PL101771B1 - A method of obtaining substances against neoplasms - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania substancji przeciwnowotworowych, skladajacych sie z polisacharydów, zawierajacych azot, przez ekstrakcje grzybów, nalezacych do gromady Basidiomycetes, za pomoca wodnego rozpuszczalnikai oczyszczania otrzymanego wyciagu.Wiadomo, ze przeciwnowotworowe substancje, skladajace sie z polisacharydów, mozna otrzymac przez oczyszczanie wyciagów, otrzymanych przez ekstrahowanie wodnymi rozpuszczalnikami pod zwyklym cisnieniem grzybów, nalezacych do gromady Basidiomycetes. Ten znany sposób ma jednak wade, a mianowicie wydajnosc jego jest bardzo mala i wiele substancji czynnych pozostaje w surowcu po ekstrakcji, co powoduje duze straty przy pracy na skale techniczna i stwarza problem wlasciwego odprowadzania scieków.Sposób wedlug wynalazku nie ma tych wad i umozliwia otrzymywanie z wysoka wydajnoscia substancji przeciwnowotworowych, skladajacych sie z polisacharydów, zawierajacych azot i wykazujacych bardzo dobre wlasciwosci przeciwnowotworowe. Cecha sposobu wedlug wynalazku jest to, ze grzyby, nalezace do gromady Basidiomycetes, ekstrahuje sie wodnym rozpuszczalnikiem pod zwiekszonym cisnieniem i w temperaturze 120-200°C.Stosowane w opisie i PL PL PL PL

Claims (6)

1. zastrzezeniach okreslenie „grzyby nalezace do gromady Basidiomycetes" oznacza grzybnie i/albo owocniki grzybów z gromady Basidiomycetes, nalezacych do rodzin, takich jak Polyporaceae, Mucronoporaceae, Tricholomataceae, Hygrophoraceae, Bolbitiaceae, Stopharicaceae, Cortinariaceae, Rhodophyl- laceae, Boletaceae, Hydnaceae,. Fistulinaceae, Tremellaceae, Phallineae, Clathraceae, Clavariaceae, Certiciaceae, Agaricaceae, Coprinaceae, Russulaceae, Auriculariaceae, Coniophoraceae, Lycopredalaceae i z rodzaju Rhizopo- gon oraz Calostoma. Znanymi grzybami z gromady Basidiomycetes sa np. takie, jak Trametes sanguinea, Trametes, Cinnabaria, Polyporellus sauamosus (Fr.) Karst, Daedaleopsis styracina (P.Henn, i Shirai) Imazeki, Fomitopsis pimcola (Fr.) Karst., Lenzites Butulina (Fr.),Gloephyllum saepiarium (Fr.)Karst., Ganoderma boninense Pat., Fomes fomenta- vius (Fr.) Kickx, Grifola gigantea (Fr.) Pilat, Favolus alveolarius (Fr.) Quel, Coriolus versicoior (Fr.) Que'l, Coriolus hirsutus (Fr.) Quel, Coriolus pargamenus (Fr.)Pat., Coriolus consors (Besh.) lmaz, Coriolus conchifer (Schw.) Pat., Coriolus pubescens (Fr,) Quet, Coriolus biformis (Klotz), Hirschioporus abietimus, Laetiporus,101771 sulphurcus, Grifola frondosa, Porodisculus pendulus, Rigidoporus ulmarius, Oxyporus ravidus, Tyromyces lac- teus, Cryptoporus volvatus, Poria vaporaria, lrpcx lacteus, Lampteromyces japonicus, Tricholomopsis rutilans (Fr.) Sing. (Tricholoma rutilans (Fr.) Quel), Armillariella melled, Laccaria amethystina, Ischnoderma resinosum (Fr.) Karst. (Polyporus resinosum Fr.), Lyophyllum ulinarium, Lyophyllum aggregatum, Tricholoma matsutake, Hohenbuhelia serotina (Fr.) Sing., Cartharellula cyathiformis (Fr.) Sing., Panellus stipieus (Fr.) Karst., Schizo- phyllum commune (Fr.), Panus conchatus (Fr.), Pleurotus ostreatus (Fr.) Quel, Oudemansiella radicata (Fr.) Sing., Lentinus edodes (Berk.) Sing., Flamniulina velutipes, Mycena pura, Lepista subnuda, Clitocybe infundibnli- formus, Tricholomopsis platyphylla (Fr.) Sing. [Collybia platyphylla (Fr.) Kummer], Tremellodon gelatinosom Fr.,Aleurodiscus amorphus Rabenth., Lycoperdon pyriforme Pers., Phaeolus schweinitzii (Fr.)Pat., Cryptoderma pini (Fr.) Imazeki, Phellinus gilvus (Fr.) Pat., Stereum hirsutum Fr., Meruluis tremellosus Fr., Lopharia mirabilis (Berk. et Br.) Pat., Echinodontium Tsugecola(P. Henn. et Shirai), Hygrocybe ovina (Fr.) Kuchn. (Hygrophorus ovinus Fr.), Agaricus bisporus (lange) Sing. [Psalliota hortensis (Cke.) W.G. Smith var. bispora Lange], Phaeolepio- ta aurea (Fr.) Maire [Pholiota aurea (Fr.) GUL, Cystoderma aureum (Fr.)Kiihn. et Romagn., Pholiota vahlii (Fr.) Lange], Coprinus atramentarius (Fr.) Fr., Agrocybe arvalis (Fr.) Fayod var. tuberigena (Quel.) Konr. et Maubl. [Naucoria arvalis (Fr.) Qucl. var. tuberigena QueL, Agrocybe tuberosa (Henn) Sing.], Gymnopilus aeruginosus (Peck) Sing. (Pholiota aerugiosa Peck), Thodophyllus murraii (Berk. et Curt.) Sing, [Entoloma murraii (Berk. et Curt.) Sacc], Boletus edulis Fr., Lactarius volemus Fr., Auricularia polytricha (Mont.) Saec, Rozites Caperata (Fr.) Karst. [Pholiota caperate (Fr.) GUL], Suillus granulatus (Fr.) Kuntze (Bektus granulatus Fr.), Russula delica Fr. [Russula chloroides (Krombh.) Bres.], Phlogiotis helvelloides (Fr.)Martin [Guepinia heWelloides Fr., Gyroce- phalus rufus Bref.], Gyroporus casteneus (Fr.) QueL, Auricularia auriculajudae (Fr.)QueL, Cyrophana lacrymans (Fr.) Pat (Merulius lacrymans Fr.), Onnia orientalis (Lloyd) Imazeki [Polyporus orientalis Lloyd), Fuscoporia obliaua (Fr.) Aoshima (Poria obliaua Fr.). Inonotus cuticularis (Fr.)Karst. (Polyporus cuticularis Fr.,Polyporus mikadoi Lloyd), Hygrophorus leucophaeus (Fr.) Gili, Agrocybe cylindracea (Fr.) Maire [Pholiota cylindracea (Fr.) GUL, P. aegerita (Brig.) QueL], Naematoloma sublateritum (Fr.) Karst., Pholiota nameko (T.Ito) S. Ito et Imai (Pholiota glutinosa Kawam.), Cortinarius elatior Fr., Rhodophyllus abortivus (Berk, et Curt.) Sing. [Clitopi- lus abortivus (Berk. et Curt.) Sacc], Suillus grevillei (Klotzch) Sing., Creolophus spathulatus Imazeki, Fistulina hepatica Fr., Protodaedalca hispida Imazeki, Dictyophora indusiata (Pers.) Fish,. Lysurus mokusin (Pers.) Fr. f. sinensis (Lloyd) Kobayasi, Lycoperdon gemmatum Fr., Rhizopogonrubescens (Tul.)Tul., Calostoma Japonicum P. Henn., Ramaria Flava (Fr.) Quel. (Clavaria flava Fr.) i Rhodophyllus rhodopolius (Fr.) Quel. [Entoloma rhodopolium (Fr.) Quel] (patrz „Coloured Illustrations of Fungi of Japan", Rokuya Imazeki i Psuguo Hongo, tom 1,1974 i tom II, 1975). Ogólnie uwazano, ze w czasic ekstrahowania grzybów z gromady Basidiomycetes pod zwiekszonym cisnie¬ niem i w temperaturze powyzej 120°C czynne substancje tych grzybów ulegaja rozkladowi, totez aczkolwiek spodziewano sie, ze w tych warunkach predkosc ekstrakcji moznaby zwiekszyc, to jednak ze wzgledu na roz¬ klad ogólna wydajnosc zadanych substancji przeciwnowotworowych nie zostalaby zwiekszona. Nieoczekiwanie stwierdzono jednak, ze prowadzac proces sposobem wedlug wynalazku uzyskuje sie wydajnosc znacznie wyzsza od osiaganej znanymi sposobami. Wedlug wynalazku proces prowadzi sie korzystnie w ten sposób, ze grzybnie i/albo owocniki grzybów z gromady Basidiomycetes umieszcza sie w naczyniu do pracy pod cisnieniem, np. w autoklawie do pracy perio¬ dycznej lub w rurowym ekstraktorze przeplywowym, razem z wodnym rozpuszczalnikiem i ekstrahuje w tempe¬ raturze 120-200°C, pod cisnieniem równym calkowitemu cisnieniu pary wodnego rozpuszczalnika zawartego w naczyniu. Zazwyczaj cisnienie to wynosi do 20 kG/cm2, korzystnie mniej niz 16 kG/cm2, ale nie powinno byc nizsze niz 1,8 kG/cm2. Czas ekstrakcji zalezy od temperatury i zwykle wynosi 5-360 minut, jezeli proces prowa¬ dzi sie w podanej wyzej temperaturze 120 200°C. W temperaturze ponizej 120°C ekstrakcja nie przebiega zado¬ walajaco, a w temperaturze wyzszej niz 200°C rozklad czynnych substancji moze powodowac zbyt duze straty. Nalezy tez nadmienic, ze ekstrakcja prowadzona w czasie krótszym niz 5 minut nie daje dobrych wyników, zas ekstrakcja prowadzona dluzej ni6 6 godzin moze powodowac rozklad czynnej substancji. Proces wedlug wynalazku mozna tez prowadzic w ten sposób, ze wyjsciowy material poddaje sie kUkakro- tnie ekstrakcji w wyzej podanych warunkach, albo przed wlasciwym procesem ekstrakcji zanurza material w wo¬ dnym rozpuszczalniku o temperaturze nizszej niz 100°C, lub tez po ekstrakcji zgodnie z wynalazkiem plu«ze wodnym rozpuszczalnikiem w temperaturze nizszej niz 100°C. Zgodnie z wynalazkiem jako wodny rozpuszczalnik mozna stosowac rozpuszczalniki stosowane w znanych procesach, np. wode, wodne roztwory kwasów lub alkalii, wodne roztwory mocznika lub aminokwasów. Wodny rozpuszczalnik stosuje sie zwykle w ilosci 5-100 razy, korzystnie 10-50 razy wiekszej w stosunku wagowym od Uosci materialu wyjsciowego. Najkorzystniej jako rozpuszczalnik stosuje sie wode lub rozcienczony roztwór101 771 3 wodny alkalii o stezeniu niniejszym niz In. Otrzymany wyciag zwykle oczyszcza sie metoda ultrafiltracji, wysalania, dializy, odwróconej osmozy lub w inny sposób, przy czym mozna tez stosowac sposoby kombinowa¬ ne. Oczyszczanie to ma na celu usuniecie z wyciagu substancji o malym ciezarze czasteczkowym, to jest mniej¬ szym niz 5000. Po oczyszczeniu otrzymuje sie polisacharydy, zawierajace azot i wykazujace bardzo dobre dziala¬ nie przeciwnowotworowe. Badania prowadzone na myszach wykazaly, ze polisacharydy otrzymane sposobem wedlug wynalazku, maja szczególnie dobre dzialanie przeciwnowotworowe inhibitujace w odniesieniu do rakowego miesaka 180, nie tylko przy ich podawaniu dootrzewnowym, ale i doustnym. Dzialanie to zostalo potwierdzone w licznych pró¬ bach, co dowodzi, ze zawierajace azot polisacharydy, otrzymywane sposobem wedlug wynalazku,stanowia bar¬ dzo cenne srodki przeciwrakowe, które moga byc stosowane nie tylko doustnie jako srodki przeciwnowotworo¬ we, ale równiez pobudzaja one dzialanie uodporniajace. Stwierdzono równiez, ze substancje te sa skuteczne nie tylko przy zapobieganiu skutkom ubocznym przy traktowaniu lekami chemicznymi pacjentów z nowotworami, wykazujacych zwiekszona wrazliwosc na radioterapie, ale równiez w przypadkach zmniejszonej odpornosci lub oslabienia fizycznego, wyniklych na skutek operacji lub transfuzji krwi, jak tez i jako srodki zwiekszajace odpornosc na zakazenia bakteryjne lub wirusowe, gdy odpornosc pacjenta lub jego sily fizyczne sa slabe. Stwierdzono równiez, ze substancje otrzymywane sposobem wedlug wynalazku, maja przy podawaniu doustnym bardzo dobry wplyw na dzialanie watroby, zwiekszaja apetyt, usuwaja zaklócenia jelitowe i wzmagaja oddawa¬ nie moczu. Sa one równiez skuteczne przy leczeniu tradu. Biorac pod uwage fakt, ze substancje otrzymywane sposobem wedlug wynalazku, sa tak przydatne jako srodki przeciwnowotworowe, a sposób ten umozliwia latwe wytwarzanie tych substancji z wysoka wydajnoscia, mozna stwierdzic, ze wynalazek stanowi cenne wzbogacenietechniki. . ¦ * Przyklad I. Grzybnie Coriolus yersicolor (Fr.) Quel, otrzymane na drodze sztucznej hodowli, suszy sie do zawartosci 10% wagowych wody i dzieli na 5 czesci, i kazda z tych czesci umieszcza w autoklawie wraz z woda w ilosci 12,5 raza wiekszej w stosunku wagowym od ilosci grzybni i ekstrahuje w warunkach podanych w tablicy 2. Poszczególne wyciagi przesacze sie w celu oddzielenia ekstraktu, który przy uzyciu znanych metod poddaje sie w temperaturze 5°C w ciagu 72 godzin dializie za pomoca strumienia wody w rurze do dializy (Visking Tube firmy Union Carbide Corp.). W wyniku dializy usuwa sie substancje o malym ciezarze czasteczko¬ wym (mniejszym niz 5000). Otrzymany w procesie dializy roztwór zateza sie, otrzymujac proszek o barwie czerwonawobrazowej, zawierajacy 7% wody. Proszek ten o srednim ciezarze czasteczkowym wyzszym niz 10000 jest polisacharydem zawierajacym azot, co wykonano w drodze analizy, elementarnej i rozmaitych reakcji bar¬ wnych, których wyniki podano w tablicy 1. Tablica 1 Reakcje barwne - testy Reakcja barwna Reakcja z kwasem a-naftolo-siarkowym (reakcja Molisha) Reakcja z kwasem indolosiarkowym [ (reakcja Disha) | Reakcja z kwasem antronosiarkowym | Reakcja z kwasem fenolo-siarkowym Reakcja z kwasem tryptofano-siarkowym Proces Lowry-Folin Reakcja winhydrynowa po hydrolizie kwasem solnym Barwa purpurowa brazowa zielonkawo-niebieska brazowa purpurowo-brazowa niebieska purpurowo-niebieska Uwagi stwierdzono sacharyd stwierdzono sacharyd stwierdzono sacharyd | stwierdzono sacharyd | stwierdzono sacharyd stwierdzono wiazanie peptydowe stwierdzono (^-aminokwas Wyniki powyzszego testu wskazuja, ze substancje otrzymane sposobem wedlug wynalazku, sa polisachary¬ dami, zawierajacymi glównie azot, zwiazany wiazaniem peptydowym. W celu okreslenia efektów przeciwnowotworowego dzialania polisacharydów zawierajacych azot, otrzymy¬ wanych sposobem wedlug wynalazku, przeprowadzono nastepujace testy. Metoda testowania. Komórki nowotworowe Sarcoma-180 przeszczepia sie do jamy brzusznej myszy i 7 dni pózniej (po dosta¬ tecznym rozmnozeniu sie komórek) 106 fragmentów komórek przeszczepia podskórnie na powierzchnie pacho¬ wa innych grup myszy w celu wywolania stalych nowotworów.4 101 771 Wewnatrzotrzewnowe podawanie substancji wytwarzanej sposobem wedlug wynalazku, rozpoczyna sie 24 godziny po transplantacji. Substancje podaje sie 10 razy, raz dziennie, co drugi dzien, w dawce jednorazowej, wynoszacej 10 mg/kg ogólnie w ilosci 0,2 ml/20 g ciezaru ciala myszy, a 25 dnia po przeszczepieniu wyluszcza nowotwór z kazdej myszy i okresla jego ciezar. Inhibitujace dzialanie substancji, wytworzonej sposobem wedlug wynalazku, na wzrost nowotworu okresla sie na podstawie przecietnego ciezaru nowotworów tej grupy myszy, której substancje te podawano i przecietne¬ go ciezaru nowotworów myszy z próby kontrolnej. Wyniki pomiarów podsumowano w tablicy 2, w której równiez podano dane odnosnie przygotowania odpo¬ wiednich próbek, mianowicie ilosc wodnego rozpuszczalnika (wody), temperature ekstrakcji, szybkosc ekstra¬ kcji, selektywnosc i wydajnosc. Z rezultatów zamieszczonych w tablicy 2 wynika, ze w testach prowadzonych na myszach, którym prze¬ szczepiono podskórnie komórki nowotworowe Sarcoma-180, kazdy z polisacharydów, zawierajacych azot, otrzy¬ mywanych na drodze ekstrakcji w warunkach zgodnych z wynalazkiem, wykazuje równa lub wieksza aktywnosc przeciwnowotworowa w porównaniu z podobnymi preparatami, otrzymywanymi w znanych warunkach ekstra¬ kcji, przy czym nalezy szczególnie podkreslic, ze wydajnosc w przeliczeniu na ilosc wyjsciowego grzyba jest wyraznie wieksza. Przyklad II. Grzybnie Basidiomycete, taka sama jak w przykladzie I, dzieli sie na 8 grup i kazda z tych grup umieszcza w autoklawie wraz z alkalicznym lub zasadniczo obojetnym roztworem wodnym w ilosci 12,5 raza wiekszej w stosunku wagowym od ilosci grzybni, co podano ponizej w tablicy 3, po czym ekstrahuje sie pod cisnieniem i w temperaturach podanych w tablicy 3. Po ekstrakcji produkt w autoklawie zobojetnia sie i filtruje, oddzielajac wyciag od skladników nierozpuszczalnych, stanowiacych pozostalosc poekstrakcyjna. Wyciag poddaje sie procesowi dializy zgodnie ze sposobem opisanym w przykladzie I, w celu odzyskania substan¬ cji o srednim ciezarze czasteczkowym wyzszym niz 10000. W wyniku badania metoda reakcji barwnych podanych w tablicy 1, stwierdzono, ze substancje te stanowia polisacharydy, zawierajace azot. W celu okreslenia aktywnosci przeciwnowotworowej otrzymanych polisachary¬ dów, zawierajacych azot, próby 1-8 podaje sie myszom, którym podskórnie przeszczepiono Sarcoma-180. Okazu¬ je sie, ze substancje te maja takie same lub skuteczniejsze dzialanie przeciwrakowe w porównaniu z polisachary¬ dami otrzymanymi zgodnie ze znana metoda ekstrakcji za pomoca goracej wody pod normalnym cisnieniem. Przyklad III. Owocniki dostepnego w handlu grzyba Lentinus edodes, zawierajace okolo 88,27% wody, grupuje sie w 6 czesciach i kazda z nich umieszcza w autoklawie wraz z woda w ilosci, podanej w tablicy 4 i poddaje ekstrakcji pod cisnieniem i w temperaturach podanych równiez w tablicy 4. Po ekstrakcji poszczególne produkty w autoklawie filtruje sie, oddzielajac wyciag od substancji nierozpuszczalnych, stanowiacych pozosta¬ losc po procesie ekstrakcji. Otrzymany wyciag poddaje sie dializie zgodnie z metoda opisana w przykladzie I, uzyskujac frakcje o srednim ciezarze czasteczkowym wyzszym niz 10000. W wyniku dializy usuwa sie z roztwo¬ ru wyciagu substancje o niskim ciezarze czasteczkowym. Kazda z otrzymanych substancji bada sie metoda reakcji barwnych, podanych w tablicy 1 oraz metoda analizy elementarnej. Wyniki wskazuja, ze substancje te sa polisa¬ charydami, zawierajacymi azot. Kazda z otrzymanych substancji wykazuje duza szybkosc inhibitowania, wynoszaca ponad 80%, co wyka¬ zaly badania metoda opisana w przykladzie I. W tablicy 4 podano warunki i wyniki ekstrakcji omawianej w powyzszym przykladzie.101 771 *o 1 »*/5 O 3 2 8* N O cd 00 *c -S *7 .£ rt ca Stop hamow Sarcom s« cd - -o jnosc tosur sci gi rt w O 3= £ vO *W» o L^ 2 O * tyj S v 2 -3 zs^ frjs c/i a 1 *"» i ,yi 3 8 .5 .&« S 6 5 o g rt- *S5 O U * CS ^ 3 ¦M t* H O H ^ ^ . dy ago* zyba S * Sb losc unku ilosci 33 CA $ Numer próby —< "H r-^ t-^ r-^ r-^ i-^ o o o o o <3\ 5\ O O C7\ 0 r^ ^ co" tT* co co On On On HH^yoC oo t-* rH CN ^t ^t «0 r| "o Tf o vo ri wjioooo^ ^H(SOOO rt o o o o o NO NO NO CO CS co O O CO cm »o so c- o l-H o o o «o o ri io no no co -H —H ^H l—1 f—1 n n "l "l "1 ¦a 1 00 oC 00 ^ o 1-H "*" NO l—1 eN o NO co 00 I ON v 1 i-H 1 *i1 n\ 'S O bO c o .o -o 1-s ^ ed* c 6 O o 8 ? * i .e o » £ ago £ » g o •a s •N "o A O majacy •-H +-» O a £ *o T3 13 X lisac 8. cd X » N fct, CU * CCJ * N 43 O £ »M cl cd o 44 . 43 .Zr Ul CU* £ *0 es bD N O S § * » bi2 .23 ta i* ^ <2 '2 * o 6 *o •N 3* 3 O 2 a-- e cd* S « O C S N cd SI i-i e 3 CV N P g ^ :§ CL O O li * ^ & *. 8 i li -w .a J3 ^ C< 4 5 Jj - £.5 ^l .Sf O !? *0 o cd- c ^ S 2 S G • 8 B o -*-» i-i O Cu cd* ?- ' '•$ -S. § I '^% li $:% M T3 a 3 c5 ,& s ° ? S 2 :a 3 3 Si* 1 ed "* - *59 oo 1 *P G ^h 1 s b» *d co § o * co ^ a 1 Et 3 * Wydajnosc ^ w stosunk do ilosci grz 3 o 1 E ,*£ 1 2 1 0 1 4 1 00 so ::r 1 »W5 tT i O M g fi ^ 1 N -^ 1 co « •2-N G P 2 o 1 G 7 1 *% O U « a§ N G U-g 2 3 cd uio^ s V H ^ G zeza Rozpus Numer próby MNIO^^O^ONM it ^-' ro ^ ^ fN »o rn (NOMrN00»H^M On On On On On On On On fS O VO » ^ H O 0 •-H t^ ^ ON* C-l 00 *H* \0 (NfSfSN^WNTf OnOOOOnCOO«0'-h oo" no" Ne h o d o (o WNCO-lfriOWNUOCOlO O^h^W^CONH o-^or^TftNoó^lo Ttr-«o»ocor*-vooo OCOCOfSNO oTNcTNO^cr^oooo^lo l-H i-H lFH f-H 1-H oooooooo v©NONO i-H OOOOOOOO (NsONOOOOOOOOO i^^h*-Ii-4cNi-«<-h(N cd O .£? O O O * S ^ c ^ ^i n ^ ? i^ OfNOOOO*H»H I 1—< <= On l/l oo" l-H 00 co co n ° NO 1 00 1 On 1 X a f-H 1 O* 8.S |101771 po 1 v/l 2 3 5 g^ £3 N 1 *s 1 »W 1 * O fc* C^ O ¦d S^ . o o £ ts g * S 1 o 1 n 1* 1 «^s 1 CU ^ 1 "O ~ rs 'c? 1 •55 rt vt IX) 1^ 0^ 1 ts 1 N i2 .^n c c 1 5 ^2- ^ O U * T 1 SA *-' A 3 1 N C £ 1 ^ 1 ^ s 1 & H f 0 ^ O fi !? £.2 * H 0 |3 S 5 & Li c b tosu osci 1 ** ^ | £ | Numer 1 próby MOO ON t 00 H -H O" O* O O ^ °°. ^l H. "1 ^ ^ I r** co co O co 00 (SH (SN W 0r ^ H« M. ^ ^ MO h VO V) 5\ \C HWH N (S IO O «o o\ ^ O *r± ri Tf 0 oN d « »o r- 00 r- 00 vo r- «o 10 10 in «o H ^ ^ 00 H 00 1—1 ^H OOOOOO SD VO VD OOOOOO rM m o\ 00 o\ 00 «—< «—1 1—i 1—< f-H i-H OOOOOO w n w m n h- T 1-1 , fi co °- »-H NC °°* 1 có* 1 l-H 1 O 1 lO 1 ¦lt 1 0» l «—1 1 O vo 1 0 1 0 1 fH 1 0 1 CO I i » 1 c 1 I I i i101 771 7 Zastrzezenie patentowe 1. Sposób otrzymywania substancji przeciwnowotworowych, skladajacych sie z polisacharydów, zawieraja¬ cych azot, przez ekstrakcje grzybów, nalezacych do gromady Basidiomycetes, za pomoca wodnego rozpuszczalni¬ ka i oczyszczanie otrzymanego wyciagu, znamienny tym, ze grzyb poddaje sie ekstrakcji wodnym roz¬ puszczalnikiem pod zwiekszonym cisnieniem i w temperaturze 120-200°C.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze ekstrakcji poddaje sie grzyb nalezacy do rodzaju Coriolus z gromady Basidiomycetes.

3. Sposób wedlug zastrz. 1,znamienny tym, ze ekstrakcji poddaje sie grzyb nalezacy do rodzaju Lentinus z gromady Basidiomycetes.

4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze ekstrakcje prowadzi sie pod cisnieniem 1,8-20 kG/cm2.

5. Sposób wedlug zastrz. 1,znamienny tym, ze ekstrakcje prowadzi sie w ciagu 5-360 minut.

6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako wodny rozpuszczalnik w procesie ekstrakcji stosuje sie wode albo rozcienczony roztwór alkaliczny o stezeniu mniejszym niz In. PL PL PL PL