CN108627595B - 一种同时检测毛发中12种碱性毒品的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于毒品检测技术领域,尤其涉及一种同时检测毛发中12种碱性毒品的方法。该同时分析头发中12种精神活性药物的方法简便、快速,分析范围宽广。本发明与已有的方法相比,在样品前处理上省去了液液提取过程,整个过程可在1h内完成,并没有增长时间;相反,多个样品分析时,更显现高通量的优势。本发明所提供的技术方案可以实现实际案例的外污染检测、即时定量分析,便于阳性案例的数据积累。因此,本发明所述的同时检测毛发中12种碱性毒品的方法具有优异的选择性、线性相关性、精密度和准确度,同时LOD与LOQ足够低,从而成功为推测毒品来源及正确区分非法滥用和临床用药提供技术支持,并具有可观的市场潜力。
Description
技术领域
本发明属于毒品检测技术领域,尤其涉及一种同时检测毛发中12种碱性毒 品的方法。
背景技术
众所周知,以吗啡、可待因、甲基苯丙胺、苯丙胺为代表的碱性毒品在我国 扩散最广、危害最为严重。
毛发检材与血、尿等其它生物检材相比具有易获取、易保存、目标物稳定、 检出时限长等优点,尤其是,毛发检材能反映较长时间(几个月或几年)的药物使 用情况,因此,其在法庭科学摄毒鉴定中发挥着重要作用,目前在我国已成为吸 毒成瘾认定的证据。
此外,司法鉴定中,将人体毛发样品检测出毒品成分增加为认定吸毒成瘾人 员的科学证据;然而,目前尚缺乏同时检测多种毒品的方法,难以满足毛发中毒 品检测的迫切需求。
现有的文献中已建立有毛发中苯丙胺、阿片类毒品和可卡因的检测方法,然 而,这些现有技术中的方法通常只能针对一类毒品,不同的毒品检测要求样品前 处理操作各不相同,而且前处理繁琐、费时,显然已无法满足现实鉴定的需求。 目前我国境内滥用的毒品种类日趋多样化,近20%的吸毒者往往是多种毒品混 用,例如混用甲基苯丙胺,氯胺酮、可卡因等毒品。在这种情况下,如果仅用针 对单类毒品的方法实施分析,就容易造成漏检,因此,实际工作中,迫切需要一 种毛发中多种类毒品及其代谢物的筛选分析方法。
发明内容
本发明旨在克服现有技术中存在的缺陷,并提供一种简便、快速、高效地同 时检测毛发中12种碱性毒品的方法,从而推广毛发中毒品的分析技术,规范法 医毒物实验室分析方法,为摄毒鉴定的举证、侦破和审理提供技术支撑。
因此,本发明提供了以下技术方案:
一种同时检测毛发中12种碱性毒品的方法,其包括以下步骤:
(1)样品前处理;
(2)LC-MS/MS分析;
其中,步骤(1)所述的样品前处理包括:
在室温下,将毛发样品依次用蒸馏水和丙酮振荡洗涤,再晾干毛发样品,剪 碎后,置于一EP管中;然后,向该EP管中加入陶瓷研磨珠和内标溶液,冷冻 研磨;接着,离心,取上清液转移至进样瓶中,进样至LC-MS/MS系统;
其中,所述12种碱性毒品为:单乙酰吗啡,吗啡,可待因,甲基苯丙胺, 苯丙胺,3,4-亚甲二氧甲基苯丙胺(MDMA),3,4-亚甲二氧基苯丙胺(MDA), 3,4-亚甲二氧基-N-乙基-苯丙胺(MDE),氯胺酮,去甲氯胺酮,可卡因,苯甲 酰爱康宁。
优选地,在上述方法中,所述内标溶液为甲氧那明的甲醇溶液。
进一步优选地,在上述方法中,所述内标溶液的浓度为1ng/mL。
优选地,在上述方法中,所述冷冻研磨的温度为10℃以下。
优选地,在上述方法中,所述冷冻研磨的持续时间为2~8min。
优选地,在上述方法中,所述离心的转速为10000~13000rpm。
进一步优选地,在上述方法中,所述离心的持续时间为2~4min。
进一步优选地,在上述方法中,所述样品前处理的具体操作包括:在室温下, 将毛发样品依次用蒸馏水和丙酮振荡洗涤2次,再晾干毛发样品,剪碎至约1mm 每段,然后将20mg碎发置于一EP管中;然后,向该EP管中加入0.3g陶瓷研 磨珠和1mL内标溶液(甲氧那明1ng/mL),冷冻研磨(10℃以下)5min;接着, 以12000rpm的转速离心3min,取上清液转移至进样瓶中,进样至LC-MS/MS 系统。
优选地,在上述方法中,步骤(2)所述的LC-MS/MS分析中,色谱条件包 括:
色谱柱为Allure PFP Propyl液相色谱柱(2.1mm×100mm×5μm);流动相A 为乙腈,流动相B为20mmol/L乙酸胺和0.1%甲酸缓冲液,梯度洗脱;流速: 350μL/min;进样量:5μL;进样器温度:室温;柱温:室温。
进一步优选地,在上述方法中,所述梯度洗脱的条件为:第0-4min:80% 流动相A,20%流动相B;第4-4.1min:95%流动相A,5%流动相B;第4.1-9min: 80%流动相A,20%流动相B;第9min到最后:80%流动相A,20%流动相B。
优选地,在上述方法中,步骤(2)所述的LC-MS/MS分析中,质谱条件包 括:电喷雾电离-正离子模式(ESI+);碰撞气(CAD):7psi;气帘气(CUR):25psi; 离子源电压(IS):5500V;雾化气(GS1):35psi;辅助气(GS2):35psi;离 子源温度(TEM):500℃;扫描方式:多反应监测(MRM)。
与现有技术相比,本发明所提供的技术方案具有以下技术优势:本发明所建 立的同时分析头发中12种精神活性药物的方法简便、快速,分析范围宽广。按 照国际头发分析协会(SOHT)发布的滥用药物头发确认分析规则,阿片类和苯 丙胺类药物的cutoff值为0.2ng/mg,可卡因、苯甲酰爱康宁的的cutoff值分别 为0.5ng/mg和0.05ng/mg,该方法的LOD在0.05ng/mg(20mg头发用量),足 以满足通常的头发中滥用药物鉴定案件。新方法已应用于SOHT的PT样品测试, 证明其可行性、定性定量的准确性。本发明与已有的方法相比,在样品前处理上 省去了液液提取过程,整个过程可在1h内完成,并没有增长时间;相反,多个样品分析时,更显现高通量的优势。本发明所提供的技术方案可以实现实际案例 的外污染检测、即时定量分析,便于阳性案例的数据积累。
综上所述,本发明所述的同时检测毛发中12种碱性毒品的方法具有优异的 选择性、线性相关性、精密度和准确度,同时LOD与LOQ足够低,因此,成 功为推测毒品来源及正确区分非法滥用和临床用药提供技术支持,从而具有可观 的市场潜力。
附图说明
图1为实施例1中的头发样本的LC-MS/MS图谱;
图2为实施例2中的头发样本的LC-MS/MS图谱;
图3为实施例3中的头发样本的LC-MS/MS图谱;
图4为12种碱性毒品的总离子流色谱图;
图5为单乙酰吗啡的LC-MS/MS图谱;
图6为吗啡的LC-MS/MS图谱;
图7为可待因的LC-MS/MS图谱;
图8为甲基苯丙胺的LC-MS/MS图谱;
图9为苯丙胺的LC-MS/MS图谱;
图10为MDMA的LC-MS/MS图谱;
图11为MDA的LC-MS/MS图谱;
图12为MDE的LC-MS/MS图谱;
图13为氯胺酮的LC-MS/MS图谱;
图14为去甲氯胺酮的LC-MS/MS图谱;
图15为可卡因的LC-MS/MS图谱;
图16为苯甲酰爱康宁的LC-MS/MS图谱;
图17为内标的LC-MS/MS图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步阐述,但本发明并不限于以下实施 方式。
一种同时检测毛发中12种碱性毒品的方法,包括以下步骤:
(1)样品前处理;
(2)LC-MS/MS分析;
其中,步骤(1)所述的样品前处理包括:
在室温下,将毛发样品依次用蒸馏水和丙酮振荡洗涤,再晾干毛发样品,剪 碎后,置于一EP管中;然后,向该EP管中加入陶瓷研磨珠和内标溶液,冷冻 研磨;接着,离心,取上清液转移至进样瓶中,进样至LC-MS/MS系统;
其中,所述12种碱性毒品为:单乙酰吗啡,吗啡,可待因,甲基苯丙胺, 苯丙胺,3,4-亚甲二氧甲基苯丙胺(MDMA),3,4-亚甲二氧基苯丙胺(MDA), 3,4-亚甲二氧基-N-乙基-苯丙胺(MDE),氯胺酮,去甲氯胺酮,可卡因,苯甲 酰爱康宁。
在一个优选实施例中,所述内标溶液为甲氧那明的甲醇溶液。
在一个进一步优选的实施例中,所述内标溶液的浓度为1ng/mL。
在一个优选实施例中,所述冷冻研磨的温度为10℃以下。
在一个优选实施例中,所述冷冻研磨的持续时间为2~8min。
在一个优选实施例中,所述离心的转速为10000~13000rpm。
在一个进一步优选的实施例中,所述离心的持续时间为2~4min。
在一个优选实施例中,步骤(2)所述的LC-MS/MS分析中,色谱条件包括:
色谱柱为Allure PFP Propyl液相色谱柱(2.1mm×100mm×5μm);流动相A 为乙腈,流动相B为20mmol/L乙酸胺和0.1%甲酸缓冲液,梯度洗脱;流速: 350μL/min;进样量:5μL;进样器温度:室温;柱温:室温。
在一个进一步优选的实施例中,所述梯度洗脱的条件如下表1所示:
表1梯度洗脱的条件
时间(min) | A(v%) | B(v%) |
初始 | 80 | 20 |
1.00 | 80 | 20 |
4 | 95 | 5 |
4.10 | 80 | 20 |
9.00 | 80 | 20 |
在一个优选实施例中,步骤(2)所述的LC-MS/MS分析中,质谱条件包括: 电喷雾电离-正离子模式(ESI+);碰撞气(CAD):7psi;气帘气(CUR):25psi;离 子源电压(IS):5500V;雾化气(GS1):35psi;辅助气(GS2):35psi;离子 源温度(TEM):500℃;扫描方式:多反应监测(MRM)。
其中,检测离子及其它相关参数见下表2:
表2各化合物的MS/MS条件及保留时间
注:*第一对母离子/子离子为定量离子对。
此外,发明人还实施了一系列试验以对本发明所述方法进行验证,主要包括 验证本发明所述方法的选择性、线性相关性及其定量限、精密度和准确度等;分 别如下文所述:
空白头发按照本发明所述的方法实施样品前处理,然后进行LC-MS/MS分 析,空白头发中内源性物质不会干扰12种碱性毒品及其代谢物、内标的测定,因 此本发明所述方法具有很好的选择性。
12种碱性毒品及其代谢物在各自的线性范围内均呈良好的线性关系,见下表 3,LOD均为0.05ng/mg,LOQ均为0.1ng/mg。
表3线性方程和线性范围
并且,12种碱性毒品及其代谢物在低、中、高三个浓度的准确度均在100±20% 以内,精密度RSD均在±20%以内,具体见下表4。
表4毛发中12种碱性毒品及其代谢物测定的精密度和准确度
实施例1
某派出所送检头发,嫌疑人声称从未碰过毒品。送检头发采用本发明所述方 法进行分析,在其贴头皮0-3cm段中不仅检出甲基苯丙胺及其代谢物苯丙胺, 同时也检出MDMA及其代谢物MDA,具体检测结果见图1。
实施例2
某派出所送检头发,嫌疑人承认溜“冰”;该送检头发采用本发明所述方法 进行分析,不仅检出甲基苯丙胺及其代谢物苯丙胺,同时也检出了氯胺酮及其代 谢物去甲氯胺酮;可见,应用本发明所述方法可同时筛选多种碱性毒品,以减少 漏检风险,本实施例的检测结果参见图2。
实施例3
某派出所送检头发,嫌疑人承认溜“冰”;该送检头发采用本发明所述方法 进行分析,不仅检出MDMA及其代谢物MDA,同时也检出氯胺酮及其代谢物去 甲氯胺酮,可卡因及其代谢物苯甲酰爱康宁;可见,应用本发明所述方法可同时 筛选多种碱性毒品,以减少漏检风险,本实施例的检测结果参见图3。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述,但其只是作为范例,本发明并 不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言,任何对本发明进行 的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此,在不脱离本发明的精神和范 围下所作的均等变换和修改,都应涵盖在本发明的范围内。
Claims (7)
1.一种同时检测毛发中12种碱性毒品的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)样品前处理;
2)LC-MS/MS分析;
其中,步骤1)所述的样品前处理包括:
在室温下,将毛发样品依次用蒸馏水和丙酮振荡洗涤,再晾干毛发样品,剪碎后,置于一EP管中;然后,向该EP管中加入陶瓷研磨珠和内标溶液,冷冻研磨;接着,离心,取上清液转移至进样瓶中,进样至LC-MS/MS系统;
其中,所述12种碱性毒品为:单乙酰吗啡,吗啡,可待因,甲基苯丙胺,苯丙胺,3,4-亚甲二氧甲基苯丙胺,3,4-亚甲二氧基苯丙胺,3,4-亚甲二氧基-N-乙基-苯丙胺,氯胺酮,去甲氯胺酮,可卡因,苯甲酰爱康宁;
其中,所述内标溶液为甲氧那明的甲醇溶液;
步骤2)所述的LC-MS/MS分析中,色谱条件包括:
色谱柱为Allure PFP Propyl液相色谱柱,2.1mm×100mm×5μm;流动相A为乙腈,流动相B为20mmol/L乙酸胺和0.1%甲酸缓冲液,梯度洗脱;流速:350μL/min;进样量:5μL;进样器温度:室温;柱温:室温;
所述梯度洗脱的条件为:0-4min:80%流动相A,20%流动相B;4-4.1min:95%流动相A,5%流动相B;4.1-9min:80%流动相A,20%流动相B;9min到最后:80%流动相A,20%流动相B。
2.根据权利要求1所述的同时检测毛发中12种碱性毒品的方法,其特征在于,所述内标溶液的浓度为1ng/mL。
3.根据权利要求1所述的同时检测毛发中12种碱性毒品的方法,其特征在于,所述冷冻研磨的温度为10℃以下。
4.根据权利要求1所述的同时检测毛发中12种碱性毒品的方法,其特征在于,所述冷冻研磨的持续时间为2~8min。
5.根据权利要求1所述的同时检测毛发中12种碱性毒品的方法,其特征在于,所述离心的转速为10000~13000rpm。
6.根据权利要求5所述的同时检测毛发中12种碱性毒品的方法,其特征在于,所述离心的持续时间为2~4min。
7.根据权利要求1所述的同时检测毛发中12种碱性毒品的方法,其特征在于,步骤2)所述的LC-MS/MS分析中,质谱条件包括:
电喷雾电离-正离子模式,ESI+;碰撞气,CAD:7psi;气帘气,CUR:25psi;离子源电压,IS:5500V;雾化气,GS1:35psi;辅助气,GS2:35psi;离子源温度,TEM:500℃;扫描方式:多反应监测,MRM。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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