CN101317832A - 白藜芦醇口服纳米给药系统 - Google Patents

Abstract

本发明通过纳米技术制备得到一种白藜芦醇口服纳米给药系统。该给药系统是由白藜芦醇和载体材料小麦醇溶蛋白制成，利用纳米粒高度分散的特性及载体材料的生物粘附特性，增加白藜芦醇与肠道吸收部位的接触面积与接触时间，促进其在小肠更好地吸收。同时，将白藜芦醇口服纳米给药系统分散在适宜的辅料骨架材料中，提高白藜芦醇的溶出速度和程度。

Description

白藜芦醇口服纳米给药系统

技术领域

本发明涉及一种药物剂型和制剂技术，具体涉及一种白藜芦醇口服纳米给药系统。

背景技术

白藜芦醇(Resveratrol，Res)是一种天然二苯乙烯类活性物质，普遍存在于何首乌、虎杖及金丝雀等常用中药中，具有抑制血小板聚集、抗菌、抗癌及保肝护肝等多种生物学作用。但其水中溶解度小，经小肠吸收率低，严重影响了其在医药领域的广泛应用，目前尚没有研制出理想的白藜芦醇的药物制剂。因此，寻找和研究毒副作用小的药物剂型来改善白藜芦醇的水溶性，并提高其在小肠的吸收具有非常重要的意义。

小麦醇溶蛋白是从作为人类食物的小麦麦粉尤其是中国的优质纯系小麦品种中，经提取、纯化后获得的天然植物两性蛋白质成分，来源丰富，容易分离提纯，并且有很好的生物相容性。研究表明，由于其内部的H键及S-S键而呈折叠状二级结构，醇溶蛋白所形成的肽泡状药物载体与肠上皮细胞，红细胞，肝细胞以及皮肤角质细胞具有一定亲和性，可以作为转染试剂(载体)，能够将药物运输到细胞内，可成为一种无毒无害的天然蛋白质分子微胶囊，作为药物的良好载体有着巨大的潜力。

纳米技术(nanotechnology)是当今利用纳米尺度物质进行交叉研究和工业化的一门综合性的技术体系。纳米技术成为药物新型传输载体始于70年代，由于纳米粒子的微小体积和特殊结构，在胃肠道能成批地被转运，因此成为改善难溶性药物吸收的一种有效途径。

纳米技术提高药物胃肠吸收的机理可能包括以下几个方面：1)纳米粒可通过小肠的peyer′s结而进入循环系统，粒径小的纳米载体还可穿过肠系膜的细胞间通路进入循环；2)由于纳米粒高度的分散性和巨大的表面积，能增加难溶性药物的溶解度和溶出速度，也能增加与胃肠道壁的接触，从而增加吸收的机会，提高难溶性药物的生物利用度；3)纳米粒较之溶液剂，更能被十二指肠的微毛所捕获，并滞留较长时间，进一步延长药物与细胞壁接触时间，提高药物的吸收速率和吸收率；4)纳米载体可保护某些不稳定药物，使之不被酶或酸碱催化降解。

利用小麦醇溶蛋白作为载体材料，应用纳米技术将白藜芦醇制备成新型口服给药系统，解决其吸收差的问题，目前没有文献报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种应用纳米技术制备的白藜芦醇口服纳米给药系统。

本发明通过利用纳米技术高度分散的特性及载体材料小麦醇溶蛋白生物粘附特性，增加白藜芦醇与肠道吸收部位的接触，改善白藜芦醇的口服吸收，更好地发挥药效。同时，将白藜芦醇纳米粒的胶体溶液经冷冻干燥后分散在适宜的辅料骨架中，口服给药时在肠道中释放出白藜芦醇，提高白藜芦醇的溶出速度和程度，促进其在小肠的吸收。

本发明所述的白藜芦醇口服纳米给药系统，是以活性成分白藜芦醇与载体材料小麦醇溶蛋白制成。

小麦醇溶蛋白来源于小麦面筋粉，所述纳米组合物中载体材料小麦醇溶蛋白的制备方法是一种快速简便的蛋白质提取纯化方法(I.Ezpeleta etal.Gliadin nanoparicles for the controlled release ofall-trans-retinoic acid.Int J Pharm 131(1996)191-200.)，用稀乙醇(40％～80％)对谷类作物进行提取，经过两次离心得到小麦醇溶蛋白粗提物，并采用水-酸水-水透析法纯化得到小麦醇溶蛋白。其分子量范围通过电泳测定，结果小麦醇溶蛋白是在200KD-30KD之间的一组蛋白质的组合物。

本发明所述的白藜芦醇口服纳米给药系统中，白藜芦醇与小麦醇溶蛋白的质量比为1∶5-100。

本发明所述的白藜芦醇口服纳米给药系统，是通过去溶剂法制备的，具体步骤如下：

A.将表面活性剂或稳定剂溶于水中，构成水相；

B.将小麦醇溶蛋白和白藜芦醇，溶于70％～80％乙醇中，构成有机相；

C.将有机相通过针头，注入水相中，搅拌；然后除去乙醇，浓缩，即得白藜芦醇纳米粒的胶体溶液。

上述制备方法中，所述的稳定剂或表面活性剂包括Pluronic F68、聚乙烯醇、磷脂类、吐温类(土温-80)、司盘类任意一种或几种。

在制备本发明所述的白藜芦醇口服纳米给药系统时，白藜芦醇、有机溶剂和水三者的比例为1∶0.5-10∶0.5-50(mg/ml/ml)。

本发明所述的白藜芦醇口服纳米给药系统的制备方法中，还包括，在白藜芦醇纳米粒的胶体溶液中加入增稠剂、凝胶剂或稳定剂，或加入药用辅料后冷冻干燥或喷雾干燥。

本发明所述的白藜芦醇口服纳米给药系统能够分散在水溶液、或凝胶溶液中；或分散在药用辅料的固体粉末中。

本发明的优点在于：所述的白藜芦醇口服纳米给药系统的制备过程中仅使用乙醇，制备方法简单，适于工业化生产，同时有效解决了有机溶剂残留的相关问题。并且结合了载体材料生物粘附性特点与纳米技术的特点，使难溶性的白藜芦醇在肠道的吸收明显增加。并且通过体外抗肿瘤试验，表明白藜芦醇口服纳米给药系统具有较好的抗肿瘤活性。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步说明本发明，但本发明并不限于下列实施例包含的内容。

实施例1

取Pluronic F68 15mg，加30ml水溶解作为水相；另取白藜芦醇10mg和小麦醇溶蛋白100mg，加入10ml 80％乙醇溶液中，搅拌使溶解，作为有机相。取有机相，用5号针迅速注入水相中，继续搅拌5min。移至60℃真空干燥箱，除去乙醇，浓缩至每1ml中含0.3mg的白藜芦醇，即得白藜芦醇口服纳米给药系统。

上述白藜芦醇口服纳米给药系统的粒径为50～200nm，白藜芦醇的包封率为74.6％。

实施例2

取吐温-80 30mg，加50ml水溶解作为水相；另取白藜芦醇10mg和小麦醇溶蛋白50mg，加入5ml 70％乙醇溶液中，搅拌使溶解，作为有机相。取有机相用5号针迅速注入水相中，继续搅拌5min。移至60℃真空干燥箱(真空度为0.08mpa)，除去乙醇，浓缩至每1mL中含0.3mg的白藜芦醇。加入蔗糖及甘露醇为支架剂，冷冻干燥即得白藜芦醇口服纳米给药系统。

上述白藜芦醇口服纳米给药系统的粒径为50～200nm，白藜芦醇的包封率为71.5％。

实施例3

取Pluronic F68 15mg、吐温-80 15mg，加100ml水溶解作为水相；白藜芦醇10mg和小麦醇溶蛋白120mg，加入50ml 70％乙醇溶液中，搅拌使溶解，作为有机相。取有机相用5号针迅速注入水相中，继续搅拌5min。移至60℃真空干燥箱(真空度为0.08mpa)，除去乙醇，浓缩至每1ml中含0.30mg的白藜芦醇。冷冻干燥即得白藜芦醇口服纳米给药系统。

上述白藜芦醇口服纳米给药系统的粒径为50～200nm，白藜芦醇的包封率为83.5％。

实施例4

取Pluronic F68 15mg加10ml水溶解作为水相；白藜芦醇10mg和小麦醇溶蛋白1000mg，加入10ml 70％乙醇溶液中，搅拌使溶解，作为有机相。取有机相用5号针迅速注入250rpm搅拌的水相中，继续搅拌5min。移至60℃旋转蒸发仪中(真空度为0.05mpa)，除去乙醇，浓缩至每1ml中含0.30mg的白藜芦醇。冷冻干燥即得白藜芦醇口服纳米给药系统。

上述白藜芦醇口服纳米给药系统的粒径为50～200nm，白藜芦醇的包封率为81.5％。

实施例5

白藜芦醇水溶液和白藜芦醇口服纳米给药系统的大鼠在体肠吸收试验

参比样品：白藜芦醇水溶液(含适量吐温)；

供试样品：白藜芦醇口服纳米给药系统(按照实施例1方法制备的样品)。

试验动物：Wister大鼠，雄性，体重(250±30g)，每组5只。参比样品及供试样品的浓度均为：20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL，采用大鼠在体小肠回流实验方法，进行整肠段回流实验，考察不同浓度药物的吸收行为。分别按下式计算各肠段药物的吸收率P(％)和吸收速率常数ka(h^-1)：吸收率P(％)＝(X₁-X₂)/X₁×100％，X₁：回流前肠循环液中含药量，X₂：回流结束时肠循环液中含药量。大鼠在体肠吸收2小时后供试样品和参比样品的吸收百分率结果见表1，试验结果表明：白藜芦醇口服纳米给药系统在小肠的吸收比白藜芦醇水溶液有明显的增加。

表1不同浓度的白藜芦醇水溶液及白藜芦醇口服纳米给药系统的在体肠吸收(n＝5)

实施例6白藜芦醇小麦醇溶蛋白纳米粒的体外抗肿瘤试验

供试样品：按照实施例2方法制备的白藜芦醇口服纳米给药系统

方法：选择肝癌HepG2作为受试细胞株，应用不同浓度的白藜芦醇口服纳米给药系统作用于细胞72小时后，用MTT法观察不同浓度的该药物对细胞的生长抑制情况，实验重复三批。试验结果见表2。

表2白藜芦醇口服纳米给药系统体外对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用

结论：白藜芦醇口服纳米给药系统体外对肝癌细胞HepG2有较好的抑制作用。

Claims (10)

1.一种白藜芦醇口服纳米给药系统，其特征在于以活性成分白藜芦醇与载体材料小麦醇溶蛋白组成。

2.根据权利要求1所述的白藜芦醇口服纳米给药系统，其特征在于所述的载体材料小麦醇溶蛋白为分子量范围在200KD-30KD的一组蛋白质，来源于小麦面筋粉。

3.根据权利要求1所述的白藜芦醇口服纳米给药系统，其特征在于，白藜芦醇和小麦醇溶蛋白的质量比为1∶5-100。

4.根据权利要求1所述的白藜芦醇口服纳米给药系统，其特征在于，这种给药系统是通过去溶剂法制备的。

5.根据权利要求1～4任一所述的白藜芦醇口服纳米给药系统的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、将表面活性剂或稳定剂溶于水中，构成水相；

B、将小麦醇溶蛋白和白藜芦醇，溶于70％～80％乙醇中，构成有机相；

C、将有机相通过针头，注入水相中，搅拌；然后除去乙醇，浓缩，即得白藜芦醇纳米粒的胶体溶液。

6.根据权利要求5所述的白藜芦醇口服纳米给药系统的制备方法，其特征在于所述的稳定剂或表面活性剂包括Pluronic F68、聚乙烯醇、磷脂类、吐温类、司盘类中的任意一种或几种。

7.根据权利要求5所述的白藜芦醇口服纳米给药系统的制备方法，其特征在于，制备这种给药系统时，白藜芦醇∶有机溶剂∶水的比例为1∶0.5-10∶1-50(mg/ml/ml)。

8.根据权利要求5所述的白藜芦醇口服纳米给药系统的制备方法，其特征在于，还包括，在白藜芦醇纳米粒的胶体溶液中加入增稠剂、凝胶剂或稳定剂，或加入药用辅料后冷冻干燥或喷雾干燥。

9.根据权利要求1所述的白藜芦醇口服纳米给药系统，其特征在于，所述的白藜芦醇口服纳米给药系统能够分散在水溶液、或凝胶溶液中；或分散在药用辅料的固体粉末中。

10.权利要求1～9任一权利要求所述的白藜芦醇口服纳米给药系统在制备治疗肝癌药物中的应用。