KR101433621B1

KR101433621B1 - 누클레오시드 포스포릴라아제 및 히드롤라아제의 비고리형 아민 억제제

Info

Publication number: KR101433621B1
Application number: KR1020097006628A
Authority: KR
Inventors: 케이쓰 클린치; 게리 브라이언 에반스; 리차드 허버트 퍼눅스; 피터 마이클 켈리; 번 엘. 슈람; 피터 찰스 타일러; 안쏘니 데이비드 울하우스; 쉬발리 에쉬윈 굴랍
Original assignee: 알버트 아인슈타인 컬리지 오브 메디신 오브 예쉬바 유니버시티; 인더스트리얼 리서치 리미티드
Priority date: 2006-09-07
Filing date: 2007-09-07
Publication date: 2014-08-27
Also published as: KR20090069281A; CN101528749A; AU2007293774B2; AU2007293774C1; ATE502038T1; DK2057165T3; RS51864B; CY1111507T1; CA2662628A1; WO2008030119A9; JP5388067B2; EP2057165A4; HRP20110408T1; US8853224B2; JP2010502696A; SI2057165T1; AU2007293774A1; CA2662628C; PT2057165E; US20110130412A1

Abstract

본 발명은 퓨린 누클레오시드 포스포릴라아제(PNP) 및/또는 누클레오시드 히드롤라아제(NH)의 억제제인 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 암, 세균 감염, 원충 감염, 및 T-세포 매개된 질환을 포함하는 질환 및 감염증의 치료에서의 이들 화합물의 용도, 및 이들 화합물을 함유하는 약제 조성물에 관한 것이다.

Description

누클레오시드 포스포릴라아제 및 히드롤라아제의 비고리형 아민 억제제{ACYCLIC AMINE INHIBITORS OF NUCLEOSIDE PHOSPHORYLASES AND HYDROLASES}

본 발명은 일반적으로 특정 누클레오시드 유사체, 이들 화합물의 약제로서의 용도, 이들 화합물을 함유하는 약제 조성물, 이들 화합물의 제조 방법, 및 퓨린 누클레오시드 포스포릴라아제 및 누클레오시드 히드롤라아제의 억제가 요망되는 질환 또는 병태의 치료 방법에 관한 것이다.

미국 특허 제 5,985,848호, 제 6,066,722호 및 제 6,228,741호는 퓨린 누클레오시드 포스포릴라아제(PNP) 및 퓨린 포스포리보실-트랜스퍼라아제(PRT)의 억제제인 누클레오시드 유사체를 기술하고 있다. 상기 유사체는 기생충 감염, T-세포 암, 자가면역 질환 및 염증 질환을 치료하는데 유용하다. 상기 유사체는 또한 기관 이식에서의 면역억제에 유용하다.

미국 특허 제 6,693,193호는 특정 PNP 억제제 화합물의 제조 방법을 기술하고 있다. 이 출원은 이 화합물을 PNP 억제제로 인식하고 있으며, 이들을 제조하는 더욱 간편한 방법에 대한 요구를 다루고 있다. 미국 특허 출원 제 10/363,424호는 PNP 및 PRT의 억제제인 추가의 누클레오시드 유사체를 기술하고 있다.

PNP는, 예를 들어 구아닌 및 히폭산틴의 리보- 및 데옥시리보누클레오시드를 가인산분해에 의해 절단시키는 것(phosphorolytic cleavage)을 촉매화하여 상응하는 당-1-포스페이트 및 구아닌, 히폭산틴 또는 다른 퓨린 염기를 생성한다.

PNP가 결핍된 사람은 자극된 T 림프구의 증식을 억제하는 dGTP의 축적으로 말미암아 특정 T-세포 면역결핍을 갖게 된다. 따라서, PNP 억제제는 면역억제성이며, T-세포 암 및 T-세포 증식성 질환에 대해 활성을 나타낸다.

누클레오시드 히드롤라아제(NH)는 누클레오시드의 가수분해를 촉매화한다. 이들 효소는 포유동물에서는 확인되지 않으나, 몇몇의 원생동물 기생충에서 누클레오시드 구제(salvage)를 위해서 필요하다. 몇몇의 원생동물 기생충은 이러한 목적을 위해 누클레오시드 히드롤라아제 대신에 또는 이에 추가하여 누클레오시드 포스포릴라아제를 이용한다. 누클레오시드 히드롤라아제 및 포스포릴라아제의 억제제는 기생충의 대사를 방해할 것으로 예상될 수 있으며, 따라서 원생동물 기생충에 대해 유용하게 사용될 수 있다.

상기 참조된 특허 명세서에 기술된 화합물의 이미노 당 부분은 C-1과 C-4 사이에 위치한 질소 원자를 지녀서 1,4-디데옥시-1,4-이미노-D-리비톨 화합물을 형성한다. 리비톨 고리 내에서 질소 원자의 위치는 PNP 및 NH 효소로의 결합을 위해 중요할 수 있다. 또한, 당 부분과 누클레오시드 염기 유사체 사이의 연결부(link)의 위치는 효소 억제 활성을 위해 중요할 수 있다. 상기 기술된 화합물은 당 고리의 C-1 위치에서 그러한 연결부를 갖는다.

본 출원인은 다른 누클레오시드 포스포릴라아제, 포스포리보실트랜스퍼라아제, 및 히드롤라아제 억제제를 또한 개발하였는데, 여기서 당 고리 내의 질소 원자 의 위치는 가변하며, 또한 여기서 2개의 질소 원자가 당 고리의 일부를 형성한다. 당 부분과 염기 유사체를 연결시키는 대안적인 방법 또한 연구되어 왔고, 결과적으로 당 부분이 메틸렌 가교를 통해 누클레오시드 염기 유사체로 연결되는 일 부류의 억제제가 얻어졌다. 이들 다른 억제제는 미국 특허 출원 제 10/395,636호에 기술되어 있다.

현재까지, 상기 화합물의 이미노 당 고리의 3차원 구조가 PNP 및 NH로의 효과적인 결합 및 이에 따라 이들 효소의 억제를 위해 중요하다는 것이 고려되었다. 상기 고리 구조는, 효소와 상호작용하는 경우에 중요한 작용기, 예컨대 이미노 질소 및 다양한 히드록실 기가 이용될 수 있는 공간적 위치를 억제한다. 이들 입체장애(steric constraint)는 이전에는 효소의 활성 부위에 상기 화합물을 결합시키는데 필수적인 것으로 생각되었다. 상기한 입체 장애가 존재하지 않는 경우, 화합물은 효소 활성 부위로의 유능한 결합제인 것으로 예측되지 않을 것이고, 결과적으로 효소의 효과적인 억제제이지는 않을 것이다.

이미노 당 고리가 효과적인 효소를 위해 중요하다는 견해는, 사람 및 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum) PNP와의 전이 상태 유사체 상호작용에 대한 연구를 기술하고 있는 문헌(J. Biol. Chem., 2005, 280, 30320-30328)에 의해 강화된다. 다양한 누클레오시드 유사체에 대한 이들 PNP에 대한 억제 활성이 설명된다. 다수의 유사체의 구조는 이미노 당 고리를 함유한다. 고리가 사실상 개방되어 아미노 질소 상에서 히드록실에틸 및 히드록실프로필 치환기를 제공하는 2개의 화합물이 설명된다.

문헌(J. Med. Chem., 2006, 49, 6037-6045)은 또한 몇몇이 이미노 당 고리 부분을 포함하며 몇몇은 비고리형 N-히드록시에틸 아미노 기를 보유하는 다수의 PNP 억제제 화합물을 기술하고 있다. PNP 억제 활성을 나타내지 않는 그러한 화합물은 단지 중간 정도의 효능(마이크로몰 또는 나노몰수준의 억제 상수)을 갖는 것으로 생각된다.

PNP 효소에 결합하는데 필요한 화합물의 구조적 특성 및 억제 활성에 대한 이해가 일부 이루어지고 있긴 하지만, 이 화합물이 약한 억제제일지 또는 유능한 억제제일지, 또는 심지어는 억제제로 작용하지 않을지를, 이 화합물이 합성되어 적합한 검정법으로 시험될 때까지는, 특정 정도로 예측하기는 여전히 어렵다. 상기 언급된 문헌(J. Biol. Chem 및 J. Med. Chem)에 개시된 이미노 당 고리 개방된 화합물은 너무 소수이며, 일반적인 부류의 PNP의 비고리형 아민 억제제에 대한 예측제(predictor)로 제공되기에는 구조적으로 너무 다르다.

본 출원인은 현재, 이미노 고리보다 비고리형 아민 기를 갖는, 상기 기술된 화합물과 유사한 특정 화합물이 사람 및 플라스모디움 팔시파룸 PNP의 효과적인 억제제임을 놀랍게도 발견하였다.

따라서, 본 발명의 과제는 PNP 또는 NH의 억제제인 비고리형 아민 화합물을 제공하는 것, 또는 적어도 유용한 선택을 제공하는 것이다.

발명의 개요

따라서, 제 1 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르 프로드러그형(prodrug form) 을 제공한다:

상기 식에서,

R¹은 H 또는 NR³R⁴이며;

R²는 H, 또는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아르알킬, 아르알케닐, 아르알키닐, 또는 아릴 기이며, 이들 기 각각은 하나 또는 그 초과의 히드록시, 알콕시, 티올, 알킬티오, 아릴티오, 아르알킬티오, 할로겐, 카르복실산, 카르복실레이트 알킬 에스테르, 니트로, 또는 NR³R⁴ 기로 치환되거나 치환되지 않으며, 여기서 각각의 알킬티오, 아릴티오 및 아르알킬티오 기는 하나 또는 그 초과의 알킬, 할로겐, 아미노, 히드록시, 또는 알콕시 기로 치환되거나 치환되지 않으며;

단, R¹이 H인 경우에, R²는 하나 이상의 NR³R⁴기로 치환되는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아르알킬, 아르알케닐, 아르알키닐, 또는 아릴 기이고;

R³ 및 R⁴는 서로 독립적으로 H, 또는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아르알킬, 아르알케닐, 아르알키닐, 또는 아릴 기이며, 이들 기 각각은 하나 또는 그 초과의 히드 록시, 알콕시, 티올, 알킬티오, 아릴티오, 아르알킬티오, 할로겐, 카르복실산, 카르복실레이트 알킬 에스테르, 니트로, 또는 NR³R⁴ 기로 치환되거나 치환되지 않고, 여기서 각각의 알킬티오, 아릴티오 및 아르알킬티오 기는 하나 또는 그 초과의 알킬, 할로겐, 아미노, 히드록시, 또는 알콕시 기로 치환되거나 치환되지 않으며;

A는 N 또는 CH이고;

B는 OH 또는 알콕시이고;

D는 H, OH, NH₂, 또는 SCH₃이고;

단 R¹이 NR³R⁴이고 R²가 H이고 A가 CH이고 B가 OH이고 D가 H인 경우, R³은, R⁴가 히드록시에틸이면 히드록시에틸 또는 히드록시프로필이 아니고;

단 R¹이 NR³R⁴이고 R²가 H이고 A가 CH이고 B가 OH이고 D가 NH₂인 경우, R³은, R⁴가 H, 메틸, 에틸, 또는 히드록시에틸이면 히드록시에틸은 아니고, R⁴는, R³이 H, 메틸, 에틸 또는 히드록시에틸이면 히드록시에틸은 아니다.

R¹이 H이면 R²는 하나 이상의 NR³R⁴ 기로 치환된 알킬인 것이 바람직하다.

R³ 또는 R⁴가 치환되거나 치환되지 않은 알킬인 경우, 상기 알킬 기는 바람직하게는 하나 또는 그 초과의 히드록시 기로 치환된다. 예를 들어, R³ 또는 R⁴는 히드록시메틸, 히드록시에틸, 히드록시프로필, 디히드록시프로필, 히드록시부틸, 디히드록시부틸, 트리히드록시부틸, 히드록시펜틸, 디히드록시펜틸, 또는 트리히드 록시펜틸일 수 있다.

R³ 또는 R⁴는 또한 바람직하게는 하나 또는 그 초과의 히드록시 기 및/또는 하나 또는 그 초과의 치환되거나 치환되지 않은 티올, 알킬티오, 아릴티오, 또는 아르알킬티오 기로 치환된 알킬일 수 있다. 예를 들어, R³ 또는 R⁴는 메틸티오메틸, 메틸티오에틸, 메틸티오프로필, 메틸티오히드록시프로필, 메틸티오디히드록시프로필, 메틸티오부틸, 메틸티오히드록시부틸, 메틸티오디히드록시부틸, 메틸티오트리히드록시부틸, 메틸티오펜틸, 메틸티오히드록시펜틸, 메틸티오디히드록시펜틸, 메틸티오트리히드록시펜틸, 또는 메틸티오테트라히드록시펜틸일 수 있다.

R¹이 NR³R⁴이고 R³ 및 R⁴가 H인 경우, R²는 바람직하게는 치환되거나 치환되지 않은 알킬, 더욱 바람직하게는 치환되거나 치환되지 않은 C₁-C₅ 알킬, 예를 들어, 히드록시메틸, 히드록시에틸, 히드록시프로필, 디히드록시프로필, 히드록시부틸, 디히드록시부틸, 트리히드록시부틸, 히드록시펜틸, 디히드록시펜틸, 트리히드록시펜틸, 메틸티오메틸, 메틸티오에틸, 메틸티오프로필, 메틸티오히드록시프로필, 메틸티오디히드록시프로필, 메틸티오부틸, 메틸티오히드록시부틸, 메틸티오디히드록시부틸, 메틸티오트리히드록시부틸, 메틸티오펜틸, 메틸티오히드록시펜틸, 메틸티오디히드록시펜틸, 메틸티오트리히드록시펜틸, 또는 메틸티오테트라히드록시펜틸이다.

R¹이 NR³R⁴이고 R³이 H이고 R⁴가 치환되거나 치환되지 않은 알킬인 경우에 R² 는 바람직하게는 H이다.

R¹이 NR³R⁴이고 R³이 H이고 R⁴가 치환되거나 치환되지 않은 알킬인 경우에 R²는 바람직하게는 치환되거나 치환되지 않은 알킬, 더욱 바람직하게는 치환되거나 치환되지 않은 C₁-C₅ 알킬이다.

R¹이 NR³R⁴이고 R³ 및 R⁴가 각각 치환되거나 치환되지 않은 알킬인 경우에 R²는 바람직하게는 H이다.

바람직하게는 A는 CH이다. 다르게는, A는 N일 수 있다.

B가 OH인 것이 또한 바람직하다.

D가 H 또는 NH₂인 것이 또한 바람직하다. 다르게는, D는 바람직하게는 OH 또는 SCH₃일 수 있다.

본 발명의 바람직한 화합물에는 하기 것들이 포함된다:

rac-(2R,3S)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올;

7-(((2,4-디히드록시부틸)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(R)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-프로판-1,2-디올 히드로클로라이드;

(2R,3R)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄- 1,2,4-트리올 히드로클로라이드;

2-아미노-7-(2,3-디히드록시-1-(2-히드록시에틸아미노)프로필)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(2,3-디히드록시-1-(2-히드록시에틸아미노)프로필)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(1-아미노-2,3,5-트리히드록시펜틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(1-아미노-2,3,5-트리히드록시펜틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(4-아미노-2,3,5-트리히드록시펜틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(4-아미노-2,3,5-트리히드록시펜틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(1-(1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)-2-히드록시에틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(1-(1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)-2-히드록시에틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2,4-디히드록시부틸)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((2,4-디히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((2,4-디히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(3,4-디히드록시-5-(메틸티오메틸)피롤리딘-2-일)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(3,4-디히드록시-5-(메틸티오메틸)피롤리딘-2-일)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(2,3-디히드록시-1-(2-(메틸티오)에틸아미노)프로필)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(2,3-디히드록시-1-(2-(메틸티오)에틸아미노)프로필)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(1-아미노-2,3-디히드록시-5-(메틸티오)펜틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(1-아미노-2,3-디히드록시-5-(메틸티오)펜틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(2-히드록시-1-(1-히드록시-3-(메틸티오)프로판-2-일아미노)에틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(2-히드록시-1-(1-히드록시-3-(메틸티오)프로판-2-일아미노)에틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2-히드록시-4-(메틸티오)부틸)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2-히드록시-4-(메틸티오)부틸)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((2-히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((2-히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((3-히드록시-2-(메틸티오메틸)프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((3-히드록시-2-(메틸티오메틸)프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((3-히드록시-2-(메틸티오메틸)프로필)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((3-히드록시-2-(메틸티오메틸)프로필)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2R,3R)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2S,3S)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2R,3S)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2S,3R)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2R,3R)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2S,3S)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2R,3S)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2S,3R)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

5-아미노-3-(((2R,3R)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

5-아미노-3-(((2S,3S)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

5-아미노-3-(((2R,3S)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

5-아미노-3-(((2S,3R)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

7-((1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

3-((1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

7-((4-히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((4-히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

3-((4-히드록시부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

7-((2-히드록시에틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((2-히드록시에틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

3-((2-히드록시에틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

3-((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

7-(((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필)(메틸)-아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필)(메틸)-아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

3-(((1,3-디히드록시프로판-2-일)(메틸)아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

3-((1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

7-(((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필)(히드록시메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필)(히드록시메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

5-아미노-3-(((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필)(히드록시메틸)아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

7-((1,3-디히드록시-2-(메틸티오메틸)프로판-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((1,3-디히드록시-2-(메틸티오메틸)프로판-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

5-아미노-3-((1,3-디히드록시-2-(메틸티오메틸)프로판-2-일아미노)메틸)-1 H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

7-(((2R,3R)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2S,3S)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2R,3S)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2S,3R)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2R,3R)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2S,3S)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2R,3S)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2S,3R)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

5-아미노-3-(((2R,3R)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

5-아미노-3-(((2S,3S)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

5-아미노-3-(((2R,3S)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

5-아미노-3-(((2S,3R)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

7-((벤질((2R,3R)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((벤질((2S,3S)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((벤질)((2R,3S)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((벤질((2S,3R)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((벤질((2R,3R)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((벤질((2S,3S)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((벤질((2R,3S)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((벤질((2S,3R)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(S)-7-(1-(1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)-2-히드록시에틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(R)-7-(1-(1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)-2-히드록시에틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(S)-2-아미노-7-(1-(1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)-2-히드록시에틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(R)-2-아미노-7-(1-(1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)-2-히드록시에틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(S)-3-(1-(1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)-2-히드록시에틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

(R)-3-(1-(1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)-2-히드록시에틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

7-(((2R,3R)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2S,3S)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2R,3S)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2S,3R)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2R,3R)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2S,3S)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2R,3S)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2S,3R)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(R)-7-((벤질(2,3-디히드록시프로필)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(S)-7-((벤질(2,3-디히드록시프로필)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(R)-2-아미노-7-((벤질(2,3-디히드록시프로필)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(S)-2-아미노-7-((벤질(2,3-디히드록시프로필)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(R)-3-((2,3-디히드록시프로필아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

(S)-3-((2,3-디히드록시프로필아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

(R)-7-(((2,3-디히드록시프로필)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(S)-7-(((2,3-디히드록시프로필)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(R)-2-아미노-7-(((2,3-디히드록시프로필)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(S)-2-아미노-7-(((2,3-디히드록시프로필)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(R)-3-(((2,3-디히드록시프로필)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

(S)-3-(((2,3-디히드록시프로필)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

(2R,3R)-7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(2S,3S)-7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(2R,3S)-7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(2S,3R)-7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(2R,3R)-2-아미노-7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(2S,3S)-2-아미노-7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(2R,3S)-2-아미노-7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(2S,3R)-2-아미노-7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

(2R,3R)-5-아미노-3-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

(2S,3S)-5-아미노-3-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

(2R,3S)-5-아미노-3-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

(2S,3R)-5-아미노-3-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

7-(((2R,3R)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2S,3S)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2R,3S)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2S,3R)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2R,3R)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2S,3S)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2R,3S)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2S,3R)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

3-(((2R,3R)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

3-(((2S,3S)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

3-(((2R,3S)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

3-(((2S,3R)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

3-(((2R,3R)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

3-(((2S,3S)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

3-(((2R,3S)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-IH-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

3-(((2S,3R)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7(6H)-온;

2-아미노-7-(((2R,3R)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2S,3S)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2R,3S)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-(((2S,3R)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2R,3R)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2S,3S)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-(((2R,3S)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온; 및

7-(((2S,3R)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온.

본 발명의 바람직한 화합물은, 4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일 부분 (9-데아자히폭산틴-9-일)이 2-아미노-7-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온-7-일 (9-데아자구아닌-9-일) 부분 또는 (8-아자-9-데아자히폭산틴-9-일) 부분으로 대체되는 상기 확인된 화합물 각각을 또한 포함한다.

본 발명의 제 2 양태에서는, 약제학적으로 유효량의 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 약제 조성물이 제공된다.

본 발명의 다른 양태에서는, 퓨린 누클레오시드 포스포릴라아제 또는 누클레오시드 히드롤라아제의 억제가 요망되는 질환 또는 병태를 치료하는 방법으로서, 약제학적으로 유효량의 화학식 (I)의 화합물을 상기한 치료를 요하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 제공된다.

상기 질환 또는 병태에는 암, 세균성 및 원충 감염, 및 T-세포 매개된 질환 또는 병태, 예컨대 건선, 관절염 및 이식 거부증이 포함된다.

퓨린 누클레오시드 포스포릴라아제는 바람직하게는 사람 퓨린 누클레오시드 포스포릴라아제(Hs PNP)이나, 원충 기생충 플라스모디움 팔시파룸으로부터 유래한 퓨린 누클레오시드 포스포릴라아제(Pf PNP)를 포함하는 임의의 다른 퓨린 누클레오시드 포스포릴라아제일 수 있다.

본 발명의 추가 양태에서, 하나 또는 그 초과의 상기 질환 또는 병태를 치료하기 위한 약제를 제조하는데 있어서의 화학식 (I)의 화합물의 용도를 제공한다.

도 1은 화합물 17.3이 경구적으로 이용가능하고 24 초과의 시간 동안 마우스에서 PNP를 억제시켰음을 나타내는 도면이다.

정의

용어 "알킬"은 탄소수 30개 이하의 임의의 포화된 탄화수소 라디칼을 의미하며, 여기에는 임의의 C₁-C₂₅, C₁-C₂₀, C₁-C₁₅, C₁-C₁₀, 또는 C₁-C₆ 알킬기가 포함되는데, 이는 직쇄 및 분지쇄 알킬 기 모두를 포함하도록 의도된다. 아르알킬 라디칼의 비-방향족 부분에 대해서 동일한 용어가 적용된다. 알킬 기의 예에는 하기 것들이 포함된다: 메틸 기, 에틸 기, n-프로필 기, 이소-프로필 기, n-부틸 기, 이소-부틸 기, 2차-부틸 기, t-부틸 기, n-펜틸 기, 1,1-디메틸프로필 기, 1,2-디메틸프로필 기, 2,2-디메틸프로필 기, 1-에틸프로필 기, 2-에틸프로필 기, n-헥실 기 및 1-메틸-2-에틸프로필 기.

용어 "알케닐"은 하나 이상의 이중 결합을 지니며 탄소수 30개 이하의 임의의 탄화수소 라디칼을 의미하는데, 여기에는 임의의 C₂-C₂₅, C₂-C₂₀, C₂-C₁₅, C₂-C₁₀, 또는 C₂-C₆ 알케닐기가 포함되고, 이는 직쇄 및 분지쇄 알케닐 기 모두를 포함하도록 의도된다. 아르알케닐 라디칼의 비-방향족 부분에 대해서 동일한 용어가 적용된다. 알케닐 기의 예에는 하기 것들이 포함된다: 에테닐 기, n-프로페닐 기, 이소-프로페닐 기, n-부테닐 기, 이소-부테닐 기, 2차-부테닐 기, t-부테닐 기, n-펜테닐 기, 1,1-디메틸프로페닐 기, 1,2-디메틸프로페닐 기, 2,2-디메틸프로페닐 기, 1-에틸프로페닐 기, 2-에틸프로페닐 기, n-헥세닐 기 및 1-메틸-2-에틸프로페닐 기.

용어 "알키닐"은 하나 이상의 삼중 결합을 지니며 탄소수 30개 이하의 임의의 탄화수소 라디칼을 의미하는데, 여기에는 임의의 C₂-C₂₅, C₂-C₂₀, C₂-C₁₅, C₂-C₁₀, 또는 C₂-C₆ 알키닐기가 포함되고, 이는 직쇄 및 분지쇄 알키닐 기 모두를 포함하도록 의도된다. 아르알키닐 라디칼의 비-방향족 부분에 대해서 동일한 용어가 적용된다. 알키닐 기의 예에는 하기 것들이 포함된다: 에티닐 기, n-프로피닐 기, 이소-프로피닐 기, n-부티닐 기, 이소-부티닐 기, 2차-부티닐 기, t-부티닐 기, n-펜티닐 기, 1,1-디메틸프로피닐 기, 1,2-디메틸프로피닐 기, 2,2-디메틸프로피닐 기, 1-에틸프로피닐 기, 2-에틸프로피닐 기, n-헥시닐 기 및 1-메틸-2-에틸프로피닐 기.

용어 "아릴"은 탄소수 4 내지 18개의 방향족 라디칼을 의미하며 여기에는 헤테로방향족 라디칼이 포함된다. 이의 예에는 모노시클릭 기, 및 융합된 기, 예컨대 비시클릭 기 및 트리시클릭기가 포함된다. 몇몇의 예에는 페닐 기, 인데닐 기, 1-나프틸 기, 2-나프틸 기, 아줄레닐 기, 헵탈레닐 기, 비페닐 기, 인다세닐 기, 아세나프틸 기, 플루오레닐 기, 페날레닐 기, 페난트레닐 기, 안트라세닐 기, 시클로펜타시클로옥테닐 기, 및 벤조시클로옥테닐 기, 피리딜 기, 피롤릴 기, 피리다지닐 기, 피리미디닐 기, 피라지닐 기, 트리아졸릴 기, 테트라졸릴 기, 벤조트리아졸릴 기, 피라졸릴 기, 이미다졸릴 기, 벤즈이미다졸릴 기, 인돌릴 기, 이소인돌릴 기, 인돌리지닐 기, 퓨리닐 기, 인다졸릴 기, 푸릴 기, 피라닐 기, 벤조푸릴 기, 이소벤조푸릴 기, 티에닐 기, 티아졸릴 기, 이소티아졸릴 기, 벤조티아졸릴 기, 옥사졸릴 기, 및 이속사졸릴 기가 포함된다.

용어 "아르알킬"은 아릴 치환기를 갖는 알킬 라디칼을 의미한다.

용어 "알콕시"는 수소가 알킬 기로 치환된 히드록시 기를 의미한다.

용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 및 요오드를 포함한다.

용어 "치환되거나 치환되지 않은"은 치환되거나 치환되지 않은 기를 기준으로, 상기 기가 히드록시, 알킬, 알콕시, 티올, 치환되거나 치환되지 않은 알킬티오, 치환되거나 치환되지 않은 아릴티오, 치환되거나 치환되지 않은 아르알킬티오, 할로겐, 아미노, 카르복실산 및 카르복실레이트 알킬 에스테르를 포함하는 군으로부터 선택된 하나 또는 그 초과의 치환기를 지닐 수 있다.

본원에 사용된 용어 "프로드러그"는 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 유도체로서, 이 유도체의 생체내 변환에 의해 화학식 (I)로 정의된 화합물이 얻어짐을 의미한다. 화학식 (I)의 화합물의 프로드러그는, 변형부가 생체내에서 분할되어 모 화합물을 제공하도록 하는 방식으로 화합물 내에 존재하는 작용기를 변형시킴으로써 생성될 수 있다.

용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 무기 또는 유기 산으로부터 유래한 비-독성 염에 적용하도록 의도되는데, 여기에는 예를 들어 하기 산 염들이 포함된다: 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 비설페이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포설포네이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 포르메이트, 푸마레이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 글리콜레이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로요오다이드, 2-히드록시에탄설포네이트, 락테이트, 말레이트, 말로네이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥살레이트, 팔모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, p-톨루엔설포네이트, 살리실레이트, 석시네이트, 설페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트 및 운데카노에이트.

용어 "환자"에는 사람 및 비-사람 동물이 포함된다.

억제제 화합물에 대한 설명

본 발명의 비고리형 아민 화합물은 놀랍게도 PNP의 효능있는 억제제이다. PNP 효소 및 이미노 고리 화합물의 효소 억제 활성에 대한 본 출원인의 특별한 지식을 토대로 판단컨 대, 본 출원인은 비고리형 아민 화합물이 효력있는 PNP 억제제로 작용할 것이라는 것은 예측하지 못했을 것이다. 이전에는, 이미노 고리보다는 입체 장애되지 않은 비고리형 아민이 이들 화합물을 훨씬 덜 효력있게 만들것이라고 생각되었다. 그러나, 본 발명의 화합물은 놀랍게도 사람 PNP의 효력있는 억제제인 것으로 입증되었다. 참으로, 치료 가능성을 갖기에 충분한 효능인 8.5 ±0.6 ｐM의 사람 PNP에 대한 K_i ^*를 갖는 본 발명의 한 화합물(화합물 17.3)은 경구적으로 이용가능하다. 모 DADMe-이뮤실린-H 및 이뮤실린-H 화합물과 같은 이러한 가장 효력있는 "제 3 세대" 억제제는 HsPNP에 결합하기 위해 피코몰 범위의 Kd 값을 갖는다. HsPNP에 대한 피코몰 억제제의 공통적인 구조적 요소는 2차 N 및 3개의 히드록실 기이다. 비고리형의, 단일 결합된 아미노 알콜기의 기하학적 유연성에 의해, DADMe-이뮤실린-H 및 이뮤실린-H에 대해 확인되는 것들과 일치되도록 이들 3개의 히드록실 기를 촉매 위치에 배치시킬 수 있을 것으로 예상된다.

억제제 화합물의 합성

본 발명의 화합물은 여러 상이한 방법으로 제조될 수 있다. 대표적인 비제한적인 예가 하기되어 있다.

R¹이 NR³R⁴인 화합물은, 아민 NHR⁵R⁶(여기서, R⁵ 및 R⁶은 R³ 또는 R⁴와 동일할 수 있거나, 이들의 보호형일 수 있다)을 하기 반응 도식 1에 도시된 만니치 반응(Mannich reaction)으로 알데히드(예를 들어, 포름알데히드) 및 9-데아자퓨린(예를 들어, 9-데아자히폭산틴)과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 상기 만니치 반응 후에는 필요한 경우 탈보호가 실시된다:

반응 도식 1

아민 NHR⁵R⁶을 사용한 알데히드의 대안적인 환원적 아민화(하기 반응 도식 2에 도시됨)는, 이들로 한정되는 것은 아니나 NaBH₃CN 또는 NaAcO₃BH와 같은 시약을 사용하여 실시될 수 있다. 적합한 탈보호 단계가 후술되어 있다. 보호된 적합한 알데히드는 공지되어 있다 [참조: 예를 들어, J. Org. Chem. 2004, 69, 2217-2220].

반응 도식 2

다른 예가 반응 도식 3에 도시되어 있다. R⁷이 치환되거나 치환되지 않은 알킬 또는 이의 보호형이고 R⁸이 H 또는 치환되거나 치환되지 않은 알킬 또는 이의 보호형인 카보닐 화합물은 리튬화된 퓨린 유도체로 처리될 수 있다[이의 몇몇의 예는 문헌(J. Org. Chem. 2004, 69, 2217-2220)에서 확인할 수 있다]. 표준 데옥시화반응 단계가 하기되어 있다:

반응 도식 3

상기 기술된 아민 NHR⁵R⁶은 다수의 방법으로 제조될 수 있다. 대표적인 비제한적인 예가 하기되어 있다.

ㆍN-벤질히드록실아민 및 포름알데히드로부터 유래한 니트론을 사용한 부트-2-엔-1,4-디올의 고리첨가(cycloaddition) 후에 아연 환원시켜 아민을 수득하는데, 이것을 추가로 작용화시켜 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다:

반응 도식 4

ㆍ부탄 1,2,4-트리올의 2,4-O-벤질리덴 또는 1,2-O-이소프로필리덴 유도체로의 전환(반응 도식 5). 이후, 이 화합물들은 아민으로 전환될 수 있는데, 이 아민을, 1차 히드록시 기를 활성화시키고 보호기를 치환 및 적절히 조정하여 본 발명의 화합물로 추가로 작용화시킬 수 있다:

반응 도식 5

ㆍ(R)- 또는 (S)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올과 같은 화합물은 반응 도식 5에 기재된 화학물질을 이용하여 아민으로 전환될 수 있으며, 이후 아민은 본 발명의 화합물로 전환될 수 있다.

ㆍ부트-2-엔 1,4-디올은 하기 반응 도식 6에 기재된 바와 같이 보호되고, 에폭시화되고, 고리 개방되어 아민에 대한 전구물질이 생성될 수 있는데, 이것은 이후 본 발명의 화합물로 전환될 수 있다:

반응 도식 6

ㆍD- 및 L-디에틸 타르트레이트는 하기 반응 도식 7에 도시된 바와 같이 키랄 아민으로 전환될 수 있으며[참조:

, 이로부터 다른 유용한 아민이 유래될 수도 있다:

반응 도식 7

ㆍ4,4-디메틸-3,5,8-트리옥사비시클로[5.1.0]옥탄을 α-메틸벤질아민의 거울상이성질체(J. Org. Chem. 1998, 63, 7582-7583)와 반응시켜 아미노 알콜의 부분입체이성질체 혼합물을 수득한다(반응 도식 8 참조). 목적하는 부분입체이성질체를 결정화시키고 수소첨가분해(hydrogenolysis)시켜 거울상이성질체적으로 순수한(enantiomerically pure) 아미노 알콜에 대한 접근을 제공한다:

반응 도식 8

ㆍ다양한 보호된 락톤 및 에스테르를 암모니아로 처리하여 아미도 알콜을 수득하고, 이것을 리튬 알루미늄 수소화물로 처리하여 상응하는 아미노 알콜로 전환시킬 수 있다(하기 반응 도식 9 참조):

반응 도식 9

일반적인 특징

본 발명의 화합물은 유리 염기 형태 및 염 형태 모두로 유용하다.

본 발명의 화합물은 화학식 (I)의 모든 광학 이성질체 및 입체 이성질체를 포함함이 이해가 될 것이다.

B 및/또는 D가 히드록시 기인 화학식 (I)의 화합물의 표현형(representation)은 상응하는 아미드의 엔올-타입의 호변이성질체 형태의 것임이 이해가 될 것이며, 이것은 아미드 형태로 주로 존재할 것이다. 엔올-타입의 호변이성질체 표현형을 사용하면 단순히 더욱 적은 구조식이 본 발명의 화합물을 나타내도록 할 수 있다.

활성 화합물은 경구, 비경구, 흡입 분무, 국소, 직장, 비내, 협측 또는 이식된 저장소를 통해서를 포함하는 다양한 경로로 환자에게 투여될 수 있다. 투여될 화합물의 양은 환자의 특성, 치료할 질환의 특성 및 정도에 따라 광범위하게 달라질 것이다. 전형적으로, 성인 남자에 대한 용량은 1 미만 내지 1000 밀리그램, 바람직하게는 0.1 내지 100 밀리그램의 범위 내일 것이다. 임의의 특정 환자에 대해 요구된 특정 용량은 환자 나이, 체중, 일반적 건강 상태, 성별 등을 포함하는 다양한 인자에 따라 달라질 것이다.

경구 투여에 있어서, 본 발명의 화합물은 고체 또는 액체 제제, 예를 들어 정제, 캡슐, 분말, 용액, 현탁액 및 분산액으로 제형화될 수 있다. 상기한 제제는 당업계에 잘 공지되어 있으므로, 다른 경구 투여 계획은 본원에 기재되어 있지 않다. 정제 형태에서, 화합물은 결합제, 붕해제 및 윤활제와 함께, 통상적인 정제 베이스, 예컨대 락토오스, 수크로오스 및 옥수수 전분으로 정제화될 수 있다. 상기 결합제는 예를 들어 옥수수 전분 또는 젤라틴일 수 있으며, 붕해제는 감자 전분 또는 알긴산일 수 있으며, 윤활제는 마그네슘 스테아레이트일 수 있다. 캡슐 형태로 경구 투여하기 위해서는, 희석제, 예컨대 락토오스 및 건조된 옥수수 전분이 사용될 수 있다. 다른 성분, 예컨대 착색제, 감미제 또는 향미제가 첨가될 수 있다.

경구 사용을 위해 수성 현탁액이 필요한 경우에, 활성 성분은 담체, 예컨대 물 및 에탄올과 배합될 수 있고, 에멀션화제, 현탁화제 및/또는 계면활성제가 사용될 수 있다. 착색제, 감미제 또는 향미제가 또한 첨가될 수 있다.

상기 화합물은 또한 물 또는 식염수와 같은 생리학적으로 허용되는 희석제 중에서 주사로 투여될 수 있다. 상기 희석제는 하나 또는 그 초과의 다른 성분, 예컨대 에탄올, 프로필렌 글리콜, 오일 또는 약제학적으로 허용되는 계면활성제를 포함할 수 있다.

상기 화합물은 또한 국소적으로 투여될 수 있다. 화합물의 국소 투여를 위한 담체는 미네랄 오일, 액체 바세린, 백색 바세린(white petrolatum), 프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌 화합물, 에멀션화되는 왁스 및 물이 포함된다. 상기 화합물은 피부 또는 점막으로의 국소 투여를 위해 로션 또는 크림 중의 성분으로 존재할 수 있다. 상기한 크림은 하나 또는 그 초과의 약제학적으로 허용되는 담체 중에 현탁되거나 용해된 활성 화합물을 함유할 수 있다. 적합한 담체에는 미네랄 오일, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 세틸 에스테르 왁스, 세테아릴 알콜, 2-옥틸도데칸올, 벤질 알콜 및 물이 포함된다.

상기 화합물은 또한 서방성 시스템에 의해 추가로 투여될 수 있다. 예를 들어, 이들은 천천히 용해하는 정제 또는 캡슐 내로 도입될 수 있다.

하기 실시예는 본 발명을 추가로 예시하는 것이나, 본 발명이 실시예로 제한되는 것은 아님이 이해되어야 한다.

일반적인 방법

무수 용매를 상업적으로 입수하였다. 공기 민감한 반응은 아르곤 하에서 실시하였다. 유기 용액을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 사용 전에 크로마토그래피 용매를 증류시켰다. 박층 크로마토그래피(TLC)를, 60 F₂₅₄ 실리카로 코팅된 유리 또는 알루미늄 시트 상에서 실시하였다. 유기 화합물을, 자외선 광 하에서, 또는 황산(2M) 중의 세륨(IV) 설페이트(0.2%, w/v) 및 암모늄 몰리브데이트(5%)에 딥핑, H₂SO₄(M) 중의 I₂(0.2%) 및 KI(7%)에 딥핑, 또는 EtOH 중의 0.1% 닌히드린에 딥핑시킴으로써 시각화하였다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 를 스칼라우 또는 머크(Scharlau or Merck) 실리카 겔 60(40 내지 60 ㎛) 상에서 실시하였다. 광학적 회전을 1 dm의 경로 길이를 갖는 퍼킨-엘머 241 편광계 상에서 기록하였는데, 이는 10^-1 deg㎠/g의 단위로 표시되며; 농도는 g/100 ml로 표시된다. NMR 스펙트럼은 브루커 AC300E 상에서 기록하였다. 다르게 언급되지 않는 한, 300 MHz에서 ¹H 스펙트럼은 CDCl₃, CD₃OD(내부 기준 Me₄Si, δ0) 또는 D₂O(내부 기준 없음) 중에서 측정하였고, 75.5 MHz에서 ¹³C 스펙트럼은 CDCl₃(기준, 용매 중심선, δ 77.4), CD₃OD(기준, 용매 중심선 δ 49.5) 또는 D₂O(내부 기준 없음) 중에서 측정하였다. 포지티브 전기분무 질량 스펙트럼을 워터스 Q-TOF 프레미어 탄덤 질량 분광계 상에서 기록하였다.

실시예 1 - rac-(2R,3S)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올의 합성

실시예 1.1 - 1,4-비스-메톡시메톡시-시스-부트-2-엔의 합성

문헌(C. Saluzzo, A-M. La Spina, D. Picq, G. Alvernhe, D. Anker, D. Wolf and G. Haufe, Bull. Chim. Soc. Fr., 1994, 131, 831-843)에 기재된 방법에 따라 이 화합물을 제조하였다.

실시예 1.2 - 메소-2,3-비스((메톡시메톡시)메틸)옥시란의 합성

DCM(4Oml) 중의 실시예 1.1의 생성물(3.66g, 20.8mmol)의 교반 용액에 m-클로로퍼벤조산(57%, 7.55g, 24.9mmol)을 조금씩 나누어 첨가하였다. 생성되는 용액을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 에테르와 중탄산나트륨 포화 수용액 사이에 분배하고, 에테르 층을 건조시키고(MgSO₄) 농축하였다. 잔류물을 용리제로 석유 에테르 중의 17% 에틸 아세테이트를 사용하는 플래쉬 실리카 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 무색 오일(1.88g, 47%)로 수 득하였다.

실시예 1.3 - rac-(6R,7S)-7-아지도-2,4,9,11-테트라옥사도데칸-6-올의 합성

실시예 1.2로부터의 생성물(1.88g, 9.77mmol), 염화암모늄(1.83g, 34.2mmol) 및 아지드화나트륨(2.22g, 34.2mmol)을 110℃에서 5시간 동안 디메틸포름아미드(15ml) 중에서 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물(5x)로 세척한 다음, 건조시키고(MgSO₄) 증발시켰다. 잔류물을, 용리제로 2:1 페트롤:에틸 아세테이트를 사용하는 플래쉬 실리카 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 무색 오일(786mg, 34%)로 수득하였다.

실시예 1.4 - (6RS,7SR)-7-아미노-2,4,9,11-테트라옥사도데칸-6-올의 합성

테트라히드로푸란(10ml) 중의 실시예 1.3의 생성물(392mg, 1.67mmol)의 교반 용액에 리튬 알루미늄 수소화물(에테르 중의 1.0M, 3.33ml)을 적가하였다. 생성되는 용액을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 중탄산나트륨 수용액과 에틸 아세테이트 사이에 분배하고 수성 층을 증발시켰다. 잔류물을 고온의 에틸 아세테이트(4x)로 분쇄시키고, 용액을 증발시켜 표제 화합물을 무색 오일(261 mg, 75%)로 수득하였다.

실시예 1.5 - (6RS,7SR)-7-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-2,4,9,11-테트라옥사도데칸-6-올의 합성

실시예 1.4로부터의 생성물(151mg, 0.722mmol) 및 알데히드(G.B. Evans et al., J. Med. Chem. 2005, 48, 4679-4689)(204mg, 0.601 mmol)를 메탄올(10ml)로부터 3회 증발시키고 난 후에, 메탄올(10ml), 아세트산(5 drops) 및 나트륨 시아노보로히드라이드(76mg, 1.20mmol)를 첨가하였다. 생성되는 용액을 주위 온도에서 16시간 동안 교반시키고 나서 실리카 상으로 증발하였다. 잔류물을 용리제로 95:5 디클로로메탄:메탄올(및 1% 트리에틸아민)을 사용하는 플래쉬 실리카 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 무색 오일(319mg, 100%)로 수득하였다.

실시예 1.6 - 7-(((2RS,3SR)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 1.5로부터의 생성물(104mg, 0.195mmol)을 -78℃에서 DCM(10ml) 중에 용해하고, 보론 트리브로마이드(DCM 중의 1.0M, 1.95ml)를 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 45분 동안 교반시키고 나서 메탄올(10ml)을 첨가하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 메탄올(2x)과 함께 증발시켰다. 잔류물을 물과 DCM 사이에 분배하 고 수성층을 증발시켰다. 잔류물을 10분 동안 메탄올성 암모니아 중에서 교반시킨 다음, 실리카 상으로 증발시키고 용리제로 5:4.5:0.5 DCM:메탄올:암모니아를 사용하는 플래쉬 실리카 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 백색 고형물(27mg, 52%)로 수득하였다.

생성물인 화합물 1.6은 하기 실시예 17 및 18의 거울상이성질체의 1:1 혼합물이다.

실시예 2 - 7-(((2,4-디히드록시부틸)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 2.1 - 4-히드록시메틸-2-페닐-1,3-디옥산의 합성

p-톨루엔설폰산 일수화물(0.269 g, 1.413 mmol)을 함유하는 무수 톨루엔(50 ml) 중의 1,2,4-부탄트리올(3.0 g, 28.3 mmol)과 벤즈알데히드(11.48 ml, 113 mmol)의 혼합물을 환류 하 딘-스타크 장치 중에서 가열하였다. 약 1시간 후에, 상기 용액을 NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고, 건조시키고, 고진공하에서 농축시켜 벤즈알데히드의 대부분을 제거하였다. 크로마토그래피를 실시하여 시럽상의 표제 화합물(2.88 g, 14.83 mmol, 52.5% 수율)을 수득하였다. NMR 데이터는 기록된 것(Tetrahedron Asymm. 1996, 7, 3209-3246)과 동일하였다.

실시예 2.2 - 4-메틸아미노메틸-2-페닐-1,3-디옥산의 합성

디클로로메탄(20 ml) 중의 4-히드록시메틸-2-페닐-1,3-디옥산(0.80 g, 4.12 mmol)의 용액에 디이소프로필에틸아민(1.702 ml, 10.30 mmol)을 첨가하고, 이 용액을 얼음조 중에서 냉각시켰다. 메탄설포닐 클로라이드(0.414 ml, 5.35 mmol)를 첨가하고 용액을 실온으로 가온시켰다. 1시간 후에, 이 용액을 2M HCl 수용액, NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척시키고, 건조시킨 다음 시럽(1.15 g)으로 농축시켰다. 40% 수성 메틸아민(2.85 ml, 33.0 mmol)을 함유하는 DMSO(8 mL) 중의 이 물질의 용액(0.9 g, 3.30 mmol)을 마개로 막고 약 75-80℃에서 24시간 동안 가열하였다. 용액을 냉각시키고, 클로로포름을 첨가하고, 물로 2회 세척한 다음 건조 및 농축하였다. 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물(0.465 g, 2.24 mmol, 68%)을 시럽으로 수득하였다.

실시예 2.3 - 7-((메틸((2-페닐-1,3-디옥산-4-일)메틸)아미노)-메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

디옥산(10 mL) 중의 4-메틸아미노메틸-2-페닐-1,3-디옥산(0.368 g, 1.775 mmol), 9-데아자히폭산틴(0.288 g, 2.131 mmol), 아세트산(0.508 ml, 8.88 mmol) 및 37% 수성 포름알데히드(0.264 ml, 3.55 mmol)의 혼합물을 교반하고, 80℃에서 마개막은 플라스크 중에서 가열하였다. 추가량의 37% 수성 포름알데히드(0.132 ml, 1.775 mmol)를 첨가하고, 이 마개막은 플라스크를 80℃에서 약 24시간 동안 다 시 가열하였다. 용액을 농축 건조시키고 크로마토그래피(CH₂Cl₂ 중의 10% 7M NH₃/MeOH)에 의해 덜 극성인 부산물은 분리되었으나, 생성물 및 데아자히폭산틴은 함께 용리되었다. 이 물질을, 용리제로 CHCl₃/EtOAc/MeOH 5:2:1에 이어 4:2:3 CHCl₃/EtOAc/MeOH 및 20% 7M NH₃/MeOH을 사용하여 크로마토그래피하여 표제 화합물을 백색 고형물(0.406 g, 1.146 mmol, 64.5% 수율)로 수득하였다.

실시예 2.4 - 7-(((2,4-디히드록시부틸)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

메탄올(2 ml) 및 진한 HCl 수용액(2 mL) 중의 9-데아자-9-{[(메틸(2-페닐-1,3-디옥산-4-일)메틸)아미노]메틸}-히폭산틴(0.070 g, 0.198 mmol)의 용액을 실온에서 정치시켰다. 약 2시간 후에, 이것을 물로 희석하고, 클로로포름으로 추출하고(x2), 이후 수성 상을 농축 건조시켰다. 크로마토그래피(CH₂Cl₂/MeOH/수성 NH₃ 5:4:1)를 실시하여 7-(((2,4-디히드록시부틸)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온을 백색 고형물(0.040 g, 0.150 mmol, 76% 수율)로 수득하였다.

실시예 3 - (R)-7-((2,3-디히드록시프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드의 합성

실시예 3.1 (S)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸 메탄설포네이트의 합성

표제 화합물을 (R)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올(시그마-알드리치, 99%ee)로부터 문헌에 공지된 과정(H. S. Kim, D. Barak, T.K. Harden, J.L. Boyer and K.A. Jacobson, J. Med. Chem., 2001, 44, 3092)으로 제조하였다.

실시예 3.2 - (R)-N-벤질-1-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄아민의 합성

표제 화합물을, (S)-거울상이성질체의 제조에 대해 기술된 방법(M. Lemaire, F. Posada, J.-G. Gourcy and G. Jemlnet, Synlett, 1995, 627)과 동일한 방식으로 제조하였다. (S)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸 메탄설포네이트(3.0 g, 14.27 mmol) 및 벤질아민(6.23 ml, 57.1 mmol)의 용액을 함께 CH₃CN(38 ml) 중에서 48시간 동안 환류시켰다. Tlc(EtOAc-헥스 8:2)로부터, 신규 생성물(uv/몰리브데이트 또는 닌히드린)의 R_f가 약 0.3이며 이것이 약간 더 높은 러닝(running) sm을 나타냄을 확인하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 EtOAc에 용해하고 NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고, 건조시키고 용매를 증발시켰다. 잔류물을 크로마토그래피(EtOAc-헥스, 6:4에 이어 8:2)시켜 (R)-N-벤질-1-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄아민(2.56 g, 11.57 mmol, 81% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.

실시예 3.3 - (R)-N-벤질-1-(5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-N-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)메탄아민의 합성

1,2-디클로로에탄(30 ml) 중의 (R)-N-벤질-1-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄아민(0.372 g, 1.682 mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.5 g, 1.682 mmol)의 용액에 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(0.463 g, 2.186 mmol) 및 무수 MgSO₄(1g)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 6시간 동안 교반하였다. Tlc(EtOAc-헥산, 8:2)로부터, 반응이 본질적으로 종료 되었음을 확인하였다. CH₂Cl₂로 희석시킨 후에, 혼합물을 NaHCO₃ 포화 수용액, 염수로 세척하고, 건조시키고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 크로마토그래피(EtOAc-헥스, 1:1, uv 및 몰리브데이트)시켜 (R)-N-벤질-1-(5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-N-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)메탄아민(0.631 g, 1.255 mmol, 74.7% 수율)을 무색 검으로 수득하였다.

실시예 3.4 - (R)-7-((벤질(2,3-디히드록시프로필)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온

(R)-N-벤질-1-(5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-N-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)메탄아민(0.6 g, 1.194 mmol)을 HCl(15 ml, 37%) 중에서 3시간 동안 100℃로 가열하였다. Tlc(CH₂Cl₂-MeOH 중의 6M NH₃, 9:1)로부터 반응이 종료되었음을 확인하였다. 용매를 증발시키고 잔류물을 MeOH에 용해하고, 이것을 앰버리스트(Amberlyst) A21 수지로 중화시키고, 여과한 다음, 용매를 증발하였다. 잔류물을 크로마토그래피(CH₂Cl₂-MeOH 중의 6M NH₃, 9:1에 이어 85:15)시켜 (R)-3-(벤질((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)아미노)프로판-1,2-디올(0.36 g, 1.096 mmol, 92% 수율)을 무색 고형물로 수득하였다.

실시예 3.5 - (R)-7-((2,3-디히드록시프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드

(R)-3-(벤질((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)아미노)프로판-1,2-디올(0.1 g, 0.305 mmol)을 고온수(20 ml)에 용해시키고, 실온으로 냉각시키고 10% Pd-C(50 mg)를 첨가하였다. 수소를 벌로운으로부터 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반하였다. 4시간 후에, tlc(CH₂Cl₂-MeOH-cNH₃, 5:4.5:0.5)로부터 반응이 종료되었음을 확인하였다. 수소를 Ar로 대체하고, 생성물이 용액 상태로 존재하도록 혼합물을 80℃로 가열시킨 다음, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 용매를 증발시켜 (R)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)프로판-1,2-디올을 무색 고형물(0.072 g, 99%)로 수득하였다. 생성물을 5% HCl을 사용하여 이의 히드로클로라이드 염으로 전환시켰다.

실시예 4 - 7-(((2R,3R)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드의 합성

실시예 4.1 - (2S,3R)-디에틸 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-3-히드록시석시네이트의 합성

나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(0.545 g, 2.57 mmol)를 1,2-디클로로에탄(30 ml) 중의 (2S,3R)-디에틸 2-아미노-3-히드록시석시네이트(0.406 g, 1.978 mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히 드(0.588 g, 1.978 mmol)의 용액에 첨가하였는데, 상기 (2S,3R)-디에틸 2-아미노-3-히드록시석시네이트는 공지된 방법(A. Breuning, R. Vicik and T. Schirmeister, Tetrahedron Asymm., 2003, 14, 3301 and Z. Tang, Z.-H. Yang, X.-H. Chen, L.-F. Cun, A.- Q. ml, Y.-Z. Jiang and L.-Z. Gong, J. Am. Chem. Soc, 2005, 127, 9285)으로 디에틸-L-타르트레이트로부터 제조하였으며, 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. Tlc(EtOAc)로부터 아민 전부가 사라졌으나 (닌히드린) 일부의 알데히드는 여전히 존재하였고 새로운 주 생성물이 이들 사이에 존재하였음을 확인하였다. 추가량의 (2S,3R)-디에틸 2-아미노-3-히드록시석시네이트(121 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 추가 3시간 동안 교반시킨 후에, CH₂Cl₂로 희석하고 NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척한 다음, 건조시키고 증발하였다. 잔류물을 크로마토그래피(EtOAc-헥산, 9:1에 이어 EtOAc)시켜 (2S,3R)-디에틸 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-3-히드록시석시네이트(0.668 g, 1.373 mmol, 69.4% 수율)를 담황색 검으로 수득하였다.

실시예 4.2 - (2R,3R)-3-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리 미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올의 합성

THF(10 ml) 및 메탄올(0.499 ml, 12.33 mmol) 중의 (2S,3R)-디에틸 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-3-히드록시석시네이트(0.6 g, 1.233 mmol)의 환류중인 용액에 리튬 보로히드라이드(0.134 g, 6.17 mmol)를 약 1시간에 걸쳐 조금씩 나누어 첨가하였다. Tlc(CH₂Cl₂-MeOH-CNH₃, 9:1:0.1)로부터 계속하여 (uv, 닌히드린 또는 몰리브데이트) sm이 확인되었다. 추가량의 MeOH(0.5 ml)를 첨가하고, Tlc로부터 반응이 종결되었음이 확인될 때까지 적은 분획의 LiBH₄(총 약 134 mg)를 약 1시간에 걸쳐 첨가하였다. 용매를 증발시키고 잔류물을 크로마토그래피(CH₂Cl₂-MeOH-cNH₃, 95:5:0.5에 이어 85:15:0.5)하여 무색 검을 수득하였는데 이것은 곧 결정화되었다(214 mg, 41%). 이 검은 후속 단계를 실시하기에 충분히 순수하였으며, 이의 소량을, 일정 분획의 미정제 (2R,3R)-3-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올을 MeOH 중에 용해하고 용매를 증발시켜 유동성 검을 남김으로써 재결정화시켰다. 상기 검을 고온의 에틸아세테이트에 용해하고, 실온으로 냉각시키고 씨딩시켰다. 무색 고형물을 여과로 제거하고 건조시켜 현미경 하에서 매우 작은 결정의 클러스터를 수득하였다.

실시예 4.3 - 7-(((2R,3R)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드의 합성

(2R,3R)-3-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올(0.1 g, 0.248 mmol)을 2시간 동안 HCl(4 ml, 37%) 중에서 환류 하에 가열하였다. Tlc(CH₂Cl₂-MeOH-cNH₃, 5:4.5:0.5)로부터 반응이 종료되었음을 확인하였다. 용매를 증발시키고 잔류물을 MeOH에 용해하고 앰버리스트Amberlyst A21 수지로 중화시켰다. 혼합물을 여과하고, 용매를 증발시킨 다음, 잔류물을 크로마토그래피(CH₂Cl₂-MeOH-cNH₃, 7:3:0.3에 이어 5:4.5:0.5)시켜 유리 염기의 생성물을 무색 고형물로서 수득하였는데, 이것을 5% HCl을 사용하여 무색 고형물(0.055 g, 0.180 mmol, 72.6% 수율)인 7-(((2R,3R)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드로 전환시켰다.

실시예 5 - (S)-7-((2,3-디히드록시프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드

실시예 5.1 - (R)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸 메탄설포네이트

표제 화합물을 문헌에 공지된 과정(H.S. Kim, D. Barak, T.K. Harden, J.L. Boyer and K.A. Jacobson, J. Med. Chem., 2001, 44, 3092)에 의해 (S)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올(시그마-알드리치, 99%ee)로부터 제조하였다.

¹H NMR 및 ¹³C NMR은 화합물 3.1에 대한 것과 동일하였다.

실시예 5.2 - (S)-N-벤질-1-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄아민

표제 화합물을 문헌(M. Lemaire, F. Posada, J.-G. Gourcy and G. Jeminet, Synlett, 1995, 627)에 기재된 것과 동일한 방식으로 제조하였다. (R)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸 메탄설포네이트(3.9 g, 18.55 mmol) 및 벤질아민(8.10 ml, 74.2 mmol)의 용액을 CH₃CN(50 ml) 중에서 48시간 동안 환류시켰다. 용매를 증발시키고 잔류물을 EtOAc에 용해하고 NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고, 건조시킨 다음 용매를 증발시켰다. 잔류물을 크로마토그래피(EtOAc-헥스, 6:4에 이어 8:2)시켜 (S)-N-벤질-1-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄아민(3.1 g, 14.01 mmol, 76% 수율)을 황색 오일로 수득하였다.

¹H NMR 및 ¹³C NMR은 화합물 3.2에 대한 것과 동일하였다.

실시예 5.3 - (S)-N-벤질-1-(5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-N-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)메탄아민

1,2-디클로로에탄(30 ml) 중의 (S)-N-벤질-1-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄아민(0.670 g, 3.03 mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.9 g, 3.03 mmol)의 용액에 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(0.834 g, 3.94 mmol) 및 무수 MgSO₄(2 g)를 첨가하였다. 이 혼합물을 5시간 동안 교반시켰다. CH₂Cl₂로 희석시킨 후에, 혼합물을 NaHCO₃ 포화 수용액, 염수로 세척하고, 건조시킨 다음, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 크로마토그래 피(EtOAc-헥스, 1:1, uv 및 몰리브데이트)시켜 (S)-N-벤질-1-(5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-N-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)-메탄아민(1.18 g, 2.34 mmol, 78% 수율)을 담황색 검으로 수득하였다.

¹H NMR 및 ¹³C NMR은 화합물 3에 대한 것과 동일하였다.

실시예 5.4 - (S)-7-((벤질(2,3-디히드록시프로필)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온

(S)-N-벤질-1-(5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-N-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)메탄아민(1.1 g, 2.189 mmol)을 HCl(15 ml, 37%) 중에서 3시간 동안 100℃로 가열하였다. Tlc(CH₂Cl₂-MeOH 중의 6M NH₃, 9:1)로부터 반응이 종료되었음을 확인하였다. 용매를 증발시키고 잔류물을 MeOH에 용해하고, 앰버리스트 A21 수지로 중화시키고, 여과한 다음, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 크로마토그래피(CH₂Cl₂-MeOH 중의 6M NH₃, 9:1에 이어 85:15)시켜 (S)-3-(벤질((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)아미노)프로판-1,2-디올(0.427 g, 1.3 mmol, 59.4% 수율)을 무색 고형물로 수득하였다.

¹H NMR 및 ¹³C NMR은 화합물 3.4에 대한 것과 동일하였다.

실시예 5.5 - (S)-7-((2,3-디히드록시프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d] 피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드

(S)-3-(벤질((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)아미노)프로판-1,2-디올(0.1 g, 0.305 mmol)을 MeOH(10 ml)에 용해하고, 물(10 ml)로 희석하고 10% Pd-C(50 mg)를 첨가하였다. 벌루운으로부터의 H₂를 첨가하고, 혼합물을 45분 동안 교반하였다. 이 H₂를 Ar로 대체하고 혼합물을 셀라이트를 통과시켜 여과하였다. 셀라이트를 여러 분획의 고온수로 추출하고, 합한 여액을 고형물(53 mg)로 증발시켰다. 상기 고형물을 실리카 겔 상에서 크로마토그래피(CH₂Cl₂-MeOH-cNH₃, 5:4.5:0.5)시켜 유리 염기 형태의 생성물을 무색 고형물로 수득하였다. 생성물을 5% HCl을 사용하여 무색 거품인 이의 히드로클로라이드로 전환시키고 MeOH로부터 재결정화시켜 (S)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)프로판-1,2-디올 히드로클로라이드(35mg, 41.8%)을 수득하였다.

¹H NMR 및 ¹³C NMR은 화합물 3.5에 대한 것과 동일하였다.

실시예 6 - 7-((1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 6.1 - 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-2-(히드록시메틸)프로판-1,3-디올의 합성

나트륨 시아노보로히드라이드를, 메탄올(5 ml) 중의 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(50 mg, 168 μmol) 및 2-아미노-2-(히드록시메틸)프로판-1,3-디올(20.37 mg, 168 μmol)의 현탁액에 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 미정제 반응물을 실리카 상으로 흡수시키고, 20% MeOH/EtOAc로 용리시켜 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-2-(히드록시메틸)프로판-1,3-디올(24 mg, 59.6 μmol, 35.5% 수율)을 시럽으로 수득하였다.

실시예 6.2 - 2-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-2-(히드록시메틸)프로판-1,3-디올의 합성

보론 트리브로마이드(1 mL, 1.0 mmol)를 디클로로메탄(5 mL)중의 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-2-(히드록시메틸)프로판-1,3-디올(30 mg, 74.5 μmol)의 용액에 적가하고, 실온에서 교반하였다. 1시간 후에 백색 고형물을 반응물로부터 침전시킨 다음, 반응물을 메탄올로 켄칭시키고, 진공 하에서 농축시키고, 메탄올(3 X 25 mL)로 함께 증류시켜 미정제 잔류물을 수득하였다. 이 잔류물을 실리카 상으로 흡수된 메탄올 중에 용해시키고, 용리제로 5:4.5:0.5 DCM:MeOH:NH₄0H를 사용하여 크로마토그래피시켜 2-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-2-(히드록시메틸)프로판-1,3-디올(7 mg, 26.1 μmol, 35.0% 수율)을 백색 고형물로 수득하고, 이것을 NMR 분석을 위해 HCl 염으로 전환시켰다. 융점 223-224℃(EtOH로부터의 플레이트).

실시예 7 - 3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-부탄올 및 -에탄올의 합성

실시예 7.1 - 7-((벤질(4-히드록시부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

물(5 ml) 중의 3-(벤질아민)부탄올(172 mg, 0.96 mmol), 9-데아자히폭산 틴(100 mg, 0.74 mmol) 및 37% 수성 포름알데히드(72 ㎕, 0.96 mmol)의 혼합물을 교반시키고 85℃에서 마개막은 플라스크 중에서 밤새 가열하였다. 용액을 증발 건조시키고, 잔류물을 실리카(DCM-MeOH 9:1 내지 8:2) 상에서 크로마토그래피시켜 7-((벤질(4-히드록시부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(130 mg, 0.40 mmol, 55% 수율)을 백색 고형물로 수득하였다.

실시예 7.2 - 7-((4-히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

이소-프로판올(3 ml) 중의 7-((벤질(4-히드록시부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(230 mg, 0.70 mmol)에 10% Pd-C(50 mg)를 첨가하였다. 이 혼합물을 1기압의 수소 하 50℃에서 밤새 교반하였다. 이후, 용액을 셀라이트 패드 상에서 여과시키고, 이 패드를 MeOH(10 ml)로 세척하였다. 여액을 증발 건조시키고 잔류물을 실리카(DCM-MeOH 8:2 + 1% cNH₃)상에서 크로마토그래피시켜 7-(((4-히드록시부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(133 mg, 0.56 mmol, 80% 수율)을 백색 고형물로 수득하였다.

실시예 7.3 - 7-((2-히드록시에틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

물(5 ml) 중의 에탄올아민(78 ㎕, 0.96 mmol), 9-데아자히폭산틴(100 mg, 0.74 mmol) 및 37% 수성 포름알데히드(72 ㎕, 0.96 mmol)의 혼합물을 교반시키고, 이것을 85℃에서 마개막은 플라스크 중에서 밤새 가열하였다. 상기 용액을 증발 건조시키고, 잔류물을 실리카(DCM-MeOH-cNH₃ 6:3.5:0.5)상에서 크로마토그래피시켜 7-((2-히드록시에틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(100 mg, 0.48 mmol, 65% 수율)을 엷은 갈색 고형물로 수득하였다.

실시예 8 - 7-((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 8.1 - N-벤질(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메탄아민의 합성

벤질아민(10 mL, 92 mmol) 중의 (2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸 메탄설포네이트(1.70 g, 7.58 mmol)의 용액을 80℃에서 교반하고 TLC로 모니터하였다. 2시간 후에, 반응이 종료되었음을 확인하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 톨루엔(소량의 에틸아세테이트를 함유함)으로 희석하고 물로 세척한 다음, 건조하고 진공 하에서 농축시켰다. 용리제로 에틸아세테이트를 사용하여 실리카 상에서 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 N-벤질(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메탄아민(1.51 g, 85% 수율)을 황색 오일로 수득하였다.

실시예 8.2 - 7-((벤질((2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

아세트산(0.122 mL, 2125 μmol)을, 1,4-디옥산(2 mL, 2.34E+04 μmol) 중의 N-벤질(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메탄아민(100 mg, 425 μmol)의 용액에 적가하고 3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(115 mg, 850 μmol)을 첨가하였다. 생성되는 현탁액을 95℃(조 온도)로 가열하고, 그 온도에서 밤새 유지하였다. 반응물을 주위 온도로 냉각시켰다. 용리제로 5% 7N NH₃/MeOH을 사용하는 실리카 상에서 컬럼 크로마토그래피하여, 추정컨대 7-((벤질((2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(56 mg, 146 μmol, 34.5% 수율)을 수득하였는데, 이것을 추가로 특성화하지 않고 후속 단계에 사용하였다.

실시예 8.3 - 7-((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

cHCl를, 메탄올(2 mL) 중의 7-((벤질((2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(50 mg, 131 μmol)의 교반시킨 용액에 첨가하였다. 0.5시간 후에, 반응물을 진공 하에서 농축시키고, 메탄올과 함께 증류시켰다. 미정제 반응물을 실리카 겔 상으로 메탄올 용액으로서 흡수시키고, 용리제로 20% 7N NH₃/MeOH를 사용하는 실리카 상에서 크로마토그래피로 정제하여 추정컨대 7-(((2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(19 mg, 42.4% 수율)을 백색 고형물로 수득하였다. 이것을 특성화하지 않고 후속 단계에 사용하였다. 물(2 mL, 1.11E + 05 μmol) 중의 7-(((2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(19 mg, 55.5 μmol) 및 10% 탄소상 팔라듐(56 mg, 526 μmol)의 용액을 1 기압의 수소(0.101 mg, 50.2 μmol)하에서 72시간 동안 교반시켰다. 반응물을 셀라이트^®를 통해 여과하고, 여액을 진공 하에서 농축시켜 미정제 잔류물을 수득하고, 이것을 용리제로 5:4.5:0.5 DCM:MeOH:NH₄OH을 사용하는 실리카 겔 상에서 크로마토그래피로 정제하여 7-((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드(4 mg, 27.6% 수율)를 백색 고형물로 수득하였다.

실시예 9 - 7-(((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필)(메틸)-아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 9.1 - (2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)-N-메틸메탄아민의 합성

메틸아민 용액(3 ml, 34.8 mmol)을, DMSO(7 mL) 중의 (2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸 메탄설포네이트(0.9 g, 4.01 mmol, 문헌(B. Xu et al. J. Med. Chem. 2002, 45, 5694)에 기재된 바와 같이 제조함)의 용액에 첨가하고, 이것을 75℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 CHCl₃로 희석하고, 이 CHCl₃를 물(X2)로 세척하고, 건조한 다음 진공 하에서 농축시켜 대략 670 mg의 미정제 생성물을 수득하였다. 이 미정제 물질을 용리제로 DCM, 20% MeOH/DCM, 및 MeOH/DCM 중의 20% 7N NH₃를 사용하는 실리카 상에서 크로마토그래피하여 (2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)-N-메틸메탄아민(330 mg, 52% 수율)을 오일상 잔류물로서 수득하였다.

실시예 9.2 - 7-((((2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸)(메틸)-아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

아세트산(0.180 mL, 3140 μmol)을, 1,4-디옥산(2 mL, 2.34E + 04 μmol) 중의 (2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)-N-메틸메탄아민(100 mg, 628 μmol)의 용액에 적가한 다음, 3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(170 mg, 1256 μmol)을 첨가하였다. 생성되는 현탁액을 95℃(조 온도)로 가열하고 그 온도에서 밤새 유지하였다. 실리카 상으로 흡수시킨 후에, 용리제로 MeOH/DCM 중의 10% 7N NH₃를 사용하여 크로마토그래피하여 하나의 주 생성물로서 추정컨대 7-((벤질((2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(120 mg, 62% 수율)을 수득하였다. 이것을 추가로 특성화하지 다음 단계에 사용하였다.

실시예 9.3 - 7-(((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필)(메틸)-아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

염산 30%(10.00 ㎕, 326 μmol)을, 메탄올(13.21 ㎕, 326 μmol) 중의 7-((((2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸)(메틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(100 mg, 326 μmol)의 용액에 첨가하고, 생성되는 반응물을 30분 동안 정치시켰다. 반응물을 진공 하에서 농축시켜 고형물을 수득하였다. 고형물을 메탄올 중에 재용해하고 실리카 상으로 흡수시켰다. 용리제로 MeOH 중의 20% 7N NH₃를 사용하여 크로마토그래피시켜 표제 화합물을 고형물(80 mg, 92% 수율)로 수득하였다.

실시예 10 - 7-((1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드의 합성

실시예 10.1 - 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)프로판-1,3-디올의 합성

아세틸 클로라이드(0.117 ml, 1.65 mmol)를, MeOH(5 ml) 중의 2-아미노프로판-1,3-디올(0.3 g, 3.29 mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.196 g, 0.659 mmol, 문헌(G. B. Evans, R.H. Furneaux, A, Lewandowicz, V.L. Schramm and P.C. Tyler, J. Med. Chem., 2003, 46, 3412)에 기재된 대로 제조함)의 교반시킨 용액에 첨가하였다. 나트륨 시아노보로히드라이드(0.062 g, 0.988 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂-Me0H-28% NH₄OH, 95:5:0.5에 이어9:1:0.05) 상에서 크로마토그래피하여 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-프로판-1,3-디올(0.188 g, 77%)을 무색 고형물로 수득하였다.

실시예 10.2 - 7-((1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드의 합성

실시예 10.1로부터의 생성물(0.18 g, 0.483 mmol)을 37% HCl 중에서 환류 하 에 1.5시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 MeOH:H₂O의 1:1 혼합물 중에 용해시키고, 앰버리스트 A21 수지로 중화시킨 다음, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(ⁱPrOH-물-28% NH₄OH, 92:0.4:0.4) 상에서 크로마토그래피시켜 유리 염기 형태의 생성물을 수득하고, 이것을 5% HCl를 사용하여 무색 고형물인 7-((1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드(0.085 g, 64.0%)로 전환하였다.

실시예 11 - 7-(((1,3-디히드록시프로판-2-일)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드의 합성

실시예 11.1 - 2-(((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)(2-히드록시에틸)아미노)프로판-1,3-디올 히드로클로라이드의 합성

나트륨 시아노보로히드라이드(0.011 g, 0.18 mmol)를, MeOH(3 ml) 중의 실시예 10.2의 생성물(0.041 g, 0.15 mmol) 및 1,4-디옥산-2,5-디올(0.027 g, 0.22 mmol, 시그마-알드리치)의 용액에 첨가하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고 잔류물을 실리카 겔(ⁱPrOH-28% 수성 NH₄OH-물, 98:1:1)상에서 크로마토그래피시켜 미정제 생성물을 황색 고형물(약 21 mg)로서 수득하였다. 이 고형물을 소량의 7M NH₃-EtOH 용액으로 분쇄시켜 유리 염기 형태의 표제 화합물을 무색 고형물(약 12 mg)로서 수득하였다. 이 고형물을 과량의 5% 수성 HCl에 용해한 다음, 용매를 증발시켜 7-(((1,3-디히드록시프로판-2-일)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드를 고형물(15 mg, 32%)로 수득하였다.

실시예 12 - 7-((1,3-디히드록시-2-(메틸티오메틸)프로판-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 12.1 - N-(5-(히드록시메틸)-2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)피발아미드의 합성

메탄올(400 mL) 및 물(40 mL) 중의 2-아미노-2-(히드록시메틸)프로판-1,3-디올(15.7 g, 130 mmol) 및 디-3차-부틸 디카보네이트(31.1 g, 143 mmol)의 용액을 주위 온도에서 72시간 동안 교반하였다. 플라스크의 내용물을 감압 하에서 농축시키고, 생성되는 백색 고형물을 최소량의 고온 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 밤새 재결정화시켰다. 결정을 여과하고 석유 에테르로 세척하여 N-(1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일)피발아미드(26.5 g, 130 mmol, 100%)를 보풀감이 있는(fluffy) 백색 침상 물질로 수득하였다. DMF(100 mL) 중의 N-(1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일)피발아미드(9.50 g, 42.0 mmol) 및 2,2-디메톡시프로판(16.0 mL, 129 mmol)의 용액에 피리디늄 파라-톨루엔설포네이트(0.540 g, 2.15 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응물을 주위 온도에서 15시간 동안 교반시킨 후에, TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트, 4:1, 에를리히(Erlichs) 장치를 사용하여 시각화됨)로 반응이 종료되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 디에틸 에테르로 희석하고, 중탄산나트륨 수용액으로 3회 세척하고 염수로 1회 세척한 다음 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과한 다음, 감압 하에서 농축시켰다. 생성되는 반-고형물을 최소량의 고온 석유 에테르로부터 재결정하여 N-(5-(히드록시메틸)-2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)피발아미드(7.32 g, 65%)를 백색 결정으로 수득하였다.

실시예 12.2 - 3차-부틸 2,2-디메틸-5-(메틸티오메틸)-1,3-디옥산-5-일카바메이트의 합성

CH₂Cl₂(10 mL) 중의 N-(5-(히드록시메틸)-2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)피발아미드(1.03 g, 4.20 mmol) 및 트리에틸아민(1.52 mL, 10.9 mmol)의 용액에 메탄설포닐 클로라이드(0.425 mL, 5.46 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 1.5시간 후에 TLC(석유 에테르: 에틸아세테이트, 4:1, 에를리히 장치를 사용하여 시각화함)로 반응이 종료되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 CH₂Cl₂로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 여과한 다음, 감압 하에서 농축시켜 (2,2-디메틸-5-피발아미노-1,3-디옥산-5-일)-메틸 메탄설포네이트(1.35 g, 4.17 mmol, 99%)를 엷은 황색 고형물로 수득하였다. DMF(3 mL) 중의 (2,2-디메틸-5-피발아미노-1,3-디옥산-5-일)-메틸 메탄설포네이트(0.566 g, 1.67 mmol)의 용액에 아르곤 하 실온에서 15시간 동안 나트륨 티오메톡사이드(0.292 g, 4.17 mmol)를 첨가하였다. TLC(석유 에테르: 에틸아세테이트, 4:1 , 에를리히 장치를 사용하여 시각화함)로 반응이 종료됨을 확인하고, 플라스크의 내용물을 에틸아세테이트로 희석한 다음, 중탄산나트륨 수용액으로 3회 세척하고 염수로 1회 세척하였다. 유기 층을 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 여과한 다음 감압 하에서 농축하였다. 생성되는 담황색 고형물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(CH₂Cl₂: 메탄올, 5:1)로 정제하여 3차-부틸 2,2-디메틸-5-(메틸티오메틸)-1,3-디옥산-5-일카바메이트(0.460 g, 95%)를 백색 고형물로 수득하였다.

실시예 12.3 - 2-아미노-2-(메틸티오메틸)프로판-1,3-디올, 히드로클로라이드 염의 합성

메탄올(10 mL) 중의 3차-부틸 2,2-디메틸-5-(메틸티오메틸)-1,3-디옥산-5-일카바메이트(2.64 g, 9.06 mmol)의 용액을 메탄올(100 mL) 중의 진한 염산(8 mL)의 용액에 첨가하고, 감압 하에서 농축시켜 황색 오일을 수득하고, 이것을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(CH₂Cl₂: 메탄올: 7M 메탄올성 암모니아, 5:2:1)로 정제하였다. 잔류물을, 진한 염산(1 ml)과 메탄올(5 ml)의 용액으로 처리하고 감압 하에서 농축시킴으로써 히드로클로라이드 염으로 재전환시켜 2-아미노-2-(메틸티오메틸)프로판 -1,3-디올, 히드로클로라이드 염(1.37 g, 9.06 mmol, 100%)을 수득하였다

실시예 12.4 - 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-2-(메틸티오메틸)프로판-1,3-디올의 합성

메탄올(10 ml) 중의 2-아미노-2-(메톡시메틸)-1,3-프로판디올(265 mg, 0.156 mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(505 mg, 0.149 mmol)의 용액에 나트륨 시아노보로히드라이드(140 mg, 0.223 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 5시간 동안 교반하였다. TLC(CH₂Cl₂:메탄올:7M 메탄올성 암모니아, 19:1:0.5, UV 및 에를리히 장치를 사용하여 시각화함)로부터 반응이 실질적으로 종료된 것을 확인하고, 플라스크의 내용물을 감압 하에서 농축시킨 다음, 여기에 기울기 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(CH₂Cl₂: 메탄올: 7M 메탄올성 암모니아, 20:1:0.5 내지 10:1:0.5)를 실시하여, 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-2-(메틸티오메틸)프로판-1,3-디올(440 mg, 62%)을 황색 검으로서 수득하였다.

실시예 12.5 - 7-((1,3-디히드록시-2-(메틸티오메틸)프로판-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

메탄올(1 mL) 중의 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-2-(메틸티오메틸)프로판-1,3-디올(200 mg, 0.421 mmol)의 용액을, 메탄올(5 mL) 중의 진한 염산(2 ml)의 용액에 첨가하고, 반응물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 플라스크의 내용물을 감압 하에서 농축하고 메탄올(5 mL) 중에 재용해시킨 다음, 앰버리스트 21 수지(~1 g)를 첨가하였다. 주위 온도에서 1시간 동안 교반시킨 후에, 상기 수지를 여과로 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시킨 다음 7M 메탄올성 암모니아(5 mL)에 재용해시키고 30분 동안 교반하였다. TLC(CH₂Cl₂:7M 메탄올성 암모니아, 4:1 , 에를리히 장치를 사용하여 시각화함)로부터 반응이 종료됨을 확인하고 용액을 감압 하에서 농축시키고 잔류물을 실리카 컬럼 상으로 건조-로딩시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(CH₂Cl₂:7M 메탄올성 암모니아, 3:1 , 에를리히 장치를 사용하여 시각화함)로 정제하여 7-((1,3-디히드록시-2-(메틸티오메틸)프로판-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(62.0 mg, 49%)을 백색 포말로 수득하였다.

실시예 13 - (R)-7-(((2,3-디히드록시프로필)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)- 3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 13.1 - (R)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸아미노)에탄올의 합성

탄산칼륨(0.125 g, 0.904 mmol)을, CH₃CN(4 ml) 중의 실시예 3.2로부터의 생성물(0.2 g, 0.904 mmol) 및 2-브로모에탄올(0.096 ml, 1.356 mmol)의 용액에 첨가하고, 이 혼합물을 환류 하에 64시간 동안 가열시켰다. 냉각시킨 후에, 혼합물을 EtOAc로 희석하고 NaHCO₃ 포화 용액으로 세척하고, 건조시킨 다음, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(EtOAc-헥산 1:1에 이어 7:3)상에서 크로마토그래피하여 미정제 (R)-2-(벤질((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)아미노)에탄올을 무색 오일(203 mg, 85%)로 수득하였다. 상기 오일을 MeOH(5 ml)에 용해하고, 10% Pd-C(50 mg)을 첨가하고, 혼합물을 벌루운으로부터 첨가된 수소 하에서 1시간 동안 교반하 였다. 수소를 Ar로 대체하고 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 용매를 증발시킨 다음, 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂-Me0H-28% NH₄OH, 97:3:0.5에 이어 9:1:0.1) 상에서 크로마토그래피하고, 생성물을 120℃/0.05 mmHg에서 쿠겔로흐(kugelrohr) 장치 상에서 증류하여 (R)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸아미노)에탄올(0.103 g, 78%)을 무색 검으로서 수득하였다.

실시예 13.2 - (R)-2-(((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)아미노)에탄올의 합성

나트륨 트리아세톡시 보로히드라이드(0.126 g, 0.594 mmol) 및 MgSO₄(500 mg)를 1,2-디클로로에탄(3 ml) 중의 실시예 13.1로부터의 생성물(0.08 g, 0.457 mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.136 g, 0.457 mmol, 문헌(G. B. Evans, R.H. Furneaux, A, Lewandowicz, V.L. Schramm and P.C. Tyler, J. Med. Chem., 2003, 46, 3412)에 기재된 대로 제조함)의 용액에 첨가하고, 이 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂로 희석시키고 NaHCO₃ 포화 용액으로 세척하고, 건조한 다음, 용매를 증발시켰다. 잔 류물을 실리카 겔(EtOAc에 이어 EtOAc-MeOH-28% NH₄OH, 97:3:0.01) 상에서 크로마토그래피하여 (R)-2-(((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)아미노)에탄올(0.180 g, 86%)을 무색 검으로서 수득하였는데, 이것은 정치 시에 담황색으로 변색되었다.

실시예 13.3 - (R)-7-(((2,3-디히드록시프로필)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 13.2로부터의 생성물(0.165 g, 0.361 mmol)을 37% HCl(4 ml)에 용해하고 1.5시간 동안 100℃로 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 MeOH 및 소량의 물에 용해시킨 다음, 앰버리스트 A21 수지로 중화하였다. 상기 혼합물을 여과하고 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(ⁱPrOH-H₂O-28% NH₄OH 9:0.5:0.5에 이어 8:1.5:0.5)상에서 크로마토그래피하여 (R)-7-(((2,3-디히드록시프로필)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(0.074 g, 72.5%)을 무색 고형물로 수득하였다.

실시예 14 - (S)-7-(((2,3-디히드록시프로필)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 14.1 - (S)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸아미노)에탄올의 합성

실시예 5.2로부터의 생성물(200 mg, 0.904 mmol)을 2-브로모에탄올(0.096 ml, 1.356 mmol) 및 탄산칼륨(0.125 g, 0.904 mmol)으로 처리하여 미정제 (S)-2-(벤질((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)아미노)에탄올(0.172 g, 71.7%)을 수득한 다음, 이것을 실시예 13.1에서의 (R)-거울상 이성질체에 대해서와 정확히 동일 한 방식으로 수소첨가분해하여 70 mg(62%)의 화합물 14.1을 수득하였다. ¹H 및 ¹³C NMR 데이터는 실시예 13.1에서의 (R)-거울상이성질체와 동일하였다.

실시예 14.2 - (S)-2-(((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)아미노)에탄올의 합성

실시예 14.1로부터의 생성물(0.048g, 0.274 mmol)을 실시예 13.2에서의 R-거울상이성질체에 대해 기술된 것과 동일한 방식으로 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.081 g, 0.274 mmol) 및 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(0.075 g, 0.356 mmol)로 환원적으로 아민화시켜, (S)-2-(((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)아미노)에탄올(100 mg, 80%)을 무색 검으로서 수득하였는데, 이것은 담황색으로 서서히 변색되었다. ¹H 및 ¹³C NMR 데이터는 실시예 13.2에서의 (R)-거울상이성질체와 동일하였다.

실시예 14.3 - (S)-7-(((2,3-디히드록시프로필)(2-히드록시에틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 14.2로부터의 생성물(100 mg, 0.219 mmol)을 실시예 13.3에서의 R-거울상 이성질체에 대해 기술된 것과 동일한 방식으로 표제 화합물(42 mg, 67.9%)로 전환하였다. ¹H 및 ¹³C NMR 데이터는 실시예 13.3에서의 (R)-거울상이성질체에 대해 기술된 것과 동일하였다.

실시예 15 - 7-(((2S,3S)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 15.1 - (2R,3S)-디에틸 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-3-히드록시석시네이트의 합성

(2R,3S)-디에틸 2-아미노-3-히드록시석시네이트(문헌(A. Breuning, R. Vicik and T. Schirmeister, Tetrahedron Asymm., 2003, 14, 3301 and Z. Tang, Z-H. Yang, X.-H. Chen, L.-F. Cun, A. -Q. Mi, Y. -Z. Jiang and L-Z. Gong, J. Am. Chem. Soc, 2005, 127, 9285)에 기재된 대로 제조됨)(0.109g, 0.53mmol), 나트륨 시아노보로히드라이드(0.055g, O.88 mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.131g, 0.44mmol)의 혼합물을 메탄올(3x)로부터 증발시켰다. 잔류물을 메탄올(10ml)에 용해하고 아세트산을 첨가하였다(5 점적). 반응 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실리카 겔 상으로 증발시키고 크로마토그래피(에틸아세테이트-페트롤, 2:1에 이어 에틸아세테이트-트리에틸아민, 1:99)시켜 무색 오일(0.166g, 77%)을 수득하였다.

실시예 15.2 - (2S,3S)-3-((5-(벤질옥시메틸)-4~메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올의 합성

디에틸 에테르(10ml) 중의 실시예 15.1의 생성물(0.166g, 0.34mmol)의 교반 용액에 메탄올(0.14ml, 3.41mmol)에 이어 리튬 보로히드라이드(0.85ml, 1.71mmol, THF 중의 2.0M)를 첨가하였다. 30분 후에, 반응 혼합물을 메탄올로 희석한 후에 농축하였다. 잔류물을 메탄올에 용해하고 진한 암모니아 수용액(1 ml)으로 희석하고 실리카 겔 상으로 증발시켰다. 이 물질을 실리카 겔(DCM-메탄올-진한 암모니아, 85:15:2, 70:30:2에 이어 50:50:4) 상에서 크로마토그래피하였다. 이로부터 3개의 상이한 화합물이 수득되었다: 하나는 표제 화합물이고, 2개의 상이한 염 형태 의 표제 화합물. 이들 3개의 화합물을 합하여 무색 오일(0.103g, 75%)을 수득하였다.

실시예 15.3 - 7-(((2S,3S)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 트리플루오로아세트산 염의 합성

-78℃에서 DCM(10ml) 중의 실시예 15.2로부터의 생성물(0.103g, 0.26mmol)의 교반 용액에 보론 트리브로마이드(2.56ml, 2.56mmol, DCM 중의 1.0M)를 첨가하였다. 15분 후에 반응 혼합물을 주위 온도로 가온시키고 메탄올(3x)과 함께 증발시켰다. 잔류물을 메탄올(7N 암모니아 용액) 중에서 10분 동안 교반시키고 실리카 겔 상으로 증발시켰다. 이 물질을 실리카 겔(클로로포름-메탄올-진한 암모니아, 10:9:1) 상에서 그리고 극성-RP HPLC(TFA-메탄올-물, 0.1:1:99에서 0.1:1:4로 비율을 증가시킴) 상에서 크로마토그래피시켜 백색 고형물(0.018mg, 26%)을 수득하였다.

실시예 16 - (2RS,3SR)-1,3,4-트리히드록시-N,N-디메틸-N-((4-옥소-4,5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)부탄-2-암모늄 요오다이드의 합성

실시예 16.1 - (5S,6R)-2,2-디메틸-6-((S)-1-페닐에틸아미노)-1,3-디옥세판-5-올의 합성

이 화합물을 문헌(T. Inaba, A. Birchler, Y. Yamada, S. Sagawa, K. Yokota, K. Ando and I. Uchida, J. Org. Chem., 1998, 63, 7582-7583)에 기재된 방법에 따라 제조하였다..

실시예 16.2 - (5S,6R)-6-아미노-2,2-디메틸-1,3-디옥세판-5-올의 합성

이소프로판올(5 ml) 중의 (5S,6R)-2,2-디메틸-6-((S)-1-페닐에틸아미노)-1,3-디옥세판-5-올(500 mg, 1.88 mmol)에 10% Pd-C(100 mg)을 첨가하였다. 이 혼합물을 1기압의 수소 하 50℃에서 밤새 교반하였다. 이후, 용액을 셀라이트 패드 상에서 여과하고, 이 패드를 MeOH(20 ml)로 세척하였다. 여액을 증발 건조시켜 (5S,6R)-6-아미노-2,2-디메틸-1,3-디옥세판-5-올(300 mg, 1.86 mmol, 99% 수율)을 백색 고형물로 수득하였다.

실시예 16.3 - 7-(((2RS,3SR)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

물(2 ml) 중의 (5S,6R)-6-아미노-2,2-디메틸-1,3-디옥세판-5-올(155 mg, 0.96 mmol), 9-데아자히폭산틴(100 mg, 0.74 mmol) 및 37% 수성 포름알데히드(140 ㎕, 1.85 mmol)의 혼합물을 교반하고, 마개막은 플라스크에서 85℃에서 밤새 가열하였다. 상기 용액을 증발 건조시켰다. 잔류물을 10분 동안 메탄올성 암모니아 중에서 교반한 후에 증발시켰다. 잔류물을 실리카(DCM-MeOH-cNH₃ 6:3.5:0.5) 상에서 크로마토그래피하여 라세미체인 7-(((2RS,3SR)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(55 mg, 0.20 mmol, 30% 수율)을 백색 고형물로 수득하였다.

실시예 16.4 - (2RS,3SR)-1,3,4-트리히드록시-N,N-디메틸-N-((4-옥소-4,5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)부탄-2-아미늄 요오다이드의 합성

DMF(5 mL) 중의 rac-(2R,3S)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올(50 mg, 0.19 mmol) 및 탄산칼륨(130 mg, 0.93 mmol)의 혼합물에 요오도메탄(15 ㎕, 0.20 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 이후, 용매를 증발시키고 잔류물을 용리제로 DCM-MeOH-cNH₃₍9:1:0.1)를 사용하는 크로마토그래피로 정제하여 (2RS,3SR)-1,3,4-트리히드록시-N,N-디메틸-N-((4-옥소-4,5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)부탄-2-아미늄 요오다이드(30 mg, 0.10 mmol, 57% 수율)를 무색 오일로 수득하였다.

실시예 17 - 7-(((2R,3S)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 17.1 - (2R,3S)-디에틸 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-3-히드록시석시네이트의 합성

(2S,3S)-디에틸 2-아미노-3-히드록시석시네이트(문헌(A. Baruch, S.H.L. Verhelst, M. Bogyo, K.A.H. Chehade, Synthesis, 2005, 2, 240-244 and Z. Tang, Z. -H. Yang, X.-H. Chen, L.-F. Cun, A.-Q. ml, Y.-Z. Jiang and L.-Z. Gong, J. Am. Chem. Soc, 2005, 127, 9285)에 기재된 대로 제조함)(0.871g, 4.24mmol), 나트륨 시아노보로히드라이드(0.444g, 7.07mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]I피리미딘-7-카르브알데히드(1.051g, 3.54mmol)의 혼합물을 메탄올(3x)로부터 증발시켰다. 잔류물을 메탄올(20ml)에 용해하고 아세트산을 첨가하였다(10점적). 반응 혼합물을 주위 온도에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카 겔 상으로 증발시켜 크로마토그래피하였다(트리에틸아민-메탄올-DCM, 1 :3:99). 이로써, 무색 오일(2.577g, 150%)이 수득되었다. ¹H NMR로부터 생성물이

(공동-극성인) 출발물질 아민 및 몇몇의 보로히드라이드 잔류물로 오염되어 있음을 확인하였다.

실시예 17.2 - (2S,3R)-3-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올의 합성

디에틸 에테르(30ml) 중의 실시예 17.1로부터의 생성물(1.718g, 3.53mmol)의 교반 용액에 메탄올(1.43ml, 35.3mmol)에 이어 리튬 보로히드라이드(8.83ml, 17.7mmol, THF 중의 2.0M)를 첨가하였다. 1시간 후에 메탄올(1.43ml, 35.3mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고 계속하여 교반하였다. 1시간 후에 추가의 반응 혼합물을 메탄올로 희석한 다음 농축하였다. 잔류물을 메탄올(20ml)에 용해하고, 염산(20ml, 1M)으로 희석하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔(메탄올 [7N 암모니아]-DCM, 15:85) 상에서 크로마토그래피하여 백색 고형물(0.94Og, 66%)을 수득하였다.

실시예 17.3 - 7-(((2R,3S)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 트리플루오로아세트산 염의 합성

-78℃에서 DCM(30ml) 중의 실시예 17.2로부터의 생성물(0.94Og, 2.34mmol)의 교반 용액에 보론 트리브로마이드(23.4ml, 23.4mmol, DCM 중의 1.0M)를 첨가하였다. 15분 후에 반응 혼합물을 주위 온도로 가온시키고 메탄올(3x)과 함께 증발시켰다. 잔류물을 메탄올(7N 암모니아 용액) 중에서 10분 동안 교반시키고 실리카 겔 상으로 증발시켰다. 상기 물질을 실리카 겔(클로로포름-메탄올-진한 암모니아, 10:9:1) 상에서 그리고 극성-RP HPLC(TFA-메탄올-물, 0.1:3:97에서 0.1:50:50로 비율을 증가시킴) 상에서 크로마토그래피하여 결정형의 백색 고형물(0.234mg, 26%)을 수득하였다.

실시예 18 - 7-(((2S,3R)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 18.1 - (2S,3R)-디에틸 2-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-3-히드록시석시네이트의 합성

(2R,3R)-디에틸 2-아미노-3-히드록시석시네이트(문헌(A. Baruch, S.H.L. Verhelst, M. Bogyo, K.A.H. Chehade, Synthesis, 2005, 2, 240-244 and Z. Tang, Z.-H. Yang, X.-H. Chen, L.-F. Cun, A. -Q. Mi, Y.-Z. Jiang and L.-Z. Gong, J. Am. Chem. Soc, 2005, 127, 9285)에 기재된 대로 제조함)(0.083g, 0.40mmol), 나트륨 시아노보로히드라이드(0.042g, 0.67mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.10Og, 0.34mmol)의 혼합물을 메탄올(3x)로부터 증발시켰다. 잔류물을 메탄올(10ml)에 용해하고 아세트산을 첨가하였다(5 점적). 반응 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카 겔 상으로 증발시키고, 크로마토그래피(트리에틸아민-에틸아세테이트-페트롤, 1:66:33)시켜 무색 오일(0.114g, 70%)을 수득하였다. ¹H NMR로부터 상기 생성물이 (공동-극성의) 출발물질인 아민으로 약간 오염되어 있음이 밝혀졌다.

실시예 18.2 - (2R,3S)-3-((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4~트리올의 합성

디에틸 에테르(10ml) 중의 실시예 18.1로부터의 생성물(0.114g, 0.23mmol)의 교반 용액에 메탄올(0.10ml, 2.34mmol)에 이어 리튬 보로히드라이드(0.59ml, 1.17mmol, THF 중의 2.0M)를 첨가하였다. 30분 후에, 반응 혼합물을 메탄올로 희석한 다음, 실리카 겔 상으로 증발시켰다. 상기 물질을 크로마토그래피(진한 암모니아-메탄올-DCM, 0.5:5:95에 이어 0.5:15:85)하여 무색 검(0.056g, 59%)을 수득하였다.

실시예 18.3 - 7-(((2S,3R)-1,3,4-트리히드록시부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

-78℃에서 DCM(7ml) 중의 실시예 18.2로부터의 생성물(0.056g, 0.14mmol)의 교반 용액에 보론 트리브로마이드(1.39ml, 1.39mmol, DCM 중의 1.0M)를 첨가하였다. 15분 후에 반응 혼합물을 주위 온도로 가온시키고 메탄올(3x)과 함께 증발시켰다. 잔류물을 메탄올(7N 암모니아 용액) 중에서 10분 동안 교반시키고, 실리카 겔 상으로 증발시켰다. 이 물질을 실리카 겔(클로로포름-메탄올-진한 암모니아, 10:9:1) 상에서 크로마토그래피하여 백색 고형물(17mg, 46%)을 수득하였다.

실시예 19 - 7-(((2S,3R)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 19.1 - (2S,3R)-O-이소프로필리덴-4-히드록시부틸아민의 합성

무수 THF(약 45 ml) 중의 2,3-O-이소프로필리덴-D-에리트론아미드(D.L. Mitchell Canad.J.Chem., 1963, 41, 214)(2.80 g, 16.0 mmol)의 용액을 약 30분에 걸쳐, 주위 온도에서 유지된 THF(40 ml) 중의 리튬 알루미늄 히드라이드(2.43 g, 64.0 mmol)의 교반시킨 현탁액에 적가하였다. 이후 이 혼합물을 밤새 환류시키고 냉각시킨 후에 피져 방식(Fieser manner)으로 작업하였다. 무기 물질을 여과로 제거하고, 여액을 농축시켜 (2S,3R)-0-이소프로필리덴-4-히드록시부틸아민(2.17 g, 84%)을 유동성 시럽으로 수득하였는데, 이것은 후속 반응에 대해 충분히 순수한 것으로 사료되었다.

실시예 19.2 - N-[5-(벤질일옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸아미노 (2S,3R)-2,3-O-이소프로필리덴-2,3,4-부탄트리올

무수 황산 마그네슘(0.5 g)을 함유하는 1,2-디클로로에탄(8 ml) 중의 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.39 g, 1.30 mmol), (2S,3R)-2,3-O-이소프로필리덴-1-아미노-2,3,4-부탄트리올(0.21 g, 1.30 mmol)의 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(0.36 g, 1.70 mmol)를 한번에 첨가하고, 전체를 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 이 혼합물을 DCM으로 희석하고 중탄산나트륨 포화 용액으로 세척한 다음 건조시키고 농축 건조시켰다. 혼합물을 용리제로 2% 내지 5% MeOH/EtOAc를 사용하는 실리카(사전 흡수없이) 상에서 플래쉬 크로마토그래피시켜 분별하여 표제 화합물(0.23 g, 39.9%)을 비유동성 시럽으로 수득하였다.

실시예 19.3 - 7-(((2S,3R)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

진한 염산(10 ml)을 N-[5-(벤질일옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸아미노-(2S,3R)-2,3-0-이소프로필리덴-2,3,4-부탄트리올(0.48 g, 1.08 mmol)에 첨가하고 이 용액을 2시간 동안 환류시키고 나서 냉각시키고, 농축 한 다음 메탄올(10 ml) 및 물(2 ml)에 재용해하였다. 상기 용액을 A-21 수지로 pH 7로 중화시킨 후에 여과로 수거하였다. 미정제 생성물을 실리카 상으로 사전 흡수시키고 용리제로 DCM/MeOH/0.88 NH₃(5:4:1)을 사용하는 실리카 상에서 분별하였다. 표제 화합물을 완속 침전(하룻밤)에 의해 용리하는 용매로부터 선택된 정교한 분획으로 백색 고형물로서 수거하였다.

실시예 19.4 - (2S,3R)-2,3-O-이소프로필리덴-1-아미노-4-메틸티오부탄-2,3-디올의 합성

톨루엔(10 ml) 중의 (2S,3R)-O-이소프로필리덴-4-히드록시부틸아민(1.2 g, 7.44 mmol)의 세게 교반시킨 용액에 물(10 ml), 탄산칼륨(1.55 g, 11.2 mmol)에 이어 벤질 클로로포르메이트(2.54 g, 톨루엔 중의 50% 용액, 7.44 mmol)를 한번에 첨가하였다. 90분 동안 계속하여 교반시킨 후에 혼합물을 DCM으로 희석하고 포화된 중탄산나트륨 및 염수로 세척한 다음 건조시키고 시럽, 1.97 g(90%)으로 농축시켰다. 이 CBz-보호된 아민은 후속하는 반응에 대해 충분히 순수한 것으로 사료되지만 용리제로 40% EtOAc/헥산을 사용하는 실리카 상에서의 크로마토그래피로 정제할 수 있었다.

N-CBz 유도체(4.44 g, 15.1 mmol)의 샘플을 트리에틸아민(1.5 당량, 3.17 ml, 22.6 mmol)을 함유하는 무수 DCM(40 ml) 중에 용해시키고, 상기 용액을 아르곤 블랭킷 하의 얼음조 중에서 냉각시켰다. 메탄설포닐 클로라이드(1.2 당량, 1.4 ml, 18.1 mmol)를 수분에 걸쳐 적가하고, 이때 냉각조를 제거하고 혼합물을 주위 온도에서 30분 동안 교반하였다. 상기 용액을 DCM으로 희석하고, 중탄산나트륨 포화 용액으로 세척하고 건조시킨 다음 농축시켜 N-CBz, O-메실레이트를 무색의 유동상 시럽(5.83 g)으로 수득하였는데, 이것은 후속 반응에 대해 충분히 순수한 것으 로 사료되었다.

상기 N-CBz, O-메실레이트 에스테르(5.83 g)를 무수 DMF(60 ml)에 용해하고 나트륨 티오메톡사이드(2 당량, 2.19 g, 상기 메실레이트 전구체를 기준으로 31.3 mmol)를 3분획(대략)으로 첨가하면서 수조(열을 발산시키도록) 중에 침지시킨 후에일주일에 걸쳐 주위 온도에서 교반시켰다. 이 혼합물을 에테르로 희석하고 생성되는 유기 상을 물로 5회 세척하고 나서 건조시키고 유동상 시럽(4.56 g)으로 농축하였다. 2-성분의 생성물 혼합물을, 0% 내지 40% EtOAc/헥산의 기울기 용리를 이용하는 실리카 상에서 크로마토그래피로 분별하여 N-CBz, 4-티오메틸 유도체(1.02 g, 21%)를 수득하였다.

이 반응으로부터 회수된 주 생성물은 일관되게 시스 3,4-디히드록시피롤리딘의 이소프로필리덴 유도체인 것으로 확인되었다. 미정제의 티오메틸화된 N-CBz 보호된 아민(1.03 g, 3.17 mmol)을 이소프로판올(25 ml) 중에 용해하고 여기에 수성 수산화나트륨(2M, 10 ml, 20.0 mmol)을 첨가하였다. 2상의 혼합물을 24시간 동안 환류시킨 후에 상기 용액을 냉각시키고 이소프로판올의 대부분이 제거되는 지점까지 농축시켰다. 생성물을 에테르 내로 추출하고 에테르 상을 건조시키고 유동상의 밝은 황색 시럽(0.73 g)으로 농축시켰다. 이 미정제 생성물을, 용리제로 먼저 DCM(벤질알콜을 제거하기 위해)에 이어 DCM 중의 2% 내지 6% [7M NH₃/MeOH]을 사용하고 닌히드린을 사용하여 시각화되는 실리카 상에서 사전 흡수시킨 후에 플래쉬 크로마토그래피로 정제하였다. 이러한 방식으로, (2S,3R) 2,3-0-이소프로필리덴-2,3-디히드록시-4-메틸티오부틸아민(0.39 g, 64.3%)을 밝은 황색 시럽으로 수득하였다.

실시예 19.5 - N-[5-(벤질일옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸아미노(2S,3R)-2,3-O-이소프로필리덴-4-메틸티오-2,3-부탄디올의 합성

무수 황산 마그네슘을 함유하는 1,2-디클로로에탄(25 ml) 중의 5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.85 g, 2.51 mmol), (2S,3R)-2,3-0-이소프로필리덴-1-아미노-4-메틸티오-2,3-부탄디올(0.37 g, 1.93 mmol)의 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(0.53 g, 2.51 mmol)를 한번에 첨가하고, 전체를 주위 온도에서 밤새 교반시켰다. 이 혼합물을 DCM으로 희석시키고 중탄산나트륨 포화 용액으로 세척한 다음 건조시키고 농축시켰다(1.32 g). 혼합물을 용리제로 DCM/에틸아세테이트/7M NH₃-MeOH(49:49:2)을 사용하는 실리카(사전 흡수시키면서) 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 분별하여 표제 화합물(0.60 g, 60.3%)을 비유동성 시럽으로 수득하였다.

실시예 19.6 - 7-(((2S,3R)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

-78℃에서 아르곤 하에서 유지된 리튬 나프탈레나이드[무수 THF(25 ml) 중에서 용액 상태의 나프탈렌(1.94 g, 15.2 mmol)과 리튬(0.081 g, 11.7 mmol)의 반응으로부터 제조됨]의 용액에 2분의 기간에 걸쳐, 무수 THF(5 ml) 중의 N-[5-(벤질일옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸아미노(2S,3R)-2,3-O-이소프로필리덴-4-메틸티오-2,3-부탄디올(0.60 g, 1.17 mmol)의 용액을 적가하였다. 이 용액을 -78℃에서 60분 동안 교반시킨 다음, tlc(DCM 7M NH₃-MeOH, 9:1)로부터 출발 물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 이 혼합물을 2-3 ml 물을 첨가하여 켄칭시킨 다음 주위 온도로 가온시키고 거의 건조된 상태로 농축시켰다. 이후, 이 혼합물을 메탄올성 암모니아(7M, 20 ml)와 함께 15분 동안 교반시키고 나서 재농축하였다. 미정제 생성물을 DCM 중에 재용해시키고 실리카 상으로 사전 흡수시킨 다음, 용리제로 DCM 7M NH₃-MeOH, 9:1 칵테일을 사용하여 분별시켜 중간체인 N-[4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸아미노(2S,3R)-2,3-O-이소프로필리덴-4-메틸티오-2,3-부탄디올(0.18 g, 45.5%)을 비유동성 검으로 수득하였다.

N-[4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸아미노(2S,3R)-2,3-0-이소프로필리덴-4-메틸티오-2,3-부탄디올(0.18 g, 0.53 mmol)을 MeOH(15 ml)에 현탁시키고, 여기에 MeOH(10 ml) 중의 아세틸 클로라이드(0.38 ml, 5.3 mmol)의 용액을 첨가하였더니 몇분 이내에 용해되었다. 5시간 동안 계속하여 교반시킨 다음, 이 용액을 A-21 수지로 중화하고, 여과한 다음 실리카 상으로 직접 사전 흡수시켰다. 미정제 생성물을 DCM/MeOH(80:20 + 1 7M NH₃-MeOH)로 개시되고(60:40 +1 7M NH₃-MeOH)로 종료되는 계단화된(stepped) 기울기 용리를 이용하는 플래쉬 크로마토그래피로 분별하고, 선택된 클러스터 의 용기 중에서의 용리 용매로부터 완속 침전으로 수거하였다. 이러한 방식으로, 표제 화합물을 무색 고형물(0.023 g, 13.5%)로 수득하였다.

실시예 20 - 7-(((2RS,3RS)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤 로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 및 7-(((2RS,3RS)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 20.1 - (2R/S,3R/S)-에틸, 메틸 2,3-O-이소프로필리덴타르트레이트의 합성

벤젠(30 ml) 중에 (+) 및 (-) 다에틸 타르트레이트(각각 1.0 g, 9.7 mmol) 및 디메톡시프로판(2.0 g, 19.4 mmol)을 함유하는 용액에 p-톨루엔설폰산(0.1 g)을 첨가하고, 이 혼합물을 3시간 동안 환류시켰다. 상기 용액을 냉각하고 EtOAc(200 ml)로 희석시키고 포화된 염수/중탄산 나트륨 칵테일로 세척한 후에 건조시키고 농축시켜 균일한 유동성 액체(1.78 g, 79%)를 수득하였다. 이 샘플을 쿠겔로흐 장치(120-140°/18 mm)로 증류하여 혼합된 에틸메틸 에스테르를 무색 액체로 수득하였다. 후속하는 대규모 제조에서, 미정제 생성물은 추가 반응에 대해 충분히 순수한 것으로 사료되었다.

실시예 20.2 - (2R/S,3R/S) 메틸 2,3-O-이소프로필리덴타르트라미드의 합성

상기 2,3-O-이소프로필리덴타르트레이트 에스테르(1.78 g, 7.66 mmol)를 MeOH(10 ml)에 용해하고, 메탄올성 암모니아(7M, 1.09 ml, 7.66 mmol)를 첨가하면서 주위 온도에서 교반하였다. 상기 용액을 주위 온도에서 2일 동안 교반시키고 나서 소량의 실리카 상으로 직접 사전 흡수시키고 미정제 생성물을 50% 에틸아세테이트/헥산을 사용하는 기울기 용리에 의해 분별하여 타르트라미드(0.67 g, 43%)를 오일로서 수득하였는데, 이 물질은 용이하게 고화되었다.

실시예 20.3 - (2R/S,3R/S) 2,3-0-이소프로필리덴-1-아미노-2,3,4-부탄트리올의 합성

상기 타르트라미드 에스테르(0.83 g, 4.08 mmol)를 무수 THF(10 ml)에 용해하고, 이것을 주위 온도에서 THF(60 ml) 중의 LAH의 현탁액에 적가하였다. 이후 상기 혼합물을 4시간 동안 환류시키고 나서 얼음조 중에서 냉각시키고 3단계 피저 방법을 사용하여 주의깊게 켄칭시켰다. 무기 물질을 여과로 제거하고 에테르로 완전하게 세정한 다음, 여액을 건조시키고 균일한 무색 시럽(0.6 g, 91%)으로 농축시켰는데, 상기 시럽을 후속 반응에 사용하였다.

실시예 20.4 - N-[5-(벤질일옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸아미노(2R/S,3R/S)-2,3-0-이소프로필리덴-2,3,4-부탄트리올의 합성

무수 황산 마그네슘(1.0 g)을 함유하는 1,2-디클로로에탄(10 ml) 중의 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.59 g, 1.98 mmol), (2RS,3RS)-2,3 이소프로필리덴-1-아미노-2,3,4-부탄트리올(0.41 g, 2.54 mmol)의 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(0.70 g, 3.31 mmol)를 한번 에 첨가하고 전체를 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 이 혼합물을 DCM으로 희석하고 중탄산나트륨 포화 용액으로 세척한 다음, 건조시키고 비유동성 시럽(0.92 g)으로 농축하였다. 상기 N-[5-(벤질일옥시메틸)-4-메톡시-5N-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸-1-아미노(2R/S,3R/S)-2,3-0-이소프로필리덴-2,3,4-부탄트리올을 용리제로 2% 내지 5% MeOH/EtOAc을 사용하는 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피(사전흡수 없이)에 의해 비유동성의 무색 시럽(0.65 g, 58%)으로 수거하였다.

실시예 20.5 - 7-(((2RS,3RS)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

진한 염산(10 ml) 중의 N-[5-(벤질일옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸-1-아미노(2R/S,3R/S)-2,3-이소프로필리덴-2,3,4-부탄트리올(0.48 g, 1.085 mmol)의 용액을 3시간 동안 환류시켰다. 이후, 상기 용액을 냉각시키고 농축시킨 다음, 물(3 ml)을 함유하는 메탄올(10 ml) 중에 재용해시키고, 앰버리스트 A-21 수지로 중화하였다. 상기 수지를 여과로 제거하고, 여액을 비유동성 시럽(0.35 g)으로 농축시키고, 이것의 일부를 RP-HPLC[1% MeOH, 페노메넥스 시너지 4μ POLAR RP 8OA, 25O x 30 mm]로 정제하여 7-(((2RS,3RS)-2,3,4-트리히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(트리플레이트 염)을 무색 포말로 수득하였다.

실시예 20.6 - (2R/S,3R/S)-2,3-0-이소프로필리덴-1-아미노-4-메틸티오부탄-2,3-디올의 합성

톨루엔(70 ml) 중의 (2R/S,3R/S)-2,3-O-이소프로필리덴-1-아미노-2,3,4-부탄트리올(6.92 g, 43.0 mmol)의 세게 교반시킨 용액에 물(70 ml), 탄산칼륨(8.91 g, 1.5 당량, 64.5 mmol)에 이어 벤질 클로로포르메이트(톨루엔 중의 50% w/w, 14.7 g, 43.0 mmol)를 첨가하였다. 주위 온도에서 3시간 동안 교반시킨 후에, 이 혼합물을 DCM으로 희석시킨 다음 물로 세척하고, 유기 상을 분리시키고, 건조시킨 후에, 유동성 시럽(12.1 g, 정량적)으로 농축시켰다. 이에 대한 ¹H NMR 스펙트럼으로부터 화합물 -N-카보벤질옥시 (2R/S,3R/S) 2,3-O-이소프로필리덴-1-아미노-2,3,4-부탄트리올 -이 후속하는 반응에 대해 충분히 순수함을 확인하였다. 이 화합물의 샘플(4.29 g, 14.5 mmol)을 트리에틸아민(1.5 당량, 3.06 ml, 21. 8 mmol)을 함유하는 무수 DCM 중에 용해한 후에, 아르곤 블랭킷 하의 얼음조 중에서 냉각시켰다. 메탄설포닐 클로라이드(1.2 당량, 1.36 ml, 17.5 mmol)를 수분에 걸쳐 적가하고, 이 지점에서 냉각조를 제거하고, 혼합물을 주위 온도에서 30분 동안 교반하였다. 용액을 DCM으로 희석하고, 중탄산나트륨 포화 용액으로 세척한 다음, 건조시키고 무색의 유동성 시럽(5.09 g)으로 농축시켰다. 상기 시럽은 후속하는 반응에 대해 충분히 순수한 것으로 사료되었다.

상기 메실레이트 에스테르(5.09 g)를 무수 DMF(50 ml) 중에 용해하고, 나트륨 티오메톡사이드(2 당량, 2.04 g, 상기 메실레이트 전구체를 기준으로 하여 29.0 mmol)를 3분획(대략)으로 나누어 첨가하면서 수조(열을 발산시키도록) 중에 침지하였다. 온도를 22℃ 이하로 상승시킨 후에, 주위 온도에서 일주일에 걸쳐 교반시켰다. 혼합물을 에테르로 희석하고 생성되는 유기 상을 물로 5회 세척한 후에 건조시키고 유동성 시럽(2.79 g, 59%)으로 농축시켰다.

상기 미정제의 티오메틸화된 N-CBz 보호된 아민(4.07 g, 12.52 mmol)을 이소프로판올(70 ml)에 용해하고, 여기에 수성 수산화칼륨(2M, 31.2 ml, 62.4 mmol)을 첨가하였다. 상기한 2상 혼합물을 4 내지 5시간 동안 환류시키고, 그 후 용액을 냉각시키고, 이소프로판올의 대부분이 제거되는 지점까지 농축시켰다. 생성물을 에테르 내로 추출하고, 상기 에테르 상을 건조시키고 유동성의, 밝은 황색 시럽(3.26 g)으로 농축하였다. 상기 미정제 생성물을 용리제로 먼저 DCM(벤질알콜을 제거하기 위해)에 이어 DCM 중의 2% 내지 6% [7M NH₃/MeOH]를 사용하고 닌히드린을 사용하여 시 각화되는 실리카 상에서 사전흡수시킨 후에 플래쉬 크로마토그래피로 정제하였다. (2R/S,3R/S) 2,3-0-이소프로필리덴-2,3-디히드록시-4-메틸티오부틸아민(1.84 g, 77%)을 밝은 황색 시럽으로 수득하였다.

실시예 20.7 - N-[5-(벤질일옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸아미노(2R/S,3R/S)-2,3-0-이소프로필리덴-4-메틸티오-2,3-부탄디올의 합성

무수 황산 마그네슘(0.6 g)을 함유하는 1,2-디클로로에탄(25 ml) 중의 5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.95 g, 2.79 mmol), (2R/S,3R/S)-2,3-O-이소프로필리덴-1-아미노-4-메틸티오-2,3-부탄디올(0.41 g, 2.14 mmol)의 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(0.59 g, 3.31 mmol)를 한번에 첨가하고 전체를 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 이 혼합물을 DCM으로 희석하고 중탄산나트륨 포화 용액으로 세척한 다음, 건조시키고 농축시켰다(1.51 g). 상기 혼합물을 용리제로 DCM/에틸 아세테이트/7M NH₃-MeOH(10:10:0.15)를 사용하는 실리카 상에서 (사전흡수되는) 플래쉬 크로마토그래피에 의해 분별하여 표제 화합물(0.55 g, 49.9%)을 비유동성 시럽으로 수득하였다.

실시예 20.8 - 7-(((2RS,3RS)-2,3-디히드록시-4-(메틸티오)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

-78℃에서 아르곤 하에서 유지된 리튬 나프탈레나이드[무수 THF(25 ml) 중에서 용액 상태의 나프탈렌(1.94 g, 15.2 mmol)과 리튬(0.081 g, 11.7 mmol)의 반응으로부터 제조됨]의 용액에 2분의 기간에 걸쳐, 무수 THF(5 ml) 중의 N-[5-(벤질일옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸아미노(2S,3R)-2,3-O-이소프로필리덴-4-메틸티오-2,3-부탄디올(0.55 g, 1.08 mmol)의 용액을 적가하였다. 이 용액을 -78℃에서 60분 동안 교반시킨 다음, tlc(DCM 7M NH₃-MeOH, 9:1)로부터 출발 물질이 완전히 소모되었음을 확인하였다. 이 혼합물을 2-3 ml 물을 첨가하여 켄칭시킨 다음 주위 온도로 가온시키고 거의 건조된 상태로 농축시켰다. 이후, 이 혼합물을 메탄올성 암모니아(7M, 20 ml)와 함께 15분 동안 교반시키고 나서 재농축하였다. 미정제 생성물을 DCM 중에 재용해시키고 실리카 상으로 사전 흡수시킨 다음, 용리제로 DCM 7M NH₃-MeOH, 9:1 칵테일을 사용하여 분별시켜 중간체인 N-(4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노(2R/S,3R/S)-2,3-O-이소프로필리덴-4-메틸티오-2,3-부탄디올(0.13 g, 35.6%)을 비유동성 검으로 수득하였 다.

N-[4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일]메틸아미노(2R/S,3R/S)-2,3-0-이소프로필리덴-4-메틸티오-2,3-부탄디올(0.13 g, 0.38 mmol)을 MeOH(5 ml)에 현탁시키고, 여기에 MeOH(5 ml) 중의 아세틸 클로라이드(0.27 ml, 3.8 mmol)의 용액을 첨가하였더니 몇분 이내에 용해되었다. 5시간 동안 계속하여 교반시킨 다음, 이 용액을 A-21 수지로 중화하고, 여과한 다음 실리카 상으로 직접 사전 흡수시켰다. 미정제 생성물을 DCM/MeOH(80:20 + 1 7M NH₃-MeOH)로 개시되고(60:40 +1 7M NH₃-MeOH)로 종료되는 계단화된 기울기 용리를 이용하는 플래쉬 크로마토그래피로 분별하고, 선택된 클러스터의 용기 중에서 용리 용매로부터 완속 침전으로 수거하였다. 이러한 방식으로, 표제 화합물은 무색 고형물(0.028 g, 22%)로서 수득되었다.

실시예 21 - 7-(((2RS,3RS)-3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드의 합성

실시예 21.1 - (±)-((4R/S, 5R/S)-2-벤질이속사졸리딘-4,5-디일)디메탄올의 합성

N-벤질히드록실아민 히드로클로라이드(13.59 g, 85.15 mmol)와 나트륨 아세테이트(9.31 g, 114 mmol)의 혼합물을 실온에서 에탄올(75 mL) 중에서 15분 동안 함께 교반하였다. 37% 포름알데히드 수용액(12.68 ml, 170 mmol)을 첨가하고 30분 동안 계속하여 교반시킨 다음 시스-2-부텐-1,4-디올(4.67 ml, 56.8 mmol)을 첨가하고 이 혼합물을 환류하에 16시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고 잔류물을 CHCl₃ 중에 용해시킨 다음, NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄), 용매를 증발시켜 갈색 시럽(12.5 g, 98%)을 수득하였다. 상기 시럽은 추가 정제 없이 사용하기에 적합하였다. 이의 일 분획을 실리카 겔(EtOAc에 이어 EtOAc-MeOH, 95:5) 상에서 크로마토그래피로 정제하여, (±)-((4R/S, 5R/S)-2-벤질이속사 졸리딘-4,5-디일)디메탄올을 무색 시럽으로 수득하였다.

실시예 21.2 - (±)-(2R/S, 3R/S)-3-((벤질아미노)메틸)부탄-1,2,4-트리올의 합성

아연 분말(11.13 g, 170 mmol)을 아세트산(150 ml) 중의 실시예 21.1로부터의 생성물(12.5 g, 56.1 mmol)의 용액에 첨가하고 - 약 67℃로 발열됨 - 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 여과하고, 용매를 증발시킨 다음, 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂-MeOH 중의 7M NH₃, 9:1에 이어 8:2)상에서 크로마토그래피하여 (±)-(2R/S,3R/S)-3-((벤질아미노)메틸)부탄-1,2,4-트리올을 무색 시럽(5.8 g, 45%)으로 수득하였다.

실시예 21.3 - (±)-(2R/S,3R/S)-3-((벤질((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)아미노)메틸)부탄-1,2,4-트리올의 합성

아세틸 클로라이드(0.021 ml, 0.301 mmol), 5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.179 g, 0.602 mmol, 문헌(G.B. Evans, R.H.Furneaux, A, Lewandowicz, V.L. Schramm and P.C. Tyler, J. Med. Chem., 2003, 46, 3412)에 기재된 바와 같이 제조함), 실시예 21.2로부터의 생성물(0.136 g, 0.602 mmol) 및 나트륨 시아노보로히드라이드(0.057 g, 0.903 mmol)를 연속적으로 MeOH(6 ml)에 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 64시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂-MeOH 중의 7M NH₃, 96:4) 상에서 크로마토그래피하여 (±)-(2R/S,3R/S)-3-((벤질((5-(벤질옥시메틸)-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)아미노)메틸)부탄-1,2,4-트리올(0.159 g, 52%)을 무색 검으로 수득하였다.

실시예 21.4 - 7-(((2RS,3RS)-3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드의 합성

실시예 21.3으로부터의 생성물(0.15 g, 0.296 mmol)을 환류 하 37% HCl 수용액(4 ml) 중에서 1.5시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시켜 크림색 포말을 형성시키고, 이것을 MeOH:물(10 ml)의 1:1 혼합물에 용해하고, 이 용액을 앰버리스트 A21 수지로 중화하였다. 상기 수지를 여과로 제거하고, 10% Pd-C(50 mg)를 여액에 첨가한 다음, 혼합물을 벌루운으로부터 첨가된 수소 하에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 Pd-촉매를 셀라이트 상에서 여과로 제거하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂-Me0H-28% 수성 NH₄OH, 5:4.5:0.5) 상에서 크로마토그래피하 여 유리 염기 형태의 생성물을 무색 고형물로 수득하고, 이 고형물을 과량의 5% HCl 수용액에 용해시키고 용매를 증발시켜 라세미체인 7-(((2RS,3RS)-3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드를 무색 고형물(26 mg, 28%)로 수득하였다.

실시예 22 - 7-(((2RS,3SR)-3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 22.1 - N-벤질 트랜스-4,5-비스(히드록시메틸)이속사졸리딘의 합성

35 ml EtOH 중의 N-벤질히드록실아민(4.4 g, 27.7 mmol) 및 무수 NaOAc(3.0 g, 36.7 mmol)의 혼합물을 주위 온도에서 15분 동안 교반시킨 후에, 포름알데히드(4.1 ml, 55.1 mmol)를 첨가하고, 이 혼합물을 추가 30분 동안 교반하였다. 이후, 에탄올(20 ml) 중의 (E)-부트-2-엔-1,4-디올(1.63 g, 18.50 mmol)의 용액을 상기 혼합물에 한번에 첨가하고, 생성되는 용액을 18시간 동안 환류시켰다. 혼합물 을 냉각하고, 농축시키고, DCM에 용해시킨 다음, 용액을 중탄산나트륨 용액으로 세척하고, 건조시킨 다음, 비유동성 오일(5.25 g)로 농축하였다. 미정제 생성물을, 용리제로 먼저 EtOAc에 이어 5% MeOH/EtOAc를 사용하는 실리카 상에서 크로마토그래피로 분별하여 표제 화합물을 비유동성 시럽(1.95 g)으로 분리하였다. 용리제로 단지 EtOAc를 사용하여 크로마토그래피를 반복하여 표제 화합물(1.46 g, 35%)을 균질한 시럽으로 분리하였다.

실시예 22.2 - (±)-3-[(벤질아미노)메틸]부탄-1,2,4-트리올의 합성

아연 분말(0.47 g, 7.2 mmol)을, 아세트산(6 ml) 중의 N-벤질 트랜스-4,5-비스(히드록시메틸)이속사졸리딘(0.32 g, 1.43 mmol)의 용액에 첨가하고, 이 혼합물을 1.5시간 동안 세게 교반하였더니 출발 물질이 소모되었다. 혼합물을 셀라이트 플러그를 통해 여과하고 여액을 농축 건조시킨 후에 DCM에 재용해시키고 실리카 상으로 사전 흡수시키고 M/7M NH₃-MeOH(4:1)로 등용매 용리시키면서 크로마토그래피로 분별하여 아미노트리올(0.26 g, 81%)을 비유동성 시럽으로 수득하였다.

실시예 22.3 - 5-(벤질옥시메틸)-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르 브알데히드의 합성

얼음조 중에서 냉각 상태로 유지된 THF(60 ml) 중의 4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘(4.04 g, 26.3 mmol)의 현탁액에 20분의 기간에 걸쳐 수소화나트륨(1.58 g, 60% 분산액(disp), 39.5 mmol)을 조금씩 나누어 첨가하고, 혼합물을 추가 15분 동안 교반하였다. 이후 벤질클로로메틸 에테르(6.87 g, 6.12 ml, 26.3 mmol)를 15분의 기간에 걸쳐 적가하고, 그 시점에 얼음조를 제거하고 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 얼음 중에서 상기 용액을 재냉각시키고, 물(2 ml)로 켄칭시킨 다음, 혼합물을 (다량의) DCM(셀라이트를 통한 여과에 의해 상 경계가 명확해짐)으로 추출하고 유기 상을 농축 건조시켰다. 미정제 생성물을 DCM(100 ml)에 재용해하고 얼음조 중에서 냉각시킨 후에 NBS(4.7 g, 26.41 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하였다. 생성되는 용액을 주위 온도로 가온시키면서 2시간 동안 교반한 다음 실리카 상으로 직접 농축시켰다. 미정제 물질을 용리제로 20% EtOAc/헥산을 사용하는 실리카 상에서 크로마토그래피로 분별하여 표제 화합물을 오일(5.28 g, 56.9%)로 수득하였는데, 이 오일은 용이하게 고화되었다.

7-브로모-5-(벤질옥시메틸)-4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘(3.73 g, 10.6 mmol)을 무수 아니솔(48 ml) 중에 용해시킨 다음 Et₂O(145 ml)로 희석시키고 나서 -78℃로 냉각시키고, 이 시점에서 온도가 -70℃를 초과하지 않도록 N-부틸리 튬(헥산 중의 1.48M, 9.2 ml, 13.6 mmol)을 적가하였다. 첨가후 2분 이내에, DMF(8.5 ml, 0.123 mol)를 신속하게 도입하고(T< -68℃) -40℃로 가온시키면서 혼합물을 교반하고, 이 시점에서 물(20 ml)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 이후 EtOAc로 추출하고 추출물을 염수로 세척한 다음 건조시키고 오렌지색 고형물로 농축시켰다. 이 물질을 용리제로 20% 내지 40% EtOAc/헥산을 사용하는 실리카 상에서 크로마토그래피로 정제하여, (중요 분획의) 표제 알데히드(1.83 g, 57.3%)를 회백색 고형물로 수득하였다.

실시예 22.4 - (±)-3-{벤질([5-벤질옥시메틸]-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)아미노메틸}부탄-1,2,4-트리올의 합성

메탄올(11 ml) 중의 (±)-3-[(벤질아미노)메틸]부탄-1,2,4-트리올(0.25 g, 1.11 mmol), 5-벤질옥시-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘 7-카르브알데히드(0.33 g, 1.11 mmol)의 용액에 40 ㎕의 아세틸 클로라이드를 첨가하고, 여기에 나트륨 시아노보로히드라이드(0.105 g, 1.67 mmol)를 한번에 첨가하였다. 이 혼합물을 주위 온도에서 3일 동안 교반시키고 나서 DCM으로 희석하고 중탄산나트륨 포화 용액으로 세척하였다. 용액을 건조시키고 농축시킨 후에 용리제로 DCM 중의 4% 7M NH₃-MeOH을 사용하는 실리카 상에서 크로마토그래피로 분별하여 표제 화합물(0.31 g, 55%)을 비유동성 시럽으로 수득하였다.

실시예 22.5/22.6 - 7-(((2RS,3SR)-3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

3-{벤질([5-벤질옥시메틸]-4-메톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)아미노메틸}부탄-1,2,4-트리올(0.31 g, 0.612 mmol)의 용액을 진한 염산(8 ml) 중에서 2.5시간 동안 환류시키고 농축 건조시켰다. 잔류물을 메탄올(10 ml) 및 물(2 ml)에 재용해시키고 A21 수지로 중화 지점까지 처리하였다. 이 수지를 여과로 수거하고, 여액을 농축시키고 메탄올(6 ml) 및 물(3 ml)에 재용해하고, 10% Pd/C(0.1 g)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 수소첨가분해하였다. 상기 용액을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 비유동성 시럽(0.16 g)으로 농축하였다. 생성물을 용리제로 DCM/MeOH/0.88NH₃(5:4.5:0.5)을 사용하는 실리카 상에서 분별하여 표제 화합물을 유리 염기로서 무색 고형물(0.06 g, 34.7%)로 수거하였다.

실시예 23 - 7-(((2RS,3RS)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메 틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 23.1 - (±)-N-벤질-2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-히드록시프로판-1-아민의 합성

아세톤(30 ml) 중의 (±)-3-[(벤질아미노)메틸]부탄-1,2,4-트리올(실시예 22.2, 0.97 g, 4.31 mmol) 및 (±)-캄퍼설폰산 일수화물(1.62 g, 6.47 mmol)의 용액을 주위 온도에서 3일 동안 교반시킨 후에, 이 용액을 DCM으로 희석하고 중탄산 나트륨 용액으로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고 시럽(1.1 g)으로 농축시킨 후에, 이것을 용리제로 EtOAc를 사용하는 실리카 상에서 크로마토그래피로 분별하여 아세토나이드(0.52 g, 45.6%)를 유동성 황색 오일로 수득하였다.

실시예 23.2 - (±)-N-벤질-2(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-히드록시프로필 카바메이트의 합성

45 ml MeOH 중의 (±)-N-벤질-2(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-히드록시프로판-1-아민(2.07 g, 7.8 mmol)의 용액을 10% Pd/C(0.39 g)의 존재하에서 18시간 동안 수소첨가분해시키고, 그 후에는 출발 물질이 남아있지 않았다. 용액을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 농축시킨 후에, 톨루엔(13 ml)에 재용해시키고, 물(13 ml)을 첨가하고 나서 탄산칼륨(1.62 g, 11.7 mmol) 및 벤질클로로포르메이트(톨루엔 중의 50% w/w, 2.64 ml, 7.8 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 세게 교반하였다. 이 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 중탄산나트륨 용액 및 염수로 세척하고, 건조시키고 농축하였다(2.47 g). CBz-보호된 아민을 수거하고 용리제로 40% EtOAc/헥산을 사용하여 실리카 상에서 크로마토그래피하여 화합물(2.12 g, 82%)을 무색 시럽으로 수득하였다.

실시예 23.3 - (±)-2(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1 -아민의 합성

메탄설포닐 클로라이드(0.182 ml, 2.33 mmol)를 DCM(8 ml) 중의 (±)-N-벤질-2(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-히드록시프로필 카바메이트(0.6 g, 1.94 mmol) 및 Et₃N(0.41 ml, 2.91 mmol)의 얼음 냉각시킨 용액에 첨가한 다음, 상기 용액을 주위 온도로 가온시켰다. 1시간 후에, 용액을 DCM으로 희석하고, 중탄산나트륨 용액으로 세척한 다음 건조시키고 농축하였다(0.87 g). 이 생성물을 3.5 ml DMF(3.5 ml)에 용해한 다음, 나트륨 티오메톡사이드(0.272 g, 3.85 mmol)를 첨가하였다. 2시간 동안 계속하여 교반시키고 나서, 혼합물을 에테르로 희석하고 물(x5) 및 염수로 세척한 후에, 건조시키고 오일(0.70 g)로 농축시켰다. - NMR 데이터의 검사로부터 메실레이트의 티오메톡사이드로의 변환이 확인되었다. 잔류물을 이소프로판올(12 ml)에 용해하고 여기에 KOH(2M, 5.4 ml)를 첨가하고, 이 용액을 환류에서 24시간 동안 가열하였다. 용액을 냉각시키고 이소프로판올의 대부분이 제거되는 지점까지 농축시키고 이 때 Et₂O를 첨가하고 생성물을 추출하였다. 유기 상을 건조시키고 농축하고, 생성물을 용리제로 먼저 DCM(벤질알콜을 제거하기 위해)을 사용하고 이어서 4% 7M NH₃ MeOH/DCM을 사용하여 실리카 상에서 크로마토그래피로 분별하여 표제 화합물(0.32 g, 80%)을 엷은 황색 시럽으로 수득하였다.

실시예 23.4 - N-{(5-(벤질옥시메틸)-4-t-부톡시-5H-피롤로[3,2-d}피리미딘-7-일}메틸-2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민의 합성

1,2-디클로로에탄(15 ml) 중에 (±)-2(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민(0.37 g, 1.80 mmol), 5-(벤질옥시메틸)-4-t-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.795 g, 1.3 당량, 2.34 mmol)를 포함하는 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(1.3 당량, 2.34 mmol, 0.49 g)에 이어 0.5 g 무수 황산마그네슘을 한번에 첨가하였다. 이 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반시킨 다음, DCM으로 희석하고 중탄산나트륨 용액으로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고 미정제된 비유동성 시럽(1.25 g)으로 농축시켰다. 이 미정제 생성물을 DCM/EtOAc/7M NH₃-MeOH(4.95:4.95:0.1) 중에서 준비된 컬럼 내 실리카 상에서 크로마토그래피로 분별하였다- 상기 미정제물을 DCM 중의 컬럼에 첨가하고 나서 더욱 극성인 용리제로 진행시켰다. 표제 화합물(0.56 g, 58.8%)이 비유동성 시럽으로 분리되었다.

실시예 23.5 - N-{4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일}메틸-2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민의 합성

-78℃에서 아르곤 하에서 유지된 리튬 나프탈레나이드[무수 THF(25 ml) 중에서 용액 상태의 나프탈렌(1.63 g, 12.7 mmol)과 리튬(0.073 g, 10.6 mmol)의 반응으로부터 제조됨]의 용액에 2분의 기간에 걸쳐, 3 ml THF 중의 N-{(5-(벤질일옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일}메틸-2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민(0.56 g, 1.06 mmol)의 용액을 적가하였다. 이 용액을 -78℃에서 1시간 동안 교반시킨 다음, 물(2 ml)을 첨가하여 용액을 켄칭시킨 다음 주위 온도로 가온시키고 건조 농축시켰다. 이후, 이 혼합물을 7M NH₃-MeOH를 사용하여 20분 동안 교반시킨 다음 재농축하였다. 이후, 미정제 생성물을 DCM 중에 재용해시키고 소량의 실리카 상으로 사전 흡수시킨 다음, 용리제로 먼저 DCM을 사용하고 [나프탈렌을 제거하기 위해] 이어서 3% 7M NH₃-MeOH/DCM을 사용하여 실리카 상에서 크로마토그래피로 분별하여 (중요 분획의) 표제 화합물(0.1 g, 26%)을 비유동성 시럽으로 수득하였다. 이것은 후속 반응을 위해 충분히 순수한 것으로 사료되었다.

실시예 23.6 - 7-(((2RS,3RS)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

메탄올(7 ml) 중의 N-{4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일}메틸-2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민(0.1 g, 0.28 mmol)의 교반시킨 현탁액에 메탄올(3 ml) 중의 아세틸 클로라이드(0.22 g, 2.8 mmol)의 용액을 첨가하고, 이 용액을 주위 온도에서 2.5시간 동안 교반하였다. 앰버리스트 A-21 수지를 첨가하고, 용액을 중성으로 만든 다음, 여과하여 수지를 제거하고 나서 밝은 황색의 검(0.072 g)으로 농축시켰다. 이것을 수성 메탄올(1:1) 중에 용해하고 실리카 상에서의 크로마토그래피를 위해 실리카 상으로 사전 흡수시켰다. 조성비 9:1:0.1 내지 6:4:0.1 범위 내의 DCM/MeOH/0.88 NH₃ 칵테일을 사용한 기울기 용리에 의해 표제 화합물이 후반 분획에서 침전물(유리 염기)로 수득되었다. 이것을 여과로 수거하고 건조하여 무색 고형물(0.026 g)을 수득하였다.

실시예 24 - 7-(((2R,3S)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드의 합성

실시예 24.1 - (S)-2-아미노-2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에탄올의 합성

디에틸 D-타르트레이트 [(2S,3S)-디에틸 2,3-디히드록시석시네이트]를 문헌(A. Breuning, R.Vicik and T. Schirmeister, Tetrahedron Asymm., 2003, 14, 3301)에 기재된 방법에 따라 (2R,3S)-디에틸 2-아지도-3-히드록시석시네이트로 전환한 다음, 상응하는 거울상이성질체에 대해 문헌(S. Saito, T. Ishikawa, A. Kuroda, K. Koga and T. Moriwake, Tetrahedron, 1992, 48, 4067)에 기재된 방법에 따라 (R)-에틸 2-아지도-2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)아세테이트로 전환하였다. 후자의 화합물을 실시예 25.1에서의 거울상이성질체에 대해 기술된 것과 동일한 방식으로 (S)-2-아미노-2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에탄올로 전환하였다. ¹H NMR 데이터는 실시예 25.1의 거울상이성질체 생성물의 것과 동일하였다.

실시예 24.2 벤질 (S)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-히드록시에틸카바메이트의 합성

실시예 24.1로부터의 생성물을 실시예 25.2에서의 거울상이성질체에 대해 기술된 것과 동일한 방식으로 무색 고형물인 벤질 (S)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-히드록시에틸카바메이트로 전환하였다. ¹H 및 ¹³C NMR은 실시예 25.2의 거울상이성질체 생성물과 동일하였다.

실시예 24.3 - 벤질 (R)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에틸카바메이트의 합성

실시예 24.2로부터의 생성물을 실시예 25.3에서 거울상이성질체에 대해 기술된 것과 동일한 방식으로 무색 고형물인 벤질 (R)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에틸카바메이트로 전환하였다. ¹H NMR, ¹³C NMR 및 mpt는 실시 예 25.3의 거울상이성질체 생성물과 동일하였다.

실시예 24.4 - (R)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민의 합성

실시예 24.3으로부터의 생성물을 실시예 25.4에서의 거울상이성질체 생성물에 대해서 기술된 것과 동일한 방식으로 담황색 오일인 (R)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민으로 전환하였다. ¹H 및 ¹³C NMR은 실시예 25.4의 거울상이성질체 생성물과 동일하였다.

실시예 24.5 - (R)-N-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민의 합성

실시예 24.4로부터의 생성물을 실시예 25.5에서의 거울상이성질체에 대해 기술된 것과 동일한 방식으로 담황색 검인 (R)-N-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민으로 전환하였다. ¹H 및 ¹³C NMR은 실시예 25.5의 거울상이성질체 생성물과 동일하였다.

실시예 24.6 - 7-(((2R,3S)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드의 합성

실시예 25.5로부터의 생성물을 실시예 25.6에서의 거울상이성질체에 대해 기술된 것과 동일한 방식으로 7-(((2R,3S)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드로 전환하였다. ¹H 및 ¹³C NMR은 실시예 25.6의 거울상이성질체 생성물과 동일하였다.

실시예 25 - (2R,3S)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-4-(메틸티오)부탄-1,2-디올 히드로클로라이드의 합성

실시예 25.1 - (R)-2-아미노-2-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에탄올의 합성

디에틸 L-타르트레이트 [(2R,3R)-디에틸 2,3-디히드록시석시네이트]를 문헌(A. Breuning, R. Vicik and T. Schirmeister, Tetrahedron Asymm., 2003, 14, 3301)에 기재된 방법에 따라 (2S,3R)-디에틸 2-아지도-3-히드록시석시네이트로 전환한 다음, 문헌(S. Saito, T. Ishikawa, A. Kuroda, K. Koga and T. Moriwake, Tetrahedron, 1992, 48, 4067)에 기재된 방법에 따라 (S)-에틸 2-아지도-2((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)아세테이트로 전환하였다. 상기한 뒤의 화합물(1.8 g, 7.85 mmol)을 무수 THF(12 ml)에 용해하고 얼음조에서 냉각하였다. 리튬 알루미늄 히드라이드(31.4 ml, 31.4 mmol, 디에틸 에테르 중의 1M)를 첨가하고 혼합물을 실온으로 가온시키고 30분 동안 교반한 다음 환류하에 3시간 동안 가열하였다. 혼합물을 얼음조 중에서 냉각시키고, 물(1.2 ml), 15% 수성 NaOH(1.2 ml) 및 물(4 ml)을 차례대로 첨가하였다. 혼합물을 디에틸 에테르로 희석하고 셀라이트를 통해 여과하고 셀라이트를 고온의 CHCl₃(3x)로 세척하였다. 합한 여액을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고 용매를 무색 오일로 증발시켰다. 상기 오일을 실리카 겔(CH₂Cl₂-MeOH-28% 수성 NH₄OH, 96:4:0.5에 이어 9:1:0.05) 상에서 크로마토그래피하여 담황색 오일을 수득하고, 이것을 120℃/0.1 mmHg에서 쿠겔로흐 장치 상에서 증류시켜 (R)-2-아미노-2-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에탄올(0.415 g, 61%)을 무색 오일로 수득하였다.

실시예 25.2 - 벤질 (R)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-히드록시에틸카바메이트의 합성

표제 화합물의 부분입체이성질체의 제조에 대해 기술된 방법(T. Inaba, Y. Yamada, H. Abe, S. Sagawa and H. Cho, J. Org. Chem., 2000, 65, 1623)에 따라 벤질 클로로포르메이트(2.51 ml, 7.44 mmol, 톨루엔 중의 50%)를 톨루엔(12 ml)과 물(12 ml)의 혼합물 중의 실시예 25.1로부터의 생성물(1.2 g, 7.44 mmol) 및 탄산칼륨(1.286 g, 9.31 mmol)의 세게 교반시킨 용액에 첨가하였다. 실온에서 16시간 동안 계속하여 교반하였다. 트리에틸아민(10.46 ml, 74.4 mmol)을 첨가하고, 수성 상을 염으로 포화시키고 유기 층을 EtOAc로 희석시키고, 분리하고, 건조(MgSO₄)시킨 다음 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(EtOAc-헥산, 4:6에 이어 6:4) 상에서 크로마토그래피하여 벤질 (R)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-히드록시에틸카바메이트를 신속하게 결정화되는 무색 검(1.63 g, 74%)으로 수득하였다.

실시예 25.3 - 벤질 (S)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에틸카바메이트의 합성

표제 화합물의 부분입체이성질체의 제조에 대해 기술된 것과 유사한 방법(T. Inaba, Y. Yamada, H. Abe, S. Sagawa and H. Cho, J. Org. Chem., 2000, 65, 1623)으로, 메탄설포닐 클로라이드(0.470 ml, 6.03 mmol)를 0℃에서 CH₂Cl₂(15 ml) 중의 실시예 25.2로부터의 생성물(1.62 g, 5.49 mmol) 및 트리에틸아민(1.147 ml, 8.23 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이 혼합물을 실온으로 가온시키고 0.5시간 동안 교반시킨 다음, NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄) 용매를 증발시켜 미정제 메실레이트를 수득하였다. 이것을 DMF(5 ml)에 용해시키고 나트륨 티오메톡사이드(0.577 g, 8.23 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시킨 다음 디에틸 에테르(100 ml)로 희석하고 물(5 x 5 ml), 염수(1x)로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄) 용매를 황색 검으로 증발시켰다. 이 잔류물을 실리카 겔 (EtOAc-헥산, 15:85) 상에서 크로마토그래피시켜 벤질 (S)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에틸카바메이트(1.26 g, 71%)를 무색 고형물로 수득하였다. 분석용 샘플을 Et₂O-헥산으로부터 재결정하여 무색의 미세 침상물질을 수득하였다.

실시예 25.4 - (S)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민의 합성

실시예 25.3으로부터의 생성물(1.26 g, 3.87 mmol)을 ⁱPrOH(21 ml) 및 2M 수성 KOH(10 ml)에 용해하고 이것을 64시간 동안 80℃로 가열하였다. 용매를 증발시키고 잔류물을 디에틸 에테르(100 ml)에 용해하고 물(x1), 염수(x1)로 세척하고 건 조시키고(MgSO₄) 용매를 증발하였다. 잔류물을 실리카 겔(EtOAc-헥산, 1:1에 이어 EtOAc-MeOH, 99:1) 상에서 크로마토그래피하여 (S)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민(0.578 g, 78%)을 담황색 오일로 수득하였다.

실시예 25.5 - (S)-N-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민의 합성

1,2-디클로로에탄(3 ml) 중의 실시예 25.4로부터의 생성물(0.1 g, 0.523 mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.177 g, 0.523 mmol, 문헌(G. B. Evans, R. H. Furneaux, A. Lewandowicz, V. L. Schramm and P.C. Tyler, J. Med. Chem., 2003, 46, 5271)에 기재된 바와 같이 제조함)의 용액에 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(0.144 g, 0.680 mmol) 및 MgSO₄(200 mg)를 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시킨 다음 CH₂Cl₂로 희석하고 NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고 건조시키고(MgSO₄) 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(EtOAc-헥산, 9:1) 상에서 크로마토그래피 하여 (S)- N-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민(0.162 g, 60%)을 담황색 검으로 수득하였다.

실시예 25.6 - (2R,3S)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-4-(메틸티오)부탄-1,2-디올 히드로클로라이드의 합성

매우 작은 조각의 리튬(0.016 g, 2.332 mmol)을, 실온에서 3시간 동안 교반하면서 무수 THF(6 ml)중의 나프탈렌(0.374 g, 2.91 mmol)의 용액에 첨가하여 짙은 암녹색 용액을 수득함으로써 리튬 나프탈레나이드 용액(H.-J. Liu, J. Yip and K. -S. Shia, Tetrahedron Lett., 1997, 38, 2253)을 제조하였다. 상기 용액을 -78℃로 냉각시키고 무수 THF(1ml) 중의 실시예 25.5로부터의 생성물(0.15 g, 0.291 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반시키고 나서, 물(1 ml)을 첨가하여 무색 용액을 수득하고 이것을 실온으로 가온시켰다. 용매를 증발시키고 잔류물을 10분 동안 7M NH₃-MeOH(10 ml)의 용액과 함께 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 톨루엔(2 x 10 ml)으로 분쇄하고 용매를 경사분리시켜 폐기시켰다. 잔류물 을 실리카 겔(MeOH 중의 CH₂Cl₂-7M NH₃, 9:1) 상에서 크로마토그래피하여 7-(((S)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에틸아미노)메틸)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-올을 무색 고형물(76 mg, 0.225 mmol)로 수득하였다. 이것을 아세틸 클로라이드(0.2 ml, 2.81 mmol)를 함유하는 MeOH(10 ml)에 용해하고, 이 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 앰버리스트 A21 수지로 중화하고, 혼합물을 여과하고 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂-MeOH-28% 수성 NH₄OH 85:15:2)상에서 크로마토그래피하여 유리 염기 형태의 표제 화합물을 무색 고형물로 수득하였는데, 이 고형물은 5% 수성 HCl을 사용하여 (2R,3S)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-4-(메틸티오)부탄-1,2-디올 히드로클로라이드(41 mg, 42%)로 전환하였다.

실시예 26 - 7-(((2S,3S)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일이미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 26.1 - 벤질 (R)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-히드록시에틸카바메이트의 합성

표제 화합물의 거울상이성질체의 제조에 대한 공지된 방법(참조: T. Inaba, Y. Yamada, H. Abe, S. Sagawa and H. Cho, J. Org. Chem., 2000, 65, 1623)을 수행하였다. 톨루엔:물(1:1 , 20ml) 중의 (R)-2-아미노-2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥 솔란-4-일)에탄올(문헌(T. Inaba, Y, Yamada, H. Abe, S. Sagawa and H. Cho, J. Org. Chem., 2000, 65, 1623)에 기재된 바와 같이 제조함)(1.616g, 5.70mmol)의 벤조산 염의 교반시킨 용액에 탄산칼륨(0.985g, 7.13mmol)에 이어 벤질 클로로포르메이트(0.90ml, 6.27mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 세게 교반시킨 후에 트리에틸아민(0.08ml, 0.58mmol) 및 염화나트륨(1.5g, 25.6mmol)을 첨가하였다. 30분 후에, 층을 분리시키고 수성 상을 톨루엔으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(MgSO₄) 농축시켜 무색 오일(1.926g, 114%)을 수득하였다. 여분 물질은 잔류 톨루엔인 것으로 측정되었다. ¹H NMR는 문헌(T. Inaba, Y. Yamada, H. Abe, S. Sagawa and H. Cho, J. Org. Chem., 2000, 65, 1623)에 기재된 거울상이성질체에 대한 NMR 데이터와 일치하였다.

실시예 26.2 - (R)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-2-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸 메탄설포네이트의 합성

0℃에서 톨루엔(15ml) 중의 실시예 26.1로부터의 생성물(1.926g, 6.52mmol)의 교반시킨 용액에 트리에틸아민(1.09ml, 7.83mmol)에 이어 메실 클로라이드(0.56ml, 7.17mmol)를 적가하였다. 일단 첨가가 종료되면 반응 혼합물을 주위 온도로 가온시키고 1.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 및 중탄산나트륨 수용액으로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄) 증발하여 무색 오일(2.24g, 92%)을 수득하였다.

실시예 26.3 - 벤질 (S)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에틸카바메이트의 합성

디메틸포름아미드(10ml) 중의 실시예 26.2로부터의 생성물(2.24g, 6.OOmmol)의 교반 용액에 나트륨 티오메톡사이드(0.547g, 7.80mmol)를 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물(4x)로 세척하고 건조시키고(MgSO₄) 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(에틸아세테이트-페트롤, 1:4) 상에서 크로마토그래피하여 무색 오일(1.595g, 82%)을 수득하였다.

실시예 26.4 - (S)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민의 합성

이소프로판올(27ml) 및 2M 수산화칼륨(12ml) 중의 실시예 26.3으로부터의 생성물(1.595g, 4.90mmol)의 교반 용액을 80℃에서 64시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 이소프로판올이 제거되도록 농축하였다. 잔류물을 물로 희석하고 디에틸 에테르(2x)로 추출한 다음, 건조시키고(MgSO₄) 증발하였다. 잔류물을 실리카 겔(에 틸아세테이트-페트롤, 2:1에 이어 메탄올-에틸아세테이트, 1:99) 상에서 크로마토그래피하여 담황색 오일(0.575g, 61%)을 수득하였다.

실시예 26.5 - (S)-N-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민의 합성

실시예 26.4로부터의 생성물(0.13Og, 0.68mmol), 나트륨 시아노보로히드라이드(0.071 g, 1.13mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부틸옥시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.192g, 0.57mmol)의 혼합물을 메탄올(3x)로부터 증발시켰다. 잔류물을 메탄올(10ml)에 용해하고, 아세트산을 첨가하였다(5 점적). 반응 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카 겔 상으로 증발시키고 크로마토그래피하여(메탄올-트리에틸아민-DCM, 3:1:96) 황색 오일(0.274g, 94%)을 수득하였다. 1H NMR로부터 생성물이 (공동-극성의) 출발 아민을 일부 함유하고 있음이 밝혀졌다.

실시예 26.6 - 7-(((S)-1-((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오) 에틸아미노)메틸)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-올의 합성

THF(10ml) 중의 나프탈렌(0.682g, 5.32mmol)의 교반 용액에 금속 리튬(0.03Og, 4.26mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 짙은 녹색이 될때까지 주위 온도에서 교반하였다. 이 혼합물을 -30℃로 냉각시키고 실시예 26.5로부터의 생성물(0.274g, 0.53mmol)을 THF(3ml) 중의 용액으로 적가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 -30℃에서 교반시키고 염화암모늄 포화 수용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 디에틸 에테르(3x)로 추출하고, 건조시키고(MgSO₄) 농축하였다. 잔류물을 아세토니트릴 중에 용해하고 페트롤(3x)로 세척하고 증발시켰다. 잔류물을 메탄올(7N 암모니아 용액) 중에서 교반시키고, 실리카 상으로 증발시킨 다음, 크로마토그래피하여(메탄올 [7N 암모니아 용액]-DCM, 1:9) 백색 고형물(0.055g, 31%)을 수득하였다.

실시예 26.7 - 7-(((2S,3S)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 26.6으로부터의 생성물(0.055g, 0.16mmol)을 주위 온도에서 1.5시간 동안 메탄올(10 ml) 중의 1% 염화수소 용액 중에서 교반하였다. 반응 혼합물을 앰버리스트 A-21 이온 교환 수지로 중화시켰다. 상기 수지를 여과하고, 반응 용액을 농축하였다. 잔류물을 크로마토그래피(메탄올 [3.5N 암모니아 용액]-DCM, 1:4)하여 백색 고형물(0.035g, 72%)을 수득하였다.

실시예 27 - 7-(((2R,3R)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 27.1 - 벤질 (S)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-히드록시에틸카바메이트의 합성

표제 화합물을 제조하기 위해 문헌(T. Inaba, Y. Yamada, H. Abe, S. Sagawa and H. Cho, J. Org. Chem., 2000, 65, 1623)에 공지된 방법을 수행하였다. 톨루엔:물(1:1, 20ml) 중의 (S)-2-아미노-2-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에탄올(문헌(T. Inaba, Y. Yamada, H. Abe, S. Sagawa and H. Cho, J. Org. Chem., 2000, 65, 1623)에 기재된 바와 같이 제조됨)(2.083g, 7.35mmol)의 벤조산 염의 교반 용액에 탄산칼륨(1.27g, 9.19mmol)에 이어 벤질 클로로포르메이트(1.16ml, 8.09mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 세게 교반시키고 나서 트리에틸아민(0.10ml, 0.72mmol) 및 염화나트륨(1.5g, 25.6mmol)을 첨가하였다. 10분 후에, 층을 분리하고 수성 상을 톨루엔으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(MgSO₄) 농축하여 무색 오일(2.17g, 100%)을 수득하였다. ¹H NMR은 문헌(T. Inaba, Y. Yamada, H. Abe, S. Sagawa and H. Cho, J. Org. Chem., 2000, 65, 1623)에 기재된 화합물에 대한 것과 일치되었다.

실시예 27.2 - (S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-2-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)에틸메탄설포네이트의 합성

0℃에서 톨루엔(20ml) 중의 실시예 27.1로부터의 생성물(2.17g, 7.35mmol)의 교반 용액에 트리에틸아민(1.23ml, 8.82mmol)에 이어 메실 클로라이드(0.63ml, 8.08mmol)를 적가하였다. 일단 첨가가 종료되면 반응 혼합물을 주위 온도로 가온시키고 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 및 중탄산나트륨 포화 수용액으로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄) 증발시켜 무색 오일(2.58g, 94%)을 수득하였다.

실시예 27.3 - 벤질 (R)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티 오)에틸카바메이트의 합성

디메틸포름아미드(10ml) 중의 실시예 27.2로부터의 생성물(2.58g, 6.91 mmol)의 교반 용액에 나트륨 티오메톡사이드(0.63Og, 8.98mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물(4x)로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄) 증발하였다. 잔류물을 실리카 겔(에틸 아세테이트-페트롤, 1:4) 상에서 크로마토그래피하여 무색 오일(2.007g, 89%)을 수득하였다..

실시예 27.4 - (R)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민의 합성

이소프로판올(34ml) 및 2M 수산화칼륨(15ml) 중의 실시예 27.3으로부터 생성물(2.007g, 6.17mmol)의 교반 용액을 64시간 동안 80℃에서 가열하였다. 이소프로판올을 제거하기 위해 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 물로 희석시키고 디에틸 에테르(3x)로 추출하고, 건조시키고(MgSO₄) 나서 증발하였다. 잔류물을 실리카 겔(에틸 아세테이트-페트롤, 2:1에 이어 메탄올-에틸 아세테이트, 2:98) 상에서 크로마토그래피하여 담황색 오일(0.913g, 77%)을 수득하였다.

실시예 27.5 - (R)-N-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에탄아민

실시예 27.4로부터의 생성물(0.13Og, 0.68mmol), 나트륨 시아노보로히드라이드(0.071 g, 1.13mmol) 및 5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부틸옥시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.192g, 0.57mmol)의 혼합물을 메탄올(3x)로부터 증발시켰다. 잔류물을 메탄올(1Oml)에 용해하고 아세트산을 첨가하였다(5 점적). 반응 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카 겔 상으로 증발시키고 크로마토그래피 하여(메탄올-트리에틸아민-DCM, 3:1:96) 오렌지색 오일(0.272g, 93%)을 수득하였다. ¹H NMR로부터 생성물이 (공동-극성인) 출발물질 아민을 일부 함유하고 있음이 확인되었다.

실시예 27.6 - 7-(((R)-1-((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-2-(메틸티오)에틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온

THF(10ml) 중의 나프탈렌(0.677g, 5.28mmol)의 교반 용액에 리튬 금속(0.029g, 4.23mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 짙녹색이 나타날 때까지 주위 온도에서 교반하였다. 혼합물을 -78℃로 냉각시키고 실시예 27.5로부터의 생성 물(0.272g, 0.53mmol)을 THF(3ml) 중의 용액으로 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반시키고 나서 염화암모늄 포화 수용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 디에틸 에테르(3x)로 추출하고, 건조시키고(MgSO₄) 증발하였다. 잔류물을 아세토니트릴 중에 용해하고, 페트롤(3x)로 세척하고 증발하였다. 잔류물을 메탄올(7N 암모니아 용액) 중에서 교반하고, 실리카 상으로 증발시키고 크로마토그래피하여(메탄올 [7N 암모니아 용액]-DCM, 1:9) 백색 고형물(0.049g, 27%)을 수득하였다.

실시예 27.7 - 7-(((2R,3R)-3,4-디히드록시-1-(메틸티오)부탄-2-일아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 27.6으로부터의 생성물(0.049g, 0.15mmol)을 주위 온도에서 3시간 동안 메탄올(10ml) 중의 1% 염화수소 용액 중에서 교반하였다. 반응 혼합물을 앰버리스트 A-21 이온 교환 수지로 중화시켰다. 이 수지를 여과하고 반응 용액을 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피하여(메탄올 [3.5N 암모니아 용액]-DCM, 1:4) 백색 고형물(0.036g, 83%)을 수득하였다. ¹H NMR로부터 이 화합물이 실시예 26.7로부터의 거울상이성질체와 동일함이 확인되었다.

실시예 28 - 7-(((2RS,3SR)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 28.1 - (±)-벤질 (R/S)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-히드록시프로필카바메이트의 합성

실시예 30.1로부터의 생성물(0.5 g, 1.884 mmol)을 MeOH(10 ml)에 용해하고, 10% Pd-C(100 mg)를 첨가하고, 혼합물을 벌로운으로부터 첨가된 수소 분위기 하에서 16시간 동안 교반하였다. 셀라이트를 통해 여과하고 용매를 증발시켜 무색 검(320 mg)을 수득하였다. 잔류물을 톨루엔(3 ml)과 물(3ml)의 혼합물에 용해한 다음, 탄산칼륨(0.391 g, 2.83 mmol) 및 벤질 클로로포르메이트(0.637 ml, 1.884 mmol, 톨루엔 중의 50%)를 첨가한 후에, 이 2상 혼합물을 3시간 동안 세게 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고 NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄) 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(EtOAc-헥산, 6:4) 상에서 크로마토그래피하여 (±)-벤질 (R/S)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-히드록시프로필카바메이트(0.423 g, 73%)를 담황색 오일로 수득하였다.

실시예 28.2 - (±)-(S/R)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민의 합성

메탄설포닐 클로라이드(0.121 ml, 1.552 mmol)를, 얼음조 중에서 냉각시키면서 CH₂Cl₂(5 ml) 중의 실시예 28.1로부터의 생성물(0.4 g, 1.293 mmol) 및 트리에틸아민(0.273 ml, 1.940 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이 혼합물을 실온으로 가온시키고 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂로 희석시키고 NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄) 용매를 증발시켜 미정제 메실레이트를 수득하였다. 이것을 DMF(2ml), 나트륨 티오메톡사이드(0.181 g, 2.59 mmol) 중에 용해하고 혼합 물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 디에틸 에테르(60 ml)를 첨가하고 혼합물을 물(4 x 5 ml), 염수(1 x 5 ml)로 세척하고 건조시키고(MgSO₄) 용매를 증발시켰다. 잔류물을 ⁱPrOH(8 ml)와 2M KOH 수용액(3.6 ml)의 혼합물에 용해시키고, 64시간 동안 80℃로 가열하였다. 용매를 증발시키고 잔류물을 디에틸 에테르(60 ml)에 용해하고 물(x1), 염수(x1)로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄) 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂-MeOH 중의 7M NH₃, 97:3) 상에서 크로마토그래피하여 (+)-(S/R)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민(0.189 g, 71%)을 무색 오일로 수득하였다.

실시예 28.3 - 7-(((2RS,3SR)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(0.134 g, 0.633 mmol)를 1,2-디클로로에탄(4 ml) 중의 5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.165 g, 0.487 mmol, 문헌(G.B. Evans, R.H. Furneaux, A. Lewandowicz, V.L. Schramm and P.C. Tyler, J. Med. Chem., 2003, 46, 5271)에 기재된 대로 제조함) 및 실시예 28.2로부터의 생성물(0.1 g, 0.487 mmol)의 용액에 첨가하였다. MgSO₄(150 mg)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. CH₂Cl₂를 첨가하고 혼합물을 NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고, 건조시킨 다음(MgSO₄) 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(EtOAc-CH₂Cl₂-MeOH 중의 7M NH₃, 4.95:4.95:0.1에 이어 5.95:3.95:0.1) 상에서 크로마토그래피하여 황색 검(191 mg)을 수득하였는데, 이것은 ¹H NMR로부터 약 8중량%의 실시예 28.2의 생성물로 오염된 (±)-(S/R)-N-((5-벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민으로 이루어져 있음이 확인되었다. 추가로 정제하지 않고, 이것을 무수 THF(1 ml) 중에 용해하고 이것을 -78℃에서 리튬 나프탈레나이드[문헌(H.-J. Liu, J. Yip and K. -S Shia, Tetrahedron Lett., 1997, 38, 2253)에 기재된 바에 따라 무수 THF(8 ml) 중의 리튬(0.023 g, 3.33 mmol) 및 나프탈렌(0.512 g, 3.99 mmol)으로부터 제조됨]에 첨가하고, 이 암녹색의 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 물(2 ml)을 첨가하여 무색 용액을 수득하고 이 혼합물을 실온으로 가온하였다. 용매를 증발시키고 잔류물을 7M NH₃-MeOH 용액(10 ml)과 함께 10분 동안 교반시켰다. 용매를 증발시키고 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂에 이어 CH₂Cl₂-7M NH₃-MeOH, 9:1) 상에서 크로마토그래피하여 중간체 (±)-7(((S/R)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로필아미노)메틸)-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4-올(72 mg)을 수득하였다. 뒤의 것을 아세틸 클로라이드(0.237 ml, 3.33 mmol)를 함유하는 MeOH(10 ml) 중에 용해하고 실온 에서 4시간 동안 교반하였다. 용액을 앰버리스트 A21 수지로 중화시키고 여과한 다음 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂-7M NH₃-MeOH, 8:2) 상에서 크로마토그래피하여 라세미 혼합물인 7-(((2RS,3SR)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온을 무색 고형물(17 mg, 16%)로 수득하였다.

실시예 29 - 7-((벤질((2RS,3SR)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

실시예 29.1 - (±)-(R/S)-3-(벤질아미노)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)프로판-1-올의 합성

아세톤(15 ml) 및 2,2-디메톡시프로판(5 mL) 중의 실시예 21.2로부터의 생성물(0.74 g, 3.28 mmol)의 용액에 1R-(-)-캄퍼설폰산(0.916 g, 3.94 mmol)을 첨가하고 이 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 트리에틸아민(0.916 ml, 6.57 mmol)을 첨가하고, 용매를 증발하였다. 잔류물을 CHCl₃에 용해하고 10% Na₂CO₃ 수용액으로 세척하고 건조시키고(MgSO₄) 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(CHCl₃-EtOAc-MeOH, 5:2:1) 상에서 크로마토그래피하여 (±)-(R/S)-3-(벤질아미노)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)프로판-1-올을 시럽(0.55 g, 63%)으로 수득하였다.

실시예 29.2 - (±)-(S/R)-N-벤질-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민의 합성

실시예 30.1로부터의 생성물(0.5 g, 1.884 mmol) 및 디-3차-부틸 디카보네이트(0.452 g, 2.073 mmol)를 MeOH(10 ml) 중에서 1시간 동안 함께 교반하였다. 용매를 증발시키고 (±)-3차-부틸 벤질 ((R/S)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4- 일)-3-히드록시프로필)카바메이트의 잔류물을 CH₂Cl₂(10 ml)에 용해하고 트리에틸아민(0.394 ml, 2.83 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 얼음조 중에서 냉각시키고 메탄설포닐 클로라이드(0.176 ml, 2.261 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온시키고 30분 동안 교반시킨 다음 NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고 건조시키고(MgSO₄) 용매를 증발시켜 미정제 (+)-(R/S)-3-(벤질(3차-부톡시카보닐)아미노)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)프로필 메탄설포네이트를 수득하였다. 뒤의 것을 DMF(3 ml)에 용해하고 나트륨 티오메톡사이드(0.264 g, 3.77 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반시킨 후에 혼합물을 디에틸 에테르(50 ml)로 희석하고 물(4 x 5 ml)로 세척하고 건조시키고(MgSO₄) 나서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(EtOAc-헥산, 15:85) 상에서 크로마토그래피하여 (±)-3차-부틸 벤질((S/R)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로필)카바메이트를 무색 검(421 mg)으로 수득하고, 이것을 CH₂Cl₂(10 ml)와 TFA(1 ml)의 혼합물에 용해하고 70분 동안 교반하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂로 희석하고 NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄) 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(톨루엔-아세톤, 13:1) 상에서 크로마토그래피하여 (±)-(S/R)-N-벤질-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민(0.13 g, 23%)을 담황색 오일로 수득하였다.

실시예 29.3 - (±)-(S/R)-N-벤질-N-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민의 합성

나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(0.140 g, 0.660 mmol)를 1,2-디클로로에탄(4 ml) 중의 5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-카르브알데히드(0.172 g, 0.508 mmol, 문헌(G. B. Evans, R.H. Furneaux, A. Lewandowicz, V.L. Schramm and P.C. Tyler, J. Med. Chem., 2003, 46, 5271)에 기재된 대로 제조함) 및 실시예 30.2로부터의 생성물(0.15 g, 0.508 mmol)의 용액에 첨가하였다. MgSO₄(200 mg)를 첨가하고, 이 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂로 희석하고, NaHCO₃ 포화 수용액으로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄) 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(EtOAc-헥산, 25:75) 상에서 크로마토그래피시켜 (±)-(S/R)-N-벤질-N-((5-(벤질옥시메틸)-4-3차-부톡시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸)-2-((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로판-1-아민(0.2 g, 63%)을 황색 검으로 수득하였다.

실시예 29.4 - 7-((벤질((2RS,3SR)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온의 합성

리튬 나프탈레나이드 용액(H.-J. Liu, J. Yip and K.-S Shia, Tetrahedron Lett., 1997, 38, 2253)을, 작은 조각의 리튬(0.018 g, 2.59 mmol)을 아르곤 하 무수 THF(8 ml) 중의 나프탈렌(0.414 g, 3.23 mmol)의 용액에 첨가하고 실온에서 3시간 동안 교반시킴으로써 제조하였다. 생성되는 암녹색 용액을 -78℃로 냉각시키고, THF(1.5 ml) 중에 용해시킨 실시예 30.3으로부터의 생성물(0.2 g, 0.32 mmol)을 첨가하였다. 10분 후에, 물(1 ml)을 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온시키고 용매를 증발시켰다. 잔류물을 7M NH₃-MeOH 용액(10 ml)에 용해하고 실온에서 10분 동안 방치시킨 다음 용매를 증발시키고 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂에 이어 CH₂Cl₂-MeOH 중의 7M NH₃, 9:1) 상에서 크로마토그래피시켜 중간체 (±)-7-((벤질((S/R)-2,((R/S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)-3-(메틸티오)프로필)아미노)메틸)-5H-피 롤로[3,2-d]피리미딘-4-올을 황색 거품(120 mg)으로 수득하였다. 뒤 화합물의 일부(0.031g, 0.07 mmol)를 2% HCl-MeOH 용액(6 ml)에 용해하고 30분 동안 교반시킨 다음 앰버리스트 A21 수지로 중화하였다. 이 수지를 여과로 제거하고, 용매를 증발시키고, 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂-MeOH 중의 7M NH₃, 9:1에 이어 85:15) 상에서 크로마토그래피하여 라세미체인 7-((벤질((2RS,3SR)-3,4-디히드록시-2-(메틸티오메틸)부틸)아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온을 무색 고형물(11 mg, 39%)로 수득하였다.

실시예 30 - (S)-7-(1-(1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)-2-히드록시에틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드

실시예 30.1 - (S)-3차-부틸 1,3-디히드록시프로판-2-일(2-히드록시-1-(4-옥소-4,5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)에틸)카바메이트의 합성

디-3차-부틸 디카보네이트(0.091 g, 0.416 mmol)를 물(1 ml)과 MeOH(3 ml)의 혼합물 중의 (2S,3S,4R,5R)-2-(4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-5-(히드록시메틸)피롤리딘-3,4-디올 히드로클로라이드(0.07 g, 0.231 mmol, 문헌(G.B. Evans, R.H. Furneaux, G. J. Gainsford, V.L. Schramm and P.C. Tyler, Tetrahedron, 2000, 56, 3053)에 기재된 대로 합성됨) 및 트리에틸아민(0.065 ml, 0.462 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 30분 동안 교반시킨 다음, 용매를 증발시켜 116 mg의 무색 고형물을 수득하였는데, 이것은 ¹H NMR로 추정컨대, 약 78 mg, 0.213 mmol의 (2S,3S,4R,5R)-3차-부틸 3,4-디히드록시-2-(4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-5-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 및 잔여량의 트리에틸아민 히드로클로라이드로 이루어져 있었다. 이 혼합물을 MeOH(4 ml) 및 물(3 ml)에 용해하고 나트륨 페리오데이트(0.055 g, 0.255 mmol)를 첨가하였다/ 15분 동안 교반시켰더니 침전물이 형성되었다. 나트륨 보로히드라이드(0.024 g, 0.639 mmol)를 첨가하고 혼합물을 15분 동안 교반시키고 나서 셀라이트를 통해 여과하고 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(CH₂Cl₂-MeOH, 85:15) 상에서 크로마토그래피하여 (S)-3차-부틸 1,3-디히드록시프로판-2-일(2-히드록시-1-(4-옥소-4,5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)에틸)카바메이트(0.072 g, 92%)를 무색 고형물로 수득하였다.

실시예 30.2 - (S)-7-(1-(1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)-2-히드록시에틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드

실시예 31.1로부터의 생성물(0.068 g, 0.185 mmol)을 MeOH(2 ml)와 37% HCl(0.2 ml)의 혼합물에 용해하였다. 몇분 후에 용매를 증발시켜 황색 거품을 수득하고 이것을 EtOH로부터 결정화하여 (S)-7-(1-(1,3-디히드록시프로판-2-일아미노)-2-히드록시에틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온 히드로클로라이드를 무색 고형물(42 mg, 현미경으로 보았을 때 매우 미세한 결정 클럼프(clupms)로 75%)을 수득하였다. M.p. > 300℃.

실시예 31 - 억제 연구

하기 표 1에 기록된 억제 해리 상수는 PNP에 의한 이노신의 가인산분해(phosphorolysis)를 위한 것이며, 이들은 상이한 억제제 농도로 측정된 반응속도를 기초로 하였다. 0.05 ㎍의 사람 또는 플라스모디움 팔시파룸 퓨린 누클레오시드 포스파오릴라아제(각각 HsPNP 및 PfPNP; 최종 농도 1.4 nM)를 25℃에서 60 mU/mL의 최종 농도로 첨가된 크산틴 옥시다아제와 함께 50 mM KPO₄, pH = 7.5 완충액 중의 1 mM 이노신에 첨가함으로써 반응을 개시하였다. 결합 검정에서, 이노신의 가인산분해에 의해 형성된 히폭산틴을 요산으로 산화시키고 293 nm(요산에 대한 흡광계수 ε₂₉₃ = 12.9 mM^-1)에서 분광광도계로 측정하였다. 느리게 시작되는 타이트-결합 억제제(slow-onset tight-binding inhibitors)에 대한 해리 상수를, 느리게 시작되는 억제가 하기 식에 따라 일어난 후의 반응 속도로부터 결정하였다:

상기 식에서 υ= 느리게 시작하는 억제 기간이 평형에 도달한 후의 정상 상태의 반응 속도이고, k_cat은 기질 포화 속도이고, S는 기질 농도이고, K_m은 이노신에 대한 미카엘리스 상수(Michaelis constant)(이러한 조건 하에서 38 μM)이고, I는 억제제 농도이고, K_d는 타이트하게 억제된 PNP-억제제 복합체에 대한 평형 해리 상수이다. 느리게 시작하는 특성을 갖지 않는 억제제에 있어서, 초기 반응 속도를 사용하는 것을 제외하고는 동일한 식에 대한 접근이 이루어질 수 있다.

표 1 - 사람 및 말라리아 PNP를 사용한 억제 상수

실시예 32 - (2S,3R)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올(화합물 17.3)의 경구이용율

10% 수크로오스 중의 50 나노몰의 (2S,3R)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올(화합물 17.3)을 함유하는 25 ㎕의 용액을 밤새 굶긴 3마리의 Balb-c 마우스의 입 내로 피펫을 이용하여 첨가하였다. 대조군을 억제제 없이 10% 수크로오스 25 ㎕로 처리하였다. 다른 그룹의 3마리 마 우스를 50 나노몰의 화합물 17.3을 함유하는 인산염 완충된 식염수(PBS; 137 mM NaCl, 10 mM 인산염 완충액, 및 2.7 mM KCl) 100 ㎕를 복막 내 주사하여 처리하였다. 혈액의 작은 샘플(8 ㎕)을 꼬리로부터 수거하고, 이것을 1 U 헤파린 및 0.3% 트리톤 X-100을 함유하는 8 ㎕ PBS에 첨가하였다. 이 혼합물을 25분 동안 얼음 위에 두고, 즉시 검정하거나 후속하는 분석을 위해 -80℃에서 저장하였다. 즉시 검정한 샘플 또는 -80℃에서 저장한 후의 샘플은 동등한 결과를 나타내었다. 전혈 샘플의 PNP 촉매 활성을 위해, 세포용해물의 3 ㎕ 샘플을 1 mM 이노신, 50 mM 인산염, pH = 7.4 및 60 mU/ml 크산틴 옥시다아제를 함유하는 완전한 반응 혼합물(1.0 mL 부피)에 첨가하였다. 혼합 후에, 반응 과정을 293 nm에서 분광광도계로 측정하였다. 퓨린 누클레오시드 포스포릴라아제 활성의 초기 속도를 측정하기 위해 4분 동안 반응을 모니터하였다. 모든 반응 속도를, 효소 검정 혼합물에 대해 사용된 동일한 큐벳(cuvette)으로 측정한, 412 및 540 나노미터에서 헤모글로빈 흡광도 당 효소 활성으로 표준화하고 곧바로 4분의 검정 기간을 수행하였다. 도 1은 화합물 17.3이 경구적으로 이용가능하며, 24 초과의 시간 동안 마우스에서 PNP를 억제시켰음을 나타낸다.

본 발명을 실시예로 설명하였으나, 본 발명의 범위를 벗어나지 않고 변형 또는 변경이 이루어질 수 있음이 이해되어야 한다. 또한, 공지된 등가물이 특정 특성에 대해 존재하는 경우, 그러한 등가물은 본 명세서에서 구체적으로 지칭되는 것처럼 도입되어 있다.

본 발명은 PNP 및/또는 NH의 억제제인 화합물에 관한 것이다. 따라서, 본 발명의 화합물은 PNP 또는 NH의 억제가 요망되는 질환의 치료에 유용할 것으로 예측된다. 그러한 질환에는 암, 세균 감염, 원충 감염(말라리아 포함) 및 T-세포 매개된 질환이 포함된다.

Claims

하기 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 호변이성질체(tautomer), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:

상기 식에서,

R⁴는 디히드록시프로필, 디히드록시부틸, 트리히드록시부틸, 디히드록시펜틸 또는 트리히드록시펜틸이고;

A는 N 또는 CH이고;

B는 OH 또는 알콕시이고;

D는 H, OH, NH₂, 또는 SCH₃이다.
제 1항에 있어서, A가 CH인 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제 1항에 있어서, B가 OH인 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제 1항에 있어서, D가 H 또는 NH₂인 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제 4항에 있어서, D가 H인 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제 1항에 있어서, 하기 화학식을 가지는 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:

.
제 1항에 있어서,

(3RS,4SR)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올;

(R)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)-프로판-1,2-디올 히드로클로라이드;

(2R,3R)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올 히드로클로라이드;

2-아미노-7-((2,4-디히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((2,4-디히드록시부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)부틸아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

2-아미노-7-((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온;

7-((3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필아미노)메틸)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온인 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 광학 이성질체 또는 입체 이성질체.
제 1항에 있어서, 하기 화학식을 가지는, (2S,3R)-3-((4-히드록시-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)메틸아미노)부탄-1,2,4-트리올인 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:

.
제 1항에 있어서, 하기 화학식을 가지는 화합물, 또는 이의 호변이성질체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:

.
약제학적 유효량의 제 1항 내지 제 7항, 제 9항 및 제 10항 중 어느 한 항의 화합물 또는 약제학적 유효량의 제 1항 내지 제 7항, 제 9항 및 제 10항 중 어느 한 항의 화합물의 광학 이성질체 또는 입체 이성질체를 포함하는, 암, 세균 감염, 원충 감염, 건선, 관절염 또는 이식 거부증을 치료하기 위한 약제 조성물.
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제