JP2746532B2 - イザリア型虫草を主成分とする免疫強化食品 - Google Patents

イザリア型虫草を主成分とする免疫強化食品

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JP2746532B2 JP6025280A JP2528094A JP2746532B2 JP 2746532 B2 JP2746532 B2 JP 2746532B2 JP 6025280 A JP6025280 A JP 6025280A JP 2528094 A JP2528094 A JP 2528094A JP 2746532 B2 JP2746532 B2 JP 2746532B2
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Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明はイザリア型虫草(日本冬
虫夏草)の子実体(完全世代及び不完全世代)、菌糸体
およびその代謝液を主成分とする免疫強化食品に関する
ものである。
【0002】
【従来の技術】免疫反応は感染症をはじめ,炎症,腫
瘍,アレルギー,自己免疫症状疾患,移植拒絶反応など
多くの疾患の発症に深く関わっていることが知られてい
る。免疫反応が低下すると種々のウィルス,細菌,真菌
による感染症に罹感し易くなるばかりか、腫瘍の発症率
も高くなる。
【0003】免疫賦活剤は当初、抗腫瘍免疫を増強する
薬剤を意味した。その後薬物や放射線など外部因子や後
天的免疫不全、悪性腫瘍などによる免疫系の機能低下や
破壊を回復させる薬剤を指すようになった。現在、免疫
賦活剤は腫瘍免疫療法への応用のみならず、単独または
リコンビナントワクチンとの組合せにより、種々の感染
症に対する宿主の非特異的抵抗性に応用されている。
【0004】一方、免疫賦活剤の中にはコフキサルノコ
シカケ、メシマコブ、シイタケなどの担子菌類、オタネ
ニンジン、エレウテロコックなど、非特異的抵抗性の増
強に、民間で古くより伝承的に使われているものがあ
る。これらは何れも経口的に投与または摂取し、民間和
漢薬と呼ばれる。しかしその作用は現代の免疫学的解釈
によれば、免疫強化食品とも呼ぶべき範ちゅうに入れる
べきものである。実験動物を用いた免疫学的試験によれ
ば、それらのエキスまたは特定された成分を腹腔内投与
または静脈内注射した時にのみ、担子菌では免疫機能賦
活作用1)2)を示したが、オタネニンジンでは活性を示
さなかった。3)また経口投与では全く免疫機能賦活作用
を示さなかった。
【0005】1) 千原呉郎、ファルマシア レビュー,
,119(1981)および引用文献2) 秋山由紀雄、羽室淳爾、蛋白質核酸酵素、26,2
08(1981)および引用文献3) 林輝明、有地滋、久保道徳、阿部博子、谿忠人、久
山建、小田島粛夫、金沢医大誌、,171(197
8) 特開昭54−80486号公報には肉座科の不完全菌類
(冬虫夏草)の人工培養法と培養した菌糸体より薬効成
分の抽出液又は粉末体を製造する方法が記載され、又本
発明者、出願人の一人である矢萩信夫の発明に係る、特
公昭61−53033号公報には、冬虫夏草の人工培養
法が記載され、それらの公報中では冬虫夏草の特性とし
て滋養強壮効果、制癌性があげられている。
【0006】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら上記のよ
うに伝統的天然薬物に由来する免疫強化食品は、動物実
験による免疫学的試験では客観的な評価が得られていな
い。現代の自己管理医療に用いるには、客観的な活性評
価に耐える免疫強化食品である必要があり、その出現が
期待されている。
【0007】本発明の目的は、動物実験による免疫学的
試験の裏付けがあり、客観的な活性評価に耐えうる、イ
ザリア型虫草(日本冬虫夏草)の子実体(完全世代及び
不完全世代)、菌糸体およびその代謝液を主成分とする
免疫強化食品を提供することである。又本発明の他の目
的は、上記のイザリア型虫草(日本冬虫夏草)の子実体
(完全世代及び不完全世代)、菌糸体およびその代謝液
にさらに特定物質を添加して、さらに免疫賦活活性を高
めた食品を提供することである。
【0008】
【課題を解決するための手段】本発明者はイザリア型虫
草(日本冬虫夏草)の人工培養について検討する過程に
おいて、イザリア型虫草(日本冬虫夏草)、例えばハナ
サナギタケ、コナサナギタケの子実体(完全世代及び不
完全世代)、菌糸体およびその代謝液が免疫賦活活性試
験において免疫系を増強することを見出した。さらに鋭
意研究を重ねた結果、人工培地を用いて天然産虫草と同
一形態を示す菌糸体を大量に得る方法を確立し(特公昭
61−53033号など)、この菌糸体を液体培地に接
種後、培養を行って虫草の子実体(完全世代及び不完全
世代)、菌糸体およびその代謝液を得た。
【0009】そしてこの子実体(完全世代及び不完全世
代)、菌糸体および代謝液に、オウギ抽出エキス、β−
カロチン、サルノコシカケ抽出エキス、その他の茸の抽
出エキスを混和することにより、免疫賦活活性をさらに
増強させることに成功した。
【0010】子実体(完全世代及び不完全世代)、菌糸
体およびその代謝液に混和する上記物質の重量は、例え
ば子実体(完全世代及び不完全世代)、菌糸体およびそ
の代謝液100部(以下すべて重量部を表す)に対し、
オウギ抽出エキス0.1〜2部、β−カロチン0.1〜
1部、サルノコシカケ抽出エキス1〜10部が好適であ
る。本発明で使用し得る人工培養によるイザリア型虫草
(日本冬虫夏草)は以下の通りである。
【0011】
【表1】
【0012】
【表2】
【0013】
【表3】
【0014】本発明で使用し得るサルノコシカケの種類
としては下記のものがあげられる。 (1) コフキサルノコシカケ、(2) キコブタケ、(3) クジ
ラタケ、(4) エゴノキタケ、(5) チヤカイガラタケ、
(6) ツリガネタケ、(7) エゾヒヅメタケ、(8) カワラタ
ケ、(9) アラゲカワラタケ、(10)ニレサルノコシカケ、
(11)シュタケ、(12)マンネンタケ、(13)マイタケ、(14)
ヤニタケ、 本発明で使用し得るその他の茸類としては、しいた
け、どんこしいたけ、まつたけ、等があげられる。
【0015】本発明の免疫強化食品は、主成分であるイ
ザイリア型虫草(日本冬虫夏草)の子実体(完全世代お
よび不完全世代)、菌糸体を含む代謝液、又は該物質と
オウギ抽出エキス、β−カロチン、サルノコシカケ抽出
エキス等の混和物自体の形態から、液体、半固体状又は
固体状をとることが出来る。
【0016】又該免疫強化食品は、混った子実体(完全
世代および不完全世代)、菌糸体および代謝液、又は子
実体(完全世代および不完全世代)、菌糸体および代謝
液とオウギ抽出エキス、β−カロチン、サルノコシカケ
抽出エキス等との混和物を凍結乾燥後粉末化し、適宜の
結合剤(蜂蜜、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソ
ルビット、トラガント、ポリビニルピロリドンなど)、
賦形剤(乳糖、砂糖、玄米、ハト麦、唐もろこし等の穀
物の澱粉、リン酸カルシウム、ソルビット、グリシンな
ど)、崩壊剤(じゃがいも澱粉など)等と混合し、粉
末、粒状、顆粒、錠剤、ゼリー剤、液剤、カプセル剤等
の形態をとることが出来る。
【0017】
【実施例】以下に実施例、および試験例をあげて本発明
を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるも
のではない。 実施例1 原料物質の製造方法 (a)イザリア型虫草(日本冬虫夏草)の一例であるハ
ナサナギタケ(イザリアヤポニカ)の子実体(完全世代
及び不完全世代)、菌糸体およびその代謝液の製造方法 ハナサナギタケの原菌をブドウ糖0.1〜2.0%、乾
燥酵母(岩城製薬社)0.1〜2.0%、イノシン0.
01〜0.1%、寒天1.0%の組成よりなる培地に接
種し、試験管内で斜面、分離培養を行った。10〜30
℃、14〜21日間培養した結果、得られた子実体は天
然界のものと形態的、顕微鏡的の何れにおいても同一で
あった。ここに得られた子実体を人口培養用の接種用原
菌とした。
【0018】大量培養液体培地はブドウ糖0.1〜2.
0%、乾燥酵母0.1〜2.0%を含む液体培地に無菌
的に接種用原菌を接種し、10〜30℃、好ましくは1
8℃で21〜35日間、培養を行う。液体培地には菌糸
体の集合が形成される。代謝液は無味無臭で微かに白
濁、または微かな淡黄色を呈しているが時間の経過とと
もに次第に透明となる。子実体(完全世代及び不完全世
代)、菌糸体および代謝液を凍結乾燥したものの組成は
表4の通りである。
【0019】
【表4】
【0020】また、該物質の含有蛋白質のアミノ酸組成
は表5の通りである。
【0021】
【表5】
【0022】(b) イ.オウギ抽出エキスの製造法 水100gに対し、乾燥したオウギの根15gを粉砕後
添加し、70〜100℃、6時間煮沸後、不溶物が生成
し終わるまで放置した後、不溶物を分離除去して、オウ
ギ抽出エキス約1g得た。
【0023】ロ.β−カロチン 市販のカロチンベース−30(高田香料株式会社製)を
使用した。
【0024】ハ.サルノコシカケ抽出エキスの製造法 水100gに対し、乾燥したコフキサルノコシカケ18
gを粉砕後添加し、95℃、6時間煮沸後、不溶物が生
成し終るまで放置し、不溶物を分離除去して、コフキサ
ルノコシカケ抽出エキス約6gを得た。 実施例2 液状物質としての免疫強化食品の製造法 1.ハナサナギタケの子実体(完全世代および不完全世
代)、菌糸体および代謝液を主成分とする場合 実施例1の(a)で得たハナサナギタケの子実体(完全
世代および不完全世代)2.5部、菌糸体2.5部およ
び代謝液95部をよく撹拌し、子実体(完全世代および
不完全世代)および菌糸体を代謝液中に溶解させ、10
5℃、1時間高熱滅菌処理後、透明液である本発明の免
疫強化食品を瓶に充填した。 2.ハナサナギタケの子実体(完全世代および不完全世
代)、菌糸体および代謝液にオウギ抽出エキス、β−カ
ロチン、サルノコシカケ抽出エキスを混和した場合 実施例1の(a)で得たハナサナギタケの子実体(完全
世代および不完全世代)2.5部、菌糸体2.5部を含
む代謝液95部をよく撹拌後、これに実施例1の
(b)、イ、ロ、ハで得たオウギ抽出エキス1部、β−
カロチン0.1部、サルノコシカケ抽出エキス1部を添
加し、105℃、1時間高熱滅菌処理後、透明液である
本発明の免疫強化食品を瓶に充填した。 実施例3 固体状物質としての免疫強化食品の製造法 1.ハナサナギタケの子実体(完全世代および不完全世
代)、菌糸体および代謝液を主成分とする場合 実施例1の(a)で得たハナサナギタケの子実体(完全
世代および不完全世代)2.5部、菌糸体2.5部を含
む代謝液95部を凍結乾燥し、凍結乾燥後粉末化したも
の2部に対して乳糖98部を混合し、顆粒化又は固型化
した。 2.ハナサナギタケの子実体(完全世代および不完全世
代)、菌糸体および代謝液にオウギ抽出エキス、β−カ
ロチン、サルノコシカケ抽出エキスを混和した場合 実施例1の(a)で得たハナサナギタケの子実体(完全
世代および不完全世代)2.5部、菌糸体2.5部を含
む代謝液95部をよく撹拌後、これに実施例1の(b)
イ、ロ、ハで得たオウギ抽出エキス1部、β−カロチン
0.1部、サルノコシカケ抽出エキス1部を添加後凍結
乾燥し、凍結乾燥後粉末化したもの2部に対して乳糖9
8部を混合し、顆粒化又は固型化した。 実施例4 半固体状物質としての免疫強化食品の製造法 1.ハナサナギタケの子実体(完全世代および不完全世
代)、菌糸体および代謝液を主成分とする場合 実施例1の(a)で得たハナサナギタケの子実体(完全
世代および不完全世代)、菌糸体および代謝液を凍結乾
燥し粉末にしたもの10部に対し、蜂蜜80部、水10
部、安息香酸ナトリウム又は安息香酸0.05部を添加
後よく混合し、半固体状の免疫強化食品を得た。 2.ハナサナギタケの子実体(完全世代および不完全世
代)、菌糸体および代謝液にオウギ抽出エキス、β−カ
ロチン、サルノコシカケ抽出エキスを混和した場合 実施例3の2で得た、ハナサナギタケの子実体(完全世
代および不完全世代)、菌糸体を含有する代謝液100
部に対しオウギ抽出エキス1部、β−カロチン0.1
部、サルノコカケ抽出エキス1部を混和し凍結乾燥後粉
末化したもの10部に対し、蜂蜜80部、水10部、安
息香酸ナトリウム又は安息香酸0.05部を添加後よく
混合し、半固体状の免疫強化食品を得た。 試験例 実施例で得た本発明の免疫強化食品の免疫賦活活性は、
以下の様にして測定した。 試験例1 (1)材料 (a)実験動物:CDF1 マウスは日本エスエルシー社
より購入した。実験動物は購入後、1週間以上、室温2
3±1℃、湿度50±5%の飼育室で飼育し、6〜8週
令のCDF1 を1群、4〜8匹使用した。
【0025】(b)培地および免疫試験用試薬:培地は
RPMI1640培地(日水製薬社)10.4g、HE
PES(N-2-hydroxyethyl-piperazine-N,-ethanesulfo
nicacid、同仁医薬化工社)2.3gを900mlの脱
イオン水に溶かし、高圧蒸気滅菌した。別にL−グルタ
ミン0.29g、ピルビン酸ナトリウム0.11g、炭
酸水素ナトリウム2.0g(以上、和光純薬社)、硫酸
カナマイシン(明治製菓社)0.06gを100mlの
脱イオン水に溶かし、0.22μmメンブランフィルタ
ー(Millipore 社)で濾過滅菌し、これを上記の培地9
00mlに加え、全量を1000mlとした。尚、実験
には2−ME(2-mercaptoethanol) を最終濃度、5×
10-5Mに調整し、また牛胎児血清(FCS)を加えた
ものを使用した。FCSはGeneral Scientific Laborat
ory 社製マイコプラズマフリーのものを56℃、30分
間加温し、非働化して使用した。
【0026】羊赤血球(SRBC)懸濁液は日本バイオ
テスト社製緬羊血液より分離したSRBCを冷却遠心
(2,000rpm、10分間)により2回洗浄し、pa
cked cell とした。これを培地で所定の濃度に懸濁し
た。モルモット血清は日本エスエルシー社から購入した
Hartlay 系雄性モルモットを一定条件下で飼育した後、
心臓より採取した血液をポリプロピレンチューブ(Falc
on社) に入れ、室温で1時間静置して凝固させた後、遠
心(3,000rpm,20分間)し、さらに混入した
赤血球を除くため遠心(2,000rpm,10分間)
した。上清をSRBCとマウス脾臓細胞で吸収し、冷却
遠心(10,000rpm,30分間)した後、使用ま
で−80℃の冷凍庫に保存した。
【0027】その他の試薬は和光純薬社の生化学用を使
用した。 (2) SRBCに対する抗体産生細胞(PFC)数の測定 橋本5)らによるCunningham法の改良法を用いた。実施例
3の2で得た免疫強化食品の一定量を秤量し、生理食塩
水に溶かして投与した。
【0028】CDF雄性マウスに抗原チャレンジ当日を
含めて4日前より1日1回、6日間経口的に投与した。
4日目に抗原として10%(v/v)SRBC懸濁液
0.2ml(2×108 個SRBC)を尾静脈注射して
免疫した。4日後、マウスを脱血死させ、脾臓を摘出
し、無血清培地中でほぐして脾細胞懸濁液とした。冷却
遠心(1,500rpm,5分間)にて3回洗浄後、1
%FCS添加培地で、4×107 個/mlに調整し、抗体
産生細胞源とした。その脾細胞懸濁液0.1ml、1%F
CS添加培地によって調整された10%(v/v)SR
BC懸濁液0.5mlおよび4倍希釈したモルモット血清
0.4mlを試験管に加え、よく混合した後、混合液をパ
ラフィルムスライド小室に注入し、溝の両端をパラフィ
ンで封じた。37℃、5%二酸化炭素気流中で、1時間
静置後、顕微鏡(4×10倍)視野下で観察される溶血
斑の数を計測し、次式により脾細胞106 個当たりのP
FC数Nを算出した。
【0029】N=n/(A×B) n:3個のスライド小室のPFC数の平均値 A:細胞混合液1ml中の脾細胞数 B:小室内容積(ml) 結果の数値は総て平均値±標準偏差値で表わし、投与群
間の統計学的な有意差検定はStudent のt検定を用いて
行った。5)橋本嘉幸、須藤恒代、浜岡史子、医学のあゆ
み、62,824(1967) (3) 本発明の免疫強化食品の免疫賦活作用 実施例3の2で得た本発明の免疫強化食品3,10,3
0mg/kg を抗原感作日前後、計6日間1日1回投与した
場合の、投与群の免疫賦活作用を示すと図1の如くであ
る。図1において横軸は虫草代謝液等を主成分とする免
疫強化食品の投与量を表わし、縦軸は抗体産生細胞/1
2 ×脾細胞(免疫細胞の個数)を表わす。
【0030】図1中NSは「有意差なし」を表わし、P
は統計処理表現で「信用度ならびに確率を表わす。例え
ばP<0.01とは100回中99回信用できる結果が
出たことを表わす。グラフの高さは平均値を表わし、グ
ラフの冠頭に付した巾は標準偏差と呼ばれる各実験値の
バラツキを示している。
【0031】図1よりイザリア型虫草(日本冬虫夏草)
の子実体(完全世代及び不完全世代)、菌糸体およびそ
の代謝液、オウギ抽出エキス、β−カロチン、コフキサ
ルノコシカケ抽出エキスを混和した本発明の免疫強化食
品は10mg/kg / 日、30mg/kg/ 日の投与群のいずれ
においても続計学的有意に免疫機能を賦活する作用をも
つことが明らかである。 試験例2 免疫系へ作用する賦活物質がその効果を発現するには、
一般に抗原感作に対する賦活物質投与のタイミングも重
要と考えられている。試験例1で使用したと同じ本発明
の免疫強化食品3,10,30mg/kg をSRBC抗原感
作日を含めた前3日間、1日1回投与し、試験例1と同
様の手法を用いて動物から脾臓を摘出し、その免疫機能
に対する作用を調べた。抗原感作日を含め前3日間、1
日1回投与した場合の、投与量に対する抗体産生細胞/
102 ×脾細胞(免疫細胞の個数)を表わすと図2の如
くである。
【0032】図2より、本発明の免疫強化食品は、1日
1回、抗原感作日を含めた3日間の前投与において、3
0mg/kg 投与群に有意の免疫機能賦活活性が見られた。
【0033】又、試験例1で使用したと同じ本発明の免
疫強化食品3,10,30mg/kg を、1日1回SRBC
抗原感作日を含めた後3日間、後投与した場合の結果は
図3の如くである。
【0034】図3より、本発明の免疫強化食品は、1日
1回、抗原感作日を含めた3日間の後投与においても、
30mg/kg 投与群に有意の免疫機能賦活活性が見られ
た。試験例2の結果は、本発明の免疫強化食品は、抗原
感作の以前または以後に投与しても、何れも免疫賦活作
用を発揮すること示している。
【0035】なお、イザリア型虫草(日本冬虫夏草)の
一例であるコナサナギタケについても実験したところ、
同様の結果が得られた。
【0036】
【発明の効果】従来の免疫強化剤が腹腔内投与又は静脈
内注射した時にのみ、免疫機能賦活作用を示すため、取
り扱いが容易でなかったのに対し、本発明の免疫強化食
品は、経口投与により同作用を発揮するため、手軽に食
品として摂取出来、しかも抗原感作時に関係なく、すぐ
れた免疫機能賦活作用を示すため、種々の感染症や腫瘍
の予防や治療を目的とした自己管理医療に用いることが
出来る。
【図面の簡単な説明】
【図1】虫草代謝液等を主成分とする免疫強化食品を、
抗原感作日前後計6日間、1日1回投与した場合の、投
与量に対する抗体産生細胞/102 ×脾細胞(免疫細胞
の個数)を表わすグラフ
【図2】虫草代謝液等を主成分とする免疫強化食品を、
抗原感作日を含めた前3日間、1日1回投与した場合
の、投与量に対する抗体産生細胞/102 ×脾細胞(免
疫細胞の個数)を表わすグラフ
【図3】虫草代謝液等を主成分とする免疫強化食品を抗
原感作日を含めた後3日間、1日1回投与した場合の、
投与量に対する抗体産生細胞/102 ×脾細胞(免疫細
胞の個数)を表わすグラフ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平4−49241(JP,A) 特開 昭54−80486(JP,A)

Claims (2)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 イザリア型虫草(日本冬虫夏草)の子実
    体(完全世代及び不完全世代)、菌糸体および代謝液を
    主成分とする免疫強化食品。
  2. 【請求項2】 イザリア型虫草(日本冬虫夏草)の子実
    体(完全世代及び不完全世代)、菌糸体および代謝液に
    オウギ(黄耆)抽出エキス、β−カロチン、サルノコシ
    カケ抽出エキスを混和してなることを特徴とする請求項
    1記載の免疫強化食品。
JP6025280A 1994-02-23 1994-02-23 イザリア型虫草を主成分とする免疫強化食品 Expired - Lifetime JP2746532B2 (ja)

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Application Number Priority Date Filing Date Title
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