CN101177439A - 千克级规模高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备 - Google Patents
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Abstract
本发明以新鲜猪脑组织为原料，利用大型提取罐、大孔吸附树脂、DEAE SephadexA－25和硅胶层析构建了一套提取分离纯化千克级规模高纯度GM1的生产工艺。本发明摒弃传统方法流动相中有毒溶剂氯仿的使用，全套工艺污染少，工艺简单，产品成本低，适合工业化生产。
Description
所属技术领域
本发明涉及千克级规模高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)的制备方法，属于生物医药领域。
背景技术
神经节苷脂(Gangliosides，GLS)是一类含唾液酸的酸性糖脂，为哺乳动物细胞膜的重要成分，其在脑组织中含量最高。神经节苷脂的组成十分复杂，不同的神经节苷脂所含的糖基的唾液酸的数目和连接方式不同，可用G代表神经节苷脂，M、D、T分别代表单、二、三唾液酸基，下标数字1、2、3分别代表四糖基、三糖基、二糖基神经酰胺，GM1就表示由单个唾液酸基和四糖基神经酰胺连接而成的神经节苷脂。研究表明，具有显著生物学功能的神经节苷脂是连接有单个唾液酸的GM1，具有促进神经重构(神经重塑，神经可塑性，Neuroplasticity)的作用，即通过促进各种形态、生化、组化、神经生理及行为参数的改善，最终可以加速神经修复，最大程度地恢复原有的神经功能，其对血管性或外伤性中枢神经系统损伤和帕金森治病有疗效。目前神经系统疾病的发病率很高且往往缺乏有效的治疗措施，象GM1等疗效确切、副作用小的新药具有广泛的市场需求，亟待研究开发并产业化。
1957年Folch等发明了分层技术从哺乳动物组织中提取分离神经节苷脂，但此方法获得的神经节苷脂成分复杂并且纯度低，其中提取的神经节苷脂中含有大量色素、磷脂、硫脂等其他脂类成分，无法应用于药品的制备。1976年Momoi.T等使用阴离子交换介质DEAE sephadex A-25和硅胶分离纯化神经节苷脂，使分离效率和产品纯度大大提高，他们首先将猪脑或牛脑绞碎后用丙酮脱水制成丙酮粉，再用氯仿-甲醇-水的混合溶液进行提取，使得率达到了14％，但还是得率低无法用于大规模生产。
CN1353112公开了单唾液酸四己糖神经节苷脂的高纯度制备工艺，他们用有机溶剂混合物从哺乳动物脑组织中提取总神经节苷脂，然后对提取液进行浓缩、酸水解、脱盐、交换柱层析，洗脱液层析后再进行反相柱层析，最终得成品。虽然根据此工艺可以得到纯度大于98％的GM1，然而工艺流程繁琐，耗费时间长，生产一批所需的时间长达6天，工业化生产成本太高，且提取纯化过程中应用了有毒溶剂氯仿，从而使药品的副作用增加。
CN1415756与CN1570080均公开了一种微尘物转化方法制备单唾液酸四己糖神经节苷脂，虽然有效利用并节省了动物脑组织，但工艺程序复杂，在发酵工艺中菌种条件要求苛刻，容易受到染菌，且成本在每克500元以上，工业化生产成本偏高。
由于GM1结构的复杂性和多变性，以及其它技术难题没有得到解决，利用人工合成或基因工程方法制备GM1的方法在短期内难以应用。因此，目前获取GM1的普遍方法是从动物脑组织中提取分离。然而，神经节苷脂种类多，在脑组织中含量少，特别是其分子组成、结构物理化学性质等因素十分相近，所以高纯度GM1的提取分离又一定难度，特别是大规模工业化提取工艺还未见有报道和应用。到目前为止，国内关于GM1提取分离的研究大多还处于实验室规模和水平，还未得到有效应用，采用的工艺主要有Momoi.T方法和利用微生物转化的方法，但成本太高，难以大规模应用于临床。国内还没有单一成分GLS如GM1的批量生产方法和工艺，现有的分离纯化方法多有操作步骤繁琐、工艺复杂、周期长、不宜大量制备等缺点。
发明内容
GM1价格昂贵的原因在于应用现有的技术工艺制备产量少，工艺复杂，如果采用易于获得的原料，对提取过程的几个关键步骤进行改良，使生产工艺适合大量制备以及产业化生产，或发展出新的先进分离纯化技术，则其成本将大大降低。本发明人为了达到上述目的，通过对现有的GM1提取纯化工艺进行研究，通过大量实验对现有技术不断改进，提出了本发明的技术方案。
本发明以新鲜猪脑组织为原料，利用大型提取罐、大孔吸附树脂、DEAESephadex A-25和硅胶层析构建了一套提取分离纯化千克级规模高纯度GM1的生产工艺。本发明选用新鲜猪脑组织经粉碎和高速匀浆，注入提取罐并加入甲醇水混合液搅拌提取，经板框过滤分离甲醇水层经大孔吸附树脂分离神经节苷总脂；通过水解神经节苷总脂提高GM1含量30％，再经DEAE Sephadex A-2 5和硅胶层析过的纯度高于98％GM1。
通过大量的实验对提取纯化工艺进行优化，本发明的制备工艺包括如下步骤：
1) 将新鲜猪脑组织经4000～6000rpm离心除游离水后，胶体磨粉碎，3000r/min高速匀浆20～40min，成乳胶状后，注入提取罐中并加入10倍体积的甲醇水(2∶0.8～2∶1/V∶V)溶液，低温2～8℃下搅拌过夜(12～24小时)，提取；
2) 将提取液用板框过滤机实现固液分离后并上样大孔吸附树脂D-101层析柱，先用低浓度甲醇水(1∶2～1∶3/V∶V)洗除杂质，再用无水甲醇洗脱收集含有神经节苷脂洗脱液；
3) 将神经节苷脂洗脱液40℃～80℃真空浓缩并经-20℃～-60℃冷冻干燥后，用0.5M NaCl溶液溶解并用冰乙酸调节PH至3.5～4.0之间，60～75℃水解3～5小时；
4) 水解后用氢氧化钠溶液先将PH调至中性，再用1.5～2.5倍体积的预冷丙酮在-20℃～-10℃下过夜静置沉淀。离心分离沉淀后40℃～80℃真空浓缩并经-20℃～-60℃冷冻干燥并上样阴离子交换层析柱DEAE Sephadex A-25，用甲醇水流动相A(4∶1～4∶1.25/V∶V)去除杂质后，再用甲醇/乙酸钠流动相B(0.1M)洗脱并收集洗脱液；
5) 真空浓缩洗脱液后上样硅胶层析柱(填充物为60-80目和80-120目层析用硅胶各半)，用甲醇/乙酸钠(0.015M)流动相分步收集流出液，用HPLC检测GM1的纯度；
6) 将收集的高纯度GM1溶液40℃～80℃真空浓缩后用于预冷的丙酮在-20℃～-10℃下沉淀过夜，经8000rpm离心后收集沉淀，经-20℃～-60℃冷冻干燥后即为高纯度GM1冻干粉。
上述所有步骤中涉及的真空浓缩温度进一步优选为55℃～75℃，冷冻干燥温度进一步优选为-40℃～-50℃。
本发明与现有技术相比有如下的明显优点和技术进步：
(1)在有机溶剂提取方法的基础上进行了改进，摒弃传统方法流动相中有毒溶剂氯仿的使用，全套工艺污染少，药品中的主药成分含量高，副作用小。
(2)对层析分离和纯化步骤中流动相的比例进行了优化，提高了产品的得率和生产效率。
(3)整个工艺简单，甲醇可以回收或套用，产品成本低，实际生产中每克GM1纯品的成本约为160元。
(4)本发明适用于大批量制备高纯度GM1，至今尚未见有更先进的相关文献和专利报道，即通过五个步骤获得千克级高纯度(＞98％)GM1产品，步骤流程少，通过一次性处理大量动物组织，纯化时上样量大，可以进行千克级规模化生产。
具体实施方式
通过如下实施例，可以具体了解本发明的基本内容，但本发明的技术方案并不限于以下实施例。
实施例1 高纯度GM1冻干粉的制备
1)将新鲜猪脑组织经5000rpm离心去除游离水，用胶体磨粉碎后3000r/min高速匀浆30min，成乳胶状后，注入提取罐中并加入10倍体积的甲醇水(2∶0.8)溶液，低温2℃搅拌12小时，提取；
2)将提取液用板框过滤机实现固液分离后上样大孔吸附树脂D-101层析柱，先用低浓度甲醇水(1∶2)洗除杂质，再用无水甲醇洗脱收集含有神经节苷脂洗脱液；
3)将神经节苷脂洗脱液40℃真空浓缩并经-20℃冷冻干燥后，用0.5M NaCl溶液溶解并用冰乙酸调节PH至3.5，60℃水解3小时，在水解的过程中不断用薄层色谱(TLC)检测检测水解程度；水解后用氢氧化钠溶液先将PH调至中性，再用1.5倍体积的预冷丙酮-20℃过夜静置沉淀。其中，TLC的条件是样品3μl点样，在氯仿/甲醇/0.2％CaCl2(55∶45∶10，V/V/V)中展开，用0.2％间苯二酚/25％HCl/0.1M CuSO4(10∶80∶0.25，V/V/V)溶液显色，然后100℃烘烤20～30min；
4)离心分离沉淀后40℃真空浓缩并经-20℃冷冻干燥并上样阴离子交换层析柱(DEAE-Sephadex A-25)，用甲醇水流动相A(4∶1)去除杂质后，再用甲醇/乙酸钠流动相B(0.1M)洗脱并收集洗脱液；
5)真空浓缩洗脱液后上样硅胶层析住(60-80目和80-120目层析用硅胶各半)，用甲醇/乙酸钠(0.015M)流动相分步收集流出液，用HPLC检测GM1的纯度；
6)将收集的高纯度GM1溶液40℃真空浓缩后用于预冷的丙酮-20℃沉淀过夜，经8000rpm离心后收集沉淀-20℃冷冻干燥即为高纯度GM1冻干粉。
实施例2 高纯度GM1冻干粉的制备
1)将新鲜猪脑组织经5000rpm离心去除游离水，用胶体磨粉碎后3000r/min高速匀浆30min，成乳胶状后，注入提取罐中并加入10倍体积的甲醇水(2∶1)溶液，低温8℃搅拌24小时，提取；
2)将提取液用板框过滤机实现固液分离后上样大孔吸附树脂D-101层析柱，先用低浓度甲醇水(1∶3)洗除杂质，再用无水甲醇洗脱收集含有神经节苷脂洗脱液；
3)将神经节苷脂洗脱液80℃真空浓缩并经-60℃冷冻干燥后，用0.5M NaCl溶液溶解并用冰乙酸调节PH至4.0，75℃水解5小时，在水解的过程中不断用薄层色谱(TLC)检测水解程度；水解后用氢氧化钠溶液先将PH调至中性，再用2.5倍体积的预冷丙酮-10℃过夜静置沉淀。其中，TLC的条件是样品3μl点样，在氯仿/甲醇/0.2％CaCl2(55∶45∶10，V/V/V)中展开，用0.2％间苯二酚/25％HCl/0.1 M CuSO4(10∶80∶0.25，V/V/V)溶液显色，然后100℃烘烤20～30min；
4)离心分离沉淀后80℃真空浓缩并经-60℃冷冻干燥并上样阴离子交换层析柱(DEAE-Sephadex A-25)，用甲醇水流动相A(4∶1.25)去除杂质后，再用甲醇/乙酸钠流动相B(0.1M)洗脱并收集洗脱液；
5)真空浓缩洗脱液后上样硅胶层析住(60-80目和80-120目层析用硅胶各半)，用甲醇/乙酸钠(0.015M)流动相分步收集流出液，用HPLC检测GM1的纯度；
6)将收集的高纯度GM1溶液80℃真空浓缩后用于预冷的丙酮-10℃沉淀过夜，经8000rpm离心后收集沉淀-60℃冷冻干燥即为高纯度GM1冻干粉。
附图说明：
图1：实施例1制备的GM1的HPLC检测图谱。HPLC层析柱为Lichrospher 100 NH2(250×4mm，5um)，流动相为乙氰-0.2M磷酸-四氢呋喃(25∶75∶5)，流速为1.0ml/min，检测器为UV205nm，进样量为每次20ul，在此条件下检测GM1冻干粉的纯度为98.367％。(表1)
表1GM1与杂质的保留时间、峰面积、峰高、峰宽
| Time | Area | Height | Wideth | Area％ | |
| GM1 | 13.188 | 13857.7 | 212.9 | 0.9748 | 98.367 |
| 杂质峰 | 19.513 | 230 | 7.9 | 0.4142 | 1.633 |
图2：实施例2制备的GM1的HPLC图。HPLC层析柱为Lichrospher 100 NH2(250×4mm，5um)，流动相为乙氰-0.2M磷酸-四氢呋喃(25∶75∶5)，流速为1.0ml/min，检测器为UV205nm，进样量为每次20ul，在此条件下检测GM1冻干粉的纯度为98.277％。(表2)
表2 GM1与杂质的保留时间、峰面积、峰高、峰宽
| # | Time | Area | Height | Wideth | Area％ |
| GM1 | 13.221 | 13439.9 | 206.5 | 0.9545 | 98.277 |
| 杂质峰 | 19.580 | 235.6 | 8.4 | 0.4241 | 1.723 |
Claims (13)
1.一种制备千克级规模高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法，其特征在于包括如下步骤：
a.将新鲜猪脑组织除游离水后粉碎高速匀浆，注入提取罐中并加入10倍体积的甲醇水溶液，低温2～8℃搅拌，提取；
b.将提取液过滤并上样大孔吸附树脂层析柱，先用甲醇水溶液洗除杂质，再用无水甲醇洗脱收集洗脱液；
c.将洗脱液真空浓缩并经冷冻干燥后，用0.5M NaCl溶液溶解并用冰乙酸调节PH至3.5～4.0之间，60～75℃水解3～5小时，水解后用氢氧化钠溶液将PH调至中性，再用1.5～2.5倍体积的预冷丙酮低温过夜静置沉淀；
d.离心分离沉淀后真空浓缩、冷冻干燥并上样阴离子交换层析柱，用甲醇水流动相A去除杂质后，再用0.1M甲醇/乙酸钠流动相B洗脱并收集洗脱液；
e.真空浓缩洗脱液后上样硅胶层析柱，用0.015M甲醇/乙酸钠流动相收集流出液。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a所述的甲醇水溶液体积比为2∶0.8～2∶1。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b所述的甲醇水溶液体积比为1∶2～1∶3。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤d所述的甲醇水流动相A体积比为4∶1～4∶1.25。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a所述的粉碎匀浆的条件为胶体磨粉碎，3000r/min高速匀浆30min。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a所述的低温4℃下搅拌时间为1 2～24小时。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b所述的提取液过滤条件为板框过滤机过滤。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b所述的大孔吸附树脂层析柱为大孔吸附树脂D-101层析柱。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤c、d、e所述的真空浓缩温度为40℃～80℃，冷冻干燥温度为-20℃～-60℃。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤c、d、e所述的真空浓缩温度为55℃～75℃，冷冻干燥温度为-40℃～-50℃。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤c所述的预冷丙酮温度在-20℃～-10℃。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤d所述的阴离子交换层析柱为DEAESephadex A-25。
13.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤e所述的硅胶层析柱中填充物为比例各占一半的60-80目和80-120目层析用硅胶。
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Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101838295A (zh) * | 2010-04-14 | 2010-09-22 | 李桂凤 | 一种利用具有特异识别功能色谱介质快速分离纯化神经节苷脂的工业化生产工艺 |
| CN102093440A (zh) * | 2010-12-28 | 2011-06-15 | 山东新时代药业有限公司 | 一种猪脑水解蛋白与单唾液酸四己糖神经节苷脂联产工艺 |
| CN103087120A (zh) * | 2013-02-26 | 2013-05-08 | 北京四环制药有限公司 | 单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法及其应用 |
| CN103251651A (zh) * | 2013-05-20 | 2013-08-21 | 吉林省中韩动物科学研究院 | 一种动物神经节苷脂与脑苷脂提取方法与其应用 |
| CN105111253A (zh) * | 2015-09-18 | 2015-12-02 | 重庆寰瑞生物技术有限公司 | 一种提取分离神经节苷脂的方法 |
| CN106905387A (zh) * | 2017-03-20 | 2017-06-30 | 泸州瑞兴生物工程有限公司 | 一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法 |
| CN109651458A (zh) * | 2019-01-31 | 2019-04-19 | 定安益尔生物技术有限公司 | 高效水解转化制备神经节苷脂的方法 |
| CN109721632A (zh) * | 2017-10-27 | 2019-05-07 | 齐鲁制药有限公司 | 一种高纯度神经节苷脂gm1及其制备方法 |
| CN113243526A (zh) * | 2021-05-06 | 2021-08-13 | 海南大洲金丝燕产业集团有限公司 | 一种用于食用燕窝加工的燕窝酸提取方法 |
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2007
- 2007-12-11 CN CN2007101950196A patent/CN101177439B/zh active Active
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2008
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Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101838295A (zh) * | 2010-04-14 | 2010-09-22 | 李桂凤 | 一种利用具有特异识别功能色谱介质快速分离纯化神经节苷脂的工业化生产工艺 |
| CN101838295B (zh) * | 2010-04-14 | 2015-02-25 | 李桂凤 | 一种利用具有特异识别功能色谱介质快速分离纯化神经节苷脂的工业化生产工艺 |
| CN102093440A (zh) * | 2010-12-28 | 2011-06-15 | 山东新时代药业有限公司 | 一种猪脑水解蛋白与单唾液酸四己糖神经节苷脂联产工艺 |
| CN102093440B (zh) * | 2010-12-28 | 2013-04-03 | 山东新时代药业有限公司 | 一种猪脑水解蛋白与单唾液酸四己糖神经节苷脂联产工艺 |
| CN103087120A (zh) * | 2013-02-26 | 2013-05-08 | 北京四环制药有限公司 | 单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法及其应用 |
| CN103087120B (zh) * | 2013-02-26 | 2015-12-02 | 北京四环制药有限公司 | 单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法及其应用 |
| CN103251651B (zh) * | 2013-05-20 | 2015-03-18 | 吉林省中韩动物科学研究院 | 一种动物神经节苷脂与脑苷脂提取方法 |
| CN103251651A (zh) * | 2013-05-20 | 2013-08-21 | 吉林省中韩动物科学研究院 | 一种动物神经节苷脂与脑苷脂提取方法与其应用 |
| CN105111253A (zh) * | 2015-09-18 | 2015-12-02 | 重庆寰瑞生物技术有限公司 | 一种提取分离神经节苷脂的方法 |
| CN105111253B (zh) * | 2015-09-18 | 2018-01-12 | 重庆寰瑞生物技术有限公司 | 一种提取分离神经节苷脂的方法 |
| CN106905387A (zh) * | 2017-03-20 | 2017-06-30 | 泸州瑞兴生物工程有限公司 | 一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法 |
| CN109721632A (zh) * | 2017-10-27 | 2019-05-07 | 齐鲁制药有限公司 | 一种高纯度神经节苷脂gm1及其制备方法 |
| CN109721632B (zh) * | 2017-10-27 | 2023-10-31 | 齐鲁制药有限公司 | 一种高纯度神经节苷脂gm1及其制备方法 |
| CN109651458A (zh) * | 2019-01-31 | 2019-04-19 | 定安益尔生物技术有限公司 | 高效水解转化制备神经节苷脂的方法 |
| CN113243526A (zh) * | 2021-05-06 | 2021-08-13 | 海南大洲金丝燕产业集团有限公司 | 一种用于食用燕窝加工的燕窝酸提取方法 |
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Assignee: Shandong Xinshidai Pharmaceutical Industry Co., Ltd. Assignor: Lunan Pharmaceutical Group Co., Ltd. Contract record no.: 2010370000510 Denomination of invention: Preparation of kilogram-grade scale high-purity monosialotetrahexosylganglioside Granted publication date: 20100721 License type: Exclusive License Open date: 20080514 Record date: 20100908 |
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Assignee: Shandong Xinshidai Pharmaceutical Industry Co., Ltd. Assignor: Lunan Pharmaceutical Group Co., Ltd. Contract record no.: 2010370000510 Date of cancellation: 20121226 |
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