CN108717089A - 一种罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法。包括样品选择、前处理、测定，所述前处理包括以下步骤：样品加入纯水、乙腈和无水乙酸钠，旋涡振荡，再加无水硫酸镁旋涡振荡，然后离心，取上清液旋蒸至干，用溶解液溶解，过膜，待测。本发明本着基质分散原理的QuEChERS原则，建立食品中罂粟壳成分多种生物碱含量同时检测的快速、准确、经济便捷的检测方法。通过优化前处理过程，达到快速检测的要求，且提高了净化效果和检测效率，本方法的检测限、回收率、精密度均能满足检测要求。所建立的检测方法可用于酱卤食品及其调味包和汤料中罂粟碱、那可丁和蒂巴因的测定，也可用于火锅底料、酱包、调味粉、各种高汤料中罂粟碱、那可丁和蒂巴因的检测。

Description

一种罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法
技术领域
本发明涉及一种罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法。
背景技术
近年来，食品中查出罂粟壳成分的案件时有发生。罂粟壳为罂粟科植物采完鸦片后的干燥成熟果壳，含有20多种生物碱，其中以罂粟碱、吗啡、可待因、蒂巴因、那可丁等为主要成分。食物中添加罂粟壳，其成分对人们的身心健康会造成极大的危害，易使消费者成瘾，产生依赖性，造成毒物癖，对社会安全构成威胁，是国家明令禁止的违法行为。通过测定食物中罂粟壳生物碱成分残留的含量，从而判断是否在食品中违法添加，为执法提供有力证据。
食品中非法添加罂粟壳成分目前没有统一的法定检测方法，也还没有全国统一的行业标准或国家标准。现有公开的文献和地方标准的检测方法大都是以火锅食品为基质建立的，有些因干扰较多，只能作定性和半定量测定；有些因检出率低只能作筛选试验；有些因处理方法过于繁琐，不适于快速检测，均不能满足日常检测和职能部门监督管理的需要。如DB 31/2010—2012(上海市地方标准)公开了一种食品安全地方标准“火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定液相色谱‐串联质谱法”，样品用水或盐酸溶液分散均匀、乙腈提取后，经盐析分层，乙腈提取液用键合硅固相萃取吸附剂净化，离心，液相色谱－串联质谱仪检测，罂粟碱、那可丁和蒂巴因采用外标法定量，吗啡和可待因采用内标法定量。该标准在提取和测定之间增加了净化的步骤，是因为如果提取后不经净化直接过膜上机，检测图谱上会出现大量杂峰，基质干扰明显，但是增加的净化过程繁琐，不符合快速检测的原则，且基质干扰仍然存在，影响了检测效果。因此国内尚缺乏用于食品非法添加罂粟碱的标准检测方法，通过建立符合检测要求的检测方法，期望填补该方面的空缺。
发明内容
本发明要解决的技术问题，在于提供一种罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法。
本发明是这样实现的：
一种罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法，包括样品选择、前处理、测定，所述前处理包括以下步骤：称取制样好的样品2.00g，加入5mL纯水、15mL乙腈和1.5g无水乙酸钠，旋涡振荡10min，再加6g无水硫酸镁旋涡振荡10min，然后以4000转/分钟离心5min，取上清液于鸡心瓶中，45℃旋蒸至干，用2mL溶解液溶解，混匀后过0.22μm滤膜，待测。
其中乙腈可用分析纯(AR)，现有标准和公开检测方法均要求为色谱纯，净化过程复杂，试剂使用多，但是检测效果均没有本方法显著。
所述溶解液组成为：乙腈+0.1％甲酸水溶液(内含5mmol/L乙酸铵)＝10+90，体积比。
所述样品选自酱卤食品，及酱卤食品的汤料、固体类调味粉。
所述样品选择：针对固态基质样品，取可食用部分绞碎并搅拌混匀，针对半固态样品和液态样品搅拌混匀取样。
所述测定采用液相色谱‐串联质谱法。
其中液相色谱条件如下：
色谱柱：T3柱，100mm×2.1mm 1.8μm
进样量：5μL
柱温：40℃
流速：0.3mL/min
流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸(内含5mmol/L乙酸铵)溶液，按如下梯度洗脱程序：
本发明具有如下优点：本发明本着基质分散原理的QuEChERS(快速、简便、经济、有效、耐用和安全)原则，建立食品中罂粟壳成分多种生物碱含量同时检测的快速、准确、经济便捷的检测方法。本发明通过优化前处理过程，达到快速检测的要求，且提高了净化效果和检测效率，基质干扰对检测结果的影响大为减少。本方法的检测限、回收率、精密度均能满足检测要求。所建立的检测方法可用于酱卤食品及其调味包和汤料中罂粟碱、那可丁和蒂巴因的测定，也可用于火锅底料、酱包、调味粉、各种高汤料中罂粟碱、那可丁和蒂巴因的检测。
附图说明
下面参照附图结合实施例对本发明作进一步的说明。
图1为采用本发明方法进行罂粟碱检测得到的总色谱图。左图为定量离子对的色谱图，右图为定性离子对色谱图，纵坐标均为强度(intensity)，单位cps，横坐标均为时间(time)，单位min。
图2为采用本发明方法进行蒂巴因检测得到的总色谱图。左图为定量离子对的色谱图，右图为定性离子对色谱图，纵坐标均为强度(intensity)，单位cps，横坐标均为时间(time)，单位min。
图3为采用本发明方法进行那可丁检测得到的总色谱图。左图为定量离子对的色谱图，右图为定性离子对色谱图，纵坐标均为强度(intensity)，单位cps，横坐标均为时间(time)，单位min。
图4为采用原标准方法进行罂粟碱检测得到的总色谱图。左图为定量离子对的色谱图，右图为定性离子对色谱图，纵坐标均为强度(intensity)，单位cps，横坐标均为时间(time)，单位min。
图5为采用原标准方法进行蒂巴因检测得到的总色谱图。左图为定量离子对的色谱图，右图为定性离子对色谱图，纵坐标均为强度(intensity)，单位cps，横坐标均为时间(time)，单位min。
图6为采用原标准方法进行那可丁检测得到的总色谱图。左图为定量离子对的色谱图，右图为定性离子对色谱图，纵坐标均为强度(intensity)，单位cps，横坐标均为时间(time)，单位min。
具体实施方式
1、基质样品选择：固态食品可选择泡鸭爪和卤鸡爪分别代表酱汁食品和卤制食品；液态样品选择酱卤食品的汤料；半固态样品选择酱卤食品用调味粉包。
2、制样：将固态基质样品取可食用部分绞碎并搅拌混匀，装袋低温保存；半固态样品和液态样品搅拌混匀取样。
3、样品前处理：称取制样好的样品2.00g，加入5mL纯水、15mL乙腈和1.5g无水乙酸钠，旋涡混匀、并迅速振摇10min，再加6g无水硫酸镁旋涡混匀并迅速振摇10min，然后以4000转/分钟离心5min，取上清液于鸡心瓶中，45℃旋蒸至干，用2mL溶解液溶解，过0.22μm滤膜，上机待测。
所述溶解液组成为：乙腈+0.1％甲酸水溶液(内含5mmol/L乙酸铵)＝10+90，体积比。
4、测定：测定方法参考DB 31/2010—2012“火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定液相色谱‐串联质谱法”，以下简称为原标准，对罂粟碱、那可丁和蒂巴因进行检测。
具体如下：
4.1液相色谱条件
色谱柱：T3柱，100mm×2.1mm 1.8μm
进样量：5μL
柱温：40℃
流速：0.3mL/min
流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸(内含5mmol/L乙酸铵)溶液，按如下梯度洗脱程序：
4.2质谱条件
离子源：电喷雾ESI源，正离子模式
检测方式：多反应监测(MRM)
雾化气、气帘气、辅助加热气和碰撞气均为高纯氮气；定性离子对、定量离子对、去族电压、碰撞气体能量、碰撞池出口电压见表1：
表1：三种化合物的定性离子对、定量离子对、去族电压、碰撞气体能量、碰撞池出口电压
4.3定量测定
将样液采用液相色谱‐串联质谱法进行分析检测，在仪器最佳状态下，对标准工作液和样液进样分析检测，以罂粟碱、蒂巴因、那可丁的色谱峰面积为纵坐标，罂粟碱、蒂巴因、那可丁的浓度为横坐标绘制标准工作曲线，外标法定量。标准工作液设有包含零点在内的6个以上浓度梯度，且标准工作液和样液中罂粟碱、蒂巴因、那可丁的响应值均在仪器线性响应范围内，同时设置一空白对照。
4.4分析结果的表述
将液相色谱‐串联质谱法检测所获得的罂粟碱、蒂巴因、那可丁的浓度代入计算公式(1)进行计算，以获得罂粟碱、蒂巴因、那可丁的理论测定值，将该理论测定值扣除空白值即为罂粟碱、蒂巴因、那可丁的实际测定值。
计算公式:
X—试样中各待测物含量(μg/kg)；
c—从标准工作曲线得到的被测物的浓度(μg/L)；
v—样液提取体积(mL)；
m—样品溶液所代表最终试样的质量(g)。
5、检测结果
5.1校准曲线
罂粟碱、那可丁和蒂巴因的校准曲线如表2所示。
表2罂粟碱、那可丁和蒂巴因的校准曲线
5.2基质干扰
如图1‐6所示，利用本发明的方法进行罂粟碱、那可丁和蒂巴因检测，其色谱图峰形好，基本上消除了基质干扰，而采用原标准进行罂粟碱、那可丁和蒂巴因检测的色谱图，峰形较差，基质干扰明显。
5.3检测限
在酱卤食品基质的空白样中，在本方法1.0μg/kg检测限处添加标准物质，按照本方法进行前处理，上机检测分析后用S/N软件计算在标准物质出峰时间时空白样品的与标准品的信噪比值，其结果均大于10，且在保留时间±5％的范围内无干扰峰，说明此检测方法的最低检测限可以达到1.0μg/kg要求。定量、定性离子对在最低检测限标准品出峰处的信噪比(详见图1-图3)结果如表3所示。从表3可以看出，本发明的定量检测限为1.0μg/kg，而原标准的定量限为25μg/kg。
表3检测限及定量、定性离子对在最低检测限标准品出峰处的信噪比
5.4回收率
选择本方法检测低限，两倍方法检测低限和十倍方法检测低限三点进行测试,如表4所示，回收率在73.0％-94.6％间，满足检测需求。本方法与原标准(DB31/2010-2012)方法相比，在仪器条件相同的情况下，用本方法处理检测样品与用原标准方法处理检测样品，回收率普遍较高，如表5所示。
表4本方法处理检测样品的回收率
表5本方法与原标准(DB31/2010-2012)方法回收率对比
5.5精密度
选择方法检测低限进行测试，重复测定6次，按如下公式计算偏差值CV，结果如表6所示。
表6本方法处理检测样品的精密度
浓度(1.0μg/L) 蒂巴因DBY 罂粟碱YSJ 那可丁NKD
测试1 0.915 0.967 0.900
测试2 0.845 0.950 0.937
测试3 0.927 0.957 0.897
测试4 0.871 0.915 0.908
测试5 0.892 0.965 0.936
测试6 0.888 0.932 0.869
CV(％) 3.33 2.15 2.84
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是熟悉本技术领域的技术人员应当理解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉本领域的技术人员在依照本发明的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本发明的权利要求所保护的范围内。

Claims (6)

1.一种罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法，包括样品选择、前处理、测定，其特征在于：所述前处理包括以下步骤：称取制样好的样品2.00g，加入5mL纯水、15mL乙腈和1.5g无水乙酸钠，旋涡振荡10min，再加6g无水硫酸镁旋涡振荡10min，然后以4000转/分钟离心5min，取上清液于鸡心瓶中，45℃旋蒸至干，用2mL溶解液溶解，混匀后过0.22μm滤膜，上机待测。
2.根据权利要求1所述的罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法，其特征在于：所述乙腈的规格包括分析纯。
3.根据权利要求1所述的罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法，其特征在于：所述溶解液的组成为：乙腈+0.1％甲酸水溶液＝10+90，体积比，其中0.1％甲酸水溶液内含5mmol/L乙酸铵。
4.根据权利要求1所述的罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法，其特征在于：所述样品选自酱卤食品，及酱卤食品的汤料、固体类调味粉。
5.根据权利要求1所述的罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法，其特征在于：所述样品选择：针对固态基质样品，取可食用部分绞碎并搅拌混匀，针对半固态样品和液态样品搅拌混匀取样。
6.根据权利要求1所述的罂粟碱、那可丁和蒂巴因的快速检测方法，其特征在于：所述测定采用液相色谱‐串联质谱法。
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