CN109136165A - 一种自组装短肽在皮肤组织创伤中快速修复的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种自组装短肽在皮肤组织创伤中快速修复的应用，属于纳米生物再生医学领域，所述自组装短肽的氨基酸序列为：Arg Leu Glu Cys Lys Ala Asp Ala Arg Leu Glu Val Lys Ala Asp Ala‑NH2。本发明对已有的自组装短肽拓宽了新的应用领域，拓展了该自组装短肽的使用范围类型，提高了该自组装短肽的研发价值，并为皮肤组织损伤修复提供了切实可行的研究方向，拓宽了组织修复的领域。

Description

一种自组装短肽在皮肤组织创伤中快速修复的应用
技术领域
本发明属于纳米生物再生医学领域，具体涉及一种自组装短肽在皮肤组织创伤中快速修复的应用。
背景技术
皮肤作为人体最大的器官和人体的第一道防线，在生命过程中有重要的功能。如保护、水化、隔离化学物质、病毒和病原体的作用，参与人体的排泄以及调节体温、感受外界刺激等。
皮肤创伤不仅影响正常生活与美观，严重时将危及生命。皮肤创伤愈合的本质是隔离感染源、修复组织。皮肤创伤修复是一个复杂的过程，主要表现为伤口通过纤维化和瘢痕形成，愈合创面的非特异性愈合形式。其恢复时间分为多个阶段，各阶段之间相互作用、联系，共同完成创伤修复。此外，皮肤创伤修复过程中还有特殊的细胞功能级联机制的参与，如细胞动态参与、生长因子、细胞因子以及细胞外基质等。多种细胞因子和信号转导途径参与、调节着这些过程。急性创伤后几个小时完成修复的第一阶段，在伤口愈合的凝血期可激发炎症反应；在细胞增殖阶段，创伤愈合过程含创面缩小、肉芽组织形成、血管网生成和修复等；在伤口成熟的过程中，细胞外基质成分发生变化；皮肤创伤修复过程的完成时一般有瘢痕形成，其形成机制复杂，与修复过程中的炎症程度、细胞外基质的平衡等直接相关。
近年来，自然、非自然因素导致的创伤病人，以及手术或者病理导致的皮肤创伤人员数量增加，科技工作者和医疗人员等积极需求解决的策略和办法，某些相关生物新材料产品如壳聚糖、寡糖、胶原、蜂胶、沸石、薰衣草油、芦荟凝胶海藻酸钠，前沿技术如干细胞治疗，物理治疗如光电声磁等，它们对创伤修复有一定促进作用，有一定的效果。但当前市面上及治疗中主流方式依然为清创、缝合、消毒抗感染治疗等，上述部分针对皮肤创伤的药物会加重清创困难。
目前还未见疗效显著的加速皮肤创伤愈合的治疗方法。另外，无瘢痕伤口愈合，正逐渐成为创伤医学、康复医学、美容外科的研究热点。
皮肤组织中，创伤的快速修复是重要的的医学命题，具有非常重要社会现实意义，同时在临床医学中有很多重要的用途。
本发明涉及的分子自组装，指的是分子在不受外力介入的情况下，能够进行自我组织，自我聚集形成一种规则的结构，即能够从一个杂乱无序的状态转变成一个有序的状态。近几年来，手性自组装短肽，已经发展成为了一类新兴的纳米生物材料。它是一种仿ECM的生物支架纳米材料，能够模仿ECM的部分功能，从而影响细胞迁移、增殖、分化等生物学行为，可以作为细胞三维培养的基质材料，同时它在创伤快速修复，组织损伤修复等方面均有一定的作用。
我们已经获得了一类短肽化合物的结构及部分用途的专利(ZL201510134840.1)：一类能用于修复子宫和保护心肌的自组装短肽及其引用。
另外，皮肤这一器官比较子宫和心肌(心脏)有很大的不同，主要体现在于：1)属于不同的器官；2)各器官在机体中结构不同；3)各器官在机体中赋予的功能不同；4)各器官在机体中赋予的用途不同；5)各器官中的在机体中赋予的动态行为不同；6)受损伤后，修复中涉及的的细胞类型、部分蛋白、修复机制(如相关的信号通路，蛋白的上调和下调，病理学及病理生理学)等存在不同；7)其它等。故而在医学上，很难想到将皮肤组织修复与子宫和心肌组织修复使用的药物合并研究。
发明内容
本发明提供一种自组装短肽在皮肤组织创伤中快速修复的应用，以解决现有医学皮肤组织损伤修复慢、疗效差的技术问题。
本发明采用的技术方案如下：
一种自组装短肽在皮肤组织创伤中快速修复的应用，所述自组装短肽的氨基酸序列为：Arg Leu Glu Cys Lys Ala Asp Ala Arg Leu Glu Val Lys Ala Asp Ala-NH2。本申请将该自组装短肽命名为Sciobio-II，该序列是专利申请号为201510134840.1的专利文件中提供的三条短肽中的一条短肽(GFS-5)，其制备过程和短肽结构如该专利所述，本申请不再赘述。
实验表明，本发明所述自组装短肽Sciobio-II形成的纳米纤维支架，支持人皮肤成纤维细胞(HFF-1)能在其上进行黏附、生长；所以，自组装短肽能使用于皮肤细胞方面的三维培养。
实验表明，本发明所述自组装短肽Sciobio-II所构建的三维培养的细胞，部分蛋白的表达在二维和三维中有显著不同。人皮肤成纤维细胞(HFF-1)三维培养中的重要蛋白逐渐增加，表明本发明短肽启动了皮肤细胞中的某些信号通路中的重要蛋白的上调或者下调。
实验表明，本发明所述自组装短肽Sciobio-II形成的纳米纤维支架，HE染色显示能支持皮肤组织修复,疤痕小。
实验表明，本发明所述自组装短肽Sciobio-II形成的纳米纤维支架，还能加快修复皮肤损伤的修复速度，修复速度较比对照组快约2-3倍(第7天时，生理盐水组伤口未愈合面积是短肽组的2倍、第11天为3倍、第14天时为2.5倍)，修复质量较对照好(HE染色)。
实验表明，本发明所述自组装短肽Sciobio-II形成的纳米纤维支架，还能加速皮肤创伤修复过程中炎症期的进程，推进创伤修复过程的进行；同时，在创伤修复进入组织增生期后，短肽组生长因子的表达量也高于非短肽组。
实验表明，本发明所述自组装短肽Sciobio-II形成的纳米纤维支架，重要生长因子其mRNA的表达量和对照比较，有较大差异，而对于VEGF与TGF-β2，前期表达量都较少，第5天时开始升高，另外EGF与TGF-β1在14天时的表达量迅速升高。
综上，本发明所述自组装短肽Sciobio-II，支持皮肤细胞生长，调节重要蛋白的表达，能支持皮肤损伤修复，能加速修复皮肤损伤，修复质量好，可应用到皮肤组织创伤快速修复等相关领域。
上述细胞三维培养是指自组装短肽在制备细胞三维培养修饰纳米支架材料中的应用；皮肤组织损伤修复是指自组装短肽作为生物医学纳米材料的应用。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
(1)本发明为皮肤组织损伤修复提供了切实可行的研究方向，拓宽了组织修复的领域；
(2)本发明对已有的自组装短肽拓宽了新的应用领域，拓展了该自组装短肽的使用范围类型，提高了该自组装短肽的研发价值；
(3)本发明涉及的自组装短肽能够目的性的修复皮肤损伤组织，修复速度快，修复质量好，创面愈合速度快，炎症小，疤痕小，皮肤组织损伤修复后，速度和质量都有显著提高，故而对于疤痕具有较好的疗效，在美容方面具有巨大的经济价值；
(4)提供了一种新型的自组装纳米生物医学材料，这种新型生物医学材料能够广泛的应用到纳米生物医学工程、细胞工程及生物工程及等领域，并具有明显的经济及其社会效益；
(5)提供了一种细胞三维培养纳米支架材料，可广泛应用于生物医学领域。
附图说明
图1是本发明所述自组装短肽Sciobio-II 24小时后原子力显微镜结果图(A：Sciobio-II三维细胞培养基质II号；B：Sciobio-II三维细胞培养基质II号)。
图2是本发明所述自组装短肽Sciobio-II构建的三维环境中的HFF-1细胞培养图。
图3为HFF-1细胞在本发明所述自组装短肽Sciobio-II构建的三维环境中的吖啶橙/溴化乙锭染色图。
图4是HFF-1细胞在Sciobio-II构建的三维环境中的DAPI染色图。
图5是q-PCR检测HFF-1细胞在Sciobio-II构建的三维环境中生长因子的mRNA表达水平。
图6是自组装短肽Sciobio-II对皮肤创伤快速修复过程的动物模型，①Control②Peptide③TGF-β1④Peptide+TGF-β1。
图7是短肽Sciobio-II对皮肤创伤修复的HE染色。
图8是短肽Sciobio-II对皮肤创伤修复的组织免疫组化染色染色，A:IL-6在组织中的表达变化B：FAK在组织中的表达变化。
图9是q-PCR检测短肽Sciobio-II在皮肤创伤修复过程中相关炎症因子的mRNA表达水平。
图10是q-PCR检测短肽Sciobio-II在皮肤创伤修复过程中相关生长因子的mRNA表达水平。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，并不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域的普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他所用实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例1：自组装短肽Sciobio-II自组装24h的原子力显微镜(AFM)
在37℃环境下自组装24小时后的自组装短肽在原子力显微镜中显示，在组装24小时之后，短肽形成密集的纳米棒状纤维结构，棒状纳米纤维相互集结成致密的纳米纤维网络支架，为细胞的三维培养提供支持与粘附(图1)。
实施例2：HFF-1细胞在Sciobio-II构建的三维环境中的培养
人皮肤成纤维细胞(HFF-1)常规培养于二维环境，15％FBS和1％双抗配置的高糖DMEM培养基，CO2细胞培养箱(37℃，5％)培养。三维培养步骤如下：(1)细胞贴壁生长到约80％进行三维培养；(2)胰酶(0.25％)消化前PBS清洗细胞两次；(3)1000rpm离心，计数；(4)加入短肽等溶液，混合均匀，形成三维混悬细胞液。置96孔板于恒温培养箱(37℃，5％CO2)进行培养，观察，分析。在二维环境中，HFF-1为贴壁生长状态，呈长梭形。在Sciobio-II所构建的三维环境中培养时，细胞呈球形镶嵌于短肽水凝胶中。细胞透亮并且边界清晰可见，表现为多层生长。在培养5天后，二维环境中细胞已长满，出现接触抑制，部分细胞死亡。细胞的生长与增殖受到抑制。而在Sciobio-II构建的三维培养环境中，细胞透亮且细胞数量仍有增长。证明HFF-1细胞可在短肽水凝胶构建的三维培养环境中生长、增殖且状态良好(图2)。
实施例3：HFF-1细胞在Sciobio-II构建的三维环境中的吖啶橙/溴化乙锭染色
步骤如下：(1)二维环境与Sciobio-II构建的三维环境中进行HFF-1细胞培养。每孔接种细胞数约2000。孔板置于37℃，5％CO2恒温培养箱中培养。铺板后24h记为第1天，第1、3、5和7天进行AO/EB染色；(2)AO染液与EB染液等量避光混合均匀，制成AO/EB染液；(3)取孔板，弃去培养基。PBS清洗。4％多聚甲醛20μl/孔固定10-15min。避光加入AO/EB染液15μl/孔，染色10min。使用PBS洗去背景。荧光倒置显微镜下观察、拍照。
AO/EB染色后，活细胞核的染色质呈绿染状态，且结构正常；早凋细胞核的染色质呈绿染状态，但结构为固缩状/圆珠状；死亡细胞核的染色质呈橘红色，同时结构正常；晚凋细胞核的染色质呈橘红色，染状态为固缩状/圆珠状。如图3所示，在培养7天后，HFF-1在短肽水凝胶中呈绿色，长势良好，凋亡少(图3)。
实施例4：HFF-1细胞在Sciobio-II构建的三维环境中的DAPI染色
方法如下：(1)HFF-1细胞进行二维与三维培养。接种细胞数量为2000/孔。置孔板置于恒温培养箱中培养。
(2)铺板24h记为第1天。1、3和5天取出孔板，DAPI染色。
(3)弃培养基后，PBS清洗。加入20μl多聚甲醛(4％)固定(10-15min)。吸出细胞后PBS清洗。避光条件加入20μlDAPI染液染色(15min)。再用PBS清洗2-3次。用荧光倒置显微镜观察并拍照。
结果显示，HFF-1细胞在Sciobio-II构建的三维环境中，细胞核呈圆形且染色均匀，表示HFF-1可在Sciobio-II所构建的三维环境中生长且状态良好(图4)。
实施例5：q-QPCR检测HFF-1在Sciobio-II构建的三维环境中生长因子的mRNA表达水平
HFF-1细胞的二维与三维培养后，铺板后24h记为第1天，1、3、5和7天收集细胞。每组3个复孔。步骤如下：
(1)二维细胞的收集
①弃孔板中培养基，PBS清洗2次。
②每孔加500μl EDTA胰酶(0.25％)消化，用显微镜监测至细胞呈变圆。随即加入细胞培养基500μl使消化终止，吹打细胞呈均匀分散状态。
③1000rpm，离心10min。弃上清。待用。
(2)三维细胞的收集
①24孔板中短肽-细胞的混合液以及培养基，一起转移到EP管内分装。离心5min后，舍弃上清。
②加1m EDTA胰酶(0.25％)，吹打2min之后，适宜转速下离心5min后，舍弃上清，待用。
(3)细胞总RNA的提取
①每管加Total RNA Extractor 1ml，吹打5-10min直至溶液变浑浊。室温下放置10min，待核蛋白与核酸分离完全。
②每管加200μl CHCl3(氯仿)，混匀，静置3min；12000rpm下离心10min。
③吸取上层清液，置于无酶灭菌的EP管内，加入等体量异丙醇。颠倒使之混匀，室温下静置20min，12000rpm下离心10min。弃上清。
④加1ml乙醇溶液(75％，DEPC水配制)洗涤并沉淀。12000rpm下4℃离心3min，舍弃上清。
⑤室温下干燥5-10min。避免过干，防止出现RNA溶解不全。
⑥加入RNase-free水20μl，吹打使RNA溶解。
⑦核酸浓度测定仪作RNA浓度与纯度的测定。纯度须在1.8与2.0之间。根据检测结果的浓度稀释相应RNA的浓度到1000ng/μl。
(4)逆转录RNA合成cDNA。
参照PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书进行两步法逆转录实验。
①去除DNA干扰
于PCR仪中反应，42℃，反应2min。
②合成cDNA
于PCR仪中反应，反应步骤：
注：步骤(2)需按照表格所示顺序添加反应物。
③利用核酸浓度测定仪作cDNA浓度与纯度的测定。按照检测的结果将cDNA的浓度调整到100ng/μl。在-20℃条件下保存。
(5)荧光定量PCR
所用荧光定量PCR的反应体系以及相应的反应程序，均参考Vazyme公司标准说明书进行。
反应体系如下：
反应程序如下：
(6)得到的实验结果统一按照ΔΔct处理，并且采用t检验进一步作数据分析，当P值小于0.05时认为显著性差异。
生长因子在细胞的增殖过程中有重要作用。选取具有代表性的生长因子，利用荧光定量PCR技术对他们的表达情况进行检测q-PCR结果显示：VEGF、EGF和TGF-β1表达趋势基本相同。第1天至第5天，二维环境培养的细胞与三维环境培养的细胞生长因子都成上升趋势，且二维的表达量要高于三维。第7天时，由于二维培养环境生长空间有限，当细胞增殖到一定的密度时，开始出现接触抑制等情况，减缓、抑制了细胞的增殖。第7天时，三维环境中细胞生长因子的表达量要高于二维环境中的细胞。
实施例6：SD大鼠皮肤创伤快速修复模型建立
建立创伤快速修复模型，步骤如下：
(1)体重250g左右的SD大鼠雌雄随机，每组10只，7％水合氯醛采用腹腔注射进行麻醉(0.3ml/100g)。待备皮和消毒全部完成后，将大鼠固定。
(2)使用圆形印章在大鼠背上进行标记。后沿印章痕迹在大鼠背上剪4个直径约0.8cm的圆形创面，深度到达皮下筋膜层。分别给药：①左上：生理盐水；②右上：Sciobio-II溶液；③左下：TGF-β1；④右下：Sciobio-II+TGF-β1。
(3)分别于术后第1、3、5、7、11和14天随机测量伤口面积，并进行取样。
(4)使用多聚甲醛溶液(4％)浸泡组织样本,48h后采用石蜡包埋并切片。为
为接下来的HE染色以及免疫组化染色做好准备。
SD大鼠皮肤创伤快速修复模型，选择Sciobio-II作为目标，对照为生长因子(TGF-β1)以及生理盐水。在第14天时，短肽组与短肽+生长因子组的伤口基本恢复完毕，仅见针点疤痕组织，疤痕很小，无法测量伤口面积，故本实验的创伤面积与标本取材均至第14天。实验结果表明，前5天，创伤面积恢复较快；5-14天，伤口面积恢复速率有所降低。短肽组在第11天时已基本完成创伤修复过程。第7天时，生理盐水组伤口未愈合面积是短肽组的2倍、第11天为3倍、第14天时为2.5倍(图6)。表明，Sciobio-II修复皮肤创面，疤痕小，速度快，质量好。
实施例7：短肽Sciobio-II对皮肤创伤修复的HE染色
HE染色步骤如下：
HE染色结果显示：第1天时，各组均有较为严重的炎症因子浸润情况。炎症细胞大量增多，且聚集在伤口附近。伤口处部分组织有崩解的情况。第3天时，大鼠伤口处开始结痂，表皮明显增厚，炎症因子聚集加重，肉芽组织逐渐增多。第5天时，各组炎症情况减少，Sciobio-II组炎症小，而生理盐水组较其他各组炎症情况较为严重；Sciobio-II组毛细血管增生较快。第7天时，各组炎症情况基本消退，肉芽组织增多且开始纤维化，表皮厚度增加，短肽组与短肽+生长因子组较其他两组表皮厚度增加较多。肉芽组织有表皮化的趋势；第14天时，除生理盐水组表皮仍在修复外，其他组基本已完成修复过程。短肽组与短肽+生长因子组在第11天时，肉芽组织上皮化覆盖创面，基本完成创伤修复(图7)。表明，Sciobio-II修复皮肤创面时，炎症小，毛细血管增生较快，速度快，质量好。
实施例8：短肽Sciobio-II对皮肤创伤修复的组织免疫组化染色
免疫组化染色步骤如下：
(1)脱蜡、水化
脱蜡前将组织切片放入58℃烘箱，烘烤2小时。
在摇床上进行PBS洗片操作，重复3次，每次时间为5min。后甩干切片，并用吸水纸吸去组织周围残留液体。
(2)抗原修复
①0.01M枸橼酸钠缓冲溶液加热至95℃进行抗原修复。
②室温下自然冷却，PBS洗片3×5min。用滤纸擦干组织周围液体。
(3)阻断过氧化物酶：用移液枪吸H2O2 50μl滴在组织上。将切片放湿盒内，在恒温箱37℃条件下中孵育达15-20min。最后PBS作3次清洗，每次时间为5min。
(4)血清封闭：用移液枪吸山羊血清50μl滴在组织上。将切片放湿盒内，在恒温箱37℃条件下中孵育30min。
(5)一抗：按照说明书用PBS配制合适浓度的一抗；甩去切片上的山羊血清(勿洗)，擦干组织周边液体；吸取50μl一抗，均匀滴在组织上，使组织表面完全覆盖；在4℃条件下过夜。
(6)复温：在恒温箱37℃条件下中复温30min。PBS作3次清洗，每次时间为5min。
(7)二抗：移液枪吸二抗50μl滴在组织上；在恒温箱37℃条件下中复温30min。PBS作3次清洗，每次时间为5min。
(8)辣根酶作链霉卵白素标记：滴辣根酶链霉卵50μl在组织上，在恒温箱37℃条件下中复温30min。PBS作3次清洗，每次时间为5min。
(9)DAB显色：按照1：20的比例添加DAB与DAB底物液配置DAB显色液(现配现用)，加入EP管，旋涡混匀；滴加DAB显色液，显微镜下观察到组织有褐色出现时，用水冲洗，注意不要冲掉组织。
(10)复染：苏木素复染细胞核1min。
(11)脱水、封片
在脱水结束后即刻滴加中性树胶，封片并晾干。
在修复过程中，炎症因子、生长因子，以及相关通路的因子共同发挥作用，促进创伤的修复以及新生组织的形成。因此，我们采用免疫组化染色的方法来检测炎症因子IL-6以及通路相关因子FAK在大鼠皮肤创伤快速修复模型中的表达量。
IL-6免疫组化结果显示：第3天时，各组IL-6表达量都较高，短肽组与短肽+生长因子组IL-6表达量较其他组更高，且集中在伤口前端。第7天时，IL-6表达情况有所减少，其中，短肽组减少更为明显。第14天时，各组IL-6表达基本消失。
FAK免疫组化结果显示：第3天时，短肽组FAK表达量较高，其他组FAK表达量很少。第7天时，短肽组与短肽组+生长因子组FAK表达量逐渐升高，其他两组表达不明显。第14天时，短肽组与短肽+生长因子组FAK的表达逐渐消退，其他两组FAK的表达量有所升高(图8)。表明：Sciobio-II对皮肤创伤快速修复过程中，激活或启动了与炎症因子IL-6和FAK有关的信号通路或蛋白的上调或者下调。
实施例9：
q-PCR检测短肽Sciobio-II对皮肤创伤修复过程中相关炎症因子的mRNA表达水平
q-PCR技术检测皮肤创伤修复SD大鼠动物模型修复过程中相关的炎症因子表达情况。结果显示：创伤模型建立至第7天，各组炎症因子都有较高的表达，11天后炎症因子表达量逐渐减少，14天时暂未检测到炎症因子的表达。其中，短肽组与短肽+生长因子组在第3天与第5天时，炎症因子的表达量较其他两组更高，第5天时为炎症因子表达顶峰。随后表达量开始下降。其他两组炎症因子表达量顶峰基本为第7天(图9)。表明：Sciobio-II对皮肤创伤快速修复过程中，炎症因子的上调或者下调对创伤的快速愈合过程有重要影响。
实施例10：q-PCR检测短肽Sciobio-II在皮肤创伤修复过程中相关生长因子的mRNA表达水平
在炎症期后，生长因子的表达在创伤修复过程中开始占主导作用。在生长因子的作用下，肉芽组织增生、成纤维细胞迅速增殖、表皮增厚。q-PCR检测相关生长因子其mRNA的表达量。结果发现各组的生长因子表达基本呈现随时间增高的趋势。对于EGF和TGF-β1，建模至第7天，各组表达水平不相上下，无明显趋势。第11天起，短肽组与短肽+生长因子组EGF与TGF-β1的表达量迅速升高，且在第14天时表达量依然高出其他组。其中，短肽组EGF与EGF-β1的表达量为四组中最高。对于VEGF与TGF-β2，前期各实验组表达量都较少，第5天时开始升高。且短肽组VEGF与TGF-β2的表达量分别从第11天与第5天起高于其他各组。短肽+生长因子组VEGF与TGF-β2的表达量也高于其他组直至第14天修复过程基本完成(图10)。表明：Sciobio-II对皮肤创伤快速修复过程中，生长因子的上调或者下调对创伤的快速愈合过程有较大影响。
以上所述实施例仅表达了本申请的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请技术方案构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 罗忠礼
<120> 一种自组装短肽在皮肤组织创伤中快速修复的应用
<160> 9
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 端基保护
<400> 1
Arg Leu Glu Cys Lys Ala Asp Ala Arg Leu Glu Val Lys Ala Asp Ala
1 5 10 15
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> PCR扩增引物
<400> 2
5’-TGAAGGTCGG AGTCAACGGA -3’ 20
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> PCR扩增引物
<400> 3
5’-CCTGGAAGAT GGTGATGGGA T -3’ 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> PCR扩增引物
<400> 4
5’-TTGCTGCTCT ACCTCCACCA T -3’ 21
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> PCR扩增引物
<400> 5
5’-GGTGATGTTG GACTCCTCAG TG -3’ 22
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> PCR扩增引物
<400> 6
5’-ATGGTGGATG TAGCCAGCTC -3’ 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> PCR扩增引物
<400> 7
5’-AATGGTTGTG GTCCTGAAGC -3’ 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> PCR扩增引物
<400> 8
5’-GTACCTGAAC CCGTGTTGCT -3’ 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> PCR扩增引物
<400> 9
5’-GTATCGCCAG GAATTGTTGC -3’ 20

Claims (1)

1.一种自组装短肽在皮肤组织创伤中快速修复的应用，所述自组装短肽的氨基酸序列为：Arg Leu Glu Cys Lys Ala Asp Ala Arg Leu Glu Val Lys Ala Asp Ala-NH2。
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