CN112707852B - 一种大蒜提取物的联合制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出一种大蒜提取物的联合制备方法，属于天然物质提取、分离和纯化领域，能够解决现有技术存在提取工艺制得的成分单一，未能真正实现大蒜原料充分利用的问题。该制备方法包括：1)大蒜提取液制备；2)蒜氨酸酶制备；3)大蒜素制备；4)大蒜多糖和大蒜氨基酸制备。本发明能够应用于大蒜提取物的联合制备方面。

Description

一种大蒜提取物的联合制备方法
技术领域
本发明属于天然物质提取、分离和纯化技术领域，尤其涉及一种大蒜提取物的联合制备方法。
背景技术
大蒜(Allium Sativum L.)作为药食两用植物历史悠久，经大量研究表明，大蒜具有抗菌、消炎、抗血栓、降血脂、抗肿瘤及增强免疫力等多种作用，大蒜中富含糖类、蛋白质、含硫有机化合物、氨基酸类等多种成分，也是大蒜发挥多种生物功效的物质基础。
蒜氨酸酶又称C-S裂解酶，不仅能高效的裂解C-S键，还能催化包括蒜氨酸在内的多种烯丙基半胱氨酸亚砜为烯丙基二硫亚砜，目前多应用于肿瘤治疗等方面，在生物医药行业具有广阔的应用前景；大蒜素是一种蒜氨酸在蒜氨酸酶催化作用下生成的含硫化合物，在适当的条件下可以进一步转化为阿霍烯及二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚等含硫化合物，可阻断亚硝胺的形成，具有抗癌及降低血脂的作用，还对多种病毒、细菌、真菌和幽门螺旋杆菌有明显的抑制作用；大蒜多糖主要为果聚杂多糖，属于菊糖类多糖，占干物质含量的40％左右，其多糖的单糖组成主要是果糖、葡萄糖，大蒜多糖具有多种功效，能起到调节人体免疫力、控制血脂、降低血糖、防治便秘、抗氧化、对肝损伤有良好的保护作用等；大蒜氨基酸作为大蒜中独特的非蛋白类含硫氨基酸，约占其干物质重量的2-15％，主要为精氨酸、蒜氨酸、赖氨酸、丝氨酸及其他含硫氨基酸等，在抗肿瘤、协同降血压、抗菌杀毒、清除自由基、保肝护肝及抗糖尿病等多种药理功效。
目前，专利申请(CN1556102A)提出一种联合制备蒜氨酸与大蒜多糖的方法，但该制备工艺仅简单提取了大蒜中一两类成分，并未实现大蒜原料成分充分利用，因此，如何开发出一种能够提取多种大蒜提取物的联合制备方法，是实现大蒜原料充分利用的重要解决途径。
发明内容
本发明针对现有提取工艺提取成分单一，未能真正实现大蒜原料充分利用的技术问题，提出一种操作简便、成本低廉、原料利用率高、提取物得率高的大蒜提取物的联合制备方法。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种大蒜提取物的联合制备方法，包括如下步骤：
大蒜提取液制备：鲜蒜去皮清洗后于溶剂中打浆、过滤后，制得大蒜提取液；
蒜氨酸酶制备：采用超滤膜设备对所述大蒜提取液进行分离，得到截留液和透析液，所述截留液经盐析沉淀、溶解、脱盐以及冷冻干燥处理后，制得蒜氨酸酶；
大蒜素制备：将所述透析液通过大孔树脂后，收集大孔树脂流出液，再利用洗脱剂洗脱大孔树脂，收集大孔树脂洗脱液，经浓缩干燥处理后，制得大蒜素；
大蒜多糖和大蒜氨基酸制备：将所述大孔树脂流出液通过阳离子交换树脂后，再用纯化水洗脱1-3柱体积，收集阳离子交换树脂流出液和洗脱液，并调节其pH至中性，再经浓缩干燥处理，制得大蒜多糖；
再利用洗脱剂洗脱阳离子交换树脂，收集阳离子交换树脂洗脱液，经浓缩干燥处理后，制得大蒜氨基酸。
作为优选，在所述大蒜提取液制备步骤中，鲜蒜于溶剂中打浆至60-200目，溶剂与鲜蒜的重量比为1-5:1。
作为优选，所述溶剂为水或pH＝6.0-7.5的磷酸盐缓冲溶液。
作为优选，在所述蒜氨酸酶制备步骤中，超滤膜设备为截留分子量2-8万道尔顿的超滤膜设备。
作为优选，在所述蒜氨酸酶制备步骤中，盐析沉淀所用试剂为硫酸铵，其添加量为截留液质量的20-60％，经所述盐析沉淀所得沉淀物为蒜氨酸酶粗品；
溶解所用试剂为pH＝6.0-7.5的磷酸盐缓冲溶液，脱盐具体是在0-5℃流动冰水槽中聚氨酯袋透析30-60h。
作为优选，在所述大蒜素制备步骤中，所用大孔树脂为中等极性或弱极性大孔树脂，透析液通过大孔树脂流速为2-10柱体积/h；
在所述大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤中，阳离子交换树脂为强极性或弱极性阳离子交换树脂，大孔树脂流出液通过阳离子交换树脂的流速为2-10柱体积/h。
作为优选，在所述大蒜素制备步骤中，洗脱剂为质量浓度20-95％甲醇或乙醇水溶液，洗脱体积为3-10柱体积，洗脱速度为1-5柱体积/h；
在所述大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤中，洗脱剂为质量浓度0.1-1％的氨水溶液，洗脱体积为3-20柱体积，洗脱速度为1-5柱体积/h。
作为优选，在所述大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤中，在对阳离子交换树脂洗脱液进行浓缩干燥处理前，还包括纸层析法检测大蒜氨基酸含量。
作为优选，所述纸层析法具体为：
展开剂：正丁醇：甲酸：水＝15:3:2(v/v)；
显色剂：0.4％茚三酮乙醇溶液；
显色与检视：50-80℃加热至斑点清晰，可见光检视。
作为优选，在所述大蒜素制备步骤后，大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤前还包括：HPLC法检测大蒜素含量，其色谱条件为：
色谱柱：C18色谱柱，4.6m×150mm，5μm；
检测波长：245-260nm；
流动相：流动相为体积比为60:40的甲醇和1％甲酸水混合溶液；
流速：0.5-0.8mL/min；
柱温：25-35℃；
进样量：20μL。
与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于：
1、本发明提出了一种大蒜提取物的联合制备方法，该方法通过将超滤法、不同类型吸附柱吸附法等有机结合起来，不仅制得了包括蒜氨酸酶、大蒜素、大蒜氨基酸以及大蒜多糖等四种大蒜提取物，还最大限度的保证了上述几种物质的纯度和品质，真正实现了大蒜原料的充分利用，并获得多种高附加值的产品；
2、本发明提出了一种大蒜提取物的联合制备方法，该方法选用的大孔吸附树脂成本更低廉，且操作简单，更适用于工业化生产；
3、本发明提出了一种大蒜提取物的联合制备方法，经大孔树脂流出的透析液不再具有令人反感的大蒜特殊气味，同时又保留了氨基酸、多糖等活性物质，可以提高产品的接受度。
附图说明
图1为本发明实施例所提供的大蒜提取物的联合制备方法的工艺流程图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例提供了一种大蒜提取物的联合制备方法，包括如下步骤：
S1、大蒜提取液制备：鲜蒜去皮清洗后于溶剂中打浆、过滤后，制得大蒜提取液；
S2、蒜氨酸酶制备：采用超滤膜设备对所述大蒜提取液进行分离，得到截留液和透析液，所述截留液经盐析沉淀、溶解、脱盐以及冷冻干燥处理后，制得蒜氨酸酶；
S3、大蒜素制备：将所述透析液通过大孔树脂后，收集大孔树脂流出液，再利用洗脱剂洗脱大孔树脂，收集大孔树脂洗脱液，经浓缩干燥处理后，制得大蒜素；
S4、大蒜多糖和大蒜氨基酸制备：将所述大孔树脂流出液通过阳离子交换树脂后，再用纯化水洗脱1-3柱体积，收集阳离子交换树脂流出液和洗脱液，并调节其pH至中性，再经浓缩干燥处理，制得大蒜多糖；
再利用洗脱剂洗脱阳离子交换树脂，收集阳离子交换树脂洗脱液，经浓缩干燥处理后，制得大蒜氨基酸。
在上述制备工艺中，蒜氨酸酶的提取纯化主要通过超滤和沉淀两个步骤实现，具体地，先利用分子筛实现蒜氨酸酶与多糖的分离，初步可以让酶活力提高两倍，再利用沉淀进一步提高酶活力，最终酶活力提高了约10倍，与现有技术相比，所得产品酶活力更高。
在一优选实施例中，在所述大蒜提取液制备步骤中，鲜蒜于溶剂中打浆至60-200目，溶剂与鲜蒜的重量比为1-5:1。
在一优选实施例中，所述溶剂为水或pH＝6.0-7.5的磷酸盐缓冲溶液。
在一优选实施例中，在所述蒜氨酸酶制备步骤中，超滤膜设备为截留分子量2-8万道尔顿的超滤膜设备，其中，超滤膜设备的截留分子量具体可选取2、3、4、4、5、6、7或8万道尔顿，也可根据实际所需选取上述范围内的任一数值均落在本发明的保护范围之内。
在一优选实施例中，在所述蒜氨酸酶制备步骤中，盐析沉淀所用试剂为硫酸铵，其添加量为截留液质量的20-60％，经所述盐析沉淀所得沉淀物为蒜氨酸酶粗品；
溶解所用试剂为pH＝6.0-7.5的磷酸盐缓冲溶液，脱盐具体是在0-5℃流动冰水槽中聚氨酯袋透析30-60h。
在一优选实施例中，在所述大蒜素制备步骤中，所用大孔树脂为中等极性或弱极性大孔树脂，透析液通过大孔树脂流速为2-10柱体积/h；
在所述大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤中，阳离子交换树脂为强极性或弱极性阳离子交换树脂，大孔树脂流出液通过阳离子交换树脂的流速为2-10柱体积/h。
在上述优选实施例中，大孔树脂为中等极性或弱极性大孔树脂具体可选用AB-8、D101、HPD-100等型号的大孔树脂，阳离子交换树脂为强极性或弱极性阳离子交换树脂具体可选用D201、D301、732等型号的阳离子交换树脂。
在一优选实施例中，在所述大蒜素制备步骤中，洗脱剂为质量浓度20-95％甲醇或乙醇水溶液，洗脱体积为3-10柱体积，洗脱速度为1-5柱体积/h；
在所述大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤中，洗脱剂为质量浓度0.1-1％的氨水溶液，洗脱体积为3-20柱体积，洗脱速度为1-5柱体积/h。
在一优选实施例中，在所述大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤中，在对阳离子交换树脂洗脱液进行浓缩干燥处理前，还包括纸层析法检测大蒜氨基酸含量。
在一优选实施例中，所述纸层析法具体为：
展开剂：正丁醇：甲酸：水＝15:3:2(v/v)；
显色剂：0.4％茚三酮乙醇溶液；
显色与检视：50-80℃加热至斑点清晰，可见光检视。
在一优选实施例中，在所述大蒜素制备步骤后，大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤前还包括：HPLC法检测大蒜素含量，其色谱条件为：
色谱柱：C18色谱柱，4.6m×150mm，5μm；
检测波长：245-260nm；
流动相：流动相为体积比为60:40的甲醇和1％甲酸水混合溶液；
流速：0.5-0.8mL/min；
柱温：25-35℃；
进样量：20μL。
为了更清楚详细地介绍本发明实施例所提供的大蒜提取物的联合制备方法，下面将结合具体实施例进行描述。
对比例1
本对比例提供了一种大蒜提取物的联合制备方法，具体步骤如下：
(1)大蒜提取液制备：将鲜蒜加入3倍质量的饮用水浸泡1h，流动水去皮漂洗，加入蒜瓣质量5倍的水在打浆机破碎至200目的蒜浆，蒜浆用减压抽滤设备过滤，获得澄清的大蒜提取液备用；
(2)蒜氨酸酶制备：用10万道尔顿的超滤膜设备对大蒜提取液进行分离，得到截留液和透析液，其中，蒜氨酸酶在截留液中，在截留液中搅拌加入30％硫酸铵静置析出沉淀，用离心机离心获得蒜氨酸酶沉淀物，用pH＝5.0的磷酸盐缓冲液将沉淀物溶解，蒜氨酸酶溶液置于聚氨酯袋，在0-5℃流动冰水槽中透析48h去盐，经过冷冻干燥20-40h制得蒜氨酸酶；
(3)大蒜素制备：将步骤(2)制得的透析液通过AB-8型大孔吸附树脂，控制流速为15柱体积/h，使得大蒜素吸附在树脂上，用95％乙醇溶液对大孔树脂进行洗脱，控制流速为8柱体积/h，收集大孔树脂洗脱液，并采用HPLC法检测收集大孔树脂洗脱液中大蒜素的含量，再用旋转蒸发器浓缩干燥，制得大蒜素；
(4)大蒜多糖和大蒜氨基酸制备：将大孔树脂流出液通过732型阳离子交换树脂后，控制流速为15柱体积/h，使得大蒜氨基酸吸附在树脂上，再用3柱体积纯化水冲洗树脂，收集阳离子交换树脂流出液和洗脱液，再加入适量的Na2CO3调节多糖溶液pH至中性，浓缩干燥后制得大蒜多糖；
再利用2％氨水溶液洗脱阳离子交换树脂，控制流速为8柱体积/h，收集阳离子交换树脂洗脱液，利用纸层析法检测大蒜氨基酸含量，经浓缩干燥处理后，制得大蒜氨基酸。
对比例2
本对比例提供了一种大蒜提取物的联合制备方法，具体步骤如下：
(1)大蒜提取液制备：将鲜蒜加入3倍质量的饮用水浸泡1h，流动水去皮漂洗，加入蒜瓣质量5倍的水在打浆机破碎至200目的蒜浆，蒜浆用减压抽滤设备过滤，获得澄清的大蒜提取液备用；
(2)蒜氨酸酶制备：用5000道尔顿的超滤膜设备对大蒜提取液进行分离，得到截留液和透析液，其中，蒜氨酸酶在截留液中，在截留液中搅拌加入30％硫酸铵静置析出沉淀，用离心机离心获得蒜氨酸酶沉淀物，用pH＝8.0的磷酸盐缓冲液将沉淀物溶解，蒜氨酸酶溶液置于聚氨酯袋，在0-5℃流动冰水槽中透析48h去盐，经过冷冻干燥20-40h制得蒜氨酸酶；
(3)大蒜素制备：将步骤(2)制得的透析液通过AB-8型大孔吸附树脂，控制流速为1柱体积/h，使得大蒜素吸附在树脂上，用95％乙醇溶液对大孔树脂进行洗脱，控制流速为0.5柱体积/h，收集大孔树脂洗脱液，并采用HPLC法检测收集大孔树脂洗脱液中大蒜素的含量，再用旋转蒸发器浓缩干燥，制得大蒜素；
(4)大蒜多糖和大蒜氨基酸制备：将大孔树脂流出液通过732型阳离子交换树脂后，控制流速为1柱体积/h，使得大蒜氨基酸吸附在树脂上，再用3柱体积纯化水冲洗树脂，收集阳离子交换树脂流出液和洗脱液，再加入适量的Na2CO3调节多糖溶液pH至中性，浓缩干燥后制得大蒜多糖；
再利用0.05％氨水溶液洗脱阳离子交换树脂，控制流速为0.5柱体积/h，收集阳离子交换树脂洗脱液，利用纸层析法检测大蒜氨基酸含量，经浓缩干燥处理后，制得大蒜氨基酸。
对比例3
本对比例提供了一种大蒜提取物的联合制备方法，具体步骤如下：
(1)脱水蒜片的处理：将鲜脱水蒜片置于8倍饮用水中浸泡1-2h，煮沸10分钟。以蒸软、使蒜氨酸酶失活为准；
(2)制取大蒜透明提取液：将蒸熟后的蒜片用打浆机制成100-150目的蒜浆，用250目滤布过滤得大蒜粗提液。用离心除去悬浮杂质，所得清液用截留分力量为1万的有机膜过滤，得大蒜透明提取液；
(3)阳离子交换树脂吸附浓缩提取液中的蒜氨酸：将大蒜透明提取液通过阳离子交换树脂吸附柱。吸附饱和后用去离子水进行洗脱至无糖和蛋白质。收集滤液和去离子洗脱液即为大蒜多糖溶液；
(4)大蒜多糖液的精制与浓缩干燥：大蒜多糖液中加入0.3％膨润土、明胶和硅溶胶，静置半小时，过板框式过滤机得精制大蒜多糖溶液，在60℃以下真空浓缩至可溶性固形物含量为50％，在60℃烘箱中干燥，粉碎即得大蒜多糖；
(5)蒜氨酸制备：用0.2-0.7摩尔的氨水溶液洗脱阳离子交换柱，收集pH为3.8-8.5范围的洗脱液，得蒜氨酸溶液。经过浓缩干燥后得蒜氨酸粉末。
实施例1
本实施例提供了一种大蒜提取物的联合制备方法，具体步骤如下：
(1)大蒜提取液制备：将鲜蒜加入3倍质量的饮用水浸泡1h，流动水去皮漂洗，加入蒜瓣质量5倍的水在打浆机破碎至200目的蒜浆，蒜浆用减压抽滤设备过滤，获得澄清的大蒜提取液备用；
(2)蒜氨酸酶制备：用8万道尔顿的超滤膜设备对大蒜提取液进行分离，得到截留液和透析液，其中，蒜氨酸酶在截留液中，在截留液中搅拌加入30％硫酸铵静置析出沉淀，用离心机离心获得蒜氨酸酶沉淀物，用pH＝6.5的磷酸盐缓冲液将沉淀物溶解，蒜氨酸酶溶液置于聚氨酯袋，在0-5℃流动冰水槽中透析48h去盐，经过冷冻干燥20-40h制得蒜氨酸酶；
(3)大蒜素制备：将步骤(2)制得的透析液通过AB-8型大孔吸附树脂，控制流速为10柱体积/h，使得大蒜素吸附在树脂上，用95％乙醇溶液对大孔树脂进行洗脱，控制流速为5柱体积/h，收集大孔树脂洗脱液，并采用HPLC法检测收集大孔树脂洗脱液中大蒜素的含量，再用旋转蒸发器浓缩干燥，制得大蒜素；
(4)大蒜多糖和大蒜氨基酸制备：将大孔树脂流出液通过732型阳离子交换树脂后，控制流速为10柱体积/h，使得大蒜氨基酸吸附在树脂上，再用3柱体积纯化水冲洗树脂，收集阳离子交换树脂流出液和洗脱液，再加入适量的Na2CO3调节多糖溶液pH至中性，浓缩干燥后制得大蒜多糖；
再利用1％氨水溶液洗脱阳离子交换树脂，控制流速为5柱体积/h，收集阳离子交换树脂洗脱液，利用纸层析法检测大蒜氨基酸含量，经浓缩干燥处理后，制得大蒜氨基酸。
实施例2
本实施例提供了一种大蒜提取物的联合制备方法，具体步骤如下：
(1)大蒜提取液制备：将鲜蒜加入3倍质量的饮用水浸泡1h，流动水去皮漂洗，加入蒜瓣质量4倍的水在打浆机破碎至200目的蒜浆，蒜浆用减压抽滤设备过滤，获得澄清的大蒜提取液备用；
(2)蒜氨酸酶制备：用5万道尔顿的超滤膜设备对大蒜提取液进行分离，得到截留液和透析液，其中，蒜氨酸酶在截留液中，在截留液中搅拌加入40％硫酸铵静置析出沉淀，用离心机离心获得蒜氨酸酶沉淀物，用pH＝6.0的磷酸盐缓冲液将沉淀物溶解，蒜氨酸酶溶液置于聚氨酯袋，在0-5℃流动冰水槽中透析48h去盐，经过冷冻干燥20-40h制得蒜氨酸酶；
(3)大蒜素制备：将步骤(2)制得的透析液通过AB-8型大孔吸附树脂，控制流速为5柱体积/h，使得大蒜素吸附在树脂上，用80％乙醇溶液对大孔树脂进行洗脱，控制流速为3柱体积/h，收集大孔树脂洗脱液，并采用HPLC法检测收集大孔树脂洗脱液中大蒜素的含量，再用旋转蒸发器浓缩干燥，制得大蒜素；
(4)大蒜多糖和大蒜氨基酸制备：将大孔树脂流出液通过732型阳离子交换树脂后，控制流速为8柱体积/h，大蒜氨基酸吸附在树脂上，再用2柱体积纯化水冲洗树脂，收集阳离子交换树脂流出液和洗脱液，再加入适量的Na2CO3调节多糖溶液pH至中性，浓缩干燥后制得大蒜多糖；
再利用0.5％氨水溶液洗脱阳离子交换树脂，控制流速为3柱体积/h，收集阳离子交换树脂洗脱液，利用纸层析法检测大蒜氨基酸含量，经浓缩干燥处理后，制得大蒜氨基酸。
实施例3
本实施例提供了一种大蒜提取物的联合制备方法，具体步骤如下：
(1)大蒜提取液制备：将鲜蒜加入3倍质量的饮用水浸泡1h，流动水去皮漂洗，加入蒜瓣质量3倍的水在打浆机破碎至100目的蒜浆，蒜浆用减压抽滤设备过滤，获得澄清的大蒜提取液备用；
(2)蒜氨酸酶制备：用3万道尔顿的超滤膜设备对大蒜提取液进行分离，得到截留液和透析液，其中，蒜氨酸酶在截留液中，在截留液中搅拌加入50％硫酸铵静置析出沉淀，用离心机离心获得蒜氨酸酶沉淀物，用pH＝7.0的磷酸盐缓冲液将沉淀物溶解，蒜氨酸酶溶液置于聚氨酯袋，在0-5℃流动冰水槽中透析48h去盐，经过冷冻干燥20-40h制得蒜氨酸酶；
(3)大蒜素制备：将步骤(2)制得的透析液通过AB-8型大孔吸附树脂，控制流速为3柱体积/h，使得大蒜素吸附在树脂上，用50％乙醇溶液对大孔树脂进行洗脱，控制流速为2柱体积/h，收集大孔树脂洗脱液，并采用HPLC法检测收集大孔树脂洗脱液中大蒜素的含量，再用旋转蒸发器浓缩干燥，制得大蒜素；
(4)大蒜多糖和大蒜氨基酸制备：将大孔树脂流出液通过732型阳离子交换树脂后，控制流速为3柱体积/h，使得大蒜氨基酸吸附在树脂上，再用2柱体积纯化水冲洗树脂，收集阳离子交换树脂流出液和洗脱液，再加入适量的Na2CO3调节多糖溶液pH至中性，浓缩干燥后制得大蒜多糖；
再利用0.1％氨水溶液洗脱阳离子交换树脂，控制流速为5柱体积/h，收集阳离子交换树脂洗脱液，利用纸层析法检测大蒜氨基酸含量，经浓缩干燥处理后，制得大蒜氨基酸。
性能测试：
本发明还对利用上述实施例与对比例所述制备方法制得的各类提取物进行酶活、纯度以及含量等检测，具体检测结果如下：
表1各实施例与对比例蒜氨酸酶测定结果
蒜氨酸酶比活力(U/g) 蒜氨酸酶回收率/％
实施例1 1065 81.32％
实施例2 1741 78.39％
实施例3 1653 80.11％
对比例1 105 8.56％
对比例2 234 10.13％
对比例3 / /
由表1所示结果可知，利用本发明实施例1-3所述的制备方法制得的蒜氨酸酶的比活力高达1741U/g，回收率高达81.32％，而对比例1-2制得的蒜氨酸酶的比活力仅达到100-200U/g左右，回收率仅为8％-10％，由此可见，利用本发明所述的制备方法制得的蒜氨酸酶纯度更高，回收率更高，产品附加值更高。
表2各实施例与对比例大蒜素测定结果
大蒜素纯度/％ 大蒜素回收率/％
实施例1 83.53％ 72.84％
实施例2 86.89％ 75.55％
实施例3 84.06％ 70.35％
对比例1 56.48％ 35.22％
对比例2 15.91％ 23.46％
对比例3 / /
由表2所示结果可知，利用本发明实施例1-3所述的制备方法制得的大蒜素的纯度最高可达86.89％，回收率高达75.55％，而对比例1-2制得的大蒜素纯度仅为15％-50％左右，回收率仅为20％-30％，由此可见，利用本发明所述的制备方法制得的大蒜素纯度、回收率均显著高于对比例。
表3各实施例与对比例大蒜多糖测定结果
大蒜多糖含量/％ 大蒜多糖回收率/％
实施例1 50.51％ 85.69％
实施例2 53.64％ 88.37％
实施例3 55.19％ 89.91％
对比例1 45.30％ 72.58％
对比例2 42.19％ 75.37％
对比例3 95％ 50-70％
由表3所示结果可知，利用本发明实施例1-3所述的制备方法制得的大蒜多糖的含量最高可达55.19％，回收率高达89.91％，而对比例1-2制得的大蒜素纯度仅为40％左右，回收率约为70％，由此可见，利用本发明所述的制备方法制得的大蒜多糖含量以及回收率更高。
表4各实施例与对比例大蒜氨基酸测定结果
大蒜氨基酸含量/％ 大蒜氨基酸回收率/％
实施例1 87.59％ 62.36％
实施例2 89.13％ 62.59％
实施例3 91.65％ 63.85％
对比例1 71.52％ 49.36％
对比例2 68.84％ 45.62％
对比例3 / /
由表4所示结果可知，利用本发明实施例1-3所述的制备方法制得的大蒜氨基酸的含量最高可达91.65％，回收率高达63％，而对比例1-2制得的大蒜氨基酸含量仅为60-70％左右，回收率约为40％，由此可见，利用本发明所述的制备方法制得的大蒜氨基酸的含量以及回收率更高。
由上述内容可知，利用本发明所提供的制备方法通过将超滤法、不同类型吸附柱吸附法等有机结合起来，不仅制得了包括蒜氨酸酶、大蒜素、大蒜氨基酸以及大蒜多糖等四种大蒜提取物，还最大限度的保证了上述几种物质的纯度和品质，真正实现了大蒜原料的充分利用。

Claims (9)

1.一种大蒜提取物的联合制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
大蒜提取液制备：鲜蒜去皮清洗后于溶剂中打浆、过滤后，制得大蒜提取液，所述溶剂为水或pH＝6.0-7.5的磷酸盐缓冲溶液；
蒜氨酸酶制备：采用超滤膜设备对所述大蒜提取液进行分离，得到截留液和透析液，所述截留液经盐析沉淀、溶解、脱盐以及冷冻干燥处理后，制得蒜氨酸酶；
大蒜素制备：将所述透析液通过大孔树脂后，收集大孔树脂流出液，再利用洗脱剂洗脱大孔树脂，收集大孔树脂洗脱液，经浓缩干燥处理后，制得大蒜素，洗脱剂为质量浓度20-95％甲醇或乙醇水溶液；
大蒜多糖和大蒜氨基酸制备：将所述大孔树脂流出液通过阳离子交换树脂后，再用纯化水洗脱1-3柱体积，收集阳离子交换树脂流出液和洗脱液，并调节其pH至中性，再经浓缩干燥处理，制得大蒜多糖；
再利用洗脱剂洗脱阳离子交换树脂，收集阳离子交换树脂洗脱液，经浓缩干燥处理后，制得大蒜氨基酸，所述洗脱剂为质量浓度0.1-1％的氨水溶液；
其中，所用大孔树脂为中等极性或弱极性大孔树脂，阳离子交换树脂为强极性或弱极性阳离子交换树脂。
2.根据权利要求1所述的大蒜提取物的联合制备方法，其特征在于，在所述大蒜提取液制备步骤中，鲜蒜于溶剂中打浆至60-200目，溶剂与鲜蒜的重量比为1-5:1。
3.根据权利要求1所述的大蒜提取物的联合制备方法，其特征在于，在所述蒜氨酸酶制备步骤中，超滤膜设备为截留分子量2-8万道尔顿的超滤膜设备。
4.根据权利要求1所述的大蒜提取物的联合制备方法，其特征在于，在所述蒜氨酸酶制备步骤中，盐析沉淀所用试剂为硫酸铵，其添加量为截留液质量的20-60％，经所述盐析沉淀所得沉淀物为蒜氨酸酶粗品；
溶解所用试剂为pH＝6.0-7.5的磷酸盐缓冲溶液，脱盐具体是在0-5℃流动冰水槽中聚氨酯袋透析30-60h。
5.根据权利要求1所述的大蒜提取物的联合制备方法，其特征在于，在所述大蒜素制备步骤中，透析液通过大孔树脂流速为2-10柱体积/h；
在所述大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤中，大孔树脂流出液通过阳离子交换树脂的流速为2-10柱体积/h。
6.根据权利要求1所述的大蒜提取物的联合制备方法，其特征在于，在所述大蒜素制备步骤中，洗脱剂的洗脱体积为3-10柱体积，洗脱速度为1-5柱体积/h；
在所述大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤中，洗脱剂的洗脱体积为3-20柱体积，洗脱速度为1-5柱体积/h。
7.根据权利要求1所述的大蒜提取物的联合制备方法，其特征在于，在所述大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤中，在对阳离子交换树脂洗脱液进行浓缩干燥处理前，还包括纸层析法检测大蒜氨基酸含量。
8.根据权利要求7所述的大蒜提取物的联合制备方法，其特征在于，所述纸层析法具体为：
展开剂：正丁醇：甲酸：水＝15:3:2(v/v)；
显色剂：0.4％茚三酮乙醇溶液；
显色与检视：50-80℃加热至斑点清晰，可见光检视。
9.根据权利要求1所述的大蒜提取物的联合制备方法，其特征在于，在所述大蒜素制备步骤后，大蒜多糖和大蒜氨基酸制备步骤前还包括：HPLC法检测大蒜素含量，其色谱条件为：
色谱柱：C18色谱柱，4.6m×150mm，5μm；
检测波长：245-260nm；
流动相：流动相为体积比为60:40的甲醇和1％甲酸水混合溶液；
流速：0.5-0.8mL/min；
柱温：25-35℃；
进样量：20μL。
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