌연변이는 단백질 미스폴딩을 유발할 가능성이 있다. 정확하게 폴딩된 베스트로핀의 양을 증가시키는 본 발명의 조성물은 베스트 황반 이영양증의 치료에 있어서 유용하다.

5q31-연결된 각막 이영양증 (5q31-linked corneal dystrophies)은 각막에 단백질 침전물이 연령-종속적으로 점차 축적되어 시각 손상으로 이어지는 특징을 가진 상염색체 우성 PCD이다. TGFBI (transforming growth factor-β-induced)라고도 칭하는 BIGH3 유전자의 돌연변이 (GenBank Accession No: NM_000358)가 이 질병의 전체 그룹에 대한 원인으로 밝혀졌다. 다른 잔기들과 마찬가지로 Arg-124에서의 치환은 (GenBank Accession No. NP_000349) 각막 조직 내 단백질 전환의 변경을 포함하는 별개의 응집 경로를 통해 암호화된 단백질의 각막-특이적 침전을 야기한다. 정확하게 폴딩된 TGFBI 단백질의 양을 증가시키는 본 발명의 조성물은 5q31-연결된 각막 이영양증의 치료에 있어서 유용하다.

한 구체예에서, 본 발명은 치료 진행의 관찰 방법을 제공한다. 이러한 방법은 단백질 폴딩 (미스폴딩을 포함)과 관련된 장애 또는 그의 증상을 앓고 있거나 그에 대해 취약한 대상에게 본 명세서의 화합물을 질환 또는 그의 증상을 치료하기에 충분한 치료적 양으로 투여한 후, 대상 내에서 진단적 표지자 (Marker) (예를 들어, 본 명세서의 화합물에 의해 조절되는 본 명세서에 서술된 임의의 표적, 단백질 또는 그의 지표 등)의 농도 결정 또는 진단적 측정 (예를 들어 선별, 활성조사)의 단계를 포함한다. 대상의 질환 상태를 확인하기 위하여, 상기 방법에 의해 결정된 표지자의 농도를 투병중인 다른 환자 또는 건강한 정상 대조군에서의 알려진 표지자 농도와 비교할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 1 차 농도 결정보다 늦은 시점에 대상 내 표지자의 2 차 농도를 결정하고, 두 가지 농도를 비교하여 질환의 진행 또는 요법의 효능을 관찰한다. 어떤 바람직한 구체예에서, 대상 내 표지자의 치료전 농도를 치료 시작에 앞서 본 발명에 따라 결정하고, 이러한 표지자의 치료전 농도를 치료 개시 후의 대상 내 표지자 농도와 비교하여 치료의 효능을 결정할 수 있다.

약제학적 조성물

본 발명은 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 화합물을 함유하는 약제학적 조제를 특징으로 하며, 여기에서 화합물은 생화학적 기능성 입체구조를 취하는 돌연변이 단백질의 생성을 제공한다. 상기 조제는 치료적 및 예방적 적용성을 모두 가지고 있다. 한 구체예에서, 약제학적 조성물은 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 또는 히스톤 데아세틸라제 저해제에 속하는 적어도 하나의 추가 화합물과 배합된 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날을 포함한다. 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 이차적 화합물은 함께 또는 독립적으로 제형화된다. 또 다른 구체예에서, 약제학적 조성물은 프로테아좀 저해제 또는 자가소화 저해제를 포함한다. 본 발명의 화합물은 약제학적 조성물의 일부로서 투여될 수 있다. 조성물은 멸균되어야 하며, 대상에게 투여하기에 적당한 중량 또는 부피 단위에 치료적 유효량의 폴리펩티드를 함유하여야 한다. 본 발명의 조성물 및 배합물은 약제학적 팩 (pharmaceutical pack)의 일부일 수 있으며, 여기에서 각각의 화합물은 개별적인 투여량으로 존재한다.

예방적 또는 치료적 투여에 사용되는 본 발명의 약제학적 조성물은 멸균되어야 한다. 멸균성은 멸균 여과막 (예를 들어 0.2 ㎛ 막)을 통한 여과, 감마선 조사 또는 당업자에게 공지된 다른 적당한 임의의 수단에 의해 용이하게 달성될 수 있다. 치료용 폴리펩티드 조성물은 일반적으로 멸균적 입구를 가진 용기, 예를 들어 정맥주사 용액 봉투 또는 피하주사 바늘로 관통할 수 있는 마개를 가진 바이알에 넣는다. 이러한 조성물은 통상 예를 들어 밀봉 앰플 또는 바이알과 같은 단위 또는 다중-투여 용기에 수용액 또는 재건할 수 있는 동결건조 제형으로 보관된다.

화합물들은 약제학적으로 허용되는 부형제와 임의로 배합될 수 있다. 본 명세서에서 용어 "약제학적으로 허용되는 부형제"는 하나 이상의 융화성 고체 또는 액체 충진제, 희석제 또는 캡슐화 물질로서 인간에게 투여하기에 적당한 것들을 의미한다. 용어 "담체"는 투여를 용이하게 하기 위하여 활성성분과 배합되는 천연 또는 합성된 유기 또는 무기 성분을 나타낸다. 약제학적 조성물의 구성요소는, 목적하는 약제학적 효능을 실질적으로 손상시키는 상호작용이 없는 방법으로, 본 발명에 따른 분자들과의 혼합 및 그들 상호간의 혼합도 가능하다.

본 발명의 화합물은 약제학적으로 허용되는 부형제에 함유될 수 있다. 부형제는 바람직하게는 등장성 및 화학적 안정성을 증대시키는 물질과 같은 소량의 첨가제를 함유한다. 상기 물질은 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자 (recipient)에게 무독성이며, 포스페이트, 시트레이트, 숙시네이트, 아세테이트, 락테이트, 타르타레이트 및 기타 유기산 또는 그의 염; 트리스-하이드록시메틸아미노메탄 (TRIS), 비카르보네이트, 카르보네이트 및 기타 유기염기 및 그의 염과 같은 완충물질; 아스코르빈산과 같은 항산화제; 저분자량 (예를 들어 10 잔기 미만) 폴리펩티드, 예를 들어 폴리아르기닌, 폴리리신, 폴리글루타메이트 및 폴리아스파테이트; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈 (PVP), 폴리프로필렌 글리콜 (PPGs) 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEGs)과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루탐산, 아스파트산, 히스티딘, 리신 또는 아르기닌과 같은 아미노산; 셀룰로오즈 또는 그의 유도체, 글루코즈, 만노즈, 수크로즈, 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물 또는 헤파린, 콘드로이틴 설페이트 또는 덱스트란 설페이트와 같은 황산화된 탄수화물 유도체; 칼슘 이온, 마그네슘 이온 및 망간 이온을 포함하는 2 가 금속 이온과 같은 다가 금속 이온; 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA)과 같은 킬레이트 시약; 만니톨 또는 소르비톨과 같은 당알콜; 소듐 또는 암모늄과 같은 짝이온; 및/또는 폴리소르베이트 또는 폴록사머와 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다. 안정제, 항균제, 불활성 기체, 액체 및 영양소 보충제 (즉, 링거 덱스트로즈), 전해질 보충제 등의 다른 첨가제도 통상적인 양으로 포함될 수 있다.

상기한 바와 같이, 조성물은 유효량으로 투여될 수 있다. 유효량은 투여 방식, 치료하고자 하는 특정 질병 및 목적하는 성과에 의존할 것이다. 이는 또한 질병의 병기, 대상의 연령 및 신체 조건, 동시에 시행하는 요법이 있다면 그의 성질, 및 의료계 종사자에게 주지된 유사 요인에도 의존한다. 치료적 적용에 있어서, 이는 의학적으로 목적하는 결과를 달성하기에 충분한 양이다.

단백질 입체구조 질환 또는 장애를 가진 대상에 있어서, 유효량은 세포 내에 정확하게 폴딩된 단백질의 농도를 증가시키기에 충분하다. 미스폴딩된 단백질과 관련된 질환 또는 장애를 가진 대상에 있어서, 유효량은 병리와 관련된 증상을 안정화시키거나, 지연 또는 경감시키기에 충분한 양이다. 일반적으로, 본 발명에 따른 화합물의 투여량은 일당 약 0.01 mg/kg 내지 일당 약 1000 mg/kg이 될 것이다. 약 50 내지 약 2000 mg/kg 범위의 투여량이 적당할 것으로 예상된다. 더 낮은 투여량은 정맥내 투여와 같은 어떤 형태의 투여에 기인한다. 초기 적용된 투여량에서 대상 내의 반응이 충분하지 않을 경우에는, 환자 용인성이 허용하는 한도내에서 더 높은 투여량 (또는 더 국소적인 다른 전달경로를 통한 효과적으로 더 높은 투여량)을 채택할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물의 적절한 전신 농도를 달성하기 위해서는 일일 다중 투여를 고려한다.

다양한 투여 경로가 이용 가능하다. 대체로 본 발명의 방법은 의학적으로 허용되는 임의의 투여 방식을 이용하여 실행할 수 있으며, 이는 의학적으로 허용할 수 없는 유해 효과를 유발하지 않으면서 활성 화합물의 유효농도를 산출하는 임의의 방식을 의미한다. 바람직한 한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 안내 (intraocularly) 투여된다. 다른 투여 방식은 경구, 국소, 직장, 안내, 구강, 질내, 조내, 뇌실내, 기관내, 비강, 경피, 임플란트 내/상 또는 장관외 경로를 포함한다. 용어 "장관외"는 경피, 초내, 정맥내, 근육내, 복막내 또는 주입을 포함한다. 본 발명의 조성물을 함유하는 조성물은 초자체액 (intravitreal humor)과 같은 생리적 유체 (physiological fluid)에 가해질 수 있다. CNS 투여를 위해서는, 주사 또는 외과수술에 의한 붕괴, CNS 맥관구조 내피세포 간의 점착 접촉을 일시적으로 개방하는 약물 및 상기 세포를 통한 전좌 (tanslocation)을 촉진하는 화합물을 포함하여, 혈액 뇌 장벽 (blood brain barrier)을 통과하여 치료제의 이동을 증진시키는 다양한 기술이 이용가능하다. 예방적 치료에 있어서는 경구 투여가 바람직할 수 있으며, 이는 투여 일정과 환자의 편의 때문이다.

본 발명의 약제학적 조성물은, 대상에게 투여할 때 유해 효과를 야기하지 않는 한도 내에서, 플라스마 단백질, 단백질 분해효소 및 다른 생물학적 물질을 포함하는 하나 이상의 추가의 단백질을 목적에 따라 임의로 추가 함유할 수 있다. 적당한 단백질 또는 생물학적 물질은 인간 또는 포유류 플라스마로부터 당업자에게 이용 가능하고 공지된 임의의 정제 방법에 의해; 상등액, 추출물, 재조합 조직배양, 바이러스, 효모, 박테리아 또는 표준 재조합 DNA 기술에 따라 도입된 인간 또는 포유류 플라스마 단백질을 발현하는 유전자를 함유하는 것 등의 용해물에서; 또는 표준 유전자 전환 기술에 따라 도입된 인간 플라스마 단백질을 발현하는 유전자를 함유하는 유전자 전환 동물 또는 액체 (예를 들어 혈액, 젖, 림프, 소변 등)에서 얻어질 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은, 제형의 pH를 약 5.0 내지 8.0의 범위와 같은 생리적 pH를 반영하는 예정 수준으로 유지하기 위한 하나 이상의 pH 완충 화합물을 함유할 수 있다. 수성 액체 제형 (aqueous liquid formulation)에 사용되는 pH 완충 화합물은 히스티딘 또는 히스티딘 및 글리신과 같은 아미노산의 혼합물과 같은 아미노산 또는 아미노산의 혼합물일 수 있다. 다른 방법으로서, pH 완충 화합물은 바람직하게는 제형의 pH를 약 5.0 내지 8.0의 범위와 같은 예정 수준으로 유지하면서 칼슘 이온을 킬레이트하지 않는 약제이다. 상기 pH 완충 화합물의 설명을 위한 예는 이미다졸 및 아세테이트 이온을 포함하나, 이에 한정되지는 않는다. pH 완충 화합물은 제형의 pH를 예정 수준으로 유지하기에 적당한 임의의 양으로 존재할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 또한 하나 이상의 어떤 삼투적 조절 약제 (osmotic modulating agent), 즉 제형의 삼투적 특성 (예를 들어 긴장성 (tonicity), 삼투성 (osmolality) 및/또는 삼투압)을 수용자 개체의 혈류 및 혈구 세포가 허용하는 수준으로 조절하는 화합물을 함유할 수 있다. 삼투적 조절 약제는 칼슘 이온을 킬레이트하지 않는 약제일 수 있다. 삼투적 조절 약제는 제형의 삼투적 특성을 조절하는, 당업자에게 이용 가능한 임의의 공지 화합물일 수 있다. 당업자는 본 발명의 제형에 사용하기 위하여 주어진 삼투적 조절 약제의 적합성을 실험적으로 결정할 수 있을 것이다. 적당한 타입의 삼투적 조절 약제의 설명을 위한 예는: 소듐 클로라이드 및 소듐 아세테이트와 같은 염; 수크로즈, 덱스트로즈 및 만니톨과 같은 당; 글리신과 같은 아미노산; 및 하나 이상의 상기 약제 및/또는 약제 타입의 혼합물을 포함하나, 이에 한정되지는 않는다. 삼투적 조절 약제는 제형의 삼투적 특성을 조절하기에 충분한 임의의 농도로 존재할 수 있다.

본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은, 칼슘 이온, 마그네슘 이온 및/또는 망간 이온과 같은 다가 금속 이온을 함유할 수 있다. 조성물의 안정화에 도움을 주면서 수용자 개체에게 유해한 효과를 유발하지 않는 임의의 다가 금속 이온이 사용될 수 있다. 상기 두 기준에 기초하여 당업자는 적당한 금속 이온을 실험적으로 결정할 수 있으며, 이러한 금속 이온의 적당한 근원은 공지되어 있고 무기 및 유기염을 포함한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 또한 비-수성 액체 제형일 수도 있다. 함유된 활성 약제 (들)의 안정성을 제공한다는 전제 하에, 임의의 적당한 비-수성 액체가 채용될 수 있다. 바람직하게는, 비-수성 액체는 친수성 액체이다. 적당한 비-수성 액체의 설명을 위한 예는: 글리세롤; 디메틸 설폭사이드 (DMSO); 폴리디메틸실록산 (PMS); 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 트리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 ("PEG") 200, PEG 300 및 PEG 400과 같은 에틸렌 글리콜들; 및 디프로필렌 글리콜, 트리프로필렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 ("PPG") 425, PPG 725, PPG 1000, PPG 2000, PPG 3000 및 PPG 4000과 같은 폴리프로필렌 글리콜들을 포함한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 또한 수성/비-수성 혼합 액체 제형일 수도 있다. 수성/비-수성 혼합 액체 제형이 그에 함유된 화합물의 안정성을 제공한다는 전제 하에, 상기한 바와 같은 임의의 비-수성 액체 제형은 상기한 바와 같은 임의의 수성 액체 제형과 함께 채용될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 제형에서 비-수성 액체는 친수성 액체이다. 적당한 비-수성 액체의 설명을 위한 예는: 글리세롤; DMSO; PMS; PEG 200, PEG 300 및 PEG 400과 같은 에틸렌 글리콜; 및 PPG 425, PPG 725, PPG 1000, PPG 2000, PPG 3000 및 PPG 4000과 같은 폴리프로필렌 글리콜을 포함한다.

적당하고 안정한 제형은 활성 약제가 동결 또는 비동결 액체 상태에서 보관될 수 있도록 허용한다. 안정한 액체 제형은 적어도 -70 ℃의 온도에서 보관할 수 있으나, 또한 조성물의 특성에 따라 적어도 0 ℃또는 약 0.1 ℃내지 약 42 ℃ 범위의 더 높은 온도에서도 보관할 수 있다. 단백질 및 폴리펩티드가 pH, 온도 및 치료적 효능에 영향을 미칠 수 있는 다수의 기타 요인의 변화에 대해 민감하다는 것은 당업자에게 일반적으로 공지되어 있다.

어떤 구체예에서 바람직한 투여 경로는 허파용 에어로졸 (pulmonary aerosol)이다. 폴리펩티드를 함유하는 에어로졸 전달 시스템을 제조하는 기술은 당업자에게 주지되어 있다. 일반적으로, 이러한 시스템은 파라토프 (paratope) 결합능과 같은 항체의 생물학적 특성을 심각하게 손상시키지 않는 구성요소를 이용해야 한다 (참조: 예를 들어 Sciarra and Cutie, "Aerosols," in Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, 1990, pp1694-1712; 참고문헌으로 포함). 당업자는 폴리펩티드 에어로졸을 생산하기 위한 다양한 변수 및 조건들을 과도한 실험에 의존하지 않고 용이하게 수정할 수 있다.

다른 전달 시스템은 시간-방출 (time-release), 지연 방출 (delayed release) 또는 서방형 방출 (sustained release) 전달 시스템을 포함할 수 있다. 이러한 시스템은 본 발명에 따른 조성물의 반복적 투여를 피함으로써 대상 및 의사의 편의를 증진할 수 있다. 방출 전달 시스템의 많은 타입이 당업자에게 공지되어 있고 이용 가능하다. 폴리락타이드 (U.S. Pat. No. 3,773,919; European Patent No. 58,481), 폴리(락타이드-글리콜라이드), 코폴리옥살레이트, 폴리카프로락톤, 폴리에스테르아미드, 폴리오르토에스테르, 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산 (European Patent No. 133,988)과 같은 폴리하이드록시부티르산, L-글루탐산 및 감마-에틸-L-글루타메이트의 공중합체 (Sidman, K.R. et al., Biopolymers 22: 547-556), 폴리(2-하이드록시에틸 메타크릴레이트) 또는 에틸렌 비닐 아세테이트 (Langer, R. et al., J. Biomed. Mater. Res. 15:267-277; Langer, R. Chem. Tech. 12:98-105), 및 폴리안하이드라이드와 같은 중합체 기본 시스템 (polymer base system)이 이에 포함된다.

서방형-방출 조성물의 다른 예는, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐과 같이 성형된 물체 형태를 가진 반-투과성 중합체 매트릭스를 포함한다. 전달 시스템은 또한: 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르와 같은 스테롤 및 모노- 디- 및 트리-글리세리드와 같은 중성 지방 또는 지방산을 포함하는 지방질; 생물학적-유도된 생흡수성 하이드로겔 (즉, 키틴 하이드로겔 또는 키토산 하이드로겔)과 같은 하이드로겔 방출 시스템; 실라스틱 시스템 (sylastic systems); 펩티드 기본 시스템; 왁스 코팅; 전통적인 결합제 및 부형제를 사용하는 압축 정제; 부분적으로 융합된 임플란트 등의 비-중합체 시스템도 포함한다. 특이적인 예는: (a) 미국특허 제 4,452,775 호, 제 4,667,014 호, 제 4,748,034 호 및 제 5,239,660 호에 기술된 것과 같이 약제가 형태 안에서 매트릭스 내에 함유된 침식성 (erosional) 시스템 및 (b) 미국특허 제 3,832,253 호 및 제 3,854,480 호에 기술된 것과 같이 활성 구성성분이 중합체로부터 조절된 속도로 투과하는 확산성 (diffusional) 시스템을 포함하나, 이에 한정되지는 않는다.

본 발명에 따른 방법 및 조성물과 함께 사용될 수 있는 전달 시스템의 또 다른 타입은 콜로이드 분산 시스템 (colloidal dispersion system)이다. 콜로이드 분산 시스템은 수중유 에멀젼 (oil-in-water emulsion), 마이셀 (micelles), 혼합 마이셀 및 리포좀 (liposome)을 포함하는 지방질-기본 시스템을 포함한다. 리포좀은 생체내 또는 시험관내 전달 벡터로서 유용한 인공적 막 베셀 (vessel)이다. 크기가 0.2-4.0 ㎛ 범위인 대형 유니라멜라 베셀 (large unilamellar vessel) (LUV)은 수성 내부에 대형 거대분자를 캡슐화할 수 있으며 생물학적 활성 형태로 세포에 전달된다 (Fraley, R., and Papahadjopoulos, D., Trends Biochem. Sci. 6: 77-80).

모노클로날 항체, 당, 당지질 또는 단백질과 같은 리간드에 리포좀을 연결함으로써 리포좀을 특정 조직에 표적화할 수 있다. 리포좀은 Gibco BRL로부터 상업적으로 이용 가능하며, 예를 들어, N-[1-(2,3 디올레일옥시)-프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드 (DOTMA) 및 디메틸 디옥타데실암모늄 브로마이드 (DDAB)와 같은 양이온성 지방질로 이루어진 LIPOFECTIN™ 및 LIPOFECTACE™가 있다. 리포좀을 만드는 방법은 당업계에 주지되어 있고, 예를 들어 DE 3,218,121; Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82:3688-3692 (1985); Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 77:4030-4034 (1980); EP 52,322; EP 36,676; EP 88,046; EP 143,949; EP 142,641; 일본특허출원 제 83-118008 호; 미국특허 제 4,485,045 호 및 제 4,544,545 호; 및 EP 102,324와 같은 다수의 간행물에 기술되어 있다. 리포좀은 또한 문헌 (Gregoriadis, G., Trends Biotechnol., 3:232-241)에 개관되어 있다.

비히클의 또 다른 타입은 포유류 수용자에게 이식하기에 적당한 생체적합성 극미립자 (microparticle) 또는 임플란트이다. 이러한 방법에 따라 유용한 생침식성 임플란트의 예는 PCT 국제출원 제 PCT/US/03307 호 (공개 제 WO 95/24929 호, 제목 "중합체 유전자 전달 시스템")에 기술되어 있다. PCT/US/0307은 적당한 프로모터에 의해 조절되는 외래 유전자를 함유하는 생체적합성의, 바람직하게는 생분해성의 중합체 매트릭스를 기술한다. 중합체 매트릭스는 대상 내에서 외래 유전자 또는 유전자 산물의 서방형 방출을 달성하기 위해 이용될 수 있다.

중합체 매트릭스는 바람직하게는 마이크로구체 (microsphere) (약제가 고체 중합체 매트릭스 전체에 분산됨) 또는 마이크로캡슐 (약제가 중합체 쉘 (shell)의 중심에 저장됨)과 같은 극미립자의 형태이다. 약물을 함유하는 상기 중합체의 마이크로캡슐은, 예를 들어 미국특허 제 5,075,109 호에 기술되어 있다. 약제를 함유하는 중합체 매트릭스의 다른 형태는 필름, 코팅, 겔, 임플란트 및 스텐트 (stent)를 포함한다. 중합체 매트릭스 장치의 크기 및 조성은 매트릭스가 도입되는 조직 내에서 유리한 방출 역학을 얻을 수 있도록 선택된다. 또한 중합체 매트릭스의 크기는 이를 사용하고자 하는 전달 방법에 따라 선택된다. 바람직하게는, 에어로졸 경로를 이용할 경우, 중합체 매트릭스 및 조성물은 계면활성제 비히클 내에 둘러싸여 있다. 중합체 매트릭스 조성물은, 전달의 효율성을 추가로 증대시키기 위하여, 유리한 분해 속도를 갖는 동시에 생점착성 (bioadhesive)인 물질로 형성되도록 선택될 수 있다. 매트릭스 조성물은 또한, 분해되지 않고 장기간의 시간에 걸쳐 확산에 의해 방출하도록 선택될 수도 있다. 전달 시스템은 국소적, 부위-특이적 (site-specific) 전달에 적당한 생체적합성 마이크로구체일 수도 있다. 이러한 마이크로구체는 문헌 (Chickering, D.E., et al., Biotechnol. Bioeng., 52: 96-101; Mathiowitz, E., et al., Nature 386: 410-414)에 개시되어 있다.

비-생분해성 및 생분해성 중합체 매트릭스는 양자 모두 본 발명의 조성물을 대상에게 전달하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 중합체는 천연 또는 합성 중합체일 수 있다. 일반적으로 대략 수 시간 내지 1 년 또는 그 이상인 목적 방출 기간에 기초하여 중합체가 선택된다. 통상적으로, 수 시간에서 3 내지 12 개월의 범위에 걸친 방출이 가장 바람직하다. 중합체는 물 속에서 그 무게의 약 90%까지 흡수할 수 있는 하이드로겔 형태를 임의로 취하며, 또한 임의로 다가 이온 또는 다른 중합체로 교차결합된다.

생분해성 전달 시스템을 형성하기 위해 사용될 수 있는 예시적 합성 중합체는: 폴리아미드, 폴리카르보네이트, 폴리알킬렌, 폴리알킬렌 글리콜, 폴리알킬렌 옥사이드, 폴리알킬렌 테레프탈레이트, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르, 폴리-비닐 할라이드, 폴리비닐피롤리돈, 폴리글리콜라이드, 폴리실록산, 폴리우레탄 및 그의 공중합체, 알킬 셀룰로즈, 하이드록시알킬 셀룰로즈, 셀룰로즈 에테르, 셀룰로즈 에스테르, 니트로 셀룰로즈, 아크릴 및 메타크릴 에스테르의 중합체, 메틸 셀룰로즈, 에틸 셀룰로즈, 하이드록시프로필 셀룰로즈, 하이드록시-프로필 메틸 셀룰로즈, 하이드록시부틸 메틸 셀룰로즈, 셀룰로즈 아세테이트, 셀룰로즈 프로피오네이트, 셀룰로즈 아세테이트 부티레이트, 셀룰로즈 아세테이트 프탈레이트, 카르복시에틸 셀룰로즈, 셀룰로즈 트리아세테이트, 셀룰로즈 설페이트 소듐 염, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실 메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트), 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸렌 테레프탈레이트), 폴리(비닐 알콜), 폴리비닐 아세테이트, 폴리 비닐 클로라이드, 폴리스티렌, 폴리비닐피롤리돈, 및 락트산 및 글리콜산의 중합체, 폴리안하이드라이드, 폴리(오르토)에스테르, 폴리(부트산), 폴리(발레르산), 및 폴리(락타이드-코카프로락톤), 및 천연 중합체, 예컨대 알기네이트 및 다른 다당체, 예컨대 덱스트란 및 셀룰로즈, 콜라겐, 그의 화학적 유도체 (치환, 화학적 그룹의 부가, 예를 들어 알킬, 알킬렌, 하이드록실화, 산화 및 당업자에 의해 일상적으로 행해지는 기타 개질), 알부민 및 다른 친수성 단백질, 제인 및 다른 프롤아민 및 호수성 단백질, 공중합체 및 그의 혼합물을 포함한다. 일반적으로, 상기 물질들은 생체내에서 효소적 가수분해 또는 물에 대한 노출에 의해 표면 침식 또는 거체 침식 (bulk erosion)에 의해 분해된다.

안 전달 ( Ocular Delivery ) 방법

본 발명의 조성물 (예를 들어, 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 또는 히스톤 데아세틸라제 저해제)는 녹내장, 망막색소변성증, 연령-관련 황반변성, 녹내장, 각막 이영양증, 망막분리증, 스타르가르트병, 상염색체 우성 드루젠 및 베스트 황반 이영양증과 같은 안 단백질 입체구조 질환의 치료에 특히 적당하다.

한 시도에서, 본 발명의 조성물은 눈의 초자체에 직접 이식하기에 적당한 안과 장치를 통해 투여된다. 본 발명의 조성물은, 예를 들어 미국특허 제 5,672,659 호 및 제 5,595,760 호에 기술된 바와 같은 서방형 방출 조성물로 제공될 수 있다. 이러한 장치들은 해로운 국소적 및 전신적 부작용의 위험 없이 눈을 치료하는 다양한 조성물의 서방형 조절 방출을 제공함이 발견되었다. 본 안과적 전달 방법의 목적은 임플란트의 지속기간을 연장하기 위하여 안내 장치 또는 임플란트에 함유된 약물의 양을 최대화하는 반면에 그의 크기를 최소화함에 있다. 예를 들어 미국특허 제 5,378,475 호; 제 6,375,972 호, 및 제 6,756,058 호 및 미국특허 공개 제 20050096290 호 및 제 200501269448 호를 참조한다. 이러한 임플란트는 생분해성 및/또는 생체적합성 임플란트일 수 있고, 또는 비-생분해성 임플란트일 수도 있다. 생분해성 안 임플란트는 예를 들어 미국특허 공개 제 20050048099 호에 기술되어 있다. 임플란트는 활성 약제에 대해 투과성 또는 불투과성일 수 있으며, 안테리어 (anterior) 또는 포스테리어 (posterior) 챔버 (chamber)와 같은 눈의 챔버 내에 삽입될 수 있고, 또는 공막 (schlera), 경맥락막강 (transchoroidal space) 또는 초자체 바깥의 무혈관 영역 (avascularized region)에 이식될 수 있다. 다른 방법으로서, 본 발명에 따른 조성물의 저장소 역할을 하는 콘택트 렌즈도 약물 전달에 이용될 수 있다.

바람직한 구체예에서, 임플란트는 공막과 같은 무혈관 영역에 위치하여, 예를 들어 안내 공간 (intraocular space) 또는 눈의 황반과 같은 치료의 목적 부위에 약물의 경공막 확산 (transcleral diffusion)이 일어나도록 한다. 추가로, 경공막 확산 부위는 바람직하게는 황반에 근접한 곳이다. 조성물의 전달을 위한 임플란트의 예는, 본 명세서에 참고로 포함되어 있는 미국특허 제 3,416,530 호; 제 3,828,777 호; 제 4,014,335 호; 제 4,300,557 호; 제 4,327,725 호; 제 4,853,224 호; 제 4,946,450 호; 제 4,997,652 호; 제 5,147,647 호; 제 5,164,188 호; 제 5,178,635 호; 제 5,300,114 호; 제 5,322,691 호; 제 5,403,901 호; 제 5,443,505 호; 제 5,466,466 호; 제 5,476,511 호; 제 5,516,522 호; 제 5,632,984 호; 제 5,679,666 호; 제 5,710,165 호; 제 5,725,493 호; 제 5,743,274 호; 제 5,766,242 호; 제 5,766,619 호; 제 5,770,592 호; 제 5,773,019 호; 제 5,824,072 호; 제 5,824,073 호; 제 5,830,173 호; 제 5,836,935 호; 제 5,869,079 호; 제 5,902,598 호; 제 5,904,144 호; 제 5,916,584 호; 제 6,001,386 호; 제 6,074,661 호; 제 6,110,485 호; 제 6,126,687 호; 제 6,146,366 호; 제 6,251,090 호; 및 제 6,299,895 호, 및 WO 01/30323 및 WO 01/28474에 기술된 장치를 포함하나, 이에 한정되지는 않는다.

예들은 하기와 같은 것들을 포함하나, 이에 한정되지는 않는다: 목적하는 국소 또는 전신의 생리적 또는 약제학적 효과를 얻기 위해 효과적인 유효량의 약제를 함유하는 내부 저장소 (inner reservoir), 약제의 통과에 대해 불투과성인 내부 튜브 (inner tube), 1 차 및 2 차 말단을 가지며 내부 저장소의 적어도 일부분을 차지하는 내부 튜브, 자신의 중량을 지탱할 수 있는 재질 및 크기로 이루어진 내부 튜브, 내부 튜브 1 차 말단에 위치한 비투과성 요소, 약제가 저장소로부터 내부 튜브 1 차 말단을 지나 통과하지 못하도록 하는 비투과성 요소, 및 내부 튜브 2 차 말단에 위치한 투과성 요소, 약제가 저장소로부터 내부 튜브 2 차 말단을 통해 확산되도록 허용하는 투과성 요소를 포함하는 서방형 방출 약물 전달 시스템; 본 발명의 화합물을 눈의 한 구분 (segment)에 투여하는 방법, 본 발명의 화합물을 눈의 초자체에 전달하기 위한 서방형 방출 장치 또는 본 발명의 화합물을 눈의 한 구분에 투여하기 위한 이식 가능한 서방형 방출 장치를 이식하는 단계를 포함하는 방법; a) 진단적 효과 또는 목적하는 국소 또는 전신의 생리적 또는 약제학적 효과를 얻기에 효과적인 적어도 하나의 1 차 약제의 치료적 유효량을 함유하는 약물 코어 (drug core); b) 약물 코어를 수용할 내부 구획 (internal compartment)을 둘러싸며 그 경계를 이루고 약제의 통과에 대해 본질적으로 비투과성인 적어도 하나의 단위 컵 (unirary cup), 단위 컵의 개방된 상위 말단의 적어도 일부분의 주위에 적어도 하나의 함몰된 홈 (recessed groove)을 가진 개방된 상위 말단을 포함하는 단위 컵; c) 약제의 통과에 대해 투과성인 투과성 마개 (plug), 투과성 마개가 단위컵의 개방된 상위 말단에 위치하여 개방된 상위 말단을 닫고, 여기에서 홈이 투과성 마개와 상호작용하여 이를 정위치에 고정시키며, 약제가 약물 코어로부터 투과성 마개를 지나 단위 컵의 개방된 상위 말단 바깥으로 통과해 나오도록 허용하는 투과성 마개; 및 d) 진단적 효과 또는 목적하는 국소 또는 전신의 생리적 또는 약제학적 효과를 얻기에 효과적인 적어도 하나의 2 차 약제를 포함하는 서방형 방출 약물 전달 장치; 또는 목적하는 용해도를 가진 약제의 유효량을 포함하는 내부 코어 및 중합체 코팅층, 약제에 대해 투과성이며 내부 코어를 완전히 덮는 중합체 층을 포함하는 서방형 방출 약물 전달 장치.

안 전달을 위한 다른 시도는 본 발명의 화합물을 눈에, 바람직하게는 망막색소상피 세포 및/또는 부르크 막 (Bruch's membrane)에 표적화하기 위한 리포좀의 이용을 포함한다. 예를 들어, 화합물은 상기 방법에 따라 리포좀과 복합체를 형성할 수 있고, 이러한 화합물/리포좀 복합체를 안 PCD를 가진 환자에게 정맥주사로 투여하여, 화합물을 목적하는 안 조직 또는 세포에 향하도록 한다. 어떤 형태의 안 PCD에 있어서는, 망막색소상피 세포 또는 부르크 막에 근접하여 리포좀을 직접 주사함으로써 복합체의 표적화를 제공할 수도 있다. 특이적 구체예에서, 화합물은 안-내 서방형 전달 (VITRASERT 또는 ENVISION과 같은)을 통해 투여된다. 특이적 구체예에서, 화합물은 포스테리어 서브테논 주사 (posterior subtennons injection)에 의해 전달된다. 또 다른 특이적 구체예에서, 본 발명의 조성물을 함유하는 마이크로에멀젼 입자를 안 조직에 전달하여 부르크 막, 망막색소상피 세포, 또는 양자 모두에서 지방질을 흡수 (take up)한다.

나노입자는 혈청 반감기를 연장시킴으로써 캡슐화된 약물의 효능을 개선시키는 것으로 입증된 콜로이드 담체 시스템이다. 폴리알킬시아노아크릴레이트 (PACAs) 나노입자는 문헌에 기재된 바와 같이 (Stella et al., J. Pharm. Sci., 2000. 89: p. 1452-1464; Brigger et al., Int. J. Pharm., 2001. 214: p. 37-42; Calvo et al., Pharm. Res., 2001. 18: p.1157-1166; 및 Li et al., Biol. Pharm. Bull., 2001. 24: p. 662-665) 임상적으로 개발 중인 중합체 콜로이드 약물 전달 시스템이다. 생분해성 폴리(하이드록실산), 예컨대 폴리(락트산) (PLA) 및 폴리(락트-코-글리콜라이드) (PLGA)의 공중합체가 생물의학적 적용에 광범위하게 사용되고 있으며 일정한 임상적 적용에 대해 FDA 승인을 득하였다. 추가로, PEG-PLGA 나노입자는 (i) 캡슐화될 약제가 총 담체 시스템에서 알맞게 높은 중량 분수 (적재)를 차지한다는 점; (ii) 캡슐화 공정의 1 차 단계에 사용되는 약제의 양이 최종 담체 내에 알맞게 높은 농도로 도입 (혼입 효율)된다는 점; (iii) 담체의 동결 건조가 가능하고 응집 없이 용액으로 재건될 수 있다는 점; (iv) 담체가 생분해성인 점; (v) 담체 시스템이 작은 크기인 점; (vi) 담체가 입자 지속성을 증대시킨다는 점을 포함하여 다수의 바람직한 담체 특징을 가지고 있다.

나노입자는 당업계에 공지된 사실상 모든 생분해성 쉘을 사용하여 합성된다. 한 구체예에서, 중합체, 예를 들어 폴리 (락트산) (PLA) 또는 폴리 (락트-코-글리콜산) (PLGA)가 사용된다. 상기 중합체는 생체적합성이며 생분해성이고, 나노입자의 순환 수명 및 광화학적 효능을 바람직하게 증가시키는 개질이 용이하다. 한 구체예에서, 중합체는 입자의 음전하를 증가시킴으로써 음전하 핵산 압타머 (aptamer)와의 상호작용을 제한하는 말단 카르복실산 그룹 (COOH)에 대해 개질된다. 나노입자는 또한 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)로 개질되며, 이 또한 순환 내에서 입자의 반감기 및 안정성을 증가시킨다. 다른 방법으로서, COOH 그룹은 아민-개질된 압타머와의 공유적 접합을 위하여 N-하이드록시숙신이미드 (NHS) 에스테르로 전환된다.

본 발명의 방법 및 조성물에 유용한 생체적합성 중합체는, 폴리아미드, 폴리카르보네이트, 폴리알킬렌, 폴리알킬렌 글리콜, 폴리알킬렌 옥사이드, 폴리알킬렌 테레프탈레이트, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르, 폴리비닐 할라이드, 폴리비닐피롤리돈, 폴리글리콜라이드, 폴리실록산, 폴리우레탄 및 그의 공중합체, 알킬 셀룰로즈, 하이드록시알킬 셀룰로즈, 셀룰로즈 에테르, 셀룰로즈 에스테르, 니트로 셀룰로즈, 아크릴 및 메타크릴 에스테르의 중합체, 메틸 셀룰로즈, 에틸 셀룰로즈, 하이드록시프로필 셀룰로즈, 하이드록시-프로필 메틸 셀룰로즈, 하이드록시부틸 메틸 셀룰로즈, 셀룰로즈 아세테이트, 셀룰로즈 프로피오네이트, 세룰로즈 아세테이트 부티레이트, 셀룰로즈 아세테이트 프탈레이트, 카르복시에틸 셀룰로즈, 셀룰로즈 트리아세테이트, 셀룰로즈 설페이트 소듐 염, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트), 폴리에틸렌, 폴리프로필렌 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸렌 테레프탈레이트), 폴리(비닐 알콜), 폴리(비닐 아세테이트, 폴리 비닐 클로라이드 폴리스티렌, 폴리비닐피롤리돈, 폴리히알루론산, 카제인, 젤라틴, 글루틴, 폴리안하이드라이드, 폴리아크릴산, 알기네이트, 키토산, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트) 및 이들의 임의의 배합물을 포함하나, 이로 한정되지는 않는다. 한 구체예에서, 본 발명의 나노입자 는 PEG-PLGA 중합체를 포함한다.

본 발명의 조성물은 또한 국소적으로도 전달될 수 있다. 국소적 전달을 위하여, 조성물은 안 전달에 있어서 승인된 약제학적으로 허용되는 임의의 부형제 내에 제공된다. 바람직하게는, 조성물은 눈 표면에 점적 형태 (drop form)로 전달된다. 몇 가지 적용에서, 조성물의 전달은 각막을 통해 안 내부로의 화합물 확산에 의존한다. 안 PCD 치료를 위한 본 발명의 화합물을 이용하는 최선의 치료계획이 용이하게 결정될 수 있음을, 당업자는 인식할 것이다. 이는 실험적 문제가 아니라, 의료분야에서 일상적으로 수행되는 최적화의 문제이다. 누드 마우스에서의 생체내 연구는 투여량 및 전달 계획의 최적화의 시작점을 제공한다. 일부 마우스 연구에서 실시된 바와 같이, 주사 빈도는 초기에 주당 1회가 될 것이다. 그러나 상기 빈도는, 초기 임상실험에서 얻어진 결과 및 특정 환자의 필요에 따라, 매일 내지 매 2 주 내지 매월로 최적화 조정될 수 있다.

당업자가 인식하는 바와 같이, 인간에 대한 투여량을 동물 모델과 비교하여 수정함이 당업계에서 통상적이므로, 인간 투여량은 마우스에 사용된 화합물의 양으로부터 보외법에 의해 초기 결정될 수 있다. 어떤 구체예에서 투여량은 약 1 mg 화합물/Kg 체중 내지 약 5000 mg 화합물/Kg 체중; 또는 약 5 mg/Kg 체중 내지 약 4000 mg/Kg 체중 또는 약 10 mg/Kg 체중 내지 약 3000 mg/Kg 체중; 또는 약 50 mg/Kg 체중 내지 약 2000 mg/Kg 체중; 또는 약 100 mg/Kg 체중 내지 약 1000 mg/Kg 체중; 또는 약 150 mg/Kg 체중 내지 약 500 mg/Kg 체중의 범위에서 변화할 것으로 계획되었다. 다른 구체예에서 투여량은 약 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000 mg/Kg 체중일 수 있다. 다른 구체예에서, 더 높은 투여량의 사용이 계획되며, 그 투여량은 약 5 mg 화합물/Kg 체중 내지 약 20 mg 화합물/Kg 체중의 범위일 수 있다. 다른 구체예에서 투여량은 약 8, 10, 12, 14, 16 또는 18 mg/Kg 체중일 수 있다. 이러한 치료 프로토콜에서 통상적으로 수행되듯이, 상기 투여량은 초기 임싱실험의 결과 및 특정 환자의 필요에 따라 당연히 상향 또는 하향 조정될 수 있다.

스크리닝 에세이 ( Screening Assays )

본 명세서에 논의한 바와 같이, 미스폴딩된 단백질은 종종 세포의 정상적인 생물학적 기능을 방해하여 PCD를 유발한다. 다수의 경우에 있어서, 미스폴딩된 단백질의 단백질 응집체로서의 축적은 세포 손상 및 세포독성을 유발시킨다. 유용한 화합물들은 생화학적 활성 입체구조를 취하는 돌연변이 단백질의 양을 증가시킴으로써 단백질 미스폴딩을 보정 또는 예방한다. 상기 화합물의 확인을 위한 스크리닝 에세이를 실행하기 위해서 임의의 다수 방법들을 이용할 수 있다. 한 시도에서, 야생형 단백질 입체구조를 채용하지 못하는 돌연변이 단백질이 세포 (예를 들어 시험관내 또는 생체내 세포) 내에 발현되고; 세포를 후보 화합물과 접촉시키며; 돌연변이 단백질의 입체구조에 대한 화합물의 효과를 당업계에 공지되었거나 본 명세서에 기술된 임의의 방법을 이용하여 조사하였다. 화합물과 접촉되지 않은 대조군 세포와 비교하여, 접촉된 세포에 존재하는 정확하게 폴딩된 단백질의 수율을 증가시키는 화합물은, 본 발명의 방법에 유용한 것으로 간주되었다. 정확하게 폴딩된 단백질 양의 증가는 예를 들어, 특징적 파장 (예를 들어 로돕신에 대해 500 nm)에서의 단백질의 흡광도 측정에 의해, 세포독성 감소로써 측정되는 세포 내 단백질 응집의 감소의 측정에 의해, PCD-관련 표현형 (phenotype)의 경감의 측정에 의해, 또는 임의의 표준 방법을 이용한 단백질의 생물학적 활성 (예를 들어 효소 활성, 리간드와의 결합) 증가의 특정에 의해 조사할 수 있다. 관련된 시도에서, 스크리닝은 11-시스-레티날, 9-시스-레티날, 또는 그의 유사체 또는 유도체의 존재 하에 실행되었다. 유용한 화합물들은 생물학적 기능성 입체구조를 취하는 단백질의 양을 적어도 10%, 15% 또는 20%, 또는 바람직하게는 25%, 50% 또는 75%; 또는 가장 바람직하게는 적어도 100%, 200%, 300% 또는 400%까지도 증가시킨다.

필요하다면, 확인된 화합물의 효능을 PCD (예를 들어 망막색소변성증, 낭포성 섬유증, 헌팅톤병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 신성 요붕증, 암 (예를 들어 p53 돌연변이와 관련된 암) 및 프리온-관련 장애 (예를 들어 야콥-크로이츠펠트병))를 가진 동물 모델에서 조사할 수 있다.

시험 화합물 및 추출물

일반적으로, 세포 내에서 정확하게 폴딩된 단백질의 양을 증가시킬 수 있는 화합물들은 천연산물 또는 합성 (또는 반-합성) 추출물의 거대 라이브러리 (library) 또는 화학적 라이브러리로부터 당업계에 공지된 방법에 따라 확인된다. 약물 발견 및 개발 분야의 당업자는 시험 추출물 또는 화합물의 명확한 기원은 본 발명의 스크리닝 절차(들)에 결정적이지 않다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 사실상 모든 다수의 화학적 추출물 또는 화합물들을 본 명세서에 기술된 방법을 이용하여 스크리닝할 수 있다. 이러한 추출물 또는 화합물의 예는, 식물-, 진균-, 원핵생물- 또는 동물-기본 추출물, 발효 배양액, 및 합성 화합물과 함께 기존 화합물의 개질을 포함하나, 이에 한정되지는 않는다. 당류-, 지방질-, 펩티드-, 및 핵산-기본 화합물을 포함하나 이에 한정되지는 않는 임의의 다수 화학적 화합물들의 무작위 또는 지향된 합성 (예를 들어 반-합성 또는 전합성)을 위한 다수의 방법이 또한 이용 가능하다. 합성 화합물 라이브러리는 브랜든 어소시에이트 (Brandon Associates) (Merrimack, N.H.) 및 알드리치 케미칼 (Aldrich Chemical) (Milwaukee, Wis.)로부터 상업적으로 이용 가능하다. 다른 방법으로서, 박테리아, 진균, 식물 및 동물 추출물 형태의 천연 화합물 라이브러리는, 바이오틱스 (Biotics) (Sussex, UK), 제노바 (Xenova) (Slough, UK), 하버 브랜치 오션그래픽스 인스티튜트 (Harbor Branch Oceangraphics Institute) (Ft. Pierce, Fla), 파마마르, 유.에스.에이. (PharmaMar, U.S.A.) (Cambridhe, Mass.)를 포함하는 다수의 공급자로부터 상업적으로 이용 가능하다. 추가로, 천연 및 합성적으로 생산되는 라이브러리는, 필요한 경우, 당업계에 공지된 방법, 예를 들어 표준 추출 및 분획화 방법에 따라 생산될 수 있다. 또한 필요한 경우, 임의의 라이브러리 또는 화합물은 표준 화학적, 물리학적, 또는 생화학적 방법을 이용하여 용이하게 개질될 수 있다.

추가로, 데레플리케이션 (dereplication) 방법 (예를 들어 분류학적 데레플리케이션, 생물학적 데레플리케이션 및 화학적 데레플리케이션, 또는 그들의 임의 배합) 또는 미스폴딩된 단백질을 보정하는 활성을 가진 것으로 이미 공지된 물질들의 복제 또는 반복을 제거하는 방법을 가능한 한 사용해야 함을, 약물 발견 및 개발의 당업자는 용이하게 이해한다.

정제하지 않은 추출물이 미스폴딩된 단백질의 입체구조를 보정함이 발견될 경우, 관찰된 효과의 원인이 되는 화학적 성분을 분리하기 위하여 양성 선도 추출물 (positive lead extract)의 추가 분획화가 필요하다. 따라서 추출, 분획화 및 정제공정의 목적은 정제되지 않은 추출물 내에서 정확하게 폴딩된 단백질의 수율을 증가시키는 화학적 실체 (entity)에 대한 신중한 특성조사 (characterization) 및 존재확인 (identification)이다. 이러한 불균질 추출물의 분획화 및 정제 방법은 당업계에 공지되어 있다. 필요한 경우, 미스폴딩된 단백질 또는 단백질 응집체와 관련된 임의의 병리의 치료에 있어서 유용한 약제로서 입증된 화합물들은 당업계에 공지된 방법에 따라 화학적으로 개질된다.

배합 요법 ( Combination Therapies )

PCD (예를 들어 망막색소변성증, 헌팅톤병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 신성 요붕증, 암 및 프리온-관련 장애, 예컨대 야콥-크로이츠펠트병)의 치료에 있어서 유용한 본 발명의 배합물은, 필요한 경우에, 당업계에 공지된 임의의 표준요법과 배합하여 투여할 수 있다. 망막색소변성증에 대하여, 표준요법은 비타민 A 보충제를 포함한다. 파킨슨병의 경우에, 표준요법은 하기 도파민 수용체 작용제 중의 임의의 하나 이상의 투여를 포함하며: 레보도파/카르비도파, 아만타딘, 브로모크립틴, 페르골리드, 아포몰핀, 벤세라지드, 라이수리드 (lysuride), 메술레르긴, 리수리드 (lisuride), 레르고트릴, 메만틴, 메테르골린, 피리베딜, 티라민, 티로신, 페닐알라닌, 브로모크립틴 메실레이트, 페르골리드 메실레이트; 다른 표준요법은 항히스티민제, 항우울제, 도파민 작용제, 모노아민 옥시다아제 저해제를 포함한다. 헌팅톤병에 대하여, 표준요법은 하기의 할로페리돌, 페노티아진, 레세르핀, 테트라베나진, 아만타딘 및 코엔자임 Q10 중 임의의 하나 이상의 투여를 포함한다. 알츠하이머병에 대하여, 표준요법은 하기 중 임의의 하나 이상의 투여를 포함한다: 도네페질 (Aricept), 리바스티그민 (Exelon), 갈란타민 (Razadyne) 및 타크린 (Cognex). 신성 요붕증에 대하여, 표준요법은 하기 중 임의의 하나 이상의 투여를 포함한다: 클로로티아지드/하이드로클로로티아지드, 아밀로리드 및 인도메타신. 암에 대하여, 표준요법은 하기 중 임의의 하나 이상의 투여를 포함한다: 아비라테론 아세테이트, 알트레타민, 안하이드로빈블라스틴, 아우리스타틴, 벡사로텐, 비칼루타미드, BMS184476, 2,3,4,5,6-펜타플루오로-N-(3-플루오로-4-메톡시페닐)벤젠 술폰아미드, 블레오마이신, N,N-디메틸-L-발릴-L-발릴-N-메틸-L-발릴-L-프롤릴-L-프롤린-t-부틸아미드, 카켁틴, 세마도틴, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 3',4'-디데하이드로-4'-데옥시-8'-노르빈-칼류코블라스틴, 도세탁솔, 독세탁셀, 사이클로포스파미드, 카르보플라틴, 카르무스틴 (BCNU), 시스플라틴, 크립토피신, 사이타라빈, 다카르바진 (DTIC), 닥티노마이신, 도노루비신, 돌라스타틴, 독소루비신 (아드리아마이신), 에토포시드, 5-플루오로우라실, 피나스테리드, 플루타미드, 하이드록시우레아 및 하이드록시우레아탁산, 이포스파미드, 리아로졸, 로니다민, 로무스틴 (CCNU), 메클로레타민 (니트로젠 머스타드), 멜팔란, 미보불린 이세티오네이트, 리족신, 세르테네프, 스트렙토조신, 미토마이신, 메토트렉세이트, 닐루타미드, 오나프리스톤, 파클리탁셀, 프레드니무스틴, 프로카르바진, RPR109881, 스트라무스틴 포스페이트, 타목시펜, 타소네르민, 탁솔, 트레티노인, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 설페이트 및 빈플루닌.

키트

본 발명은 PCD 또는 그의 증상의 치료 또는 예방을 위한 키트를 제공한다. 한 구체예에서, 키트는 유효량의 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 하기 중 임의의 하나 이상을 함유하는 약제학적 팩을 포함한다: 프로테아좀 저해제 (예를 들어 MG132), 자가소화 저해제 (예를 들어 3-메틸아데닌), 리소좀 저해제 (예를 들어 암모늄 클로라이드), ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제 (예를 들어 브레펠딘 A), Hsp90 샤페론 저해제 (예를 들어 겔다나마이신), 열 충격 반응 활성화제 (예를 들어 셀라스트롤), 글리코시다아제 저해제 (예를 들어 카스타노스페르민) 및 히스톤 데아세틸라제 저해제 (예를 들어 스크립타이드). 바람직하게는, 조성물은 단위 투여량 형태로 존재한다. 어떤 구체예에서, 키트는 치료적 또는 예방적 조성물을 함유하는 멸균 용기를 포함하며; 이러한 용기는 상자 (boxes), 앰플, 병, 바이알, 튜브, 봉투 (bags), 파우치 (pouches), 블리스터-팩 (blister-packs) 또는 당업계에 공지된 다른 적당한 용기 형태일 수 있다. 상기 용기들은 플라스틱, 유리, 접합가공지 (laminated paper), 금속 박편 (metal foil) 또는 약제를 담기에 적당한 다른 재질로 만들어질 수 있다.

필요한 경우에, 본 발명의 조성물 또는 그의 배합물은, PCD를 가지고 있거나 발병 위험도가 있는 대상에게 이를 투여하기 위한 사용 설명서와 함께 제공된다. 사용 설명서는 일반적으로 PCD의 치료 또는 예방을 위한 화합물의 용도에 관한 정보를 포함한다. 다른 구체예에서, 사용 설명서는 하기 중의 적어도 하나를 포함한다: 화합물 또는 화합물의 배합물의 기술; PCD 또는 그의 증상을 치료하기 위한 투여 계획 및 투여; 주의 사항; 경고; 적응증 (indications); 금기 (counter-indications); 과잉투여 안내; 유해작용; 동물 약리학; 임상 연구; 및/또는 참고문헌. 사용 설명서는 용기 (존재하는 경우)에 직접 인쇄될 수도 있고, 또는 용기에 부착된 라벨, 또는 용기 내에 또는 용기와 함께 제공되는 독립된 인쇄물, 팜플렛, 카드 또는 폴더일 수 있다.

하기의 실시예들은 발명을 설명하기 위하여 제공되는 것으로서, 그를 한정하는 것이 아니다. 하기에 제공되는 특이적 구성들이 화합물 또는 그의 배합물의 중요한 특성들을 유지하는 가운데 상기 기술한 발명과 일관되게 다양한 방법으로 변경될 수 있음을, 당업자는 이해할 것이다.

재조합 폴리펩티드 발현

본 발명의 조성물은 생화학적 활성 입체구조를 가진 재조합 폴리펩티드의 회수율을 증가시키므로, 이들은 당업계에 공지된 사실상 모든 재조합 폴리펩티드의 발현 증대에 있어서 일반적으로 유용하다. 특히, 본 발명의 조성물은 불활성 단백질의 응집체를 형성하는 경향이 있거나 봉입체 (inclusion body)를 형성하는 생물학적 활성 폴리펩티드의 회수율을 증대시킴에 있어서 유용하다. 상기 단백질의 생물학적 활성 형태의 회수율을 증대시키기 위하여, 본 발명에 따른 조성물 중 적어도 하나 이상이 단백질 합성이 유도되는 시간에 단백질을 발현하는 재조합 세포 (예를 들어 진핵세포, 포유류 세포 또는 효모 세포)의 배지에 첨가된다. 상기 조성물은 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 글리코시다아제 저해제, 열 충격 반응 활성화제 또는 히스톤 데아세틸라제 저해제를 포함한다. 재조합 또는 돌연변이 옵신의 발현을 증가시키기 위하여, 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날을 유도시에 배지에 첨가할 수 있다.

일반적으로, 재조합 폴리펩티드는 적당한 발현 비히클 내의 폴리펩티드-암호화 핵산 분자 또는 그의 단편의 전부 또는 일부로 적당한 숙주 세포를 형질변환 (transformation) 시킴으로써 생산된다. 분자생물학 분야의 당업자는 임의의 다양한 발현 시스템이 재조합 단백질의 제공에 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 사용되는 명확한 숙주 세포는 본 발명에 있어서 결정적이지 않다. 재조합 폴리펩티드는 사실상 모든 진핵 숙주 (예를 들어 사카로마이세스 세레비시아, 곤충 세포, 예를 들어 Sf21 세포, 또는 포유류 세포, 예컨대 NIH 3T3, HeLa, 또는 바람직하게는 COS 세포)에서 생산될 수 있다. 상기 세포들은 광범위한 공급원 (예를 들어, The American Type Culture Collection, Rockland, Md.; 또한 예를 들어 참조문헌, Ausubel et al., Current Protocol in Molecular Biology, New York: John Wiley and Sons, 1997)으로부터 이용 가능하다. 트란스펙션 (transfection) 방법 및 발현 비히클의 선정은 선택된 숙주 시스템에 의존한다. 형질변환 방법은 예를 들어 Ausubel 등의 상기 문헌에 기술되어 있고; 발현 비히클은 예를 들어 문헌 (Cloning Vectors: A Laboratory Manual (P. H. Pouwels et al., 1985, Supp. 1987))에서 제공되는 것들로부터 선정될 수 있다.

재조합 폴리펩티드의 생산을 위한 다양한 발현 시스템이 존재한다. 이러한 폴리펩티드의 생산에 있어서 유용한 발현 벡터 (expression vector)는 염색체성 (chromosomal), 유전자 부체성 (episomal), 및 바이러스-유래 벡터, 예컨대 박테리아 플라스미드, 박테리오파아지, 트란스포존 (transposon), 효모 유전자 부체 (yeast episomes), 삽입 인자 (insertion elements), 효모 염색체 인자 (yeast chromosomal elements), 바이러스, 예를 들어 바큘로바이러스, 파포바 바이러스, 예컨대 SV40, 박시니아 바이러스, 아데노바이러스, 포울 폭스 바이러스, 슈도라비스 바이러스 및 레트로바이러스로부터 유래된 벡터, 및 그의 배합으로부터 유래된 벡터를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

일단 재조합 폴리펩티드가 발현되면, 예를 들어 친화성 크로마토그라피 (affinity chromatography)를 이용하여 이를 분리한다. 한 실시예에서, 폴리펩티드에 대하여 유발된 항체 (예를 들어 본 명세서에 기술된 바에 따라 생산된)를 컬럼에 부착하여 재조합 폴리펩티드의 분리에 사용할 수 있다. 폴리펩티드-보유 세포의 친화성 크로마토그라피에 앞선 용해 및 분획화는 표준 방법 (예를 들어 참조 문헌 Ausubel et al., supra)에 따라 수행할 수 있다. 필요한 경우에, 일단 분리된 재조합 단백질은 예를 들어 고속 액체 크로마토그라피에 의해 추가로 정제될 수 있다 (예를 들어 참조 문헌 Fisher, Laboratory Techniques In Biochemistry and Molecular Biology, eds., Work and Burdon, Elsevier, 1980).

도 1a 및 1b는 각각 돌연변이 P23H 및 야생형 로돕신의 흡광에 대한 MG132 및 11-시스-레티날의 효과를 나타내는 흡광 스펙트럼이다.

도 2a 및 2b는 돌연변이 P23H 및 야생형 로돕신의 흡광에 대한 3-메틸아데닌 및 11-시스-레티날의 효과를 나타내는 흡광 스펙트럼이다.

도 3a 및 3b는 돌연변이 P23H 및 야생형 로돕신의 흡광에 대한 암모늄 클로 라이드 및 11-시스-레티날의 효과를 나타내는 흡광 스펙트럼이다.

도 4a 및 4b는 돌연변이 P23H 및 야생형 로돕신의 흡광에 대한 브레펠딘 A 및 11-시스-레티날의 효과를 나타내는 흡광 스펙트럼이다.

도 5a 및 5b는 돌연변이 P23H 및 야생형 로돕신의 흡광에 대한 겔다나마이신 및 11-시스-레티날의 효과를 나타내는 흡광 스펙트럼이다.

도 6a 및 6b는 돌연변이 P23H 및 야생형 로돕신의 흡광에 대한 셀라스트롤 및 11-시스-레티날의 효과를 나타내는 흡광 스펙트럼이다.

도 7a 및 7b는 돌연변이 P23H 및 야생형 로돕신의 흡광에 대한 디하이드로-셀라스트롤 및 11-시스-레티날의 효과를 나타내는 흡광 스펙트럼이다.

도 8a 및 8b는 돌연변이 P23H 및 야생형 로돕신의 흡광에 대한 스크립타이드 및 11-시스-레티날의 효과를 나타내는 흡광 스펙트럼이다.

망막색소변성증 (RP)는 간상 광수용체 (rod photoreceptor)의 사멸을 유발하는 유전적 망막 장애의 불균질한 그룹을 포함한다. 망막색소변성증을 앓는 환자에서 광수용체의 사멸은 야맹증 및 주변 시력의 점진적 상실에 의한 후속의 터널 시야 (tunnel vision)를 야기한다. 상염색체 우성 망막색소변성증 (ADRP) 환자의 20-25%가 로돕신 유전자에 돌연변이를 가지고 있으며, 가장 흔한 돌연변이는 P23H이다. P23H 돌연변이는 11-시스-레티날과 결합하지 못하는 미스폴딩된 옵신을 유발한다. 미스폴딩된 P23H 단백질은 세포 내에 잔류하여 응집체를 형성한다 (Saliba et al. 2002. JCS 115: 2907-2918; Illing et. al. 2002. JBC 277: 34150- 34160). 이러한 응집 작용에 따라 P23H를 포함하는 일부 RP 돌연변이를 단백질 입체구조 장애 (PCD)로 분류한다.

하기 실시예들은 미스폴딩된 단백질 응집을 감소시키고 정확하게 폴딩된 단백질의 수율을 증가시키는 화합물의 확인을 위하여 P23H 돌연변이 단백질의 이용에 치중되어 있지만, 본 발명이 그에 한정되는 것은 아니다. 세포 내에서 정확하게 폴딩된 P23H의 수율을 증가시키기에 유용한 것으로 확인된 화합물들은 단지 망막색소변성증의 치료에만 유용한 것이 아니다. 이러한 화합물들은 임의의 미스폴딩된 단백질의 수율을 증가시킬 가능성이 있으며, 사실상 모든 단백질 입체구조 장애의 치료에 있어서 일반적으로 유용하다.

미스폴딩되고 응집된 단백질의 구제가 특이적인 약리학적 샤페론을 이용함으로써 점차 입증되어 왔다. 경쟁적 (competitive) 효소 저해제 또한 약리학적 샤페론으로 사용되어 왔으며, 파브리병, GM1-강글리오시드증, 고셔병, 테이-삭스병 및 RP17을 포함하는 질환들에 있어서 간혹 특이적인 화학적 사프롱으로 지칭되었다. 단백질의 폴딩, 수송 및 분해를 위해 세포가 일반적으로 사용하는 과정들의 저해가 세포 내에서 적절하게 폴딩된 단백질의 수율을 증가시킬 수 있는지 여부를 결정하기 위하여, 하기 부류의 예시적 화합물들을 시험하였다: 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제.

이전의 연구들은 천연 발색단 11-시스-레티날이 9-시스-레티날 및 11-시스- 레티날의 7-환 고정 이성체와 마찬가지로 P23H 옵신의 생체내 폴딩 및 안정화를 정량적으로 촉진함을 입증하였다 (Noorwez et.al. J Biol Chem. 2003 Apr 18;278(16):14442-50). 야생형 단백질과 같이, 구제된 돌연변이 P23H 단백질은 색소를 형성하였으며, 완성된 글리코실화를 취득하여 세포 표면으로 수송되었다. 본 연구에서는, P23H 옵신의 세포 내 운명에 참여할 가능성이 있는 다양한 세포 효소 및 경로의 저해제의 효과를 분석하였다.

실시예 1: P23H 옵신 발현 세포주를 단백질 폴딩 에세이에 사용하였다

돌연변이 P23H 및 야생형 옵신을 11-시스-레티날 및 다양한 저해제의 존재 하에 테트라사이클린-유도성의 안정한 HEK293 세포주에서 독립적으로 발현시켰다. 48 시간에, 폴딩된 단백질을 면역친화성 (immunoaffinity) 정제하여 UV-가시광선 분광학으로 정량분석하였다. 옵신 단백질 총량은 280 nm에서 측정하였다. 생화학적 기능성 입체구조로 존재하는 로돕신의 양은 500 nm에서 측정하였다. 면역형광 현미경을 이용하여 단백질의 세포 소재 (cellular location)도 또한 결정하였다.

실시예 2: 프로테아좀 저해가 정확하게 폴딩된 P23H 의 회수율을 증가시켰다

프로테아좀의 가역적 저해제 MG132를 실시예 1에 기술된 HEK293 세포주의 배양 배지에 유도시에 첨가하였다. 프로테아좀 저해는 도 1a에 나타낸 바와 같이 200-250%를 초과하는 로돕신의 회수율을 야기하였다. 반면에 야생형 로돕신의 수율 증가는 35-40%에 불과하였다 (도 1b).

실시예 3: 자가소화 저해가 정확하게 폴딩된 P23H 의 회수율을 증가시켰다

3-메틸아데닌을 유도시에 배양 배지에 첨가함으로써 실시예 1의 HEK293 세포에서 자가소화를 차단하였다. 이로 인해 P23H 로돕신의 회수율이 350-400% 증가한 반면에 야생형 로돕신의 회수는 불과 50-60% 증가하였다 (도 2a 및 2b).

실시예 4: 리소좀 저해가 정확하게 폴딩된 P23H 의 회수율을 증가시켰다

리소좀 저해제 암모늄 클로라이드를 P23H 단백질 합성이 유도되는 시간에 실시예 1의 HEK293 세포의 배양 배지에 첨가하였다. 흥미롭게도, 리소좀 저해는 P23H 로돕신의 회수율을 30% 증가시키고 야생형 로돕신의 회수율은 10% 증가시켰다 (도 3a 및 3b).

실시예 5: ER -골지 수송 차단이 정확하게 폴딩된 P23H 의 수율을 증가시켰다

유도시에 브레펠딘 A를 첨가함으로써 실시예 1의 HEK293 세포에서 단백질의ER로부터 골지로의 순행성 (anterograde) 수송을 차단하였다. 이러한 처리는 P23H 로돕신의 수율을 2-배 증가시켰다 (도 4a). 야생형 로돕신 수율에서 상응하는 증가는 약 60%였다 (도 4b).

실시예 6: Hsp90 저해가 정확하게 폴딩된 P23H 의 회수율을 증가시켰다

특이적 Hsp90 샤페론 저해제 겔다마이신을 실시예 1에 기술된 HEK293 세포의 배양 배지에 유도시에 첨가하였다. 야생형 및 P23H 옵신을 발현하는 세포에 겔다마이신을 투여한 결과, P23H 로돕신의 회수율이 60% 증가하였다 (도 5a). 야생형 로돕신의 회수율에는 무시할만한 증가가 있었을 뿐이다 (도 5b).

실시예 7: 열 충격 반응 활성화가 정확하게 폴딩된 P23H 의 수율을 증가시켰다

셀라스트롤을 유도시에 첨가함으로써 실시예 1의 HEK293 세포에서 열 충격 반응을 활성화시켰다. 이러한 처리는 P23H 로돕신을 40% 증가시켰다 (도 6a). 셀라스트롤은 야생형 로돕신의 회수율에 훨씬 작은 효과를 나타내었다 (~5-7%) (도 6b).

실시예 8: 디하이드로 - 셀라스트롤이 야생형 및 P23H 로돕신의 회수율을 증가시켰다

셀라스트롤의 유도체 디하이드로-셀라스트롤의 P23H 로돕신 회수율에 대한 효과를 실시예 1의 HEK293 세포에서 조사하였다. 디하이드로-셀라스트롤은 야생형 및 P23H 로돕신 양자 모두의 회수율을 약 5-10% 증가시켰다 (도 7a 및 7b).

실시예 9: 히스톤 데아세틸라제 저해가 야생형 및 P23H 로돕신의 회수율을 증가시켰다

히스톤 데아세틸라제 저해제 스크립타이드를 유도시에 실시예 1에 기술된 HEK293 세포의 배양 배지에 첨가하였다. 스크립타이드는 야생형 및 P23H 로돕신 양자 모두의 회수율을 약 30% 증가시켰다 (도 8a 및 8b).

실시예 10: 11- 시스 - 레티날이 저해제 존재 하에 옵신의 구제를 증대시켰다

표 1에 나타낸 바와 같이, 각각의 하기 저해제는 11-시스-레티날 존재 하에 폴딩된 로돕신의 회수율을 증가시켰다: 글루코시다아제 1 & 2 (카스타노스페르민), ER로부터 골지로의 순행성 수송 (브레펠딘 A), Hsp90 (겔다나마이신), 프로테아좀 (MG132), 자가소화 (3-MA) 및 리소좀 (암모늄 클로라이드). MG132 및 3-메틸아데닌이 폴딩된 로돕신의 회수율에 가장 극적인 효과를 나타내었다.

로돕신 회수율에 대한 저해제의 효과

화합물	P23H (회수율의 % 증가)	야생형 (회수율의 % 증가)
MG132	230	140
3MA	400	159
암모늄 클로라이드	138	115
브레펠딘 A	210	160
겔다나마이신	170	115
셀라스트롤	150	115
디하이드로 셀라스트롤 아세테이트	123	105
스크립타이드	131	130

저해제의 효과가 특이적 샤페론 11-시스-레티날을 요구하는지 여부를 결정하기 위하여, 각각의 저해제를 단독으로 시험하였다. 프로테아좀 저해제 MG132는 정확하게 폴딩된 P23H 로돕신의 회수율을 11-시스-레티날의 부재 하에 150% 증가시켰다. 자가소화 저해제 3-메틸아데닌은 정확하게 폴딩된 P23H 로돕신의 회수율을 11-시스-레티날의 부재 하에 200% 증가시켰다. 정확하게 폴딩된 P23H 옵신의 수율 감소는 11-시스-레티날의 첨가 없이 다른 저해제의 존재 하에 세포를 성장시켰을 때 회복되었다.

P23H 돌연변이는 옵신을 불안정화시켜 세포 내에서 그의 응집을 초래한다. 부정확하게 폴딩된 P23H는 그의 천연 리간드인 11-시스-레티날과 결합하지 못한다. P23H 돌연변이를 발현하는 세포의 배양 배지에의 11-시스-레티날 첨가는, 초기 폴딩 옵신 중간체에 리간드의 접근을 가능하게 하여 로돕신 수율의 5-6 배 증가가 달성된다. 이러한 효과는 돌연변이에 대해 특이적이며, 야생형 옵신을 발현하는 세포의 배지에 11-시스-레티날을 첨가했을 때에는 효과가 나타나지 않는다. 11-시스-레티날 및 각각의 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제 또는 히스톤 데아세틸라제 저해제의 배합물은 생화학적 기능성 입체구조를 취한 P23H의 회수율을 증가시켰다.

생화학적 기능성 입체구조를 가진 P23H 단백질은, 기능성 에세이에서 야생형 단백질의 생물학적 활성을 나타내었다. 예를 들어, P23H 단백질은, 본 명세서에 기술된 바와 같이 발현되었을 때, 빛에 의해 활성화되고 메타로돕신 II로 전환되는 능력을 보유한다. 이러한 전환은 분광광도법에 의해 관찰되었다. 추가로, P23H 단백질은, 본 명세서에 기술된 바와 같이 발현되었을 때, 세포막의 일부분으로서 분리될 수 있다. P23H을 함유하는 분리된 막에 트란스듀신을 첨가하면, P23H 단백질은 복소삼량체 G 단백질 트란스듀신 (heterotrimer G protein transducin)를 활성화시켜 트란스듀신의 α 서브유닛에 의한 GDP의 GTP로의 교환을 촉발시킬 수 있다. 망막색소변성증의 동물 모델에서, 본 발명의 조성물 (예를 들어, 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 또는 히스톤 데아세틸라제 저해제 중의 하나 이상과 배합된 11-시스-레티날)은 망막색소변성증 표현형과 관련된 증상을 개선하거나 기능적으로 구제할 것으로 기대된다.

재료 및 방법

세포주 및 배양 조건

안정한 야생형 및 P23H 옵신 발현 HEK293 세포주를 Flp-In T-Rex 시스템 (Invitrogen)에서 생성시켰다. HEK293 세포는 10% 우태아 혈청 (fetal bovine serum), 항생-항진균 용액 (antibiotic-antimycotic solution), 5 ㎍/ml 블라스티시딘 및 하이그로마이신으로 보충한 DMEM 고 글루코즈 배지에서 8% CO₂ 존재 하에 37 ℃에서 배양하였다.

옵신 생산의 유도 및 저해제 첨가

옵신 발현 HEK293 세포주가 컨플루언스 (confluence)에 달하도록 하여 배지를 교체한 후 1 ㎍/ml 테트라사이클린으로 유도하였다. 10 μM의 11-시스-레티날을 유도 후 즉시 적색광 하에 첨가하고, 저해제들을 표 2 (하기)에 나타낸 농도로 동시에 첨가하였다.

사용된 저해제	사용된 농도
MG132	250 nM
3-메틸아데닌	10 mM
암모늄 클로라이드	30 mM
브레펠딘 A	100 ng/ml
겔다나마이신	750 nM
셀라스트롤	1 μM
디하이드로-셀라스트롤	1 μM
스크립타이드	4 μM
키푸넨신	20 μM

배양접시를 48 시간 동안 배양하였다. 10 μM의 레티날을 최초 적용 후 24 시간에 적색광 하에서 공급하였다.

세포 수확 및 로돕신 정제

유도 및 저해제 투여 후 48 시간에 HEK293 세포를 수확하여 본질적으로 문헌 (Noorwez et. al. J Biol Chem. 2004 Apr 16;279(16):16278-84)에 기재된 바와 같이 로돕신을 정제하였다. Varian Cary 50 분광광도계로 분광광도법 스캔을 실시하였다.

다른 구체예

앞서 기술한 바로부터, 다양한 사용법 및 조건에 채용하기 위하여 본 명세서에 기술된 발명에 대한 변경 및 개질이 가능함은 자명할 것이다. 이러한 구체예 또한 하기 청구의 범위 내에 속한다.

본 명세서의 변수에 대한 임의의 정의에서 열거된 요소들의 상술은 임의의 단일 요소 또는 열거된 요소들의 배합 (또는 부분 배합)으로서의 당해 변수의 정의를 포함한다. 본 명세서의 구체예의 상술은 임의의 단일 구체예 또는 임의의 다른 구체예 또는 그의 부분과의 배합으로서의 당해 구체예를 포함한다.

본 명세서에 언급된 모든 특허 및 공개공보는 각각의 독립적인 특허 및 공개공보가 구체적이며 개별적으로 원용에 의해 포함되는 것으로 표시된 것과 동일한 정도로 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.

Claims

프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 화합물의 투여를 포함하고, 여기에서 화합물이 대상을 치료하기에 충분한 양으로 투여되는, 단백질 입체구조 장애 (PCD)를 가진 대상을 치료하는 방법.
제1항에 있어서, PCD가 망막색소변성증, 연령-관련 황반변성, 녹내장, 각막 이영양증, 망막분리증, 스타르가르트병, 상염색체 우성 드루젠 및 베스트 황반 이영양증으로 구성된 그룹으로부터 선택된 안 PCD인 방법.
제2항에 있어서, 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체를 대상에게 투여함을 추가로 포함하는 방법.
제2항에 있어서, 안 PCD가 망막색소변성증 또는 연령-관련 황반변성인 방법.
a) 대상에게 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날을 투여하고;

b) 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다 아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 추가 화합물을 투여하며, 여기에서 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 상기 화합물을 동시에 또는 상호간 14 일 이내에 대상을 치료하기에 충분한 양으로 투여함을 포함하는, 망막색소변성증을 가진 것으로 진단 받은 대상을 치료하는 방법.
제5항에 있어서 11-시스-레티날이 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체인 방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 대상이 단백질 폴딩에 영향을 미치는 돌연변이를 포함하는 방법.
제7항에 있어서, 돌연변이가 옵신 내에 존재하는 방법.
제8항에 있어서, 옵신이 P23H 돌연변이를 포함하는 방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 프로테아좀 저해제가 MG132, 락토시스틴, 클라스토-락토시스틴-베타-락톤, PSI, MG-115, MG-101, N-아세틸-Leu-Leu-Met-CHO, N-카르보벤조일-Gly-Pro-Phe-Leu-CHO, N-카르보벤조일-Gly-Pro-Ala-Phe-CHO, N-카르보벤조일-Leu-Leu-Phe-CHO, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되 는 방법.
제10항에 있어서, 프로테아좀 저해제가 프로테아좀의 가역적 저해제인 방법.
제11항에 있어서, 가역적 프로테아좀 저해제가 MG132인 방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 자가소화 저해제가 3-메틸아데닌, 3-메틸 아데노신, 아데노신, 오카다산, N⁶-머캅토퓨린 리보사이드 (N⁶-MPR), 5-아미노-4-이미다졸 카르복사미드 리보사이드 (AICAR), 바필로마이신 A1, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
제13항에 있어서, 자가소화 저해제가 3-메틸아데닌인 방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 리소좀 저해제가 류펩틴, 트란스-에폭시삭시닐-L-류실아미드-(4-구아니디노)부탄, L-메티오닌 메틸 에스테르, 암모늄 클로라이드, 메틸아민, 클로로퀸, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
제15항에 있어서, 리소좀 저해제가 암모늄 클로라이드인 방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제가 브레펠딘 A 및 그의 염 또는 유사체인 방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, Hsp90 샤페론 저해제가 벤조퀴논 안사마이신 항생제, 겔다나마이신, 17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신, 라디시콜, 노보비오신, 및 Hsp90 ATP/ADP 포켓에 결합하는 Hsp90 저해제, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
제18항에 있어서, Hsp90 샤페론 저해제가 겔다나마이신인 방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 열 충격 반응 활성화제가 셀라스트롤, 셀라스트롤 메틸 에스테르, 디하이드로셀라스트롤 디아세테이트, 셀라스트롤 부틸 에스테르 및 디하이드로셀라스트롤로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
제20항에 있어서, 열 충격 반응 활성화제가 셀라스트롤인 방법.
제20항에 있어서, 열 충격 반응 활성화제가 디하이드로-셀라스트롤인 방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 글리코시다아제 저해제가 아우스트랄린 하이드 로클로라이드, 카스타노스페르민, 6-아세트아미도-6-데옥시-카스타노스페르민, 데옥시푸코노지리마이신 하이드로클로라이드 (DFJ), 데옥시노지리마이신 (DNJ), 데옥시갈락토노지리마이신 하이드로클로라이드 (DGJ), 데옥시만노지리마이신 하이드로클로라이드 (DMJ), 2R,5R-비스(하이드록시메틸)-3R,4R-디하이드록시피롤리딘 (DMDP), 1,4-디데옥시-1,4-이미노-D-만니톨 하이드로클로라이드, 3R,4R,5R,6R)-3,4,5,6-테트라하이드록시아제판 하이드로클로라이드, 1,5-디데옥시-1,5-이미노-자일리톨, 키푸넨신, N-부틸데옥시노지리마이신 (BDNJ), N-노닐 DNJ (NDNJ), N-헥실 DNJ (HDNJ), N-메틸데옥시노지리마이신 (MDNJ), 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
제20항에 있어서, 글리코시다아제 저해제가 카스타노스페르민인 방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 히스톤 데아세틸라제 저해제가 스크립타이드, APHA 화합물 8, 아피시딘, 소듐 부티레이트, (-)-데푸데신, 시르티놀, 트리코스타틴 A, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
제25항에 있어서, 히스톤 데아세틸라제 저해제가 스크립타이드인 방법.
제3항 또는 제5항에 있어서, 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 화합물이 상호간 10 일 이내에 투여되는 방법.
제27항에 있어서, 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 추가의 화합물이 상호간 5 일 이내에 투여되는 방법.
제28항에 있어서, 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 추가의 화합물이 상호간 24 시간 이내에 투여되는 방법.
제29항에 있어서, 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 화합물이 동시에 투여되는 방법.
제30항에 있어서, 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 화합물이 눈에 투여되는 방법.
제31항에 있어서, 안-내 투여인 방법.
제30항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날 및 화합물이 그들의 장기간 방출을 제공하는 조성물 내에 각각 혼입되는 방법.
제30항에 있어서, 조성물이 마이크로구체 (microsphere), 나노구체 (nanosphere) 또는 나노에멀젼 (nanoemulsion)인 방법.
제34항에 있어서, 장기간 방출이 약물 전달 장치에 의하는 방법.
제5항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 비타민 A 보충제의 투여를 추가로 포함하는 방법.
제1항에 있어서, PCD가 α1-항트립신 결핍증, 낭포성 섬유증, 헌팅톤병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 신성 요붕증, 암 및 야콥-크로이츠펠트병으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
제37항에 있어서, PCD가 낭포성 섬유증이고 방법이 항생제, 비타민 A, D, E 및 K 보충제, 알부테롤 기관지확장제, 도르나제 및 이부프로펜으로 구성된 그룹으로부터 선택된 약제의 투여를 추가로 포함하는 방법.
제38항에 있어서, PCD가 헌팅톤병이고 방법이 할로페리돌, 페노티아진, 레세르핀, 테트라베나진, 아만타딘 및 코엔자임 Q10으로 구성된 그룹으로부터 선택된 약제의 투여를 추가로 포함하는 방법.
제37항에 있어서, PCD가 파킨슨병이고 방법이 레보도파, 아만타딘, 브로모크 립틴, 페르골리드, 아포몰핀, 벤세라지드, 라이수리드 (lysuride), 메술레르긴, 리수리드 (lisuride), 레르고트릴, 메만틴, 메테르골린, 피리베딜, 티라민, 티로신, 페닐알라닌, 브로모크립틴 메실레이트, 페르골리드 메실레이트, 항히스티민제, 항우울제 및 모노아민 옥시다아제 저해제로 구성된 그룹으로부터 선택된 약제의 투여를 추가로 포함하는 방법.
제37항에 있어서, PCD가 알츠하이머병이고 방법이 도네페질, 리바스티그민, 갈란타민 및 타크린으로 구성된 그룹으로부터 선택된 약제의 투여를 추가로 포함하는 방법.
제37항에 있어서, PCD가 신성 요붕증이고 방법이 클로로티아지드/하이드로클로로티아지드, 아밀로리드 및 인도메타신으로 구성된 그룹으로부터 선택된 약제의 투여를 추가로 포함하는 방법.
제37항에 있어서, PCD가 암이고 방법이 아비라테론 아세테이트, 알트레타민, 안하이드로빈블라스틴, 아우리스타틴, 벡사로텐, 비칼루타미드, BMS184476, 2,3,4,5,6-펜타플루오로-N-(3-플루오로-4-메톡시페닐)벤젠 술폰아미드, 블레오마이신, N,N-디메틸-L-발릴-L-발릴-N-메틸-L-발릴-L-프롤릴-L-프롤린-t-부틸아미드, 카켁틴, 세마도틴, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 3',4'-디데하이드로-4'-데옥시-8'-노르빈-칼류코블라스틴, 도세탁솔, 독세탁셀, 사이클로포스파미드, 카르보플라 틴, 카르무스틴 (BCNU), 시스플라틴, 크립토피신, 사이타라빈, 다카르바진 (DTIC), 닥티노마이신, 도노루비신, 돌라스타틴, 독소루비신 (아드리아마이신), 에토포시드, 5-플루오로우라실, 피나스테리드, 플루타미드, 하이드록시우레아 및 하이드록시우레아탁산, 이포스파미드, 리아로졸, 로니다민, 로무스틴 (CCNU), 메클로레타민 (니트로젠 머스타드), 멜팔란, 미보불린 이세티오네이트, 리족신, 세르테네프, 스트렙토조신, 미토마이신, 메토트렉세이트, 닐루타미드, 오나프리스톤, 파클리탁셀, 프레드니무스틴, 프로카르바진, RPR109881, 스트라무스틴 포스페이트, 타목시펜, 타소네르민, 탁솔, 트레티노인, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 설페이트 및 빈플루닌으로 구성된 그룹으로부터 선택된 약제의 투여를 추가로 포함하는 방법.
a) 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 화합물의 유효량에 세포를 접촉시키고;

b) 단백질의 생화학적 기능성 입체구조의 양의 증가를 확인함을 포함하는, 세포 내에서 단백질의 생화학적 기능성 입체구조의 양을 증가시키는 방법.
제44항에 있어서, 11-시스-레티날, 9-시스-레티날 또는 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체에 세포를 접촉시킴을 추가로 포함하는 방법.
제45항에 있어서, 세포가 응집체 또는 원섬유를 형성하는 돌연변이 단백질을 포함하는 방법.
제46항에 있어서, 세포가 돌연변이 옵신 단백질을 포함하는 방법.
제46항에 있어서, 세포가 돌연변이 미오실린 단백질을 포함하는 방법.
제46항에 있어서, 세포가 돌연변이 리포푸신 단백질을 포함하는 방법.
제46항에 있어서, 세포가 돌연변이 β-H3 단백질을 포함하는 방법.
제44항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 세포가 시험관내인 방법.
제44항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 세포가 생체내인 방법.
제44항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 세포가 포유류 세포인 방법.
제53항에 있어서, 세포가 인간 세포인 방법.
약제학적으로 허용되는 부형제 내에 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날의 유효량 및 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 추가 화합물의 유효량을 포함하는, 안 PCD 치료용 약제학적 조성물.
약제학적으로 허용되는 부형제 내에 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날의 유효량 및 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 추가 화합물의 유효량을 포함하는, 망막색소변성증 치료용 약제학적 조성물.
제55항 또는 제56항에 있어서, 프로테아좀 저해제가 MG132, 락토시스틴, 클라스토-락토시스틴-베타-락톤, PSI, MG-115, MG-101, N-아세틸-Leu-Leu-Met-CHO, N-카르보벤조일-Gly-Pro-Phe-Leu-CHO, N-카르보벤조일-Gly-Pro-Ala-Phe-CHO, N-카르보벤조일-Leu-Leu-Phe-CHO, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 조성물.
제57항에 있어서, 프로테아좀 저해제가 프로테아좀의 가역적 저해제인 조성물.
제55항 또는 제56항에 있어서, 가역적 프로테아좀 저해제가 MG132인 조성물.
제55항 또는 제56항에 있어서, 자가소화 저해제가 3-메틸아데닌, 3-메틸 아데노신, 아데노신, 오카다산, N⁶-머캅토퓨린 리보사이드 (N⁶-MPR), 5-아미노-4-이미다졸 카르복사미드 리보사이드 (AICAR), 바필로마이신 A1, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 조성물.
제60항에 있어서, 자가소화 저해제가 3-메틸아데닌인 조성물.
제55항 또는 제56항에 있어서, 리소좀 저해제가 류펩틴, 트란스-에폭시삭시닐-L-류실아미드-(4-구아니디노)부탄, L-메티오닌 메틸 에스테르, 암모늄 클로라이드, 메틸아민, 클로로퀸, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 조성물.
제62항에 있어서, 리소좀 저해제가 암모늄 클로라이드인 조성물.
제55항 또는 제56항에 있어서, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제가 브레펠딘 A 및 그의 염 또는 유사체인 조성물.
제55항 또는 제56항에 있어서, Hsp90 샤페론 저해제가 벤조퀴논 안사마이신 항생제, 겔다나마이신, 17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신, 라디시콜, 노보비오신, 및 Hsp90 ATP/ADP 포켓에 결합하는 Hsp90 저해제, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 조성물.
제65항에 있어서, Hsp90 샤페론 저해제가 겔다나마이신인 조성물.
제55항 또는 제56항에 있어서, 열 충격 반응 활성화제가 셀라스트롤, 셀라스트롤 메틸 에스테르, 디하이드로셀라스트롤 디아세테이트, 셀라스트롤 부틸 에스테르 및 디하이드로셀라스트롤로 구성된 그룹으로부터 선택되는 조성물.
제67항에 있어서, 열 충격 반응 활성화제가 셀라스트롤인 조성물.
제67항에 있어서, 열 충격 반응 활성화제가 디하이드로-셀라스트롤인 조성물.
제55항 또는 제56항에 있어서, 글리코시다아제 저해제가 아우스트랄린 하이드로클로라이드, 카스타노스페르민, 6-아세트아미도-6-데옥시-카스타노스페르민, 데옥시푸코노지리마이신 하이드로클로라이드 (DFJ), 데옥시노지리마이신 (DNJ), 데 옥시갈락토노지리마이신 하이드로클로라이드 (DGJ), 데옥시만노지리마이신 하이드로클로라이드 (DMJ), 2R,5R-비스(하이드록시메틸)-3R,4R-디하이드록시피롤리딘 (DMDP), 1,4-디데옥시-1,4-이미노-D-만니톨 하이드로클로라이드, 3R,4R,5R,6R)-3,4,5,6-테트라하이드록시아제판 하이드로클로라이드, 1,5-디데옥시-1,5-이미노-자일리톨, 키푸넨신, N-부틸데옥시노지리마이신 (BDNJ), N-노닐 DNJ (NDNJ), N-헥실 DNJ (HDNJ), N-메틸데옥시노지리마이신 (MDNJ), 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 조성물.
제70항에 있어서, 글리코시다아제 저해제가 카스타노스페르민인 조성물.
제55항 또는 제56항에 있어서, 히스톤 데아세틸라제 저해제가 스크립타이드, APHA 화합물 8, 아피시딘, 소듐 부티레이트, (-)-데푸데신, 시르티놀, 트리코스타틴 A, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 조성물.
제72항에 있어서, 히스톤 데아세틸라제 저해제가 스크립타이드인 조성물.
제55항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 안 PCD가 연령-관련 황반변성, 망막색소변성증, 녹내장, 각막 이영양증, 망막분리증, 스타르가르트병, 상염색체 우성 드루젠 또는 베스트 황반 이영양증으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 조성물.
유효량의 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날; 및 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 추가 화합물의 유효량을 포함하는, 안 PCD 치료용 키트.
유효량의 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날; 및 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 추가 화합물의 유효량을 포함하는, 망막색소변성증 치료용 키트.
제75항 또는 제76항에 있어서, 프로테아좀 저해제가 MG132, 락토시스틴, 클라스토-락토시스틴-베타-락톤, PSI, MG-115, MG-101, N-아세틸-Leu-Leu-Met-CHO, N-카르보벤조일-Gly-Pro-Phe-Leu-CHO, N-카르보벤조일-Gly-Pro-Ala-Phe-CHO, N-카르보벤조일-Leu-Leu-Phe-CHO, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 키트.
제75항 또는 제76항에 있어서, 프로테아좀 저해제가 프로테아좀의 가역적 저 해제인 키트.
제78항에 있어서, 가역적 프로테아좀 저해제가 MG132인 키트.
제75항 또는 제76항에 있어서, 자가소화 저해제가 3-메틸아데닌, 3-메틸 아데노신, 아데노신, 오카다산, N⁶-머캅토퓨린 리보사이드 (N⁶-MPR), 5-아미노-4-이미다졸 카르복사미드 리보사이드 (AICAR), 바필로마이신 A1, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 키트.
제80항에 있어서, 자가소화 저해제가 3-메틸아데닌인 키트.
제75항 또는 제76항에 있어서, 리소좀 저해제가 류펩틴, 트란스-에폭시삭시닐-L-류실아미드-(4-구아니디노)부탄, L-메티오닌 메틸 에스테르, 암모늄 클로라이드, 메틸아민, 클로로퀸, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 키트.
제82항에 있어서, 리소좀 저해제가 암모늄 클로라이드인 키트.
제75항 또는 제76항에 있어서, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제가 브레펠딘 A 및 그의 염 또는 유사체인 키트.
제75항 또는 제76항에 있어서, Hsp90 샤페론 저해제가 벤조퀴논 안사마이신 항생제, 겔다나마이신, 17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신, 라디시콜, 노보비오신, 및 Hsp90 ATP/ADP 포켓에 결합하는 Hsp90 저해제, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 키트.
제85항에 있어서, Hsp90 샤페론 저해제가 겔다나마이신인 키트.
제75항 또는 제76항에 있어서, 열 충격 반응 활성화제가 셀라스트롤, 셀라스트롤 메틸 에스테르, 디하이드로셀라스트롤 디아세테이트, 셀라스트롤 부틸 에스테르 및 디하이드로셀라스트롤로 구성된 그룹으로부터 선택되는 키트.
제87항에 있어서, 열 충격 반응 활성화제가 셀라스트롤인 키트.
제87항에 있어서, 열 충격 반응 활성화제가 디하이드로-셀라스트롤인 키트.
제75항 또는 제76항에 있어서, 글리코시다아제 저해제가 아우스트랄린 하이드로클로라이드, 카스타노스페르민, 6-아세트아미도-6-데옥시-카스타노스페르민, 데옥시푸코노지리마이신 하이드로클로라이드 (DFJ), 데옥시노지리마이신 (DNJ), 데 옥시갈락토노지리마이신 하이드로클로라이드 (DGJ), 데옥시만노지리마이신 하이드로클로라이드 (DMJ), 2R,5R-비스(하이드록시메틸)-3R,4R-디하이드록시피롤리딘 (DMDP), 1,4-디데옥시-1,4-이미노-D-만니톨 하이드로클로라이드, 3R,4R,5R,6R)-3,4,5,6-테트라하이드록시아제판 하이드로클로라이드, 1,5-디데옥시-1,5-이미노-자일리톨, 키푸넨신, N-부틸데옥시노지리마이신 (BDNJ), N-노닐 DNJ (NDNJ), N-헥실 DNJ (HDNJ), N-메틸데옥시노지리마이신 (MDNJ), 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 키트.
제90항에 있어서, 글리코시다아제 저해제가 카스타노스페르민인 키트.
제75항 또는 제76항에 있어서, 히스톤 데아세틸라제 저해제가 스크립타이드, APHA 화합물 8, 아피시딘, 소듐 부티레이트, (-)-데푸데신, 시르티놀, 트리코스타틴 A, 및 그의 염 또는 유사체로 구성된 그룹으로부터 선택되는 키트.
제92항에 있어서, 히스톤 데아세틸라제 저해제가 스크립타이드인 키트.
a) 시험관내에서 미스폴딩된 단백질을 발현하는 세포를 후보 화합물과 접촉시키고;

b) 세포로부터 회수된 정확하게 폴딩된 단백질의 수율을 대조군 세포와 비교하여 결정함을 포함하며, 여기에서 접촉된 세포 내의 정확하게 폴딩된 단백질의 수 율 증가에 의해 PCD를 가진 대상의 치료에 유용한 화합물을 확인함을 특징으로 하여, 안 PCD를 가진 대상의 치료에 유용한 화합물을 확인하는 방법.
a) 시험관내에서 미스폴딩된 단백질을 발현하는 세포를

(i) 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날, 및

(ii)후보 화합물과 접촉시키고;

b) 세포로부터 회수된 정확하게 폴딩된 단백질의 수율을 대조군 세포와 비교하여 결정함을 포함하며, 여기에서 접촉된 세포 내의 정확하게 폴딩된 단백질의 수율 증가에 의해 망막색소변성증을 가진 대상의 치료에 유용한 화합물을 확인함을 특징으로 하여, 망막색소변성증을 가진 대상의 치료에 유용한 화합물을 확인하는 방법.
제94항 또는 제95항에 있어서, 11-시스-레티날이 11-시스-레티날의 7-환 고정 이성체인 방법.
제94항 또는 제95항에 있어서, 미스폴딩된 단백질이 돌연변이를 포함하는 방법.
제94항 또는 제95항에 있어서, 미스폴딩된 단백질이 옵신인 방법.
제98항에 있어서, 옵신이 P23H 돌연변이를 포함하는 방법.
대상에게 프로테아좀 저해제 또는 자가소화 저해제를 대상의 치료에 충분한 양으로 투여함을 포함하는, 단백질 입체구조 장애 (PCD)를 가진 대상의 치료 방법.
대상에게 프로테아좀 저해제 또는 자가소화 저해제를 대상의 치료에 충분한 양으로 투여함을 포함하는, 망막색소변성증을 가진 대상의 치료 방법.
제100항 또는 제101항에 있어서, 프로테아좀 저해제가 프로테아좀의 가역적 저해제인 방법.
제102항에 있어서, 가역적 프로테아좀 저해제가 MG132인 방법.
제100항 또는 제101항에 있어서, 자가소화 저해제가 3-메틸아데닌, 3-메틸 아데노신, 아데노신, 오카다산, N⁶-머캅토퓨린 리보사이드 (N⁶-MPR), 아미노티올화된 아데노신 유사체, 5-아미노-4-이미다졸 카르복사미드 리보사이드 (AICAR) 및 바필로마이신 A1으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
제104항에 있어서, 자가소화 저해제가 3-메틸아데닌인 방법.
a) 재조합 단백질을 발현하는 세포를 프로테아좀 저해제, 자가소화 저해제, 리소좀 저해제, ER로부터 골지로의 단백질 수송의 저해제, Hsp90 샤페론 저해제, 열 충격 반응 활성화제, 글리코시다아제 저해제 및 히스톤 데아세틸라제 저해제로 구성된 그룹으로부터 선택된 화합물과 접촉시키고;

b) 세포로부터 재조합 단백질을 분리하며, 여기에서 상기 방법은 생화학적 기능성 입체구조를 가진 재조합 단백질을 생산함을 포함하는, 생화학적 기능성 입체구조를 가진 재조합 단백질의 생산 방법.
제107항에 있어서, 단백질의 생물학적 활성의 측정을 추가로 포함하는 방법.
제107항에 있어서, 생물학적 활성을 효소 활성 조사에 의해 검출하는 방법.
제107항에 있어서, 생물학적 활성을 분광광도법으로 검출하는 방법.
제107항에 있어서, 세포를 11-시스-레티날과 접촉시킴을 추가로 포함하는 방법.
제107항에 있어서, 세포가 진핵세포인 방법.
제111항에 있어서, 세포가 효모 세포인 방법.
제111항에 있어서, 세포가 포유류 세포인 방법.