CN101267831B - 用于促进止血和其它生理活动的组合物和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明描述了包含纳米级结构化材料或其前体(例如自组装肽)的组合物。所述组合物可包含其它物质(例如血管收缩剂)。本发明还描述了使用该组合物促进止血、保护皮肤或伤口免受污染、通过移除以前应用的提供保护性涂层的组合物对部位进行去污染处理、以及抑制血液以外身体物质移动的方法。所述组合物也可用于分离组织、移除组织、保存组织(例如用于随后的移植或再附着)以及作为填充剂、稳定剂或水化剂。本发明还描述了包含此组合物的医疗器械(例如支架或导管)、绷带或其它创伤敷料、缝合线、以及包含此组合物的药盒。
Description
相关申请
本申请要求申请日为2005年4月25日的美国申请No.60/674,612和申请日为2006年1月13日的美国申请No.60/758,827的权益。对于可由本申请授予的任何美国专利来说,这些在先申请以其整体通过参考引入本申请中。
政府支持
美国政府已提供基金支持用于开发本发明(国立卫生研究院基金号EY00126)。因此美国政府可能拥有本发明一定的权益。
背景技术
尽管可得到血液制品,但失血仍是发病和死亡的重要原因。失血有很多种原因,其包括严重损伤和临床病况,比如动脉瘤破裂、食管或胃的溃疡、以及食管静脉曲张。主动脉失去完整性可迅速导致死亡,尤其是如果其发生在不能迅速取得医疗救助的情况下。
手术中出血常常是一个主要问题。失血可以导致患者的很多问题,尽管在不需要部位有血可能对正常组织不利或干扰外科医生观察手术野的能力。当清除血液以及控制出血时,必需推迟手术。即使在最小侵入性的手术(例如腹腔镜手术)期间,出血也可能带来问题。在某些情况下,如果出血不能被充分控制住,外科医生必须将这些优选的手术转换成传统的开放手术。
在涉及经皮将装置引入动脉、静脉或小血管中的诊断和介入手术中,出血也可引起问题。例如,比如冠状血管形成术、血管造影、旋切术(atherectomy)、以及动脉支架植入术等手术经常涉及通过放置在血管(例如股动脉)内的导管进入血管系统。一旦手术完成且导管或其它装置被移出,必须对从血管刺破处的出血进行控制。
在任何这些情况下控制出血的选择均是有限的。最古老的方法之一包括施加压力,或者给血管直接施加压力或者给身体外部施加压力再到 血管。必须维持压力直到出血被控制住。这一过程耗时且不便,而且患者处于血肿的风险下。其它的物理方法包括使用钳子、夹子、塞子、或海绵等。这些装置效果有限且应用麻烦,尤其是如果有很多小的出血血管时。使用加热进行凝血并烧灼出血的血管在手术中被广泛使用,但这是破坏性的过程并可随之导致组织的损伤。另外,这些方法需要设备和专家,因此不适于用在医疗环境以外的情况。除了加热和机械装置以外,还使用多种化合物用于促进止血,但均不理想。
因此,本发明的一个目的是提供更好地控制体液泄漏的方法和组合物,所述体液例如血液、组织液(interstitial fluid)和脑脊液。
本发明的另一个目的是提供以各种方式配制的这种组合物,包括作为绷带、喷雾、涂层或粉末。
本发明的再一个目的是提供一种能用于控制体液泄漏而又足够透明的组合物,使得外科医生能看见并通过此材料工作。
发明内容
配制包含肽的组合物以应用于伤口,所述肽具有交替的亲水性和疏水性单体以允许其在生理条件下进行自组装。在任何给定的制剂中,自组装肽的浓度可以变化且可在约0.1%(1mg/ml)到10%(100mg/ml)之间(包括端值)。例如,自组装肽(例如在液体制剂中)的浓度可为约0.1-3.0%(1-30mg/ml)(例如0.1-1.0%;1.0-2.0%;2.0-3.0%或1.0-3.0%)。在储备溶液或在固体(例如粉末化的)制剂中,自组装肽的浓度可更高。固体制剂可具有接近100%(例如自组装肽的浓度可为组合物的95、96、97、98、99%或更多(例如99.99%))的自组装肽浓度。无论是以液体还是固体形式,在使用前通过加入稀释剂(例如水(比如去离子水))、填充剂或油均可提供所需浓度的所述肽。
所述制剂包含药学上可接受的载体或作为医疗装置或涂层的一部分被提供。制剂还可包含其它的治疗剂、预防剂或诊断剂。它们可以是抗炎药、血管活性剂、抗感染药、麻醉剂、生长因子、和/或细胞。金属可作为螯合剂加入或用于降低粘附。在一个实施方案中,制剂以干粉或冻干粉提供,其可以直接以粉末或者以片、盘或干胶片(wafer)来施用,其在应用部位水化,或者混悬或溶解于液体中,最优选水中,并以喷雾剂、糊剂(paint)或注射剂或水凝胶来应用,其包括例如甲壳素、 胶原、藻酸盐或合成聚合物的材料。在另一个实施方案中,所述材料与油组合提供并形成层压物(laminate)。在另一个实施方案中,所述制剂以装置的涂层来提供,所述装置例如支架或导管,其可通过在含水溶液中溶解自组装肽并在所述装置上干燥而施用,或与聚合物载体混合并施用于该装置。在另一个实施方案中,所述制剂以绷带、泡沫或基质提供,其中所述肽可分散或吸收于其中。所述制剂也可为缝合线、带、或粘合剂的形式,或被施用于例如手术单等材料以防止污染。所述材料也可用于分离组织,例如在去除特定组织或肿瘤期间,在眼或肺中以防止出血(作为对出血热的反应),用于保存组织以用于随后的移植或再附着,以及作为填充剂、稳定剂或水化剂。应当指出,所述材料可用来辅助去除肿瘤,所述肿瘤包括由于例如其大小(其可随肝癌出现)、一致性或位置(例如神经瘤)而难于切除的肿瘤。所述方法可包括确认需要治疗的患者(例如人类患者),并在肿瘤附近提供包括自组装肽的组合物。组合物的用量以及其中肽的浓度将足以允许组合物在肿瘤周围形成凝胶或半固体涂层或保护套包绕肿瘤、其部分、或其细胞。外科医生然后切过包围肿瘤(或其识别部分)的凝胶并去除包覆肿瘤、其部分、或肿瘤细胞的凝胶。
在某些实施方案中,所述材料可用在血液稳定剂中,因为其不裂解血液且抑制血小板聚集。在另一个实施方案中,所述材料在不足以自组装的浓度下可用于保存血液。
本发明所述的一种或多种组合物可用于与使用说明书一起组装成药盒。例如,所述药盒可包含生物相容性的组合物,所述组合物包含自组装肽(或其浓缩溶液或粉末化制剂,与稀释剂一起)和血管收缩药、着色剂、和/或镇痛药或麻醉剂以及其组合说明(如果还未组合好)和使用说明(例如稀释和施用)。所述药盒还可包括另外的一种或多种本发明所描述的试剂。这些试剂可存在于基于肽的组合物中或分开包装,且其可包括生物细胞、抗微生物剂(例如抗生素)或其它治疗剂、胶原、抗感染药、生长因子、或营养素中的一种或多种类型。所述药盒也可包括注射器、针、移液器、纱布、海绵、棉花、拭子、绷带、止鼻血塞、消毒剂、手术线、剪刀、解剖刀、无菌流体、喷雾罐、无菌容器、或一次性手套中的一种或多种,所述喷雾罐包括其中液体溶液通过简易手泵喷雾的那些。
除非上下文说明,否则我们意在使术语“组合物”、“材料”和“制剂”可互换使用。
所述制剂可适当地施用于治疗一种或多种疾病或病症。例如,可施用所述制剂修复损伤,或在手术例如肺、眼或硬脑膜手术期间、或者在硬脑膜外或脊髓穿刺之后施用所述制剂,以阻止血液、组织液、或脑脊液的渗漏。所述制剂可施用于烧伤或溃疡,特别是当以泡沫、基质或绷带的形式与麻醉剂、抗炎剂、生长因子、和抗感染药一起配制,以阻止出血(任何此种抑制均可以以促进止血为特征)或组织液的损失。所述制剂可包括在(例如分散于其中或包被于其上)缝合线或粘合剂中,用于在缝合或粘合伤口时施用或在此之后释放,由此限制出血、组织液损失、或其它流体比如由实质组织(如肝、胰和胃肠道)产生的流体。所述制剂可在绷带、纱布、海绵、或其它材料中应用到任何出血部位,用于立即控制出血,或以后释放以控制出血,如果初始治疗如缝合或加压不够充分的话。含有所述制剂的干燥后织物、脱水泡沫(dehydratedfoams)或水凝胶、或绷带可以是用于处理损伤的急救药盒的一部分,例如在战争中、在事故现场、或可能需要快速处理且存放空间有限的临床环境。在以绷带或敷料为特征的实施方案中,所述绷带或敷料可包括形状和大小足以覆盖伤口或其基本部分(例如组织损伤最严重的部分或出血最多的区域)的第一层。所述第一层可具有顶表面、底表面、以及任选地全部或部分被粘合剂所覆盖的周边。所述绷带或敷料的第二层可以可分离地固定到所述第一层的底表面,任选地不包括周边或具有粘合剂的任何周边部分,并可以包括包含自组装肽的液体或非液体组合物(例如凝胶、糊剂(paste)、泡沫、乳膏(cream)、软膏(ointment)、粉末化组合物以及干胶片或盘)。所述组合物将在应用绷带或敷料时与伤口接触,并且在移除所述第一层或者第一和第二层时可以从绷带或敷料转移到伤口部位。在更简单的配置中,所述包括自组装分子的组合物可与第一层的底部(例如粘合剂周边的内部)相结合,而第二层可省略。在任一种情况下,第一和/或第二层可包括透明窗,透过其可看到下面的一些或全部伤口。可在包装之前或恰在使用之前将包含自组装剂的组合物加到绷带上。在另一个实施方案中,所述制剂可包括进一步的物理屏障,例如硅膜层,以防止在通过应用所述制剂使流体的主动流动被阻止后因干燥而使流体损失。所述制剂也可作为水凝胶、含油层压物或喷雾剂应用。
可以在具有筒(barrel)的注射器或移液器中提供所述液体制剂,所述筒含有包含自组装肽的组合物,所述注射器或移液器还具有将所述组合物从所述注射器或移液器的开放尖端驱出的工具(例如活塞或球)。所述注射器可由一个或多个隔室组成,以在应用时将所述自组装肽与一种或多种其它试剂混合。所述隔室还可以在一个隔室中含有赋形剂(例如形成水凝胶或粘合剂的材料),在另一个隔室中含有自组装肽(分别为第一隔室和第二隔室)。在另一个实施方案中,一个隔室(第一隔室)可包含冻干的自组装肽或自组装肽颗粒,另一个隔室(第二隔室)可包含溶解或水化所述肽的溶液。所述筒内的组合物还可包含治疗剂、预防剂或诊断剂或着色剂、或任何本文中所述的其它非纤维状试剂。注射器的隔室可通过Y型接头在共同末端连接以允许分派和混合每个隔室内的组合物、材料或制剂,并且用于推出所述组合物的活塞或其它装置可被适当配置以适应所述隔室。
本发明包括所述组合物在制备药物中的用途,所述组合物包括自组装肽和基于自组装肽的组合物,而无论其形式如何。
本发明包括所述组合物在制备药物中的用途,所述组合物包括自组装肽和基于自组装肽的组合物,而无论其形式如何,所述药物用于例如:促进止血;保护皮肤或伤口不受污染;除去某部位的污染(在除去以前应用的组合物时会发生);促进组织愈合(例如中枢神经系统以外的组织);递送细胞和/或药物;抑制除血液以外的身体物质(如本文中所述)移动;分离组织;去除组织;保存组织(用于例如随后的移植或再附着至患者);施加到血管支架;施加到绷带或其它敷料(dressing);掺入人工皮肤中;化妆性和重建性组织工程;以及制备填充剂、稳定剂或水化剂。
附图说明
图1显示代表性自组装肽RADA16-I的序列,以及举例说明重复结构和大致尺度的空间填充模型。
图2是在采用肽溶液(右柱;SAP(自组装肽))对比盐水对照(左柱)处理后实现完全止血所需时间的比较图。此研究如实施例1中描述进行。简而言之,将成年啮齿动物麻醉,取下部分头盖骨,将上矢状窦的静脉横切然后以肽溶液或盐水处理。
图3为盐水处理的对照(左柱)和肽处理的病例(右柱)的出血持续时间的图,如实施例2中所述,从开始施加肽溶液到股动脉横切后完成止血来进行测量。
详细说明
I.制剂
A.自组装肽
本文中所用的术语“肽”包括“多肽”、“寡肽”和“蛋白质”,指一串至少两个通过共价键(例如肽键)连接的α氨基酸残基。有用的肽长度上可变,只要其保留在一定程度上自组装的能力,以用于本发明所描述的一个或多个目的。具有少至两个氨基酸残基或多至约200个残基的肽可以是适合的,且那些已知自组装的肽典型地具有在此范围内的长度(例如8-200、8-36、8-24、8-16、12-20、6-64或16-20个氨基酸残基)。根据上下文,“肽”可指单一的肽或具有相同或不同序列的肽的集合,其中任何肽可仅含有天然的α-氨基酸残基、非天然的α-氨基酸残基或两者均有。在本领域中α-氨基酸类似物也是已知的并可作为替代使用。特别地,可使用D-型的α-氨基酸残基。此外,自组装肽中的一个或多个氨基酸残基可通过添加化学实体而被改变或衍生化,所述化学实体例如酰基、碳水化合物基团、碳水化合物链、磷酸基、法呢基、异法呢基、脂肪酸基、或用于缀合或官能化的连接基团。有用的肽也可以带分枝,在此情况下其包含至少两个氨基酸聚合物,其中每个聚合物由至少三个通过肽键连接的氨基酸残基组成。两个氨基酸聚合物自身是连接的,但不是通过肽键。
尽管肽的序列可以变动,有用的序列包括那些将两亲性性质赋予所述肽的序列(例如所述肽可包含大约相等数目的疏水性和亲水性氨基酸残基),且所述肽可为互补的和结构上相容的。互补的肽具有通过结构中相邻肽上的残基(例如亲水性残基)之间形成的离子键或氢键相互作用的能力。例如,给定肽的亲水性残基与相邻肽的亲水性残基可形成氢键或离子对。不成对残基可暴露于溶剂。肽-肽相互作用也可涉及范得华力或不构建共价键的其它力。当其能够维持足够的恒定肽内距离以允许组装和结构形成时,所述肽则是结构上相容的。尽管所述肽内距离可变动,但其可相当小(例如小于约4、3、2或1 )。然而,肽内距离(例 如代表性数目的距离的平均值)可大于此值。可基于分子建模或基于之前已经报道的简化方法(参见美国专利No.5,670,483)计算这些距离。
更特别地,所述肽可具有或可包含符合以下式I-IV中一个或多个的氨基酸残基序列:
((Xaaneu-Xaa+)x(Xaaneu-Xaa-)y)n (I)
((Xaaneu-Xaa-)x(Xaaneu-Xaa+)y)n (II)
((Xaa+-Xaaneu)x(Xaa-Xaaneu)y)n (III)
((Xaa--Xaaneu)x(Xaa+Xaaneu)y)n (IV)
其中,Xaaneu代表带中性电荷的氨基酸残基;Xaa+代表带正电荷的氨基酸残基;Xaa-代表带负电荷的氨基酸残基;x和y是独立地具有1、2或4的值的整数;n是具有1-10的值(例如1-8、1-5或1-3)的整数。
自组装肽可具有以下的氨基酸残基的序列:其中Xaaneu代表丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或甘氨酸;Xaa+代表精氨酸、赖氨酸或组氨酸;Xaa-代表天冬氨酸或谷氨酸。例如,自组装肽可具有或包含下述氨基酸序列:RADARADARADA(SEQ ID No:31);其它的实例包括
ARADARADARAD(SEQ ID NO:70);AKADAKADAKAD(SEQ ID NO:71);
AHADAHADAHAD(SEQ ID NO:72);ARAEARAEARAE(SEQ ID NO:73);
AKAEAKAEAKAE(SEQ ID NO:74);and AHAEAHAEAHAE(SEQ ID NO:75)。
本文中所述的结构可通过以下文献中所述的肽的自组装而形成:美国专利No.5,670,483、5,955,343、6,548,630以及6,800,481,以及Holmeset al,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,97:6728-6733(2000);Zhang et al,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:3334-3338(1993);Zhang et al,Biomaterials,16:1385-1393(1995);Caplan et al,Biomaterials,23:219-227(2002);Leon et al,J.Biomater.Sci.Polym.Ed.,9:297-312(1998);和Caplan etal,Biomacromolecules,1:627-631(2000)。代表性的自组装肽示于表1。
表1.代表性的自组装肽
N/A指不适用
*当在含NaCl的溶液中孵育时这些肽形成β-片层,然而没有观察到其形成宏观结构的自组装。
可生成其它有用的自组装肽,例如不同于那些通过单氨基酸残基或通过多氨基酸残基(例如通过包括或排除四体重复单元(repeatingquartet))举例说明的自组装肽。例如,可将一个或多个半胱氨酸残基包括在肽中,这样的残基可通过形成二硫键彼此键合。相对于以不包括半胱氨酸的相对应肽构成的结构而言,以此种方式键合的结构可具有增加的机械强度。
在自组装肽中的氨基酸残基可为天然的或非天然的氨基酸残基。天然的氨基酸残基可包括由标准遗传密码编码的氨基酸残基和非标准氨基酸(例如具有D-构型而非L-构型的氨基酸),以及可由标准氨基酸的修饰而形成的那些氨基酸(例如吡咯赖氨酸、硒代半胱氨酸)。非天然的氨基酸没有在自然界发现,但可被引入肽链中。这些包括D-别异亮氨酸(2R,3S)-2-氨基-3-甲基戊酸、L-环戊基甘氨酸(S)-2-氨基-2-环戊基乙酸。对于其它的实例,可参阅教科书或万维网(网址由加州理工学院维持,并显示已被成功地引入功能性蛋白质的非天然氨基酸的结构)。可使用在美国申请No.20040204561(例如参见 0042)中列出的非天然氨 基酸残基和氨基酸衍生物。可通过本领域公知的方法对自组装肽进行化学合成或从天然或重组产生的来源进行纯化。例如,所述肽可使用标准的f-moc化学合成并使用高压液相色谱法(HPLC)纯化。
在使用自组装肽的情况下,认为其侧链(或R基团)分配进入两面,即带有正电荷和/或负电荷的离子性侧链的极性面,以及带有被认为在生理pH下是中性或不带电荷的非极性面(例如丙氨酸残基的侧链或具有其它疏水性基团的残基的侧链)。在一个肽的极性面上带正电荷和带负电荷的氨基酸残基可与另一个肽的带相反电荷的残基形成互补离子对。因此,这些肽可称为离子性自互补肽。如果所述离子性残基在极性面上以一个带正电荷的和一个带负电荷的残基交替出现(-+-+-+-+),则所述肽可被描述为“模式I”;如果所述离子性残基在极性面上以两个带正电荷的和两个带负电荷的残基交替出现(--++--++),则所述肽可被描述为“模式II”;如果所述离子性残基在极性面上以三个带正电荷的和三个带负电荷的残基交替出现(+++---+++---),则所述肽可被描述为“模式III”;如果所述离子性残基在极性面上以四个带正电荷的和四个带负电荷的残基交替出现(++++----++++----),则所述肽可被描述为“模式IV”。具有序列EAKA的四个重复单元的肽可被称为EAKA16-I,可以同样的规定对具有其它序列的肽进行描述。
自互补肽比如EAKA16-I、RADA16-I、RAEA16-I和KADA16-I描述于表1。通过式I-IV中每一个来描述具有模式I的肽,即在β-片层的一侧(如极性面)具有交替的正电荷和负电荷R基团的肽,其中x和y为1。采用相同的公式描述模式II的肽,即具有带一种电荷(如正电荷)的两个残基然后是带另一种电荷(如负电荷)的两个残基的肽,其中x和y为2。也对模式III的肽即具有带一种电荷(如正电荷)的三个残基然后是带另一种电荷(如负电荷)的三个残基例如RARARADADADA(SEQ ID NO:76)进行了研究。
也已经对包含16个氨基酸的模式IV的离子性自互补肽(比如EAK16-IV、KAE16-IV、DAR16-IV和RAD16-IV)进行了研究。如果对在这些自组装肽中带电残基进行替换(例如带正电荷的赖氨酸被带正电荷的精氨酸替换,带负电荷的谷氨酸被带负电荷的天冬氨酸替换),则实质上对于自组装过程并没有已知的显著作用。然而,如果带正电荷的残基(赖氨酸和精氨酸)被带负电荷的残基(天冬氨酸和谷氨酸)所 替换,则肽不再能够经历自组装而形成宏观结构。然而,在盐的存在下其仍然能形成β-片层结构。其它的形成氢键的亲水性残基(例如天冬酰胺和谷氨酰胺)可被引入到肽中代替带电残基,或者另外引入而非代替。如果将肽中的丙氨酸残基改变为疏水性更强的残基如亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸,则所得的肽具有更大的自组装趋势并形成具有更强强度的肽基质。具有与本文中所述肽相似的氨基酸组成和长度的肽形成α-螺旋和无规卷曲而不是β-片层,且不形成宏观结构。因此,除自互补以外,其它因素可能对于形成宏观结构也是重要的,例如肽长度、分子间相互作用的程度、以及形成交错阵列的能力。
可由不同肽的混合物(例如,含有超过一种类型的符合给定的一个或两个或多个公式的肽的混合物)形成基于肽的结构。在一些实施方案中,混合物中每种类型的肽均能独立地自组装。在另一些实施方案中,每种类型的肽中的一种或多种不能独立地自组装,但与不同肽的组合可自组装(即混合物中的肽互相之间是互补的并且结构上相容)。因此,可使用同样序列或含有相同重复亚单元的自互补和自相容肽的均一混合物,或者互相之间互补且结构上彼此相容的不同肽的不均匀混合物。例如,可以预期KAKAKAKAKAKAKAKA(SEQ ID NO:65)和EAEAEAEAEAEAEAEA(SEQ ID NO:66)的混合物或KAKAKAKAKAKAKAKA(SEQ ID NO:65)和ADADADADADADADAD(SEQ ID NO:67)的混合物形成膜,但这些肽中任何一种由于缺乏互补性并非都能单独形成膜。
本文中所描述的组合物(不管精确形式(例如是以液体形式还是模制形式)、不管总体组成(例如是与另一种试剂联用、容纳于装置中、还是包装于药盒中)可包括RADA16-I(SEQ ID NO:1)或RADA12-I和EAKA16-I(SEQ ID NO:6)或EAK16-II(SEQ ID NO:18)的混合物。其它的混合物可包括RAD16-II(SEQ ID NO:4)或RAD12-II和EAKA16-I(SEQ ID NO:6)或EAK16-II(SEQ ID NO:I8)。其它的混合物可包括各种长度的同样肽的序列或模式I和模式II的肽的混合物。例如,可以使用RADA12-I和RADA12-II的混合物、RADA16-I和RADA16-II的混合物、RADA12-I和RADA16-I的混合物、RADA12-II和RADA16-II的混合物、EAKA12-I和EAKA12-II的混合物、EAKA16-I和EAKA16-II的混合物、EAKA12-I和EAKA16-II的混合物、或EAKA12-II和EAKA16-II的混合物。施用混合物而非单一肽可调节例如组装速度和组 装材料的刚性等性质。
总而言之,以本文中描述的方式使用的肽可具有或可包括交替的疏水性和亲水性的氨基酸残基,所述氨基酸残基是互补的且结构上相容。应当指出,所述肽可在长度上变化并可为四残基的倍数,但并非必须如此。例如,所述肽在长度上可为至少8个氨基酸(例如8或10个氨基酸),在长度上至少12个氨基酸(例如12或14个氨基酸),或在长度上至少16个氨基酸(例如16、18、20、22或24个氨基酸)。少于100个氨基酸残基长度的肽,更优选少于约50个氨基酸长度的肽可更容易组装。氨基酸残基可选自D-氨基酸或L-氨基酸,肽或肽的混合物可包括其组合。合适的天然的疏水性氨基酸残基包括Ala、Val、Ile、Met、Phe、Tyr、Trp、Ser、Thr和Gly。亲水性氨基酸残基可为碱性氨基酸(例如Lys、Arg、His、Orn);酸性氨基酸(例如GIu、Asp);或形成氢键的氨基酸(例如Asn、Gln)。如果L-氨基酸在结构中出现,则降解产生可被宿主组织再利用的氨基酸。L-构型氨基酸残基天然存在于体内的事实使得其与来自为数众多的其它生物相容性物质的此类化合物相区别,并可提供独特的优点。
给定肽的任一端或两端均可修饰。例如,可分别保护或不保护羧基和氨基端残基的羧基和/或氨基基团。末端处电荷也可以被修饰。例如,基团比如酰基(RCO-,其中R为有机基团(例如乙酰基(CH3CO-))可在肽的N端存在以中和“额外的”正电荷,否则其可存在(例如并非来自于N端氨基酸之侧链的电荷)。同样地,可使用如氨基(NH2)等基团来中和“额外的”负电荷,否则其可存在于C端(例如并非来自于C端氨基酸残基之侧链的电荷)。在使用胺的情况下,C端将形成酰胺(-CONH2)。末端电荷的中和可有利于自组装。本领域普通技术人员将能够选择其它合适的基团。
可形成具有不同硬度和弹性的自组装结构。所述结构通常具有低弹性模数(例如通过标准方法(比如标准的锥板流变仪)测量,在1-10kPa范围内的模数)。可优选较低的值,因为在细胞收缩时,它们允许作为对压力响应随着移动而发生结构变形。更具体地,可通过多种方法控制硬度,包括通过改变所述前体分子(例如自组装肽)的长度、序列、和/或浓度。也可使用增加硬度的其它方法。例如,可以向所述前体附着随后可交联或彼此键合的生物素分子或任何其它分子。所述分子(例如 生物素)可被包括于肽的N或C端或附着至末端之间的一个或多个残基上。在使用生物素的情况下,可通过随后加入亲合素而实现交联。含生物素的肽或含其它交联分子的肽也在本发明的范围内。例如,可引入具有芳香环的氨基酸残基并通过暴露于紫外光而交联。可通过对已知序列和浓度的肽应用预定时间长度的辐照而精确控制交联的程度。可使用标准方法通过光散射、凝胶过滤或扫描电子显微镜确定交联的程度。此外,可在以蛋白酶(例如基质金属蛋白酶)消化后通过HPLC或质谱分析其结构来检查交联。可在交联之前和之后测定材料强度。不管是通过化学剂还是光能实现交联,可在产生模具(mold)的过程中或当将含肽溶液施加到机体时将所述分子交联。
也可通过将蛋白酶或肽酶切割位点引入到前体中而调节结构的半衰期(例如体内半衰期),所述前体随后形成给定的结构。体内天然存在的或引入的(例如通过手术)蛋白酶或肽酶然后可通过裂解其相应底物而促进降解。可使用本文中所述任何修饰的组合。例如,可利用包括蛋白酶切割位点和半胱氨酸残基和/或交联剂的自组装肽、包含它们的药盒和装置、以及使用它们的方法。
图1显示代表性自组装肽RADA16-I的序列以及显示重复结构和近似大小的空间填充模型(space-filling model)。通过显微镜检查通过肽自组装形成的材料而观察相互交织的纳米纤维和单个的纳米纤维。在肽自组装形成的凝胶样结构看上去透明且有柔性。
由通过任何方法制备的任何自组装肽形成的肽结构可使用各种生物物理和光学技术表征,比如园二色谱(CD)、动态光散射、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、原子力(张力)显微术(ATM)、扫描电子显微术(SEM)、以及透射电子显微术(TEM)。例如,可使用生物物理方法以测定肽结构中β片层二级结构的程度。可使用扫描和/或透射电子显微图的定量图像分析测定纤维和孔径大小、纤维直径、长度、弹性、以及体积分数。也可使用几种标准机械测定技术来检查所述结构,以测量膨胀程度、pH和离子浓度对结构形成的效应、不同条件下的水化水平、张力强度、以及各种特性随结构形成和降解所需时间而改变的方式。这些方法允许本领域普通技术人员确定本发明中所述的各种替代物以及肽中的哪一种最适用于各种方法,并允许将各种方法最优化。
B.自组装肽材料的形成
在自组装以前,可将肽容纳于(例如溶解于)基本上不合有离子(例如单价离子)或含有足够低离子浓度的溶液中以防止明显的自组装(例如低于10、5、1、或0.1mM的离子浓度)。可在任何随后的时间通过向肽溶液添加离子性溶质或稀释剂或通过改变pH而启动或增强自组装。例如,在浓度为约5mM到5M之间的NaCl将在短时间内(例如在数分钟内)诱导宏观结构的组装。较低浓度的NaCl也可诱导组装,但以较低的速率进行。作为替代,也可通过将肽(以干燥、半固体凝胶、或以溶于基本不含离子的液体中的形式存在)引入到流体(例如生理液体比如血液或胃液)中或含有这种离子的区域(例如体腔比如鼻或口或因手术而暴露的腔)而启动或增强自组装。通常,当使肽与这样的溶液以任何方式接触时可预期发生自组装。
可使用各种各样的离子,包括阴离子和阳离子(双价、单价或三价)。例如,可通过暴露于单价阳离子比如Li+、Na+、K+以及Cs+而促进相转变,且诱导或增强自组装所需的这些离子的浓度通常为至少5mM(例如至少10、20或50mM)。更低的浓度也有助于组装,尽管以更低的速率进行。需要时,可以允许自组装但以更低速率进行的浓度与疏水性材料(例如药学可接受的油)一起递送自组装肽。当将自组装肽与疏水剂比如油或脂质混合时,材料的组装形成不同的结构。所述结构看起来像在油层上的冰,但在某些情况下当添加另一种材料时,该材料将组装进各种其它适于药物加载或其它相关治疗剂的三维结构中。分子中的亲水性部分将以使疏水-亲水相互作用最小化的方式组装,由此形成两种环境间的屏障。若干实验已表明自组装肽将在水上排列于所述油样冰的表面上,其中分子的疏水性部分朝向表面而分子的亲水性部分背向油,或将形成环状结构,其中疏水性材料包含于内部。这种表现类型可以实现治疗剂或其它感兴趣分子的包封以用于体内递送。
根据制剂配方和宏观结构的期望性质(例如支架(scaffold)的硬度或其形成速率),前体(例如自组装肽)的浓度可从约0.01%w/v(0.1mg/ml)到约99.99%w/v(999.9mg/ml)之间变动,其中包括端值。例如,在支架形成以前浓度可为约0.1%(1mg/ml)到10%(100mg/ml),包括端值(例如约0.1%-5%、0.5%-5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%或4.0%或更高)。在一些实施方案中,浓度也可小于0.1%。可将前体(例如自组装肽)配制为粉末并以粉末形式或重悬后施用。如果干燥,所述肽然后可在与体液(例如在损伤部位)接触之后自组装。
基于肽的结构可在规则或不规则形状的模具中形成,所述模具可包括体腔或身体的一部分(例如血管腔)或其可为惰性材料比如塑料或玻璃。可按照预定形状制备结构或支架或者可制备具有预定体积的结构或支架。为形成具有预定形状或体积(例如期望的几何形状或大小,包括薄片或膜)的结构,将肽水溶液置于预定形状的铸模中,并通过加入很多离子引发肽的自组装。作为替代,可在将溶液置入所述模中以前的短时间中将所述离子加入肽溶液中,前提是要在实质性组装发生以前小心将溶液置于模具中。在所述模具为组织(例如血管腔或其它隔室,在原位或不在原位)的情况下,加入离子溶液可能不是必须的。所得材料的特性、组装所需时间、以及所形成的宏观结构尺寸取决于所用肽溶液的浓度和量、用于诱导结构组装的离子的浓度、以及铸模设备的尺寸。所述支架可在室温下实现凝胶样或基本上固体的形式,并且可加热以辅助成型(例如,可将在成型过程中使用的溶液(例如含有前体的溶液)加热到可高达约体温的温度(约37℃))。一旦支架已达到所需的牢固程度,便可将其从所述模具中移出并用于本文所描述的目的。
当与身体接触时组装和/或经历相转变(例如从液态到半固体、凝胶等的转变)的材料可用于防止身体物质的移动。对于皮肤,在皮肤上缺乏水分或油时组合物可与离子性溶液或油一起施用以自组装。自组装或相转变由发现于对象体内的组分(例如离子)或生理pH而引发,并得到生理温度的辅助。当组合物暴露于对象身体或与对象身体接触时,可开始自组装或相转变,并且可通过对所述组合物已经(或将要)沉积的区域进行局部加热而促进所述自组装或相转变。所述对象(对于任何本文中所描述的适应症而言)可为人。基于迄今为止的研究,当与身体内部组织接触时,自组装快速发生,而不需要额外加热。在一个实施方案中,组装和/或相转变所需有效时间可为在与对象内部组织接触或与所述身体内所发现条件的相似环境接触之后60秒或更少(例如50、40、30、20或10秒或更少)。在某些情况下,比如在组合物中自组装剂浓度较低的情况下,或在身体物质发生实质性移动的情况下,自组装或相转变可需要更长时间来实现期望效果,例如,长达1分钟、5分钟、10分钟、30分钟、1小时或更长。例如,应用于脑、肝或肌肉中的血管横切部位的自组装肽提供在其应用后短达10秒钟的完全止血(参见实施例1-3)。当所述组合物用于保护对象不受污染时,可优选含离子的溶液,因为当非离子性组合物与未受损皮肤接触时,相转变不发生或不易发生。
所述组合物可形成基本上刚性(例如固体或近固体)的结构或采取一定形状和体积(例如符合液体组合物在体内或体外施用部位的形状和体积的结构)。组装或相转变后固化材料在一定程度上可变形或可压缩,但基本上将不会从一个区域流动到另一个区域,因为沿着液体到固体连续区间的不同点,组合物可以实现该作用,这至少部分上可归因于其经历相转变的能力。其结果是,所述组合物可用于防止在需要其的对象内身体物质的移动。也可通过在体外暴露于在一定生理值范围内的条件(例如适于细胞或组织培养的条件)下实现自组装。当液体制剂易于分散时,施用的组合物也可为凝胶形式,当与对象身体接触时,其可变硬。
在一个实施方案中,在任何给定制剂中自组装肽的浓度可变化且可为约0.1%(1mg/ml)到10%(100mg/ml),包含端值在内。例如,自组装肽(例如在液体制剂中)的浓度可为约0.1-3.0%(1-30mg/ml)(例如0.1-1.0%、1.0-2.0%、2.0-3.0%或1.0-3.0%)。在储备液和固体(例如粉末化的)制剂中自组装肽的浓度可更高。在固体制剂中,自组装肽的浓度可达100%(例如自组装肽的浓度可为组合物的95、96、97、98、99%或更多(例如99.99%))。无论在液体或固体形式中,可通过在使用前添加稀释剂(例如去离子水)、粉末、润湿剂或治疗剂、诊断剂或预防剂而使所述肽达到期望浓度。
不考虑自组装试剂的精确性质,当暴露于例如本文中所描述的那些条件时,所述试剂可形成膜状二维或三维结构,包括具有有序交织的纳米纤维的稳定宏观多孔基质(例如,直径约10-20nm的纤维,其线性尺寸的孔径约50-100nm)。三维宏观基质可具有足够大的尺寸,足以在低放大率(例如约10倍或更小)下可见,并且即使其为透明的,膜状结构也可肉眼看见。虽然是三维的,但所述结构可极其薄,包括有限层数的分子(例如2、3或更多层的分子)。通常,给定结构的每个维度都至少具有10μm的尺寸(例如两个维度具有至少100-1000μm的尺寸(例如1-10mm、10-100mm或更多))。在结构具有基本上规则形状(例如在所述结构为球体、圆柱体、立方体等的情况下),相关的维度可表示为长度、宽度、深度、幅度、高度、半径、直径或圆周,或者在所述结构不具有规则形状时在前述任何形状的近似形状的情况下也是如此。
当自组装肽在比如本文所述的条件下(例如在存在足够浓度(如生理浓度)的离子(例如单价离子)的情况下)当与水接触时,自组装肽 可形成水化材料。材料可具有高水含量(例如约95%或更高(如约97%、98%、99%或更高)),且所述组合物可水化但基本上不自组装。由于认识到测量可变动例如根据制造条件以及技术人员测量时所用条件而发生变动的事实,给定值可以为“近似的”。通常,当第一值落入第二值的10%以内时(不论大于还是小于),第一值近似地等于第二值,除非从上下文清楚地看出该值不是近似的或例如在这样的值将超出可能值的100%的情况下。
可通过操纵其中组分而按需要控制结构或或支架的性质和机械强度。例如,可通过提高其中自组装剂(例如肽)的浓度而提高组装凝胶的硬度。以下将进一步讨论所述肽的序列、特征和性质以及通过其自组装而形成的结构。
可以将组合物配制为浓缩储备物或干燥形式,且其可被稀释或溶解以形成组合物(例如生物相容性组合物),所述组合物在体外或体内对生物细胞基本上是无毒的。例如,所述组合物可包含其量对接受者身体不引起明显有害作用(例如,抑制性的严重的免疫或炎性反应、或不可接受的瘢痕组织形成)的材料。
当将含有非组装肽的溶液放置于生物组织上时,与所述组织足够接近的肽将组装,使所述溶液凝胶化。任何与组织保持距离的溶液仍是液体,因为自组装肽还没有被暴露在促使其组装的条件下。随着材料被干扰(例如通过手术操作),当液体材料与身体充分接触时其看起来凝胶化。有时,组合物可呈现出从液体到固体范围之间变化的特性,表现出凝胶样或药膏状或如浆状)。
B-附加的治疗剂、预防剂和诊断剂
制剂通常包含赋形剂或其它药学可接受的载体或作为医疗器械或涂层的一部分而提供。制剂也可包含其它的治疗剂、预防剂和诊断剂。在一个优选的实施方案中,这些试剂可为抗炎剂、血管活性剂、抗感染剂、麻醉剂、生长因子,和/或细胞。
这些试剂也可为肽或蛋白质、多糖或糖类、核酸或核苷酸、蛋白聚糖、脂质、碳水化合物、或小分子,通常为具有多个碳-碳键的可从自然分离或经过化学合成产生的有机化合物。小分子具有相对低的分子量(例如小于约1500g/mol)且不是肽或核酸。所述物质也可为生物分子, 其包括例如肽、蛋白聚糖、脂质、碳水化合物或核酸等的分子,其中任何分子可具有在活生物体中发现的这些分子的典型特征。像小分子一样,生物分子可以是天然存在的或可为人造的(即,其可为自然界尚未发现的分子)。例如,具有在自然界尚未发现的序列(例如,未存在于公众可得的数据库中的序列)或具有以非自然方法由人手修饰的已知序列(例如通过改变翻译后过程例如糖基化而修饰的序列)的蛋白质是人造生物分子。编码这种蛋白质的核酸分子(例如寡核苷酸,任选地包含于表达载体中)也是生物分子且可被引入本文所述的组合物中。例如,组合物可包含多种自组装肽和细胞,所述细胞表达或被设计以表达蛋白质生物分子(借助含有编码所述蛋白质生物分子的核酸序列)。
许多不同的治疗剂、预防剂或诊断剂可被引入所述制剂中或与所述制剂一起使用或与之联合(例如序贯或同时施用)。代表性的血管收缩剂(其中任何一种可与一种或多种自组装肽一起配制(例如在液体、粉末或凝胶形式的生物相容性组合物中))包括麻黄碱和苯肾上腺素;代表性的着色剂包括偶氮砷III、偶氮氯膦III、偶氮安替比林III、紫脲酸铵、铬黑T、铬蓝SE、oxyacetazo I、偶氮羧III、环庚三烯酚酮、甲基百里酚蓝、和媒介黑32;代表性的麻醉剂包括苯佐卡因、丁哌卡因、苦味酸氨苯丁酯、氯普鲁卡因、可卡因、箭毒、二丁卡因、达克罗宁、依替卡因、利多卡因、甲哌卡因、丙吗卡因、丙胺卡因、普鲁卡因、丙氧卡因、罗哌卡因、丁卡因,或其组合。在某些情况下局部应用麻醉剂可以是全部需要,例如对于烧伤或其它皮肤创伤而言,包括褥疮或者最低限度的侵入性手术。将局部麻醉剂与自组装肽组合,无论是通过存在于同一制剂中或者通过共施用,可有助于在体内容纳麻醉剂并减少进入循环的量。血管收缩剂比如苯肾上腺素可被包含以延长局部麻醉剂的作用(例如0.1-0.5%的苯肾上腺素)。不同于局部麻醉剂的镇痛剂,比如甾类、非甾体抗炎药如吲哚美辛,血小板活化因子(PAF)抑制剂比如来昔帕泛、CV 3988、和/或PAF受体抑制剂比如SRI 63-441。抗感染药或抗微生物剂(例如抗生素、抗细菌剂、抗病毒剂或抗真菌剂)可被包含用于全身或局部施用。实例包括β-内酰胺抗生素比如青霉素和头孢菌素以及其它的细胞壁合成抑制剂比如万古霉素、氯霉素、四环素、大环内酯类、克林霉素、链阳性霉素、氨基糖苷类、大观霉素、磺胺类药、甲氧苄胺嘧啶、喹诺酮类、两性霉素B、氟胞嘧啶、唑类比如酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、克霉唑和咪康唑、灰黄霉素、特比萘芬和制霉菌素。可局部施用抗微生物剂(例如治疗皮肤感染或烧伤、或帮助预防在导管 插入部位感染(例如静脉导管),例如卡那霉素、新霉素、杆菌肽、多粘菌素、局部磺胺药比如醋酸磺胺米隆或磺胺嘧啶银、或硫酸庆大霉素。抗微生物剂也可为广谱药。例如可使用第二、第三或第四代头孢菌素。这些药剂可具有抗宽范围的细菌包括革兰氏阳性和革兰氏阴性菌种的活性。这样的抗细菌剂在使用本发明的支架来抑制肠内容物移动(比如在有目的地或偶然地干扰肠壁的完整性的肠横切或其它手术期间)的情况下可能是尤其适合的。本领域普通技术人员通过考虑比如患者病史(例如对这样药剂的任何过敏反应史)、所述肽将应用的部位、可能存在的传染剂(infectious agent)的种类等因素将能够选择合适的抗微生物剂。
本文中描述的任何组合物,无论其仅包含自组装前体还是前体和一种或多种生物活性分子(例如血管收缩剂或麻醉剂)(以及无论是液体、半固体还是固体形式)均可包含着色剂。合适的着色剂包括商业可得的食品色素、天然和合成染料、以及荧光分子。优选地,所述着色剂是无毒的或以使任何不利作用(例如毒性作用)最小化的低浓度被包含。着色剂的使用使得可能改善被结构或支架覆盖区域的可视化并可易于清除,如果需要这样的清除。着色剂可在当其开始与被污染区域(例如可通过污染自身(例如通过伤口部位存在的血液或细菌)引发颜色变化颜色)接触时改变颜色。例如,细菌的代谢产物可引发颜色变化。也可检测由污染物引起的条件比如pH或氧化还原状态。示例性的指示剂包括偶氮砷III、偶氮氯膦III、偶氮安替比林III、紫脲酸铵、铬黑T、以及对于Mg2+的铬蓝SE、oxyacetazo I、偶氮羧III、环庚三烯酚酮、甲基百里酚蓝、和媒介黑32。AlamarBlue(一种氧化还原指示剂)和酚红也可用于所述组合物和方法中。
所述组合物可包含多种其它活性剂。例如,可包含多种生长因子以加速愈合的一个或多个方面(例如血管生成、细胞迁移、突起延伸和细胞增殖)。如同其他一样,通过包含于组合物中或通过共同施用,这些种类的组合物可“包括”在本发明方法内。实例包括血管内皮生长因子(VEGF)、一种转化生长因子(TGF)比如转化生长因子β、血小板源生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、神经生长因子(NGF)、胰岛素样生长因子(例如胰岛素样生长因子I)、神经胶质生长因子(GGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)等。应当理解,在很多情况下这些术语表示多种不同的分子种类。例如,几种转化生长因子β的种类是本领域内已知的。 本领域普通技术人员将会被指导通过考虑例如将要施用组合物的部位而选择合适的生长因子。例如,用于皮肤的组合物中可包含EGF;用于神经或神经系统的组合物中可包含NGF和/或GGF;等等。
生长因子或其它试剂可为趋化性物质,其具有在体内或细胞培养物中召集细胞到其所存在部位的能力。被召集的细胞可具有有助于形成新组织或修复存在的受损组织(例如在结构上和/或功能上对所述组织作贡献(例如通过提供生长因子或对期望免疫应答作贡献))的能力。某些趋化性物质也可起到增殖剂的作用(例如神经营养因子比如NGF或BDNF)。
也可将所述组合物与一些化合物相组合或代替它们来使用,所述化合物包括但不限于以下化合物:氰基丙烯酸酯(盐)、氧化纤维素、纤维蛋白密封剂、胶原凝胶、凝血酶粉末、微孔多糖粉末、凝血因子(例如因子V、因子VIII、纤维蛋白原或凝血酶原)和沸石粉末。
应当理解,通常以有效量施用治疗分子以达到临床上明显的效果,且有效剂量和浓度是本领域所公知的。这些剂量和浓度可指导选择本申请上下文中的剂量和浓度。可以以各种合适的浓度和合适的量(例如以微克或毫克级或更大)提供生物活性分子。例如,可查阅教科书比如Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics,10thEd.,以及Katzung的Basic and Clinical Pharmacology。
细胞
在将细胞递送给患者时(例如为促进组织愈合),可使用自体细胞。在一个实施方案中,所述细胞可使用来自所述患者的造血细胞,分散在材料中并被移植。在另一个实施方案中,所述细胞为脐血红细胞。
如上所述的成型支架、液体组合物、凝胶、固体(例如粉末)或半固体的实施方案可包括一种或多种额外的物质比如生物活性分子或细胞。在某些情况下,所述细胞可天然地或在基因工程改造后(例如以表达和/或分泌重组蛋白)分泌生物活性分子。本文中描述的结构(例如基于肽的结构)能够支持细胞附着、生存和生长;当细胞在基于肽的结构上培养时或当细胞在所述材料内(例如当包封时)生长时已观察到这些。此外,当神经元在所述结构上或在其内部生长时,所述结构能作为用于轴突生长和突触形成的基底使用。因此,当被如此包封时,生物活 性分子和细胞可被包封于肽结构内并保持基本功能和活力(参见例如U.S.S.N.09/778,200和10/196,942)。
C.赋形剂、载体和装置
所述制剂包含药学可接受的载体或制剂作为医疗装置或涂层的一部分而提供。所述制剂也可包含其它的治疗剂、预防剂或诊断剂。
在一个实施方案中,所述制剂以干粉末或冻干粉末提供,所述干粉末或冻干粉末可直接作为在应用部位水化的粉末而施用,或者混悬或溶解于液体(最优选含水液体)中,并作为喷剂、涂剂(paint)、或注射剂或水凝胶比如甲壳素、胶原、藻酸盐或合成聚合物来施用。可使用适于皮肤施用的任何制剂(例如可作为喷剂或粉末使用的液体)以形成下述的“纳米遮盖”(″nanodrape″)。在另一个实施方案中,所述制剂作为在装置(例如支架或导管)上的涂层而提供,其可溶于含水溶液中或在所述装置上干燥,或与聚合物载体混合并应用于所述装置。在另一个实施方案中,所述制剂提供于绷带、泡沫或基质中,肽可分散或吸收于其中。所述制剂也可为缝合线、带或粘合剂的形式。
通常,通过局部施用(例如配制为软膏、乳膏或溶液)或注射到希望阻断的神经纤维所在的区域递送局部麻醉剂。所述制剂可施用于烧伤或溃疡,特别是当以泡沫、基质或绷带的形式与麻醉剂、抗炎剂、生长因子和抗感染药一起配制以阻止出血或组织液损失时。
可将本文中所描述的一种或多种组合物与使用说明书一起装配成药盒。例如,所述药盒可包含生物相容性的组合物,所述生物相容性的组合物包含自组装肽(或其浓溶液或粉末化制剂连同稀释剂)和血管收缩剂、着色剂、或止痛剂或麻醉剂以及关于其组合(如果还未组合)和使用(例如稀释和施用)的说明书。所述药盒还可包含一种或多种额外的本文中所描述的试剂。这些试剂可存在于基于肽的组合物中或分开包装,其可包含一种或多种生物细胞、抗生素或其它的治疗剂、胶原、抗炎剂、生长因子或营养物。所述药盒还可包含以下的一种或多种:注射器(例如筒形注射器或球形注射器)、针、移液器、纱布、海绵、棉花等、药签、绷带、鼻血塞、消毒剂、外科缝线、剪刀、解剖刀、无菌流体、喷雾罐,包括其中液体溶液通过简单手泵而喷雾的装置、无菌容器或一次性手套。
可施用所述制剂用于治疗一种或多种病状。例如,可应用所述制剂修复损伤或处理肺或硬脑脊膜的手术,或随后的硬膜外穿刺或腰椎穿刺以阻止脑脊液的渗漏。所述制剂可在施用时分散于缝合线或粘合剂中或在伤口缝合或粘合后释放,因此限制出血、体液或其它比如由软组织(比如肝、胰和胃肠道)所产生流体的损失。如果初始治疗比如缝合或压力不充分,则可将所述制剂以绷带、纱布、海绵或其它材料的形式应用于任何出血部位以迅速控制出血,或随后释放以控制出血。含有所述制剂的干织物、脱水泡沫或水凝胶或绷带可成为处理损伤的急救药盒的一部分,例如,在战争中、在事故现场或在可能需要快速处理及储存空间有限的临床。
在一些实施方案中,含有自组装剂的组合物可与外科海绵联用。例如,在其使用以前或使用期间可将液体组合物吸收进商业可得的海绵中。研究表明可在没有传统海绵的情况下实现满意的止血,但可能存在这样的情况,即含有自组装剂的组合物可能是有益的(例如在患者经受大范围出血或在治疗目的是暂时稳定化的情况下)。施用的组合物可包括本文中描述的任何非纤维试剂。海绵可以是本领域中任何公知的,包括纺织和非纺织的海绵以及那些特别指定用于牙科和眼科手术的海绵。参见例如U.S.Patent Nos.4,098,728、4,211,227、4,636,208、5,180,375和6,711,879。
在一些以绷带或敷料为特色的实施方案中,所述绷带或敷料可包括其形状和尺寸足以覆盖伤口或其基本部分(例如组织受伤最严重的部分或出血最多的区域)的第一层。所述第一层可具有顶表面、底表面以及任选地全部或部分被粘合剂覆盖的周边。所述绷带或敷料的第二层可以可分离地附于所述第一层的底表面,所述第二层任选地不包含周边或具有粘合剂的任何周边部分,并可以包括含自组装肽的液体或非液体组合物(例如凝胶、糊剂、泡沫、乳膏、软膏或粉末化组合物)。当应用绷带或敷料时所述组合物将开始与伤口接触,并且当取下该第一层或该第一和第二层时所述组合物可从绷带或敷料转移到伤口部位。在更简单的配置中,所述包含自组装剂(例如肽)的组合物可与所述第一层的底部(例如粘合剂周边的内部)相结合,且所述第二层可省去。在两种中的任一种情况下,该第一和/或第二层可包括透明的窗口,通过该窗口可看到下面伤口的部分或全部。在组合物被包装或恰在使用以前,可将包含一种或多种自组装剂的组合物添加到绷带。在另一个实施方案中,组 合物可包含进一步的物理屏障(比如硅膜层),以在通过使用所述制剂阻止流体的主动流动后,防止由干燥造成的流体损失。
所述制剂也可作为即时释放或控制释放制剂而施用。延迟释放剂型在施用后非即刻的时间释放药物(或多种药物)。延长释放剂型与常规剂型(例如作为溶液或立即释放药物的常规固体剂型)相比,允许给药频率至少减少两倍。修饰释放剂型选择药物释放的时间、过程和/或部位的特征以实现治疗或方便的目标,所述目标不是常规剂型比如溶液、软膏、或即时溶解剂型所提供的。延迟释放和延长释放剂型以及其组合是修饰释放剂型的类型。
形成基质的材料是水化时形成强大、粘性凝胶的材料且提供对药物扩散和释放的控制。在亲水性基质系统中,形成基质的材料被均匀地掺入整个片剂中。当与水接触时,片的外层被部分水化而形成凝胶层。药物向所述凝胶层外扩散的速率和所述凝胶层溶蚀的速率决定整体片剂溶出和药物释放速率。形成基质的材料的实例包括水溶性的纤维素醚,比如甲基纤维素、乙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。
使用药学可接受的“载体”制备制剂,所述“载体”由被认为是安全和有效并可施用于个体而不引起不需要的生物学副作用或不想要的相互作用的材料组成。“载体”是在药物制剂中除活性成分外存在的所有成分。术语“载体”包括但不限于稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、填充剂、形成基质的组合物和包衣组合物。
“载体”也包括包衣组合物的所有组分,其可包括增塑剂、色素、着色剂、稳定剂和助流剂。可参考比如下述文献制备延迟释放剂型制剂,比如″Pharmaceutical dosage form tablets″,eds.Liberman et.al.(NewYork,Marcel Dekker,Inc.,1989),″Remington-The science andpractice of pharmacy″,20th ed.,Lippincott Williams & Wilkins,Baltimore,Md.,2000,以及″Pharmaceutical dosage forms and drugdelivery systems″,6th Edition,Ansel et.al.,(Media,Pa.:Williams andWilkins,1995),其提供关于制备片剂和胶囊以及片剂、胶囊和颗粒的延迟释放剂型的载体、材料、设备和方法的信息。
合适的包衣材料的实例包括但不限于:纤维素聚合物比如邻苯二甲酸醋酸纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素 邻苯二甲酸酯和醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯;聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、丙烯酸聚合物和共聚物、以及以商品名EudragitTM(Roth Pharma,Westerstadt,Germany)可商业购得的甲基丙烯酸树脂、玉米蛋白、虫胶和多糖。此外,包衣材料可包含常规载体比如增塑剂、色素、着色剂、助流剂、稳定剂、致孔剂和表面活性剂。在含药片剂、珠粒(bead)、颗粒或微粒中存在的任选的药学可接受的赋形剂包括但不限于稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、稳定剂和表面活性剂。
稀释剂(也称为“填充剂”)通常是增加固体剂型体积所必需的,以便以实际大小提供来压缩片剂或形成珠粒和颗粒。合适的稀释剂包括但不限于磷酸氢二钙二水合物、硫酸钙、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素、微晶纤维素、高岭土、氯化钠、干淀粉、水解淀粉、预糊化淀粉、二氧化硅、氧化钛、硅酸镁铝和糖粉。
粘合剂用于给固体剂型制剂赋予粘性性质,并因此确保片剂或珠粒或颗粒在剂型形成后保持完整。合适的粘合剂材料包括但不限于淀粉,预糊化淀粉,明胶,糖(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖、乳糖和山梨糖醇),聚乙二醇,蜡,天然和合成胶比如阿拉伯胶、黄耆胶,藻酸钠,纤维素包括羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、乙基纤维素和硅酸镁铝(veegum)和合成聚合物比如丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸氨烷基酯共聚物、聚丙烯酸/聚甲基丙烯酸和聚乙烯吡咯烷酮。这些适合作为粘合剂的材料中一些也可用作形成基质的材料,比如羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素和微晶纤维素。
润滑剂用于辅助生产片剂或干胶片(wafer)。合适的润滑剂的实例包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、山嵛酸甘油酯、聚乙二醇、滑石和矿物油。
崩解剂用于促使剂型在施用后崩解或“破裂”,通常包括但不限于淀粉、乙醇酸淀粉钠、羧甲基淀粉钠、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、预糊化淀粉、粘土、纤维素、海藻素(alginine)、树胶(gum)或交联聚合物比如交联PVP(来自GAF Chemical Corp公司的PolyplasdoneTM XL)。
稳定剂用于抑制或阻止药物分解反应,其包括例如氧化反应。
表面活性剂可为阴离子、阳离子、两性离子或非离子表面活性剂。合适的阴离子表面活性剂包括但不限于包含羧酸根、磺酸根和硫酸根离子的那些。阴离子表面活性剂的实例包括长链烷基磺酸和烷基芳基磺酸的钠盐、钾盐、铵盐比如十二烷基苯磺酸钠;二烷基磺基琥珀酸钠,比如十二烷基苯磺酸钠;二烷基磺基琥珀酸钠比如双(2-乙基硫氧基)-磺基琥珀酸钠;以及烷基硫酸盐比如月桂基硫酸钠。阳离子表面活性剂包括但不限于季铵化合物比如苯扎氯铵、氯化苄乙铵、十六烷基三甲基溴化铵、硬脂基二甲基苄基氯化铵、聚氧乙烯和椰子胺。非离子表面活性剂的实例包括单硬脂酸乙二醇酯、肉豆蔻酸丙二醇酯、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、聚甘油基-4-油酸酯、山梨聚糖酰化物(sorbitan acylate)、蔗糖酰化物、PEG-150月桂酸酯、PEG-400单月桂酸酯、聚氧乙烯单月桂酸酯、聚山梨醇酯、聚氧乙烯辛基苯基醚、PEG-1000鲸蜡基醚、聚氧乙烯十三烷基醚、聚丙二醇丁基醚、PoloxamerTM 401、硬脂酰单异丙醇胺和聚氧乙烯氢化牛脂酰胺。两性离子表面活性剂的实例包括N-十二烷基-β-丙氨酸钠、N-月桂基-β-亚氨基二丙酸钠、肉豆蔻酰两性乙酸钠、月桂基甜菜碱和月桂基磺基甜菜碱。
如果需要,所述片剂、微珠、颗粒或微粒也可包含少量无毒的辅助性物质比如润湿剂或乳化剂、染料、pH缓冲剂、以及防腐剂。
延长释放制剂通常被制备成扩散或渗透系统,例如在″Remington-The science and practice of pharmacy″(20th ed.,Lippincott Williams & Wilkins,Baltimore,MD,2000)中所描述的。扩散系统通常由储库和基质这两类装置组成,且这在本领域内是众所周知的且有记载。基质装置通常是通过将药物与缓慢释放聚合物载体压缩成片剂形式来制成。用于制备基质装置的三种主要材料是不溶性塑料、亲水性聚合物和脂肪化合物。塑性基质包括丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯和聚乙烯。亲水性聚合物包括纤维素聚合物比如甲基纤维素和乙基纤维素,羟基烷基纤维素比如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和CarbopolTM 934,聚氧乙烯及其混合物。脂肪化合物包括但不限于各种蜡比如巴西棕榈蜡和三硬脂酸甘油酯和蜡型物质包括氢化蓖麻油或氢化植物油、或其混合物。在某些实施方案中,所述塑性材料为药学可接受的丙烯酸聚合物,包括但不限于丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物,甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙基酯、甲基丙烯酸氰乙基酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚丙 烯酸、聚甲基丙烯酸、甲基丙烯酸烷基胺共聚物聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚甲基丙烯酸(酐)、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚(甲基丙烯酸酸酐)、以及甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物。在某些实施方案中,所述丙烯酸聚合物包括季胺基甲基丙烯酸共聚物中的一种或多种。季胺基甲基丙烯酸共聚物是本领域内众所周知的,并作为丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯与低含量季铵基团的完全聚合的共聚物描述于NF XVII中。
作为替代,延长释放制剂可使用渗透系统或通过将半渗透涂层应用于剂型而制备。在后一种情况下,可通过将低渗透性和高渗透性的包衣材料以合适比例联用而实现期望的药物释放特性。
可通过以下方法将即时释放部分添加到延长释放系统中:通过包衣或压制法将即时释放层应用到延长释放核心的顶部,或者在多单位系统中比如包含延长和即时释放珠粒的胶囊中。通过本领域的公知技术比如直接压制、湿法制粒或干法制粒制备含有亲水性聚合物的延长释放片剂。其制剂通常将聚合物、稀释剂、粘合剂和润滑剂以及活性药物成分纳入。常用的稀释剂包括惰性粉末化物质比如淀粉,粉末化纤维素,尤其是结晶和微晶纤维素,糖比如果糖、甘露醇和蔗糖、谷物粉和类似的可食用粉末。典型的稀释剂包括例如各种类型的淀粉、乳糖、甘露醇、高岭土、磷酸钙或硫酸钙,无机盐比如氯化钠和糖粉。也可使用粉末化纤维素衍生物。典型的片剂粘合剂包括比如淀粉、明胶和糖(比如乳糖、果糖和葡萄糖)的物质。也可使用天然和合成的树胶,包括阿拉伯胶、藻酸盐、甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。聚乙二醇、亲水性聚合物、乙基纤维素和蜡也可用作粘合剂。润滑剂是片剂制剂中防止片和冲头粘连到冲模所必需的。润滑剂选自滑的固体如滑石、硬脂酸镁和硬脂酸钙、硬脂酸和氢化植物油。含有蜡材料的延长释放片剂通常使用本领域已知的方法比如直接混合法、冻凝(congealing)法和水分散法制备。在冻凝法中,药物与蜡材料混合并喷雾-冻凝或冻凝并过筛和处理。
对于特定的包衣材料而言,优选的衣层重量可易于由本领域技术人员通过评价以不同量的各种包衣材料制备的片剂、珠粒和颗粒的单个释放特性而确定。可仅从临床研究确定的是产生所需释放特性的材料的组合、方法和应用形式。包衣组合物可包含常规添加剂比如增塑剂、色素、着色剂、稳定剂、助流剂等。增塑剂通常存在以减少衣层的脆性,通常以相对于聚合物干重的约10重量%到50重量%存在。典型的增塑剂的 实例包括聚乙二醇、丙二醇、三醋精、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、三乙基乙酰基柠檬酸酯、蓖麻油和乙酰化单甘油酯。优选用稳定剂稳定分散系中的颗粒。典型的稳定剂是非离子乳化剂比如山梨聚糖酯、聚山梨醇酯和聚乙烯吡咯烷酮。推荐用助流剂减少在膜形成和干燥期间的粘合作用,并通常代表包衣溶液中聚合物重量的约25重量%到100重量%。一种有效的助流剂是滑石。其它的助流剂比如硬脂酸镁和单硬脂酸甘油酯也可使用。色素比如二氧化钛也可使用。少量的消泡剂比如硅酮(例如二甲基硅油)也可加入到包衣组合物中。
聚合物基质
非生物可降解和生物可降解基质均可用于递送自组装肽,虽然生物可降解基质是优选的。这些基质可为天然或和合成的聚合物,虽然由于更好的降解特性和释放特性而优选合成聚合物。基于所需释放时间来选择聚合物。在一些情况下线性释放可能是最有用的,尽管在其它情况下脉冲释放或“大量释放”(“bulk release”)可提供更有效的结果。聚合物可为水凝胶(典型地吸收至多约90%重量的水)形式,且可任选地用多价离子或聚合物交联。
可用于递送的代表性合成聚合物包括聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯烃、聚亚烷基二醇、聚亚烷基氧化物、聚烯烃对苯二甲酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚乙烯卤化物、聚乙烯吡咯烷酮、聚交酯(polyglycolides)、聚硅氧烷、聚氨酯和其共聚物、烷基纤维素、羟基烷基纤维素、纤维素醚、纤维素酯、硝酸纤维素、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的聚合物、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维素、醋酸纤维素、丙酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、醋酸邻苯二甲酸纤维素、羧乙基纤维素、三乙酸纤维素、纤维素硫酸钠盐、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚甲基丙烯酸异丁酯、聚甲基丙烯酸己酯、聚甲基丙烯酸异癸酯、聚甲基丙烯酸月桂酯、聚甲基丙烯酸苯酯、聚丙烯酸甲基酯、聚丙烯酸异丙酯、聚丙烯酸异丁酯、聚丙烯酸十八烷基酯、聚乙烯、聚丙烯、聚乙二醇、聚氧化乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇止、聚乙烯醇、聚醋酸乙烯酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯和聚乙烯吡咯烷酮。
非生物可降解聚合物的实例包括乙烯-醋酸乙烯(ethylene vinyl acetate)、聚甲基丙烯酸、聚酰胺、其共聚物和混合物。生物可降解的聚合物的实例包括合成聚合物比如乳酸和乙醇酸的聚合物、聚酸酐、聚(邻)酯、聚氨酯、聚丁酸、聚戊酸和聚(丙交酯-共-己内酯),以及天然聚合物比如藻酸盐和其它多糖包括右旋糖和纤维素、胶原、其化学衍生物(化学基团的取代、加成,例如烷基、亚烃基、羟基化、氧化和由本领域技术人员做出的其它常规修饰)、白蛋白和其它亲水性蛋白质、玉米蛋白及其它醇溶谷蛋白和疏水性蛋白质、其共聚物和混合物。总之,这些材料通过表面或大量溶蚀在体内被酶水解或者与水接触而被降解。
特别令人感兴趣的生物粘性聚合物包括生物可侵蚀的水凝胶(这由H.S.Sawhney、C.P.Pathak和J.A.Hubell在Macromolecules,1993,26,581-587中描述),聚透明质酸、酪蛋白、明胶、谷胶(glutin)、聚酸酐、聚丙烯酸、藻酸盐、壳聚糖、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚甲基丙烯酸异丁酯、聚甲基丙烯酸己酯、聚甲基丙烯酸异癸酯、聚甲基丙烯酸月桂酯、聚甲基丙烯酸苯基酯、聚丙烯酸甲酯、聚丙烯酸异丙酯、聚丙烯酸异丁酯和聚丙烯酸十八烷基酯。
基质可以是以微粒的形式比如微球,其中肽分散在固体聚合物基质或微囊中,其中核心是与聚合物壳体不同的材料,且肽分散或悬于本质上可为液体或固体的核心中。除非在本文中特别定义,微粒、微球和微囊可互换使用。作为替代,可将聚合物铸成在纳米到四厘米范围内的薄片或膜,由研磨或其它标准技术产生的粉末,或甚至凝胶比如水凝胶。聚合物也可以为衣层、或者支架或导管、血管移植物、或其它假体装置的一部分的形式。
所述基质可通过溶剂蒸发、喷雾干燥、溶剂萃取和其它本领域技术人员所知的方法形成。生物可侵蚀微球可使用开发用于制备供药物递送的微球的任何方法而制备,例如描述于Mathiowitz和Langer,J.J.Controlled Release 5:3-22(1987);Mathiowitz等Reactive Polymers6:275-283(1987);和Mathiowitz等J.Appl.Polymer Sci.35:755-774(1988)。方法的选择取决于聚合物选择、大小、外部形态和所需的结晶度,例如描述于Mathiowitz等Scanning Microscopy 4:329-340(1990);Mathiowitz等J.Appl.Polymer Sci.45:125-134(1992);和Benita等J.Pharm.Sci.73:1721-1724(1984)。在溶剂蒸发方面,例如描述于Mathiowitz等(1990)、Benita等(1984)和Jaffe的美国专利No.4,272,398 中,将聚合物溶于挥发性有机溶剂中。将肽以可溶形式或分散为细微粒子的形式加入到聚合物溶液,并将混合物悬于含有表面活性剂比如聚乙烯醇的水相中。搅拌所得乳液直到蒸出大多数有机溶剂,余下固体微球。一般来说,可将聚合物溶于二氯甲烷中。通过此可用于相对稳定聚合物(比如聚酯和聚苯乙烯)的方法可得到具有不同大小(1-1000微米)和形态的微球。然而,不稳定聚合物比如聚酸酐可由于暴露于水而降解。对这些聚合物而言,可优选热熔包封和溶剂去除。
在热熔包封中,首先将所述聚合物熔融,然后将其与肽的固体颗粒混合。将所述混合物混悬于不相混溶的溶剂(比如硅油)中并持续搅拌,加热到所述聚合物熔点以上5℃。一旦乳液被稳定,将其冷却直到该聚合物颗粒固化。将所得微球以石油醚滗洗(decantation)以得到自由流动的粉末。可由此方法得到具有直径在1至1000微米之间的微球。以此技术制备的球的外表面通常光滑而致密。此方法可用于水不稳定的聚合物,但受限于使用分子量在1000至50000之间的聚合物。溶剂去除首先是针对使用聚酸酐而设计的。在此方法中,药物被分散或溶解于所选聚合物在挥发性有机溶剂如二氯甲烷的溶液中。然后通过搅拌,将所述混合物混悬于油比如硅油中以形成乳液。在24小时内,溶剂扩散到油相中且所述乳液小滴变硬成为固体聚合物微球。不像溶剂蒸发,此方法可被用于从具有高熔点和宽范围分子量的聚合物来制备微球。可使用此方法得到具有直径在1到300微米之间的微球。所述球的外部形态高度依赖于所使用聚合物的类型。在喷雾干燥中,将所述聚合物溶于二氯甲烷(0.04g/ml)中。将已知量的活性药物混悬(如果不溶)或共溶(如果可溶)于聚合物溶液中。然后将所述溶液或混悬液喷雾干燥。根据Mathiowitz的美国专利No.4,861,627可制备双壁微球。
由凝胶型聚合物比如藻酸盐或聚膦嗪(polyphosphazines)或其它二羧酸聚合物制成的水凝胶微球可通过以下方法制备:将所述聚合物溶于水溶液中,将待引入混合物中的材料混悬,并通过微滴形成设备(配有氮气喷嘴)挤出聚合物混合物。所得微球落入缓慢搅拌的离子硬化浴(hardening bath)中,例如如在Salib等Pharmazeutische Industrie40-11A,1230(1978)中所述。壳聚糖微球可通过将聚合物溶于酸性溶液中并与三聚磷酸盐交联来制备。例如,羧甲基纤维素(CMC)微球可通过将聚合物溶于酸性溶液中并用铅离子沉淀微球而制备。可制备藻酸盐/聚乙烯酰亚胺(PEI)以减少藻酸盐微球中羧基基团的量。
包括膜、包衣、小丸、厚片(slab)以及设备的其它递送系统可使用溶剂或熔融铸造和挤出、以及用于制备复合材料的标准方法而制造。聚合物可通过首先将单体和肽混合(如Sawhney等所描述)并用UV光聚合所述单体而制备。所述聚合可在体外和体内进行。
D.施用装置
液体制剂可在具有筒的注射器或移液器中提供,所述筒含有包含自组装肽的组合物和用于将所述组合物从注射器或移液器开口端(例如柱塞或球)推出的装置。所述注射器可由一个或多个隔室(例如由沿着所述注射器筒长轴对称或不对称分布的间隔器所产生)组成,以使得在应用时发生自组装肽与一种或多种其它试剂的混合。所述隔室也可在第一隔室中容纳赋形剂比如形成水凝胶或粘合剂的材料以及在第二隔室中容纳形成自组装肽的材料。在另一个实施方案中,第一隔室可容纳冻干的自组装肽或自组装肽的颗粒,且第二隔室可容纳溶解或水化所述肽或用于干法应用之粉末的溶液。在所述筒内的组合物还可包含如本文中所描述的任何非纤维性试剂(例如血管收缩剂、着色剂、麻醉剂或镇痛药、抗微生物剂(例如抗生素、抗病毒剂或抗真菌剂)或其它治疗剂、胶原、抗炎剂、生长因子或营养素中的一种或多种)。在另一个实施方案中,所述材料可形成凝胶并与工具(比如刮刀)一起使用。
II.施用方法
本文中描述的任何试剂,包括细胞、治疗、预防或诊断化合物比如抗生素和生长因子,可在体外或体内自组装以前引入到肽溶液中,且预成型结构可包含这些试剂中的一种或多种,任选地包装于无菌材料中和/或提供使用说明书。所述材料可预防性使用或在缺少额外药剂的情况下作为治疗剂使用。生物活性剂可大致均匀地分布于整个支架(scaffold)或集中于一个区域或另一个区域(例如在表面上或表面附近、在核心区、在支架或其区域中分级分布、或在其中分层(例如浓集于层中或均匀或不均匀地分配))。为实现所述物质在所述结构中大致均匀的分配,可将含有前体的溶液与所述物质(其也可在溶液中)在启动自组装前混合。
A.施用部位
可将所述材料应用于各种不同表面以预防或控制流体通过(例如促 进止血)或作为屏障起作用(例如减少污染)。自组装剂的量部分地由所述材料在控制流体流动中的作用、以及与自组装肽联用的任何其它材料或结构的性质所决定,所述自组装肽单独或与其它生物活性材料相组合使用。
在第一个实施方案中,所述材料用于预防或控制出血。所述材料可以作为液体、凝胶或衬底比如绷带或膜的一部分而应用。因此,可将制剂应用于血管,例如在血管成形术时用在血管腔内,或作为支架或导管的涂层,或者用于血管外部,典型地用在吻合术部位。所述材料可在手术之前、之中或之后应用于组织以阻止出血(特别是易出现问题的组织比如肝、肾或脾,或存在需要输注的高风险的其它手术)或封闭和保护组织(例如所选或采集用于移植的组织或适于再附着的组织(例如断指(趾)))。
所述材料还特别适合用于眼以防止出血或玻璃体液内的出血(即促进止血)。所述材料将有益处的其它手术包括角膜移植、结膜手术和青光眼手术。所述材料在手术期间是特别有利的,因为其为透明的,在外科医生进行手术时他或她能够透过该材料看清楚。
可将所述材料用于阻止或妨碍血液之外流体的流动。可将所述材料应用于烧伤以阻止或妨碍组织液的渗漏。可将所述材料作为硬脑膜或肺的密封剂而应用于硬脑膜或肺。
所述材料也可应用于普通口腔手术、牙周病和普通牙科病,均作为屏障以及用于控制或阻止出血。
由于作用机制独立于正常的凝血途径,故所述材料在凝血功能受损的个体中(血友病、von Willebrands、维生素K、蛋白S或蛋白C缺乏、爆发性肝炎、弥散性血管内凝血(“DIC”)、溶血性尿毒综合征(“HUS”))的用途也是重要的应用。
在另一个实施方案中,将所述材料应用于组织(比如肿瘤)的外部以防止手术时破裂或转移。所述材料的好处之一在于其可注射并在原位凝胶化,使得所述材料可在手术期间按需要应用和再应用。
在又一个实施方案中,所述材料特别适合于起到屏障作用以防止或减少对组织的污染或从一个组织到另一个组织的污染,例如在肠手术 期间。可在手术之前或期间应用所述材料来准备内部位点,尤其是比如窦腔等位点,以及用于手术比如经尿道手术和经阴道手术,以及作为预防和/或治疗剂。所述材料还尤其可用于心血管手术,其中屏障和止血的性质均具有价值,例如对于易导致不良后果(比如瓣环脓肿(包敷瓣膜,加抗生素)、心内膜炎(包敷瓣膜)、主动脉根夹层(提供立即止血))的心脏瓣膜患者而言。
所述材料与金属比如银的联用具有抗粘附性质并可抑制血管发生。因此,其可用于减少结疤和粘附,包括趋于在手术后发生的那些。所述材料可以在手术之后应用,或应用于比如烧伤等损伤,以减少结疤和/或流体损失,并限制感染或感染的风险。这在整形手术中具有进一步的应用,尤其是对于在封闭或皮肤移植前对已清洁和清除区域的保护,例如在腹壁成形术、面部拉皮(face lifts)、皮瓣供区、用于乳房再造的背阔肌中。
在又一个实施方案中,所述材料作为可被患者喝下的淤浆(slurry)施用以减少胃出血(例如来自溃疡的出血)或减弱酸度,或限制因食道静脉曲张的出血。作为替代,可作为灌肠剂提供所述材料以治疗痔疮或填充憩室。
在又一个实施方案中,所述材料可用于受精治疗、卵的保存、以及瘢痕性输卵管的修复。
所述材料还可作为器官保存材料作为血液稳定剂而使用。
由于组装是不可逆的,所容纳的物质可被释放出来。例如,分子或细胞可在体内从所述结构中释放出来(例如,当所述结构降解时,小分子可扩散,较大的分子和细胞可释放出来)。
在又一个实施方案中,所述材料,包括含有非纤维性和/或治疗性试剂或细胞的制剂,用作神经保护剂以使神经损伤后的破坏和疤痕形成最小化。基于肽的结构促进神经组织的修复和再生(例如当将自组装肽应用于脑中损伤时,如U.S.S.N.10/968,790中所描述)。支架内纤维的小尺寸和/或所述材料的开放“编织”结构允许细胞突起的延长并允许营养物和废物以向神经组织再生提供独特优势的方式进行充分扩散。
基于肽的结构,包括含有非纤维性和/或治疗性试剂或细胞的基于 肽的结构,当被应用于损伤区域时能够加强非神经组织(例如上皮组织比如皮肤)的修复(参见实施例5)。因此,可将所述组合物应用到中枢神经系统以外、脑以外、或者颅腔或脊髓或脊柱以外的组织。所述修复可使所述组织的解剖或机能恢复到与组织损伤或恶化(例如与疾病相关的恶化)前相类似的状况。所述治疗应优于在缺乏使用本组合物处理下所预期的效果。例如,所述修复可包括在组织因损伤、恶化或其它破坏所分离的两部分之间的物理连续性的恢复。优选地,所述已恢复的物理连接将包括组织的所述部分的再并置或再连接,而没有异源组织(比如瘢痕组织)的可见性分隔。
在促进创伤修复的过程中,所述组合物不仅可改善最终结果(例如减少瘢痕形成而导致更紧密地类似于原本组织的结果),还可减少治愈所需的时间。由于神经和非神经组织之间存在相当大的差异,这些结果不能在应用于受损中枢神经系统后所获得结果的基础上预测到。
B.有效剂量
一般来说,所需材料的数量将取决于多种因素而变化,所述因素比如损伤的大小或程度(其进而可用以下术语表示:切口长度、损伤血管的口径或数目、烧伤程度、溃疡的大小和深度、磨损或其它损伤)。所述量可变化,例如从若干微升到若干毫升或更多,例如数十或数百毫升。用于递送所述材料的装置将根据所述量而变化。例如,可方便地使用注射器递送较小的量,而管或可挤压瓶将更适于较大的量。有效量(关于支架、其前体、或存在于制剂中的其它生物活性分子)意指导致改善或期望的生物效应所必需的量。
本领域的普通技术人员应当理解,试剂的有效量可根据多种因素而变化,所述因素比如:期望的生物学终点、待递送的试剂、所述试剂递送部位的性质、以及所述试剂施用病况的性质。例如,用于加速止血的组合物的有效量可以是在出血开始时间到出血结束时间之间,相对于采用冷盐水治疗或不治疗的血液损失量相比,足以使血液损失减少至少25%的量。用于加速止血的组合物的有效量也可以是相对于采用冷盐水治疗或不治疗所需的时间,足以使停止可见出血所需时间减少至少25%的量。用于促进创伤愈合的组合物的有效量可以是相对于缺少此治疗所需的时间,足以使损伤大小减少预定百分比所需之时间减少至少25%的量。
所提供组合物的量可根据对象病况的严重程度而变化且应将不想要的移动抑制到足以使所述对象受益的程度。所述身体物质可以为血液、脑脊液、脓、浆液渗出液、胆汁、胰液、或胃肠道(例如胃或肠)或尿道中正常含有的物质。
C.施用方法
所述组合物可提供于对象身体表面和/或提供于由力(例如由意外伤害或手术)产生的腔内。以此方式,可在广泛情况下抑制身体物质的不利移动,这些情况包括外伤损伤、医学病况(例如与出血有关的慢性或长期医学病况)、或手术过程(例如矫形外科、牙外科、心脏外科、眼外科、或整形外科或重建外科)。例如,在身体物质的不利移动是外伤结果的情况下,所述对象可具有部分或完全切断的身体部分、破口、磨损、刺伤、或烧伤。在将所述组合物应用于身体表面的情况下,其不仅可抑制身体物质的不利移动,而且还有助于保护所述对象免受污染。例如,将自组装剂应用到皮肤将阻止皮肤或毛发上不利的外来物质移动入伤口。当所述身体物质的不利移动由慢性病况引起时,对象可经历反复性出血。例如,对象可经历与血管曲张有关的出血,包括毛细血管扩张、痔疮、肺出血(例如由肺癌、支气管炎、或细菌性或病毒性疾病(包括肺炎或流行性感冒)所引起))、或食管静脉曲张。可使用本文中所描述的组合物处理与反复出血相关的医学病况,所述组合物包括含有自组装肽和血管收缩剂(例如苯肾上腺素,其可占所述组合物的约0.25-0.5%)的组合物。在出血发生于口咽或肺的情况下,所述组合物可通过定量吸入器施用。如果所述患者的病况已恶化到需要进行人工通气的程度,可通过呼吸器或通过灌洗使用所述组合物。
在手术期间也可发生身体物质的不利移动,且手术过程可涉及对象的神经系统、眼、耳、鼻、口、咽、呼吸系统、心血管系统、消化系统、泌尿系统、生殖系统、肌肉骨骼系统、肝、或覆盖物(integument)内的切口。不管身体物质的移动是否是有意的,都可进行所述方法。可在所述不利移动发生之前或之后(例如在手术过程中在血管的有意横切之前或在血管的无意横切之后)施用本文中所描述的组合物。例如,可进行手术过程以旨在修复动脉瘤、阻止脑内出血、治疗食道血管曲张、治疗溃疡或抑制胃内容物或肠内容物的损失(例如来自肿胀或破裂的阑尾)。手术过程可涉及切除对象肠的一部分。可在含有自组装肽的组合 物帮助下进行的其它手术包括动脉造影、心脏导管插入术、支架插入、辅助自然分娩或剖宫产分娩、子宫切除术、器官移植、关节置换术、或椎间盘切除(或其它操作)。这些手术是代表性的。所述手术过程可在内镜或腹腔镜的协助下进行,且所述组合物可独立地递送或从位于这些装置内的腔室中递送,所述腔室并通过用于释放到对象组织的通道与远端相连。在患者具有溃疡的情况下,所述溃疡可为食道溃疡、胃溃疡、十二指肠溃疡、糖尿病性溃疡或褥疮性溃疡。更一般地,所述组合物可施用于皮肤的任何破裂区域,且本文中所描述的任何方法可包括确定需要治疗的患者的步骤。
自组装肽纳米纤维支架(SAPNS)可为手术野提供透明的环境,同时还产生光学清楚的液体,允许手术透过所得的液体和凝胶混合物进行操作。在手术期间手术野常常被血液和碎片弄模糊。另外,从手术野清除碎片通常需要以盐水冲洗。盐水仅是临时性的溶液且需要连续地供应以保持手术野清楚。这造成了几个问题:任何存在的污染将易于扩散;小的开口将需要在冲洗和手术之间更替;以及在肠手术期间使用盐水可导致引起术后并发症的大量感染。使用SAPNS用于生物学限制将减少内镜以及开放手术中的术后并发症。已经在脑、脊髓、胃肠道、肝、肌肉、动脉和静脉中证实了效果。
例如,当前采用的部分切除如下。外科医生进行肠的部分切除以除去癌前区域。制造切口并将肠轻轻提离腹腔并放置在紧邻该患者的桌上。将侵犯区域(offending area)切除,然后将所述肠的两端结扎在一起。在将所述肠放回体内之前,有一个与肠上端相连的结肠造口袋,并将手术区域消毒。将肠放回腹内并缝合。将引流管置于腹内以确保没有渗漏或出血。与之相反,使用自组装肽材料的部分切除按以下进行。医生打开腹腔并发现肠的侵犯部分。使用另外的液体将其分离,将所述另外的液体灌入腹腔内以将侵犯部分与腹腔的其余部分相分离。外科医生通过由液体形成的凝胶并切除所述肠。将两端结扎在一起并检查所述区域有无任何颜色变化(所述凝胶可具有指示剂模(die),如果存在胃液或细菌的任何渗漏,则指示剂模改变颜色(例如变为蓝色))。除去有色材料(例如通过抽吸)。在将腹腔缝合之前可再将少许材料喷到修复区域周围。总之,可使用自组装肽产生更清洁的局部环境以进行手术;分离结构及阻止污染物的迁移;使结构膨胀用于手术过程(例如肠);包围被去除并可能渗漏的结构(例如阑尾);修补身体上的洞;允许在脏 环境中更好的手术结果;推进手术范围以在手术前围绕含有任何渗漏的器官;在进行腹部手术时产生防止或阻止粘附的屏障;以及用于形成范围和范围插入点之间的衬垫。优点可包括以下的一个或多个:所述材料光学透明,在室温下具有长保质期,可通过其进行手术,缩短准备时间,消除计数海绵,分离手术野中的每个结构,缩短手术室的清理时间,缩短手术时间,减少或消除由其它冲洗剂引起的交叉污染。此外,所述材料是生物相容的,且分解产物可以是天然的且能被身体吸收。所述材料也易于处理,可在所需部位注射,减少葡萄球菌感染或其感染的风险,可能能够减少手术室一次性物品比如纸的成本,并可减少生物有害物袋的使用,因为所述材料可在手术后煮沸灭菌而产生蒸汽。因为所述材料是透明的,这使得外科医生手术操作更快,因为手术野没有血液。在复杂病例中,消除控制出血的伤口包扎可减少手术时间多达50%。通过使用所述材料可减少由二次感染导致的术后感染,因为所述材料可在手术期间和手术以后包覆伤口,从而减少来自异物的污染。在术后护理中,可使用所述材料通过减慢颗粒物质材料在腹腔和胸腔内的扩展而减少由于不想要的引流而带来的感染。
虽然可在任何时间从应用部位(例如出血血管)移走所述组合物,但医生可能希望使其保持在原位,甚至在促进止血的初始目标已经实现后也是如此(例如为促进伤口愈合)。
在所述组合物包括自组装肽的情况下,这些肽可包含天然的且可被身体吸收的氨基酸残基。如所指出,所述组合物不难于处理,且其可容易地按照需要来分配。可通过改变其中组分的浓度(例如通过改变给定组合物中自组装肽的浓度)而容易地改变其特性(例如硬度)。作为结果,组装结构不明显影响对下面组织的观察,且不必在手术过程进行之前和之后将其移走,可透过所述材料评估伤口。例如,医生可评估使用本文中所描述的组合物处理的烧伤或其它表面创伤区域。在手术室中,外科医生可对所述材料进行初步切开并可继续采用标准器械在内部区域进行手术,比如使用手术刀和手术钳,或更现代化的手段比如激光,也可将所述组合物应用于所述内部区域。由于可在切口部位周围应用所述组合物并形成涂层以保护不受感染物感染,故很少需要给患者刮皮肤、应用覆盖物和应用消毒剂。
假定组装支架具有结构完整性,如果需要,可将其从其所形成的 区域移去。因此,例如可通过抽吸或通过使用工具比如镊子将其提起,或使用拭子或纱布将其擦掉而移走组装支架。例如,可在实现止血后或在清创过程中将所述支架移去。基于迄今的研究,可移去所述支架或其大部分而不破坏下面的组织。在所述组装支架在体外形成的情况下,可将其从模中移出并随后使用(例如移植到组织或组织空隙中)。所述组合物应减少后来需要处理或清洗的材料(例如手术单、海绵或其它生物有害物)的量。通过限制在直接应用于患者后的感染,“纳米单”(“Nanodrapes”)可用以替代传统的纸质或布质手术单,例如通过喷雾或其它方法涂敷患者或手术切口周围区域。当前,在布置好手术台后通过刮、擦洗、消毒和覆盖使患者做好手术准备。然后将杀菌剂和带子应用于手术将要进行的区域。可将液体制剂(其可为温热的)喷雾到身体上,并在此自组装成薄的涂层(或“第二皮肤”),从而将自组装组合物代替手术单来应用。优选地,所述材料具有小于任何细菌(例如金黄色葡萄球菌)的孔径(或平均孔径)。所述孔径将阻止污染物(包括空气传播的污染物)到达患者皮肤或伤口。所述涂层或第二皮肤可为至少或约1毫米厚,且所述材料可含有抗微生物剂(例如温和的杀菌剂)。无论何时应用于皮肤,该材料还可包含用于皮肤的水化成分以使其不会干燥。
可通过向对象(例如人患者)在位于需要支架的部位(例如,以控制身体物质的移动或渗漏以保护伤口或促进组织修复)或该部位附近引入所述前体而提供支架(例如纳米大小的结构化材料)。在部位附近提供前体(例如自组装肽),此时它们被提供在足够接近目标区域的位置(例如出血血管、消化道的疾病段或烧伤皮肤区域)以便其以有效量到达目标区域。所述前体(其可为均一或不均一的(例如可应用单一种类的自组装肽或者两种或多种不同这类肽的混合物))可包含于组合物中且当与生理环境接触时自组装而形成所述支架(例如纳米尺度的结构化材料)。因此,所述前体可在原位组装(例如在对象身体内的施用部位或其附近)。
纳米尺度的结构化材料可包括或其组装物可涉及存在于原位的其它组分(例如离子)。因此,前体比如自组装肽可在基本上不含离子的溶液(例如基本上不含单价阳离子)中提供,且当其开始与体内的这类离子(例如在身体物质比如血液、胃肠道内容物等之中)接触时自组装而形成宏观结构。例如,可在胃或肠穿孔的部位或其附近或已制造或将 制造手术切口的部位应用含有前体的溶液。
所述支架还可以以凝胶的形式提供,因为在将组合物引入目标区域(例如对于手术过程而言制造切口的区域)之前可以组装前体(例如自组装肽)。组装的结构可采取任何方便的形状。
也可通过以干粉形式提供前体而提供所述支架。“干”粉具有相对低的液体含量(例如足够低以便其中的微粒易于分散)。当以干粉形式提供的自组装肽开始与含有单价阳离子的体液接触时,所述自组装肽将组装,如果需要,可加入含有这类离子的溶液以改变所述支架形成的速度或其硬度。自组装肽可作为乳液提供,或如上所述以类似于当前使用手术海绵的方式成型为预制的可插入体腔内或伤口部位的形状。如果需要,可将粘合剂加入到干粉中,然后干粉形成所需的形状。不管所述支架组装的精确方式(例如是通过使含有前体的液体制剂与身体接触还是通过使干粉与含有离子的溶液在体外接触)如何,所形成的支架可采取需要的形状。在所述大小和形状使支架填充血管腔的情况下,支架可用作血管塞(vascular plug)。
可在对象经历不利事件之前(例如在损伤发生以前或在出血开始以前)实施预防措施。因此,施用部位可以是潜在移动或潜在渗漏的部位,且可进行施用以防止本应发生的移动或渗漏或使之最小化。当用于本文的治疗过程或处理时,所述组合物可逆转、减缓或抑制病况进程(例如这样的状态、综合征、疾病、或征兆、症状、或表现)。一旦确认对象具有可进行处理的病况,即实施处理所述对象的方法,且本文中所描述的任何方法,无论最详细描述为预防剂还是治疗剂,均可包括确认应处理的对象(例如被认为需要接受规定处理或程序并随后实施的对象(例如正在出血或预定将经受手术的患者))的步骤。
由于可用本文所描述的组合物抑制对象中身体物质的移动,包括在表皮内或从表皮移动,故该组合物可用在实行手术的情形中,且可描述为实行手术或产生手术野的新方法。所述方法,无论是否在手术情形中采用,均可包括确认需要处理的对象的步骤以及在在不利移动已经发生或将要发生的部位或其附近提供纳米尺度结构化材料或其前体的步骤。所施用组合物的量和其中自组装肽的浓度可足够抑制身体物质的不利移动。例如,可确认将要经历手术过程的患者并将含有自组装肽和血管收缩剂、着色剂、或局部麻醉剂的生物相容性组合物提供到切口部位 或将实行或已实行其它侵入性方案的部位。受影响的身体物质可为流体比如血液或血液产物、浆液流出物(炎症相关的流出物,主要由血浆组成,其通常看上去是澄清的或琥珀色流体)、脓、胃液、尿、胆汁、脑脊液(CSF)、和胰液等。身体物质可为粘稠的、淤浆状或半固体,但通常表现出流动或移动的能力。此性质的物质包括胃肠道内容物。该组合物可在应用后(例如在实现止血后或肠手术完成后)移除或可留在原处。例如,可应用该组合物以加速止血或抑制手术期间肠内容物的移动,且当手术完成时部分或全部支架可留在原处。这提供了相对于应用海绵和其它材料的实质性优点,所述海绵和其它材料必须在闭合前被移除。可以各种方法(例如通过擦拭或通过抽吸)移除所述组合物。
还可应用该组合物遮蔽下面的区域(例如烧伤区域或其它损伤的皮肤或其它组织),并因此可有助于防止污染物(例如外来物质)与所述区域(即该组合物可被用作屏障或遮蔽物)接触。尽管其在原位,内科医生或其它保健提供者可透过所述材料检查伤口,外科医生可透过其进行手术。在所述过程期间已经落于所述材料上的污染物可通过移除所述材料而随后被移除。
可在明确处理之前(例如当受害者在等待运送到医院或在运输期间)施用所述组合物以稳定伤口。所述组合物可相似地用于在低于最佳无菌度下进行操作的情况下(例如在野战医院或在获得无菌手术室的方法有限的情况下的地区)。在例如这些情况下,所述组合物和方法具有明显减少污染可能性的潜力。
自组装肽材料还可与麻醉剂联合局部应用于待作手术的局部区域,且自组装肽材料可以较高浓度应用以减少手术过程中器官的移动。这可通过减少全身麻醉剂负荷而减少老年患者的认知障碍。可在进行手术的组织或皮肤上喷雾一薄层。对特定器官施用特异性麻醉剂可分开或一起应用。皮肤具有不同于肠的受体且每个器官都需要特异性麻醉剂。在手术期间肠需要停止运动而血液和血管收缩则需要保持不变。
出血的治疗和预防:具有患不期望出血(其可以是或不是过度的或立即危及生命的)的风险增加的任何个体,可采用本发明中描述的组合物治疗。这些个体包括那些具有血凝障碍比如血友病的个体、接受抗凝剂治疗的患者、患反复性鼻出血的患者、以及经历手术的个体,尤其是涉及接触动脉的大手术。不限于此,所述手术或过程可以是对神经系 统、眼、耳、鼻、口、咽、呼吸系统、心血管系统、消化系统、泌尿系统、肌肉骨骼系统、覆盖(皮肤)系统、或生殖系统的手术。如已经指出的,组合物还可应用于除中枢神经系统(即脑和脊髓)以外的组织。其中可应用该组合物的手术和过程的具体实例包括动脉造影术、心血管造影术、心导管插入术、产道撕裂修复、冠状动脉梗塞移除、支架插入、剖腹产、子宫切除术、骨折复位、冠状动脉旁路移植术、胆囊切除术、器官移植、全关节(例如膝、髋、踝、肩)置换、阑尾切除术、椎间盘切除或破坏、大肠部分切除、乳房切除术、或前列腺切除术。手术过程可涉及血管的有意或无意横切或引起血液之外身体物质的释放。
事故受害者、参与战斗的个体、以及分娩女性也处于经历显著失血的风险。所述组合物也可用于产道出血部位(例如在子宫、阴道或邻近组织内)以加速止血。例如,所述组合物可用于胎盘撕裂或用于填充子宫以控制出血。如同其它适应症一样,应用于生殖道的组合物可被移除或留在原位。自发性出血、动脉瘤破裂、食道静脉曲张、胃溃疡、肠上部溃疡(例如十二指肠溃疡)也是其中可发生大量出血的医学病况,也可对这些个体按本文中所描述方法进行治疗。
出血的精确来源可以变动且可来自动脉或静脉系统的任何血管(例如动脉、微动脉、毛细血管或毛细血管床、微静脉、或静脉)。血管的大小可在从大(例如组合物可抑制主动脉、髂动脉或股动脉、或门静脉的出血)到小(例如毛细血管)的范围内变动,且血管可位于身体的任何部位(例如在比如肝、胃、肠、皮肤、肌肉、骨、肺的实体器官内,或在生殖系统内)。
当凝血因子和/或血小板的血浆水平低时或在个体已接受抗凝剂(例如华法林或肝素)的情况下,通常所需的血凝时间可延长。当存在对血管完整性最低水平以上的损害时,出血常常保持显著长于平均凝血时间。基于这些研究,预期所述组合物将在小于平均血凝时间的时间内引起止血,且至少在某些情况下小得多。尽管所述组合物不限于在任何给定时间实现止血的那些组合物(以及比如保护区域不受污染或促进组织愈合的用途独立于此功能),所述组合物可在应用后在短至五秒的时间内对出血对象发挥益处。其它的组合物可在应用后约10、15或20秒内发挥作用。有效期间可以以不同于绝对时间的方式进行表征。例如,相对于应用冰盐水时所需的时间而言,组合物可将实现止血所需时间减 少25%~50%、50%~75%、或75%~100%。相对于应用冰盐水时所需时间而言,实现止血所需时间可减少约2、3、4或5倍。
可根据一些变量选择肽浓度,所述变量比如血管口径、其损伤程度、以及使血液退出的力(或损伤时将退出)。为促进大血管(例如主动脉、头臂动脉、颈动脉、锁骨下动脉、腹腔动脉、肠系膜上动脉、肾动脉、髂动脉、股动脉、或腘动脉)的止血,更高的肽浓度将是理想的。有用的浓度范围可在约0.1-10%之间(例如1-10%;0.5-5%;1-4%;0.1-2%;0.1-3%;0.1-4%;0.1-5%;和1-8%(例如约1、1.5、2、2.5、3、4、5、6或7%)。对于本文描述的其他适应症,还可以使用前述任何范围内的任何子范围或任何具体值。
如已经指出的,出血可为任何大量的不同原因引起并可为内部的或外部的。不管原因或原因的本质(例如是由疾病过程引起还是由有意或意外创伤引起)如何,均可应用所述组合物。所述组合物可用于在有限空间内(例如在中空器官内)或在身体表面或邻近身体表面实现止血。例如,所述组合物可用于部分或全部切断的身体部分比如肢或指(趾)。在那种情况下,该组合物可发挥多种功能;其不仅可促进止血,而且还可保护受伤组织免受污染并促进组织愈合。更具体地,该组合物可应用于伤口,留在原位一段时间以足够实现止血以及发生凝血,然后可被移除。污染性材料比如粘附于肽凝胶上的微粒和感染物将随之被移除。然后可应用无菌敷料。当然,该组合物可用于清洁伤口、预防污染、或促进组织愈合的目的,甚至在止血已实现后或在加速止血并非所需的情况下。
当用于治疗鼻出血时,将所述组合物插入到合适的鼻孔内并可留在原位直到出血已消退。该组合物可通过抽吸(例如使用滴眼器或注射器)而容易地移除或可通过其它物理方法而移除,包括给鼻子简单地吹气。如果需要,可通过将该组合物包括在鼻出血塞的一个或多个表面上的方式而施用该组合物。
也可将所述组合物留在伤口原位,且可将敷料应用到该组合物上。由于该组合物自身易于移除,其出现在所述敷料下面可有助于防止该敷料粘连于受损组织。如果需要,可使用具有透明部分的绷带以便可透过该绷带的透明部分和其下肽结构观察损伤部位。这将允许医生在不移除所述敷料的情况下监测愈合的进展。以下对改进的绷带作出进一步描述 且其在本发明的范围内。
很多医学过程涉及血管穿刺,其后可有明显的出血。自组装肽组合物可应用于穿刺的血管壁,例如在撤除用于穿刺所述血管的仪器期间。由自组装肽形成的血管塞提供了现有血管塞和装置的替代物,比如在美国专利Nos.5,192,302、5,222,974、5,645,565和6,663,655中所描述的那些。所述血管塞可在原位形成(例如在血管穿刺部位),或可预先形成并应用到所述部位。
更一般地,包含纳米结构化材料或其前体(例如自组装肽)的组合物可用于密封通过组织的任何通路。因此本方法包括密封通过组织的通路的方法,其是通过将含纳米尺度结构化材料(例如自组装两亲性肽)的组合物施加到所述通道的一端或两端或其内部。所述组织可为例如血管壁、器官壁、皮下组织、或脂肪组织。密封所述通路可导致止血。该通路也可为瘘(即两个器官或身体结构之间或者器官或结构与外部世界之间的不正常连通)。如果需要,外科医生可将所述组合物应用到管结构(比如肠或血管)的内部,切除并结扎在凝胶中的所述肠或血管,并从所述结构内部抽空凝胶以恢复结构的连续性并允许血液或其它身体物质再灌注到该区域。
对于手术应用而言,可将含有自组装肽的组合物填入伤口或手术区域的任何部分。此方法可代替伤口包扎使用,如同在手术期间进行常规性的伤口包扎。由于组合物含有生物相容和生物可降解的材料,其可留在原位,从而避免在手术结束时移除的需要以及避免随后为此目的而进行手术的需要。生物可降解材料可在细胞内或在对象体内物理性和/或化学性地分解(例如,通过生理条件下的水解或通过天然的生物学过程比如通过细胞内或身体内存在的酶的作用)以形成较小的可被代谢(以及任选地被再利用和/或排泄或其它处置)的化学物质。优选地,所述生物可降解化合物是生物相容性的。
胃肠道出血(其可由于溃疡或血管发育不良而发生)是相对常见且严重的病况,如果不加治疗其可致命。食管静脉曲张出血以及胃或十二指肠溃疡出血可尤其严重。已开发了许多内镜治疗方法以实现止血,比如注射硬化剂、附着机械止血装置、以及接触电烙技术(contactelectrocautery techniques)。可将组合物施用于溃疡处或食管、胃、小肠、或大肠的出血部位或其邻近部位。也可以这种方式治疗大肠远端部 分、直肠、或肛门的出血(例如痔疮)。
动脉瘤破裂可代表带来迅速致死后果的灾害性事件。破裂的主动脉瘤可迅速导致放血,即使迅速采取医疗措施。破裂的颅内动脉瘤常具有破坏性的后果。本发明的组合物和方法可以以与其用于治疗因其它原因而出血基本相似的方式用于治疗来自破裂动脉瘤的出血(例如,通过将自组装前体或预成型结构应用到出血部位)。鉴于动脉瘤破裂常导致严重的后果,经常尝试进行手术修补。可将所述组合物应用于尝试修复的任何情况下(例如,在开放手术或血管内修复(例如放置移植物和/或支架)期间)。更具体地,本发明方法包括通过将含有纳米尺度结构化材料或其前体的组合物(例如包含自组装肽的组合物)引入到所述动脉瘤中(例如到动脉瘤囊中)而治疗动脉瘤。一旦任何出血处在较好控制下,然后可施用任何合适的技术修复该动脉瘤。该动脉瘤囊中存在肽结构减少了在这些其它处理之前或期间渗漏或破裂的机会。所述支架可留在原位。
抑制脑脊液(CSF)的移动或渗漏:硬脑脊膜是覆盖脑和脊髓的硬的最外层的纤维膜,并位于颅骨内表面。CSF渗漏是一种在损伤、手术或其它硬脑膜穿刺过程(其包括在将麻醉剂施用到硬膜外隙过程中的非故意的穿刺)之后的严重并发症。此渗漏可导致严重的后遗症,比如严重的头痛、感染和脑膜炎。在应用于CSF的不利移动或渗漏部位或其邻近部位之后,所述组合物可抑制在需要其的对象中CSF的移动或渗漏。可将该组合物在进行硬脑膜手术之后应用到缝合处以帮助防止CSF从切开位置渗出。
所述组合物也可用于抑制耳鼓中流体的移动或渗漏。
抑制胃肠道内容物的渗漏:所述组合物可抑制胃肠道内容物的移动。例如,所述结构物可防止胃或肠穿孔后或手术期间的胃肠内容物渗漏(参见实施例4)。该结构物可用于隔离这些身体物质并防止其在腹腔内扩散,从而使污染和随后的化学性腹膜炎和/或感染的风险降至最小。胃内容物(其含有胃腺的消化性分泌物,所述消化分泌物主要由盐酸、粘蛋白和酶比如胃蛋白酶和脂酶组成)如果释放到腹腔内可引起损伤和/或感染。肠内容物释放到腹腔内代表了肠手术期间的频发事件且也可在肠穿孔或阑尾破裂的情况下发生。该组合物可用于抑制胃肠道内容物渗漏进入腹腔内。移动部位可以是由疾病过程或手术切入引起的胃或肠 损伤的部位。该组合物也可应用于消化系统的任何器官(例如胃、小肠或大肠)的外部或可被注射或引入其内部。该组合物可在肠节段的切除过程中施用。例如,可向从第一点延伸至第二点之间的肠节段中填入本发明的组合物并切除位于所述第一和第二点之间的肠部分。
在相关的方法中,可使用该组合物移除已释放到腹腔内的肠内容物。所述方法包括将液体组合物应用到所释放的肠内容物,允许该液体组合物经历相转变,然后移除凝胶样或半固体组合物。这些步骤可重复一次或多次直到外科医生对已从腹腔移除的肠内容物的量满意为止。
同样地,可抑制其它内部器官(例如胆汁系统或泌尿系统)内容物的移动。例如,可通过将所述组合物应用到所述部位并随后将其移除而抑制胆汁、胰液(即胰外分泌部的含有消化酶的分泌液)或尿的移动和/或清除对胆汁、胰液、或尿已释放进入区域的污染或使之洁净。因此,所述方法对于修复或其它治疗肠、胆和/或泌尿系统缺陷的手术具有广泛的应用。如本文中已指出,可将该组合物应用于皮肤或应用于皮肤切口或下面的创伤组织以减少被微生物(比如细菌)污染的可能性。通过在随后的时间(例如当手术过程完成时)移除所述组合物,可用所述方法清除已应用所述组合物的部位的污染。
伤口愈合:研究还表明所述组合物具有增强愈合的功能,尤其是上皮层或肌肉的愈合,因此可施用以治疗组织损伤部位。例如,可将含有自组装肽的组合物应用到组织损伤部位。该组合物显示出既增加组织修复的速率又抑制瘢痕组织的形成。该组合物可用于急性或慢性伤口护理。例如,可将其应用于任何方式(例如撕裂或烧伤)引起的创伤皮肤以及损伤比如糖尿病溃疡和褥疮性溃疡。
递送方法、装置和药盒:可使用各种装置将所述组合物引入到身体的目标区域。所述装置可为简单的,比如注射器,且这样的装置可与该组合物一起提供在药盒中。该组合物可通过注射(例如使用针和注射器)或采用导管、插管、或通过从任何合适尺寸的容器中分配(例如灌注)而局部递送至体内目标区域或目标区域附近。如果有必要,所述组合物可在成像导引(例如立体导引)的辅助下递送。作为替代,可用该组合物将材料润湿然后使用所述材料将组合物应用到组织区域。
对于储存和运输而言,自组装肽可溶于合适的溶剂(例如水性介 质比如无菌水,并在使用以前长时间储存)中。含有肽的溶液已储存长达两年而基本没有活性的损失。如果在长时间后发生部分自组装,可在施用前使用物理搅动(例如超声处理)以使所述材料恢复到更接近液体的状态。作为替代,所述材料可作为凝胶应用。如果需要,可在应用之前将少量离子(例如单价阳离子)加入到溶液中。这可加速凝胶形成的过程。作为替代,可在已施用所述溶液之后应用单价阳离子。
提供含有各种容量的注射器或具有可变形侧壁的容器(例如塑料容器或塑料壁的容器)的药盒,其中所述具有可变形侧壁的容器可被挤压以迫使液体组合物从开口出来。在一个实施方案中,所述注射器或容器含有多个隔室,一个含有单价离子,另一个含有自组装肽,在施用时使其通过共同的针混合。可使用内镜递送所述组合物用以治疗中空器官(例如食道、胃、肠等)或体腔(例如在最小侵入性手术期间)。最小侵入性手术指一种手术方法,采用此方法通过小切口或自然身体开口插入专门设计的仪器而进行手术,常常以内镜观察进行。实例包括腹腔镜手术、关节镜手术、和血管内手术。内镜通常是长的柔性管状装置。除了可以进行内部结构的观察以外,很多内镜具有额外的通过专门通道进行诊断(例如活组织检查)和治疗(例如递送治疗剂)的能力。结肠镜、乙状结肠镜、支气管镜、膀胱镜和腹腔镜是具有使其特别好地适于观察特定器官、结构、或腔的特征的内镜的变形。任何这些装置均可用于递送所述组合物。可以包装药盒,其包括内镜和容纳有包含自组装肽的溶液的容器。合适的内镜是本领域已知的且是广泛可获得的。内镜普遍性地用于将硬化剂递送至食道出血的部位。
药盒可包括自组装肽和以下的一种或多种:注射器、针、线、纱布、绷带、消毒剂、抗生素、局部麻醉剂、镇痛剂、手术线、剪刀、手术刀、无菌流体、以及无菌容器。所述肽可以是在溶液中或干的形式(例如作为干粉)。药盒的组分可分开包装并且是无菌的。药盒通常在容器中提供,例如适于商业销售的塑料、卡板或金属容器。所述药盒可设计成“急救药盒”的形式,在此情况下其典型地在外部具有比如红十字等符号。任何试剂盒均可包括使用说明书。
实施例
实施例1:自组装肽材料加速脑内止血
在移除横切组织上的部分颅骨后,对大鼠和仓鼠脑内上矢状窦的分支进行完全横切。通过腹腔注射氯胺酮(80mg/kg)和赛拉嗪(8mg/kg),对动物进行麻醉。所有的手术过程在手术显微镜下进行。将22只动物(包括10只成年仓鼠和12只初成年雌性Spraque-Dawley大鼠(200-250g))在窦分支横切处以冰盐水或20μl 1%肽溶液处理。通过在无菌水中溶解RADA 16-I肽(n-RADARADARADARADA-c;SEQ IDNO:1)制备所述材料,并用与2cc注射器相连的31号针将所述含肽的溶液应用到损伤组织。
将实验录制在有时间标志的录像带上并按照每次一帧重新播放以评价肽溶液形成有效地阻止出血的凝胶所需的时间。视觉评价止血,将“完全止血”定义为伤口部位的血液完全没有运动。在所有情况下,在应用所述肽溶液的10秒内达到完全出血。
拍摄了一系列成年大鼠的照片,在这些大鼠中其上面颅骨的一部分被移除且上矢状窦静脉之一被横切,然后以含肽的溶液处理。初始照片显示暴露的脑和上矢状窦的静脉;下一张照片显示静脉的切断;下一张照片显示破裂静脉的出血;最后的照片显示应用肽溶液后5秒的相同区域。实现了完全止血。
图2是在以上直接描述和在实施例1的情况下,以肽溶液(左栏)对比盐水对照(右栏)处理后,比较实现完全止血所需时间的图。测量通向成年大鼠脑中窦的静脉横切后从开始应用肽溶液到完全止血的持续时间。每个柱显示对于6只肽处理病例和6只对照研究例的以秒计的平均时间。平均8.3秒达到完全止血。在盐水对照中,从没有达到停止出血。*表示盐水对照试验在指定时间点终止以防止动物出血死亡。
在进行上矢状窦的完全横切之后获得了类似的结果。在后面的实验中使用了更高浓度的肽(例如,~3%-4%)以实现止血。在20秒后3个盐水对照例持续出血。在对照动物中,将冰盐水移除并应用肽溶液,几乎立即导致完全止血。
总共对22只大鼠和64只仓鼠进行了实验,其中在向颅内出血部位施用后,含肽溶液在10秒内有效地实现止血。
实施例2:在股动脉横切后自组装肽材料加速止血
将成年大鼠的坐骨神经和股动脉暴露,并将股动脉横切。通过使用与注射器本体相连的玻璃移液器将20μl 1%RADA 16-I肽的溶液应用到横切部位而处理12只大鼠,同时通过将冷盐水应用到横切部位而处理对照大鼠。在所有处理例中,止血均在小于10秒内达到。盐水对照例继续出血直到在110秒将实验终止。在这些对照动物中,随后将冷盐水替换为肽溶液导致几乎立即达到完全止血。
拍摄了一系列股动脉被横切的成年大鼠的照片。在拍摄的第一张照片中,坐骨神经和股动脉被暴露。下一张照片显示动脉的切开以及下一张照片显示出血。在大约5秒后,在血液和血浆存在下,在由组装肽形成澄清凝胶的区域观察到完全止血。如果需要,可将组装材料容易地抽吸离开所述区域。在试验的持续时间中保持完全止血(1小时)。
图3是举例说明盐水处理对照(左柱)和在以肽处理的情况下(右柱)的出血持续时间的图,在股动脉横切后测量从开始应用肽溶液到止血完成的时间。该柱总结了治疗组显示以秒计的6只仓鼠的平均时间,其中完全止血在不到10秒内达到。在盐水对照中,从来没有达到止血。*指示实验被终止以便动物不会出血而死亡。
肌肉创伤实验显示了在大鼠背部肌肉切开1-2cm的切口后的迅速止血。将大鼠背部脊斜肌暴露并在所述肌肉中切开一个深切口,其后将1%的肽溶液(RADA 16-I)应用到该切口中。在10秒内,所有的出血均已停止。对于单独应用冰盐水而言,对照动物在20秒后继续出血。
在后肢肌肉中(porteocaudalis和胫骨头侧肌(musculus tibialiscranialis))重复此过程且得到相似的结果。将1%至100%之间的肽(RADA 16-I)应用于肢伤,在所有例中均达到止血。然而当动脉或静脉被横切时,需要2%或更高的材料以达到止血。对于单独应用冰盐水而言,对照动物在20秒后继续出血。
实施例3:自组装肽材料加速肝止血
为进一步证实含有肽的结构终止具有相对低压的血管出血的能力,将成年大鼠的腹腔打开,肝暴露出来,左侧叶(lobus sinisterlateralis)接受吻到尾部切口,完全切除一部分肝。随之发生大出血。使用27号针和4cc注射器,将1%肽溶液(RADA 16-I)应用到所述切口及其邻近。所有的出血均在10秒内停止。拍摄一系列照片。第一张显 示肝的暴露;在第二张中,肝被分离,且大出血很明显;在第三张中,使肝的两部分回到一起,出血继续。在以1%肽溶液(表面应用和在切口应用)处理所述部位后,所有的出血均在10秒内停止。可观察到在左侧叶的两部分之间的清楚区域。将此过程重复数次,结果相同。
类似的实验证实了肽结构终止在具有高压的肝中血管出血的能力。一系列照片证明了该实验。第一张显示开口的腹腔和暴露的肝;在第二张中,左侧叶接受横切,将肝的一部分和门静脉的主支完全切断;第三张显示损伤部位的大出血。以4%的肽溶液表面应用及应用于切口以处理切口。所有的出血均在10秒内停止。将左侧叶的下面部分向下拉以显示肽结构在切口处。甚至在承受此物理性拉力时该部位也未出血。十分钟之后,仍没有出血。因此,应用4%的肽溶液导致在小于10秒内在高压出血环境中的完全止血。
在同样类型的实验中检验了以2%或3%肽溶液的处理并且也达到了完全止血。以1%的溶液处理导致出血的部分停止。此外,在处理后30秒将多余的肽结构从伤口处擦掉,止血仍维持。重复此过程数次得到相同的结果。
在另一些实验中,将左侧叶的右下象限的1/4瓣移除,以向损伤部位局部施用2%肽(RADA 16-I)来处理边缘。出血在小于10秒内停止。1分钟后将所述肽移除,在肝边缘达到完全止血。
实施例4:自组装肽材料
将成年大鼠的肠在十二指肠处用小切口穿孔,导致胃液渗漏进腹腔。当以2%的肽(RADA 16-I)溶液处理此部位时,所有的来自肠的胃液渗漏均停止。再次将一定体积的2%肽溶液注射进损伤处的十二指肠内。在手术持续1小时的时间中,这防止所有从肠的渗漏。在对照的十二指肠的切口中,当未加处理时,肠壁翻转且胃液持续从所述损伤部位渗漏。当在损伤后15分钟以肽溶液处理该部位时,所述肽处理也使所有的从此损伤部位的渗漏停止。此外,该处理停止了所述肠壁翻转的进程。
实施例5:自组装肽材料加速皮肤伤口的愈合
为证实自组装肽增强伤口愈合的能力,将动物进行皮肤和皮下组织的钻孔活组织检查。将进行活组织检查的区域以单独施用自组装肽 (RADA 16-I)溶液进行处理或者不加处理。伤口不绑绷带。一系列4mm钻孔活组织检查愈合试验的照片举例说明了结果,其中将损伤组织以自组装肽处理并与未进行处理的匹配例比较。在第0天、1天、4和7天对伤口拍摄照片。处理的伤口愈合得快得多,证据是在所有三个穿孔中在早至第1天伤口部位就收缩。在某些情况下,用肽处理看起来加速愈合多达5天。在所有情况下,在处理例中伤口部位的收缩发生得更快。
实施例6:含利多卡因的组合物
将RADA 16(模式I)与利多卡因(5%)混合,在应用针刺之前将混合物应用于成年大鼠的皮肤。与单独使用利多卡因的反应相比,当与自组装肽混合时,对针刺反应保持沉默的时间长了四倍。此外,进行肠手术时,我们给两只大鼠的肠应用了自组装肽和利多卡因的溶液。所述溶液减少了在手术持续时间内的蠕动,同时没有对动物的明显副作用。
前述描述应仅理解为是代表性的,而并非意在限制。对于本领域技术人员而言,制造和使用本发明的组合物和装置以及实践本发明的方法的替代系统和技术将是显而易见的,并旨在包括于所附权利要求中。
Claims (38)
1.包含有效量的自组装肽的制剂在制备用于在需要其的手术切口部位或伤口部位限制体液、物质或污染物的移动的屏障中的用途,其中所述自组装肽包含交替的疏水性和亲水性的氨基酸残基并且具有8-200个氨基酸残基的长度,并且所述屏障包含多个相互交织的纳米纤维,
其中所述自组装肽包含符合式I-IV中一种或多种的氨基酸残基的序列:
((Xaaneu-Xaa+)x(Xaaneu-Xaa-)y)n (I)
((Xaaneu-Xaa-)x(Xaaneu-Xaa+)y)n (II)
((Xaa+-Xaaneu)x(Xaa-Xaaneu)y)n (III)
((Xaa--Xaaneu)x(Xaa+Xaaneu)y)n (IV)
其中:Xaaneu代表带有中性电荷的氨基酸残基;Xaa+代表带有正电荷的氨基酸残基;Xaa-代表带有负电荷的氨基酸残基;x和y独立地代表具有值1、2或4的整数;n为具有值1-5的整数。
2.权利要求1的用途,其中所述制剂还包含药学可接受的用于施用到身体上或体内的载体和/或非纤维剂。
3.权利要求2的用途,其中所述制剂包括干粉、干胶片、盘、片剂、胶囊、液体、凝胶、乳膏、泡沫、软膏、乳剂、支架涂层、导管或其它医用植入物、引入微粒中的肽、聚合物基质、水凝胶、织物、绷带、缝线或海绵。
4.权利要求2的用途,其中所述包含自组装肽的制剂提供于第一保存或施用装置中,并且所述药物可接受的载体提供于第二保存或施用装置中。
5.权利要求1的用途,其中所述自组装肽包含符合式III或式IV的氨基酸残基的序列。
6.权利要求1的用途,其中Xaaneu代表丙氨酸;Xaa+代表精氨酸或赖氨酸;Xaa-代表天冬氨酸或谷氨酸。
7.权利要求1的用途,其中所述组合物包含含有氨基酸序列RADARADARADA的自组装肽。
8.权利要求1的用途,其中所述制剂包含含有氨基酸序列RADARADARADARADA的自组装肽。
9.权利要求1的用途,其中所述氨基酸残基为天然的氨基酸残基。
10.权利要求1的用途,其中自组装肽的浓度在0.1%(1mg/ml)到99%(99mg/ml)之间,包含端值在内。
11.权利要求1的用途,其中所述自组装肽提供于药盒中,所述药盒带有使用说明书和任选地施用装置。
12.权利要求1的用途,其中所述制剂在包含第一隔室和任选地第二隔室的容器中,所述第一隔室含有自组装肽,所述第二隔室含有载体或非纤维剂,在给患者施用之前所述自组装肽可与之相混合。
13.权利要求1的用途,其中所述体液为血液、血浆、肠液、脑脊液、组织液、由实质组织产生的流体、浆液渗出液、脓、胃液、尿或胆汁。
14.权利要求1的用途,其中所述体液为血液。
15.权利要求1的用途,其包括施用所述制剂以减少污染的风险或限制污染。
16.权利要求1的用途,其中所述体液为肠液或脑脊液。
17.权利要求1的用途,其包括将所述制剂施用于组织、细胞或生物流体以稳定所述细胞或稳定所述流体中的蛋白质。
18.权利要求1的用途,其包括在手术期间施用所述制剂以限制肿瘤细胞、感染、脓、浆液渗出液、胆汁、胰液、或正常容纳于胃、肠、或尿道中之物质的污染或扩散。
19.权利要求1的用途,其中所述手术切口部位或伤口部位在以下之中或与其相邻近:血管、组织、泌尿生殖区域、肺、硬脑膜、肠、胃、心脏、胆道、尿道、食管、脑、脊髓、胃肠道、肝、肾、肌肉、动脉、静脉、神经系统、眼、耳、鼻、口、咽、呼吸系统、心血管系统、消化系统、泌尿系统、生殖系统、肌肉骨骼系统、肝、覆盖物或吻合术部位。
20.权利要求1的用途,其包括将所述制剂施用于眼或邻近眼或在眼内的区域。
21.权利要求1的用途,其包括将所述制剂施用于血管以在再附着时限制损伤在血管内膜或血管外部。
22.权利要求1的用途,其包括在手术过程之前或期间将所述制剂施用于切口部位。
23.权利要求1的用途,其包括将所述制剂作为涂层施用于正在经历或正准备好经历手术过程的患者以容纳或防止污染、或支持手术区域内的组织。
24.权利要求1的用途,其中所述制剂在肿瘤切除期间施用。
25.权利要求1的用途,其中所述制剂在角膜修复期间施用。
26.权利要求1的用途,其中将所述制剂施用于所述动物的手术切口部位或伤口部位以抑制出血。
27.权利要求1的用途,其中施用所述制剂以维持患者的体温。
28.权利要求1的用途,其中将所述制剂施用于动脉瘤。
29.权利要求1的用途,其中将所述制剂施用于溃疡。
30.权利要求18的用途,其中所述结构抑制污染物的移动,使得所述动物对所述污染物的免疫应答相对于所述动物在缺少该结构的情况下对所述污染物的免疫应答减小。
31.权利要求1的用途,其中将所述制剂施用于口腔或口腔内的区域。
32.权利要求1的用途,其中将所述制剂施用于泌尿生殖区域内的部位或其邻近部位。
33.权利要求1的用途,其包括在内镜或腹腔镜的辅助下施用所述制剂。
34.权利要求1的用途,其包括将所述制剂施用于烧伤区域。
35.权利要求1的用途,其中所述制剂还包含治疗剂、预防剂、诊断剂、药学可接受的稀释剂、填充剂或油。
36.权利要求1的用途,其中所述制剂还包含抗炎剂、血管收缩剂、抗感染药、麻醉剂、生长因子、细胞、有机化合物、生物分子、着色剂、维生素或金属。
37.权利要求1的用途,其中所述制剂是固体形式。
38.权利要求1的用途,其中所述制剂是溶液形式。
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