CN106905387A - 一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法 - Google Patents

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张宪
姚静
李豫俭
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SICHUAN QIGEMAN PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.
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Luzhou Ruixing Biological Engineering Co Ltd
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Abstract

本发明公开了一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法，包括以鲜猪脑为原料进行搅拌，得到鲜猪脑的浓缩液；对制备的浓缩液进行树脂层析，并抽滤干燥得到浓缩粉；将浓缩粉溶于流动相，然后进行硅胶层析，沉淀干燥得到粗品浓缩粉；将粗品浓缩粉溶于层析缓冲液中，然后进行硅胶层析，沉淀干燥得到精品浓缩粉。本发明在纯化步骤中分为粗纯化步骤和精纯化步骤，与现有技术相比，单唾液酸四己糖神经节苷脂钠制备的纯度更高；在树脂层析步骤中使用的树脂，采用特定的酸碱处理以及清洗过程，而且对树脂层析柱进行强化再生处理。

Description

一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法
技术领域
本发明涉及药物制备方法领域，具体是指一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法。
背景技术
单唾液酸四己糖神经节苷脂钠，系自猪脑中提取制得的对神经细胞功能损伤具有作用的物质。现有技术对于单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的提取都立足于提高产品纯度、收率，降低产品成本，减少毒害有机溶剂( 特别是氯仿) 的使用量等方面进行了大量的研究，并且市场已有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液、注射用单唾液酸四己糖神经节苷脂钠等多种产品在销售使用。然而，由于来源于生物原料猪脑，单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的不良反应比较多，特别是与药物中的杂质、污染物、添加剂、病毒或特殊代谢产物形成有关的过敏反应，而且目前的提取技术也不够精细，提取的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠中还会含有微量的有害物质和杂质。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提取纯度高、杂质少、步骤简单、安全性高的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法。
本发明通过下述技术方案实现：一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法，包括以下步骤:
（1）以鲜猪脑为原料进行搅拌，得到鲜猪脑的浓缩液；
（2）对制备的浓缩液进行树脂层析，并抽滤干燥得到浓缩粉：
（3）硅胶粗纯化步骤：将浓缩粉溶于由甲醇、三氯和纯水制备的流动相，然后进行硅胶层析，沉淀干燥得到粗品浓缩粉；
（4）硅胶精纯化步骤：将粗品浓缩粉溶于由甲醇、三氯和纯水制备的层析缓冲液中，然后进行硅胶层析，沉淀干燥得到精品浓缩粉。
进一步地，所述步骤（1）包括：猪脑的解冻、分拣杂质、搅拌、压滤、分层、分解，得到鲜猪脑浓缩液。
进一步地，步骤（2）包括：新树脂的制备以及树脂强化再生、树脂的吸附清洗以及甲醇脱洗、树脂及鲜猪脑浓缩液的浓缩、丙酮沉淀、抽滤干燥，得到浓缩粉。
进一步地，新树脂的制备以及树脂强化再生的具体步骤为：
（2.1）新树脂用饮用水清洗2BV；树脂强化再生用饮用水层析2BV，放出树脂；
（2.2）放出后的树脂用20%盐酸溶液50L浸泡1.5-2.5小时；
（2.3）浸泡后用饮用水清洗2-4遍，沥干后，用3%-5%氢氧化钠溶液60-100L浸泡1.5-2.5小时；
（2.4）将浸泡后的树脂饮用水清洗至pH=6-8，沥干，然后按树脂：水（v/v）=1:1加入饮用水，装柱备用；
（2.5）树脂每柱洗脱10批，然后按 （2.1）-（2.4）步骤强化再生树脂一次。
进一步地，流动相按照甲醇：三氯：纯水=30:80:8（V:V:V）的比例进行配比。
进一步地，层析缓冲液按照甲醇：三氯：纯水=40:70:5（V:V:V）的比例进行配比。
本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
（1）本发明在纯化步骤中分为粗纯化步骤和精纯化步骤，与现有技术相比，单唾液酸四己糖神经节苷脂钠制备的纯度更高；
（2）本发明在树脂层析步骤中使用的树脂，采用特定的酸碱处理以及清洗过程，而且对树脂层析柱进行强化再生处理，使得树脂层析的效果更好。
具体实施方式
为使本发明的目的、工艺条件及优点作用更加清楚明白，结合以下实施实例，对本发明作进一步详细说明。此处所描述的具体实施实例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：
一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法，包括以下步骤:
（1）以鲜猪脑为原料进行搅拌，得到鲜猪脑的浓缩液；
（2）对制备的浓缩液进行树脂层析，并抽滤干燥得到浓缩粉：
（3）硅胶粗纯化步骤：将浓缩粉溶于由甲醇、三氯和纯水制备的流动相，然后进行硅胶层析，沉淀干燥得到粗品浓缩粉；
（4）硅胶精纯化步骤：将粗品浓缩粉溶于由甲醇、三氯和纯水制备的层析缓冲液中，然后进行硅胶层析，沉淀干燥得到精品浓缩粉。
其中，步骤（3）中溶样（浓缩粉溶于流动相）按每柱2.0kg上样量在溶解在溶样桶中，按1:5（W/V）比例加入流动相浸泡不不低于12小时；开启搅拌至溶解完全，彻底溶解样品，样品溶解后性状为黄色透明液体，密封备用；流动相按照甲醇：三氯：纯水=30:80:8（V:V:V）的比例进行配比；层析缓冲液按照甲醇：三氯：纯水=40:70:5（V:V:V）的比例进行配比；
硅胶层析的步骤为：
层析柱的装柱：每柱装柱硅胶量为18kg, 100-200目硅胶；准确称取18kg，100-200目硅胶于悬浮专用圆桶中，加入54L流动相充分搅拌悬浮，将硅胶一次性沿内壁装入层析柱上部，即完成装柱；开启流动相，每柱平衡50L，流速5L/小时，待上样；
上样的步骤为：
将提前溶解的样品缓慢匀速泵入层析柱内，上样完毕后开始层析；
层析的步骤为：
每柱以5L/小时流速层析，用20L/桶收集，直至样品收集完全；取样检测，收集合格产品层析结束。
实施例2：
本实施例在实施例1的基础上，所述步骤（1）包括：猪脑的解冻、分拣杂质、搅拌、压滤、分层、分解，得到鲜猪脑浓缩液。从冷库领出200kg/釜猪脑；猪脑解冻后去除解冻槽中的血水，挑拣出杂物，将解冻槽中已经解冻的猪脑舀到绞肉机料斗里，脑浆用收集槽接收；清场并清洗所有设备、工器具。
本实施例的其他部分与实施例1相同，不再赘述。
实施例3：
本实施例在上述实施例的基础上，所述步骤（2）包括：新树脂的制备以及树脂强化再生、树脂的吸附清洗以及甲醇脱洗、树脂及鲜猪脑浓缩液的浓缩、丙酮沉淀、抽滤干燥，得到浓缩粉。
本实施例的其他部分与上述实施例相同，不再赘述。
实施例4：
本实施例在上述实施例的基础上，所述新树脂的制备以及树脂强化再生的具体步骤为：
（2.1）新树脂用饮用水清洗2BV；树脂强化再生用饮用水层析2BV，放出树脂；
（2.2）放出后的树脂用10%盐酸溶液80L浸泡2小时；
（2.3）浸泡后用饮用水清洗3遍，沥干后，用4%氢氧化钠溶液80L浸泡2小时；
（2.4）将浸泡后的树脂饮用水清洗至pH=7，沥干，然后按树脂：水（v/v）=1:1加入饮用水，装柱备用；
（2.5）树脂每柱洗脱3批，然后按 （2.1）-（2.4）步骤强化再生树脂一次。
由大量的测量数据得出，通过本制备方法制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠平均纯度高于99.5%，通过对50名使用者的跟踪统计，发生不良反应的概率降低了58%。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:
（1）以鲜猪脑为原料进行搅拌，得到鲜猪脑的浓缩液；
（2）对制备的浓缩液进行树脂层析，并抽滤干燥得到浓缩粉：
（3）硅胶粗纯化步骤：将浓缩粉溶于由甲醇、三氯和纯水制备的流动相，然后进行硅胶层析，沉淀干燥得到粗品浓缩粉；
（4）硅胶精纯化步骤：将粗品浓缩粉溶于由甲醇、三氯和纯水制备的层析缓冲液中，然后进行硅胶层析，沉淀干燥得到精品浓缩粉。
2.根据权利要求1所述的一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）包括：猪脑的解冻、分拣杂质、搅拌、压滤、分层、分解，得到鲜猪脑浓缩液。
3.根据权利要求1所述的一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）包括：新树脂的制备以及树脂强化再生、树脂的吸附清洗以及甲醇脱洗、树脂及鲜猪脑浓缩液的浓缩、丙酮沉淀、抽滤干燥，得到浓缩粉。
4.根据权利要求3所述的一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法，其特征在于，所述新树脂的制备以及树脂强化再生的具体步骤为：
（2.1）新树脂用饮用水清洗2BV；树脂强化再生用饮用水层析2BV，放出树脂；
（2.2）放出后的树脂用20%盐酸溶液50L浸泡1.5-2.5小时；
（2.3）浸泡后用饮用水清洗2-4遍，沥干后，用10%氢氧化钠溶液60-100L浸泡1.5-2.5小时；
（2.4）将浸泡后的树脂饮用水清洗至pH=6-8，沥干，然后按树脂：水（v/v）=1:1加入饮用水，装柱备用；
（2.5）树脂每柱洗脱3批，然后按 （2.1）-（2.4）步骤强化再生树脂一次。
5.根据权利要求3所述的一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法，其特征在于，所述流动相按照甲醇：三氯：纯水=30:80:8（V:V:V）的比例进行配比。
6.根据权利要求1或2所述的一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制备方法，其特征在于，所述层析缓冲液按照甲醇：三氯：纯水=40:70:5（V:V:V）的比例进行配比。
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