CH622948A5

CH622948A5 -

Info

Publication number: CH622948A5
Application number: CH1562576A
Authority: CH
Inventors: Kiro Asano; Tsuyoshi Saito; Hiromitsu Tanaka; Satoru Enomoto
Original assignee: Kureha Chemical Ind Co Ltd
Priority date: 1975-12-18
Filing date: 1976-12-13
Publication date: 1981-05-15
Also published as: HU176827B; US4202885A; SU786855A3; AT347031B; DK147766C; MX4646E; ATA934876A; DE2655844A1; PL101771B1; DK147766B; AU496814B2; CA1055487A; JPS5628152B2; FR2335235A1; IN142077B; DE2655844B2; CS200503B2; ES454304A1; SE435678B; DD129330A5

Description

Aufgabe der Erfindung ist ein verbessertes Verfahren zur Herstellung von Antitumor-Mittel, das stickstoffhaltiges Polysaccharid enthält, durch Behandlung von Pilz aus der Klasse der Basidiomyzeten.

Das Verfahren der Erfindung ist dadurch gekennzeichnet, dass der Pilz künstlich in einem Medium gezüchtet und das so erhaltene Pilzmaterial mit einem wässrigen Lösungsmittel unter Druck im Bereich von 1,8 bis 20 kg/cm2 bei Temperaturen im Bereich von 120-200° C behandelt wird.

Die Bezeichnung «Pilz aus der Klasse der Basidiomyzeten» umfasst hier die Myzelen und/oder Fruchtkörper der Pilze und für das Verfahren der Erfindung sind die Basidiomyzeten aus folgenden Familien verwendbar:

Polyporaceae, Mucronoporaceae, Tricholomataceae, Hy-grophoraceae, Bolbitiaceae, Strophariaceae, Cortinariaceae, Rhodophyllaceae, Boletaceae, Hydnaceae, Fistulinaceae, Tremellaceae, Phallineae, Clathraceae, Clavariaceae, Cortici-aceae, Agaricaceae, Coprinaceae, Russulaceae, Auriculariaceae, Coniophoraceae und Lycoperdalaceae von den Arten Rhizo-pogon und Calostoma in der Pflanzenklassifikation. Solche Basidiomyzeten sind bekannt und umfassen z. B. Trametes sanguinea, Trametes cinnabaria, Polyporellus squamosus (Fr.) Karst., Daedaleopsis styracina (P. Henn. et shir) Imazeki, Fomitopsis pinicola (Fr.) Karst., Lenzites butulina (Fr.), Glo-eophyllum saepiarium (Fr.) Karst., Ganoderma boninense Pat., Fomes fomentavius (Fr.) Kickx, Grifola gigantea (Fr.) Pilât, Favolus alveolarius (Fr.) Quél, Coriolus versicolor (Fr.) Quél, Coriolus hirsutus (Fr.) Quél, Coriolus pargamenus (Fr.) Pat., Coriolus consors (Besh.) Imaz, Coriolus conchifer (Schw.) Pat., Coriolus pubescens (Fr.) Quél, Coriolus biformis (Klotz), Hirschioporus abietinus, Laetiporus sulphureus, Grifola frondosa, Porodisculus pendulus, Rigidoporus ulmarius, Oxyporus ravidus, Tyromyces lacteus, Cryptoporus volvatus, Poria vaporaria, Irpex lacteus, Lamptermoyces japonicus,

Tricholomopsis (Fr.) Sing. (Tricholoma rutilans (Fr.) Quél), Armillariella melled, Laccaria amethystina, Ischnoderma resi-nosum (Fr.) Karst. (Polyporus resinosum Fr.), Lyophyllum ulmarium, Lyophyllum aggregatum, Tricholoma matsutake, 5 Hohenbuhelia serotina (Fr.) Sing., Cantharellula cyathiformis (Fr.) Sing., Panellus stipieus (Fr.) Karst., Schizophyllum commune (Fr.), Panus conchatus (Fr.), Pleurotus ostreatus (Fr.) Quél, Oudemansiella radicata (Fr.) Sing., Lentinus edo-des (Berk.) Sing., Flammulina velutipes, Mycena pura, Lepista io subnuda, Clitocybe infundibnliformus, Tricholomopsis platy-phylla (Fr.) Sing. (Collybia platyphylla (Fr.) Kummer), Tre-mellodon gelatinosum (Fr.), Aleurodiscus amorphus Rabenh., Lycoperdon pyriforme Pers., Phaeolus schweinitzii (Fr.) Pat., Cryptoderma pini (Fr.) Imazeki, Phellinus gilvus (Fr.) Pat., 15 Stereum hirsutum (Fr.) Meruluis tremellosus (Fr.) Lopharia mirabilis (Berk, et Br.) Pat., Echinodontium tsugecola (P. Henn. et Shirai), Hygrocybe ovina (Fr.) Kühn. (Hygrophorus ovinus Fr.), Agaricus bisporus (Lange) Sing. (Psalliota horten-sis (Cke.) W. G. Smith var. bispora Lange), Phaeolepiota 20 aurea (Fr.) Maire (Pholiota aurea (Fr.) Gill.; Cystoderma aureum (Fr.) Kühn, et Romagn.; Pholiota vahln (Fr.) Lange), Coprinus atramentarius (Fr.) Fr., Agrocybe arvalis (Fr.) Fayod var. tuberigena (Quél) Konr. et Maubl. (Naucoria arvalis (Fr.) Quél var. tuberigena Quél.; Agrocybe tuberosa (Henn.) 25 Sing.), Gymnopilus aeruginosus (Peck) Sing. (Pholiota aeruginosa Peck), Rhodophyllus murraii (Berk, et Curt.) Sing. (Entoloma murraii (Berk, et Curt.) Sacc.), Boletus edulis Fr., Lactarius volemus (Fr.), Auricularia polytricha (Mont.) Sacc., Rozites caperata (Fr.) Karst. (Pholiota caperata (Fr.) Gill.), 30 Suillus granulatus (Fr.) Kuntze (Bektus granulatus Fr.), Rus-sula delica Fr. (Russula chloroides (Krombh.) Bres.), Phlogio-tis helvelloides (Fr.) Martin (Guepinia helvelloides Fr.; Gyro-cephalus rufus Bref.), Gyroporus castaneus (Fr.) Quél., Auricularia auriculajudae (Fr.) Quél., Cyrophana lacrymans 35 (Fr.) Pat. (Merulius lacrymans Fr.), Onnia orientalis (Lloyd) Imazeki (Polyporus orientalis Lloyd), Fuscoporia obliqua (Fr.) Aoshima (Poria obliqua Fr.), Inonotus cuticularis (Fr.) Karst. (Polyporus cuticularis Fr.; Polyporus mikadoi Lloyd), Hygrophorus leucophaeus (Fr.) Gill. Agrocybe cylindracea (Fr.) 40 Maire (Pholiota cylindracea (Fr.) Gill.; P, aegerita (Brig.) Quél.), Naematoloma sublateritium (Fr.) Karst., Pholiota na-meko (T. Ito) S. Ito et Imai (Pholiota glutinosa Kawam.), Cor-tinarius elatior (Fr.), Rhodophyllus abortivus (Berk, et Curt.) Sing. (Clitopilus abortivus (Berk, et Curt.) Sacc.), Suillus gre-45 villei (Klotzch.) Sing., Creolophus spathulatus Imazeki, Fistulina hepatic (Fr.), Protodaedalea hispida Imazeki, Dictyophora indusiata (Pers.) Fisch., Lysurus mokusin (Pers.) Fr. g. sinensis (Lloyd) Kobayasi, Lycoperdon gemmatum (Fr.), Rhizopogon rubescens (Tul.) Tul., Calostoma japonicum P. Henn., Rama-50 ria flava (Fr.) Quél (Clavaria flava Fr.) und Rhodophyllus rhodopolius (Fr.) Quél. (Entoloma rhodopolium (Fr.) Quél.). (Siehe die Publikation «Coloured Illustrations of Fungi of Japan» von Rokuya Imazeki und Tsuguo Hongo, Bände I, 1974 und II, 1975). Das aus solchen oder ähnlichen Basi-55 diomyzeten durch künstliche Züchtung in einem Medium gewonnene Material, insbesondere die Myzelen und/oder Fruchtkörper, werden dann mit wässrigem Lösungsmittel unter Druck im genannten Bereich und Temperaturen im genannten Bereich behandelt.

«o Es ist überraschend, dass das durch künstliche Züchtung erhaltene Pilzmaterial bei Behandlung unter diesen Bedingungen eine bessere Ausbeute an Antitumor-Mittel ermöglicht. Vielmehr wäre eine Zersetzung der aktiven Komponenten zu erwarten gewesen.

es Das durch künstliche Züchtung gewonnene Material, insbesondere die Myzelen und/oder Fruchtkörper, können zur Behandlung mit wässrigem Medium unter den genannten Druck- und Temperaturbedingungen in einen Druckbehälter

3

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gegeben werden, z. B. in einen Autoklav für Chargenbetrieb oder einen rohrartigen Durchflussextraktor, und zwar zusammen mit dem wässrigen Lösungsmittel. Im Druckbehälter wird das Material dann bei den genannten Temperaturen behandelt. Der Behandlungsdruck ist vorzugsweise dem Gesamtdampfdruck des im Behälter enthaltenen wässrigen Lösungsmittels mindestens äquivalent und liegt stets im Bereich von 1,8 bis 20 kg/cm2, vorzugsweise unter 16 kg/cm2.

Die Behandlungsdauer kann der angewendeten Temperatur zweckmässig angepasst werden, liegt aber vorzugsweise im Bereich von 5-360 min. Eine entsprechende Behandlungsdauer kann daher innerhalb des oben genannten Bereiches entsprechend der angewendeten Temperatur im Bereich von 120-200° C gewählt werden. Behandlungstemperaturen unter 120° C ergeben keine zufriedenstellenden Effekte, und Temperaturen von über 200° C können zu Zersetzungen der aktiven Komponente führen, was das Verfahren praktisch undurchführbar macht. Eine Behandlungsdauer von weniger als 5 min kann zu unbefriedigenden Wirkungen führen, während eine Behandlungsdauer von mehr als 360 min die Zersetzung der aktiven Komponente bewirken kann.

Bei der praktischen Durchführung des erfindungsgemässen Verfahrens kann die Behandlungsoperation wiederholt unter den oben genannten Bedingungen durchgeführt werden. Das Ausgangsmaterial (d.h. die Basidiomyzeten) kann aber auch vor der eigentlichen Behandlungsoperation in wässriges Lösungsmittel bei einer Temperatur von weniger als 100° C getaucht werden. Ferner kann man das erhaltene Material nach der Behandlung mit wässrigem Lösungsmittel bei Temperaturen von weniger als 100° C waschen.

Für das erfindungsgemässe Verfahren sind die wässrigen Lösungsmittel geeignet, wie sie auch bei den bekannten Verfahren verwendet werden, d.h. beispielsweise reines Wasser, wässrige saure oder alkalische Lösungen, wässrige Harnstofflösungen und Aminosäurelösungen. Das wässrige Lösungsmittel wird meist in Anteilen entsprechend dem Fünf- bis Hundertfachen, vorzugsweise Zehn- bis Fünfzigfachen, des Gewichtes des Ausgangsmaterials verwendet. Wasser oder verdünnte Alkalilösungen von weniger als In werden als wässriges Lösungsmittel für das Verfahren besonders bevorzugt.

Das so erhaltene Produkt kann dann durch Ultrafiltrieren, Aussalzen, Dialyse, Umkehrosmose oder auf anderem Wege gereinigt werden und die Reinigungsmethoden können entweder einzeln oder in Kombination miteinander angewendet werden, um die niedermolekularen Stoffe (solche mit Molekulargewichten von weniger als 5000) aus dem Produkt der Behandlung zu entfernen. Eine solche Raffination liefert ein stickstoffhaltiges Polysaccharid mit ausgezeichneter Anti-tumor-Aktivität.

Die aus stickstoffhaltigen Polysacchariden aufgebauten Substanzen, die nach dem erfindungsgemässen Verfahren erhältlich sind, zeigen eine ausgezeichnete Antitumor-Aktivität, mit besonders hohem Inhibitionseffekt gegen feste Sarcoma-180-Krebswucherung, und zwar nicht nur bei intraperitonealer, sondern auch bei oraler Verabreichung an Mäuse. Dies bedeutet, dass die erfindungsgemäss erhältlichen stickstoffhaltigen Polysaccharide ein hervorragendes Antikrebs-Mittel bieten, und diese Wirkungen sind durch zahlreiche Versuche bestätigt worden. Die Verwendung der nach dem erfindungsgemässen Verfahren erhältlichen Stoffe ist aber nicht auf orale Applikation zum Erzielen von antitumorigenen Wirkungen beschränkt; vielmehr stimulieren diese Substanzen auch Immunreaktionen.

Insbesondere wurde festgestellt, dass diese Stoffe nicht nur zur Vermeidung der Nebeneffekte von Chemotherapeutika bei Tumorpatienten einsetzbar sind und eine erhöhte Suszeptibili-tät für die Radiotherapie zeigen, sondern auch der Immunitätsverminderung und der allgemeinen Schwächung der Patienten nach Operationen oder Bluttransfusionen entgegenwirken können bzw. Resistenz gegen Virus- und Bakterien-In-fektion bei Patienten bewirken können, deren Immunreaktion oder physische Kraft gering war. Es wurde auch festge-5 stellt, dass die orale Verabreichung der vorliegenden Stoffe hervorragende Wirkungen in bezug auf die Verbesserung der Leberfunktion, die Appetitanregung, das Beheben von Ver-dauungs- bzw. Darmstörungen und eine Förderung des Harnabganges bewirken. Sie haben sich auch für die Behandlung io der Lepra als wirksam erwiesen.

Wie erwähnt, bietet das erfindungsgemässe Verfahren nicht nur stickstoffhaltige Polysaccharide mit hervorragender anti-tumorigener Wirkung bei intraperitonealer oder sogar bei oraler Verabreichung und mit den anderen oben erwähnten 15 Aktivitäten, sondern ermöglicht die Gewinnung dieser Stoffe in hoher Ausbeute nach einem relativ einfachen Verfahren. Das Verfahren der Erfindung ermöglicht einen wesentlichen Beitrag zur technischen Produktion von Antikrebs-Wirkstoffen aus Basidiomyzeten.

20

Beispiel 1

Myzel von Coriolus versicolor (Fr.) Quél, aus einer künstlichen Kultur wurde auf einen Wassergehalt von 10% getrocknet und in fünf Teilmengen getrennt. Jede Teilmenge wurde 25 mit dem 12,5fachen (Gewicht) an Wasser gemischt, in einen Autoklav eingespeist und unter den in der Tabelle II angegebenen Bedingungen behandelt. Das aus jeder Teilmenge erhaltene Produkt wurde dann zur Fraktionierung der Behandlungsproduktlösung für sich filtriert und die erhaltene Lösung 30 anschliessend in laufendem Wasser während 72 Std. bei 5° C unter Verwendung von Dialyseschlauch («Visking Tube», hergestellt von der Firma Union Carbide Corporation) in üblicher Weise dialysiert, um die niedermolekularen Stoffe (diejenigen mit Molekulargewicht von weniger als 5000) aus dem 35 Produkt zu entfernen. Die Dialysatlösung wurde zur Gewinnung eines leberbraunfarbenen Pulvers mit einem Wassergehalt von 7 % konzentriert. Dieses pulverförmige Material zeigte ein Molekulargewichtsmittel von über 10 000; die Ergebnisse der Elementaranalyse und die verschiedenen, in Tabelle I 40 zusammengestellten Farbreaktionstests bestätigen, dass dieses Material ein stickstoffhaltiges Polysaccharid ist.

Tabelle I F arbreaktionstests

45 .

Farbreaktion

Farbe

Bemerkungen a-Naphthol/Schwefel-säure-Reaktion 50 (Molish-Reaktion) Indol/Schwefelsäure-Reaktion (Dish-Reak-tion

Anthron/Schwefel-55 säure-Reaktion Phenol/Schwefel-säure-Reaktion Tryptophan/Schwefel-säure-Reaktion 60 Lowry-Folin-Verfahren Ninhydrin-Reaktion nach Salzsäurehydrolyse purpurn Saccharid bestätigt braun grünlichblau braun purpurbraun blau purpurblau

Saccharid bestätigt

Peptidbindung bestätigt a-Aminosäure bestätigt

Aus den obigen Testergebnissen ergibt sich, dass die nach dem erfindungsgemässen Verfahren erhältlichen Produkte Polysaccharide sind, die primären peptidgebundenen Stickstoff enthalten.

622 948

Zur Prüfung der Antitumor-Wirkungen der nach dem erfindungsgemässen Verfahren erhaltenen stickstoffhaltigen Polysaccharide wurde folgender Test durchgeführt:

Testverfahren

Sarcoma-180-Tumorzellen wurden in die Bauchhöhle von Mäusen transplantiert; sieben Tage später (nach ausreichender Multiplikation der Zellen) wurden 106 Zellstücke weiter auf subkutane Bereiche der Achselhöhlen einer anderen Versuchstiergruppe (Mäuse) zur Entwicklung von festen Tumoren transplantiert. Mit der intraperitonealen Verabreichung der nach dem erfindungsgemässen Verfahren erhaltenen Stoffe wurde in der 24. Stunde nach der Transplantation begonnen. Die Substanzen wurden zehnmal verabreicht, jeweils einmal jeden zweiten Tag, mit einer Dosis von 10 mg/kg pro Verab-

4

reichung bis zu einer Gesamtmenge von 0,2 ml/20 g (Körpergewicht der Maus). Am 25. Tag nach der Transplantation wurde bei jeder Maus der Tumor herausgeschält und dessen Gewicht gemessen. Die Tumorwachstums-Inhibierungswir-s kung der erfindungsgemäss hergestellten Substanz wurde aus den mittleren Tumorgewichten in der Gruppe von Mäusen, welchen die erfindungsgemässe Substanz verabreicht wurde, und dem Durchschnittsgewicht der Tumoren in der Vergleichsgruppe berechnet.

io Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengestellt. Die Einzelheiten der Herstellung der jeweils für diesen Test verwendeten Proben, d. h. die verwendete Menge an wässrigem Lösungsmittel (Wasser), die Behandlungstemperatur und die Behandlungsdauer sowie die Behandlungsrate, die Selektivität 15 und Ausbeute sind ebenfalls in Tabelle II zusammengestellt.

Tabelle II

Probe

Wasseranteil

Tempera

Druck

Dauer

Behand

Selekti

Ausbeute

Inhibie

Stick

Nr.

(Gewichts tur

(kg/cm2)

(min)

lungsrate vität bezogen rung von stoff

verhältnis

(°C)

(%)

auf den

Sarcoma-

gehalt

zum Pilz)

(Pilz) (%)

180 (%)

(%)

1

12,5

120

2,0

360

34,5

52,2

18,1

89,9

0,71

2

12,5

150

5,0

60

51,5

52,5

27,1

87,9

0,72

3

12,5

160

6,3

60

62,0

68,4

42,4

91,0

0,72

4

12,5

165

7,2

30

68,8

59,0

40,6

93,0

0,73

5

12,5

180

10,2

20

80,6

70,6

57,0

94,9

0,73

Vergleich

12,5

98

360

21,6

47,9

10,4

89,8

0,71

Bemerkungen:

1. Als Vergleichsmaterial diente eine Probe, die unter Verwendung des gleichen Pilzmaterials wie bei den Proben 1—5, aber durch Behandlung unter normalem Druck nach konventioneller Methode erhalten worden war.

2. «Behandlungsrate» ist der gelöste Anteil an Pilz-Ausgangsmaterial, ausgedrückt in Gew.%.

3. «Selektivität» ist die prozentuale Ausbeute an stickstoffhaltigen Polysacchariden mit Molekulargewichten von über 10 000, die aus dem Behandlungsprodukt gewonnen wurden.

4. «Ausbeute bezogen auf Pilz» ist die prozentuale Ausbeute an stickstoffhaltigen Polysacchariden mit Molekulargewicht von grösser als 10 000, bezogen auf das gesamte eingeführte Pilzmaterial.

Aus den in Tabelle II angegebenen Resultaten ist zu sehen, dass bei den Tests, die an den mit Sarcoma-180-Tumorzellen durch Transplantation versehenen Mäusen durchgeführt worden waren, jedes der stickstoffhaltigen Polysaccharide, das unter den Behandlungsbedingungen gemäss dem Erfindungsgemässen Verfahren erhalten worden war, eine gleiche oder höhere Antitumor-Aktivität aufwies als die zu Vergleichszwecken unter üblichen Behandlungsbedingungen hergestellten Produkte, und es ist besonders zu vermerken, dass die Ausbeuten in bezug auf verwendetes Pilzmaterial erheblich verbessert sind.

Beispiel 2

Myzel, das wie in Beispiel 1 gezüchtet worden war, wurde in acht Gruppen geteilt. Jede Materialgruppe wurde zusammen mit der 12,5fachen Gewichtsmenge (Myzelgewicht) alkalischer oder praktisch neutraler wässriger Lösung gemäss Angaben in der folgenden Tabelle III in einen Autoklav eingespeist und unter den ebenfalls in Tabelle III angegebenen Durck- und Temperaturbedingungen behandelt. Nach der Behandlung wurde das Material im Autoklav neutralisiert und zur Frak-45 tionierung der erhaltenen Lösung unter Abtrennung der unlöslichen Anteile als Rückstand filtriert. Die als Behandlungsprodukt erhaltene Lösung wurde nach der in Beispiel 1 beschriebenen Arbeitsweise dialysiert, um Substanzen mit einem Molekulargewichtsmittel von über 10 000 zu gewinnen, so Der Test dieser Substanzen nach den in Tabelle I angegebenen verschiedenen Farbreaktionen bestätigte, dass es sich um stickstoffhaltige Polysaccharide handelte. Zum Test der Antitumor-Aktivität der so erhaltenen stickstoffhaltigen Polysaccharide wurden die Proben 1-8 Mäusen verabreicht, die durch sub-55 kutane Transplantation mit Sarcoma-180 vorbehandelt worden waren. Die Ergebnisse zeigen, dass diese Stoffe gleiche oder höhere Antitumor-Wirkungen erzielen, als die durch konventionelle Heisswasserbehandlungsmethoden unter Normaldruck erhältlichen stickstoffhaltigen Polysaccharide.

5

Tabelle III

622 948

Probe

Lösungsmittel

Tem

Dauer

Druck

Behand

Selekti

Ausbeute

Inhibie

Stick

Nr.

peratur

(min)

(kg/cm2)

lungsrate vität bezogen rung von stoff

CO

(%)

auf Pilz (%)

Sarcoma-180 (%)

gehalt (%)

1

0,ln-NaHC03

120

60

2,0

40,0

58,0

21,2

92

4,92

2

2n-NaHC03

160

60

6,3

74,4

36,6

27,0

90

4,12

3

0,ln-NaHC03

160

60

6,3

50,7

46,8

24,6

92

3,65

4

0,ln-NaHC03

180

20

10,2

57,4

51,9

29,8

92

2,12

5

0,ln-NaHC03

200

20

15,5

84,3

50,3

42,4

98

1,25

6

0,ln-NaOH

180

60

10,2

72,6

50,0

38,1

91

2,39

7

14% NH4OH

180

18,0

68,9

30,5

21,0

94

5,29

8

1 % L-Glutamin

200

10

15,5

85,1

55,1

46,9

92

3,42

Ver

gleich

0,ln-NaOH

98

60

22,3

38,1

8,5

90

4,91

Bemerkungen:

1. Das Vergleichsmaterial ist eine Probe, die aus den gleichen Basidiomyzeten wie die Proben 1-8 durch Anwendung der üblichen Heisswasserbehandlungsmethoden unter Normaldruck erhalten worden war.

2. Im übrigen ist auf die Bemerkungen in Tabelle II zu verweisen.

Beispiel 3

Die rohen Fruchtkörper von künstlich in einem Medium gezüchteten, Lentinus-Eboden mit einem Wassergehalt von 88,27% wurden in sechs Teilmengen getrennt. Jede Teilmenge wurde zusammen mit der in Tabelle IV angegebenen Wassermenge in einen Autoklav eingespeist und dann der Behandlung unter Druck und Temperaturbedingungen gemäss Angaben in Tabelle IV unterzogen. Nach der Behandlung wurde das aus dem Autoklav entnommene Behandlungsmaterial jeder Teilmenge filtriert, um das Filtrat von einem Rückstand unlöslicher Anteile zu trennen. Das erhaltene Filtrat wurde wie in Beispiel 1 dialysiert, um die Fraktionen mit Molekulargewichtsmittelwerten von über 10 000 zu gewinnen. Durch die

25 Dialysebehandlung wurden die Substanzen mit niedrigerem Molekulargewicht aus der Behandlungslösung eliminiert. Jede der erhaltenen Substanzen wurde entsprechend den verschiedenen in Tabelle I angegebenen Farbreaktionen sowie durch Elementaranalyse untersucht und die Testergebnisse bestäti-30 gen, dass diese Substanzen stickstoffhaltige Polysaccharide waren.

Jeder der so erhaltenen Stoffe zeigte nach der in Beispiel 1 beschriebenen Testmethode eine hohe Inhibierungsrate von mehr als 80%.

35 Die Behandlungsbedingungen sowie die Ergebnisse der Untersuchung der erhaltenen Produkte dieses Beispiels sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt.

Tabelle IV

Probe

Wasseranteil

Temperatur

Dauer

Druck

Behand

Selektivität

Ausbeute

Stick

Nr.

(Gew.-Ver-hältnis zum getrockneten Pilz)

(°C)

(min)

(kg/cm2)

lungsrate (%)

(%)

bezogen auf getrockneten Pilz (%)

stoffgehalt (%)

1

30

120

60

1,7

52,0

15,0

7,8

1,02

2

30

150

60

4,5

74,5

31,2

23,2

0,98

3

30

190

60

11,5

80,9

16,1

13,1

0,99

4

30

180

20

8,5

79,4

25,8

20,5

0,97

5

30

190

20

11,5

80,0

29,7

23,7

0,98

6

70

180

20

8,5

68,5

56,4

38,6

1,01

Vergleich

30

100

60

1,0

45,0

13,8

6,2

1,03

(Siehe Bemerkungen zu Tabelle II)

s

Claims

622 948 PATENTANSPRÜCHE

1. Verfahren zur Herstellung von Antitumor-Mittel, das stickstoffhaltiges Polysaccharid enthält, durch Behandlung von Pilz aus der Klasse der Basidiomyzeten, dadurch gekennzeichnet, dass der Pilz künstlich in einem Medium gezüchtet und das so erhaltene Pilzmaterial mit einem wässrigen Lösungsmittel unter Druck im Bereich von 1,8 bis 20 kg/cm2 bei Temperaturen im Bereich von 120-200° C behandelt wird.

2. Verfahren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass als Pilz aus der Basidiomyzeten-Klasse ein solcher vom Stamm Coriolus verwendet wird.

3. Verfahren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass als Pilz aus der Basidiomyzeten-Klasse ein solcher vom Stamm Lentinus verwendet wird.

4. Verfahren nach einem der Patentansprüche 1-3, dadurch gekennzeichnet, dass die Behandlung während eines Zeitraumes von 5-360 min durchgeführt wird.

5. Verfahren nach einem der Patentansprüche 1-3, dadurch gekennzeichnet, dass als wässriges Lösungsmittel Wasser oder eine verdünnte Alkalilösung mit einer Konzentration von weniger als In verwendet wird.

Es ist bekannt, dass Substanzen mit Antikrebswirkung, im folgenden Antitumor-Mittel genannt, auf Basis von Polysacchariden durch künstliche Züchtung von Pilzen aus der Klasse der Basidiomyzeten und Isolieren von Wirkstoff in Form von stickstoffhaltigen Polysacchariden aus dem Kulturmaterial gewonnen werden können, wie dies z.B. im Patent 587 345 beschrieben ist. Das bekannte Verfahren hat aber einen relativ geringen Wirkungsgrad.