CN107629105A - 一种风味罗汉果甜苷v的提纯方法 - Google Patents
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Abstract
一种风味罗汉果甜苷V的提纯方法，包括以下步骤：（1）聚酰胺吸附：将罗汉果甜苷粗提物先用水溶解，上聚酰胺树脂层析柱，收集流出液；（2）调碱、超滤：调节流出液的pH值至8～10，静置，粗滤，超滤，收集滤液；（3）离子交换吸附：将滤液依次上阳离子交换树脂柱和阴离子交换树脂柱，收集流出液；（4）脱色、干燥：将流出液上脱色树脂柱，收集流出液，浓缩，喷雾干燥，得风味罗汉果甜苷V。本发明方法所得产品中，罗汉果甜苷V的质量含量＞60%，收率≥90%，后苦味来源物质的质量含量＜0.06%，去除率＞99.5%，无后苦味，口感清爽、清凉，口味纯正，均匀性好，性质稳定；本发明方法简单，可操作性强，适合产业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种罗汉果甜苷V的提纯方法，具体涉及一种风味罗汉果甜苷V的提纯方法。
背景技术
罗汉果含有丰富的罗汉果甜苷V，甜度是蔗糖甜度的300多倍，具有降血糖作用，可以用来辅助治疗糖尿病；且含丰富的维生素C，有抗衰老、抗癌及益肤美容的作用；还有降血脂及减肥的作用，可辅助治疗高脂血症，改善肥胖者的形象。因此，罗汉果甜苷V可广泛应用于营养保健品、婴幼儿食品、膨化食品、调味料、中老年食品、固体饮料、糕点、冷食、方便食品、速溶食品等。
目前，罗汉果甜苷V的应用日益广泛，我国罗汉果提取物行业发展也已初具规模，但是，由于现有罗汉果甜苷提取技术的缺陷，普通罗汉果甜苷提取物产品质量参差不齐，都有不同程度的后苦味、涩味及青果味。研究发现，罗汉果甜苷提取物中的后苦味等不良口感主要来源于其中的鞣质、黄酮类化合物、蛋白质、氨基酸、小肽、盐和色素类杂质等。
CN106176888A、CN106432396A、CN106418423A都公开了罗汉果提取物脱苦的方法，三者分别是用DM130树脂+D101树脂、LX-22树脂+ D101树脂、AB-8树脂+ D101树脂的组合方式进行大孔树脂反复吸附、解析罗汉果甜苷。但是，由于上述大孔树脂对吸附物质的选择性较差，不能针对性的去除异味杂质，对杂味去除作用有限，无法根除后苦味。
CN106617115A公开了一种从罗汉果生产废液中分离可溶性膳食纤维的方法，该方法以罗汉果生产废液为原料，通过絮凝、脱盐、脱色、浓缩干燥等步骤制备罗汉果可溶性膳食纤维。虽然该方法中的技术步骤，可以针对性的去除罗汉果生产过程中所产生废液中的杂质、杂味，得到膳食纤维（不带甜味），但是，由于该方法与本发明方法的目标产物不同，因此，该方法无法去除罗汉果甜苷粗提物中有后苦味的杂质、杂味。
CN104059122A公开了一种高纯度罗汉果皂苷Ⅴ的制备方法，该方法以新鲜罗汉果为原料，通过去离子水加热萃取、浓缩、大孔吸附树脂分离、洗脱、浓缩、阳阴离子交换树脂分离、浓缩等步骤得到罗汉果皂苷Ⅴ。但是，大孔吸附树脂分离的选择性差，且阳、阴离子交换树脂分离去除杂质的种类和数量有限，因此，该方法不能去除产品中的不良风味物质。
CN1907091A公开了一种除去罗汉果提取物回苦味的方法，该方法先将罗汉果提取物粗品用纯水溶解，再依次通过阴离子交换树脂和阳离子交换树脂，或混合型离子交换树脂，或依次通过阴离子交换膜和阳离子交换膜，最后喷雾干燥得到脱苦味的罗汉果提取物。但是，该方法的局限性在于，其对离子交换树脂或离子交换膜不吸附的电中性、不电离的杂质、杂味物质无法去除。
CN103923152A公开了一种罗汉果甙V的提取方法，该方法以罗汉果鲜果为原料，经清洗、破碎、糖化、水提取和浓缩、沉降离心、多柱大孔吸附树脂分段解析、离子交换、浓缩、硅胶精制、浓缩喷雾等步骤获得最终产品罗汉果甙V提取物。但是，该方法冗繁复杂、周期长、成本高，不适用于工业化生产。
CN107156563A公开了一种鲜罗汉果脱色浓缩汁的制备工艺，该方法以罗汉果鲜果为原料，经糖化、选果和洗果、破碎、渗漉提取、蝶式离心、微滤、超滤、聚酰胺、脱色树脂、阳离子树脂、膜浓缩、活性炭、陶瓷膜、真空浓缩等步骤，得到鲜罗汉果脱色浓缩汁。但是，该方法的局限在于，无法除去影响罗汉果提取物风味的重要成分——蛋白质；此外，该方法得到的浓缩汁中罗汉果苷V的含量很低，非甜苷成分占固形物的比重很大，风味、口感等与固体提取物产品无可比性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种产品纯度高、收率高、苦味去除彻底，且工艺过程可操作性强，安全，环保，适宜于工业化生产的风味罗汉果甜苷V的提纯方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种风味罗汉果甜苷V的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）聚酰胺吸附：将罗汉果甜苷粗提物先用水溶解，再将罗汉果甜苷水溶液上聚酰胺树脂层析柱，收集流出液；
（2）调碱、超滤：用碱液调节步骤（1）所得流出液的pH值至8～10，静置，粗滤，再用超滤膜超滤，收集滤液；
（3）离子交换吸附：将步骤（2）所得滤液依次上阳离子交换树脂柱和阴离子交换树脂柱，收集流出液；
（4）脱色、干燥：将步骤（3）所得流出液上脱色树脂柱，收集流出液，浓缩，喷雾干燥，得风味罗汉果甜苷V。
优选地，步骤（1）中，所述罗汉果甜苷粗提物中罗汉果甜苷V的质量含量为10～55%（更优选30～50%）。
优选地，步骤（1）中，所述罗汉果甜苷粗提物中后苦味来源物质的质量含量为5～15%（更优选10～14%），其中，鞣质的质量含量为2～5%（更优选3.0～4.8%），黄酮类化合物的质量含量为2～6%（更优选3～5%）。罗汉果甜苷粗提物中的后苦味主要来源于其中所含的鞣质、黄酮类化合物、蛋白质、氨基酸、小肽、盐和色素类杂质。
优选地，步骤（1）中，所述水的用量为罗汉果甜苷粗提物质量的5～12倍（更优选6～10倍）。将罗汉果甜苷粗提物溶于水后，更有利于后续的层析、超滤和脱色；若水的用量过少，则物料的浓度过高，造成层析过程对杂质的吸附量减少，并导致超滤阻力增大，使得杂质去除不彻底；若水的用量过多，则物料浓度过低，造成后续步骤处理量增大，导致能源和时间的浪费。
优选地，步骤（1）中，所述聚酰胺树脂的用量为罗汉果甜苷粗提物质量的1～3倍。
优选地，步骤（1）中，所述聚酰胺树脂的目数为50～200目。
优选地，步骤（1）中，所述聚酰胺树脂层析柱的高径比为2～10:1，上柱的流速为0.4～10BV/h（更优选0.5～5.0BV/h）。
步骤（1）中，聚酰胺吸附的目的是去除罗汉果甜苷粗提物中的鞣质和黄酮类化合物；若聚酰胺树脂的用量过少、聚酰胺层析柱高径比过小或流速过快，都将使得杂质难以充分吸附；若聚酰胺树脂用量过多、聚酰胺层析柱高径比过大或流速过小，都将延长生产的周期并增加生产的成本。
优选地，步骤（2）中，所述碱液的pH值为8～10，其中的碱为氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化钾等中的一种或几种。调节流出液pH值的目的是将溶液的pH值调节至罗汉果甜苷粗提物中所含蛋白质的等电点，使其析出；由于只有在等电点范围内，蛋白质的溶解度才最小，所以，调节后的pH值过高或过低，都将导致蛋白质析出不彻底。
优选地，步骤（2）中，所述静置的时间为2～8h（更优选4～6h）。若静置是时间过短，将导致蛋白质的析出不完全；若静置时间过长，将导致生产周期的延长。
优选地，步骤（2）中，所述超滤膜的截留分子量为4000～8000D。超滤的作用是除去上一步骤析出的蛋白质。若超滤膜的截留分子量过小，则将造成过滤速度慢、过滤压力和温度偏高；若超滤膜的截留分子量过大，则少量微小颗粒杂质将透过超滤膜，导致固液分离效果不佳。
优选地，步骤（3）中，所述阳离子交换树脂和阴离子交换树脂的总用量为罗汉果甜苷粗提物质量的2～6倍，阳离子交换树脂和阴离子交换树脂的质量之比为1～2:1。
优选地，步骤（3）中，所述阳离子交换树脂和阴离子交换树脂柱的高径比均为1～12:1（更优选4～10:1），上柱的流速均为0.5～5.0BV/h（更优选1～3BV/h）。
步骤（3）中，离子交换吸附的目的是除去罗汉果甜苷粗提物中的氨基酸、小肽和盐；若阳、阴离子交换树脂用量过少，阳、阴离子交换树脂柱高径比过小或流速过快，则杂质都将难以充分吸附；若阳、阴离子交换树脂用量过多，阳、阴离子交换树脂柱高径比过大或流速过小，都将延长生产的周期并增加生产的成本。阳离子交换树脂去除的是过量的碱、带正电荷的氨基酸、小肽和其它金属离子；而阴离子交换树脂去除的是带负电荷的氨基酸、小肽和其它阴离子基团。由于阳离子交换树脂可以中和上一步骤超滤滤液中的碱，并吸附部分杂质，以减小阴离子交换树脂的工作负担，发挥其最大的脱色作用，所以，需要依次上阳离子交换树脂柱和阴离子交换树脂柱，先后顺序不能调换。
优选地，步骤（3）中，所述阳离子交换树脂的型号为001×7、001×8、001×16、D001、D113或D152等。
优选地，步骤（3）中，所述阴离子交换树脂的型号为201×7、D201、D301、D296或D315等。
优选地，步骤（4）中，所述脱色树脂的用量为罗汉果甜苷粗提物质量的1～3倍。
优选地，步骤（4）中，所述脱色树脂柱的高径比为1～12:1（更优选4～10:1），上柱的流速为0.4～5.0 BV/h（更优选0.5～3.0 BV/h）。
步骤（4）中，使用脱色树脂的目的是除去色素类杂质；若脱色树脂用量过少、脱色树脂柱高径比过小或流速过快，则杂质都将难以充分吸附；若脱色树脂用量过多、脱色树脂柱高径比过大或流速过小，都将延长生产的周期并增加生产的成本。
优选地，步骤（4）中，所述脱色树脂的型号为D941、D280、ADS-7或SQ338等。
优选地，步骤（4）中，所述浓缩为真空减压浓缩，浓缩至固形物含量为20～30白利度；所述喷雾干燥的进风温度为160～200℃，出风温度为80～130℃。
从总体来看，必须按照聚酰胺吸附，调碱、超滤，离子交换吸附，脱色、干燥这样的顺序进行，其先后顺序不能调换：先在中性水溶液中通过聚酰胺，除去可以对碱发生反应、易变性的鞣质和黄酮类化合物，因此不能先调碱；超滤放在调碱之后是因为调碱之后蛋白质在等电点条件下溶解度变小会有析出，有析出才可以用超滤除去；阳、阴离子交换树脂放在脱色树脂之前是对脱色树脂的保护，确保通过脱色树脂之后的物料符合质量要求。
本发明方法的原理如下：将罗汉果甜苷粗提物溶解于水，先上聚酰胺树脂可除去鞣质和黄酮类化合物，再调节pH值至等电点降低蛋白质的溶解度，超滤除去蛋白质，然后依次上阳、阴离子交换树脂除去氨基酸、小肽和盐，最后用脱色树脂将色素类杂质除去。如此可将罗汉果甜苷提取物中的苦味等杂味物质除去，得到风味罗汉果甜苷V。
本发明方法的有益效果如下：
（1）按照本发明方法所得风味罗汉果甜苷V产品中，罗汉果甜苷V的质量含量＞60%，收率≥90%，后苦味来源物质的质量含量＜0.06%，去除率＞99.5%，其中，鞣质的质量含量≤0.02%，去除率＞99.5%，黄酮类化合物的质量含量≤0.015%，去除率＞99.5%，说明已彻底去除传统罗汉果提取物中的不良后苦味，其口感清爽、清凉，口味纯正，均匀性好，性质稳定；
（2）本发明方法只用水作为溶媒，不使用任何有机溶剂，整个生产过程污水零排放，真正做到了清洁生产，安全、环保；
（3）本发明方法简单，可操作性强，适合产业化生产。
附图说明
图1是1%蔗糖、传统甜苷V50%与本发明实施例1风味罗汉果甜苷V产品的电子舌品评检测数据对比图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步说明。
本发明实施例所使用的罗汉果甜苷粗提物Ⅰ（罗汉果甜苷V的质量含量为50%；后苦味来源物质的质量含量为12.02%，其中，鞣质的质量含量为4.31%，黄酮类化合物的质量含量为3.53%）和罗汉果甜苷粗提物Ⅱ（罗汉果甜苷V的质量含量为45%；后苦味来源物质的质量含量为13.65%，其中，鞣质的质量含量为4.69%，黄酮类化合物的质量含量为3.75%）均购于湖南华诚生物资源有限公司；本发明实施例所使用的聚酰胺树脂，各型号的阳、阴离子交换树脂均购于天津南开和成科技有限公司；本发明实施例所使用的原材料或化学试剂，若无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
本发明实施例采用高效液相色谱外标法对罗汉果甜苷V及后苦味来源物质的含量进行检测。
实施例1
（1）聚酰胺吸附：将1kg罗汉果甜苷粗提物Ⅰ先用8L水溶解，再将罗汉果甜苷水溶液以流速1BV/h上聚酰胺树脂层析柱（聚酰胺树脂的目数为100目，用量为2kg，聚酰胺层析柱的高径比为5:1），收集流出液；
（2）调碱、超滤：用碱液调节步骤（1）所得流出液的pH值至10，静置4h，粗滤，再用截留分子量为6000D的超滤膜超滤，收集滤液；
（3）离子交换吸附：将步骤（2）所得滤液依次上阳离子交换树脂柱（阳离子交换树脂的型号为001×7，用量为2kg，阳离子交换树脂柱的高径比为6:1）和阴离子交换树脂柱（阴离子交换树脂的型号为201×7，用量为2kg，阴离子交换树脂柱的高径比为6:1），上柱的流速均为1.5BV/h，收集流出液；
（4）脱色、干燥：将步骤（3）所得流出液以流速1BV/h上脱色树脂柱（脱色树脂的型号为D941，用量为2kg，阳离子交换树脂柱的高径比为6:1），收集流出液，真空减压浓缩至固形物含量为20白利度，在进风温度为170℃，出风温度为90℃的条件下，进行喷雾干燥，得0.73kg风味罗汉果甜苷V。
经高效液相色谱外标法检测，本实施例所得风味罗汉果甜苷V中罗汉果甜苷V的质量含量为65.5%，罗汉果甜苷V的收率为95.63%；后苦味来源物质的质量含量为0.058%，去除率为99.52%，其中，鞣质的质量含量为0.015%，去除率为99.65%，黄酮类化合物的质量含量为0.01%，去除率为99.72%。
实施例2
（1）聚酰胺吸附：将2kg罗汉果甜苷粗提物Ⅰ先用20L水溶解，再将罗汉果甜苷水溶液以流速0.5BV/h上聚酰胺树脂层析柱（聚酰胺树脂的目数为200目，用量为6kg，聚酰胺层析柱的高径比为8:1），收集流出液；
（2）调碱、超滤：用碱液调节步骤（1）所得流出液的pH值至10，静置6h，粗滤，再用截留分子量为4000D的超滤膜超滤，收集滤液；
（3）离子交换吸附：将步骤（2）所得滤液依次上阳离子交换树脂柱（阳离子交换树脂的型号为001×16，用量为7kg，阳离子交换树脂柱的高径比为10:1）和阴离子交换树脂柱（阴离子交换树脂的型号为D201，用量为5kg，阴离子交换树脂柱的高径比为10:1），上柱的流速均为1BV/h，收集流出液；
（4）脱色、干燥：将步骤（3）所得流出液以流速0.5BV/h上脱色树脂柱（脱色树脂的型号为D280，用量为5kg，阳离子交换树脂柱的高径比为10:1），收集流出液，真空减压浓缩至固形物含量为30白利度，在进风温度为180℃，出风温度为100℃的条件下，进行喷雾干燥，得1.2kg风味罗汉果甜苷V。
经高效液相色谱外标法检测，本实施例所得风味罗汉果甜苷V中罗汉果甜苷V的质量含量为75.2%，罗汉果甜苷V的收率为90.24%；后苦味来源物质的质量含量为0.04%，去除率为99.67%，其中，鞣质的质量含量为0.02%，去除率为99.54%，黄酮类化合物的质量含量为0.015%，去除率为99.58%。
实施例3
（1）聚酰胺吸附：将1kg罗汉果甜苷粗提物Ⅱ先用10L水溶解，再将罗汉果甜苷水溶液以流速2BV/h上聚酰胺树脂层析柱（聚酰胺树脂的目数为150目，用量为2.5kg，聚酰胺层析柱的高径比为10:1），收集流出液；
（2）调碱、超滤：用碱液调节步骤（1）所得流出液的pH值至9.5，静置5h，粗滤，再用截留分子量为5000D的超滤膜超滤，收集滤液；
（3）离子交换吸附：将步骤（2）所得滤液依次上阳离子交换树脂柱（阳离子交换树脂的型号为001×8，用量为2.5kg，阳离子交换树脂柱的高径比为10:1）和阴离子交换树脂柱（阴离子交换树脂的型号为D301，用量为2.5kg，阴离子交换树脂柱的高径比为10:1），上柱的流速均为2BV/h，收集流出液；
（4）脱色、干燥：将步骤（3）所得流出液以流速1.5BV/h上脱色树脂柱（脱色树脂的型号为ADS-7，用量为2kg，阳离子交换树脂柱的高径比为8:1），收集流出液，真空减压浓缩至固形物含量为20白利度，在进风温度为190℃，出风温度为110℃的条件下，进行喷雾干燥，得0.69kg风味罗汉果甜苷V。
经高效液相色谱外标法检测，本实施例所得风味罗汉果甜苷V中罗汉果甜苷V的质量含量为60.5%，罗汉果甜苷V的收率为92.77%；后苦味来源物质的质量含量为0.048%，去除率为99.65%，其中，鞣质的质量含量为0.015%，去除率为99.68%，黄酮类化合物的质量含量为0.015%，去除率为99.6%。
对实施例1～3所得风味罗汉果甜苷V的特性进行品评。
方法一：采用21人组盲试品评。
甜度测试的方法为：以1%、5%和10%的蔗糖溶液为对照，配制与其甜度相当的风味罗汉果甜苷V溶液，通过计算风味罗汉果甜苷V与蔗糖用量的比值，评价其甜度；滋味、气味（甜感和口感）测试的方法为：以1%、5%和10%的蔗糖溶液为对照，配制与其甜度相当的风味罗汉果甜苷V溶液，评价其滋味、气味（甜感和口感）；通过目测测定均匀度和稳定性；结果如表1所示。
表1 本发明实施例1～3所得风味罗汉果甜苷V的特性品评结果
由表1可知，本发明实施例1～3所得风味罗汉果甜苷V与蔗糖非常相似，均无传统罗汉果提取物的不良后苦味，口感清爽、清凉，口味纯正，均匀性好，性质稳定。
方法二：
采用TS-5000Z智能味觉分析系统即电子舌进行品评，采用同人舌头味觉细胞工作原理相类似的人工脂膜传感器技术，可以客观数字化的评价食品或药品等样品的苦味、涩味、酸味、咸味、鲜味、甜味、原料本味等基本味觉感官指标，同时还可以分析苦的回味、涩的回味和鲜的回味（丰富度）。以质量浓度1%的蔗糖为标准、分别对传统的罗汉果甜苷V50%产品和实施例1所得风味罗汉果甜苷V的电子舌品评检测数据进行绘图，如图1所示。
由图1可知，以质量浓度1%的蔗糖为标准，传统的罗汉果甜苷V50%产品的涩味和后苦味比较明显；实施例1风味罗汉果甜苷V则无涩味和后苦味，与蔗糖一致，且实施例1风味罗汉果甜苷V在回甘、柔和、清新及甜度方面都优于蔗糖和传统的罗汉果甜苷V50%产品。因此，本发明实施例1所得风味罗汉果甜苷V的脱苦、去涩味效果是十分明显的。
Claims (8)
1.一种风味罗汉果甜苷V的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）聚酰胺吸附：将罗汉果甜苷粗提物先用水溶解，再将罗汉果甜苷水溶液上聚酰胺树脂层析柱，收集流出液；
（2）调碱、超滤：用碱液调节步骤（1）所得流出液的pH值至8～10，静置，粗滤，再用超滤膜超滤，收集滤液；
（3）离子交换吸附：将步骤（2）所得滤液依次上阳离子交换树脂柱和阴离子交换树脂柱，收集流出液；
（4）脱色、干燥：将步骤（3）所得流出液上脱色树脂柱，收集流出液，浓缩，喷雾干燥，得风味罗汉果甜苷V。
2.根据权利要求1所述风味罗汉果甜苷V的提纯方法，其特征在于：步骤（1）中，所述罗汉果甜苷粗提物中罗汉果甜苷V的质量含量为10～55%；所述罗汉果甜苷粗提物中后苦味来源物质的质量含量为5～15%，其中，鞣质的质量含量为2～5%，黄酮类化合物的质量含量为2～6%；所述水的用量为罗汉果甜苷粗提物质量的5～12倍。
3.根据权利要求1或2所述风味罗汉果甜苷V的提纯方法，其特征在于：步骤（1）中，所述聚酰胺树脂的用量为罗汉果甜苷粗提物质量的1～3倍；所述聚酰胺树脂的目数为50～200目；所述聚酰胺树脂层析柱的高径比为2～10:1，上柱的流速为0.4～10BV/h。
4.根据权利要求1～3之一所述风味罗汉果甜苷V的提纯方法，其特征在于：步骤（2）中，所述碱液的pH值为8～10，其中的碱为氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化钾中的一种或几种；所述静置的时间为2～8h。
5.根据权利要求1～4之一所述风味罗汉果甜苷V的提纯方法，其特征在于：步骤（2）中，所述超滤膜的截留分子量为4000～8000D。
6.根据权利要求1～5之一所述风味罗汉果甜苷V的提纯方法，其特征在于：步骤（3）中，所述阳离子交换树脂和阴离子交换树脂的总用量为罗汉果甜苷粗提物质量的2～6倍，阳离子交换树脂和阴离子交换树脂的质量之比为1～2:1；所述阳离子交换树脂和阴离子交换树脂柱的高径比均为1～12:1，上柱的流速均为0.5～5.0BV/h；所述阳离子交换树脂的型号为001×7、001×8、001×16、D001、D113或D152；所述阴离子交换树脂的型号为201×7、D201、D301、D296或D315。
7.根据权利要求1～6之一所述风味罗汉果甜苷V的提纯方法，其特征在于：步骤（4）中，所述脱色树脂的用量为罗汉果甜苷粗提物质量的1～3倍；所述脱色树脂柱的高径比为1～12:1，上柱的流速为0.4～5.0 BV/h；所述脱色树脂的型号为D941、D280、ADS-7或SQ338。
8.根据权利要求1～7之一所述风味罗汉果甜苷V的提纯方法，其特征在于：步骤（4）中，所述浓缩为真空减压浓缩，浓缩至固形物含量为20～30白利度；所述喷雾干燥的进风温度为160～200℃，出风温度为80～130℃。
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- 2017-11-02 CN CN201711064166.XA patent/CN107629105B/zh active Active
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Denomination of invention: Purification of Mogroside V from Siraitia grosvenorii Effective date of registration: 20210422 Granted publication date: 20200207 Pledgee: CITIC Bank Changsha branch Pledgor: HUNAN HUACHENG BIOTECH, Inc. Registration number: Y2021980002898 |
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Denomination of invention: A Purification Method of Flavored Siraitia grosvenorii Glycoside V Granted publication date: 20200207 Pledgee: Agricultural Bank of China Limited Changsha Wangcheng District sub branch Pledgor: HUNAN HUACHENG BIOTECH, Inc. Registration number: Y2024980000707 |