CN101398414A - 液相色谱-质谱同时对242种化合物的定性筛查方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种可同时对242种化合物(药物或毒物)进行定性筛查的方法。采用液相色谱－质谱联用(LC－MS/MS)多反应监测(multiple reaction monitoring，MRM)方式以两对母离子－子离子对和保留时间对目标物进行定性。242种药毒物包括阿片类、苯丙胺类、可卡因类等毒品，苯二氮类、巴比妥类安眠镇静药物以及一些常见药物、生物碱、杀虫剂(包括有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类、有机氯类杀虫剂)、除草剂、杀鼠药等。

Description

液相色谱—质谱同时对242种化合物的定性筛查方法

技术领域

本发明涉及化合物进行定性筛查的方法，尤其涉及同时对多种化合物进行定性筛查的方法，更具体的是涉及一种同时对242种化合物进行定性筛查的液相色谱—质谱联用(LC-MS/MS)方法。

背景技术

液相色谱—质谱联用技术是当今世界上先进的分析技术，与其他常用的方法技术相比具有只需对样品进行简单的预处理，高效快速，灵敏度高，对混合物的分析有很高的选择性以及广泛的适用性特点，尤其适用于检测目标物含量少、检测目标物不易分离得到的样品分析。因此，利用液相色谱—质谱联用技术分析混合样品，可大大缩短分析时间，减少检材的浪费，并可对感兴趣的药毒物进行“靶”分析。这使液相色谱—质谱联用技术在刑事科学技术的研究和应用中具有广泛的应用前景，为快速分析已知目标毒物成分和在未知成分检材中加快寻找毒物提供了一个高效、切实可行的分析方法。

由于液相—质谱联用技术投入应用的时间不长，各开发厂商在流动相组成、色谱柱性质、电离电压等具体技术参数上尚未形成通用的标准，目前很少有能够定性筛选较多化合物的液相色谱—质谱联用分析方法，所以对未知物的定性筛选存在一定困难。

对于不同种类和不同数量的化合物的同时检测需要不同的分离条件与检测方法。在不同的介质中，其具体检测方法亦有较大的差异。

沈敏等人(中国司法鉴定2006，1，14—20)使用液相色谱—质谱联用(LC-MS/MS)多反应监测方法建立了132种毒药物血液中的分析方法。

向平等人(质谱学报2006，27，237—241)使用液相色谱—质谱联用(LC-MS/MS)多反应监测方法建立了59种毒药物血液中的分析方法。

但是目前尚没有提供对现有案件所涉及的各种药毒物一次有效的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中只能测定一种或几种化合物(药、毒物)的缺陷，提供一种可有效地检测出包括现有案件中所涉及的各种药毒物的液相色谱—质谱联用筛查方法。

本发明所述的各种化合物(药、毒物)共计242种，具体为：

百草枯、布洛芬、盐酸甲基爱康宁、矮壮素、盐酸爱康宁、爱康宁乙酯、甲基多巴、盐酸多巴胺、异烟肼、福尔可定、阿昔洛韦、尼古丁、烟酰胺、盐酸异丙肾上腺素、去甲吗啡、吗啡—D₃、吗啡、甲胺磷、去甲羟吗啡酮、羟吗啡酮、乙酰甲胺磷、氢吗啡酮、沙丁胺醇、西米替丁、扑热息痛、盐酸苯丙醇胺、氧化乐果、卡西酮、舒必利、茶碱、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、甲卡西酮、普鲁卡因、去甲可待因、酒石酸双氢可待因、盐酸可乐定、盐酸纳络酮、阿米雷斯、盐酸甲基麻黄碱、磷酸可待因、左旋咪唑、消旋山莨菪碱、硫酸安非他明、氨基比林、雪上一枝蒿甲素、氢溴酸东莨菪碱、羟考酮、麦司卡林、咖啡因、替苯丙胺、盐酸纳曲酮、O⁶-单乙酰吗啡盐酸盐、O³—单乙酰吗啡盐酸盐、甲基安非他明—D₅、氢可酮、氢溴酸山莨菪碱、灭多威、盐酸甲基安非他明、3，4-亚甲基二氧基甲基安非他明、7-氨基硝基安定、对-甲氧基安非他明盐酸盐(PMA)、匹莫林、久效磷、对-甲氧基甲基安非他明盐酸盐(PMMA)、士的宁、芬特明、溴甲阿托品、噻菌灵、乙基安非他明、3，4-亚甲基二氧基乙基安非他明(MDEA)、马钱子碱、去甲氯胺酮盐酸盐、3，4-亚甲基二氧基苯基-2-丁胺盐酸盐(BDB)、苯甲酰爱康宁、盐酸利多卡因、硫酸阿托品、氯胺酮盐酸盐、去甲芬太尼草酸盐、N-甲基-1-(3，4-亚甲基二氧基苯基)-2-丁胺(MBDB)、杀虫脒、4-苯基丁胺(4—PBA)、安替比林、抗感明、敌百虫、盐酸曲马朵、东莨菪内酯、盐酸洛非西定、克伦特罗、斑蟊素、乙酰可待因、哌醋甲酯、奎宁、蒂巴因、盐酸海洛因、盐酸哌唑嗪、甲基斑蝥胺、7-氨基氯硝安定、盐酸美西律、吡虫啉、4-溴—2，5—二甲氧基苯乙胺(2C—B)、原阿片碱、盐酸哌替啶、乐果、盐酸二氢埃托啡、盐酸可卡因、去甲可卡因、去甲哌替啶、哌替啶—D₄、吡虫清、美乐托宁、丁溴东莨菪碱、唑匹坦、去甲基麦角酸二乙胺(nor—LSD)、罂粟碱、7-氨基氟硝安定、眠尔通、盐酸多沙普仑、延胡索乙素、高乌甲素、盐酸奈福泮、那可丁、喷他佐辛、非那西丁、布比卡因、异麦角酸二乙胺(iso—LSD)、安妥、氟哌利多、盐酸芬氟拉明、苯环利啶(PCP)、去乙酰毛花甙丙、4-羟基去甲安定、氢溴酸右美沙芬、枸椽酸芬太尼、氯氮平、盐酸丁卡因、涕灭威、氟西泮、灭草松、盐酸苯海拉明、溴西泮、氯氮卓、磷胺、盐酸丁丙诺啡、地尔硫卓、盐酸多塞平、氟哌啶醇、马来酸咪达唑仑、地高辛、胡椒基甲基酮、抗蚜威、新乌头碱、马来酸帕罗西汀、α-乙酰-N-去甲美沙朵(Nor—LAAM)、甲磺酸双氢麦角毒碱、敌敌畏、卡马西平、α-羟基咪达唑仑、α—羟基阿普唑仑、α—羟基三唑仑、普罗帕酮、地塞米松、丙咪嗪、盐酸赛庚啶、倍他米松、盐酸羟嗪、马普替林、苯丙氨酯、盐酸苯海索、盐酸维拉帕米、残杀威、乌头碱、次乌头碱、盐酸阿米替林、右丙氧芬、奥沙西泮、泰尔登、呋喃丹、硝西泮、艾司唑仑、三氯乙基磷酸酯、盐酸美沙酮、盐酸氟西汀、劳拉西泮、绿麦隆、利血平、氯硝西泮、西维因、阿普唑仑、氯丙嗪、2-羟基乙基氟安定、α-乙酰美沙朵(LAAM)、三唑仑、安眠酮、异丙隆、甲霜灵、氟硝西泮、敌草隆、盐酸氟奋乃静、去甲基安定、羟基安定、异安定酮、萘普生、叶蝉散、苄嘧磺隆、甲基劳拉西泮、波罗的芬、醋酸地塞米松、嘧霉胺、盐酸地芬诺酯、华法令、地西泮—D₅、地西泮、多效唑、利谷隆、亚胺硫磷、2-氨基-2′-氯-5-硝基二苯酮、扑草净、青蒿素、α—氯氰菊酯、除虫菊酯、尼莫地平、马拉硫磷、甲草胺、乙草胺、鱼藤酮、普拉西泮、对硫磷、倍硫磷、磷酸三苯酯、二嗪磷、四氢大麻酚酸

(11nor-9-carboxy-delta9-THC)、甲拌磷、乙拌磷、溴氰菊酯、胺菊酯、烯丙异丙巴比妥(ESI-)、苯巴比妥(ESI-)、异戊巴比妥(ESI-)、司可巴比妥(ESI-)、硫喷妥(ESI-)、巴比妥(ESI-)

本发明所述的筛查方法，其分离条件为：

直径5μm反相分离介质；

分析柱为100或150×2.1mm；

流动相A为甲酸铵—甲酸的水溶液；

流动相B为含甲酸铵—甲酸的乙腈溶液；

流速为0.1—0.5mL/min。

所述的反相介质选自于C₁₈或C₈或CN或苯基。

所述的流动相A为甲酸铵浓度0.5mM—5mM，甲酸浓度0.01—0.1％(v/v)的水溶液。

进一步地说，所述的流动相A为甲酸铵浓度2mM，甲酸浓度0.05(v/v)的水溶液(0.126克甲酸铵和500μl甲酸，加水至1000ml)。

进一步地说，所述的流动相B为甲酸铵浓度0.5mM—5mM，甲酸浓度0.01—0.1％(v/v)的乙腈溶液。

具体地说，所述的流动相B为甲酸铵浓度2mM，甲酸浓度0.05(v/v)的乙腈溶液(0.126克甲酸铵和500μl甲酸溶解于40ml水中，再加乙腈至1000ml)。

具体地说，所述的流速选择0.2mL/min。

本发明所述的洗脱梯度为：

本发明所述的质谱检测条件为：

检测方式：多反应监测(multiple reaction monitoring，MRM)；

离子源：电喷雾离子源(ESI)；

扫描方式：正负离子同时扫描；

电喷雾电压：3200V；

雾化气流速：N₂，600L/hr；

锥孔反吹气流速：N₂，50L/hr；

离子源温度：105℃；

碰撞气：氩气；

化合物的MRM具体参数：设置各自最佳的参数，包括两对母离子(Precursor ion)—子离子(Product ion)对、锥孔电压(cone)、碰撞电压(collision)，按照保留时间分通道设置。

本发明的有益效果

1、本发明建立的MRM方法可以同时分析242种常见的化合物，样品处理后只需一次进样，就可以对这242种常见的药毒物定性，方法快速。

2、本发明建立的MRM方法对样品的检测专一性强、灵敏度高，可满足实际检案的需要。

附图说明

图1—1为实施例1中242种化合物的总离子流色谱图

图1—2～1—6为实施例1中20种化合物的母离子—子离子对色谱图

图2—1和2—2为实施例2a中检材和对照品色谱图；

图2—3和2—4为实施例2b中检材和对照品色谱图；

图3—1为实施例3中检材色谱图；

图3—2为实施例3中对照品色谱图。

具体实施方式

以下结合附图详细描述本发明的技术方案。

应当说明的是，本发明所述实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

本发明所用的试剂若未明确指明，则均购自西格玛—奥德里奇(Sigma—Aldrich)。

实施例1  242种化合物检测

242种化合物(药、毒物)和内标：

百草枯、布洛芬、盐酸甲基爱康宁、矮壮素、盐酸爱康宁、爱康宁乙酯、甲基多巴、盐酸多巴胺、异烟肼、福尔可定、阿昔洛韦、尼古丁、烟酰胺、盐酸异丙肾上腺素、去甲吗啡、吗啡—D₃、吗啡、甲胺磷、去甲羟吗啡酮、羟吗啡酮、乙酰甲胺磷、氢吗啡酮、沙丁胺醇、西米替丁、扑热息痛、盐酸苯丙醇胺、氧化乐果、卡西酮、舒必利、茶碱、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、甲卡西酮、普鲁卡因、去甲可待因、酒石酸双氢可待因、盐酸可乐定、盐酸纳络酮、阿米雷斯、盐酸甲基麻黄碱、磷酸可待因、左旋咪唑、消旋山莨菪碱、硫酸安非他明、氨基比林、雪上一枝蒿甲素、氢溴酸东莨菪碱、羟考酮、麦司卡林、咖啡因、替苯丙胺、盐酸纳曲酮、O⁶-单乙酰吗啡盐酸盐、O³—单乙酰吗啡盐酸盐、甲基安非他明—D₅、氢可酮、氢溴酸山莨菪碱、灭多威、盐酸甲基安非他明、3，4-亚甲基二氧基甲基安非他明、7-氨基硝基安定、对-甲氧基安非他明盐酸盐(PMA)、匹莫林、久效磷、对-甲氧基甲基安非他明盐酸盐(PMMA)、士的宁、芬特明、溴甲阿托品、噻菌灵、乙基安非他明、3，4-亚甲基二氧基乙基安非他明(MDEA)、马钱子碱、去甲氯胺酮盐酸盐、3，4-亚甲基二氧基苯基-2-丁胺盐酸盐(BDB)、苯甲酰爱康宁、盐酸利多卡因、硫酸阿托品、氯胺酮盐酸盐、去甲芬太尼草酸盐、N-甲基-1-(3，4-亚甲基二氧基苯基-2-丁胺盐酸盐(MBDB)、杀虫脒、4-苯基丁胺(4—PBA)、安替比林、抗感明、敌百虫、盐酸曲马朵、东莨菪内酯、盐酸洛非西定、克伦特罗、斑蟊素、乙酰可待因、哌醋甲酯、奎宁、蒂巴因、盐酸海洛因、盐酸哌唑嗪、甲基斑蝥胺、7-氨基氯硝安定、盐酸美西律、吡虫啉、4-溴—2，5—二甲氧基苯乙胺(2C—B)、原阿片碱、盐酸哌替啶、乐果、盐酸二氢埃托啡、盐酸可卡因、去甲可卡因、去甲哌替啶、哌替啶—D₄、吡虫清、美乐托宁、丁溴东莨菪碱、唑匹坦、去甲基麦角酸二乙胺(nor—LSD)、罂粟碱、7-氨基氟硝安定、眠尔通、盐酸多沙普仑、延胡索乙素、高乌甲素、盐酸奈福泮、那可丁、喷他佐辛、非那西丁、布比卡因、异麦角酸二乙胺(iso—LSD)、安妥、氟哌利多、盐酸芬氟拉明、苯环利啶

(PCP)、去乙酰毛花甙丙、4-羟基去甲安定、氢溴酸右美沙芬、枸椽酸芬太尼、氯氮平、盐酸丁卡因、涕灭威、氟西泮、灭草松、盐酸苯海拉明、溴西泮、氯氮卓、磷胺、盐酸丁丙诺啡、地尔硫卓、盐酸多塞平、氟哌啶醇、马来酸咪达唑仑、地高辛、胡椒基甲基酮、抗蚜威、新乌头碱、马来酸帕罗西汀、α-乙酰-N-去甲美沙朵(Nor—LAAM)、甲磺酸双氢麦角毒碱、敌敌畏、卡马西平、α-羟基咪达唑仑、α—羟基阿普唑仑、α—羟基三唑仑、普罗帕酮、地塞米松、丙咪嗪、盐酸赛庚啶、倍他米松、盐酸羟嗪、马普替林、苯丙氨酯、盐酸苯海索、盐酸维拉帕米、残杀威、乌头碱、次乌头碱、盐酸阿米替林、右丙氧芬、奥沙西泮、泰尔登、呋喃丹、硝西泮、艾司唑仑、三氯乙基磷酸酯、盐酸美沙酮、盐酸氟西汀、劳拉西泮、绿麦隆、利血平、氯硝西泮、西维因、阿普唑仑、氯丙嗪、2-羟基乙基氟安定、α-乙酰美沙朵(LAAM)、三唑仑、安眠酮、异丙隆、甲霜灵、氟硝西泮、敌草隆、盐酸氟奋乃静、去甲基安定、羟基安定、异安定酮、萘普生、叶蝉散、苄嘧磺隆、甲基劳拉西泮、波罗的芬、醋酸地塞米松、嘧霉胺、盐酸地芬诺酯、华法令、地西泮—D₅、地西泮、多效唑、利谷隆、亚胺硫磷、2-氨基-2′-氯-5-硝基二苯酮、扑草净、青蒿素、α—氯氰菊酯、除虫菊酯、尼莫地平、马拉硫磷、甲草胺、乙草胺、鱼藤酮、普拉西泮、对硫磷、倍硫磷、磷酸三苯酯、二嗪磷、四氢大麻酚酸

(11nor-9-carboxy-delta9-THC)、甲拌磷、乙拌磷、溴氰菊酯、胺菊酯、烯丙异丙巴比妥(ESI-)、苯巴比妥(ESI-)、异戊巴比妥(ESI-)、司可巴比妥(ESI-)、硫喷妥(ESI-)、巴比妥(ESI-)。

药毒物及内标均来源于中国药品生物制品检定所、Cerilliant公司、Sigma公司、上海市农药研究所。

液相色谱条件：

仪器：Waters Alliance 2695/Quattro Premier XE串联四极杆液—质联用仪(美国Waters公司)，配MassLynxV4.1软件。

a)色谱柱： MS C₁₈5μm 2.1×150mm(Waters公司)

b)柱温：45℃

c)流动相：A：2mM甲酸铵和0.05％甲酸的水溶液(0.126克甲酸铵和500μL甲酸，加水至1000mL)；B：2mM甲酸铵和0.05％甲酸的乙腈(0.126克甲酸铵和500μL甲酸溶于40mL水中，加乙腈960mL)

d)流速：0.2mL/min

e)梯度：

f)进样量：10μL

质谱条件：

g)检测方式：多反应监测

h)扫描方式：正负离子同时扫描

i)电喷雾电压：3200V

j)雾化气流速：N₂，600L/hr

k)锥孔反吹气流速：N₂，50L/hr

l)离子源温度：105℃

m)碰撞气：氩气

n)242种药毒物的MRM具体参数，包括两对母离子(Precursor ion)—子离子(Product ion)对、锥孔电压(cone)、碰撞电压(collision)，见表一

o)242种药毒物的MRM参数的分通道设置情况见表二

表一 242种药毒物的MRM参数

表二 242种药毒物的MRM参数的分通道设置情况

在上述检测条件下，242种化合物的保留时间见表三

表三 242种药毒物的保留时间

药物名称                    Name                      保留时间(min)

百草枯                      Paraquat                       1.95

布洛芬                      Ibuprofen                      1.96

盐酸甲基爱康宁              Methylecgonine hydrochloride   2.29

矮壮素                      Chlormequat                    2.31

盐酸爱康宁                  Ecgonine hydrochloride         2.33

爱康宁乙酯                  Ecgonine ethyl ester           2.33

甲基多巴                    Methyldopa                     2.35

盐酸多巴胺                  Dopamine hydrochloride         2.45

异烟肼                      Isoniazide                     2.48

福尔可定                    Pholcodine                     2.97

阿昔洛韦                    Acyclovir                      3.01

S-(-)NICOTINE               S-(-)nicotine                  3.11

烟酰胺                      Nicotinamide                   3.17

盐酸异丙肾上腺素            Isoprenaline hydrochloride     3.34

去甲吗啡                    Normorphine                    3.39

吗啡—D₃(IS)                Morphine—D3                   3.68

吗啡                        Morphine                       3.78

甲胺磷                      Methamidophos                  3.79

去甲羟吗啡酮                Noroxymorphone                 3.97

羟吗啡酮                    Oxymorphone                    4.2

乙酰甲胺磷                  Acephate                       4.61

氢吗啡酮                    Hydromorphone                  4.77

沙丁胺醇                    Salbutamol                     4.98

西米替丁                   Cimetidine                       5.4

扑热息痛                   Acetaminophen                    5.68

盐酸苯丙醇胺               Cathine hydrochloride            5.87

氧化乐果                   Omethoate                        5.96

卡西酮                     Cathinone                        6.9

舒必利                     Sulpiride                        7.24

茶碱                       Theophylline                     7.39

盐酸麻黄碱                 Ephedrine hydrochloride          7.85

盐酸伪麻黄碱               Pseudoephedrine hydrochloride    8.08

甲卡西酮                   Methcathinone                    8.11

普鲁卡因                   Procaine                         8.21

去甲可待因                 Norcodeine                       8.37

酒石酸双氢可待因           Dihydrocodeine tartrate          8.39

盐酸可乐定                 Clonidine hydrochloride          8.45

盐酸纳络酮                 Naloxone hydrochloride           8.51

阿米雷斯                   Aminorex                         8.59

盐酸甲基麻黄碱             Methylephedrine hydrochloride    8.64

磷酸可待因                 Codeine phosphate                8.74

左旋咪唑                   Levami sole                      9.01

消旋山莨菪碱               Raceanisodamine                  9.07

硫酸安非他明               Amfetamine sulfate               9.21

氨基比林                   Aminopyrine                      9.31

雪上一枝蒿甲素             Bullatine A                      9.47

氢溴酸东莨菪碱             Scopolamine hydrobromide         9.62

羟考酮                        Oxycodone                     9.66

麦司卡林                      Mescaline                     9.67

咖啡因                        Caffeine                      9.7

替苯丙胺                      Tenamphetamine                9.73

盐酸纳曲酮                    Naltrexone hydrochloride      9.82

O_6-单乙酰吗啡盐酸盐           O⁶-monoacetylmorphine         9.83

                              hydrochloride

O³—单乙酰吗啡盐酸盐          O³-monoacetylmorphine         9.87

                              hydrochloride

甲基安非他明—D₅(IS)          Methamphetamine—D₅           9.95

氢可酮                        Hydrocodone                   10.06

氢溴酸山莨菪碱                Anisodamine hydrobromide      10.11

灭多威                        Methomyl                      10.2

盐酸甲基安非他明              Methamphetamine               10.21

3，4-亚甲基二氧基甲基安非他明 MDMA                          10.35

7-氨基硝基安定                7-aminonitrazepam             10.36

对—甲氧基安非他明盐酸盐      PMA.HCL                       10.38

匹莫林                        Pemoline                      10.39

久效磷                        Monocrotophos                 10.68

对—甲氧基甲基安非他明盐酸盐  PMMA.HCL                      10.89

士的宁                        Strychnine                    11.02

芬特明                        Phentermine                   11.04

溴甲阿托品                    Methatropine bromide          11.12

噻菌灵                        Thiabendazole                 11.17

乙基安非他明                  Ethylamphetamine              11.35

3，4—亚甲基二氧基乙基安非他明     MDEA                       11.36

马钱子碱                           Brucine                    11.38

去甲氯胺酮盐酸盐                   Norketamine.HCL            11.51

3，4—亚甲基二氧基苯基—2—丁胺    BDB.HCL                    11.63

苯甲酰爱康宁                       Benzoylecgonine            11.64

盐酸利多卡因                       lidocaine Hydrochloride    11.66

硫酸阿托品                         Atropine sulfate           11.67

氯胺酮盐酸盐                       Ketamine hydrochloride     11.82

去甲芬太尼草酸盐                   Norfentanyl oxalate        11.99

N—甲基—1—(3，4—亚甲基二氧

                                   MBDB.HCL                   12.1

基苯基)—2—丁胺盐酸盐

杀虫脒                             Chlordimeform              12.16

4-苯基丁胺                         4-PBA                      12.31

安替比林                           Antipyrine                 12.39

抗感明                             Pheniramine                12.68

敌百虫                             Dylox                      12.69

盐酸曲马朵                         Tramadol hydrochloride     12.84

东莨菪内酯                         Scopoletin                 12.88

盐酸洛非西定                       Lofexidine hydrochloride   12.92

克伦特罗                           Clenbuterol                12.98

斑蟊素                             Cantharidin                13.07

乙酰可待因                         Acetylcodeine              13.08

哌醋甲酯                           Methylphenidate(ritalin)   13.1

奎宁                               Quinine                    13.13

蒂巴因                             Thebaine                   13.15

盐酸海洛因                    Heroin hydrochloride               13.26

盐酸哌唑嗪                    Prazosin hydrochloride             13.28

甲基斑蝥胺                    Methylcantharidinimide             13.38

7-氨基氯硝安定                7-aminoclonazepam                  13.41

盐酸美西律                    Mexiletine hydrochloride           13.41

吡虫啉                        Inidacloprid                       13.53

4-溴—2，5—二甲氧基苯乙胺    2C-B                               13.58

原阿片碱                      Protopine                          13.65

盐酸哌替啶                    Pethidine hydrochloride            13.67

乐果                          Dimethoate                         13.7

盐酸二氢埃托啡                Dihydroetorphine                   13.72

盐酸可卡因                    Cocaine hydrochloride              13.72

去甲可卡因                    Norcocaine                         13.75

去甲度冷丁                    Norpethidine                       13.76

哌替啶—D₄(IS)                Pethidine—D₄                      13.78

吡虫清                        Acetamiprid                        13.93

美乐托宁                      Melatonin                          14.01

丁溴东莨菪碱                  Scopolamine butylbromide           14.02

唑匹坦                        Zolpidem                           14.09

去甲基麦角酸二乙胺            nor—LSD                           14.15

罂粟碱                        Papaverine                         14.17

7-氨基氟硝安定                7-aminoflunitrazepam               14.18

眠尔通                        Meprobamate                        14.27

盐酸多沙普仑                  Doxapram hydrochloride             14.32

延胡索乙素                Tetrahydropalmatine               14.36

高乌甲素                  Lappaconitine                     14.42

盐酸奈福泮                Nefopam hydrochloride             14.48

那可丁                    Noscapine                         14.5

喷他佐辛                  Pentazocine                       14.54

非那西丁                  Phenacetine                       14.63

布比卡因                  Bupivacaine                       14.74

异麦角酸二乙胺            iso—LSD                          14.75

安妥                      α—naphthylthiourea               14.75

氟哌利多                  Droperidol                        14.76

盐酸芬氟拉明              Fenfluramine hydrochloride        14.85

苯环利啶                  PCP                               14.9

去乙酰毛花甙丙            Destanosidum c                    14.94

4-羟基去甲安定            4-hydroxynordiazepam              15.1

氢溴酸右美沙芬            Dextromethorphan                  15.15

枸椽酸芬太尼              Fentanyl citras                   15.19

氯氮平                    Clozapine                         15.47

盐酸丁卡因                Tetracaine hydrochloride          15.51

涕灭威                    Aldicarb                          15.56

氟西泮                    Flurazepam                        15.57

灭草松                    Bentazon                          15.61

盐酸苯海拉明              Diphenhydramine                   15.62

溴西泮                    Bromazepam                        15.74

氯氮卓                    Chlordiazepoxide                  15.79

磷胺                          Phosphamidon                     15.81

盐酸丁丙诺啡                  Buprenorphine hydrochloride      15.85

地尔硫卓                      Diltiazem                        15.87

盐酸多塞平                    Doxepin hydrochloride            15.87

氟哌啶醇                      Haloperidol                      15.89

马来酸咪达唑仑                Midazolam maleate                15.98

地高辛                        Digoxin                          16.01

胡椒基甲基酮                  3，4-methylenedioxyphenyl        16.07

抗蚜威                        Pirimicarb                       16.11

新乌头碱                      Mesaconitine                     16.18

马来酸帕罗西汀                Paroxetine maleate               16.19

α—乙酰—N—去甲美沙朵        nor—LAAM                        16.32

甲磺酸双氢麦角毒碱            co-dergocrine mesylate           16.33

敌敌畏                        Dichlorvos                       16.36

卡马西平                      Carbamazepine                    16.51

α-羟基咪达唑仑                α—hydroxymidazolam              16.52

α—羟基阿普唑仑               α—OH—alprazolam                16.56

α—羟基三唑仑                 α-OH—triazolam                  16.59

普罗帕酮                      Propafenone                      16.59

地塞米松                      Dexamethasone                    16.6

丙咪嗪                        Imipramine                       16.61

盐酸赛庚啶                    Cyproheptadine hydrochloride     16.62

倍他米松                      Betamethasone                    16.63

盐酸羟嗪                      Hydroxyzine hydrochloride        16.65

马普替林                     Maprotiline                     16.75

苯丙氨酯                     Phenprobamate                   16.8

盐酸苯海索                   Benzhexol hydrochloride         16.83

盐酸维拉帕米                 Verapamil                       16.87

残杀威                       Propoxur                        16.92

乌头碱                       Aconitine                       16.93

次乌头碱                     Hypaconitine                    16.95

盐酸阿米替林                 Amitriptyline hydrochloride     16.97

右丙氧芬                     Dextropropoxyphene              17.06

奥沙西泮                     Oxazepam                        17.07

泰尔登                       Tardan                          17.11

呋喃丹                       Carbofuran                      17.14

硝西泮                       Nitrazepam                      17.14

艾司唑仑                     Estazolam                       17.17

三氯乙基磷酸酯               Trichlorethyl phosphate         17.2

盐酸美沙酮                   Methadone hydrochloride         17.29

盐酸氟西汀                   Fluoxetine.HCL                  17.33

劳拉西泮                     Lorazepam                       17.38

绿麦隆                       Chlortoluron                    17.39

利血平                       Reserpine                       17.4

氯硝西泮                     Clonazepam                      17.45

西维因                       Carbaryl                        17.51

阿普唑仑                     Alprazolam                      17.56

氯丙嗪                       Chlorpromazine                  17.57

2-羟基乙基氟安定             2-hydroxyethyl flurazepam         17.59

α—乙酰美沙朵盐酸盐          LAAM.HCL                          17.65

三唑仑                       Triazolam                         17.73

安眠酮                       Methaqualone                      17.86

异丙隆                       Isoproturon                       18.08

甲霜灵                       Metalaxyl                         18.13

氟硝西泮                     Flunitrazepam                     18.25

敌草隆                       Diuron                            18.44

盐酸氟奋乃静                 Fluphenazine Hydrochloride        18.47

去甲基安定                   Demethyldiazepam                  18.55

羟基安定                     Temazepam                         18.62

异安定酮                     Clobazam                          18.65

萘普生                       Naproxen                          18.84

叶蝉散                       Isoprocarb                        18.85

苄嘧磺隆                     Bensulfuron—methyl               18.92

甲基劳拉西泮                 Methyllorazepam                   18.96

波罗的芬                     SKF525A                           19.04

醋酸地塞米松                 Dexamethasone Acetate             19.28

嘧霉胺                       Pyrimethanil                      19.77

盐酸地芬诺酯                 Diphenoxylate hydrochloride       19.93

华法令                       Warfarine                         20.09

地西泮—D₅(IS)               Diazepam—D5                      20.22

地西泮                       Diazepam                          20.25

多效唑                       Paclobutrazol                     20.32

利谷隆                       Linuron                           20.85

亚胺硫磷                     Imidan                            21.11

2-氨基-2′-氯-5-硝基二苯酮   2-amino-2′-chloro-5-nitrobenzo   21.16

扑草净                       Prometryne                        21.22

青蒿素                       Artemisinin                       21.78

α—氯氰菊酯                  Cypermethrin                      22.04

除虫菊酯                                                       22.62

尼莫地平                     Nimodipine                        22.95

马拉硫磷                     Malathion                         23.06

甲草胺                       Alachlor                          23.09

乙草胺                       Acetochlor                        23.11

鱼藤酮                       Rotenone                          23.47

普拉西泮                     Prazepam                          23.76

对硫磷                       Parathion                         24.87

倍硫磷                       Fenthion                          24.93

磷酸三苯酯(IS)               Triphenyl phosphate               25.04

二嗪磷                       Diazinon                          25.41

四氢大麻酚酸                 11nor-9-carboxy-delta9-THC        25.69

甲拌磷                       Phorate                           25.85

乙拌磷                       Disulfoton                        25.9

溴氰菊酯                     Decemethrin                       26.2

胺菊酯                       Tetramethrin                      27

巴比妥(ESI-)                 Barbital                          10.85

烯丙异丙巴比妥(IS)(ESI-)     Aprobarbital                      14.29

苯巴比妥(ESI-)        Phenobarbital              14.54

异戊巴比妥(ESI-)      Amobarbital                16.56

司可巴比妥(ESI-)      Secobarbital               17.15

硫喷妥(ESI-)          Thiopental                 18.54

在上述检测条件下，242种化合物的总离子流色谱图见附图1—1。

以其中20种化合物为例的母离子—子离子对色谱图见附图1—2～1—6。

图1-2为士的宁、丙咪嗪、眠尔通和甲胺磷等四种化合物的色谱图，其中：

图A、a为士的宁的两对母离子—子离子色谱图(母离子为335.2，子离子分别为264.2和184.12)

图B、b为丙咪嗪的两对母离子—子离子色谱图(母离子为281.25，子离子分别为86.15和58.23)

图C、c为眠尔通的两对母离子—子离子色谱图(母离子为219.29，子离子分别为158.06和55.15)

图D、d为甲胺磷的两对母离子—子离子色谱图(母离子为141.91，子离子分别为124.89和93.89)

图1-3为盐酸可乐定、左旋咪唑、斑蟊素和苯丙氨酯等四种化合物的色谱图，其中：

图E、e为盐酸可乐定的两对母离子—子离子色谱图(母离子为230.02，子离子分别为212.99和159.95)

图F、f为左旋咪唑的两对母离子—子离子色谱图(母离子为205.1，子离子分别为178.04和91.05)

图G、g为斑蟊素的两对母离子—子离子色谱图(母离子为197.05，子离子分别为123.05和95.05)

图H、h为苯丙氨酯的两对母离子—子离子色谱图(母离子为180.15，子离子分别为119和91)

图1-4为马普替林、抗感明、美乐托宁和对—甲氧基甲基安非他明盐酸盐等四种化合物的色谱图，其中：

图I、i为马普替林的两对母离子—子离子色谱图(母离子为278.42，子离子分别为250.42和191.34)

图J、j为抗感明的两对母离子—子离子色谱图(母离子为241.37，子离子分别为196.27和167.24)

图K、k为美乐托宁的两对母离子—子离子色谱图(母离子为233.3，子离子分别为174.27和159.28)

图L、l为对—甲氧基甲基安非他明盐酸盐的两对母离子—子离子色谱图(母离子为180.38，子离子分别为149.3和121.27)

图1-5为地塞米松、盐酸羟嗪、氢溴酸右美沙芬和甲基斑蝥胺等四种化合物的色谱图，其中：

图M、m为地塞米松的两对母离子—子离子色谱图(母离子为393.27，子离子分别为355.2和147.09)

图N、n为盐酸羟嗪的两对母离子—子离子色谱图(母离子为375.13，子离子分别为200.98和166)

图O、o为氢溴酸右美沙芬的两对母离子—子离子色谱图(母离子为272.18，子离子分别为215.13和171)

图P、p为甲基斑蝥胺的两对母离子—子离子色谱图(母离子为210.1，子离子分别为166.04和107.03)

图1-6为波罗的芬、O6-单乙酰吗啡盐酸盐、酒石酸双氢可待因和扑热息痛等四种化合物的色谱图，其中：

图Q、q为波罗的芬的两对母离子—子离子色谱图(母离子为354.2，子离子分别为209.1和105)

图R、r为O6-单乙酰吗啡盐酸盐的两对母离子—子离子色谱图(母离子为328.2，子离子分别为211.16和165.11)

图S、s为酒石酸双氢可待因的两对母离子—子离子色谱图(母离子为302.24，子离子分别为199.17和171.14)

图T、t为扑热息痛的两对母离子—子离子色谱图(母离子为151.97，子离子分别为109.93和65.03)

实施例2乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的检测

南汇区付某在家喝了自制的药酒后毒发身亡。取喝剩的药酒检验。

Waters Alliance 2695/Quattro Premier XE串联四极杆液-质联用仪(美国Waters公司)，配MassLynxV4.1软件。

乌头碱、次乌头碱和新乌头碱对照品均来源于中国药品生物制品检定所

试剂：乙腈为色谱纯，甲酸、甲酸铵、氯仿均为分析纯，水为纯净水。

样品处理

取喝剩的药酒检材1mL，用氯仿5mL提取，振荡3min后离心，取下清液60℃水浴吹干，初始流动相(也称平衡流动相，即0min时的洗脱流动相)100μL定容，液相色谱—质谱仪进样。

2a

液相色谱和ESI质谱条件：同实施例1

2b

由于该案例明确要求检验乌头类生物碱，不需要检验其他化合物，故也可采用等度洗脱以缩短分析时间。

液相条件为：流动相为乙腈(含0.05％甲酸和5mM甲酸铵)：水(含0.05％甲酸和5mM甲酸铵)＝40∶60，其余同实施例1。

ESI质谱条件：扫描方式为正离子扫描，采用单一通道MRM方法检测，其余同实施例1。

结果

根据检材中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱成分的各两对母离子—子离子对均同时出峰，且保留时间和子离子强度比均与对照品一致，即可定性。

2a方法的色谱图见附图2—1和2—2。

图2-1为检测样品的色谱图，其中：

图A、B为检材中新乌头碱的两对母离子—子离子色谱图(母离子为632.23，子离子分别为572.21和354.1)；

图C为检材新乌头碱通道的总离子流色谱图

图D、E为检材中乌头碱的两对母离子—子离子色谱图(母离子为646.25，子离子分别为586.22和368.1)

图F、G为检材中次乌头碱的两对母离子—子离子色谱图(母离子为616.21，子离子分别为556.2和338.1)

图H为检材乌头碱和次乌头碱通道的总离子流色谱图

图2-2为对照品色谱图，其中：

图A、B为新乌头碱对照品的两对母离子—子离子色谱图(母离子为632.23，子离子分别为572.21和354.1)；

图C为新乌头碱对照品通道的总离子流色谱图

图D、E为乌头碱对照品的两对母离子—子离子色谱图(母离子为646.25，子离子分别为586.22和368.1)；

图F、G为次乌头碱对照品的两对母离子—子离子色谱图(母离子为616.21，子离子分别为556.2和338.1)；

图H为乌头碱和次乌头碱对照品通道的总离子流色谱图。

2b方法的色谱图见附图2—3和2—4。

图2-3为检测样品的色谱图，其中：

图A、B为检材中乌头碱的两对母离子—子离子色谱图(母离子为646.25，子离子分别为586.22和368.1)；

图C、D为检材中新乌头碱的两对母离子—子离子色谱图(母离子为632.23，子离子分别为572.21和354.1)；

图E、F为检材中次乌头碱的两对母离子—子离子色谱图(母离子为616.21，子离子分别为556.2和338.1)；

图G为检材的总离子流色谱图。

图2-4为对照品色谱图，其中：

图A、B为乌头碱对照品的两对母离子—子离子色谱图(母离子为646.25，子离子分别为586.22和368.1)；

图C为乌头碱对照品的总离子流色谱图；

图D、E为次乌头碱对照品的两对母离子—子离子色谱图(母离子为616.21，子离子分别为556.2和338.1)；

图F为次乌头碱对照品的总离子流色谱图；

图G、H为新乌头碱对照品的两对母离子—子离子色谱图(母离子为632.23，子离子分别为572.21和354.1)；

图I为新乌头碱对照品的总离子流色谱图。

根据上述图谱对比，可以得出检出乌头碱、次乌头碱和新乌头碱成分的结论。

实施例3

松江区一西瓜地里，发生一起破坏生产经营案，从现场提取一个塑料瓶送检。

本案例要求检验除草剂百草枯，无需梯度洗脱以分离二百余种化合物，故采用等度洗脱。实验条件如下：

Waters Alliance 2695/Quattro Premier XE串联四极杆液-质联用仪(美国Waters公司)，配MassLynxV4.1软件。

百草枯对照品来源于上海市农药研究所。

试剂：乙腈为色谱纯、甲酸、甲酸铵、氯仿均为分析纯，水为纯净水。

液相色谱条件：流动相为乙腈(含0.05％甲酸和5mM甲酸铵)∶水(含0.05％甲酸和5mM甲酸铵)＝60∶40，其余同实施例1。

ESI质谱条件：扫描方式为正离子扫描，采用单一通道MRM方法检测，其余同实施例1。

样品处理

取检材塑料瓶，用适量氯仿洗涤，60℃水浴吹至近干，初始流动相100μL定容，液相—质谱仪进样。

结果

根据检材中百草枯成分的两对母离子—子离子对同时出峰，且保留时间和子离子强度比均与对照品一致，即可定性。

色谱图见附图3—1和3—2。

图3-1为检测样品的色谱图，其中：

图A、B为检材中百草枯的两对母离子—子离子色谱图(母离子为185.06，子离子分别为169.01和144.01)；

图C为检材的总离子流色谱图。

图3-2为对照品色谱图，其中：

图A、B为百草枯对照品的两对母离子—子离子色谱图(母离子为185.06，子离子分别为169.01和144.01)；

图C为百草枯对照品的总离子流色谱图。

根据上述图谱对比，可以得出检出百草枯成分的结论。

Claims (8)

1、一种可同时对242种药物和毒物(药毒物)进行定性筛查的液相色谱-质谱联用方法，采用LC-MS/MS多反应监测以两对母离子—子离子对和保留时间对目标物进行定性，包括液相色谱分离、质谱检测两个步骤：

a、液相色谱分离：反相分离介质；流动相A为含甲酸铵、甲酸的水溶液，流动相B为含甲酸铵、甲酸的乙腈溶液；流速为0.1～0.5mL/min梯度洗脱；柱温为室温至45℃；

b、质谱检测：

检测方式：多反应监测

离子源：电喷雾离子源

扫描方式：正负离子同时扫描

电喷雾电压：3200V

雾化气流速：N₂，600升/小时

锥孔反吹气流速：N₂，50升/小时

离子源温度：105℃

碰撞气：氩气

药毒物的MRM具体参数：设置各自的参数，包括两对母离子—子离子对、锥孔电压、碰撞电压，按照保留时间分通道设置。

2、如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于所述的反相介质选自于C₁₈或C₈或CN或苯基。

3、如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于所述的反相介质为C₁₈

4、如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于所述的流动相A为甲酸铵浓度0.5mM—5mM，甲酸浓度0.01—0.1％(v/v)的水溶液。

5、如权利要求4所述的筛查方法，其特征在于所述的流动相A为甲酸铵浓度2mM，甲酸浓度0.05％(v/v)的水溶液。

6、如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于所述的流动相B为甲酸铵浓度0.5mM—5mM，甲酸浓度0.01—0.1％(v/v)的乙腈溶液。

7、如权利要求6所述的筛查方法，其特征在于所述的流动相B为甲酸铵浓度2mM，甲酸浓度0.05％(v/v)的乙腈溶液。

8、如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于所述的流速为0.2ml/min。

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