CN101528749B - 核苷磷酸化酶和水解酶的无环胺抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及通式(I)的化合物，它们是嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)和/或核苷水解酶(NH)的抑制剂。本发明还涉及这些化合物在治疗包括癌症、细菌感染、原生动物感染和T-细胞介导的疾病在内的疾病和感染中的应用，并涉及包含这些化合物的药物组合物。

Description

核苷磷酸化酶和水解酶的无环胺抑制剂
技术领域
本发明一般涉及某些核苷类似物，这些化合物作为药物的应用，包含该化合物的药物组合物，该化合物的制备方法，以及治疗需要抑制嘌呤核苷磷酸化酶和核苷水解酶的疾病或病症的方法。
背景技术
US 5,985,848，US 6,066,722和US 6,228,741公开了作为嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)和嘌呤磷酸核糖转移酶(PPRT)抑制剂的核苷类似物。这种类似物可用于治疗寄生虫感染、T-细胞恶性肿瘤、自身免疫疾病和炎性疾病。这些类似物还可在器官移植中用于免疫抑制。
US 6,693,193公开了制备某些PNP抑制剂化合物的方法。该申请识别作为PNP抑制剂的化合物并提出对制备这些物质的更简便方法的需要。US10/363,424也公开了作为PNP和PRT抑制剂的核苷类似物。
PNP催化例如鸟嘌呤和次黄嘌呤等核糖核苷和脱氧核糖核苷的磷酸裂解，以得到相应的糖-1-磷酸和鸟嘌呤、次黄嘌呤或其它嘌呤碱基。
缺失PNP的人会罹患特定的T-细胞免疫缺陷，这是由于dGTP的聚集会妨碍受激的T淋巴细胞的增殖。因此PNP抑制剂可抑制免疫，并可抵抗T-细胞恶性肿瘤和T-细胞增殖性疾病。
核苷水解酶(NH)催化核苷的水解。这些酶在哺乳动物中未发现但一些原生动物类寄生虫的核苷补救需要这种酶。一些原生动物寄生虫用核苷磷酸化酶来代替用于此目的的核苷水解酶，或除核苷水解酶外还利用核苷磷酸化酶。预计核苷水解酶和磷酸化酶的抑制剂可干扰寄生虫的代谢，因此可用于抗原生动物类寄生虫。
上述专利说明书中所述化合物的亚氨基糖部分具有位于C-1和C-4之间的氮原子，形成1，4-二脱氧-1，4-亚氨基-D-核糖醇化合物。核糖醇环中氮原子的位置可能是结合PNP和NH酶的关键。此外，糖部分与核苷碱基类似物之间的连接位置可能也是酶抑制活性的关键。上述化合物在糖环的C-1位置连接。
申请人也开发了其他核苷磷酸化酶，磷酸核糖转移酶和水解酶抑制剂，其中，糖环中氮原子的位置可变化，而且两个氮原子可形成糖环的一部分。也研究了糖部分与碱基类似物相连的其他方式，得到一类抑制剂，其中糖部分与核苷碱基类似物通过亚甲基桥键连接。这些另外的抑制剂在US 10/395,636中描述。
目前认为上述化合物的亚氨基糖环的三维结构是有效结合PNP和NH、从而抑制这些酶的关键。与酶相互作用时，环结构限制了重要的官能团如亚氨基氮和各种羟基所采取的空间位置。过去认为这些空间限制是化合物与酶活性位点相结合所必需的。没有这些空间限制，预计化合物将不能有效结合酶活性位点，因而不能有效抑制酶。
亚氨基糖环是有效酶抑制作用的重要因素这一观点得到了J.Biol.Chem，.2005，280，30320-30328的支持，该文献揭示了与人和镰状疟原虫(Plasmodiumfalciparum)PNP相互作用的过渡态类似物的研究。揭示了各种核苷类似物抗上述PNP的抑制活性。大部分类似物的结构包含亚氨基糖环。公开了两种化合物，其环是打开的，形成在氨基氮上的羟乙基和羟丙基取代基。
J.Med.Chem.，2006，49，6037-6045也揭示了多种PNP抑制剂化合物，其中一些化合物包含亚氨基糖环部分，一些化合物具有无环N-羟乙基氨基。认为具有PNP抑制活性的那些化合物仅具有适度效能(抑制常数在微摩尔或纳摩尔水平)。
虽然对结合PNP酶和抑制活性所需化合物的结构特征有一定的了解，但仍然难以确定地预测化合物是弱抑制剂还是强效抑制剂，或者甚至难以确定化合物是否是抑制剂，只有在合成了化合物并用合适的试验测定后才能够确定。上述J.Biol.Chem和J.Med.Chem公开中揭示的亚氨基糖环-开环化合物太少且结构不同，不能用作一般类型的PNP无环胺抑制剂的预测物。
现在申请人意外地发现，具有无环胺基团而不是亚氨基环的类似于上述化合物的某些化合物是人和镰状疟原虫PNP的有效抑制剂。
因此，本发明的目的之一是提供无环胺化合物，它是PNP或NH的抑制剂，或至少提供了一种有用的选择。
发明概述
因此，本发明的第一方面提供了式(I)的化合物或其互变异构体，或其药学上可接受的盐，或其酯前药形式：
式中，
R1是H或NR3R4；
R2是H或是烷基、烯基、炔基、芳烷基、芳烯基、芳炔基或芳基，它们各自任选地被一个或多个羟基、烷氧基、硫醇、烷硫基、芳硫基、芳烷硫基、卤素、羧酸、羧酸烷基酯(carboxylate alky ester)、硝基、或NR3R4基团取代，其中各烷硫基、芳硫基和芳烷硫基可任选地被一个或多个烷基、卤素、氨基、羟基或烷氧基取代；
前提是当R1是H时，R2是被至少一个NR3R4基团取代的烷基、烯基、炔基、芳烷基、芳烯基、芳炔基或芳基；
R3和R4相互独立地是H或是烷基、烯基、炔基、芳烷基、芳烯基、芳炔基或芳基，它们各自可任选地被一个或多个羟基、烷氧基、硫醇、烷硫基、芳硫基、芳烷硫基、卤素、羧酸、羧酸烷基酯、硝基或NR3R4基团取代，其中各烷硫基、芳硫基和芳烷硫基可任选地被一个或多个烷基、卤素、氨基、羟基或烷氧基取代；
A是N或CH；
B是OH或烷氧基；和
D是H、OH、NH2或SCH3；
前提是当R1是NR3R4，R2是H，A是CH，B是OH，D是H时，则在R4是羟乙基时R3不是羟乙基或羟丙基；和
前提是当R1是NR3R4，R2是H，A是CH，B是OH，D是NH2时，则在R4是H、甲基、乙基或羟乙基时R3不是羟乙基，在R3是H、甲基、乙基或羟乙基时R4不是羟乙基。
如果R1是H则R2优选是被至少一个NR3R4基团取代的烷基。
如果R3或R4是任选取代的烷基，则烷基优选是被一个或多个羟基取代。例如，R3或R4可以是羟甲基、羟乙基、羟丙基、二羟基丙基、羟丁基、二羟基丁基、三羟基丁基、羟戊基、二羟基戊基或三羟基戊基。
R3或R4还优选是被一个或多个羟基和/或一个或多个任选取代的硫醇、烷硫基、芳硫基或芳烷硫基取代的烷基。例如，R3或R4可以是甲硫基甲基、甲硫基乙基、甲硫基丙基、甲硫基羟基丙基、甲硫基二羟基丙基、甲硫基丁基、甲硫基羟基丁基、甲硫基二羟基丁基、甲硫基三羟基丁基、甲硫基戊基、甲硫基羟基戊基、甲硫基二羟基戊基、甲硫基三羟基戊基或甲硫基四羟基戊基。
当R1是NR3R4，R3和R4是H时，R2优选是任选取代的烷基，更优选任选取代的C1-C5烷基，例如羟甲基、羟乙基、羟丙基、二羟基丙基、羟丁基、二羟基丁基、三羟丁基、羟戊基、二羟基戊基、三羟基戊基、甲硫基甲基、甲硫基乙基、甲硫基丙基、甲硫基羟基丙基、甲硫基二羟基丙基、甲硫基丁基、甲硫基羟基丁基、甲硫基二羟基丁基、甲硫基三羟基丁基、甲硫基戊基、甲硫基羟基戊基、甲硫基二羟基戊基、甲硫基三羟基戊基或甲硫基四羟基戊基。
当R1是NR3R4，R3是H，R4是任选取代的烷基时，R2优选是H。
当R1是NR3R4，R3是H，R4是任选取代的烷基时，R2优选是任选取代的烷基，更优选任选取代的C1-C5烷基。
当R1是NR3R4，R3和R4各自是任选取代的烷基时，R2优选是H。
优选地，A是CH。或者，A可以是N。
也优选B是OH。
还优选D是H或NH2。或者，D可优选是OH或SCH3。
本发明优选的化合物包括：
外消旋(rac)-(2R，3S)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇；
7-(((2，4-二羟基丁基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(R)3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2-丙二醇盐酸盐；
(2R，3R)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇盐酸盐；
2-氨基-7-(2，3-二羟基-1-(2-羟乙基氨基)丙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(2，3-二羟基-1-(2-羟乙基氨基)丙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(1-氨基-2，3，5-三羟基戊基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(1-氨基-2，3，5-三羟基戊基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(4-氨基-2，3，5-三羟基戊基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(4-氨基-2，3，5-三羟基戊基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(1-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)-2-羟乙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(1-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)-2-羟乙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2，4-二羟基丁基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((2，4-二羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((2，4-二羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((3-羟基-2-(羟甲基)丙基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((3-羟基-2-(羟甲基)丙基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(3，4-二羟基-5-(甲硫基甲基)吡咯烷-2-基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(3，4-二羟基-5-(甲硫基甲基)吡咯烷-2-基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(2，3-二羟基-1-(2-(甲硫基)乙基氨基)丙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(2，3-二羟基-1-(2-(甲硫基)乙基氨基)丙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(1-氨基-2，3-二羟基-5-(甲硫基)戊基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(1-氨基-2，3-二羟基-5-(甲硫基)戊基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(2-羟基-1-(1-羟基-3-(甲硫基)丙-2-基氨基)乙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(2-羟基-1-(1-羟基-3-(甲硫基)丙-2-基氨基)乙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2-羟基-4-(甲硫基)丁基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2-羟基-4-(甲硫基)丁基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((2-羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((2-羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((3-羟基-2-(甲硫基甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((3-羟基-2-(甲硫基甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((3-羟基-2-(甲硫基甲基)丙基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((3-羟基-2-(甲硫基甲基)丙基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2R，3R)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2S，3S)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2R，3S)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2S，3R)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2R，3R)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2S，3S)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2R，3S)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2S，3R)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
5-氨基-3-(((2R，3R)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
5-氨基-3-(((2S，3S)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
5-氨基-3-(((2R，3S)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
5-氨基-3-(((2S，3R)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-((1，3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((1，3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
3-((1，3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-((4-羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((4-羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
3-((4-羟基丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-((2-羟乙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((2-羟乙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
3-((2-羟乙基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
3-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-(((3-羟基-2-(羟甲基)丙基)(甲基)-氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((3-羟基-2-(羟甲基)丙基)(甲基)-氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
3-(((1，3-二羟基丙-2-基)(甲基)氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
3-((1，3-二羟基丙-2-基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-(((3-羟基-2-(羟甲基)丙基)(甲基)-氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((3-羟基-2-(羟甲基)丙基)(甲基)-氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
3-(((1，3-二羟基丙-2-基)(甲基)氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-(((3-羟基-2-(羟甲基)丙基)(羟甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((3-羟基-2-(羟甲基)丙基)(羟甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
5-氨基-3-(((3-羟基-2-(羟甲基)丙基)(羟甲基)氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-((1，3-二羟基-2-(甲硫基甲基)丙-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((1，3-二羟基-2-(甲硫基甲基)丙-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
5-氨基-3-((1，3-二羟基-2-(甲硫基甲基)丙-2-基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-(((2R，3R)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2S，3S)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2R，3S)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2S，3R)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2R，3R)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2S，3S)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2R，3S)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2S，3R)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
5-氨基-3-(((2R，3R)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
5-氨基-3-(((2S，3S)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
5-氨基-3-(((2R，3S)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
5-氨基-3-(((2S，3R)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-((苄基((2R，3R)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((苄基((2S，3S)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((苄基((2R，3S)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((苄基((2S，3R)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((苄基((2R，3R)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((苄基((2S，3S)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((苄基((2R，3S)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((苄基((2S，3R)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(S)-7-(1-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)-2-羟乙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(R)-7-(1-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)-2-羟乙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(S)-2-氨基-7-(1-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)-2-羟乙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(R)-2-氨基-7-(1-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)-2-羟乙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(S)-3-(1-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)-2-羟乙基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
(R)-3-(1-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)-2-羟乙基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-(((2R，3R)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2S，3S)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2R，3S)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2S，3R)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2R，3R)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2S，3S)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2R，3S)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2S，3R)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(R)-7-((苄基(2，3-二羟丙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(S)-7-((苄基(2，3-二羟丙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(R)-2-氨基-7-((苄基(2，3-二羟丙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(S)-2-氨基-7-((苄基(2，3-二羟丙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(R)-3-((2，3-二羟丙基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
(S)-3-((2，3-二羟丙基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
(R)-7-(((2，3-二羟丙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(S)-7-(((2，3-二羟丙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(R)-2-氨基-7-(((2，3-二羟丙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(S)-2-氨基-7-(((2，3-二羟丙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(R)-3-(((2，3-二羟丙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
(S)-3-(((2，3-二羟丙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
(2R，3R)-7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(2S，3S)-7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(3R，3S)-7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(2S，3R)-7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(2R，3R)-2-氨基-7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(2S，3S)-2-氨基-7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(2R，3S)-2-氨基-7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(2S，3R)-2-氨基-7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
(2R，3R)-5-氨基-3-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
(2S，3S)-5-氨基-3-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
(2R，3S)-5-氨基-3-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
(2S，3R)-5-氨基-3-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-(((2R，3R)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2S，3S)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2R，3S)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2S，3R)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2R，3R)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2S，3S)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2R，3S)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2S，3R)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
3-(((2R，3R)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
3-(((2S，3S)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
3-(((2R，3S)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
3-(((2S，3R)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
3-(((2R，3R)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
3-(((2S，3S)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
3-(((2R，3S)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
3-(((2S，3R)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7(6H)-酮；
2-氨基-7-(((2R，3R)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2S，3S)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2R，3S)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-(((2S，3R)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2R，3R)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2S，3S)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-(((2R，3S)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；和
7-(((2S，3R)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮。
本发明优选的化合物也包括每一个上述鉴定的化合物，其中4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基部分(9-脱氮次黄嘌呤-9-基)或被2-氨基-7-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮-7-基(9-脱氮鸟嘌呤-9-基)部分或被(8-氮杂-9-脱氮次黄嘌呤-9-基)部分替代。
在本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，其包含有药物效量的式(I)的化合物。
再一方面，本发明提供了一种治疗需要抑制嘌呤核苷磷酸化酶或核苷水解酶的疾病或症状的方法，该方法包括给予需要治疗的患者药学有效量的式(I)的化合物。
所述疾病或症状包括癌症、细菌感染、原生动物感染和T-细胞介导的疾病或病症如银屑病、关节炎或移植排斥。
嘌呤核苷磷酸化酶优选是人嘌呤核苷磷酸化酶(Hs PNP)，但也可以是任何其他嘌呤核苷磷酸化酶，包括原生动物镰状疟原虫的嘌呤核苷磷酸化酶(PfPNP)。
在本发明的又一方面，提供了式(I)的化合物在制造用于治疗一种或多种所述疾病或病症的药物中的应用。
发明详述
定义
术语“烷基”表示最多具有30个碳原子的任何饱和烃基团，包括任何C1-C25、C1-C20、C1-C15、C1-C10或C1-C6烷基，旨在包括直链烷基和支链烷基。同一术语也适用于芳烷基基团的非芳族部分。烷基的例子包括：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-乙基丙基、正己基和1-甲基-2-乙基丙基。
术语“烯基”表示具有至少一个双键且最多具有30个碳原子的任何烃基团，包括任何C2-C25、C2-C20、C2-C15、C2-C10或C2-C6烯基，旨在包括直链烯基和支链烯基。同一术语也适用于芳烯基基团的非芳族部分。烯基的例子包括：乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、仲丁烯基、叔丁烯基、正戊烯基、1，1-二甲基丙烯基、1，2-二甲基丙烯基、2，2-二甲基丙烯基、1-乙基丙烯基、2-乙基丙烯基、正己烯基和1-甲基-2-乙基丙烯基。
术语“炔基”表示具有至少一个三键且最多具有30个碳原子的任何烃基团，包括任何C2-C25、C2-C20、C2-C15、C2-C10或C2-C6炔基，旨在包括直链炔基和支链炔基。同一术语也适用于芳炔基基团的非芳族部分。炔基的例子包括：乙炔基、正丙炔基、异丙炔基、正丁炔基、异丁炔基、仲丁炔基、叔丁炔基、正戊炔基、1，1-二甲基丙炔基、1，2-二甲基丙炔基、2，2-二甲基丙炔基、1-乙基丙炔基、2-乙基丙炔基、正己炔基和1-甲基-2-乙基丙炔基。
术语“芳基”表示具有4-18个碳原子的芳族基团，包括杂芳基基团。例子包括单环基团，以及稠合基团如双环基团和三环基团。一些例子包括：苯基、茚基、1-萘基、2-萘基、薁基、庚搭烯基(heptalenyl)、联苯基、二环戊二烯并苯基(indacenyl group)、苊基、芴基、非那烯基、菲基、蒽基、环戊环辛烯基(cyclopentacyclootenyl group)和苯并环辛烯基、吡啶基、吡咯基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三唑基、四唑基、苯并三唑基、吡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、中氮茚基、嘌呤基、吲唑基、呋喃基、吡喃基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、苯并噻唑基、噁唑基和异噁唑基。
术语“芳烷基”表示具有芳基取代基的烷基基团。
术语“烷氧基”表示氢被烷基取代的羟基。
术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。
术语“任选地取代”表示对于任选取代的基团，该基团可具有一个或多个选自下组的取代基：羟基、烷基、烷氧基、硫醇、任选取代的烷硫基、任选取代的芳硫基、任选取代的芳烷硫基、卤素、氨基、羧酸和羧酸烷基酯。
本文所用术语“前药”表示式(I)化合物的药学上可接受的衍生物，使得该衍生物在体内生物转化形成式(I)所定义的化合物。式(I)化合物的前药可通过对该化合物中存在的官能团改性来制备，这种改性能够在体内裂解形成母体化合物。
术语“药学上可接受的盐”适用于源自无机酸或有机酸的无毒盐，包括例如以下酸性盐：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐(hemisulfate)、庚酸盐、己酸盐、氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、帕莫酸盐(palmoate)、果胶酯酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐和十一烷酸盐。
术语“患者”包括人和除人以外的动物。
抑制剂化合物的描述
本发明的无环胺化合物出人意料地是PNP的强效抑制剂。基于对PNP酶以及亚氨基环化合物的酶抑制活性的具体了解，申请人不能预见到无环胺化合物是强效的PNP抑制剂。过去认为无空间约束的无环胺与亚氨基环不同，致使化合物的效能弱得多。然而，本发明的化合物证明出人意料地是强效的人PNP抑制剂。确实，一种本发明的化合物(化合物17.3)对人PNP的Ki *为8.5±0.6pM，该效能足以产生治疗效果，且可口服。最强效的“第三代”抑制剂，如母体DADMe-英谬素(Immucillin)-H和英谬素-H化合物与HsPNP结合的Kd值在皮摩尔范围内。HsPNP皮摩尔抑制剂的共同结构元素是仲N和三个羟基。预计无环单键键合氨基醇基团的几何柔性允许这三个羟基定位在催化位点，以匹配DADMe-英谬素-H和英谬素-H中发现的部分。
合成抑制剂化合物
本发明的化合物可通过多种不同的方法制备。下面是代表性的非限制性例子。
R1是NR3R4的化合物可以在如方案1所示的Mannich反应中通过胺NHR5R6(其中R5和R6可与R3和R4相同或是受保护形式)与醛(例如甲醛)和9-脱氮嘌呤(例如9-脱氮次黄嘌呤)反应来制备。需要时可在Mannich反应后脱保护。
Figure G2007800402949D00181
方案1
或者，可用反应试剂使醛与胺NHR5R6发生还原胺化(如方案2所示)，所述试剂例如但不限于，NaBH3CN或Na AcO3BH。随后可进行合适的脱保护步骤。合适地的受保护的醛是已知的(例如，J.Org.Chem.2004，69，2217-2220)。
Figure G2007800402949D00182
方案2
另一个例子如方案3所示。可用锂化的嘌呤衍生物处理羰基化合物，该羰基化合物中R7是任选取代的烷基或受保护形式，R8是H或任选取代的烷基或受保护形式(一些例子可参见J.Org.Chem.2004，69，2217-2220)。随后可进行标准脱氧步骤。
可通过许多方法制备上述胺NHR5R6。以下是代表性的非限制性例子。
·丁-2-烯-1，4-二醇与N-苄基羟胺衍生的硝酮和甲醛环加成(方案4)，然后锌还原得到胺，该胺可进一步官能化以提供本发明的化合物。
Figure G2007800402949D00191
方案4
·1，2，4-丁三醇转化形成2，4-O-苯亚甲基或1，2-O-异亚丙基衍生物(方案5)。然后这些化合物可转化为胺，通过活化伯羟基并置换和适当操纵保护基团可使胺进一步官能化形成本发明的化合物。
Figure G2007800402949D00192
方案5
·采用方案5所述的化学方法，化合物如(R)-或(S)-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲醇可转化为胺，然后胺再转化形成本发明的化合物。
·如方案6所示，丁-2-烯1，4-二醇可通过进行保护、环氧化和开环而形成胺前体，然后胺前体再转化为本发明的化合物。
·D-和L-酒石酸二乙酯可转化形成手性胺，如方案7所示(A.Breuning，R.Vicik和T.Schirmeister，Tetrahedron Asymm.，2003，14，3301和Z.Tang，Z.-H.Yang，X.-H.Chen，L.-F.Cun，A.-Q.Mi，Y.-Z.Jiang和L.-Z.Gong，J.Am.Chem.Soc.，2005，127，9285)，由此手性胺可衍生化得到其他有用的胺。
Figure G2007800402949D00201
方案7
·4，4-二甲基-3，5，8-三氧杂双环[5.1.0]辛烷与α-甲基苄胺的任一对映异构体反应(J.Org.Chem.1998，63，7582-7583)得到氨基醇的非对映异构体混合物(方案8)。所需非对映异构体水解后的结晶提供了得到对映异构体纯的氨基醇的路径。
Figure G2007800402949D00202
方案8
·可用氨处理各种保护的内酯和酯以得到酰胺醇，用氢化铝锂处理可使酰胺醇转化为相应的氨基醇(方案9)。
Figure G2007800402949D00203
方案9
一般方面
本发明的化合物可以以游离碱的形式和盐的形式使用。
应理解，本发明的化合物包括式(I)的所有光学异构体和立体异构体。
还应理解，式(I)化合物的代表(其中，B和/或D是羟基)是相应酰胺的烯醇型互变异构体的形式，这在酰胺形式中广泛存在。烯醇型互变异构体代表的使用简单地允许较少的结构通式来表示本发明的化合物。
所述活性化合物可通过各种途径施用于患者，包括口服、胃肠外、吸入喷雾、局部、结肠、鼻腔、含服施用或通过植入式储库施用。根据患者的状况和待治疗疾病的性质和程度，要施用的化合物的量是可变的。通常给成人的剂量小于1毫克至1000毫克，优选0.1-100毫克。任何特定患者的具体剂量取决于许多因素，包括患者年龄、体重、健康状况、性别等。
供口服施用时，所述化合物可被制成固体或液体制剂，例如片剂、胶囊剂、粉末剂、溶液剂、悬液剂和分散剂。这种制剂是本领域熟知的，其它口服剂型方案未在这里列出。当为片剂形式时，所述化合物可与常规的片剂基料如乳糖、蔗糖和玉米淀粉，以及粘合剂、崩解剂和润滑剂一起制片。所述粘合剂可以是，例如，玉米淀粉或明胶，所述崩解剂可以是马铃薯淀粉或藻酸，所述润滑剂可以是硬脂酸镁。当以胶囊形式口服施用时，可采用稀释剂如乳糖和干玉米淀粉。也可加入其它组分如着色剂、甜味剂或调味剂。
当口服应用需要水性混悬剂时，活性成分可与载体如水和乙醇混合并可使用乳化剂、助悬剂和/或表面活性剂。也可添加着色剂、甜味剂和调味剂。
所述化合物可与生理上可接受的稀释剂如水或盐水混合通过注射给药。所述稀释剂可含有一种或多种其它成分，如乙醇、丙二醇、油或药学上可接受的表面活性剂。
所述化合物也可局部施用。局部施用化合物的载体包括：矿物油、液状石蜡、白凡士林、丙二醇、聚环氧乙烷、聚环氧丙烷化合物、乳化蜡和水。化合物可以是用于皮肤或粘膜局部施用的洗剂或乳膏中的活性成分。所述乳膏可包含悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性化合物。合适的载体包括：矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苄基醇和水。
所述化合物还可通过持续释放体系的方式给予。例如，可将它们掺入缓释片或胶囊中。
实施例
以下实施例进一步阐述了本发明。但应该明确，本发明并不限于这些实施例。
一般方法
商业购得无水溶剂。空气敏感的反应在氩气下进行。有机溶液用MgSO4干燥，溶剂减压蒸发。色谱溶剂在使用前经过蒸馏。薄层色谱(t.l.c.)在用60 F254二氧化硅涂覆的玻璃板或铝板上进行。有机化合物在有机物紫外光下进行观察，或利用硫酸铈(IV)(0.2％，w/v)和钼酸铵(5％)的硫酸溶液(2M)浸渍进行观察，这是一种I2(0.2％)和KI(7％)的H2SO4(M)溶液或0.1％茚三酮的EtOH溶液。快速柱色谱是在Scharlau或Merck硅胶60(40-60μm)上进行。用Perkin-Elmer 241旋光计测定旋光度，路径长1dm，旋光度单位为10-1deg cm2 g-1；浓度g/100ml。用Bruker AC300E记录NMR谱。除非另有说明，300MHz的1H谱在CDCl3，CD3OD(内标Me4Si，δ0)或D2O(无内标)中测定，75.5MHz的13C谱在CDCl3(标准物，溶剂中线，δ77.4)，CD3OD(标准物，溶剂中线δ49.5)或D2O(无内标)中测定。用Waters Q-TOF Premier串联质谱仪测定正电子喷射质谱。
实施例1-合成外消旋-(2R，3S)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇
Figure G2007800402949D00221
实施例1.1-合成1，4-双甲氧基甲氧基-顺-2-丁烯
根据C.Saluzzo，A-M.La Spina，D.Picq，G.Alvernhe，D.Anker，D.Wolf和G.Haufe，Bull.Chim.Soc.Fr.，1994，131，831-843所述的方法制备此化合物。
实施例1.2-合成内消旋(meso)-2，3-二((甲氧基甲氧基)甲基)环氧乙烷
向实施例1.1的产物(3.66克，20.8毫摩尔)的搅拌的DCM(40毫升)溶液中分批加入间氯过苯甲酸(57％，7.55克，24.9毫摩尔)。将所得溶液在环境温度下搅拌16小时。蒸发反应混合物，使其分配在醚和饱和碳酸氢钠水溶液之间，醚层进行干燥(MgSO4)并浓缩。残留物通过快速硅胶色谱进行纯化，用17％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到无色油状物的标题化合物(1.88克，47％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)3.26(2H，m)，3.39(6H，s)，3.65(2H，m)，3.75(2H，dd，J 4.3，11.6Hz)，4.67(4H，ABq)。
实施例1.3-合成外消旋-(6R，7S)-7-叠氮基-2，4，9，11-四氧杂十二烷-6-醇
将实施例1.2的产物(1.88克，9.77毫摩尔)、氯化铵(1.83克，34.2毫摩尔)和叠氮化钠(2.22克，34.2毫摩尔)在二甲基甲酰胺(15毫升)中，在110℃加热5小时。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤(5×)，干燥(MgSO4)并蒸发。残留物通过快速硅胶色谱进行纯化，用2∶1的石油溶剂油∶乙酸乙酯洗脱，得到无色油状物的标题化合物(786毫克，34％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)2.77(1H，br s)，3.39(3H，s)，3.40(3H，s)，3.64(3H，m)，3.80(2H，m)，3.91(1H，m)，4.67(2H，m)，4.68(2H，m)；13C NMR(75MHz，CDCl3)55.9，62.8，68.1，70.1，70.8，97.1，97.5。
实施例1.4-合成(6RS，7SR)-7-氨基-2，4，9，11-四氧杂十二烷-6-醇
向实施例1.3产物(392毫克，1.67毫摩尔)的搅拌的四氢呋喃(10毫升)溶液中逐滴加入氢化铝锂(1.0M的醚中，3.33毫升)。将所得溶液在环境温度下搅拌1小时。反应混合物在碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间进行分配，蒸发水层。残留物用热乙酸乙酯(4x)研磨，蒸发溶液，产生无色油状物的标题化合物(261毫克，75％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)3.07(1H，m)，3.38(3H，s)，3.38(3H，s)，3.53(1H，dd，J 6.8，9.7Hz)，3.67(5H，m)，4.64(2H，s)，4.66(2H，s)；13C NMR(75MHz，CDCl3)52.7，55.7，55.7，70.7，70.9，70.9，97.1，97.3。
实施例1.5-合成(6RS，7SR)-7-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-2，4，9，11-四氧杂十二烷-6-醇
将实施例1.4的产物(151毫克，0.722毫摩尔)和醛(G.B.Evans等，J.Med.Chem.2005，48，4679-4689)(204毫克，0.601毫摩尔)从甲醇(10毫升)蒸发三次，然后加入甲醇(10毫升)、乙酸(5滴)和氰基硼氢化钠(76毫克，1.20毫摩尔)。所得溶液在环境温度下搅拌16小时，二氧化硅上蒸发。残留物通过快速硅胶色谱进行纯化，用95∶5的二氯甲烷∶甲醇(加1％三乙胺)洗脱，得到无色油状物的标题化合物(319毫克，100％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)1.69(9H，s)，2.93(1H，m)，3.35(3H，s)，3.36(3H，s)，3.62(2H，m)，3.75(3H，m)，3.98(1H，d，J Hz)，4.18(1H，d，JHz)，4.47(2H，s)，4.62(2H，s)，4.65(2H，s)，5.73(2H，s)，7.29(6H，m)，8.46(1H，s)。
实施例1.6-合成7-(((2RS，3SR)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
在-78℃，将实施例1.5的产物(104毫克，0.195毫摩尔)在DCM(10毫升)中进行搅拌，逐滴加入三溴化硼(1.0M在DCM中溶液，1.95毫升)。将反应液在-78℃搅拌45分钟，然后加入甲醇(10毫升)。蒸发溶剂，残留物用甲醇共蒸发(2x)。残留物在水和DCM之间分配，蒸发水层。残留物在甲醇氨溶液中搅拌10分钟，然后蒸发到二氧化硅上，通过快速硅胶色谱进行纯化，用5∶4.5∶0.5的DCM∶甲醇∶氨洗脱，得到白色固体的标题化合物(27毫克，52％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)2.76(1H，q，J 5.2Hz)，3.48(1H，dd，J 6.3，11.9Hz)，3.60(2H，m)，3.70(2H，m)，3.85(2H，ABq)，7.34(1H，s)，7.78(1H，s)；13C NMR(75MHz，CDCl3)40.2，59.8，59.8，63.5，71.2，113.1，117.5，129.2，142.4，143.5，155.4；m/z(ESI+)537(2MH+，20％)，269(MH+，100％)；HRMS(ESI+)C11H16N4O4理论值：269.1241，实测值：269.1250。产物化合物1.6是以下实施例17和18的对映异构体的1∶1混合物。
实施例2-合成7-(((2，4-二羟基丁基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
实施例2.1-合成4-羟甲基-2-苯基-1，3-二噁烷
在迪安-斯达克(Dean-Stark)装置中，将1，2，4-丁三醇(3.0克，28.3毫摩尔)和苯甲醛(11.48毫升，113毫摩尔)在无水甲苯(50毫升)中的混合物与对甲苯磺酸一水合物(0.269克，1.413毫摩尔)在回流下加热。约1小时后，溶液用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥，高真空下浓缩以去除大部分苯甲醛。色谱纯化得到浆状物的标题化合物(2.88克，14.83毫摩尔，产率52.5％)。NMR与报道(Tetrahedron Asymm.1996，7，3209-3246)类似。
实施例2.2-合成4-甲基氨基甲基-2-苯基-1，3-二噁烷
向4-羟甲基-2-苯基-1，3-二噁烷(0.80克，4.12毫摩尔)的二氯甲烷(20毫升)溶液中加入二异丙基乙胺(1.702毫升，10.30毫摩尔)，将该溶液在冰浴中冷却。加入甲磺酰氯(0.414毫升，5.35毫摩尔)，溶液升温至室温。1小时后，用2M HCl水溶液、饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥，浓缩至浆状物(1.15克)。将该物质(0.9克，3.30毫摩尔)在含40％甲胺水溶液(2.85毫升，33.0毫摩尔)的DMSO(8毫升)中的溶液塞住，并在约75-80℃加热24小时。溶液冷却，加入氯仿，用水洗涤两次，干燥并浓缩。色谱纯化得到浆状物的标题化合物(0.465克，2.24毫摩尔，68％)。1H NMR(CDCl3)δ7.50-7.47(2H，m)，7.39-7.30(3H，m)，5.52(1H，s)，4.31-4.25(1H，m)，4.09-3.93(2H，m)，2.80(1H，dd，J＝12.3，8.0Hz)，2.67(1H，dd，J＝12.3，3.4Hz)，2.45(3H，s)，1.96-1.83(2H，m)，1.49(1H，dd，J＝13.2，1.2Hz)；13CNMRδ139.0，129.2，128.6，126.5，101.6，76.8，67.2，57.0，36.8，29.5。
实施例2.3-合成7-((甲基((2-苯基-1，3-二噁烷-4-基)甲基)氨基)-甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
对4-甲基氨基甲基-2-苯基-1，3-二噁烷(0.368克，1.775毫摩尔)、9-脱氮次黄嘌呤(0.288克，2.131毫摩尔)、乙酸(0.508毫升，8.88毫摩尔)和37％甲醛水溶液(0.264毫升，3.55毫摩尔)在二噁烷(10毫升)中的混合物搅拌并在具塞子的烧瓶中在80℃进行加热。加入更多37％甲醛水溶液(0.132毫升，1.775毫摩尔)，将具塞子的烧瓶再次在80℃加热约24小时。溶液浓缩至干，色谱(10％ 7MNH3/MeOH在CH2Cl2中)分离极性较低的副产物，但产物和脱氮次黄嘌呤一起洗脱。该物质的色谱纯化先用CHCl3/EtOAc/MeOH 5∶2∶1洗脱，再用4∶2∶3洗脱，然后是20％ 7M NH3/MeOH洗脱，得到白色固体的标题化合物(0.406克，1.146毫摩尔，产率64.5％)。1H NMR(CDCl3/CD3OD)δ7.84((1H，s)，7.48-7.45(2H，m)，7.39(1H，s)，7.37-7.28(3H，m)，5.56(1H，s)，4.30-4.11(2H，m)，4.02(1H，dt，J＝11.9，2.5Hz)，3.91和3.83(1H each，d，J＝13.8Hz)，2.73(1H，dd，J＝13.5，7.5Hz)，2.57(1H，dd，J＝13.5，3.4Hz)，2.39(3H，s)，1.74(ddd，J＝12.5，4.9Hz)，1.53(1H，d，J＝12.4Hz)；13C NMRδ156.8，146.2，143.2，140.6，130.6，130.5，129.8，128.0，119.7，113.9，103.0，77.4，68.7，62.5，52.0，44.3，31.5。
实施例2.4-合成7-(((2，4-二羟基丁基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将9-脱氮-9-{[(甲基(2-苯基-1，3-二噁烷-4-基)甲基)氨基]甲基}-次黄嘌呤(0.070克，0.198毫摩尔)的甲醇(2毫升)溶液和浓盐酸溶液(2毫升)在室温下静置。约2小时后，用水稀释，用氯仿萃取(×2)，然后将水相浓缩至干。色谱纯化(CH2Cl2/MeOH/NH3水 5∶4∶1)得到白色固体的7-(((2，4-二羟基丁基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(0.040克，0.150毫摩尔，产率76％)。1HNMR(D2O)δ8.00(1H，s)，7.71(1H，s)，4.51(1H，d，J＝13.9Hz)，4.44(1H，d，J＝14.0Hz)，4.19(1H，br s)，3.68(2H，t，J＝6.4Hz)，3.17(2H，br s)，2.86(3H，s)，1.71-1.61(2H，m)；13C NMRδ155.3，144.6，143.4，132.4，118.2，104.2，72.0，63.1，60.0，58.0，36.8。
实施例3- 合成(R)-7-((2，3-二羟丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
Figure G2007800402949D00271
实施例3.1-合成(S)-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲磺酸甲酯
通过已知文献方法(H.S.Kim，D.Barak，T.K.Harden，J.L.Boyer和K.A.Jacobson，J.Med.Chem.，2001，44，3092)，由(R)-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲醇(西格玛-阿尔得里奇(Sigma-Aldrich)，99％ee)制备标题化合物。1HNMR(CDCl3，300MHz)，δppm，4.37(m，1H)，4.23(d，2H，J 5.3Hz)，4.11(dd，1H，J 8.7，6.5Hz)，3.83(dd，1H，J 8.7，5.4Hz)，3.07(s，3H)，1.45(s，3H)，1.37(s，3H)。13CNMR(CDCl3，75.5MHz)，δppm，110.2，73.2，69.2，65.8，37.6，31.5，26.6，25.1。[α]D 25+3.1(c，0.72，CHCl3)。
实施例3.2-合成(R)-N-苄基-1-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲胺
根据制备(S)-对映异构体(M.Lemaire，F.Posada，J.-G.Gourcy和G.Jeminet，Synlett，1995，627)所述的相同方法，制备标题化合物。将(S)-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲磺酸甲酯(3.0克，14.27毫摩尔)和苄胺(6.23毫升，57.1毫摩尔)的溶液在CH3CN(38毫升)中一起回流48小时。Tlc(EtOAc-己烷8∶2)显示新产物(uv/钼酸盐或茚三酮)，其Rf约为0.3，具有少量较高流动的原料(alittle higher running sm)。蒸发溶剂，残留物溶解在EtOAc中，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥，蒸发溶剂。残留物进行色谱纯化(EtOAc-己烷，6∶4，然后8∶2)，得到黄色油状物的(R)-N-苄基-1-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲胺(2.56克，11.57毫摩尔，81％产率)。[α]D 21-3.7(c，0.885，CHCl3)。1H NMR(CDCl3，300MHz)，δppm，7.32-7.20(m，5H)，4.25，(m，1H)，4.03(dd，1H，J 8.0，6.4Hz)，3.82(s，2H)，3.68(dd，1H，J 8.0，6.8Hz)，2.74(d，2H，J 5.7Hz)，1.40(s，3H)，1.35(s，3H)。13CNMR(CDCl3，75.5MHz)，δppm，140.6，128.8，128.4，127.3，109.5，75.8，67.9，54.4，52.1，27.3，25.8。
实施例3.3-(R)-N-苄基-1-(5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)-N-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)甲胺
向(R)-N-苄基-1-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲胺(0.372克，1.682毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(carbaldehyde)(0.5克，1.682毫摩尔)在1，2-二氯乙烷(30毫升)的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.463克，2.186毫摩尔)和无水MgSO4(1g)。将该混合物搅拌6小时。Tlc(EtOAc-己烷，8∶2)显示反应基本完成。用CH2Cl2稀释后，混合物用饱和NaHCO3水溶液、盐水洗涤，干燥，蒸发溶剂。残留物进行色谱纯化(EtOAc-己烷，1∶1，紫外和钼酸盐)，得到无色胶状物的(R)-N-苄基-1-(5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)-N-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)甲胺(0.631克，1.255毫摩尔，74.7％产率)。[α]D 21-21.9(c，0.905，MeOH)。1H NMR(CDCl3，300MHz)，δppm，8.55(s，1H)，7.41(s，1H)，7.37-7.18(m，10H)，5.73(s，2H)，4.46(s，2H)，4.38-4.29(m，1H)，4.10，(s，3H)，4.05-3.98(m，2H)，3.79(d，1H，J 13.9Hz)，3.63(d，1H，J 13.9Hz)，3.53，(t，1H，J 7.9Hz)，2.73(dd，1H，J 13.3，5.9Hz)，2.64(dd，1H，J 13.3，5.9Hz)，1.32(s，6H)。13C NMR(CDCl3，75.5MHz)，δppm，156.2(C)，150.7(C)，150.0(CH)，139.6(C)，136.9(C)，132.2(CH)，128.8(CH)，128.4(CH)，128.2(CH)，128.0(CH)，127.7(CH)，126.9(CH)，115.7(C)，114.7(C)，109.0(C)，77.0(CH2)，74.7(CH2)，70.1(CH2)，68.4(CH2)，59.2(CH2)，56.2(CH2)53.5(CH3)，47.8(CH2)，26.8(CH3)，25.6(CH3)。+ESMS实测值：503.2643(M+H)+C29H35N4O4理论值：503.2658。
实施例3.4-(R)-7-((苄基(2，3-二羟丙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将(R)-N-苄基-1-(5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)-N-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)甲胺(0.6克，1.194毫摩尔)在HCl(15毫升，37％)中加热至100℃保持3小时。Tlc(CH2Cl2-6M NH3的MeOH溶液，9∶1)表明反应完全。蒸发溶剂，残留物溶解在MeOH中，用Amberlyst A21树脂中和，过滤，蒸发溶剂。残留物进行色谱纯化(CH2Cl2-6M NH3的MeOH溶液，9∶1，然后85∶15)，得到无色固体的(R)-3-(苄基((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)氨基)-1，2-丙二醇(0.36克，1.096毫摩尔，产率92％)。[α]D 22+13.0(c 0.715，MeOH)。1H NMR(CD3OD，300MHz)，δppm，7.90(s，1H)，7.37(s，1H)，7.31-7.16(m，5H)，3.97-3.78(m，3H)，3.69(d，1H，J 13.8Hz)，3.63(d，1H，J 13.8Hz)，3.50(dd，1H，J 11.2，4.8Hz)，3.42(dd，1H，J 11.2，5.7Hz)，2.60(d，2H，J6.4Hz)。13C NMR(CD3OD，75.5MHz)，δppm，156.1(C)，145.5(C)，142.5(CH)，140.2(C)，130.2(CH)，129.4(CH)，129.2(CH)，128.1(CH)，119.3(C)，115.0(C)，70.6(CH)，66.3(CH2)，60.0(CH2)，57.6(CH2)，49.0(CH2)。+ESMS实测值：329.1600C17H21N4O3(M+H)+理论值：329.1614。
实施例3.5-(R)-7-((2，3-二羟丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
(R)-3-(苄基((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)氨基)-1，2-丙二醇(0.1克，0.305毫摩尔)溶解在热水(20毫升)中，冷却至室温，加入10％Pd-C(50毫克)。由气囊加入氢气，混合物在室温下搅拌。4小时后，tlc(CH2Cl2-MeOH-cNH3，5∶4.5∶0.5)显示反应完全。用氩气代替氢气，混合物加热至80℃以确保产物在溶液中，然后使混合物过滤通过硅藻土(celite)，蒸发溶剂，得到无色固体的(R)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2-丙二醇(0.072克，99％)。用5％ HCl使产物转化为盐酸盐。1H NMR(D2O+DCl，300MHz)，δppm，9.07(s，1H)，7.91(s，1H)，4.53(s，2H)，4.06(m，1H)，3.69-3.57(m，2H)，3.33(dd，1H，J12.9，2.9Hz)，3.17(dd，1H，J 12.9，9.8Hz)。13C NMR(D2O+DCl，75.5MHz)，δppm，153.8(C)，146.1(CH)，134.1(C)，133.1(CH)，119.6(C)，104.1(C)，68.5(CH)，64.5(CH2)，50.2(CH2)，41.8(CH2)。[α]D 18+12.6(c，0.565，H2O)。+ESMS实测值：261.0952(M+Na)+C10H14N4O3Na理论值：261.0964。
实施例4-合成7-(((2R，3R)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
Figure G2007800402949D00301
实施例4.1-合成(2S，3R)-2-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-3-羟基琥珀酸二乙酯
将三乙酰氧基硼氢化钠(0.545克，2.57毫摩尔)加入(2S，3R)-2-氨基-3-羟基琥珀酸二乙酯(0.406克，1.978毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.588克，1.978毫摩尔)的1，2-二氯乙烷(30毫升)溶液中，(2S，3R)-2-氨基-3-羟基琥珀酸二乙酯根据已知方法(A.Breuning，R.Vicik和T.Schirmeister，Tetrahedron Asymm.，2003，14，3301和Z.Tang，Z.-H.Yang，X.-H.Chen，L.-F.Cun，A.-Q.Mi，Y.-Z.Jiang和L.-Z.Gong，J.Am.Chem.Soc.，2005，127，9285)由L-酒石酸二乙酯制备，将该混合物在室温下搅拌1小时。Tlc(EtOAc)显示所有胺消失(茚三酮)，但仍然存在一些醛及它们之间的新的主产物。加入更多(2S，3R)-2-氨基-3-羟基琥珀酸二乙酯(121毫克)。混合物再搅拌3消失，然后用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥并蒸发。残留物经色谱纯化(EtOAc-己烷，9∶1，然后是EtOAc)，得到淡黄色胶状物的(2S，3R)-2-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-3-羟基琥珀酸二乙酯(0.668克，1.373毫摩尔，产率69.4％)。[α]D 21-5.9(c 0.54，EtOH)。1H NMR(CDCl3，300MHz)，δppm，8.55(s，1H)，7.34(s，1H)，7.33-7.23(m，5H)，5.70(s，2H)，4.62(d，1H，J 3.4Hz)，4.48(s，2H)，4.23-4.15(m，5H)，4.10(s，3H)，3.99(d，1H，J 13.8Hz)，3.85(d，1H，J 3.3Hz)，2.25(br.s，2H，交换至D2O)，1.26(t，3H，J 7.1Hz)，1.25(t，3H，J 7.1Hz)。13C NMR(CDCl3，75.5MHz)，δppm，171.9(C)，171.1(C)，156.2(C)，150.0(CH)，149.8(C)，136.9(C)，130.9(CH)，128.4(CH)，127.9(CH)，127.6(CH)，116.1(C)，77.0(CH2)，72.0(CH)，70.2(CH2)，63.8(CH)，61.4(CH2)，61.3(CH2)，53.5(CH3)，42.6(CH2)，14.1(CH3)。+ESMS实测值：487.2174(M+H)+C24H31N4O7理论值：487.2193。
实施例4.2-合成(2R，3R)-3-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇
向(2S，3R)-2-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-3-羟基琥珀酸二乙酯(0.6克，1.233毫摩尔)在THF(10毫升)和甲醇(0.499毫升，12.33毫摩尔)的回流溶液中，在约1小时内分批加入硼氢化锂(0.134克，6.17毫摩尔)。Tlc(CH2Cl2-MeOH-cNH3，9∶1∶0.1)仍显示(紫外，茚三酮或钼酸盐)原料(sm)。加入更多MeOH(0.5毫升)，约1小时内加入少部分的LiBH4(总量约134毫克)直到显示反应完全。蒸发溶剂，残留物经色谱纯化(CH2Cl2-MeOH-cNH3，95∶5∶0.5，然后是85∶15∶0.5)，得到立即结晶的无色胶状物(214毫克，41％)。该胶状物的纯度足以进行下一步骤，但少量通过以下过程进行重结晶：将一部分粗品(2R，3R)-3-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇溶解在MeOH中，蒸发溶剂得到可流动的胶状物(mobile gum)。将该胶状物溶解在热乙酸乙酯中，冷却至室温，加入晶种。滤出无色固体，干燥后得到在显微镜下观察非常细小的结晶簇。熔点：108-109℃。[α]D 18-6.1(c 0.59，MeOH)。1H NMR(CD3OD，300MHz)，δppm，8.42(s，1H)，7.64(s，1H)，7.28-7.16(m，5H)，5.75(s，2H)，4.50(s，2H)，4.10(s，3H)，3.83-3.68(m，3H)，3.63(d，2H，J 5.5Hz)，3.31(五重峰(pentet)，1H，J 1.6Hz)。13CNMR(CD3OD，75.5MHz)，δppm，158.0(C)，150.8(CH)，150.7(C)，138.8(C)，134.2(CH)，129.3(CH)，128.8(CH)，128.6(CH)，117.0(C)，116.1(C)，78.5(CH2)，72.1(CH)，71.5(CH2)，65.6(CH2)，62.3(CH)，61.0(CH2)，54.3(CH3)，41.6(CH2)。+ESMS实测值：403.1980(M+H)+C20H27N4O5理论值：403.1981。
实施例4.3-合成7-(((2R，3R)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
将(2R，3R)-3-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇(0.1克，0.248毫摩尔)在HCl(4毫升，37％)中回流条件下加热2小时。Tlc(CH2Cl2-MeOH-cNH3，5∶4.5∶0.5)显示反应完全。蒸发溶剂，残留物溶解在MeOH中，用Amberlyst A21树脂中和。过滤混合物，蒸发溶剂，残留物经色谱纯化(CH2Cl2-MeOH-cNH3，7∶3∶0.3，然后是5∶4.5∶0.5)，得到无色固体的产物的游离碱形式，用5％HCl使其转化为无色固体的7-(((2R，3R)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐(0.055克，0.180毫摩尔，72.6％产率)。[α]D 22+15.4(c 0.56，H2O)。1H NMR(D2O，300MHz)，δppm，8.82(s，1H)，7.87(s，1H)，4.61(s，2H)，4.19(m，1H)，4.06-3.89(m，2H)，3.72(d，2H，J5.6Hz)，3.56(m，1H)。13C NMR(D2O，75.5MHz)，δppm，154.4(C)，145.6(CH)，136.0(C)，133.6(CH)，119.4(C)，104.9(C)，69.4(CH)，63.4(CH2)，61.4(CH)，58.0(CH2)，40.4(CH2)。+ESMS实测值：269.1252(M+H)+C11H17N4O4理论值：269.1250-游离碱。
实施例5-(S)-7-((2，3-二羟丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
Figure G2007800402949D00331
实施例5.1-(R)-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲磺酸甲酯
通过已知的文献方法(H.S.Kim，D.Barak，T.K.Harden，J.L.Boyer和K.A.Jacobson，J.Med.Chem.，2001，44，3092)，由(S)-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲醇(西格玛-阿尔得里奇，99％ee)制备标题化合物。[α]D 21-3.1(c，0.83，CHCl3)。1H NMR和13C NMR与化合物3.1的相同。
实施例5.2-(S)-N-苄基-1-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲胺
根据M.Lemaire，F.Posada，J.-G.Gourcy和G.Jeminet，Synlett，1995，627所述相同的方法，制备标题化合物。将(R)-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲磺酸甲酯(3.9克，18.55毫摩尔)和苄胺(8.10毫升，74.2毫摩尔)在CH3CN(50毫升)中的溶液回流48小时。蒸发溶剂，残留物溶解在EtOAc中，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥，蒸发溶剂。残留物经色谱纯化(EtOAc-己烷，6∶4，然后是8∶2)，得到黄色油状物的(S)-N-苄基-1-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲胺(3.1克，14.01毫摩尔，产率76％)。[α]D 21+4.3(c，0.69，CHCl3)。1H NMR和13C NMR与化合物3.2的相同。
实施例5.3-(S)-N-苄基-1-(5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)-N-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)甲胺
向(S)-N-苄基-1-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲胺(0.670克，3.03毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.9克，3.03毫摩尔)在1，2-二氯乙烷(30毫升)的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.834克，3.94毫摩尔)和无水MgSO4(2克)。将该混合物搅拌5小时。用CH2Cl2稀释后，混合物用饱和NaHCO3水溶液、盐水洗涤，干燥，蒸发溶剂。残留物经色谱纯化(EtOAc-己烷，1∶1，紫外和钼酸盐)，得到淡黄色胶状物的(S)-N-苄基-1-(5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)-N-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)-甲胺(1.18克，2.34毫摩尔，产率78％)。[α]D 21+21.6(c，0.92，MeOH)。1H NMR和13C NMR与化合物3的相同。+ESMS实测值：503.2635(M+H)+C29H35N4O4理论值：503.2658。
实施例5.4-(S)-7-((苄基(2，3-二羟丙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将(S)-N-苄基-1-(5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)-N-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)甲胺(1.1克，2.189毫摩尔)在HCl(15毫升，37％)中加热至100℃保持3小时。Tlc(CH2Cl2-6M NH3的MeOH溶液，9∶1)显示反应完全。蒸发溶剂，残留物溶解在MeOH中，用Amberlyst A21树脂中和，过滤，蒸发溶剂。残留物经色谱纯化(CH2Cl2-6M NH3的MeOH溶液，9∶1，然后是85∶15)，得到无色固体的(S)-3-(苄基((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)氨基)-1，2-丙二醇(0.427克，1.3毫摩尔，59.4％产率)。[α]D 20-12.7(c 0.715，MeOH)。1H NMR和13C NMR与化合物3.4的相同。+ESMS实测值：329.1618C17H21N4O3(M+H)+ 理论值：329.1614。
实施例5.5-(S)-7-((2，3-二羟丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
将(S)-3-(苄基((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)氨基)-1，2-丙二醇(0.1克，0.305毫摩尔)溶解在MeOH(10毫升)中，用水(10毫升)稀释，加入10％Pd-C(50毫克)。由气囊加入H2，将混合物搅拌45分钟。用氩气代替氢气，混合物通过硅藻土过滤。用热水分批萃取硅藻土滤液，将合并的滤液蒸发成固体(53毫克)。该固体在硅胶上经色谱纯化(CH2Cl2-MeOH-cNH3，5∶4.5∶0.5)，得到无色固体的游离碱形式的产物。用5％HCl使该产物转化为其盐酸盐，为无色泡沫状，由MeOH结晶得到(S)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2-丙二醇盐酸盐(35毫克，41.8％)。熔点：241-242℃。[α]D 20-12.9(c，0.535，H2O)。1H NMR和13C NMR与化合物3.5的相同。+ESMS实测值：239.1136(M+H)+C10H15N43N理论值：239.1144。
实施例6-合成7-((1，3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00351
实施例6.1-合成2-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇
将氰基硼氢化钠加入5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(50毫克，168微摩尔)和2-氨基-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇(20.37毫克，168微摩尔)在甲醇(5毫升)的悬浮液中，室温下搅拌过夜。粗品反应液吸收到二氧化硅上，用20％MeOH/EtOAc洗脱，得到浆状物的2-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇(24毫克，59.6微摩尔，35.5％产率)。1H NMR(d4-MeOH)8.42(s，1H)，7.65(s，1H)，7.23(m，5H)，5.74(s，2H)，4.51(s，2H)，4.11(s，3H)，4.04(s，2H)，3.68(s，6H)。13C NMR(d4-MeOH)158.4，151.2，150.9，139.1，134.4，129.7，129.2，129.0，117.5，116.4，78.9，71.9，62.9，62.6，54.8，36.6。
实施例6.2-合成2-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇
将三溴化硼(1毫升，1.0毫摩尔)逐滴加入2-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇(30毫克，74.5微摩尔)的二氯甲烷(5毫升)溶液中，室温下进行搅拌。1小时后由反应液沉淀出白色固体，然后用甲醇使反应猝灭，真空浓缩，用甲醇(3×25毫升)共蒸馏，得到粗品残留物。残留物溶解在甲醇中，用二氧化硅吸收，经色谱纯化，用5∶4.5∶0.5DCM∶MeOH∶NH4OH洗脱得到白色固体的2-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇(7毫克，26.1微摩尔，产率35.0％)，将该固体转化为盐酸盐以便进行NMR分析。熔点：223-224℃(由EtOH的板(plates fromEtOH))。1H NMR(D2O，参考在2.225ppm的内标丙酮)δ9.06，(s，1H)，7.92(s，1H)，4.59(s，2H)，3.91(s，6H)。13NMR(D2O，参考在δ31.5的内标丙酮)δ153.7，146.0，134.2，133.0，119.4，104.7，67.6，59.3，36.4。+ESMS实测值：269.1263(M+H)+C11H17N4O4理论值：269.1250。
实施例7-合成3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-丁醇和-乙醇
Figure G2007800402949D00361
实施例7.1-合成7-((苄基(4-羟基丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
对3-(苄胺)丁醇(172毫克，0.96毫摩尔)、9-脱氮次黄嘌呤(100毫克，0.74毫摩尔)和37％甲醛水溶液(72微升，0.96毫摩尔)在水(5毫升)中的混合物搅拌，并在具塞的烧瓶中85℃加热过夜。将溶液蒸发至干，残留物在二氧化硅上经色谱纯化(DCM-MeOH 9∶1到8∶2)，得到白色固体的7-((苄基(4-羟基丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(130毫克，0.40毫摩尔，55％产率)。1HNMR(300MHz，CD3OD+DCl)1.50(2H，m)，1.93(2H，m)，3.20(2H，q，J 7Hz)，3.55(2H，t，J 6Hz)，4.50(1H，d，J 13Hz)，4.62(1H，d，J 13Hz)，4.72(1H，d，J 14.1Hz)，4.79(1H，d，J 14.1Hz)，7.45(3H，m)，7.63(2H，m)，8.00(1H，s)，9.10(1H，s)；13C NMR(75MHz，CD3OD+DCl)22.2，30.8，50.0，53.6，58.2，62.3，100.2，103.7，120.4，130.7，131.4，132.7，133.5，134.5，147.1，153.0。
实施例7.2-合成7-((4-羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
向在异丙醇(3毫升)中的7-((苄基(4-羟基丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(230毫克，0.70毫摩尔)中加入10％Pd-C(50毫克)。混合物在1个大气压H2下50℃搅拌过夜。然后将溶液在硅藻土滤垫上过滤，用MeOH(10毫升)洗涤滤垫。滤液蒸发至干，残留物在二氧化硅上经色谱纯化(DCM-MeOH 8∶2+1％ cNH3)，得到白色固体的7-(((4-羟基丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(133毫克，0.56毫摩尔，80％产率)。1H NMR(300MHz，CD3OD+DCl)1.64(2H，m)，1.87(2H，m)，3.19(2H，t，J 7.6Hz)，3.63(2H，t，J 5.9Hz)，4.48(2H，s)，7.87(1H，s)，9.05(1H，s)；13C NMR(75MHz，CD3OD+DCl)24.7，30.7，30.9，42.1，62.5，105.6，120.2，133.4，133.8，146.8，153.3。
实施例7.3-合成7-((2-羟乙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
对乙醇胺(78微升，0.96毫摩尔)、9-脱氮次黄嘌呤(100毫克，0.74毫摩尔)和37％甲醛水溶液(72微升，0.96毫摩尔)在水(5毫升)中的混合物搅拌，并在具塞的烧瓶中85℃加热过夜。将该溶液蒸发至干，残留物在二氧化硅上经色谱纯化(DCM-MeOH-cNH3 6∶3.5∶0.5)，得到淡褐色固体的7-((2-羟乙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(100毫克，0.48毫摩尔，65％产率)。1H NMR(300MHz，CD3OD)2.80(2H，t，J 5.5Hz)，3.68(2H，t，J 5.5Hz)，3.97(2H，s)，7.42(1H，s)，7.88(1H，s)；13C NMR(75MHz，MeOD+DCl)42.0，50.7，58.43，105.2，120.5，133.8，135.0，147.1，153.0。
实施例8-合成7-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00381
实施例8.1-合成N-苄基(2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲胺
对(2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲磺酸甲酯(1.70克，7.58毫摩尔)的苄胺(10毫升，92毫摩尔)溶液在80℃搅拌，并用TLC监测反应。2小时后反应完全，然后真空浓缩。残留物用甲苯(含少量乙酸乙酯)稀释，用水洗涤，干燥，真空浓缩。二氧化硅上柱色谱纯化，用乙酸乙酯洗脱得到黄色油状物的N-苄基(2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲胺(1.51克，产率85％)。13C NMR(CD3OD)δ140.8，129.4(2XCH)，128.1，99.3，64.0(2XCH2)，54.7，33.7，25.6，23.0。
实施例8.2-合成7-((苄基((2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将乙酸(0.122毫升，2125微摩尔)逐滴加入N-苄基(2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲胺(100毫克，425微摩尔)的1，4-二噁烷(2毫升，2.34E+04微摩尔)溶液中，然后加入3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(115毫克，850微摩尔)。将所得悬浮液加热至95℃(浴温度)并在该温度保持过夜。将反应冷却至环境温度。在二氧化硅上经柱色谱纯化，用5％7N NH3/MeOH洗脱，推测得到7-((苄基((2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(56毫克，146微摩尔，产率34.5％)，该物质无需进一步表征即可用于下一步骤。
实施例8.3-合成7-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将HCl加入7-((苄基((2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(50毫克，131微摩尔)的甲醇(2毫升)搅拌溶液中。0.5小时后，真空浓缩反应液，用甲醇共蒸馏。将粗品反应液以甲醇溶液的形式吸收到硅胶上，在硅胶上进行色谱纯化，用20％ 7N NH3/MeOH洗脱，推测得到白色固体的7-(((2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(19毫克，42.4％产率)，该物质无需进一步表征即可用于下一步骤。将7-(((2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(19毫克，55.5微摩尔)和10％碳载钯(56毫克，526微摩尔)的水(2毫升，1.11E+05微摩尔)溶液在氢气氛下(0.101毫克，50.2微摩尔)搅拌72小时。反应液通过西莱特滤器(Celite)过滤，滤液真空浓缩，得到粗品残留物，残留物在硅胶上经色谱纯化，用5∶4.5∶0.5的DCM∶MeOH∶NH4OH洗脱，得到白色固体的7-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐(4毫克，27.6％产率)。13C NMR(D2O)δ152.6，145.0，133.2，131.7，118.4，102.8，60.8(2XCH2)，47.6，41.1，39.8。
实施例9-合成7-(((3-羟基-2-(羟甲基)丙基)(甲基)-氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00392
实施例9.1-合成(2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)-N-甲基甲胺
将甲胺溶液(3毫升，34.8毫摩尔)加入(2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲磺酸甲酯(0.9克，4.01毫摩尔，根据B.Xu等，J.Med.Chem.2002，45，5694所述制备)的DMSO(7毫升)溶液中，75℃搅拌过夜。反应液用CHCl3稀释，用水洗涤(×2)，干燥，真空浓缩，得到约670毫克粗产物。粗产物在硅胶上经色谱纯化，用DCM，20％MeOH/DCM和20％7N NH3的MeOH/DCM溶液洗脱，得到油状残留物的(2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)-N-甲基甲胺(330毫克，产率52％)。13CNMR(CD3OD)δ99.7，64.4(2XCH2)，52.3，36.9，36.0，26.0，23.5。
实施例9.2-合成7-((((2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲基)(甲基)-氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将乙酸(0.180毫升，3140微摩尔)逐滴加入(2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)-N-甲基甲胺(100毫克，628微摩尔)的1，4-二噁烷(2毫升，2.34E+04微摩尔)溶液中，然后加入3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(170毫克，1256微摩尔)。将所得悬浮液加热至95℃(浴温度)并在该温度下保持过夜。用二氧化硅吸收后，用10％7NNH3的MeOH/DCM溶液洗脱进行色谱纯化，得到一种主产物，推测是7-((苄基((2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(120毫克，产率62％)。该物质无需进一步表征即可用于下一步骤。
实施例9.3-合成7-(((3-羟基-2-(羟甲基)丙基)(甲基)-氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将30％盐酸(10.00微升，326微摩尔)加入7-((((2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(100毫克，326微摩尔)的甲醇(13.21微升，326微摩尔)溶液中，将所得反应液静置30分钟。反应液真空浓缩，得到固体。固体重新溶解在甲醇中，用二氧化硅吸收。用20％7N NH3的MeOH溶液洗脱进行色谱纯化，产生固体的标题化合物(80毫克，产率92％)。13C NMR(D2O)δ155.1，144.4，143.3，132.1，118.0，104.4，61.3(2XCH2)，56.7，50.5，40.9，38.3。
实施例10-合成7-((1，3-二羟基丙-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
Figure G2007800402949D00411
实施例10.1-合成2-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，3-丙二醇
将乙酰氯(0.117毫升，1.65毫摩尔)加入2-氨基-1，3-丙二醇(0.3克，3.29毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.196克，0.659毫摩尔，根据G.B.Evans，R.H.Furneaux，A，Lewandowicz，V.L.Schramm和P.C.Tyler，J.Med.Chem.，2003，46，3412所述方法制备)的MeOH(5毫升)的搅拌溶液中。加入氰基硼氢化钠(0.062克，0.988毫摩尔)，并将该混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂，残留物在硅胶上进行色谱纯化(CH2Cl2-MeOH-28％ NH4OH，95∶5∶0.5，然后是9∶1∶0.05)，得到无色固体的2-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，3-丙二醇(0.188克，77％)。1H NMR(CD3OD)δ8.42，(s，1H)，7.65(s，1H)，7.25-7.16(m，5H)，5.75(s，2H)，4.50(s，2H)，4.10(s，3H)，4.03(s，2H)，3.68(dd，J＝11.2，5.9Hz，2H)，3.58(dd，J＝11.2，5.9Hz，2H)，2.81(五重峰，J＝5.6Hz，1H)。13C NMR(CD3OD，75.5MHz，参考CD3OD在δ49.0的中线)δ157.9，150.8，150.6，138.7，134.1，129.3，128.8，128.6，117.0，116.2，78.5，71.5，62.5(CH2 x 2)，61.3，54.3，41.4。+ESMS实测值：373.1865(M+H)+C19H25N4O4理论值：373.1876。
实施例10.2-合成7-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
将实施例10.1的产物(0.18克，0.483毫摩尔)在回流条件下在37％HCl中加热1.5小时。蒸发溶剂，残留物溶解在1∶1的MeOH∶H2O混合物中，用AmberlystA21树脂中和，过滤，蒸发溶剂。残留物经在硅胶上进行色谱纯化(异丙醇-水-28％NH4OH，92∶0.4∶0.4)，得到游离碱形式的产物，用5％HCl使其转化为无色固体的7-((1，3-二羟基丙-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐(0.085克，64.0％)。1H NMR(D2O，参考在δ2.225的内标丙酮)δ8.74，(s，1H)，7.85(s，1H)，4.58(s，2H)，3.98(dd，J＝12.7，4.6Hz，2H)，3.89(dd，J＝12.6，5.9Hz，2H)，3.53(m，1H)。13C NMR(D2O，参考在δ31.5的内标丙酮)δ154.5，145.4，136.8，133.4，119.3，105.3，60.9，58.9，39.8。+ESMS实测值：239.1153(M+H)+C10H15N4O3理论值：239.1144-游离碱。
实施例11-合成7-(((1，3-二羟基丙-2-基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
Figure G2007800402949D00421
实施例11.1-合成2-(((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)(2-羟乙基)氨基)-1，3-丙二醇盐酸盐
将氰基硼氢化钠(0.011克，0.18毫摩尔)加入实施例10.2的产物(0.041克，0.15毫摩尔)和1，4-二噁烷-2，5-二醇(0.027克，0.22毫摩尔，西格玛-阿尔得里奇)在MeOH(3毫升)的溶液中，室温下搅拌16小时。蒸发溶剂，残留物在硅胶上进行色谱纯化(异丙醇-28％NH4OH水溶液-水，98∶1∶1)，得到黄色固体的粗产物(约21毫克)。用少量7M NH3-EtOH溶液研磨该固体，得到无色固体的游离碱形式的标题化合物(约12毫克)。将该固体溶解在过量5％HCl水溶液中，然后蒸发溶剂，得到为固体的7-(((1，3-二羟基丙-2-基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐(15毫克，32％)。1H NMR(D2O，参考HOD在4.72ppm)δ8.49(s，1H)，7.82(s，1H)，4.77(s，2H)，3.98-3.88(m，6H)，3.77(六重峰，J＝6.1Hz，1H)，3.56(br.s，2H)。13C NMR(D2O)，δ154.4，144.4，139.5，132.8，118.6，104.1，64.3，56.7，55.7，52.6，47.1。+ESMS实测值：283.1407(M+H)+C12H19N4O4理论值：283.1406。
实施例12-合成7-((1，3-二羟基-2-(甲硫基甲基)丙-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00431
实施例12.1-合成N-(5-(羟甲基)-2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)特戊酰胺
将2-氨基-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇(15.7克，130毫摩尔)和二碳酸二叔丁酯(31.1克，143毫摩尔)在甲醇(400毫升)和水(40毫升)中的溶液在环境温度下搅拌72小时。减压条件下将烧瓶内容物浓缩，所得白色固体溶解在最少量的热乙酸乙酯中，使其重结晶过夜。过滤结晶，用石油醚洗涤，得到蓬松的白色针状物的N-(1，3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-基)特戊酰胺(26.5克，130毫摩尔，100％)。室温下，向N-(1，3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-基)特戊酰胺(9.50克，42.0毫摩尔)和2，2-二甲氧基丙烷(16.0毫升，129毫摩尔)的DMF(100毫升)溶液中加入对甲苯磺酸吡啶鎓(0.540克，2.15毫摩尔)。将反应液在环境温度下搅拌15小时，TLC(石油醚∶乙酸乙酯，4∶1，用Erlichs肉眼观察)检测反应完全。反应混合物用乙醚稀释，用碳酸氢钠水溶液洗涤三次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。所得半固体由最少量热石油醚重结晶，得到白色结晶的N-(5-(羟甲基)-2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)特戊酰胺(7.32克，65％)。1H NMR(CDCl3)：δ5.31(br s，1H，NH)，4.18(br s，1H，OH)，3.85(d，J＝11.5Hz，2H)，3.80(d，J＝11.5Hz，2H)，3.70(d，6.6Hz，2H)，1.46(s，12H)，1.44(s，3H).13C NMR(CDCl3)：δ154.0，98.8，80.5，64.8，64.5(2C)，53.4，28.3(3C)，26.9，20.3。
实施例12.2-合成2，2-二甲基-5-(甲硫基甲基)-1，3-二噁烷-5-基氨基甲酸叔丁酯
0℃，向N-(5-(羟甲基)-2，2-二甲基-1，3-二噁烷-5-基)特戊酰胺(1.03克，4.20毫摩尔)和三乙胺(1.52毫升，10.9毫摩尔)的CH2Cl2(10毫升)溶液中逐滴加入甲磺酰氯(0.425毫升，5.46毫摩尔)。将反应液升高至室温，1.5小时后TLC(石油醚∶乙酸乙酯，4∶1，用Erlichs观察)指示反应完全。反应混合物用CH2Cl2稀释，用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到淡黄色固体的(2，2-二甲基-5-特戊氨基-1，3-二噁烷-5-基)-甲磺酸甲酯(1.35克，4.17毫摩尔，99％)。室温、氩气下，向(2，2-二甲基-5-特戊氨基-1，3-二噁烷-5-基)-甲磺酸甲酯(0.566克，1.67毫摩尔)的DMF(3毫升)溶液中加入硫代甲醇钠(0.292克，4.17毫摩尔)持续15小时。TLC(石油醚∶乙酸乙酯，4∶1，用Erlichs观察)指示反应完全，因而将烧瓶内容物用乙酸乙酯稀释，用碳酸氢钠水溶液洗涤三次，用盐水洗涤一次。有机层用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。所得淡黄色固体通过快速柱色谱进行纯化(CH2Cl2∶甲醇，5∶1)，得到白色固体的2，2-二甲基-5-(甲硫基甲基)-1，3-二噁烷-5-基氨基甲酸叔丁酯(0.460克，95％)。1H NMR(CDCl3)：δ4.86(brs，1H，NH)，4.01(d，J＝11.7Hz，2H)，3.82(d，J＝11.7Hz，2H)，3.02(s，2H)，2.16(s，3H)，1.50(s，3H)，1.45(s，9H)，1.41(s，3H).13C NMR(CDCl3)：δ154.8，98.5，95.3，65.4(2C)，52.4，37.3，28.4(3C)，24.6，22.6，17.5。
实施例12.3-合成2-氨基-2-(甲硫基甲基)-1，3-丙二醇，盐酸盐
将2，2-二甲基-5-(甲硫基甲基)-1，3-二噁烷-5-基氨基甲酸叔丁酯(2.64克，9.06毫摩尔)的甲醇(10毫升)溶液加入浓盐酸(8毫升)的甲醇(100毫升)溶液中，减压浓缩得到黄色油状物，通过快速柱色谱进行纯化(CH2Cl2∶甲醇∶7M甲醇氨溶液，5∶2∶1)。用浓盐酸(1毫升)和甲醇(5毫升)溶液处理残留物使重新转化为盐酸盐，减压浓缩得到2-氨基-2-(甲硫基甲基)-1，3-丙二醇，盐酸盐(1.37克，9.06毫摩尔，100％)。1H NMR(D2O)：δ3.74(s，4H)，2.88(s，2H)，2.19(s，3H)。13CNMR(DMSO)，δppm，64.4(2x CH2)，57.9，48.9，17.5。+ESMS实测值：152.0744(M-Cl-)C5H14NO2S理论值：152.0745。
实施例12.4-合成2-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-2-(甲硫基甲基)-1，3-丙二醇
向2-氨基-2-(甲硫基甲基)-1，3-丙二醇(265毫克，0.156毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(505毫克，0.149毫摩尔)的甲醇(10毫升)溶液中加入氰基硼氢化钠(140毫克，0.223毫摩尔)，将该混合物在环境温度下搅拌5小时。TLC(CH2Cl2∶甲醇∶7M甲醇氨溶液，19∶1∶0.5，用UV和Erlichs观察)指示反应基本完全，因而将烧瓶内容物减压浓缩，并经过梯度柱色谱进行纯化(CH2Cl2∶甲醇∶7 M甲醇氨溶液，20∶1∶0.5到10∶1∶0.5)，得到黄色胶状物的2-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-2-(甲硫基甲基)-1，3-丙二醇(440毫克，62％)。1H NMR(CD3OD)δ8.36(s，1H)，7,58(s，1H)，7.24-7.21(m，5H)，5.77(s，2H)，4.50(s，2H)，3.68(d，J＝10.8Hz，2H)，3.63(d，J＝10.8Hz，2H)，2.75(s，2H)，2.15(s，3H)，1.70(s，9H)。13C NMR(CD3OD，75.5MHz)：δ157.6，150.3，139.0，133.5，129.4(2C)，128.7，128.5(2C)，118.2，116.4，84.6，78.5，71.2，63.0，55.4，37.9，36.1，29.0，17.4。+ESMS实测值：475.2379(M+H+)C24H35N4O4S理论值：475.2379。
实施例12.5-合成7-((1，3-二羟基-2-(甲硫基甲基)丙-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
向2-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-2-(甲硫基甲基)-1，3-丙二醇(200毫克，0.421毫摩尔)的甲醇(1毫升)溶液中加入浓盐酸(2毫升)的甲醇(5毫升)溶液，将反应液在100℃加热3小时。将烧瓶内容物减压浓缩，重新溶解在甲醇(5毫升)中，加入Amberlyst 21树脂(约1克)。环境温度下搅拌1小时后，过滤去除树脂，滤液减压浓缩，然后重新溶解在7M甲醇氨溶液(5毫升)中，搅拌30分钟。TLC(CH2Cl2∶7M甲醇氨溶液，4∶1，用Erlichs观察)指示反应完全，因而将溶液减压浓缩，残留物干加载到硅胶柱上。快速柱色谱纯化(CH2Cl2∶7M甲醇氨溶液，3∶1，用Erlichs观察)，得到白色泡沫体的7-((1，3-二羟基-2-(甲硫基甲基)丙-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(62.0毫克，49％)。1H NMR(D2O，DCl滴(drop of DCl))δ8.91(1H)，7.79(1H)，4.43(2H)，3.84(d，J＝12.7Hz，2H)，3.79(d，J＝12.7Hz，2H)，2.92(s，2H)，2.13(s，3H)。13C NMR(D2O，DCl滴)：δ152.8，145.2，133.3，131.8，118.5，103.5，67.4，59.2，35.4，33.5，17.0。+ESMS实测值：299.1185(M+H+)C12H19N4O3S理论值：299.1178。
实施例13-合成(R)-7-(((2，3-二羟丙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00461
实施例13.1-合成(R)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基氨基)乙醇
将碳酸钾(0.125克，0.904毫摩尔)加入实施例3.2的产物(0.2克，0.904毫摩尔)和2-溴乙醇(0.096毫升，1.356毫摩尔)的CH3CN(4毫升)溶液中，混合物在回流下加热64小时。冷却后，混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3洗涤，干燥，蒸发溶剂。残留物在硅胶上经色谱纯化(EtOAc-己烷1∶1然后是7∶3)，得到无色油状物的粗产物(R)-2-(苄基((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)氨基)乙醇(203毫克，85％)。将该油状物溶解在MeOH(5毫升)中，加入10％Pd-C(50毫克)，混合物在从气囊加入的氢气下搅拌1小时。用氩气代替氢气，混合物通过硅藻土过滤，蒸发溶剂，残留物在硅胶上经色谱纯化(CH2Cl2-MeOH-28％NH4OH，97∶3∶0.5，然后是9∶1∶0.1)，产物在kugelrohr装置上120℃/0.05 mmHg条件下蒸馏得到无色胶状物的(R)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基氨基)乙醇(0.103克，78％)。1H NMR(CD3OD)δ4.24(五重峰，J＝6.2Hz，1H)，4.06(dd，J＝8.2，6.3Hz，1H)，3.71-3.59(m，3H)，2.76-2.66(m，4H)，1.39(s，3H)，1.33(s，3H)。13C NMR(CD3OD，参考CD3OD在49.0ppm的中线)δ110.4，76.4，68.6，61.6，53.4，52.5，27.3，25.7。+ESMS实测值：176.1278 C8H18NO3(M+H)+理论值：176.1287。[α]D 20+9.5(c，0.525，MeOH)。
实施例13.2-合成(R)-2-(((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)氨基)乙醇
将三乙酰氧基硼氢化钠(0.126克，0.594毫摩尔)和MgSO4(500毫克)加入实施例13.1的产物(0.08克，0.457毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.136克，0.457毫摩尔，根据G.B.Evans，R.H.Furneaux，A，Lewandowicz，V.L.Schramm和P.C.Tyler，J.Med.Chem.，2003，46，3412所述制备)的1，2-二氯乙烷(3毫升)溶液中，将该混合物在室温下搅拌过夜。混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3溶液洗涤，干燥，蒸发溶剂。残留物在硅胶上经色谱纯化(EtOAc，然后是EtOAc-MeOH-28％ NH4OH，97∶3∶0.01)，得到无色胶状物的(R)-2-(((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)氨基)乙醇(0.180克，86％)，胶状物静置时变成淡黄色。1H NMR(CDCl3)δ8.53(s，1H)，7.36-7.23(s，6H)，5.71(s，2H)，4.60(v.br.s，1H，交换至D2O)，4.46(s，2H)，4.20(五重峰，1H，J＝6.3Hz)，4.10(s，3H)，4.02(d，1H，J＝14.1Hz)，3.88-3.67(m，4H)，3.26(dd，1H，J＝8.0，6.9Hz)，2.86-2.70(m，3H)，2.61(dd，1H，J＝13.2，6.7Hz)，1.32(s，3H)，1.28(s，3H)。13CNMR(CDCl3，参考CDCl3在77.0ppm的中线)δ156.3，150.2，149.9，136.8，131.5，128.5，128.0，127.7，116.2，115.1，108.9，76.9，74.2，70.1，68.4，59.9，57.2，56.5，53.6，47.8，26.8，25.4。+ESMS实测值：457.2467 C24H33N4O5(M+H)+理论值：457.2451。
实施例13.3-合成(R)-7-(((2，3-二羟丙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将实施例13.2的产物(0.165克，0.361毫摩尔)溶解在37％HCl(4毫升)中，加热至100℃保持1.5小时。蒸发溶剂，残留物溶解在MeOH和少量水中，用Amberlyst A21树脂中和。过滤混合物，蒸发溶剂。残留物在硅胶上经色谱纯化(异丙醇-H2O-28％ NH4OH 9∶0.5∶0.5，然后是8∶1.5∶0.5)，得到无色固体的(R)-7-(((2，3-二羟丙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(0.074克，72.5％)。[α]D 20+18.4(c，0.56，H2O)。1H NMR(D2O+NaOD，参考在2.06ppm的内标乙腈)δ8.07(s，1H)，7.35(s，1H)，3.94-3.65(m，3H)，3.68(t，J＝6.2Hz，2H)，3.50(dd，J＝11.7，4.2Hz，1H)，3.40(dd，J＝11.6，6.2Hz，1H)，2.75-2.48(m，4H)。13C NMR(D2O，75.5MHz，参考在31.5ppm的内标丙酮)δ156.3，145.4，143.7，132.0，118.6，109.2，68.9，65.1，58.5，56.7，56.3，48.8。+ESMS实测值：283.1398C12H19N4O4(M+H)+理论值：283.1406。
实施例14-合成(S)-7-(((2，3-二羟丙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00481
实施例14.1-合成(S)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基氨基)乙醇
将实施例5.2的产物(200毫克，0.904毫摩尔)用2-溴乙醇(0.096毫升，1.356毫摩尔)和碳酸钾(0.125克，0.904毫摩尔)处理，得到粗产物(S)-2-(苄基((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)氨基)乙醇(0.172克，71.7％)，确切地以实施例13.1中(R)-对映异构体的相同方式水解产生70毫克(62％)化合物14.1。1H和13C NMR与实施例13.1的(R)-对映异构体相同。+ESMS实测值：176.1274C8H18NO3(M+H)+理论值：176.1287。[α]D 20-9.6(c，0.555，MeOH)。
实施例14.2-合成(S)-2-(((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)氨基)乙醇
以实施例13.2中R-对映异构体所述相同的方式将实施例14.1的产物(0.048克，0.274毫摩尔)用5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.081克，0.274毫摩尔)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.075克，0.356毫摩尔)还原胺化，得到无色胶状物的(S)-2-(((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲基)氨基)乙醇(100毫克，80％)，该树胶缓慢变成淡黄色。1H和13C NMR与实施例13.2中的R-对映异构体相同。+ESMS实测值：457.2469 C24H33N4O5(M+H)+理论值：457.2451。
实施例14.3-合成(S)-7-(((2，3-二羟丙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
以实施例13.3中R-对映异构体所述的相同方式，将实施例14.2的产物(100毫克，0.219毫摩尔)转化为标题化合物(42毫克，67.9％)。1H和13C NMR与实施例13.3中R-对映异构体所述一致。+ESMS实测值：283.1404 C12H19N4O4(M+H)+理论值：283.1406。[α]D 20-17.9(c，0.545，H2O)。
实施例15-合成7-(((2S，3S)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00491
实施例15.1-合成(2R，3S)-2-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-3-羟基琥珀酸二乙酯
将(2R，3S)-2-氨基-3-羟基琥珀酸二乙酯(根据A.Breuning，R.Vicik和T.Schirmeister，Tetrahedron Asymm.，2003，14，3301和Z.Tang，Z.-H.Yang，X.-H.Chen，L.-F.Cun，A.-Q.Mi，Y.-Z.Jiang和L.-Z.Gong，J.Am.Chem.Soc，2005，127，9285所述制备)(0.109克，0.53毫摩尔)、氰基硼氢化钠(0.055克，0.88毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.131克，0.44毫摩尔)的混合物从甲醇蒸发(3x)。残留物溶解在甲醇(10毫升)中，加入乙酸(5滴)。反应混合物在环境温度下搅拌2小时。将反应混合物蒸发到硅胶上，经色谱纯化(乙酸乙酯-石油溶剂油，2∶1，然后是乙酸乙酯-三乙胺，1∶99)得到无色油状物(0.166克，77％)。1H NMR(CDCl3)δ8.55(s，1H)，7.34(s，1H)，7.33-7.23(m，5H)，5.70(s，2H)，4.62(d，J＝3.4Hz，1H)，4.48(s，2H)，4.23-4.15(m，5H)，4.10(s，3H)，3.99(d，J＝13.8Hz，1H)，3.85(d，J＝3.3Hz，1H)，2.25(brs，2H)，1.26(t，J＝7.1Hz，3H)，1.25(t，J＝7.1Hz，3H)。
实施例15.2-合成(2S，3S)-3-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇
向搅拌的实施例15.1的化合物(0.166克，0.34毫摩尔)的乙醚(10毫升)溶液中加入甲醇(0.14毫升，3.41毫摩尔)，再加入硼氢化锂(0.85毫升，1.71毫摩尔，2.0MTHF溶液)。30分钟后，反应混合物用甲醇稀释，然后浓缩。残留物溶解在甲醇中，用浓氨水(1毫升)稀释，蒸发到硅胶上。该物质在硅胶上经色谱纯化(DCM-甲醇-浓氨溶液，85∶15∶2，然后是70∶30∶2，再是50∶50∶4)。得到三种独特的化合物；首先是标题化合物，然后是标题化合物的两种不同盐形式。合并这三种化合物，得到无色油状物(0.103克，75％)。1H NMR(CD3OD)δ8.42(s，1H)，7.64(s，1H)，7.28-7.16(m，5H)，5.75(s，2H)，4.50(s，2H)，4.10(s，3H)，3.83-3.68(m，3H)，3.63(d，J＝5.5Hz，2H)，3.31(五重峰，J＝1.6Hz，1H)。
实施例15.3-合成7-(((2S，3S)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮的三氟乙酸盐
-78℃，向搅拌的实施例15.2的产物(0.103克，0.26毫摩尔)的DCM(10毫升)溶液中加入三溴化硼(2.56毫升，2.56毫摩尔，1.0M在DCM中)。15分钟后，将反应混合物升温至环境温度，与甲醇共蒸发(3x)。残留物在甲醇(7N氨溶液)中搅拌10分钟，蒸发到硅胶上。该物质在硅胶上经色谱纯化(氯仿-甲醇-浓氨溶液，10∶9∶1)，然后在极性-RP HPLC上纯化(TFA-甲醇-水，0.1∶1∶99增加至0.1∶1∶4)，得到白色固体(0.018毫克，26％)。1H NMR(D2O)δ8.32(s，1H)，7.74(s，1H)，4.53(s，2H)，4.13(dq，J＝5.7，1.1Hz，1H)，3.95(ddd，J＝12.5，4.5，1.1Hz，1H)，3.86(ddd，J＝11.2，7.2，1.1Hz，1H)，3.64(m，2H)，3.46(m，1H)。
实施例16-合成(2RS，3SR)-1，3，4-三羟基-N，N-二甲基-N-((4-氧代-4，5-二氢-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)丁烷-2-碘化铵(aminium iodide)
Figure G2007800402949D00511
实施例16.1-合成(5S，6R)-2，2-二甲基-6-((S)-1-苯基乙基氨基)-1，3-二氧杂环庚烷-5-醇
该化合物根据T.Inaba，A.Birchler，Y.Yamada，S.Sagawa，K.Yokota，K.Ando和I.Uchida，J.Org.Chem.，1998，63，7582-7583所述的方法制备。
实施例16.2-合成(5S，6R)-6-氨基-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环庚烷-5-醇
向(5S，6R)-2，2-二甲基-6-((S)-1-苯基乙基氨基)-1，3-二氧杂环庚烷-5-醇(500毫克，1.88毫摩尔)的异丙醇(5毫升)溶液中加入10％Pd-C(100毫克)。将该混合物在氢气氛压力下50℃搅拌过夜。然后在硅藻土滤垫上过滤溶液，用MeOH(20毫升)洗涤滤垫。滤液蒸发至干，得到白色固体的(5S，6R)-6-氨基-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环庚烷-5-醇(300毫克，1.86毫摩尔，产率99％)。1HNMR(CDCl3)1.03(3H，s)，1.06(3H，s)，2.61(1H，d，OH)，2.75(1H，m)，3.38(1H，m)，3.46(1H，dd，J 5.3和12.5Hz)，3.57(1H，dd，J 5.9和12.5Hz)，3.75(1H，dd，J 2.3和12.5Hz)，3.80(1H，dd，J 1.8和12.5Hz)。13C NMR(CDCl3)25.0，25.1，56.1，61.6，62.8，74.6，101.7。
实施例16.3-合成7-(((2RS，3SR)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将(5S，6R)-6-氨基-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环庚烷-5-醇(155毫克，0.96毫摩尔)、9-脱氮次黄嘌呤(100毫克，0.74毫摩尔)和37％甲醛水溶液(140微升，1.85毫摩尔)在水(2毫升)中的混合物搅拌并在具塞的烧瓶中85℃加热过夜。将溶液蒸发至干。残留物在甲醇氨中搅拌10分钟，然后蒸发。残留物在硅胶上经色谱纯化(DCM-MeOH-cNH3 6∶3.5∶0.5)，得到白色固体的外消旋7-(((2RS，3SR)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(55毫克，0.20毫摩尔，产率30％)。1H NMR(CDCl3)2.76(1H，q，J 5.2Hz)，3.48(1H，dd，J 6.3，11.9Hz)，3.60(2H，m)，3.70(2H，m)，3.85(2H，ABq)，7.34(1H，s)，7.78(1H，s)。13CNMR(CDCl3)40.2，59.8，59.8，63.5，71.2，113.1，117.5，129.2，142.4，143.5，155.4。m/z(ESI+)537(2MH+，20％)，269(MH+，100％)。HRMS(ESI+)C11H16N4O4理论值：269.1241，实测值：269.1250。
实施例16.4-合成(2RS，3SR)-1，3，4-三羟基-N，N-二甲基-N-((4-氧代-4，5-二氢-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)丁烷-2-碘化铵
向外消旋-(2R，3S)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇(50毫克，0.19毫摩尔)和碳酸钾(130毫克，0.93毫摩尔)在DMF(5毫升)混合物中加入碘代甲烷(15微升，0.20毫摩尔)。将该混合物在60℃搅拌过夜。然后蒸发溶剂，残留物用DCM-MeOH-cNH3(9∶1∶0.1)进行色谱纯化，得到无色油状物的(2RS，3SR)-1，3，4-三羟基-N，N-二甲基-N-((4-氧代-4，5-二氢-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)丁烷-2-碘化铵(30毫克，0.10毫摩尔，产率57％)。1HNMR(CD3OD)3.02(1H，m)，3.62(6H，s)，3.50-3.80(5H，m)，4.01(1H，d，J 13Hz)，4.17(1H，d，J 13Hz)。13C NMR(CD3OD)34.2，38.1，59.6，65.5，66.5，71.3，115.2，119.6，129.7，145.1，146.5，156.4。
实施例17-合成7-(((2R，3S)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00531
实施例17.1-合成(2R，3S)-2-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-3-羟基琥珀酸二乙酯
将(2S，3S)-2-氨基-3-羟基琥珀酸二乙酯(根据A.Baruch，S.H.L.Verhelst，M.Bogyo，K.A.H.Chehade，合成，2005，2，240-244和Z.Tang，Z.-H.Yang，X.-H.Chen，L.-F.Cun，A.-Q.Mi，Y.-Z.Jiang和L.-Z.Gong，J.Am.Chem.Soc.，2005，127，9285所述制备)(0.871克，4.24毫摩尔)、氰基硼氢化钠(0.444克，7.07毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(1.051克，3.54毫摩尔)的混合物由甲醇蒸发(3x)。残留物溶解在甲醇(20毫升)中，加入乙酸(10滴)。将反应混合物在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物蒸发到硅胶上，经色谱纯化(三乙胺-甲醇-DCM，1∶3∶99)得到无色油状物(2.577克，150％)。1HNMR揭示产物中掺杂有(同极性)原料胺和一些硼氢化物残留。1H NMR(CDCl3)δ8.52(s，1H)，7.38-7.23(m，6H)，5.69(s，2H)，4.52(br.s，1H)，4.47(s，2H)，4.32-4.10(m，6H)，4.10(s，3H)，3.73(br.s，1H)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H)，1.21(t，J＝7.2Hz，3H)。
实施例17.2-合成(2S，3R)-3-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇
向实施例17.1的产物(1.718克，3.53毫摩尔)的乙醚(30毫升)搅拌溶液中加入甲醇(1.43毫升，35.3毫摩尔)，再加入硼氢化锂(8.83毫升，17.7毫摩尔，2.0M的THF溶液)。1小时后，将甲醇(1.43毫升，35.3毫摩尔)加入反应混合物中，继续搅拌。1小时后，反应混合物用甲醇稀释，然后浓缩。残留物溶解在甲醇(20毫升)中，用盐酸稀释(20毫升，1M)并浓缩。残留物在硅胶上经色谱纯化(甲醇[7N氨溶液]-DCM，15∶85)，得到白色固体(0.940克，66％)。1H NMR(CD3OD)δ8.43(s，1H)，7.69(s，1H)，7.28-7.15(m，5H)，5.77(s，2H)，4.52(s，2H)，4.12(ABq，2H)，4.11(s，3H)，3.80(dd，J＝11.7，5.3Hz，1H)，3.80-3.60(m，3H)，3.59(dd，J＝11.0，4.9Hz，1H)，2.90(q，J＝4.9Hz，1H)。13C NMR(CD3OD)δ158.4，151.4，151.0，139.1，135.0，129.7，129.2，129.1，117.5，115.3，79.0，72.5，72.0，65.6，62.0，61.6，54.8，42.1。
实施例17.3-合成7-(((2R，3S)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮的三氟乙酸盐
-78℃，向搅拌的实施例17.2的产物(0.940克，2.34毫摩尔)的DCM(30毫升)溶液中加入三溴化硼(23.4毫升，23.4毫摩尔，1.0M的DCM溶液)。15分钟，将反应混合物升温至环境温度，用甲醇共蒸发(3x)。残留物在甲醇(7N氨溶液)中搅拌10分钟，蒸发到硅胶上。该物质在硅胶上经色谱纯化(氯仿-甲醇-浓氨溶液，10∶9∶1)，然后在极性-RP HPLC上纯化(TFA-甲醇-水，0.1∶3∶97增加至0.1∶50∶50)，得到白色结晶固体(0.234毫克，26％)。1H NMR(D2O)δppm 8.03(s，1H)，7.59(s，1H)，4.41(ABq，2H)，3.88(dd，J＝13.2，4.2Hz，1H)，3.80(m，1H)，3.72(dd，J＝13.2，5.3Hz，1H)，3.60(dd，J＝12.5，3.4Hz，2H)，3.47(dd，J＝12.5，4.5Hz，1H)，3.26(m，1H)。+ESMS实测值：269.1258(M+H)+C11H17N4O4理论值：269.1250。
实施例18-合成7-(((2S，3R)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00551
实施例18.1-合成(2S，3R)-2-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-3-羟基琥珀酸二乙酯
将(2R，3R)-2-氨基-3-羟基琥珀酸二乙酯(根据A.Baruch，S.H.L.Verhelst，M.Bogyo，K.A.H.Chehade，合成，2005，2，240-244和Z.Tang，Z.-H.Yang，X.-H.Chen，L.-F.Cun，A.-Q.Mi，Y.-Z.Jiang和L.-Z.Gong，J.Am.Chem.Soc.，2005，127，9285所述制备)(0.083克，0.40毫摩尔)、氰基硼氢化钠(0.042克，0.67毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.100克，0.34毫摩尔)的混合物由甲醇蒸发(3x)。残留物溶解在甲醇(10毫升)中，加入乙酸(5滴)。反应混合物在环境温度下搅拌16小时。将反应混合物蒸发到硅胶上，经色谱纯化(三乙胺-乙酸乙酯-石油溶剂油，1∶66∶33)，得到无色油状物(0.114克，70％)。1H NMR揭示产物中掺杂少量(同极性)原料胺。1HNMR(CDCl3)δ8.52(s，1H)，7.38-7.23(m，6H)，5.69(s，2H)，4.52(br.s，1H)，4.47(s，2H)，4.32-4.10(m，6H)，4.10(s，3H)，3.73(br.s，1H)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H)，1.21(t，J＝7.2Hz，3H)。
实施例18.2-合成(2R，3S)-3-((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇
向搅拌的实施例18.1的产物(0.114克，0.23毫摩尔)的乙醚(10毫升)溶液中加入甲醇(0.10毫升，2.34毫摩尔)，再加入硼氢化锂(0.59毫升，1.17毫摩尔，2.0M的THF溶液)。30分钟后，反应混合物用甲醇稀释，蒸发到硅胶上。该物质经色谱纯化(浓氨溶液-甲醇-DCM，0.5∶5∶95，然后是0.5∶15∶85)，得到无色胶状物(0.056克，59％)。1H NMR(CD3OD)δ8.43(s，1H)，7.69(s，1H)，7.28-7.15(m，5H)，5.77(s，2H)，4.52(s，2H)，4.12(ABq，2H)，4.11(s，3H)，3.80(dd，J＝11.7，5.3Hz，1H)，3.80-3.60(m，3H)，3.59(dd，J＝11.0，4.9Hz，1H)，2.90(q，J＝4.9Hz，1H)。13CNMR(CD3OD)δ158.4，151.4，151.0，139.1，135.0，129.7，129.2，129.1，117.5，115.3，79.0，72.5，72.0，65.6，62.0，61.6，54.8，42.1。
实施例18.3-合成7-(((2S，3R)-1，3，4-三羟基丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
-78℃，向搅拌的实施例18.2的产物(0.056克，0.14毫摩尔)的DCM(7毫升)溶液中加入三溴化硼(1.39毫升，1.39毫摩尔，1.0M在DCM中)。15分钟后，将反应混合物升温至环境温度，用甲醇共蒸发(3x)。残留物在甲醇(7N氨溶液)中搅拌10分钟，蒸发到硅胶上。该物质在硅胶上经色谱纯化(氯仿-甲醇-浓氨溶液，10∶9∶1)，得到白色固体(17毫克，46％)。1H NMR(D2O)δ8.03(s，1H)，7.59(s，1H)，4.41(ABq，2H)，3.88(dd，J＝13.2，4.2Hz，1H)，3.80(m，1H)，3.72(dd，J＝13.2，5.3Hz，1H)，3.60(dd，J＝12.5，3.4Hz，2H)，3.47(dd，J＝12.5，4.5Hz，1H)，3.26(m，1H)。+ESMS实测值：269.1262(M+H)+C11H17N4O4理论值：269.1250。
实施例19-合成7-(((2S，3R)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00571
实施例19.1-合成(2S，3R)-O-异亚丙基-4-羟基丁基胺
将2，3-O-异亚丙基-D-赤酮酰胺(erythronamide)(D.L.MitchellCanad.J.Chem.，1963，41，214)(2.80克，16.0毫摩尔)的无水THF(约45毫升)溶液在约30分钟内逐滴加入到维持在环境温度的搅拌的氢化铝锂(2.43克，64.0毫摩尔)的THF(40毫升)的悬浮液中。然后将该混合物回流过夜，然后冷却，并以Fieser方式运行。过滤去除无机材料，滤液浓缩得到可流动浆液形式的(2S，3R)-O-异亚丙基-4-羟基丁基胺(2.17克，84％)，然为该物质的纯度足以进行下一反应。1H NMR(CDCl3)δ4.31(td，J＝6.7，4.2Hz，1H)，4.23(td，J＝6.6，3.9Hz，1H)，3.71(ABq的d，低场分支J＝12.0，7.0Hz，高场分支J＝12.0，4.2Hz，2H)，3.01(ABq的d，低场分支J＝12.6，7.1Hz，高场分支J＝12.6，4.9Hz，2H)，1.45(s，3H)，1.36(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ108.3，77.6，77.5，60.8，41.2，27.8，25.3。
实施例19.2-合成N-[5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基氨基(2S，3R)-2，3-O-异亚丙基-2，3，4-丁三醇
向5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.39克，1.30毫摩尔)、(2S，3R)-2，3-O-异亚丙基-1-氨基-2，3，4-丁三醇(0.21克，1.30毫摩尔)在含无水硫酸镁(0.5克)的1，2-二氯乙烷(8毫升)的混合物中一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.36克，1.70毫摩尔)，全部物质在环境温度下搅拌过夜。混合物用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后干燥并浓缩至干。混合物在硅胶(无预吸收)上经快速色谱进行分馏，用2％到-5％MeOH/EtOAc洗脱，产生不流动的浆状物(immobile syrump)的题化合物(0.23克，39.9％)。1H 8.53(s，1H)，7.42(s，1H)，7.40-7.18(m，5H)，5.69(s，2H)，4.49(s，2H)，4.34(m，2H)，4.13(s，3H)，3.99(s，2H)，3.95(brs，1H)，3.73(ABq的d，J＝12.0，4.7Hz，ABq的低场分支和J＝12.0，3.7Hz，ABq的高场分支，2H)，2.97(ABq的d，J＝12.2，7.6Hz，ABq的低场分支，J＝12.2，3.1Hz，ABq的高场分支)，1.41(s，3H)，1.34(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ156.7，150.5，150.3，137.3，131.5，128.81，128.3，128.0，116.3，115.1，108.3，78.0，77.5，76.2，70.6，60.8，53.9，48.4，43.5，27.8，25.3。HR-ESMS MH+443.2327 C23H31N4O5理论值：MH+443.2294Δ0.9ppm(也观察到MNa+465.2111)。
实施例19.3-合成7-(((2S，3R)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将浓盐酸(10毫升)加入N-[5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基氨基-(2S，3R)-2，3-O-异亚丙基-2，3，4-丁三醇(0.48克，1.08毫摩尔)中，溶液回流2小时后冷却，浓缩，然后重新溶解在甲醇(10毫升)和水(2毫升)中。用A-21树脂将溶液中和至pH 7，然后过滤回收。粗产物预吸收到二氧化硅上，在二氧化硅上分馏，用DCM/MeOH/0.88 NH3(5∶4∶1)洗脱。在选定的洗脱馏份中由洗脱溶剂缓慢沉淀(过夜)回收得到白色固体的标题化合物。1HNMR(D2O/DCl)δ8.82(s，1H)，7.66(s，1H)，3.73(7-重峰，两个重叠的4-重峰，J＝3Hz 1H)，3.51-3.33(m，3H)，3.18(dd，J＝12.9，2.9Hz，1H)，2.96(dd，J＝12.9，9.6Hz，1H)。13C NMR(D2O/DCl)δ152.9，145.5，133.2，132.3，118.6，103.2，73.3，68.0，62.5，49.4，40.9。HR-ESMS MH+269.1242 C11H17N4O4理论值：MH+269.1250Δ3ppm。C11H16N4O4理论值：C 49.25，H 6.01，N 20.89％；实测值：C 48.79，H 6.25，N 20.74。
实施例19.4-合成(2S，3R)-2，3-O-异亚丙基-1-氨基-4-甲硫基-2，3-丁二醇
向剧烈搅拌的(2S，3R)-O-异亚丙基-4-羟基丁基胺(1.2克，7.44毫摩尔)的甲苯(10毫升)溶液中加入水(10毫升)，碳酸钾(1.55克，11.2毫摩尔)，再一次性加入氯甲酸苄酯(2.54克，50％的甲苯溶液，7.44毫摩尔)。继续搅拌90分钟后，混合物用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，然后干燥，浓缩形成浆状物，1.97克(90％)。认为该CBz-保护的胺的纯度足以进行后续反应，但也可采用40％ EtOAc/己烷作为洗脱液、在二氧化硅上进行色谱纯化。1HNMR(CDCl3)δ7.37(brs，5H)，5.12(s，2H)，4.24(m，2H)，3.71(m，2H)，3.51(m，1H)，3.36(m，1H)，1.46(s，3H)，1.36(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ156.9，136.8，129.4，128.8，128.5，109.0，77.3，76.2，67.3，61.1，41.3，28.2，25.6。
将N-CBz衍生物的样品(4.44克，15.1毫摩尔)溶解在含三乙胺(1.5当量，3.17毫升，22.6毫摩尔)的无水DCM(40毫升)中，该溶液在氩气气氛下、在冰浴中冷却。几分钟内逐滴加入甲磺酰氯(1.2当量，1.4毫升，18.1毫摩尔)，此时撤走冰浴，混合物在环境温度下搅拌30分钟。溶液用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩得到无色可流动的浆状物N-CBz，O-甲磺酸酯(5.83克)，认为其纯度足以进行后续反应。1H NMR(CDCl3)δ7.37(s，5H)，5.14(s，2H)，4.43-4.15(m，3H)，3.55(m，1H)，3.15(m，1H)，3.03(s，3H)，1.46(s，3H)，1.35(s，3H)。
将N-CBz，O-甲磺酸酯(5.83克)溶解在无水DMF(60毫升)中并浸入水浴(用于散热)中，同时分三批(等等)加入硫代甲醇钠(2当量，2.19克，31.3毫摩尔，基于甲磺酸酯前体)，然后在环境温度下搅拌整个周末。混合物用醚稀释，所得有机相用水洗涤五次，然后干燥，浓缩形成可流动的浆状物(4.56克)。将两组分产物混合物在二氧化硅上进行色谱分馏，采用10％到-40％ EtOAc/己烷的梯度洗脱，得到N-CBz，4-硫代甲基衍生物(1.02克，21％)。1H NMR(CDCl3)δ7.38(s，5H)，5.18(s，3H)，4.34(q，J＝6.0Hz，1H)，4.20(m，1H)，3.54(m，1H)，3.15(m，1H)，2.66(m，2H)，2.18(s，3H)，1.44(s，3H)，1.34(s，3H)。HR-ESMS MNa+348.1241C16H23NO4SNa理论值：MNa+348.1245Δ1.1ppm。从该反应回收的主产物一致地是顺3，4-二羟基吡咯烷的异亚丙基衍生物。
将粗产物硫代甲基化的N-CBz保护的胺(1.03克，3.17毫摩尔)溶解在异丙醇中(25毫升)，加入氢氧化钾水溶液(2M，10毫升，20.0毫摩尔)。将该两相混合物回流24小时后，冷却溶液，浓缩至去除绝大部分异丙醇的程度。产物用醚萃取，醚相干燥，浓缩形成可流动的淡黄色浆状物(0.73克)。将该粗产物预吸收到二氧化硅上之后，经快速色谱纯化，先用DCM洗脱(去除苯甲醇)，再用2％到6％[7M NH3/MeOH]的DCM洗脱，用茚三酮观察。这样，得到淡黄色浆状物的(2S，3R)2，3-O-异亚丙基-2，3-二羟基-4-甲硫基丁基胺(0.39克，64.3％)。1HNMR(CDCl3)δ4.32(q，J＝6.5Hz，1H)，4.13(q J＝6.3Hz 1H)，2.82(d，J＝6.4Hz，2H)，2.64(d，J＝6.1Hz，2H)，2.18(s，3H)，1.47(s，3H)，1.37(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ108.7，80.0，77.4，42.2，34.3，28.7，26.0，16.7。HR-ESMS MH+ 192.1057 C8H17NO2S理论值：MH+192.1058Δ0.5ppm。
实施例19.5-合成N-[5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基氨基(2S，3R)-2，3-O-异亚丙基-4-甲硫基-2，3-丁二醇
向5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.85克，2.51毫摩尔)、(2S，3R)-2，3-O-异亚丙基-1-氨基-4-甲硫基-2，3-丁二醇(0.37克，1.93毫摩尔)在含无水硫酸镁(0.6克)的1，2-二氯乙烷(25毫升)的混合物中一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.53克，2.51毫摩尔)，将整个混合物在环境温度下搅拌过夜。混合物用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后干燥并浓缩(1.32克)。混合物通过在二氧化硅(预吸收)上快速色谱分馏纯化，用DCM/乙酸乙酯/7MNH3-MeOH(49∶49∶2)洗脱，产生不流动的浆状物的标题化合物(0.60克，60.3％)。1H NMR(CDCl3)δ8.47(s，1H)，7.34(s，1H)，7.33-7.18(m，5H)，5.76(s，2H)，4.49(s，2H)，4.31(六重峰，J＝6Hz，2H)，4.04(s，2H)，2.82(d，J＝5.9Hz，2H)，2.62(d，J＝5.6Hz，2H)，2.15(s，3H)，1.70(s，9H)，1.41(s，3H)，1.34(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ156.2，150.4，150.0，137.6，130.9，128.8，128.2，127.8，116.5，108.8，83.2，77.5，77.4，77.1，70.3，49.2，43.9，34.6，29.1，28.6，26.0，16.7。HR-ESMS MH+ 515.2697C27H38N4O4S理论值：MH+515.2692Δ1.0ppm。
实施例19.6-合成7-(((2S，3R)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
-78℃，保持在氩气下，向萘化锂(lithium naphthalenide)[锂(0.081克，11.7毫摩尔)与萘(1.94克，15.2毫摩尔)在无水THF(25毫升)溶液中反应制得]溶液中，2分钟的时间内逐滴加入N-[5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基氨基(2S，3R)-2，3-O-异亚丙基-4-甲硫基-2，3-丁二醇(0.60克，1.17毫摩尔)的无水THF(5毫升)溶液。将该溶液在-78℃搅拌60分钟，然后tlc[DCM7M NH3-MeOH，9∶1)揭示原料完全消耗。加入2-3毫升水使混合物骤冷，然后升温至环境温度，再浓缩至几乎干燥。然后将混合物用甲醇氨溶液(7M，20毫升)搅拌15分钟，然后再浓缩。粗产物重新溶解在DCM中，预吸收到二氧化硅上，然后通过用DCM 7M NH3-MeOH，9∶1混合物洗脱进行分馏纯化，得到不流动的胶状物的中间体N-[4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基氨基(2S，3R)-2，3-O-异亚丙基-4-甲硫基-2，3-丁二醇(0.18克，45.5％)。1HNMR(d4-MeOH)δ7.92(s，1H)，7.43(s，1H)，4.32(m，2H)，3.96(ABq，J＝13.6Hz，2H)，2.75(d，J＝6.2Hz，2H)，2.62(d，J＝6.4Hz，2H)，2.17(s，3H)，1.35(s，6H)。13CNMR(d4-MeOH)δ156.3，145.3，143.3，128.8，119.8，116.74，110.0，78.7，78.5，49.1，44.2，35.0，29.3，26.7，16.9。HR-ESMS MH+339.1503C15H23N4O3S理论值：MH+339.1491Δ3.5ppm；也可参见MNa+361.1325。
将N-[4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基氨基(2S，3R)-2，3-O-异亚丙基-4-甲硫基-2，3-丁二醇(0.18克，0.53毫摩尔)悬浮在MeOH(15毫升)中，加入乙酰氯(0.38毫升，5.3毫摩尔)的MeOH(10毫升)溶液后，在几分钟内形成溶液。继续搅拌5小时，然后用A-21树脂中和溶液，过滤，直接预吸收到二氧化硅上。粗产物通过快速色谱进行分馏纯化，采用步阶式梯度洗脱，从DCM/MeOH(80∶20+17M NH3-MeOH)开始，直到(60∶40+17M NH3-MeOH)结束，在一组选定的收集器中通过从洗脱溶剂缓慢沉淀进行回收。这样，分离得到无色固体的标题化合物(0.023克，13.5％)。1H NMR(d4-MeOH+DCl)δ9.13(s，1H)，7.97(s，1H)，4.58(s，2H)，3.96(m，1H)，3.73(m，1H)，3.46(dd，J＝12.6，3.3Hz，1H)，3.05(dd J＝12.6，9.0Hz，1H)，2.85(dd，J＝13.9，3.7Hz，1H)，2.57(dd，J＝13.9，5.2Hz，1H)，2.15(s，3H)。13C NMR(d4-MeOH+DCl)δ153.0，146.9，134.1，132.9，120.1，105.1，74.2，70.6，51.0，42.3，39.2，16.7。HR-ESMS MNa+321.1009C12H18N4O3SNa理论值：321.0997Δ3.7ppm。
实施例20-合成7-(((2RS，3RS)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2d]嘧啶-4(5H)-酮和7-(((2RS，3RS)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00631
实施例20.1-合成(2R/S，3R/S)-乙基，甲基2，3-O-异亚丙基酒石酸酯
向含(+)和(-)酒石酸二乙酯(各1.0克，9.7毫摩尔)和二甲氧基丙烷(2.0克，19.4毫摩尔)的苯(30毫升)溶液中加入对甲苯磺酸(0.1克)，混合物回流3小时。溶液冷却，用EtOAc(200毫升)稀释，用饱和盐水/碳酸氢钠混合物洗涤，然后干燥，浓缩形成均质可流动的液体(1.78克，79％)。由Kugelrohr(120-140°℃/18mmHg)蒸馏样品，得到为无色液体的混合的乙酯甲酯。在随后较大规模的制备过程中，认为粗产物的程度足以进行进一步的反应。1H NMR(CDCl3)δ4.79-4.74(m，2H)，4.26(q，J＝7.1Hz，2H)，3.81(s，3H)1.48(s，6H)，1.32(t，J＝7.1Hz，3H)。13C NMR(CDCl3)δ170.4，170.0，114.1，77.6，77.4，62.3，53.1，26.7，14.4。
实施例20.2-合成(2R/S，3R/S)甲基2，3-O-异亚丙基酒石酰胺(tartramide)
将2，3-O-异亚丙基酒石酸酯(1.78克，7.66毫摩尔)溶解在MeOH(10毫升)中，环境温度下搅拌的同时加入甲醇氨溶液(7M，1.09毫升，7.66毫摩尔)。将该溶液在环境温度下搅拌2天，然后直接预吸收到少量二氧化硅上，粗产物用50％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱进行分馏，得到易于固化的油状物的酒石酰胺(0.67克，43％)。1H NMR(CDCl3)δ6.52(brs，2H)，6.34(brs，2H)，4.73(s，2H)，3.84(s，3H)，1.52(s，3H)，1.48(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ173.0，170.9，113.9，77.8，77.4，53.2，27.0，26.5。HRMS C8H13NO5 23NaS(M23Na)+理论值：226.0691，实测值：226.0696。
实施例20.3-合成(2R/S，3R/S)2，3-O-异亚丙基-1-氨基-2，3，4-丁三醇
将酒石酰胺酯(0.83克，4.08毫摩尔)溶解在无水THF(10毫升)中，环境温度下逐滴加入LAH在THF(60毫升)的悬浮液中。然后将该混合物回流4小时，然后在冰浴中冷却，用三步骤Feiser方法小心猝灭。过滤去除无机材料，用醚彻底洗涤，滤液干燥，浓缩形成可用于随后的反应的均质无色浆状物(0.6克，91％)。1H NMR(CDCl3)δ3.68(m，2H)，3.47(dd，J＝10.8，4.2Hz，高场br 10.8，5.2Hz，2H)，3.13(brs，2H)，2.70(ABq的d，低场br J 12.8，4.8Hz，高场br 12.8，5.2Hz，2H)，1.30(s，3H)，1.29(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ107.9，70.8，80.2，62.3，43.9，27.5，27.4。LR-ESMS MH+162.1112。
实施例20.4-合成N-[5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基氨基(2R/S，3R/S)-2，3-O-异亚丙基-2，3，4-丁三醇
向5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.59克，1.98毫摩尔)、(2RS，3RS)-2，3异亚丙基-1-氨基-2，3，4-丁三醇(0.41克，2.54毫摩尔)在含无水硫酸镁(1.0克)的1，2-二氯乙烷(10毫升)的混合物中一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.70克，3.31毫摩尔)，将整个混合物在环境温度下搅拌过夜。混合物用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠洗涤，然后干燥，浓缩形成不流动的浆状物(0.92克)。通过在二氧化硅上快速色谱(无预吸收)，用2％到5％MeOH/EtOAc洗脱，回收得到不流动的无色浆状物N-[5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基-1-氨基(2R/S，3R/S)-2，3-O-异亚丙基-2，3，4-丁三醇(0.65克，58％)。1H NMR(CDCl3)δ8.56(s，1H)，7.38(s，1H)，7.37-7.21(m，5H)，5.74(s，2H)，4.53(s，2H)，4.14(s，3H)，4.05(s，2H)，3.84(m，3H)，3.62(m，1H，CH2 ABq的高场br；3.15 dd J 12.1，3.0Hz，CH2 ABq的低场br，1H)，2.74m，CH2 ABq的高场br，1H)，1.41(s，3H)，1.30(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ156.7，150.5，150.3，137.3，131.5，128.8，128.4，128.1，116.3，115.2，108.9，82.2，80.1，77.4，70.7，62.8，34.0，50.6，43.7，27.3，27.1。LR-ESMS MNa+ 465.2144，MH+ 443.2153(C23H31N4O5)。
实施例20.5-合成7-(((2RS，3RS)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将N-[5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基-1-氨基(2R/S，3R/S)-2，3-异亚丙基-2，3，4-丁三醇(0.48克，1.085毫摩尔)的在浓盐酸(10毫升)的溶液回流3小时。然后将该溶液冷却，浓缩，重新溶解在含水(3毫升)的甲醇(10毫升)中，用Amberlyst A-21树脂中和。过滤去除树脂，滤液浓缩形成不流动的浆状物(0.35克)，一部分浆状物通过RP-HPLC[1％ MeOH，Phenomenex Synergi 4μ POLAR RP 80A，250×30mm]进行纯化，得到无色泡沫体的7-(((2RS，3RS)-2，3，4-三羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(三氟甲磺酸盐)。1H NMR(CD3OD)δ8.08(s，1H)，7.55(s，1H)，4.32(s，2H)，3.93(m，1H)，3.59-3.44(m，1H)，3.53(s，2H)，3.14(d，J＝5.9Hz，2H)。13CNMR(CD3OD)δ162.2，161.7，161.2，160.7，155.6，144.8，143.3，131.6，120.1，107.7，74.3，71.1，63.9，51.0，42.3。HR-ESMS MH+ 269.1241 C11H17N4O4理论值：269.1250。
实施例20.6-合成(2R/S，3R/S)-2，3-O-异亚丙基-1-氨基-4-甲硫基-2，3-丁二醇
向剧烈搅拌的(2R/S，3R/S)-2，3-O-异亚丙基-1-氨基-2，3，4-丁三醇(6.92克，43.0毫摩尔)在甲苯(70毫升)的溶液中加入水(70毫升)、碳酸钾(8.91克，1.5当量，64.5毫摩尔)，再加入氯甲酸苄酯(50％w/w在甲苯中，14.7克，43.0毫摩尔)。环境温度下搅拌3小时后，混合物用DCM稀释，然后用水洗涤，分离有机相，干燥，然后浓缩，得到可流动的浆状物(12.1克，定量)，1H NMR谱表明，该化合物--N-苄氧甲酰基(2R/S，3R/S)2，3-O-异亚丙基-1-氨基-2，3，4-丁三醇-的纯度足以进行后续反应。将该化合物的样品(4.29克，14.5毫摩尔)溶解在含三乙胺(1.5当量，3.06毫升，21.8毫摩尔)的无水DCM中，然后在氩气氛下、冰浴中进行冷却。几分钟内逐滴加入甲磺酰氯(1.2当量，1.36毫升，17.5毫摩尔)，此时撤走冰浴，将混合物在环境温度下搅拌30分钟。溶液用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后干燥并浓缩形成无色可流动的浆状物(5.09克)，认为该浆状物的纯度足以用于后续反应。1H NMR(CDCl3)δ7.37(s，5H)，5.14(brs，3H)，4.34(brs，2H)，3.99(m，2H)，3.46(m，2H)，3.07(s，3H)，1.42(s，6H)。13CNMR(CDCl3)δ157.0，136.7，129.0，128.6，128.5，110.4，76.9，76.0，68.5，67.4，46.4，38.1，27.5，27.2。将甲磺酸酯(5.09克)溶解在无水DMF(50毫升)中，浸在水浴中(用于散热)，分三批(等等)加入硫代甲醇钠(2当量，2.04克，29.0毫摩尔，基于甲磺酸酯前体)。温度升高至不超过22℃，然后在环境温度下搅拌整个周末。混合物用醚稀释，所得有机相用水洗涤5次，然后干燥并浓缩形成可流动的浆状物(2.79克，59％)。1H NMR(CDCl3)δ7.38(s，5H)，5.18(s，3H)，3.93(brs，2H)，3.57(m，ABq的低场分支，1H，3.41m，ABq的高场分支，1H)，2.74(brs，2H)，2.17(s，3H)，1.40(s，3H)，1.39(s，3H)。粗品硫代甲基化N-CBz保护的胺(4.07克，12.52毫摩尔)溶解在异丙醇(70毫升)中，加入氢氧化钾水溶液(2M，31.2毫升，62.4毫摩尔)。将该两相混合物回流4-5小时，然后冷却溶液，浓缩去除绝大部分异丙醇。产物用醚萃取，醚相干燥并浓缩，得到可流动的淡黄色浆状物(3.26克)。粗产物预吸收到二氧化硅上后通过快速色谱，先用DCM洗脱(去除苄基醇)，再用2％-到-6％[7M NH3/MeOH]的DCM溶液洗脱进行纯化，用茚三酮观察。得到淡黄色浆状物的(2R/S，3R/S)2，3-O-异亚丙基-2，3-二羟基-4-甲硫基丁基胺(1.84克，77％)。1H NMR(CDCl3)δ3.95(m，1H)，3.82(2x4线m，J 7.7，3.5Hz和7.6，3.5Hz，1H)，2.99(dd，J＝13.3，3.3Hz，1H)，2.83(dd，J＝13.3，6.3Hz，1H)，2.72(dxABq，J＝13.6，5.8Hz，2H)，2.19(s，3H)，1.42(s，3H)，1.42(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ109.4，82.8，77.8，44.6，37.4，27.7，27.6，16.9。ESMS MH+ 192.1057 C8H18NO2S理论值：MH+192.1057。
实施例20.7-合成N-[5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基氨基(2R/S，3R/S)-2，3-O-异亚丙基-4-甲硫基-2，3-丁二醇
向5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.95克，2.79毫摩尔)、(2R/S，3R/S)-2，3-O-异亚丙基-1-氨基-4-甲硫基-2，3-丁二醇(0.41克，2.14毫摩尔)在含无水硫酸镁(0.6克)的1，2-二氯乙烷(25毫升)的混合物中一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.59克，3.31毫摩尔)，将整个混合物在环境温度下搅拌过夜。混合物用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后干燥并浓缩(1.51克)。混合物在二氧化硅(预吸收)上通过快速色谱进行分馏，用DCM/乙酸乙酯/7M NH3-MeOH(10∶10∶0.15)洗脱，获得不流动浆状物的标题化合物(0.55克，49.9％)。1H NMR(CDCl3)δ8.48(s，1H)，7.34(s，1H)，7.34-7.19(m，5H)，5.74(s，2H)，4.51(s，2H)，4.07(s，2H)，3.98(brs，1H)，2.93(m，1H)，2.73(d，J＝5.3Hz，1H)，2.14(s，3H)，1.72(s，9H)，1.43(s，6H)。13C NMR(CDCl3)δ155.8，150.0，149.6，137.2，130.5，128.5，127.9，127.4，117.0，116.2，109.1，82.8，80.2，78.5，77.0，69.9，51.5，43.6，37.0，28.7，27.4，27.2，16.6。HR-ESMS MH+实测值：515.2675 C27H39N4O4S理论值：MH+515.2692。
实施例20.8-合成7-(((2RS，3RS)-2，3-二羟基-4-(甲硫基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
-78℃，保持在氩气下，向萘化锂[由锂(0.081克，11.7毫摩尔)与萘(1.94克，15.2毫摩尔)在无水THF(25毫升)溶液中反应制备]中，2分钟的时间内逐滴加入N-[5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基氨基(2R/S，3R/S)-2，3-O-异亚丙基-4-甲硫基-2，3-丁二醇(0.55克，1.08毫摩尔)的无水THF(5毫升)溶液。将该溶液在-78℃搅拌60分钟后，tlc[DCM 7M NH3-MeOH，9∶1)揭示原料全部消耗。加入2-3毫升水使混合物骤冷，然后升温至环境温度，然后浓缩至几乎干燥。然后混合物与甲醇氨溶液(7M，20毫升)搅拌15分钟，再次浓缩。粗产物重新溶解在DCM中，预吸收到二氧化硅上，然后通过用DCM7M NH3-MeOH，9∶1混合物洗脱进行分馏纯化，得到不流动胶状物的中间体N-(4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基(2R/S，3R/S)-2，3-O-异亚丙基-4-甲硫基-2，3-丁二醇(0.13克，35.6％)。1H NMR(CDCl3)δ7.92(s，1H)，7.41(s，1H)，4.04-3.82(m，2H)，3.95(s，2H)，2.93(dd，J＝12.3，3.3Hz，1H)，2.27 dd J＝12.3，7.5Hz，1H)，2.14(s，3H)，1.37(s，3H)，1.34(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ156.5，145.6，145.3，129.0，119.6，116.5，110.7，81.5，80.5，52.5，44.1，38.0，28.0，27.9，16.9。HR-ESMS MH+339.1487 C15H23N4O3S理论值：339.1491。
将N-[4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基]甲基氨基(2R/S，3R/S)-2，3-O-异亚丙基-4-甲硫基-2，3-丁二醇(0.13克，0.38毫摩尔)悬浮在MeOH(5毫升)中，向此悬浮液中加入乙酰氯(0.27毫升，3.8毫摩尔)的MeOH(5毫升)溶液，几分钟内形成溶液。继续搅拌5小时，然后溶液用A-21树脂中和，过滤，直接预吸收到二氧化硅上。粗产物通过用步阶式梯度洗脱的快速色谱进行分馏纯化，从DCM/MeOH(80∶20+17M NH3-MeOH)开始，以(60∶40+17M NH3-MeOH)结束，在一组选定的收集器中从洗脱溶剂缓慢沉淀进行回收。这样，分离得到无色固体的标题化合物(0.028克，22％)。1H NMR(d4-MeOH+DCl)δ9.14(s，1H)，7.94(s，1H)，4.57(s，2H)，4.14(m，1H)，3.72(td，J＝6.9，2.1Hz，1H)，3.32(m，1H)，2.74(dd，J＝13.9，3.7Hz，1H)，2.63(dd，J＝13.9，5.2Hz，1H)，2.14(s，3H)。13CNMR(d4-MeOH+DCl)δ153.0，147.0，133.9，133.0，120.0，105.1，72.7，69.2，51.7，42.2，38.2，16.3。HR-ESMS MH+ 299.1180 C12H18N4O3S理论值：299.1178。
实施例21-合成7-(((2RS，3RS)-3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
实施例21.1-合成(±)-((4R/S，5R/S)-2-苄基异噁唑烷-4，5-二基)二甲醇
室温下，将盐酸N-苄基羟胺(13.59克，85.15毫摩尔)和乙酸钠(9.31克，114毫摩尔)的混合物在乙醇(75毫升)中一起搅拌15分钟。加入37％甲醛水溶液(12.68毫升，170毫摩尔)，继续搅拌30分钟，然后加入顺-2-丁烯-1，4-二醇(4.67毫升，56.8毫摩尔)，将混合物在回流下加热16小时。蒸发溶剂，残留物溶解在CHCl3中，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂，得到无需进一步纯化即可使用的褐色浆状物(12.5克，98％)。试样通过在硅胶上色谱纯化(EtOAc，然后是EtOAc-MeOH，95∶5)，得到无色浆状物的(±)-((4R/S，5R/S)-2-苄基异噁唑烷-4，5-二基)二甲醇。13C NMR(CDCl3，参考CDCl3在77.0ppm的中线)δ136.5，129.0，128.4，127.6，78.5，62.4，61.3，60.4，56.8，45.8。
实施例21.2-合成(±)-(2R/S，3R/S)-3-((苄基氨基)甲基)-1，2，4-丁三醇
将锌粉(11.13克，170毫摩尔)加入实施例21.1的产物(12.5克，56.1毫摩尔)在乙酸(150毫升)的溶液中，放热至约67℃，将混合物在室温下搅拌1小时。过滤混合物，蒸发溶剂，残留物在硅胶上色谱纯化(CH2Cl2-7M NH3的MeOH溶液，9∶1，然后是8∶2)，得到无色浆状物的(±)-(2R/S，3R/S)-3-((苄基氨基)甲基)-1，2，4-丁三醇(5.8克，45％)。1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.23(m，5H)，4.11(br.s，4H)，3.76-3.66(m，5H)，3.61-3.51(m，2H)，2.81-2.70(m，2H)，1.82(六重峰，J＝5.5Hz，1H)。13C NMR(CDCl3，参考在77.0ppm的CDCl3的中线)δ138.8，128.5，128.2，127.3，73.3，64.5，63.1，54.0，49.7，43.3。
实施例21.3-合成(±)-(2R/S，3R/S)-3-((苄基((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)氨基)甲基)-1，2，4-丁三醇
将乙酰氯(0.021毫升，0.301毫摩尔)、5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.179克，0.602毫摩尔，根据G.B.Evans，R.H.Furneaux，A，Lewandowicz，V.L.Schramm和P.C.Tyler，J.Med.Chem.，2003，46，3412所述制备)、实施例21.2的产物(0.136克，0.602毫摩尔)和氰基硼氢化钠(0.057克，0.903毫摩尔)相继加入MeOH(6毫升)中。将该混合物在室温下搅拌64小时。蒸发溶剂，残留物在硅胶上色谱纯化(CH2Cl2-7M NH3的MeOH溶液，96∶4)，得到无色胶状物的(±)-(2R/S，3R/S)-3-((苄基((5-(苄氧基甲基)-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)氨基)甲基)-1，2，4-丁三醇(0.159克，52％)。1HNMR(CD3OD)δ8.43(s，1H)，7.58(s，1H)，7.32-7.12(m，10H)，5.75(s，2H)，4.50(s，2H)，4.10(s，3H)，3.85(s，2H)，3.71(dd，J＝10.9，4.8Hz，1H)，3.65-3.51(m，4H)，3.48-3.37(m，2H)，2.69-2.57(m，2H)，2.19(m，1H)。13C NMR(CD3OD，参考在49.0ppm的CD3OD的中线)δ157.9，151.3，150.9，139.8，138.7，135.1，130.4，129.3，128.7，128.6，128.2，116.8，114.2，78.6，74.1，71.6，65.4，63.7，59.9，55.5，54.3，48.5，42.1。+ESMS实测值：507.2604(M+H)+C28H35N4O5理论值：507.2607。
实施例21.4-合成7-(((2RS，3RS)-3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
将实施例21.3的产物(0.15克，0.296毫摩尔)在回流下在37％HCl水溶液(4毫升)中加热1.5小时。蒸发溶剂，得到乳膏状有色泡沫体，将其溶解在1∶1的MeOH∶水的混合物(10毫升)中，溶液用Amberlyst A21中和。滤出树脂，滤液中加入10％Pd-C(50毫克)，将混合物在从气球加入的氢气氛下搅拌1小时。在硅藻土上过滤出Pd-催化剂，蒸发溶剂。残留物在硅胶上经色谱纯化(CH2Cl2-MeOH-28％NH4OH水溶液，5∶4.5∶0.5)，得到无色固体的其游离碱形式的产物，将其溶解在过量5％HCl水溶液中，然后蒸发溶剂，得到无色固体的外消旋7-(((2RS，3RS)-3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐(26毫克，28％)。1H NMR(D2O，参考在2.225ppm的内标丙酮)δ8.82(s，1H)，7.86(s，1H)，4.48(s，2H)，3.81-3.72(m，2H)，3.65-3.49(m，3H)，3.31-3.19(m，2H)，2.25(m，1H)。13C NMR(D2O，参考在31.5ppm的内标丙酮)δ154.3，145.6，136.0，133.6，119.4，104.8，72.0，64.1，61.2，48.5，42.1，41.6。+ESMS实测值：283.1406 C12H19N4O4(M+H)+理论值：283.1406-游离碱。
实施例22-合成7-(((2RS，3SR)-3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00711
实施例22.1-合成N-苄基 反-4，5-二(羟甲基)异噁唑烷
将N-苄基羟胺(4.4克，27.7毫摩尔)和无水NaOAc(3.0克，36.7毫摩尔)在35毫升EtOH中的混合物在环境温度下搅拌15分钟，然后加入甲醛(4.1毫升，55.1毫摩尔)，将该混合物再搅拌30分钟。然后将(E)-丁-2-烯-1，4-二醇(1.63克，18.50毫摩尔)的乙醇(20毫升)溶液一次性引入该混合物中，所得溶液回流18小时。混合物冷却，浓缩，加入DCM中，溶液用碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，浓缩形成不流动油状物(immobile oil)(5.25克)。粗产物通过在二氧化硅上的色谱进行分馏纯化，先用EtOAc洗脱，再用5％MeOH/EtOAc洗脱，分离得到为不流动浆状物的标题化合物(1.95克)。仅用EtOAc作为洗脱液重复进行色谱纯化，分离得到均质浆状物的化合物(1.46克，35％)。1H NMR(CDCl3)δ7.41-7.22(m，5H)，4.10-3.82(m，2H)，3.80-3.60(m，4H)，3.5-2.3(m，5H)。13C NMR 137.0，129.3，128.8，128.0，81.6，64.1，63.0，58.7，47.7。
实施例22.2-合成(±)-3-[(苄基氨基)甲基]-1，2，4-丁三醇
将锌粉(0.47克，7.2毫摩尔)加入N-苄基 反-4，5-二(羟甲基)异噁唑烷(0.32克，1.43毫摩尔)的乙酸(6毫升)溶液中，将混合物剧烈搅拌1.5小时后，原料全部消耗。将混合物通过硅藻土柱过滤，滤液浓缩至干，重新溶解在DCM中，预吸收到二氧化硅上，进行色谱分馏纯化，用M/7M NH3-MeOH(4∶1)等度洗脱，得到不流动的浆状物的氨基三醇(0.26克，81％)。1H NMR(CDCl3)δ3.90(q，J＝4.0Hz，1H)，3.80(s，2H)，3.75(d，J＝5.1Hz，2H)，3.66(dq，J＝11.7，3.9Hz，2H)，2.94(d，J＝6.9Hz，2H)，1.78(m，1H)。13C NMR 138.9，129.1，128.7，127.9，73.7，65.4，65.3，54.4，48.9，43.9。-ESMS-净图谱仅显示MH+(226)和MNa+(248)，C12H19NO3。
实施例22.3-合成5-(苄氧基甲基)-4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛
向在冰浴中保持冷却的4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶(4.04克，26.3毫摩尔)在THF(60毫升)的悬浮液中，20分钟的时间内分批加入氢化钠(1.58克，60％分散体，39.5毫摩尔)，将该混合物再搅拌15分钟。然后在15分钟的时间内逐滴加入苄基氯甲基醚(6.87克，6.12毫升，26.3毫摩尔)，此时撤走冰浴，将混合物在环境温度下搅拌1小时。溶液在冰中重新冷却，用水(2毫升)骤冷，然后用(大量)DCM萃取混合物(通过硅藻土过滤使相界清楚)，有机相浓缩至干。粗产物重新溶解在DCM(100毫升)中，在冰浴中冷却后，然后分批加入NBS(4.7克，26.41毫摩尔)。将所得溶液搅拌2小时，同时升温至环境温度，然后直接浓缩到二氧化硅上。粗品在二氧化硅上通过色谱分馏纯化，用20％EtOAc/己烷洗脱，获得易于固化的油状物的标题化合物(5.28克，56.9％)。1H NMR(CDCl3)δ8.77(s，1H)，7.60(s，1H)，7.40-7.14(m，5H)，5.85(s，2H)，4.55(s，2H)。13C NMR(CDCl3)δ151.3，135.9，129.0，128.7，128.1，77.2，71.3：四重峰不明显(quats not evident)。
将7-溴-5-(苄氧基甲基)-4-氯-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶(3.73克，10.6毫摩尔)溶解在无水苯甲醚(48毫升)中，然后用Et2O(145毫升)稀释，冷却至-78℃，逐滴加入N-丁基锂(1.48M己烷溶液，9.2毫升，13.6毫摩尔)以使温度不超过-70℃。在2分钟的加入时间内，快速引入DMF(8.5毫升，0.123摩尔)(T≤-68°)，搅拌的同时使混合物升温至-40℃，此时加入水(20毫升)。然后用EtOAc萃取混合物，萃取物用盐水洗涤，然后干燥并浓缩，得到橙色固体。该物质的纯化可以通过在二氧化硅上色谱进行，用20→40％ EtOAc/己烷洗脱，得到灰白色固体的标题醛(中心馏份(heart fraction))(1.83克，57.3％)。1H NMR(CDCl3)δ10.35(s，1H)，8.89(s，1H)，8.14(s，1H)，7.35-7.20(m，5H)，5.90(s，2H)，4.60(s，2H)。
实施例22.4-合成(±)-3-{苄基([5-苄氧基甲基]-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)氨基甲基}-1，2，4-丁三醇
向(±)-3-[(苄基氨基)甲基]-1，2，4-丁三醇(0.25克，1.11毫摩尔)、5-苄氧基-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶7-甲醛(0.33克，1.11毫摩尔)在甲醇(11毫升)的溶液中加入40微升乙酰氯，然后一次性加入氰基硼氢化钠(0.105克，1.67毫摩尔)。将混合物在环境温度下搅拌三天，然后用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。溶液干燥并浓缩，然后通过在二氧化硅上色谱分馏纯化，用4％7M NH3-MeOH的DCM溶液洗脱，获得不流动的浆状物的标题化合物(0.31克，55％)。1HNMR(CDCl3)δ8.56(s，1H)，7.46-7.17(m，11H)，5.74(s，2H)，5.33(s，2H)，4.14(s，3H)，4.05(d，J＝14.2Hz，1H)，3.92(d，J＝14.2Hz，1H)，3.80-3.41(m，7H)，2.90(dd，J＝13.2，9.0Hz，1H)，2.72(dd，J＝12.9，5.1Hz，1H)，2.38(m，1H)。13C NMR(CDCl3)δ156.9，150.9，150.7，138.0，137.2，133.5，129.7，129.0，128.9，128.4，128.0，127.9，112.3，77.2，74.3，70.7，65.1，64.5，59.4，54.3，54.1，46.0，40.9。HR-ESMS MH+507.2592，C28H35N4O5理论值：507.2607Δ＝3.0ppm。
实施例22.5/22.6-合成7-(((2RS，3SR)-3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将3-{苄基([5-苄氧基甲基]-4-甲氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)氨基甲基}-1，2，4-丁三醇(0.31克，0.612毫摩尔)的溶液在浓盐酸(8毫升)中回流2.5小时，浓缩至干。残留物重新溶解在甲醇(10毫升)和水(2毫升)中，用A21树脂处理至中性。过滤回收树脂，滤液浓缩并重新溶解在甲醇(6毫升)和水(3毫升)中，加入10％Pd/C(0.1克)，混合物氢解2小时。溶液通过硅藻土滤垫过滤，浓缩形成不流动的浆状物(0.16克)。产物在二氧化硅上分馏纯化，用DCM/MeOH/0.88NH3(5∶4.5∶0.5)洗脱，回收得到无色固体的为游离碱形式的标题化合物(0.06克，34.7％)。1H NMR(D2O+DCl)δ8.64(s，1H)，7.76(s，1H)，4.40(s，2H)，3.75-3.48(m，5H)，3.27-3.20(m，2H)，2.13-2.02(m，1H)。13C NMR(D2O+DCl)δ153.73，144.6，136.3，132.5，118.5，104.28，71.2，63.9，61.4，47.2，41.2，40.2。HR-ESMSMH+283.1413 C12H19N4O4理论值：MH+283.1406Δ2.5ppm。
实施例23-合成7-(((2RS，3RS)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00751
实施例23.1-合成(±)-N-苄基-2-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-羟基丙-1-胺
将(±)-3-[(苄基氨基)甲基]-1，2，4-丁三醇(实施例22.2，0.97克，4.31毫摩尔)和(±)-樟脑磺酸一水合物(1.62克，6.47毫摩尔)的丙酮(30毫升)溶液在环境温度下搅拌三天，然后将溶液用DCM稀释，用碳酸氢钠溶液洗涤。将有机层干燥并浓缩形成浆状物(1.1克)，浆状物通过在二氧化硅上色谱分馏纯化，用EtOAc洗脱，得到可流动的黄色油状物的丙酮化合物(0.52克，45.6％)。1H NMR(CDCl3)δ7.26-7.07(m，5H)，3.92(m，2H)，3.74-3.46(m，5H)，2.94(dd，J＝12.0，3.0Hz，1H)，2.76(dd，J＝12.0，6.0Hz，1H)，1.76(m，1H)，1.28(s，3H)，1.22(s，3H)。13CNMR(CDCl3)δ139.6，128.9，128.6，127.7，109.3，75.6，68.4，66.0，54.6，51.2，43.5，27.0，25.8。LR-ESMS MH+266.1844。
实施例23.2-合成(±)-N-苄基-2(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-羟丙基氨基甲酸酯
在10％Pd/C(0.39克)的存在下，将(±)-N-苄基-2(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-羟基丙烷-1-胺(2.07克，7.8毫摩尔)在45毫升MeOH中的溶液氢解18小时后，无原料残留。将该溶液通过硅藻土滤垫过滤，浓缩，然后重新溶解在甲苯(13毫升)中。加入水(13毫升)，再加入碳酸钾(1.62克，11.7毫摩尔)和氯甲酸苄酯(50％w/w在甲苯中，2.64毫升，7.8毫摩尔)，将混合物剧烈搅拌3小时。混合物用EtOAc稀释，用碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，然后干燥并浓缩(2.47克)。通过在二氧化硅上色谱纯化，用40％EtOAc/己烷洗脱，回收CBz-保护的胺，得到无色浆状物的该化合物(2.12克，82％)。1H NMR(CDCl3)δ7.39(brs，5H)，5.24(m，1H)，5.14(s，2H)，4.08(m，2H)，3.73(m，1H)，3.62-3.34(m，4H)，3.26(t，J＝6.3Hz，1H)，1.83(m，1H)，1.42(s，3H)，1.34(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ158.3，136.7，129.0，128.6，128.5，109.3，75.7，68.5，67.5，61.0，45.6，39.3，27.0，25.8。LR-ESMSMNa+332.1180 C16H23NO5Na。
实施例23.3-合成(±)-2(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺
将甲磺酰氯(0.182毫升，2.33毫摩尔)加入冰冷却的(±)-N-苄基-2(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-羟丙基氨基甲酸酯(0.6克，1.94毫摩尔)和Et3N(0.41毫升，2.91毫摩尔)在DCM(8毫升)的溶液中，然后使该溶液升温至室温。1小时后，溶液用DCM稀释，用碳酸氢盐溶液洗涤，然后干燥并浓缩(0.87克)。将产物溶解在3.5毫升DMF(3.5毫升)中，然后加入硫代甲醇钠(0.272克，3.85毫摩尔)。继续搅拌2小时，然后将化合物用醚稀释，用水(×5)和盐水洗涤，然后干燥并浓缩形成油状物(0.70克)-NMR数据证实甲磺酸酯向硫代甲醇盐的转化。残留物溶解在异丙醇(12毫升)中，加入KOH(2M，5.4毫升)，溶液在回流下加热24小时。将溶液冷却，浓缩以去除绝大部分的异丙醇，此时加入Et2O，萃取产物。将有机相干燥并浓缩，产物通过二氧化硅上的色谱分馏纯化，先用DCM洗脱(以去除苄基醇)，再用4％ 7M NH3 MeOH/DCM洗脱，回收为淡黄色浆状物的标题化合物(0.32克，80％)。1H NMR(CDCl3)δ4.15(m，2H)，3.70(m，1H)，2.90(d，J＝5.1Hz，2H)，2.54(d，J＝2.6Hz，1H)，2.52(d，J＝1.0Hz，1H)，2.11(s，3H)，1.73(m，1H)，1.46(s，3H)，1.36(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ109.1，77.3，68.4，44.5，42.5，34.4，27.0，25.8，16.7。
实施例23.4-合成N-{(5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d}嘧啶-7-基}甲基-2-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺
向包含(±)-2(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺(0.37克，1.80毫摩尔)、5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.795克，1.3当量，2.34毫摩尔)的在1，2-二氯乙烷(15毫升)的混合物中一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.3当量，2.34毫摩尔，0.49克)，再加入0.5克无水硫酸镁。将混合物在环境温度下搅拌过夜，然后用DCM稀释，用碳酸氢钠溶液洗涤。将有机相干燥并浓缩，形成不流动的浆状物(1.25克)粗品。将该粗产物在DCM/EtOAc/7MNH3-MeOH(4.95∶4.95∶0.1)中制备的柱中在二氧化硅上色谱分馏纯化，粗品加入DCM的柱中，然后向前至极性较大的洗脱剂。分离得到不流动的浆状物的标题化合物(0.56克，58.8％)。1H NMR(CDCl3)δ8.46(s，1H)，7.36-7.18(m，6H)，5.74(s，2H)，4.47(s，2H)，4.21(q，J＝6.6Hz，1H)，4.07(dd J＝8.0，6.3Hz，1H)，3.99(s，2H)，3.67(t，J＝7.7Hz，1H)，2.86(m，2H)，2.55(d，J＝6.4Hz，2H)，2.07(s，3H)，1.69(s，9H)，1.36(s，3H)，1.32(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ156.1，150.4，149.87，137.6，130.7，128.8，128.2，127.8，117.4，116.8，109.0，83.1，77.6，77.4，70.2，68.1，50.0，44.2，42.1，34.9，29.1，26.9，25.8，16.7。
实施例23.5-合成N-{4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d}嘧啶-7-基}甲基-2-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺
-78℃、在保持氩气下，向萘化锂[由锂(0.073克，10.6毫摩尔)与萘(1.63克，12.7毫摩尔)在无水THF(25毫升)溶液中反应制备]溶液中，2分钟的时间内逐滴加入N-{(5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d}嘧啶-7-基}甲基-2-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺(0.56克，1.06毫摩尔)在3毫升THF中的溶液。-78℃搅拌1小时后，加水(2毫升)使溶液骤冷，然后将溶液升温至环境温度，再浓缩至干。搅拌混合物与7M NH3-MeOH 20分钟，然后再次浓缩。然后将粗产物重新溶解在DCM中，预吸收到少量二氧化硅上，然后通过在二氧化硅上色谱分馏纯化，先用DCM洗脱[以去除萘]，再用3％7MNH3-MeOH/DCM洗脱，得到不流动的浆状物的标题化合物(中心馏份)(0.1克，26％)。认为其纯度足以进行后续反应。1H NMR(CD3OD)δ7.88(s，1H)，7.38(s，1H)，4.11(m，2H)，3.94(s，2H)，3.68(m，1H)，2.86(d，J＝6.0Hz，2H)，2.53(m，2H)，2.06(s，3H)，1.96(m，1H)，1.32(s，3H)，1.29(s，3H)。13C NMR(CD3OD)δ156.5，145.3，143.1，128.8，119.7，116.5，110.4，79.6，69.5，51.5，44.3，42.9，35.9，27.2，26.0，16.5。HR-ESMS MH+ 353.1650 C16H25N4O3S理论值：MH+353.1647Δ0.8ppm。
实施例23.6-合成7-(((2RS，3RS)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
向搅拌的N-{4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d}嘧啶-7-基}甲基-2-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺(0.1克，0.28毫摩尔)在甲醇(7毫升)的悬浮液中加入乙酰氯(0.22克，2.8毫摩尔)的甲醇(3毫升)溶液，将该溶液在环境温度下搅拌2.5小时。加入Amberlyst A-21树脂，中和溶液后，滤出树脂，浓缩形成淡黄色胶状物(0.072克)。将其溶解在含水甲醇(1∶1)中，预吸收到二氧化硅上，在二氧化硅上进行色谱纯化。用组成从9∶1∶0.1到6∶4∶0.1的DCM/MeOH/0.88 NH3混合物梯度洗脱，得到在后馏份中沉淀物(游离碱)形式的标题化合物。过滤回收，干燥得到无色固体(0.026克)。1H NMR(CD3OD+DCl)δ7.93(s，1H)，7.42(s，1H)，3.94(s，2H)，3.82(q，J＝4.8Hz 1H)，3.58(m，2H)，2.89(m，2H)，2.66(dd J＝13.2，6.6Hz，1H)，2.55(dd J＝13.2，7.5Hz，1H)，2.13(s，3H)，1.94(m，1H).13CNMR(CD3OD+DCl)δ156.6，145.2，143.4，129.1，119.7，115.8，75.0，65.9，50.0，45.9，41.5，36.6，16.3。HR-ESMS MH+ 313.1332 C13H21N4O3S理论值：MH+313.1334Δ0.6ppm。
实施例24-合成7-(((2R，3S)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
Figure G2007800402949D00791
实施例24.1-合成(S)-2-氨基-2-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)乙醇
根据文献方法(A.Breuning，R.Vicik和T.Schirmeister，Tetrahedron：Asymm.，2003，14，3301)，将D-酒石酸二乙酯[(2S，3S)-2，3-二羟基琥珀酸二乙酯]转化为(2R，3S)-2-叠氮基-3-羟基琥珀酸二乙酯，然后根据S.Saito，T.Ishikawa，A.Kuroda，K.Koga和T.Moriwake，Tetrahedron，1992，48，4067所述合成相应的对映异构体的方法使其再转化为(R)-2-叠氮基-2-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)乙酸乙酯。根据实施例25.1中合成对映异构体所述相同的方法，使上述后一种化合物转化为(S)-2-氨基-2-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)乙醇。1H NMR与实施例25.1的对映异构体产物相同。
实施例24.2合成(S)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-羟乙基氨基甲酸苄基酯
以实施例25.2合成对映异构体所述相同的方法，将实施例24.1的产物转化为无色固体的(S)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-羟乙基氨基甲酸苄基酯。1H和13C NMR与实施例25.2的对映异构体相同。+ESMS实测值：318.1317(M+Na)+ C15H21NNaO5理论值：318.1317。[α]D 20+12.5(c 1.205，MeOH)。
实施例24.3-合成(R)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙基氨基甲酸苄基酯
根据实施例25.3合成对映异构体所述相同的方法，将实施例24.2的产物转化为无色固体的(R)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙基氨基甲酸苄基酯。1H NMR，13C NMR和熔点与实施例25.3的对映异构体产物相同。+ESMS实测值：348.1249(M+Na)+ C16H23NNaO4S理论值：348.1245。[α]D 20-31.9(c0.59，MeOH)。
实施例24.4-合成(R)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺
根据实施例25.4合成对映异构体所述相同的方法，将实施例24.3的产物转化为淡黄色油状物的(R)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺。1H和13C NMR与实施例25.4的对映异构体产物相同。+ESMS实测值：192.1064C8H18NO2S(M+H)+理论值：192.1058。[α]D 20-27.1(c 1.085，MeOH)。
实施例24.5-合成(R)-N-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺
根据实施例25.5合成对映异构体所述相同的方法，将实施例24.4的产物转化为淡黄色胶状物的(R)-N-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)-1-(S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺。1H和13CNMR与实施例25.5的对映异构体产物相同。+ESMS实测值：515.2697(M+H)+C27H39N4O4S理论值：515.2692。[α]D 20-5.4(c，0.445，MeOH)。
实施例24.6-合成7-(((2R，3S)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
根据实施例25.6合成对映异构体所述相同的方法，将实施例25.5的产物转化为7-(((2R，3S)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐。1H和13C NMR与实施例25.6的对映异构体产物相同。+ESMS实测值：299.1176 C12H19N4O3S(M+H)+游离碱理论值：299.1178。
实施例25-合成(2R，3S)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-4-(甲硫基)-1，2-丁二醇盐酸盐
Figure G2007800402949D00811
实施例25.1-合成(R)-2-氨基-2-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)乙醇
根据文献方法(A.Breuning，R.Vicik和T.Schirmeister，Tetrahedron：Asymm.，2003，14，3301)将L-酒石酸二乙酯[(2R，3R)-2，3-二羟基琥珀酸二乙酯]转化为(2S，3R)-2-叠氮基-3-羟基琥珀酸二乙酯，根据S.Saito，T.Ishikawa，A.Kuroda，K.Koga和T.Moriwake，Tetrahedron，1992，48，4067所述方法再转化为(S)-2-叠氮基-2-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)乙酸乙酯。将后一种化合物(1.8克，7.85毫摩尔)溶解在无水THF(12毫升)中，冰浴中冷却。加入氢化铝锂(31.4毫升，31.4毫摩尔，1M在乙醚中)，混合物升温至室温，搅拌30分钟，然后回流加热3小时。在冰浴和水(1.2毫升)中冷却该混合物，相继加入15％NaOH水溶液(1.2毫升)和水(4毫升)。混合物用乙醚稀释，通过硅藻土过滤，用热CHCl3(3×)洗涤硅藻土。将合并的滤液干燥(MgSO4)，过滤，蒸发溶剂，形成无色油状物。油状物在硅胶上进行色谱纯化(CH2Cl2-MeOH-28％NH4OH水溶液，96∶4∶0.5，然后是9∶1∶0.05)，得到淡黄色油状物，在Kugelrohr装置上以120℃/0.1mmHg蒸馏，得到无色油状物的(R)-2-氨基-2-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)乙醇(0.415克，61％)。1H NMR(CDCl3，参考在77.0ppm的CDCl3的中线)δ4.10-3.98(m，2H)，3.87(dd，J＝7.4，5.7Hz，1H)，3.71(dd，J＝10.9，4.4Hz，1H)，3.54(dd，J＝10.9，5.7Hz，1H)，2.95(m，1H)，1.94(brs，3H，交换至D2O)，1.42(s，3H)，1.35(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ109.0，77.8，66.5，64.4，54.6，26.5，25.2.+ESMS实测值：162.1130(M+H)+C7H16NO3理论值：162.1130。[α]D 20-9.5(c，1.47，CHCl3)。根据M.Banwell，C.De Savi，D.Hockless和K.Watson，Chem.Commun.，1998，645，由D-抗坏血酸制备的产物的旋光度，[α]D-10.5，c 1.5，CHCl3。
实施例25.2-合成(R)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-羟乙基氨基甲酸苄基酯
根据制备标题化合物的非对映异构体所述的方法(T.Inaba，Y.Yamada，H.Abe，S.Sagawa和H.Cho，J.Org.Chem.，2000，65，1623)，将氯甲酸苄酯(2.51毫升，7.44毫摩尔，50％在甲苯中)加入剧烈搅拌的实施例25.1的产物(1.2克，7.44毫摩尔)和碳酸钾(1.286克，9.31毫摩尔)在混合溶剂甲苯(12毫升)和水(12毫升)的溶液中。室温下继续搅拌16小时。加入三乙胺(10.46毫升，74.4毫摩尔)，水相用盐饱和，有机层用EtOAc稀释，分离，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂。残留物在硅胶上经色谱纯化(EtOAc-己烷，4∶6，然后是6∶4)，得到立即结晶的无色胶状物的(R)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-羟乙基氨基甲酸苄基酯(1.63克，74％)。1H NMR(CDCl3)δ7.38-7.28(m，5H)，5.38(brd，J＝6.3Hz，1H，交换至D2O)，5.10(s，2H，)，4.19(m，1H)，4.05(brdd，J＝8.5，6.5Hz，1H)，3.93-3.82(m，2H)，3.79-3.67(m，2H，D2O交换稍后简化)，2.52(brs，1H，交换至D2O)，1.42，(s，3H)，1.33(s，3H)。13C NMR(CDCl3，参考CDCl3在77.0ppm的中线)δ156.4，136.2，128.5，128.2，128.1，109.7，76.1，67.0，62.0，54.3，26.5，25.0。+ESMS实测值：318.1332(M+Na)+C15H21NNaO5理论值：318.1317。[α]D 20-12.5(c 1.22，MeOH)。
实施例25.3-合成(S)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙基氨基甲酸苄基酯
根据类似于制备标题化合物的非对映异构体的方法(T.Inaba，Y.Yamada，H.Abe，S.Sagawa和H.Cho，J.Org.Chem.，2000，65，1623)，0℃，将甲磺酰氯(0.470毫升，6.03毫摩尔)加入实施例25.2的产物(1.62克，5.49毫摩尔)和三乙胺(1.147毫升，8.23毫摩尔)在CH2Cl2(15毫升)的溶液中。将该混合物升温至室温，搅拌0.5小时后，用饱和NaHCO3洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂，得到粗品甲磺酸酯。将其溶解在DMF(5毫升)中，加入硫代甲醇钠(0.577克，8.23毫摩尔)。在室温下搅拌该混合物1小时后，用乙醚稀释(100毫升)，用水(5×5毫升)、盐水(1×)洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂，得到黄色胶状物。残留物在硅胶上色谱纯化(EtOAc-己烷，15∶85)，得到无色固体的(S)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙基氨基甲酸苄基酯(1.26克，71％)。将分析用样品由Et2O-己烷重结晶，得到无色细针状物。熔点：70-71℃。1HNMR(CDCl3)δ7.39-7.26(m，5H)，5.12(d，J＝12.3Hz，1H)，5.09(d，J＝12.3Hz，1H)，5.00(br.s，1H，交换至D2O)，4.13(m，1H)，4.05(dd，J＝8.5，6.3Hz，1H)，3.96-3.83(m，2H)，2.78(d，J＝5.4Hz，2H)，2.13(s，3H)，1.41(s，3H)，1.33(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ156.1，136.3，128.5，128.2，128.1，109.8，76.5，67.0(CH2 x2)，52.9，36.0，26.5，25.1，16.5。+ESMS实测值：348.1230(M+Na)+ C16H23NNaO4S理论值：348.1245。[α]D 20+32.4(c 0.555，MeOH)。
实施例25.4-合成(S)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺
将实施例25.3的产物(1.26克，3.87毫摩尔)溶解在异丙醇(21毫升)和2MKOH水溶液(10毫升)中，加热至80℃保持64小时。蒸发溶剂，残留物溶解在乙醚(100毫升)中，用水(×1)、盐水(×1)洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂。残留物在硅胶上色谱纯化(EtOAc-己烷，1∶1，然后是EtOAc-MeOH，99∶1)，得到淡黄色油状物的(S)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺(0.578克，78％)。1H NMR(CDCl3)δ4.07(dd，J＝7.6，6.1Hz，1H)，3.97(q，J＝6.2Hz，1H)，3.88(dd，J＝7.6，6.2Hz，1H)，2.99(m，1H)，2.81(dd，J＝13.4，3.4Hz，1H)，2.41(dd，J＝13.4，8.9Hz，1H)，2.12(s，3H)，1.42(s，3H)，1.41(s，2H，交换至D2O)，1.35(s，3H)。13C NMR(CDCl3，参考在77.0ppm的CDCl3的中线)δ109.2，78.8，66.6，52.4，39.4，26.6，25.2，15.8。+ESMS实测值：192.1051 C8H18NO2S(M+H)+理论值：192.1058。[α]D 20+27.9(c 0.92，MeOH)。
实施例25.5-合成(S)-N-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺
向实施例25.4的产物(0.1克，0.523毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.177克，0.523毫摩尔，根据G.B.Evans，R.H.Furneaux，A.Lewandowicz，V.L.Schramm和P.C.Tyler，J.Med.Chem.，2003，46，5271所述制备)在1，2-二氯乙烷(3毫升)的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.144克，0.680毫摩尔)和MgSO4(200毫克)。将该混合物在室温下搅拌16小时后，用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂。残留物通过硅胶上色谱纯化(EtOAc-己烷，9∶1)，得到淡黄色胶状物的(S)-N-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺(0.162克，60％)。1H NMR(CDCl3)δ8.47(s，1H)，7.35(s，1H)，7.32-7.22(m，5H)，5.73(s，2H)，4.47(s，2H)，4.19(q，J＝6.4Hz，1H)，4.12-4.06(m，2H)，3.98(d，J＝13.7Hz，1H)，3.89(dd，J＝8.0，6.4Hz，1H)，2.95-2.81(m，2H)，2.76(dd，J＝13.5，6.0Hz，1H)，2.10(s，3H)，2.04(br.s，1H，交换至D2O)，1.69，(s，9H)，1.40(s，3H)，1.34(s，3H)。13C NMR(CDCl3)，δ155.8，149.9，149.6，137.2，130.4，128.4，127.8，127.4，116.9，116.4，109.0，82.8，77.0，76.9，69.9，67.2，58.3，41.2，35.7，28.7，26.6，25.2，16.4。+ESMS实测值：515.2668(M+H)+C27H39N4O4S理论值：515.2692。[α]D 20+5.8(c，0.685，MeOH)。
实施例25.6-合成(2R，3S)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-4-(甲硫基)-1，2-丁二醇盐酸盐
将细小的锂片(0.016克，2.332毫摩尔)加入萘(0.374克，2.91毫摩尔)在无水THF(6毫升)的溶液中，室温下搅拌3小时，形成极暗绿色的溶液，从而制备萘化锂溶液(H.-J.Liu，J.Yip和K.-S.Shia，Tetrahedron Lett.，1997，38，2253)。将该溶液冷却至-78℃，加入在无水THF(1毫升)中的实施例25.5的产物(0.15克，0.291毫摩尔)。将该混合物搅拌10分钟后，加水(1毫升)，形成无色溶液，将该溶液升温至室温。蒸发溶剂，搅拌残留物与7M NH3-MeOH(10毫升)10分钟。蒸发溶剂，残留物用甲苯(2×10毫升)研磨，倾析溶剂并丢弃。残留物在硅胶上经色谱纯化(CH2Cl2-7M NH3的MeOH溶液，9∶1)，得到无色固体的7-(((S)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙基氨基)甲基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-醇(76毫克，0.225毫摩尔)。将其溶解在含乙酰氯(0.2毫升，2.81毫摩尔)的MeOH(10毫升)中，溶液在室温下搅拌4小时。用Amberlyst A21树脂中和后，将混合物过滤，蒸发溶剂。残留物在硅胶上经色谱纯化(CH2Cl2-MeOH-28％NH4OH水溶液85∶15∶2)，得到为无色固体的游离碱形式的标题化合物，用5％HCl水溶液使其转化为(2R，3S)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-4-(甲硫基)-1，2-丁二醇盐酸盐(41毫克，42％)。1HNMR(D2O，参考在2.225ppm的内标丙酮)，δ8.95(s，1H)，7.93(s，1H)，4.69(d，J＝14.5Hz，1H)，4.64(d，J＝14.5Hz，1H)，4.27(m，1H)，3.82-3.70(m，2H)，3.62(m，1H)，3.04-2.86(m，2H)，2.02(s，3H).13C NMR(D2O，参考在31.5ppm的内标丙酮)，δ154.0，145.9，134.7，133.9，119.5，104.4，69.7，63.1，59.1，40.8，31.3，15.6。+ESMS实测值：299.1192 C12H19N4O3S(M+H)+游离碱理论值：299.1178。[α]D 20+39.0(c0.6，MeOH)。
实施例26-合成7-(((2S，3S)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00861
实施例26.1-合成(R)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-羟乙基氨基甲酸苄基酯
根据T.Inaba，Y.Yamada，H.Abe，S.Sagawa和H.Cho，J.Org.Chem.，2000，65，1623的已知方法制备标题化合物的对映异构体。向搅拌的(R)-2-氨基-2-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)乙醇的苯甲酸盐(根据T.Inaba，Y.Yamada，H.Abe，S.Sagawa和H.Cho，J.Org.Chem.，2000，65，1623所述制备)(1.616克，5.70毫摩尔)在甲苯∶水(1∶1，20毫升)的溶液中，加入碳酸钾(0.985克，7.13毫摩尔)，再加入氯甲酸苄酯(0.90毫升，6.27毫摩尔)。将该反应混合物剧烈搅拌16小时后，加入三乙胺(0.08毫升，0.58毫摩尔)和氯化钠(1.5克，25.6毫摩尔)。30分钟后，分离各层，水相用甲苯萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)，浓缩得到无色油状物(1.926克，114％)。额外的物质体经测定为残留的甲苯。1H NMR与T.Inaba，Y.Yamada，H.Abe，S.Sagawa和H.Cho，J.Org.Chem.，2000，65，1623所述对映异构体相一致。
实施例26.2-合成(R)-2-(苄氧基羰基氨基)-2-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)乙基甲磺酸酯
0℃，向搅拌的实施例26.1的产物(1.926克，6.52毫摩尔)的甲苯(15毫升)溶液中加入三乙胺(1.09毫升，7.83毫摩尔)，再逐滴加入甲磺酰氯(0.56毫升，7.17毫摩尔)。加入过程完成后，使反应混合物升温至环境温度，搅拌1.5小时。将反应混合物用水和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发后得到无色油状物(2.24克，92％)。1H NMR(CDCl3)δ7.41-7.13(m，5H)，5.13(ABq，2H)，5.10(br.s，1H)，4.32(dt，J＝6.4，1.9Hz，1H)，4.26(d，J＝6.8Hz，2H)，4.07(dd，J＝8.3，6.8Hz，2H)，3.73(dd，J＝8.7，6.8Hz，1H)，2.98(s，3H)，1.43(s，3H)，1.33(s，3H)。
实施例26.3-合成(S)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙基氨基甲酸苄基酯
向搅拌的实施例26.2的产物(2.24克，6.00毫摩尔)在二甲基甲酰胺(10毫升)的溶液中加入硫代甲醇钠(0.547克，7.80毫摩尔)。将该反应混合物在环境温度下搅拌16小时。该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水(4×)洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。残留物在硅胶上经色谱纯化(乙酸乙酯-石油溶剂油，1∶4)，得到无色油状物(1.595克，82％)。1H NMR(CDCl3)δ7.35(m，5H)，5.12(ABq，2H)，5.07(br.s，1H)，4.47(brt，J＝7.2Hz，1H)，4.05(t，J＝7.2Hz，1H)，3.83(brq，J＝7.2Hz，1H)，3.70(dd，J＝8.3，6.8Hz，1H)，2.69(d，J＝7.6Hz，2H)，2.15(s，3H)，1.42(s，3H)，1.34(s，3H)。
实施例26.4-合成(S)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺
将搅拌的实施例26.3的产物(1.595克，4.90毫摩尔)在异丙醇(27毫升)和2M氢氧化钾(12毫升)中的溶液在80℃加热64小时。浓缩反应混合物以去除异丙醇。残留物用水稀释，用乙醚萃取(2×)，干燥(MgSO4)并蒸发。残留物在硅胶上经色谱纯化(乙酸乙酯-石油溶剂油，2∶1，然后是甲醇-乙酸乙酯，1∶99)，得到淡黄色油状物(0.575克，61％)。1H NMR(CDCl3)δ4.06(m，2H)，3.79(m，1H)，2.90(m，1H)，2.61(dd，J＝13.2，4.5Hz，1H)，2.44(dd，J＝13.2，8.7Hz，1H)，2.12(s，3H)，1.43(s，3H)，1.36(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ109.5，79.0，66.9，52.7，39.9，26.9，25.6，16.3，14.6。
实施例26.5-合成(S)-N-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺
将实施例26.4的产物(0.130克，0.68毫摩尔)、氰基硼氢化钠(0.071克，1.13毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.192克，0.57毫摩尔)的化合物从甲醇蒸发(3×)。残留物溶解在甲醇(10毫升)中，加入乙酸(5滴)。将该反应混合物在环境温度下搅拌2小时。反应混合物蒸发到硅胶上，经色谱纯化(甲醇-三乙胺-DCM，3∶1∶96)得到黄色油状物(0.274克，94％)。1HNMR表明产物包含一些(同极性)原料胺。1H NMR(CDCl3)δ8.47(s，1H)，7.38(s，1H)，7.34-7.22(m，5H)，5.73(s，2H)，4.47(s，2H)，4.34(q，J＝6.8Hz，1H)，4.10(ABq，2H)，4.03(m，1H)，3.82(m，1H)，2.87(q，J＝5.7Hz，1H)，2.72(dd，J＝13.2，5.7Hz，1H)，2.60(dd，J＝13.2，6.0Hz，1H)，2.05(s，3H)，1.69(s，9H)，1.39(s，3H)，1.34(s，3H)。
实施例26.6-合成7-(((S)-1-((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙基氨基)甲基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-醇
向搅拌的萘(0.682克，5.32毫摩尔)在THF(10毫升)的溶液中加入金属锂(0.030克，4.26毫摩尔)。将该混合物在环境温度搅拌直到浓绿色持续存在。使该混合物冷却至-30℃，逐滴加入实施例26.5的产物(0.274克，0.53毫摩尔)在THF(3毫升)的的溶液。将该反应混合物在-30℃搅拌1小时后，加入饱和氯化铵水溶液。反应混合物用乙醚萃取(3×)，干燥(MgSO4)并蒸发。残留物溶解在乙腈中，用石油洗涤(3×)并蒸发。残留物在甲醇(7N氨溶液)中搅拌，蒸发到二氧化硅上，经色谱纯化(甲醇[7N氨溶液]-DCM，1∶9)得到白色固体(0.055克，31％)。1H NMR(CD3OD)δ7.91(s，1H)，7.44(s，1H)，4.21(q，J＝6.8Hz，1H)，4.03(d，J＝6.0，2H)，4.01(m，1H)，3.73(dd，J＝8.3，6.8Hz，1H)，2.79(m，1H)，2.64(dd，J＝13.6，5.3Hz，1H)，2.53(dd，J＝13.6，6.8Hz，1H)，1.96(s，3H)，1.32(s，6H)。13C NMR(CD3OD)δ156.4，145.4，143.0，129.1，119.7，116.8，110.7，79.6，68.1，58.4，42.1，36.3，27.2，25.9，16.0。
实施例26.7-合成7-(((2S，3S)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
环境温度下，将实施例26.6的产物(0.055克，0.16毫摩尔)在1％氯化氢的甲醇溶液(10毫升)中搅拌1.5小时。该反应混合物用Amberlyst A-21离子交换树脂中和。过滤树脂，浓缩反应液。残留物经色谱纯化(甲醇[3.5N氨溶液]-DCM，1∶4)得到白色固体(0.035克，72％)。1H NMR(CD3OD)δppm 7.98(s，1H)，7.60(s，1H)，4.44(ABq，2H)，3.97(q，J＝3.8Hz，1H)，3.76(dd，J＝11.7，4.2Hz，1H)，3.67(dd，J＝11.7，3.8Hz，1H)，3.44(m，1H)，2.92(m，2H)，2.08(s，3H)。13C NMR(CD3OD)δ156.2，145.6，144.0，130.7，120.0，109.8，70.1，66.0，60.0，41.4，33.9，16.0。+ESMS实测值：299.1194(M+H)+C12H19N4O3S理论值：299.1178。
实施例27-合成7-(((2R，3R)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00901
实施例27.1-合成(S)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-羟乙基氨基甲酸苄基酯
根据T.Inaba，Y.Yamada，H.Abe，S.Sagawa和H.Cho，J.Org.Chem.，2000，65，1623所述的已知方法制备标题化合物。向搅拌的(S)-2-氨基-2-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)乙醇的苯甲酸盐(根据T.Inaba，Y.Yamada，H.Abe，S.Sagawa和H.Cho，J.Org.Chem.，2000，65，1623所述制备)(2.083克，7.35毫摩尔)在甲苯∶水(1∶1，20毫升)中的溶液中加入碳酸钾(1.27克，9.19毫摩尔)，再加入氯甲酸苄酯(1.16毫升，8.09毫摩尔)。将该反应混合物剧烈搅拌3小时后，加入三乙胺(0.10毫升，0.72毫摩尔)和氯化钠(1.5克，25.6毫摩尔)。10分钟后，分离各层，水相用甲苯萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)，浓缩得到无色油状物(2.17克，100％)。1H NMR与T.Inaba，Y.Yamada，H.Abe，S.Sagawa和H.Cho，J.Org.Chem.，2000，65，1623所述化合物相一致。
实施例27.2-合成(S)-2-(苄氧基羰基氨基)-2-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)乙基甲磺酸酯
0℃，向搅拌的实施例27.1的产物(2.17克，7.35毫摩尔)的甲苯(20毫升)溶液中，加入三乙胺(1.23毫升，8.82毫摩尔)，再逐滴加入甲磺酰氯(0.63毫升，8.08毫摩尔)。加入完成后，使反应混合物升温至环境温度，搅拌1.5小时。反应混合物用水和饱和碳酸氢钠洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发后得到无色油状物(2.58克，94％)。1H NMR(CDCl3)δ7.41-7.13(m，5H)，5.13(ABq，2H)，5.10(br.s，1H)，4.32(dt，J＝6.4，1.9Hz，1H)，4.26(d，J＝6.8Hz，2H)，4.07(dd，J＝8.3，6.8Hz，2H)，3.73(dd，J＝8.7，6.8Hz，1H)，2.98(s，3H)，1.43(s，3H)，1.33(s，3H)。
实施例27.3-合成(R)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙基氨基甲酸苄基酯
向搅拌的实施例27.2的产物(2.58克，6.91毫摩尔)的二甲基甲酰胺(10毫升)的溶液中加入硫代甲醇钠(0.630克，8.98毫摩尔)。将该反应混合物在环境温度下搅拌16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤(4×)，干燥(MgSO4)，蒸发。残留物在硅胶上经色谱纯化(乙酸乙酯-石油溶剂油，1∶4)得到无色油状物(2.007克，89％)。1H NMR(CDCl3)δ7.35(m，5H)，5.12(ABq，2H)，5.07(br.s，1H)，4.47(brt，J＝7.2Hz，1H)，4.05(t，J＝7.2Hz，1H)，3.83(brq，J＝7.2Hz，1H)，3.70(dd，J＝8.3，6.8Hz，1H)，2.69(d，J＝7.6Hz，2H)，2.15(s，3H)，1.42(s，3H)，1.34(s，3H)。
实施例27.4-合成(R)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺
将搅拌的实施例27.3的产物(2.007克，6.17毫摩尔)在异丙醇(34毫升)和2M氢氧化钾(15毫升)的溶液在80℃加热64小时。浓缩该反应混合物以去除异丙醇。残留物用水稀释，用乙醚萃取(3×)，干燥(MgSO4)并蒸发。残留物在硅胶上经色谱纯化(乙酸乙酯-石油溶剂油，2∶1，然后是甲醇-乙酸乙酯，2∶98)得到淡黄色油状物(0.913克，77％)。1H NMR(CDCl3)δ4.06(m，2H)，3.79(m，1H)，2.90(m，1H)，2.61(dd，J＝13.2，4.5Hz，1H)，2.44(dd，J＝13.2，8.7Hz，1H)，2.12(s，3H)，1.43(s，3H)，1.36(s，3H).13C NMR(CDCl3)δ109.5，79.0，66.9，52.7，39.9，26.9，25.6，16.3，14.6。
实施例27.5-(R)-N-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙胺
将实施例27.4的产物(0.130克，0.68毫摩尔)、氰基硼氢化钠(0.071克，1.13毫摩尔)和5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.192克，0.57毫摩尔)的混合物从甲醇蒸发(3×)。残留物溶解在甲醇(10毫升)中，加入乙酸(5滴)。将该反应混合物在环境温度下搅拌2小时。反应混合物蒸发到硅胶上，经色谱纯化(甲醇-三乙胺-DCM，3∶1∶96)得到橙色油(0.272克，93％)。1H NMR表明产物含有一些(同极性)原料胺。1H NMR(CDCl3)δ8.47(s，1H)，7.38(s，1H)，7.34-7.22(m，5H)，5.73(s，2H)，4.47(s，2H)，4.34(q，J＝6.8Hz，1H)，4.10(ABq，2H)，4.03(m，1H)，3.82(m，1H)，2.87(q，J＝5.7Hz，1H)，2.72(dd，J＝13.2，5.7Hz，1H)，2.60(dd，J＝13.2，6.0Hz，1H)，2.05(s，3H)，1.69(s，9H)，1.39(s，3H)，1.34(s，3H)。
实施例27.6-7-(((R)-1-((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2-(甲硫基)乙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
向搅拌的萘(0.677克，5.28毫摩尔)的THF(10毫升)溶液中加入金属锂(0.029克，4.23毫摩尔)。将该混合物在环境温度下搅拌直到浓绿色持续存在。使该混合物冷却至-78℃，逐滴加入实施例27.5的产物(0.272克，0.53毫摩尔)在THF(3毫升)中的溶液。将该反应混合物在-78℃搅拌1小时后，加入饱和氯化铵水溶液。将该反应混合物用乙醚萃取(3×)，干燥(MgSO4)并蒸发。残留物溶解在乙腈中，用石油溶剂油洗涤(3×)并蒸发。残留物在甲醇(7N氨溶液)中搅拌，蒸发到二氧化硅上，经色谱纯化(甲醇[7N氨溶液]-DCM，1∶9)得到白色固体(0.049克，27％)。1H NMR(CD3OD)δ7.91(s，1H)，7.44(s，1H)，4.21(q，J＝6.8Hz，1H)，4.03(d，J＝6.0，2H)，4.01(m，1H)，3.73(dd，J＝8.3，6.8Hz，1H)，2.79(m，1H)，2.64(dd，J＝13.6，5.3Hz，1H)，2.53(dd，J＝13.6，6.8Hz，1H)，1.96(s，3H)，1.32(s，6H)。13CNMR(CD3OD)δ156.4，145.4，143.0，129.1，119.7，116.8，110.7，79.6，68.1，58.4，42.1，36.3，27.2，25.9，16.0。
实施例27.7-合成7-(((2R，3R)-3，4-二羟基-1-(甲硫基)丁-2-基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
环境温度下，将实施例27.6的产物(0.049克，0.15毫摩尔)在1％氯化氢的甲醇溶液(10毫升)中搅拌3小时。反应混合物用Amberlyst A-21离子交换树脂进行中和。滤除树脂，浓缩反应液。残留物经色谱纯化(甲醇[3.5N氨溶液]-DCM，1∶4)得到白色固体(0.036克，83％)。1H NMR揭示该化合物与实施例26.7的对映异构体相同。+ESMS实测值：299.1180(M+H)+C12H19N4O3S理论值：299.1178。
实施例28-合成7-(((2RS，3SR)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
实施例28.1-合成(±)-(R/S)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-羟丙基氨基甲酸苄基酯
将实施例30.1的产物(0.5克，1.884毫摩尔)溶解在MeOH(10毫升)中，加入10％Pd-C(100毫克)，混合物在从气囊加入的氢气下搅拌16小时。通过硅藻土过滤，蒸发溶剂，得到无色胶状物(320毫克)。残留物溶解在甲苯(3毫升)和水(3毫升)混合物中后，加入碳酸钾(0.391克，2.83毫摩尔)和氯甲酸苄酯(0.637毫升，1.884毫摩尔，50％在甲苯中)，将两相混合物剧烈搅拌3小时。混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂。残留物在硅胶上经色谱纯化(EtOAc-己烷，6∶4)，得到淡黄色油状物的(±)-(R/S)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-羟丙基氨基甲酸苄基酯(0.423克，73％)。1HNMR(CDCl3)δppm 7.40-7.28(m，5H)，5.11(s，3H，D2O交换后变成s，2H)，4.17-4.05(m，2H)，3.75(brt，J＝6.2Hz，D2O交换后变成brd，3H)，3.31(brt，J＝6.2Hz，D2O交换后变成brd，2H)，2.77(brt，1H，交换至D2O)，1.87(m，1H)，1.41(s，3H)，1.34(s，3H)。13C NMR(CDCl3，参考在77.0ppm的CDCl3的中线)δ157.2，136.3，128.5，128.2，128.1，108.9，76.1，67.6，67.0，60.9，43.9，39.5，26.5，25.3.+ESMS实测值：332.1464(M+Na)+C16H23NaNO5理论值：332.1474。
实施例28.2-合成(±)-(S/R)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺
在冰浴中冷却的同时，将甲磺酰氯(0.121毫升，1.552毫摩尔)加入实施例28.1的产物(0.4克，1.293毫摩尔)和三乙胺(0.273毫升，1.940毫摩尔)在CH2Cl2(5毫升)的溶液中。使该混合物升温至室温，搅拌30分钟。混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂，得到粗产物甲磺酸酯。将其溶解在DMF(2毫升)，硫代甲醇钠(0.181克，2.59毫摩尔)中，将混合物在室温下搅拌1.5小时。加入乙醚(60毫升)，混合物用水(4×5毫升)、盐水(1×5毫升)洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂。残留物溶解在异丙醇(8毫升)和2M KOH水溶液(3.6毫升)的混合物中，加热至80℃保持64小时。蒸发溶剂，残留物溶解在乙醚(60毫升)中，用水(×1)、盐水(×1)洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂。残留物在硅胶上经色谱纯化(CH2Cl2-7M NH3的MeOH溶液，97∶3)，得到无色油状物的(±)-(S/R)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺(0.189克，71％)。1H NMR(CDCl3)δ4.20(q，J＝6.7Hz，1H)，4.06(dd，J＝8.1，6.4Hz，1H)，3.70(t，J＝7.7Hz，1H)，2.83-2.74(m，3H)，2.61(dd，J＝13.1，8.1Hz，1H)，2.13(s，3H)，1.79(m，1H)，1.41(s，3H)，1.35(s，3H)，1.21(b.s，2H，交换至D2O)。13C NMR(CDCl3)δ108.6，76.5，67.6，44.2，41.9，33.3，26.6，25.3，16.4。+ESMS实测值：206.1223(M+H)+C9H20NO2S理论值：206.1215。
实施例28.3-合成7-(((2RS，3SR)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
将三乙酰氧基硼氢化钠(0.134克，0.633毫摩尔)加入5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.165克，0.487毫摩尔，根据G.B.Evans，R.H.Furneaux，A.Lewandowicz，V.L.Schramm和P.C.Tyler，J.Med.Chem.，2003，46，5271所述制备)和实施例28.2的产物(0.1克，0.487毫摩尔)在1，2-二氯乙烷(4毫升)的溶液中。加入MgSO4(150毫克)，将混合物在室温下搅拌16小时。加入CH2Cl2，混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂。残留物在硅胶上经色谱纯化(EtOAc-CH2Cl2-7M NH3的MeOH溶液，4.95∶4.95∶0.1，然后是5.95∶3.95∶0.1)，得到黄色胶状物(191毫克)，1H NMR测定黄色胶状物由(±)-(S/R)-N-((5-苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺和约8重量％实施例28.2的产物构成。该黄色胶状物无需进一步纯化，将其溶解在无水THF(1毫升)中，加入-78℃的萘化锂溶液中[根据H.-J.Liu，J.Yip和K.-S Shia，TetrahedronLett.，1997，38，2253，由锂(0.023克，3.33毫摩尔)和萘(0.512克，3.99毫摩尔)在无水THF(8毫升)溶液中反应制备]，将暗绿色混合物搅拌10分钟。加水(2毫升)得到无色溶液，混合物升温至室温。蒸发溶剂，残留物与7M NH3-MeOH溶液(10毫升)搅拌10分钟。蒸发溶剂，残留物在硅胶上经色谱纯化(CH2Cl2，然后是CH2Cl2-7M NH3-MeOH，9∶1)得到中间体(±)-7(((S/R)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙基氨基)甲基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-醇(72毫克)。将后一种物质溶解在含乙酰氯(0.237毫升，3.33毫摩尔)的MeOH(10毫升)中，室温下搅拌4小时。溶液用Amberlyst A21树脂中和，过滤，蒸发溶剂。残留物在硅胶上色谱纯化(CH2Cl2-7M NH3-MeOH，8∶2)，得到无色固体的外消旋7-(((2RS，3SR)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(17毫克，16％)。1H NMR(D2O，参考在2.225ppm的内标丙酮)δ8.07(s，1H)，7.71(s，1H)，4.43(s，2H)，3.88(m，1H)，3.68-3.54(m，2H)，3.37-3.25(m，2H)，2.71(dd，J＝13.7，4.6Hz，1H)，2.47(dd，J＝13.7，9.3Hz，1H)，2.25(m，1H)，2.04(s，3H)。13C NMR(D2O，参考在31.5ppm的内标丙酮)δ156.3，145.1，144.1，132.2，119.0，107.0，73.0，63.5，48.6，42.3，39.1，32.8，15.8.+ESMS实测值：313.1324(M+H)+C13H21N4O3S理论值：313.1334。
实施例29-合成7-((苄基((2RS，3SR)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
Figure G2007800402949D00961
实施例29.1-合成(±)-(R/S)-3-(苄基氨基)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)丙-1-醇
向实施例21.2的产物(0.74克，3.28毫摩尔)在丙酮(15毫升)和2，2-二甲氧基丙烷(5毫升)的溶液中加入1R-(-)-樟脑磺酸(0.916克，3.94毫摩尔)，将该混合物在室温下搅拌1小时。加入三乙胺(0.916毫升，6.57毫摩尔)，蒸发溶剂。残留物溶解在CHCl3中，用10％Na2CO3水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂。残留物在硅胶上色谱纯化(CHCl3-EtOAc-MeOH，5∶2∶1)，得到为浆状物的(±)-(R/S)-3-(苄基氨基)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)丙-1-醇(0.55克，63％)。1H NMR(CDCl3)δ7.36-7.23(m，5H)，4.04-3.97(m，2H)，3.89(dd，J＝10.9，4.3Hz，1H)，3.82-3.62(m，4H)，3.10(br.s，2H)，2.79(dd，J＝11.8，4.0Hz，1H)，2.71(dd，J＝11.8，8.8Hz，1H)，1.94(m，1H)，1.39(s，3H)，1.33(s，3H)。13C NMR(CDCl3，参考在77.0ppm的CDCl3的中线)δ139.1，128.5，128.1，127.3，108.8，76.2，67.8，64.8，54.0，50.5，43.3，26.5，25.3。
实施例29.2-合成(±)-(S/R)-N-苄基-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺
将实施例30.1的产物(0.5克，1.884毫摩尔)和二碳酸二叔丁酯(0.452克，2.073毫摩尔)在MeOH(10毫升)中一起搅拌1小时。蒸发溶剂，将(±)-((R/S)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-羟丙基)氨基甲酸叔丁基苄基酯的残留物溶解在CH2Cl2(10毫升)中，加入三乙胺(0.394毫升，2.83毫摩尔)。在冰浴中冷却该混合物，逐滴加入甲磺酰氯(0.176毫升，2.261毫摩尔)。使混合物升温至室温，搅拌30分钟后，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂，得到粗产物(±)-(R/S)-3-(苄基(叔丁氧基羰基)氨基)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)丙基甲磺酸酯。将后者溶解在DMF(3毫升)中，加入硫代甲醇钠(0.264克，3.77毫摩尔)。室温下搅拌3小时后，将混合物用乙醚稀释(50毫升)，用水洗涤(4×5毫升)，干燥(MgSO4)，然后蒸发溶剂。残留物在硅胶上色谱纯化(EtOAc-己烷，15∶85)，得到无色浆状物的(±)-((S/R)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙基)氨基甲酸叔丁基苄基酯(421毫克)，将其溶解在CH2Cl2(10毫升)和TFA(1毫升)的混合物中搅拌70分钟。混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂。残留物在硅胶上经色谱纯化(甲苯-丙酮，13∶1)，得到淡黄色油状物的(±)-(S/R)-N-苄基-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺(0.13克，23％)。1HNMR(CDCl3)δ7.39-7.20(m，5H)，4.17(q，J＝6.8Hz，1H)，4.03(dd，J＝8.1，6.2Hz，1H)，3.77(s，2H)，3.68(t，J＝7.8Hz，1H)，2.78(dd，J＝13.1，4.3Hz，1H)，2.73-2.64(m，2H)，2.60(dd，J＝13.1 7.9Hz，1H)，2.11(s，3H)，1.92(m，1H)，1.70(br.s，1H，交换至D2O)，1.38(s，3H)，1.34(s，3H)。13C NMR(CDCl3，参考CDCl3在77.0ppm的中线)δ140.3，128.4，128.1，126.9，108.5，76.9，67.8，54.2，49.3，42.1，34.3，26.6，25.4，16.5。+ESMS实测值：296.1683 C16H26NO2S(M+H)+理论值：296.1684。
实施例29.3-合成(±)-(S/R)-N-苄基-N-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺
将三乙酰氧基硼氢化钠(0.140克，0.660毫摩尔)加入5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-甲醛(0.172克，0.508毫摩尔，根据G.B.Evans，R.H.Furneaux，A.Lewandowicz，V.L.Schramm和P.C.Tyler，J.Med.Chem.，2003，46，5271所述制备)和实施例30.2的产物(0.15克，0.508毫摩尔)在1，2-二氯乙烷(4毫升)的溶液中。加入MgSO4(200毫克)，将混合物搅拌4小时。混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发溶剂。残留物在硅胶上色谱纯化(EtOAc-己烷，25∶75)，得到黄色胶状物的(±)-(S/R)-N-苄基-N-((5-(苄氧基甲基)-4-叔丁氧基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基)-2-((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙-1-胺(0.2克，63％)。1H NMR(CDCl3)δ8.48(s，1H)，7.39-7.19(m，11H)，5.76(s，2H)，4.47(s，2H)，4.07-3.91(m，2H)，3.89(d，J＝14.3Hz，1H)，3.80(d，J＝14.3Hz，1H)，3.72(t，J＝7.6Hz，1H)，3.67(d，J＝13.8Hz，1H)，3.55(d，J＝13.8Hz，1H)，2.79(dd，J＝13.1，3.8Hz，1H)，2.60(dd，J＝12.9，6.5Hz，1H)，2.52(dd，J＝13.1，6.8Hz，1H)，2.43(dd，J＝12.9，7.2Hz，1H)，2.17-2.05(m，1H)，2.06(s，3H)，1.70(s，9H)，1.34(s，3H)，1.27(s，3H)。13C NMR(CDCl3，参考CDCl3在77.0ppm的中线)δ155.7，150.7，149.6，139.5，137.2，131.7，128.9，128.4，128.2，127.8，127.4，126.8，116.6，114.0，108.0，82.7，77.0，76.8，69.9，68.0，59.1，54.4，47.1，40.5，34.6，28.7，26.6，25.5，16.8。+ESMS实测值：619.3315 C35H47N4O4S(M+H)+理论值：619.3318。
实施例29.4-合成7-((苄基((2RS，3SR)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮
在氩气下，将细小锂片(0.018克，2.59毫摩尔)加入萘(0.414克，3.23毫摩尔)在无水THF(8毫升)的溶液中，室温下搅拌3小时，从而制备萘化锂溶液(H.-J.Liu，J.Yip和K.-S Shia，Tetrahedron Lett.，1997，38，2253)。使所得暗绿色溶液冷却至-78℃，加入溶解在THF(1.5毫升)中的实施例30.3的产物(0.2克，0.32毫摩尔)。10分钟后加入水(1毫升)，使混合物升温至室温，然后蒸发溶剂。残留物溶解在7M NH3-MeOH溶液(10毫升)中，室温下静置10分钟后，蒸发溶剂，残留物在硅胶上色谱纯化(CH2Cl2，然后是CH2Cl2-7M NH3的MeOH溶液，9∶1)得到黄色泡沫体的中间体(±)-7-((苄基((S/R)-2，((R/S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-3-(甲硫基)丙基)氨基)甲基)-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-醇(120毫克)。将后一种化合物的一部分(0.031克，0.07毫摩尔)溶解在2％ HCl-MeOH溶液(6毫升)中，搅拌30分钟后，用Amberlyst A21树脂中和。滤除树脂，蒸发溶剂，残留物在硅胶上色谱纯化(CH2Cl2-7M NH3的MeOH溶液，9∶1，然后是85∶15)，得到无色固体的外消旋7-((苄基((2RS，3SR)-3，4-二羟基-2-(甲硫基甲基)丁基)氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮(11毫克，39％)。1H NMR(CD3OD)δ7.89(s，1H)，7.38(s，1H)，7.37-7.20(m，5H)，3.93(d，J＝13.9Hz，1H)，3.78(d，J＝13.4Hz，1H)，3.72-3.64(m，2H)，3.45(d，J＝13.4Hz，1H)，3.41-3.28(m，2H+CD3OD)，2.74-2.52(m，3H)，2.39(dd，J＝13.2，7.8Hz，1H)，2.18(m，1H)，2.05(s，3H)。13C NMR(CD3OD，参考CD3OD在49.0ppm的中线)δ156.0，145.6，142.7，140.0，130.6，129.7，129.3，128.2，119.1，114.6，74.9，65.1，59.9，56.1，48.3，40.4，35.4，16.3。+ESMS实测值：403.1812(M+H)+C20H27N4O3S理论值：403.1804。
实施例30-(S)-7-(1-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)-2-羟乙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
Figure G2007800402949D00991
实施例30.1-合成(S)-1，3-二羟基丙-2-基(2-羟基-1-(4-氧代-4，5-二氢-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将二碳酸二叔丁酯(0.091克，0.416毫摩尔)加入(2S，3S，4R，5R)-2-(4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)-5-(羟甲基)吡咯烷-3，4-二醇盐酸盐(0.07克，0.231毫摩尔，根据G.B.Evans，R.H.Furneaux，G.J.Gainsford，V.L.Schramm和P.C.Tyler，Tetrahedron，2000，56，3053所述合成)和三乙胺(0.065毫升，0.462毫摩尔)在水(1毫升)和MeOH(3毫升)混合物的溶液中。将该溶液搅拌30分钟后，蒸发溶剂，得到116毫克无色固体，经1H NMR测定，该固体包含约78毫克，0.213毫摩尔的(2S，3S，4R，5R)-3，4-二羟基-2-(4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)-5-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，其余部分的盐酸三乙胺。将该混合物溶解在MeOH(4毫升)和水(3毫升)中，加入高碘酸钠(0.055克，0.255毫摩尔)。搅拌15分钟后，形成沉淀。加入硼氢化钠(0.024克，0.639毫摩尔)，将混合物搅拌15分钟后，西通过硅藻土过滤，蒸发溶剂。残留物通过在硅胶上色谱纯化(CH2Cl2-MeOH，85∶15)，得到无色固体的(S)-1，3-二羟基丙-2-基(2-羟基-1-(4-氧代-4，5-二氢-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.072克，92％)。1HNMR(CD3OD)δ7.89(s，1H)，7.50(br.s 1H)，5.32(br.s，0.5H)，5.08(br.s，0.5H)，4.28(br.s 1H)，4.17-3.50(br.m，6H)，1.39(br.d，9H)。+ESMS实测值：369.1760(M+H)+C16H25N4O6理论值：369.1774。[α]D 20+35.8(c，0.505，MeOH)。
实施例30.2-(S)-7-(1-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)-2-羟乙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐
将实施例31.1的产物(0.068克，0.185毫摩尔)溶解在MeOH(2毫升)和37％HCl(0.2毫升)混合物中。几分钟后，蒸发溶剂得到黄色泡沫体，由EtOH结晶形成无色固体的(S)-7-(1-(1，3-二羟基丙-2-基氨基)-2-羟乙基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮盐酸盐(42毫克，显微镜下观察发现75％是非常细小结晶物质)。熔点＞300℃。1H NMR(D2O+DCl，参考在2.225ppm的内标丙酮)δ8.95(s，1H)，7.96(s，1H)，5.09(t，1H，J＝4.7Hz)，4.24(dd，1H，J＝12.2，4.3Hz)，4.11(dd，1H，J＝12.2，5.1Hz)，3.97-3.77(m，4H)，3.46(五重峰，1H，J＝5.3Hz)。13C NMR(D2O+DCl，参考在31.5ppm的内标丙酮)δ154.0，146.0，133.4，132.5，119.7，106.6，62.1，60.1，59.3，59.1，54.7。+ESMS实测值：269.1239(M+H)+C11H17N4O4理论值：269.1250-游离碱形式。[α]D 20+24.1(c 0.435，H2O+1滴37％HCl)。
实施例31-抑制试验
表1所示抑制解离常数是PNP的肌苷磷酸解作用的常数，建立在不同抑制剂浓度测定的反应速率的基础上。25℃，将0.05微克人或镰状疟原虫嘌呤核苷磷酸化酶(分别是HsPNP和PfPNP；终浓度1.4nM)加入1mM肌苷的50mM KPO4，pH＝7.5缓冲液中开始反应，加入黄嘌呤氧化酶至终浓度60mU/mL。在偶合试验中，肌苷磷酸解作用形成的次黄嘌呤氧化成尿酸，然后在293nm分光光度法进行测定(尿酸消光系数ε293＝12.9mM-1)。根据方程υ＝(kcatxS)/(Km(1+I/Kd)+S)由发生慢起效抑制后的反应速率计算起效慢而结合牢固的抑制剂的解离常数，其中υ是慢起效抑制阶段达到平衡后的稳态反应速率，kcat是底物饱和时的速率，S是底物浓度，Km是肌苷的米氏常数(在所述条件下是38微摩尔)，I是抑制剂浓度，Kd是牢固抑制的PNP抑制剂复合物的平衡解离常数。对于无慢起效性质的抑制剂，采用初始反应速率，拟合相同的方程。
表1-人和疟原虫PNP的抑制常数
Figure G2007800402949D01021
Figure G2007800402949D01031
Figure G2007800402949D01041
Figure G2007800402949D01061
Figure G2007800402949D01071
实施例32-(2S，3R)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)-甲基氨基)-1，2，4-丁三醇(化合物17.3)的口服利用度
将25微升含50纳摩尔(2S，3R)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)-甲基氨基)-1，2，4-丁三醇(化合物17.3)在10％蔗糖中的溶液滴加到三只已禁食过夜的Balb-c小鼠的口腔中。对照组用25微升不含抑制剂的10％蔗糖处理。另一组三只小鼠经腹腔内注射100微升含50纳摩尔化合物17.3的磷酸盐缓冲盐水(PBS；137mM NaCl，10mM磷酸盐缓冲剂和2.7mM KCl)。从小鼠尾部收集少量血样(8微升)，加入到8微升含1U肝素和0.3％曲通(Triton)X-100的PBS中。将该混合物在冰上保存25分钟后立即测定，或储存在-80℃待以后分析。立即测定或-80℃储存后测定的样品的测定结果相同。对于全血样品的PNP催化活性，将3微升溶胞产物(lysate)样品加入含1mM肌苷、50mM磷酸盐，pH＝7.4和60mU/ml黄嘌呤氧化酶的完全反应混合物(体积1.0毫升)中。混合后，在293nm分光光度法监测反应进程。监测反应4分钟，测定嘌呤核苷磷酸化酶活性的初始速率。所有反应速率标准化为根据412和540nm处血红蛋白吸光度的酶活性，在用于酶分析混合物的相同测试杯中测定，4分钟分析过程后立即测定。图1显示了化合物17.3具有一定的口服利用度，在小鼠中能够抑制剂PNP持续24小时以上。
尽管已通过实施例描述了本发明，但应该知道，在不背离本发明范围的情况下可对其做出变化或修饰。此外，当存在特定特征的等价形式时，如果在说明书中特别指出，这些等价形式也包含在内。
工业应用
本发明涉及PNP和/或NH的抑制剂化合物。因此，预计所述化合物可用于治疗需要抑制PNP或NH的疾病。所述疾病包括：癌症、细菌感染、原生动物感染(包括疟原虫)和T-细胞介导的疾病。

Claims (13)

1.式的(I)化合物、或其互变异构体、或其药学上可接受的盐：
Figure FSB00000890644000011
式中，
R4是二羟基丙基、二羟基丁基、三羟基丁基、二羟基戊基或三羟基戊基；
A是CH；
B是OH；和
D是H或NH2。
2.如权利要求1，其特征在于，D是NH2。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，D是H。
4.权利要求1所述的化合物，具有以下结构式：
Figure FSB00000890644000012
5.如权利要求1所述的化合物，所述化合物是：
外消旋-(2R，3S)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇；
(R)3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2-丙二醇盐酸盐；
(2R，3R)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)甲基氨基)-1，2，4-丁三醇盐酸盐；
2-氨基-7-((2，4-二羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((2，4-二羟基丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((3，4-二羟基-2-(羟甲基)丁基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
2-氨基-7-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮；
7-((3-羟基-2-(羟甲基)丙基氨基)甲基)-3H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4(5H)-酮。
6.权利要求1-5中任一项所述化合物的光学异构体和立体异构体。
7.如权利要求1所述的化合物，其为具有下式的化合物(2S，3R)-3-((4-羟基-5H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-7-基)-甲基氨基)-1，2，4-丁三醇：
Figure FSB00000890644000021
8.一种药物组合物，所述组合物包含药学有效量的如权利要求1-7中任一项所述的化合物。
9.用作药物的权利要求1-7中任一项所述化合物。
10.用于治疗需要抑制嘌呤核苷磷酸化酶或核苷水解酶的疾病或病症的权利要求1-7中任一项所述化合物。
11.权利要求1-7中任一项所述化合物用于制造治疗需要抑制嘌呤核苷磷酸化酶或核苷水解酶的疾病或病症的药物的用途。
12.权利要求10所述的化合物或权利要求11所述的用途，所述疾病或病症是癌症、细菌感染、原生动物感染或T-细胞介导的疾病或病症。
13.权利要求10-12中任一项所述的化合物或用途，所述嘌呤核苷磷酸化酶是简称为Hs PNP的人嘌呤核苷磷酸化酶或简称为PfPNP的镰状疟原虫的嘌呤核苷磷酸化酶。
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Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100379750C (zh) 2002-08-21 2008-04-09 阿尔伯爱因斯坦医科叶希瓦大学 核苷磷酸化酶和核苷酶抑制剂
NZ533360A (en) 2004-06-04 2007-02-23 Ind Res Ltd Improved method for preparing 3-hydroxy-4-hydroxymethyl-pyrrolidine compounds
WO2007016291A2 (en) * 2005-07-27 2007-02-08 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Transition state structure of 5'-methylthioadenosine/s-adenosylhomocysteine nucleosidases
WO2007097643A1 (en) * 2006-02-22 2007-08-30 Industrial Research Limited Analogues of coformycin and their use for treating protozoan parasite infections
JP2009527550A (ja) 2006-02-24 2009-07-30 アルバート アインシュタイン カレッジ オブ メディシン オブ イエシバ ユニバーシティ 癌を処置する方法
EP2049543B1 (en) * 2006-09-07 2014-11-05 Callaghan Innovation Research Limited Acyclic amine inhibitors of 5'-methylthioadenosine phosphorylase and nucleosidase
DK2114925T3 (da) 2006-12-22 2012-05-29 Ind Res Ltd Azetidin-analoger af nucleosidase- og phosphorylase-inhibitorer
US20090247750A1 (en) * 2008-03-28 2009-10-01 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Process for preparing nucleoside analogs
US20110190265A1 (en) * 2008-09-22 2011-08-04 Schramm Vern L Methods and compositions for treating bacterial infections by inhibiting quorum sensing
AU2010271532B2 (en) 2009-07-17 2016-03-03 Albert Einstein College Of Medicine, Inc. 3-hydroxypyrrolidine inhibitors of 5'-methylthioadenosine phosphorylase and nucleosidase
AR077898A1 (es) 2009-08-26 2011-09-28 Nycomed Gmbh Metilpirrolopirimidincarboxamidas
JP6267863B2 (ja) 2009-10-16 2018-01-24 メリンタ セラピューティクス，インコーポレイテッド 抗微生物性化合物および抗微生物性化合物の製造方法および使用方法
KR20180051676A (ko) 2009-10-16 2018-05-16 멜린타 테라퓨틱스, 인크. 항미생물성 화합물 및 이의 제조 방법 및 사용 방법
MX339000B (es) 2009-10-16 2016-05-09 Melinta Therapeutics Inc Compuestos antimicrobianos y metodos para fabricar y utilizar los mismos.
WO2012051570A1 (en) 2010-10-15 2012-04-19 Shanta Bantia Methods and compositions for inhibition of polymerase
WO2012074912A1 (en) * 2010-11-29 2012-06-07 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Methods, assays and compounds for treating bacterial infections by inhibiting methylthioinosine phosphorylase
EA023283B1 (ru) * 2010-11-30 2016-05-31 Адэссо Эдванст Материалс Уси Ко., Лтд. Новые вещества для повторно перерабатываемых эпоксидных смол
PT2697229T (pt) * 2011-04-15 2018-04-13 Melinta Therapeutics Inc Compostos antimicrobianos e seus métodos de fabrico e de utilização
WO2012150866A1 (en) * 2011-05-03 2012-11-08 Industrial Research Limited Phosphoribosyltransferase inhibitors and uses thereof
RU2578460C2 (ru) 2011-08-10 2016-03-27 Адосиа Приемлемый для инъекций раствор по меньшей мере одного базального инсулина
EP2814461B1 (fr) 2012-01-09 2019-07-24 Adocia Solution injectable a ph 7 comprenant au moins une insuline basale dont le pi est compris entre 5,8 et 8,5 et un co-polyaminoacide substitue
WO2014025842A1 (en) 2012-08-07 2014-02-13 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Treatment of helicobacter pylori infections
US20150314003A2 (en) 2012-08-09 2015-11-05 Adocia Injectable solution at ph 7 comprising at least one basal insulin the isoelectric point of which is between 5.8 and 8.5 and a hydrophobized anionic polymer
FR3001895B1 (fr) 2013-02-12 2015-07-03 Adocia Solution injectable a ph7 comprenant au moins une insuline basale dont le point isoelectrique est compris en 5,8 et 8,5 et un compose anionique porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes
EP3010340A4 (en) * 2013-06-22 2017-08-02 Nitor Therapeutics Compositions and methods for potentiating immune response, enhancing immunotherapy, and increasing vaccine potency
PT3019503T (pt) 2013-07-12 2017-11-27 Gilead Sciences Inc Compostos carbamoílpiridona- policíclicos e seu uso para o tratamento de infecções por hiv
NO2865735T3 (zh) 2013-07-12 2018-07-21
CA2923179A1 (en) 2013-09-09 2015-03-12 Melinta Therapeutics, Inc. Antimicrobial compounds and methods of making and using the same
CA2923214A1 (en) 2013-09-09 2015-03-12 Melinta Therapeutics, Inc. Antimicrobial compounds and methods of making and using the same
SG10201806381VA (en) 2014-02-12 2018-08-30 Albert Einstein College Medicine Inc Treatment of h. pylori infections using mtan inhibitors
EP3268370A4 (en) 2015-03-11 2018-08-22 Melinta Therapeutics, Inc. Antimicrobial compounds and methods of making and using the same
WO2017155886A1 (en) 2016-03-06 2017-09-14 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treatment of zika virus infection
US10472312B2 (en) * 2016-03-15 2019-11-12 Shionogi & Co., Ltd. Method for producing phenoxyethanol derivative
CN113045484B (zh) * 2019-12-27 2024-01-26 南京药石科技股份有限公司 一种2-氨基-2-(1-甲基-4-哌啶基)丙烷-1-醇的制备方法
CN111320634A (zh) * 2020-04-14 2020-06-23 浙江工业大学 一种乙酰氧取代的吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物的制备方法

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0920777A (ja) * 1995-06-30 1997-01-21 Nippon Paper Ind Co Ltd 新規なプリンヌクレオシド誘導体、その製造方法及びその誘導体を有効成分とする酵素阻害剤
WO1997031008A1 (en) * 1996-02-23 1997-08-28 Industrial Research Limited Enzyme detection/assay method and substrates
US5985848A (en) * 1997-10-14 1999-11-16 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Inhibitors of nucleoside metabolism
US6228741B1 (en) 1998-01-13 2001-05-08 Texas Instruments Incorporated Method for trench isolation of semiconductor devices
EP1165564B1 (en) 1999-04-08 2009-03-11 Industrial Research Limited Process for preparing inhibitors of nucleoside metabolism
US6448799B1 (en) * 1999-09-30 2002-09-10 Hitachi Electronics Engineering Co., Ltd. Timing adjustment method and apparatus for semiconductor IC tester
US7109331B2 (en) * 2000-08-29 2006-09-19 Industrial Research Limited 5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine nucleoside metabolism inhibitors
US6458799B1 (en) 2000-08-31 2002-10-01 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Deazaguanine analog, preparation thereof and use thereof
JP2002296365A (ja) * 2001-03-29 2002-10-09 Seiko Epson Corp 電子機器、電子制御式機械時計、電子機器の制御方法
TW200306191A (en) 2002-02-22 2003-11-16 Teijin Ltd Pyrrolopyrimidine derivatives
US7098334B2 (en) * 2002-03-25 2006-08-29 Industrial Research Limited 4-amino-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine inhibitors of nucleoside phosphorylases and nucleosidases
CN100379750C (zh) * 2002-08-21 2008-04-09 阿尔伯爱因斯坦医科叶希瓦大学 核苷磷酸化酶和核苷酶抑制剂
GB0301736D0 (en) 2003-01-24 2003-02-26 Xenova Ltd Pharmaceutical compounds
NZ523970A (en) 2003-02-04 2005-02-25 Ind Res Ltd Process for preparing inhibitors of nucleoside phoshorylases and nucleosidases
NZ533360A (en) * 2004-06-04 2007-02-23 Ind Res Ltd Improved method for preparing 3-hydroxy-4-hydroxymethyl-pyrrolidine compounds
JP2008508287A (ja) 2004-07-27 2008-03-21 バイオクリスト・フアーマシユーテイカルズ・インコーポレイテツド ５’−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ及び５’メチルチオアデノシン／ｓ−アデノシルホモシステインヌクレオシダーゼの阻害剤
NZ540160A (en) 2005-05-20 2008-03-28 Einstein Coll Med Inhibitors of nucleoside phosphorylases
WO2007016291A2 (en) 2005-07-27 2007-02-08 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Transition state structure of 5'-methylthioadenosine/s-adenosylhomocysteine nucleosidases
NZ544187A (en) 2005-12-15 2008-07-31 Ind Res Ltd Deazapurine analogs of 1'-aza-l-nucleosides
AU2006327069A1 (en) * 2005-12-23 2007-06-28 Novartis Ag Condensed heterocyclic compounds useful as DPP-IV inhibitors
JP2009527550A (ja) 2006-02-24 2009-07-30 アルバート アインシュタイン カレッジ オブ メディシン オブ イエシバ ユニバーシティ 癌を処置する方法
WO2007097648A1 (en) 2006-02-24 2007-08-30 Industrial Research Limited Methods of treating diseases using inhibitors of nucleoside phosphorylases and nucleosidases
EP2049543B1 (en) 2006-09-07 2014-11-05 Callaghan Innovation Research Limited Acyclic amine inhibitors of 5'-methylthioadenosine phosphorylase and nucleosidase
CA2663562A1 (en) 2006-09-26 2008-04-03 Vern L. Schramm Transition state structure of human 5'-methylthioadenosine phosphorylase
DK2114925T3 (da) 2006-12-22 2012-05-29 Ind Res Ltd Azetidin-analoger af nucleosidase- og phosphorylase-inhibitorer
WO2009082247A1 (en) 2007-12-21 2009-07-02 Industrial Research Limited Process for preparing immucillins having a methylene link
US20110190265A1 (en) 2008-09-22 2011-08-04 Schramm Vern L Methods and compositions for treating bacterial infections by inhibiting quorum sensing
AU2010271532B2 (en) 2009-07-17 2016-03-03 Albert Einstein College Of Medicine, Inc. 3-hydroxypyrrolidine inhibitors of 5'-methylthioadenosine phosphorylase and nucleosidase

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Semeraro et al..Simplified analogues of immucillin-G retain potent human purine nucleoside phosphorylase inhibitory activity..《Journal of Medicial Chemistry》.2006,第49卷6037-6045.
Simplified analogues of immucillin-G retain potent human purine nucleoside phosphorylase inhibitory activity.;Semeraro et al.;《Journal of Medicial Chemistry》;20061231;第49卷;6037-6045 *

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