BR112020008695A2 - composição, usos de uma composição e de um sal, processo para fabricar uma composição, e, sal. - Google Patents

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Abstract

  Composição contendo (A) pelo menos um sal de um éster orgânico de colina ou de um derivado de colina, e (B) pelo menos um tensoativo selecionado de anfotérico e aniônico e tensoativos não iônicos.

Description

COMPOSIÇÃO, USOS DE UMA COMPOSIÇÃO E DE UM SAL, PROCESSO PARA FABRICAR UMA COMPOSIÇÃO, E, SAL
[001] A presente invenção está direcionada para uma composição contendo (A) pelo menos um sal de acordo com a fórmula geral (1) (R9);N*-(CH)A/C(RINRI-(O0-X)n-O-C(O)-R' A (D em que n é selecionado de 1 a 12, m é selecionado de zero a 50, R' é selecionado de alquila C1-Cio, linear ou ramificada e arila Cç6-Ci10, em que R' pode carregar de um ou mais hidroxila ou grupos C=O ou COOH, parcial ou totalmente neutralizados, se aplicável, R? são os mesmos ou diferentes e selecionados de alquila C1- Cio, fenila, R? e Rº são os mesmos ou diferentes e selecionados de hidrogênio e alquila C1-Ca, X é alquileno C7-C, e A é um contraífon, inorgânico ou orgânico, e (B) pelo menos um tensoativo selecionado de tensoativos anfotérico e aniônico e não iônico.
[002] Composições e especialmente composições detergentes são fabricadas para várias aplicações de limpeza, por exemplo lavagem de roupa ou lavagem de louça automática. Todas delas satisfazem muitas exigências diferentes. Embora as composições sólidas desempenhem um papel tradicional, as composições líquidas, entretanto também têm seus méritos. Elas podem ser completamente transferidas para dentro de uma máquina de lavar roupas automática sem deixar resíduos de detergente não utilizado na unidade de dosagem. Especialmente para os chamados detergentes de lavar roupas coloridos, os detergentes de lavar roupas líquidos são de enorme importância.
[003] Os fabricantes de detergente demandam uma enorme flexibilidade dos ingredientes que eles usam, incluindo os construtores. Com a popularidade crescente de detergentes líquidos de serviço pesado, um construtor bem conhecido é o citrato de sódio, o sal de trissódio do ácido cítrico. O citrato de sódio é adequado para o uso como um construtor em detergentes de lavagem de roupa de serviço pesado por causa da sua capacidade para sequestrar íons cálcio e magnésio encontrados na água de torneira e, diferente dos construtores de fosfato, é ambientalmente seguro. O mesmo é especialmente adequado para o uso em formulações de detergente líquido por que, diferente de outros construtores de detergente ambientalmente seguros, o citrato de trissódio é bem solúvel. Não obstante, um teor mínimo de água de 30% em peso é usualmente requerido. Esta exigência limita a flexibilidade dos fabricantes de detergente de lavar roupas. Esta exigência acaba por ser ainda mais nociva em vista da tendência moderna dentro desta indústria, a saber diminuir as dimensões das unidades de dosagem (bolsas) e, portanto, reduzir o conteúdo de água.
[004] Um problema adicional que os detergentes de lavar roupas se defrontam é a vida de prateleira. Especialmente as composições líquidas usualmente perdem a sua atividade depois de algum tempo. Várias razões foram identificadas. Um componente que pode ser desativado depois de algum tempo são as enzimas. Embora as enzimas sejam componentes úteis, por exemplo, para a remoção de manchas de alimentos como ovos, frutas e similares, sua atividade é deteriorada depois de algum tempo na prateleira ou no usuário final. Os compostos de boro que são conhecidos como estabilizadores de enzima, ver, por exemplo, a US 4.465.619, estão agora sob exame minucioso.
[005] Na WO 97/03156, certos derivados de colina e seu uso como tensoativos são descritos.
[006] Foi, portanto, um objetivo da presente invenção prover uma composição que permitisse uma formulação flexível, mesmo com conteúdo de água alto ou baixo. Foi adicionalmente o objetivo prover uma composição que tivesse excelente vida de prateleira, especialmente com respeito à(s) enzima(s) nela contida(s). Foi adicionalmente um objetivo prover um método para fabricar tais composições e foi adicionalmente um objetivo prover usos de tais composições.
[007] Consequentemente, as composições como definidas no princípio foram descobertas, daqui em diante também definidas como as composições inventivas ou como composições de acordo com a presente invenção. As composições inventivas contêm (A) pelo menos um sal de acordo com a fórmula geral (D, daqui em diante de modo geral também aludido como éster (A) ou sal (A) ou o componente (A), e (B) pelo menos um tensoativo selecionado de tensoativos anfotéricos e aniônicos e não iônicos, daqui em diante também aludidos como tensoativo (B) ou componente (B).
[008] O sal (A) é um sal de um éster orgânico de colina ou de um derivado de colina. O ânion do sal (A) — o contrafon — pode ser inorgânico ou orgânico, orgânico sendo preferido. Os exemplos de contrafons inorgânicos do sal (A) são nitrato, hidróxido, sulfato, fosfato, hidrogeno fosfato, di- hidrogeno fosfato, carbonato, bicarbonato e haleto, por exemplo brometo ou cloreto. Preferidos são haleto, especialmente cloreto e sulfato, carbonato e bicarbonato. Os exemplos de contraíons orgânicos são lactato, acetato, tartarato, citrato e CH3;SO; (metanossulfonato). Em modalidades com contrafons bivalentes ou trivalentes, as respectivas quantidades molares de cátion estão presentes.
[009] O átomo de nitrogênio no sal (A) carrega três grupos metila e um grupo hidroxietila. O termo derivados de colina como usado no contexto da presente invenção se refere aos compostos que carregam pelo menos um grupo alquila outro que não um grupo metila ou um grupo hidroxialquila outro que não um grupo 2-hidroxietila ou adicionalmente grupos alcóxi.
[0010] Mais especificamente, o sal (A) é um composto da fórmula geral (1) (R)I;N*-(CH)C(RNR)-(0-X)1m-O0-C(O)-R' A" (D) em que n é selecionado de 1 a 12, por exemplo 1 a 9, preferivelmente 1,2,3 ou 4 e ainda mais preferivelmente n é 1, m é selecionado de zero a 50, por exemplo 2 a 50, preferido é a 25. Mais preferivelmente, entretanto, m é zero.
R' é selecionado de alquila C1-Cio, linear ou ramificada e arila Cç6-C1o, em que R' pode carregar de um ou mais hidroxila ou C=O ou grupos COOH, parcial ou totalmente neutralizados, se aplicável. Os exemplos preferidos de R' são alquila C1-Cs não substituída tais como metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, isobutila, n-hexila, alquila Ci-Cio não substituída preferida são metila e etila, além disso substituída tal alquila Cr-Cio como - CH(OH)-CH(OH)-COOH, — CH(OH)-CH;3, — (E)-CH=CHCOOH, — (Z)- CH=CHCOOH, -Cç«Hs, para-HO-CsHy-, o,p-dihidroxifenila e 3,4,5-trihidróxi- fenila. Em uma modalidade preferida, O-C(O)-R' junto constitui um citrato. Ainda mais preferido, R' é metila.
R? são os mesmos ou diferentes e selecionados de fenila e alquila Cr-Cio, por exemplo metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, n-pentila, isopentila, sec-pentila, neo-pentila, 1,2-dimetilpropila, isoamila, n-hexila, isohexila, sec-hexila, n-heptila, n- octila, 2-etilhexila, n-nonila, n-decila, 2-n-propil-heptila ou isodecila, preferida é alquila C1-Cio linear e mais preferida é alquila C;-C, linear, ainda mais preferido pelo menos dois grupos R? são CH; e o terceiro R? é selecionado de alquila C1-C1o linear e mais preferido, todos R? são os mesmos e metila.
R?º e Rº são os mesmos ou diferentes e selecionados de hidrogênio e alquila C;-C4, preferidos são n- por exemplo metila, etila, n- propila e n-butila e ainda mais preferidos tanto R? quanto Rº são hidrogênio. em uma outra modalidade, R?º é alquila Cr-C, e Rº é hidrogênio, preferivelmente R? é metila e Rº é hidrogênio.
X é alquileno C7-Ca, por exemplo -CH;-CH7-, -CH(CH;3)-CH;- , -(CH>)3-, CH3-CH(CH;3)- ou -(CH>)4-, e
[0011] A' é um contrafon, inorgânico ou orgânico. Os exemplos de contrafons inorgânicos de sal (A) são sulfato, fosfato, hidrogeno fosfato, di- hidrogeno fosfato, carbonato, bicarbonato e haleto, por exemplo brometo ou cloreto. Preferidos são haleto, especialmente cloreto e sulfato, carbonato e bicarbonato. Os exemplos de contrafons orgânicos são lactato, acetato, tartarato, citrato e CH;SO;3" (metanossulfonato).
[0012] O exemplo mais preferido de sais (A) são sais de ésteres de colina com tartarato ou citrato como contrafon e sais de acetil colina, citrato de colina e de tartarato de colina, por exemplo lactatos, acetatos, tartaratos, citratos.
[0013] O componente (a) não é um tensoativo. Em uma modalidade, uma solução de 5 g do componente (a) em 1000 g de água tem uma tensão superficial dinâmica de > 45 mN/m a 20ºC e 101,3 kPa. Uma solução de 5 g do componente (a) em 1000g de água pode ter uma tensão superficial dinâmica de > 50 mN/m a 20ºC e 101,3 kPa. A tensão superficial dinâmica pode ser medida com um tensiômetro de pressão de bolha, em que a pressão interna máxima de uma bolha de gás que é formada em um líquido por meio de um capilar é medida; o valor medido habitualmente corresponde à tensão superficial em uma certa idade de superfície, o tempo do início da formação de bolha até a ocorrência do máximo da pressão. Em uma modalidade, a idade da superfície durante a medição a tensão superficial dinâmica a 20ºC e 101,3 kPa com um tensiômetro de pressão de bolha é 50 ms.
[0014] Em modalidades nas quais contrafon A" é — ou pode ser — bivalente tal como sulfato, tartarato, carbonato ou polivalente tal como fosfate ou citrato, a carga positiva necessária pode ser fornecida por um outro cátion derivado do sal (A) ou por cátions de metal alcalino tais como potássio ou preferivelmente sódio ou por amônio, não substituído ou substituído com alquila C,-C, e/ou com 2-hidroxietila.
[0015] Em modalidades nas quais R' carrega de um ou mais grupos carboxila eles podem ser grupos COOH livres ou parcial ou totalmente neutralizados com álcali, por exemplo potássio ou especialmente sódio ou eles podem ser esterificados, por exemplo com (Rº);N*-(CH>)-(O-X)n-OH. Tais modalidades resultam no di- ou triéster, se aplicável, do respectivo ácido di ou tricarboxílico. As misturas de mono- e diésteres, por exemplo, do ácido tartárico ou ácido cítrico e as misturas de di- e triésteres do ácido cítrico também são praticáveis.
[0016] Em uma modalidade preferida da presente invenção, sal (A) é selecionado de (CH3);N*-(CH2);-0-C(O)-R (A') (ID) em que (A')' é selecionado de metanossulfonato, tartarato e citrato e em que Ró é selecionado de -CH;-C(OH)(COOX?)-CH;- COOX? e -CH(OH)-CH(OH)-COOX' em que X' é selecionado de hidrogênio, metal alcalino — especialmente sódio — e (CH3);N*-(CH;>),- e em que X? são os mesmos ou diferentes e selecionados de hidrogênio, metal alcalino — especialmente sódio — e (CH3);N*-(CH;);-. Em uma modalidade preferida, o grupo éster de O-C(O)-R” e (A'). corresponde um a outro.
[0017] Em uma modalidade da presente invenção, as composições inventivas contêm na faixa de 0,5 a 30% em peso de sal (A), referindo-se à composição inteira, preferivelmente 0,5 a 6% em peso e mais preferivelmente 1 a 3% em peso.
[0018] Em uma modalidade da presente invenção, o sal (A) contém como uma impureza um composto (A') (R9)I;N*+-(CH)C(RNR)-(0-X)n-OH R!|-COO- em que as variáveis R!, Rà, X, ne m são as mesmas como no sal (A) correspondente. A dita impureza pode atingir até 50% em mol, preferivelmente 0,1 a 20% em mol, ainda mais preferivelmente 1 a 10% em mol de sal (A). Embora a impureza (A') possa originar da síntese do sal (A) e possa ser removida pelos métodos de purificação não é preferido remove-la.
[0019] As composições inventivas contêm adicionalmente pelo menos um tensoativo (B) selecionado de tensoativos anfotéricos e especialmente de tensoativos aniônicos e tensoativos não iônicos, daqui em diante também aludido como tensoativos anfotéricos (B), tensoativos aniônicos (B) e tensoativos não iônicos (B), respectivamente.
[0020] Os exemplos de tensoativos aniônicos adequados (B) são metal alcalino e sais de amônio de sulfatos de alquila Cg-C18, poliéter sulfato de álcool graxo Cg-Cig, de hemi-ésteres do ácido sulfúrico alquila C4-Ci? fenóis etoxilados (etoxilação: 1 a 50 mol de óxido de etileno/mol), sulfo ésteres de alquila de ácido graxo C17-Ci8, por exemplo sulfo ésteres metílicos de ácido graxo C17-Cig8, além disso de ácidos alquila C17-Cig sulfônicos e de ácidos alquila Cio-Cig arilsulfônicos. Preferência é dada aos sais de metal alcalino dos compostos anteriormente mencionados, de modo particularmente preferível os sais de sódio.
[0021] Os exemplos específicos de tensoativos aniônicos (B) são compostos de acordo com a fórmula geral (III) CsHa5+1-O(CHCH/O0),--SO;M (ID)
em que s —sendoum número na faixa de 10 a 18, preferivelmente 12 a 14 e ainda mais preferivelmente s = 12, t sendoum número na faixa de | a 5, preferivelmente 2 a 4 e ainda mais preferivelmente 3.
M sendo selecionado de metais alcalinos, preferivelmente potássio e ainda mais preferivelmente sódio.
[0022] No tensoativo (B), as variáveis s e t podem ser números médios e, portanto, eles não são necessariamente números inteiros, enquanto nas moléculas individuais de acordo com fórmula (III), tanto s quanto t indicam números inteiros.
[0023] Os exemplos adicionais para tensoativos aniônicos adequados (B) são sabões, por exemplo os sais de sódio ou potássio de ácido esteárico, ácido oléico, ácido palmítico, carboxilatos de éter e fosfatos de éter de alquila.
[0024] Os tensoativos não iônicos preferidos (B) são álcoois alquilados, copolímeros di- e multiblocos de óxido de etileno e óxido de propileno e produtos de reação de sorbitano com óxido de etileno ou óxido de propileno, alquil poligicosídeos (APG), éteres mistos de hidroxialquila e óxidos de amina.
[0025] Os exemplos preferidos de álcoois alquilados e álcoois graxos alcoxilados são, por exemplo, compostos da fórmula geral (IV)
EI A x (NV) Rô em que Ró é idêntico ou diferente e selecionado de hidrogênio e alquila C;-Cio linear, preferivelmente em cada caso idêntico e etila e de modo particularmente preferível hidrogênio ou metila, R é selecionado de alquila Cg-C22, ramificada ou linear, por exemplo n-CgH17, n-CioH2a1, n-Ci2H>25, n-C 14H29, n-C 16H33 ou n-C18H37,
R$ é selecionado de alquila C1-Cio, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, n-pentila, isopentila, sec- pentila, neopentila, 1,2-dimetilpropila, isoamila, n-hexila, isohexila, sec- hexila, n-heptila, n-octila, 2-etilhexila, n-nonila, n-decila ou isodecila.
[0026] As variáveis m e x estão na faixa de zero a 300, onde a soma de nem é pelo menos um, preferivelmente na faixa de 3 a 50. Preferivelmente, m está na faixa de 1 a 100 e x está na faixa de O a 30.
[0027] Em uma modalidade, os compostos da fórmula geral (III) podem ser copolímeros de bloco ou copolímeros aleatórios, preferência sendo dada aos copolímeros de bloco.
[0028] Outros exemplos preferidos de álcoois alquilados são, por exemplo, compostos da fórmula geral (V) Rº Rº
IDA AS a d em que Rº é idêntico ou diferente e selecionado de hidrogênio e alquila Cy-Cio linear, preferivelmente idêntico em cada caso e etila e de modo particularmente preferível hidrogênio ou metila, Rº é selecionado de alquila C6-Co, ramificada ou linear, em particular n-CgHi7, n-CioHo1, n-CioH2s, n-Ci3H27, n-CisH3a1, n-CiaHoo, n- C16H33, n-C18H37, a é um número na faixa de zero a 10, preferivelmente de 1 a 6, b é um número na faixa de | a 80, preferivelmente de 4 a 20, d é um número na faixa de zero a 50, preferivelmente 4 a 25.
[0029] A soma a + b + d está preferivelmente na faixa de 5 a 100, ainda mais preferivelmente na faixa de 9 a 50.
[0030] Os exemplos preferidos para os éteres mistos de hidroxialquila são compostos da fórmula geral (VI)
OH EA vo Rº ' em que as variáveis são definidas como segue: Rº é idêntico ou diferente e selecionado de hidrogênio e alquila Cy-Cio linear, preferivelmente em cada caso idêntico e etila e de modo particularmente preferível hidrogênio ou metila, R7 é selecionado de alquila Cg-C22, ramificada ou linear, por exemplo isoCnH23, isoCi3H27, n-CgHi7, n-CioHo1, n-CioHos, n-CiaHoo, n- C16H33 ou n-C 18H37, R$ é selecionado de alquila C1-Cig, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, n-pentila, isopentila, sec- pentila, neopentila, 1,2-dimetilpropila, isoamila, n-hexila, isohexila, sec- hexila, n-heptila, n-octila, 2-etilhexila, n-nonila, n-decila, isodecila, n- dodecila, n-tetradecila, n-hexadecila e n-octadecila.
[0031] As variáveis m e x estão na faixa de zero a 300, onde a soma de n e m é pelo menos um, preferivelmente na faixa de 5 a 50. Preferivelmente, m está na faixa de 1 a 100 e n está na faixa de O a 30.
[0032] Os compostos das fórmulas gerais (V) e (VI) podem ser copolímeros de bloco ou copolímeros aleatórios, preferência sendo dada aos copolímeros de bloco.
[0033] Os tensoativos não iônicos adicionais adequados são selecionados de copolímeros di- e multiblocos, compostos de óxido de etileno e óxido de propileno. Os tensoativos não iônicos adicionais adequados são selecionados de ésteres de sorbitano etoxilados ou propoxilados. Óxidos de amina ou alquil poligicosídeos, especialmente poliglicosídeos de alquila C,1- Ci8 linear e poligicosídeos de alquila Cg-Ci8 ramificada tais como compostos da fórmula de média geral (VII) são igualmente adequados.
R< O—(S', ; / NX (VI) Rº em que: R!'º é alquila C1-Ca, em particular etila, n-propila ou isopropila, R!' é -(CH2)5-R'º, G' é selecionado de monossacarídeos com 4 a 6 átomos de carbono, especialmente glicose e xilose, y nafaixade1l,lad,y sendo um número médio.
[0034] Os exemplos adicionais de tensoativos não iônicos são compostos das fórmulas gerais (VIII) e (IX) | À ros, (VII) j (AO)v1 (AO), Re So SEN O) AO é selecionado de óxido de etileno, óxido de propileno e óxido de butileno, EO é óxido de etileno, CHCH;-O, R'º é alquila C1-C4, em particular etila, n-propila ou isopropila, R"? selecionado de alquila Cg-C18, ramificada ou linear AO é selecionado de óxido de propileno e óxido de butileno, w é um número na faixa de 15 a 70, preferivelmente 30 a 50, wl e w3 são números na faixa de 1 a 5,e w2 é um número na faixa de 13 a 35.
[0035] Uma visão geral de tensoativos não iônicos adicionais adequados pode ser encontrada na EP-A O 851 023 e na DE-A 198 19 187.
[0036] As misturas de dois ou mais tensoativos não iônicos diferentes
(B) também pode estar presente.
[0037] Outros tensoativos que podem estar presentes são selecionados de tensoativos anfotéricos (zwiteriônicos) e tensoativos aniônicos e misturas dos mesmos.
[0038] Os exemplos de tensoativos anfotéricos (B) são aqueles que carregam uma carga positiva e uma negativa na mesma molécula sob condições de uso. Os exemplos preferidos de tensoativos anfotéricos são os chamados tensoativos de betaína. Muitos exemplos de tensoativos de betaína carregam um átomo de nitrogênio quaternizado e um grupo de ácido carboxílico por molécula. Um exemplo particularmente preferido de tensoativos anfotéricos é cocamidopropil betaína (lauramidopropil betaína).
[0039] Os exemplos de tensoativos de óxido de amina são compostos da fórmula geral (X) RURMRUNDSO | (X) em que R"?, R'º e R"* são independentemente selecionados um do outro de porções alifáticas, cicloalifáticas ou alquileno C7-C, e porções de alquila Cio-Coo amido. Preferivelmente, R"? é selecionado de alquila Cg-C29 ou alquileno C2-Ca e alquila Cio-C2o amido e R'? e R!º são ambos metila.
[0040] Um exemplo particularmente preferido é aminóxido de lauril dimetila, as vezes também chamado de óxido de lauramina. Um exemplo adicional particularmente preferido é dimetilaminóxido de cocamidilpropila, as vezes também chamado de óxido de cocamidopropilamina.
[0041] Em uma modalidade da presente invenção, as composições inventivas contêm 0,1 a 60% em peso de tensoativo (B), preferivelmente selecionado de tensoativos aniônicos (B), tensoativos não iônicos (B), tensoativos anfotéricos (B) e tensoativos de óxido de amina assim como combinações de pelo menos dois dos anteriores. Em uma modalidade preferida, as composições inventivas contêm 5 a 30% em peso de tensoativo aniônico e pelo menos um tensoativo não iônico, por exemplo na faixa de 3 a
20% em peso.
[0042] As composições inventivas podem ser líquidas na temperatura ambiente (20ºC). Preferivelmente, elas são líquidas estáveis na temperatura ambiente. Neste contexto, o termo “estável” significa que tais composições inventivas são líquidas e não mostram traços de formação de precipitado ou turbidez mesmo depois de 20 dias de armazenamento.
[0043] Em uma modalidade da presente invenção, as composições inventivas são aquosas, tipicamente contendo na faixa de 5 a 95% em peso de água, por exemplo 5 a 30% em peso e mais preferido 5 a 25% em peso ou 20 a 70% em peso de água e zero a 20% em peso de solvente orgânico. Preferido é 5 a 15% em peso de água e nenhuma quantidade de solvente orgânico, por exemplo 1% em peso ou menos.
[0044] As composições inventivas podem ser alcalinas ou exibem um valor de pH neutro ou levemente ácido, por exemplo 6 a 14, preferivelmente 6,5 a 13, mais preferivelmente 8 a 10,5 e mais preferivelmente 8,5 a 9,0.
[0045] Em uma modalidade da presente invenção, as composições inventivas adicionalmente compreendem (C) pelo menos uma enzima, daqui em diante também aludida como enzima (C), por exemplo hidrolase (C). As enzimas (C) preferidas são selecionadas de proteases, amilases e lipases, daqui em diante também aludidas como proteases (C), amilases (C) ou lipases (C), respectivamente.
[0046] Também foi descoberto que as enzimas (C) nas composições inventivas exibem uma vida útil particularmente alta. As enzimas (C) que são particularmente benéficas nas composições inventivas são selecionadas de hidrolases (EC 3). As enzimas (C) preferidas são selecionadas do grupo de enzimas atuando na ligação de éster (E.C. 3,1), glicosilases (E.C. 3,2) e peptidases (E.C. 3,4). As enzimas atuando na ligação de éster (E.C. 3,1), daqui em diante também aludidas como lipases (componente (b)), respectivamente. As glicosilases (E.C. 3,2) daqui em diante também aludidas como amilases (C) e celulases (C). As peptidases daqui em diante também aludidas como proteases (C).
[0047] As hidrolases (C) no contexto da presente invenção são identificadas pelas sequências de polipeptídeo, também aqui chamadas de sequências de aminoácido. A sequência de polipeptídeo especifica a estrutura tridimensional incluindo o “sítio ativo” de uma enzima que por sua vez determina a atividade catalítica da mesma. As sequências de polipeptídeo podem ser identificadas por uma SEQ ID NO. De acordo com o World Intellectual Property Office (WIPO) Standard ST.25 (1998) os aminoácidos aqui são representados usando código de três letras com a primeira letra como uma letra maiúscula ou o correspondente a uma letra.
[0048] As enzimas (C) no contexto da presente invenção podem se referir às enzimas precursoras e/ou as enzimas variantes, ambas tendo atividade enzimática. As enzimas tendo atividade enzimática são enzimaticamente ativas ou exerce conversão enzimática, significa que as enzimas atuam sobre os substratos e converte os mesmos em produtos. O termo “enzima” aqui exclui variantes inativas de uma enzima.
[0049] Uma sequência “precursora” de uma proteína ou enzima precursora, também chamada “enzima precursora” é a sequência de partida para a introdução de mudanças, por exemplo, pela introdução de uma ou mais substituições, inserções, deleções de aminoácido ou uma combinação das mesmas na sequência, resultando em “variantes” das sequências precursoras. O termo enzima precursora (ou sequência precursora) inclui enzimas de tipo selvagem (sequências) e sequências geradas sinteticamente (enzimas) que são usadas como sequências de partida para introdução de mudanças (adicionais).
[0050] O termo “variante de enzima” ou “variante de sequência” ou “enzima de variante” se refere a uma enzima que difere da sua enzima precursora na sua sequência de aminoácidos a um certo grau. Se não indicado de outro modo, a enzima de variante “tendo atividade enzimática” significa que esta enzima de variante tem o mesmo tipo de atividade enzimática como a respectiva enzima precursora.
[0051] Na descrição das variantes da presente invenção, a nomenclatura descrita como segue é usada: as substituições do aminoácido são descritas para fornecer o aminoácido original da enzima precursora seguido pelo número da posição dentro da sequência de aminoácidos, seguido pelo aminoácido substituído.
[0052] As deleções de aminoácido são descritas para fornecer o aminoácido original da enzima precursora seguido pelo número da posição dentro da sequência de aminoácidos, seguido por *.
[0053] As inserções de aminoácido são descritas para fornecer o aminoácido original da enzima precursora seguido pelo número da posição dentro da sequência de aminoácidos, seguido pelo aminoácido original e o aminoácido adicional. Por exemplo, uma inserção na posição 180 de lisina ao lado da glicina é designada como “Gly180GIyLys” ou “G180GK”.
[0054] No caso onde uma substituição e uma inserção ocorrem na mesma posição, isto pode ser indicado como S99SD+S99A ou resumidamente S99AD. No caso onde um resíduo de aminoácido idêntico ao resíduo de aminoácido existente é inserido, está claro que a degeneração na nomenclatura surge. Se por exemplo uma glicina é inserida depois da glicina nos exemplos acima isto seria indicado por G180GG.
[0055] Onde alterações diferentes podem ser introduzidas em uma posição, as alterações diferentes são separadas por uma vírgula, por exemplo, “Argl170Tyr, Glu” representa uma substituição de arginina na posição 170 com tirosina ou ácido glutâmico. Alternativamente as alterações diferentes ou substituições opcionais podem ser indicadas em colchetes por exemplo, Argl70[Tyr, Gly] ou Arg170( Tyr, Gly); ou resumidamente R170 [Y,G] ou R170 (Y, G); ou por extenso R170Y, R170G.
[0056] As variantes de enzima podem ser definidas pela sua identidade de sequência quando comparadas a uma enzima precursora. À identidade de sequência habitualmente é provida como “% de identidade de sequência” ou “% de identidade”. Para o cálculo de identidades de sequência, em uma primeira etapa um alinhamento de sequência tem que ser produzido. De acordo com esta invenção, um alinhamento global aos pares tem que ser produzido, significa que duas sequências têm de ser alinhadas no seu comprimento completo, que é habitualmente produzido usando-se uma abordagem matemática, chamada algoritmo de alinhamento.
[0057] No contexto da presente invenção, o alinhamento é gerado usando-se o algoritmo de Needleman e Wunsch (J. Mol. Biol. 1979 48, p. 443-453). Preferivelmente, o programa “NEEDLE” (The European Molecular Biology Open Software Suite (EMBOSS)) é usado para o propósito da invenção corrente, usando os parâmetros de default do programa (abertura do intervalo = 10,0, extensão de intervalo = 0,5 e matrizaãEBLOSUMO62). De acordo com esta invenção, o seguinte cálculo de% de identidade se aplica: % de identidade = (resíduos idênticos/comprimento da região de alinhamento que está mostrando a respectiva sequência desta invenção no seu comprimento completo): 100.
[0058] No contexto da presente invenção, as variantes de enzima podem ser descritas como uma sequência de aminoácidos que é pelo menos n% idêntica à sequência de aminoácidos da enzima precursora respectiva com “n” sendo um número inteiro entre 10 e 100. Em uma modalidade, as enzimas variantes são pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas quando comparadas com o comprimento total da sequência de aminoácidos da enzima precursora, em que a variante de enzima tem atividade enzimática.
[0059] As variantes de enzima podem ser definidas pela sua similaridade de sequência quando comparadas a uma enzima precursora. À similaridade de sequência habitualmente é provida como “% de similaridade de sequência” ou “% de similaridade”. % de similaridade de sequência leva em consideração que conjuntos definidos de aminoácidos compartilham propriedades similares, por exemplo, pelo seu tamanho, pela sua hidrofobicidade, pela sua carga ou pelas outras características. Aqui, a mudança de um aminoácido com um aminoácido similar pode ser chamada “mutação conservativa”. Para a determinação de% de similaridade de acordo com esta invenção o seguinte se aplica: o aminoácido A é similar aos aminoácidos S; o aminoácido D é similar aos aminoácidos E e N, o aminoácido E é similar aos aminoácidos D e K e Q; o aminoácido F é similar aos aminoácidos W e Y; o aminoácido H é similar aos aminoácidos Ne Y; o aminoácido I é similar aos aminoácidos L e M e V; o aminoácido K é similar aos aminoácidos E e Q e R; o aminoácido L é similar aos aminoácidos I e M e V; o aminoácido M é similar aos aminoácidos I e L e V; o aminoácido N é similar aos aminoácidos D e H e S; o aminoácido Q é similar aos aminoácidos EeKeR;o aminoácido R é similar aos aminoácidos K e Q; o aminoácido S é similar aos aminoácidos A e N e T; o aminoácido T é similar aos aminoácidos S; aminoácido V é similar aos aminoácidos I e Le M; o aminoácido W é similar aos aminoácidos F e Y; o aminoácido Y é similar aos aminoácidos F e H e W. As substituições de aminoácido conservativas podem ocorrer no comprimento total da sequência de uma sequência de polipeptídeo de uma proteína funcional tal como uma enzima. Em uma modalidade, tais mutações não pertencem aos domínios funcionais de uma enzima. Em uma modalidade, as mutações conservativas não pertencem aos centros catalíticos de uma enzima.
[0060] Levando-se as mutações conservativas em conta, um valor para a similaridade de sequência de duas sequências de aminoácido pode ser calculado a partir do mesmo alinhamento, que é usado para calcular% de identidade. De acordo com esta invenção, o seguinte cálculo de% de similaridade se aplica: % de similaridade = [(resíduos idênticos + resíduos similares)/comprimento da região de alinhamento que está mostrando a respectiva sequência (s) desta invenção no seu comprimento completo]: 100.
[0061] No contexto da presente invenção, as variantes de enzima podem ser descritas como uma sequência de aminoácidos que é pelo menos m5% similar as respectivas sequências precursoras com “m” sendo um número inteiro entre 10 e 100. Em uma modalidade, as enzimas variantes são pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% similar quando comparadas com a sequência de polipeptídeo de comprimento total da enzima precursora, em que a enzima de variante tem atividade enzimática.
[0062] A “atividade enzimática” significa o efeito catalítico exercido por uma enzima, que habitualmente é expressa como unidades por miligrama de enzima (atividade específica) que se referem às moléculas de substrato transformadas por minuto por molécula de enzima (atividade molecular).
[0063] As enzimas variantes podem ter atividade enzimática de acordo com a presente invenção quando as ditas variantes de enzima exibem pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou 100% da atividade enzimática da respectiva enzima precursora.
[0064] Em uma modalidade, as composições inventivas compreendem pelo menos uma protease (C). As enzimas (C) tendo atividade proteolítica são chamadas “proteases” ou peptidases no contexto da presente invenção. Tais enzimas são membros da classe EC 3.4.
[0065] As proteases (C) são classificadas adicionalmente como aminopeptidases (EC 3.4.11), dipeptidases (EC 3.4.13), dipeptidil-peptidases e tripeptidil-peptidases (EC 3.4.14), peptidil-dipeptidases (EC 3.4.15), carboxipeptidases tipo serina (EC 3.4.16), metalocarboxipeptidases (EC
3.4.17), carboxipeptidases tipo cisteína (EC 3.4.18), peptidases ômega (EC
3.4.19), serina endopeptidases (EC 3.4.21), cisteína endopeptidases (EC
3.4.22), endopeptidases aspárticas (EC 3.4.23), metalo-endopeptidases (EC
3.4.24), treonina endopeptidases (EC 3.425) ou endopeptidases de mecanismo catalítico desconhecido (EC 3.4.99).
[0066] A protease (C) pode ser uma endopeptidase de qualquer tipo ou uma mistura de endopeptidases de qualquer tipo. Em uma modalidade, a protease de acordo com a invenção é selecionada de serina protease (EC
3.421).
[0067] As serina proteases ou serina peptidases são distinguidas por terem uma serina no sítio cataliticamente ativo, que forma um aduto covalente com o substrato durante a reação catalítica. Uma serina protease no contexto da presente invenção é selecionada do grupo consistindo de quimiotripsina (por exemplo, EC 3.4.21.1), elastase (por exemplo, EC 3.4.21.36), elastase (por exemplo, EC 3.4.21.37 ou EC 3.4.21.71), granzima (por exemplo, EC
3.4.21.78 ou EC 3.4.21.79), calicreína (por exemplo, EC 3.4.21.34, EC
3.4.21.35, EC 3.421.118 ou EC 3.421.119), plasmina (por exemplo, EC
3.4.21.7), tripsina (por exemplo, EC 3.4.21.4), trombina (por exemplo, EC
3.4.21.5) e subtiliina A subtiliina também é conhecida como subtilopeptidase, por exemplo, EC 3.4.21.62, a última daqui em diante também sendo aludida como “subtilisina”.
[0068] As estruturas cristalográficas das proteases (C) mostram que o sítio ativo está habitualmente localizado em uma ranhura na superfície da molécula entre domínios estruturais adjacentes e a especificidade de substrato é controlada pelas propriedades de sítios de ligação dispostos ao longo da ranhura em um ou ambos os lados do sítio catalítico que é responsável pela hidrólise da ligação cindível. Consequentemente, a especificidade da protease (C) pode ser descrita pelo uso de um modelo conceitual no qual cada subsítio de especificidade é capaz de acomodar a cadeia lateral de um único resíduo de aminoácido. Os sítios são numerados a partir do sítio catalítico, S1, S2...Sn para o terminal N do substrato e S1º, S2'...Sn' para o terminal C. Os resíduos que eles acomodam são numerados Pl, P2..Pn e Pl, P2'..Pn', respectivamente:
[0069] Nesta representação o sítio catalítico da enzima é marcado “*” e a ligação peptídica clivada (a união cindível) é indicada pelo símbolo “+”.
[0070] No geral, os três tipos principais de atividade de protease (atividade proteolítica) são: igual à tripsina, onde há clivagem de substratos de amida a seguir de Arg (N) ou Lys (K) em PI, igual à quimotripsina onde a clivagem ocorre a seguir de um dos aminoácidos hidrofóbicos em P1 e igual à elastase com clivagem a seguir de um Ala (a) em PI.
[0071] Um subgrupo das serina proteases tentativamente designadas como subtilases foi proposto por Siezen et al. (1991), Protein Eng. 4: 719-737 e Siezen et al. (1997), Protein Science 6: 501-523. Elas são definidas pela análise de homologia de sequências com mais do que 170 aminoácidos de serina proteases previamente aludidas como proteases iguais à subtilisina. Uma subtilisina foi previamente muitas vezes definida como uma serina protease produzida pelas bactérias Gram positivas ou fungos e de acordo com Siezen et al. agora é um subgrupo das subtilases. Uma ampla variedade de subtilases foram identificadas e a sequência de aminoácidos de várias subtilases foi determinada. Para uma descrição mais detalhada de tais subtilases e suas sequências de aminoácido referência é feita a Siezen et al.
(1997), Protein Science 6: 501-523. As subtilases podem ser divididas em 6 subdivisões, isto é, a família da subtilisina, a família da termitase, a família da proteinase K, a família da peptidase lantibiótica, a família quexina e a família pirolisina.
[0072] Um subgrupo das subtilases são as subtilisinas que são serina proteases da família S8 como definidas pela base de dados MEROPS (http://merops.sanger.ac.uk). A família S8 da peptidase contém a subtilisina de serina endopeptidase e seus homólogos. Na subfamília S8A, os resíduos de sítio ativo frequentemente ocorrem nos motivos Asp-Thr/Ser-Gli similarmente no motivo de sequência em famílias de endopeptidases aspárticas no clã AA, His-Gli-Thr-His e Gli-Thr-Ser-Met-Ala-Xaa-Pro.
[0073] Os membros proeminentes da família S8, subfamília A são: Nome 'amília S8 de MEROPS. Subfamília À Subtilisina Carlsberg 08.001 Subtilisina lentus 08.003 Fermitase O Sogom Subtilisina BPN' 08.034 Subtilisina DY 508.037 Peptidase alcalinas 508.038 Subtilisina ALP 1 08.045 Subtilisina sendai 08.098 Elastase alcalinas YaB 508.157
[0074] A classe relacionada com a subtilisina das serina proteases compartilha uma sequência de aminoácido comum definindo uma tríade catalítica que as distingue da classe relacionada com a quimotripsina de serina proteases. As serina proteases relacionadas com as subtilisinas e quimotripsina ambas têm uma tríade catalítica compreendendo aspartato, histidina e serina.
[0075] Nas proteases (C) relacionadas com a subtilisina a ordem relativa destes aminoácidos, lendo do terminal amino para o carbóxi é aspartato-histidina-serina. Nas proteases relacionadas com a quimotripsina a ordem relativa, entretanto é histidina-aspartato-serina. Assim, a subtilisina aqui se refere a uma serina protease tendo a tríade catalítica das proteases relacionadas com a subtilisina. Os exemplos incluem as subtilisinas como descritas na WO 89/06276 e EP 0283075, WO 89/06279, WO 89/09830, WO 89/09819, WO 91/06637 e WO 91/02792.
[0076] As proteases precursoras do tipo subtilisina (EC 3.4.21.62) e variantes podem ser proteases bacterianas. A dita protease bacteriana pode ser um polipeptídeo bacteriano Gram positivo tal como uma protease de Bacillus, Clostridium, —Enterococcus, Geobacillus, Lactobacillus, Lactococcus, Oceanobacillus, Staphilococcus, Streptococcus ou Streptomyces ou um polipeptídeo bacteriano Gram negativo tal como uma protease de Campilobacter, E. coli, Flavobacterium, Fusobacterium, Helicobacter, llyobacter, Neisseria, Pseudomonas, Salmumlla ou Ureaplasma. Elas atuam como endopeptidases não específicas, isto é, elas hidrolisam quaisquer ligações peptídicas.
[0077] As enzimas de protease comercialmente disponíveis incluem aquelas vendidas sob os nomes comerciais Alcalase&, BlazeO, DuralaseO, DurazymGO, RelaseO, Relase& Ultra, SavinaseO, SavinaseO Ultra, PrimaseO, Polarzyme&, KannaseG, LiquanaseO, Liquanase& Ultra OvozymeO, Coronase&, Coronase& Ultra Neutrase&, Everlase& e EsperaseO (Novozymes A/S), aquelas vendidas sob as marcas Maxatase&, MaxacalO, MaxapemO, Purafect&, Purafect& Prime, Purafect MAG, Purafect OxO, Purafect OxPG, PuramaxO, Properase&, FN20, FN3O, FN40, ExcellaseO, Eraser&, UltimaseO, Opticlean&, EffectenzO, Preferenz& e OptimaseO (Danisco/DuPont), AxapemO& (Gist-Brocases N.V.), Protease Alcalina de Bacillus lentus (BLAP; sequência mostrada na Figura 29 da US 5.352.604) e variantes das mesmas e KAP (subtilisina de Bacillus alkalophilus) de Kao.
[0078] Em um aspecto da invenção, as enzimas precursoras e variantes podem ser uma protease de Bacillus alcalophilus, Bacillus amiloliquefaciens, Bacillus brevis, Bacillus circulans, Bacillus clausii, Bacillus coagulans, Bacillus firmus, Bacillus gibsonii, Bacillus lautus,
Bacillus lentus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus sphaericus, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis ou Bacillus thuringiensis.
[0079] Em uma modalidade da presente invenção, a subtilase é selecionada do seguinte: * subtilisina de Bacillus amiloliquefaciens BPN' (descrita por Vasantha er al. (1984) J. Bacteriol. Volume 159, p. 811-819 e JA Wells et al. (1983) em Nucleic Acids Research, Volume 11, p. 7911-7925), * subtilisina de Bacillus licheniformis (subtilisina Carlsberg; descrita em EL Smith er al. (1968) em J. Biol Chem, Volume 243, pp. 2184- 2191 e Jacobs er al. (1985) em Nucl. Acids Res, Vol 13, p. 8913-8926), * subtilisina PB92 (sequência original da protease alcalina PB92 é descrita na EP 283075 A2), * subtilisina 147 e/ou 309 (Esperase&, SavinaseO&M) como descritas na GB 1243784, * subtilisina de Bacillus lentus como descrita na WO 91/02792, tal como de Bacillus lentus DSM 5483 ou as variantes de Bacillus lentus DSM 5483 como descrito na WO 95/23221, * subtilisina de Bacillus alcalophilus (DSM 11233) descrita na DE 10064983, * subtilisina de Bacillus gibsonii (DSM 14391) como descrita na WO 2003/054184, * subtilisina de Bacillus sp. (DSM 14390) descrita na WO 2003/056017, * subtilisina de Bacillus sp. (DSM 14392) descrita na WO 2003/055974, * subtilisina de Bacillus gibsonii (DSM 14393) descrita na WO 2003/05418A4, * subtilisina tendo a SEQ ID NO: 4 como descrita na WO
2005/063974 ou uma subtilisina que seja pelo menos 40% idêntica a esta e tendo atividade proteolítica, * subtilisina tendo a SEQ ID NO: 4 como descrita na WO 2005/103244 ou subtilisina que é pelo menos 80% idêntica a esta e tendo atividade proteolítica, * subtilisina tendo a SEQ ID NO: 7 como descrita na WO 2005/103244 ou subtilisina que é pelo menos 80% idêntica a esta e tendo atividade proteolítica, e * subtilisina tendo a SEQ ID NO: 2 como descrita no pedido DE 102005028295,4 ou subtilisina que é pelo menos 66% idêntica a esta e tendo atividade proteolítica.
[0080] Os exemplos de proteases (C) úteis de acordo com a presente invenção compreendem as variantes descritas na: WO 92/19729, WO 95/23221, WO 96/34946, WO 98/20115, WO 98/20116, WO 99/11768, WO 01/44452, WO 02/088340, WO 03/006602, WO 2004/03186, WO 2004/041979, WO 2007/006305, WO 2011/036263, WO 2011/036264 e WO 2011/072099. Os exemplos adequados compreendem especialmente variantes de protease de subtilisina protease derivadas da SEQ ID NO: 22 como descrito na EP 1921147 (que é a sequência da protease alcalina madura de Bacillus lentus DSM 5483) com as substituições de aminoácido em uma ou mais das seguintes posições: 3, 4, 9, 15, 24, 27, 33, 36, 57, 68, 76, 77, 87, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 106, 118, 120, 123, 128, 129, 130, 131, 154, 160, 167, 170, 194, 195, 199, 205, 206, 217, 218, 222, 224, 232, 235, 236, 245, 248, 252 e 274 (de acordo com a numeração BPN'), que têm atividade proteolítica. Em uma modalidade, uma tal subtilisina protease não é mutada nas posições Asp32, His64 e Ser221 (de acordo com a numeração BPN).
[0081] Em uma modalidade, a subtilisina tem a SEQ ID NO: 22 como descrita na EP 1921147 ou uma subtilisina que seja pelo menos 80% idêntica a esta e tenha atividade proteolítica. Em uma modalidade, uma subtilisina é pelo menos 80% idêntica à SEQ ID NO: 22 como descrito na EP 1921147 e é distinguida por ter o aminoácido ácido glutâmico (E) ou ácido aspártico (D) ou asparagina (N) ou glutamina (Q) ou alanina (a) ou glicina (G) ou serina (S) na posição 101 (de acordo com a numeração BPN') e tem atividade proteolítica. Em uma modalidade, a subtilisina é pelo menos 80% idêntica à SEQ ID NO: 22 como descrita na EP 1921147 e é distinguida por ter aminoácido ácido glutâmico (E) ou ácido aspártico (D), na posição 101 (de acordo com a numeração BPN') e tem atividade proteolítica. Uma tal variante de subtilisina pode compreender uma substituição de aminoácido na posição 101, tal como R101E ou RI1IO1ID, sozinha ou em combinação com uma ou mais substituições nas posições 3, 4, 9, 15, 24, 27, 33, 36, 57, 68, 76, 77, 87, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 106, 118, 120, 123, 128, 129, 130, 131, 154, 160, 167, 170, 194, 195, 199, 205, 206, 217, 218, 222, 224, 232, 235, 236, 245, 248, 252 e/ou 274 (de acordo com a numeração BPN') e tem atividade proteolítica.
[0082] Em uma outra modalidade, uma subtilisina é pelo menos 80% idêntica à SEQ ID NO: 22 como descrita na EP 1921147 e é distinguida por compreender pelo menos os seguintes aminoácidos (de acordo com a numeração BPN') e tem atividade proteolítica: (a) treonina na posição 3 (3T) (b) isoleucina na posição 4 (41) (c) alanina, treonina ou arginina na posição 63 (63A, 63T ou 63R) (d) ácido aspártico ou ácido glutâmico na posição 156 (156D ou 156E) (e) prolina na posição 194 (194P) (£) metionina na posição 199 (199M) (g) isoleucina na posição 205 (2051)
(h) ácido aspártico, ácido glutâmico ou glicina na posição 217 (217D, 217E ou 2176), (1) combinações de dois ou mais aminoácidos de acordo com (a) a (bh).
[0083] Em uma outra modalidade, uma subtilisina é pelo menos 80% idêntica à SEQ ID NO: 22 como descrita na EP 1921147 e é distinguida por compreender um aminoácido (de acordo com (a) a (h)) ou combinações de acordo com (1) junto com o aminoácido 101E, 101D, 101N, 101Q, 101A, 101G ou 1018 (de acordo com a numeração BPN') e tem atividade proteolítica.
[0084] Em uma modalidade, uma subtilisina é pelo menos 80% idêntica à SEQ ID NO: 22 como descrita na EP 1921147 e é distinguida por compreender a mutação (de acordo com a numeração BPN') RIO1IE ou S3T + V4I + V2051I ou S3T + V4I + VI99M + V205I + L217D e tem atividade proteolítica.
[0085] Em uma outra modalidade, a subtilisina compreende uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 80% de identidade com a SEQ ID NO: 22 como descrita na EP 1921147 e sendo adicionalmente distinguida por compreender R101E e S3T, V4I e V205I (de acordo com a numeração BPN') e tem atividade proteolítica.
[0086] Em uma outra modalidade, uma subtilisina compreende uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 80% de identidade com a SEQ ID NO: 22 como descrita na EP 1921147 e sendo adicionalmente distinguida por compreender R1I01E e de uma ou mais substituições selecionadas do grupo consistindo de SI56D, L262E, Q137H, S3T, R45E,D,Q, PS5SN, TS8W,Y L, QS59D,M,N,T, G61 D,R, S87E, G97S, A98DE,R, SI106A,W, NI17E, H120V,D,K,N, S125M, P129D, E136Q, S144W, S161T, S163A,G, Y1I71 L, AI72S, NI85Q, VI99M, Y209W, M222Q, N238H, V244T, N261T,D e L262N,Q,D (como descrito na WO 2016/096711 e de acordo com a numeração BPN') e tem atividade proteolítica.
[0087] A identidade percentual para as variantes de subtilisina é calculada como descrito acima. As enzimas variantes de subtilisina como descritas acima que são pelo menos n% idênticas as respectivas sequências precursoras incluem variantes com n sendo pelo menos de 40 a 100. Dependendo dos valores da % de identidade aplicável como provida acima, variantes de subtilisina em uma modalidade têm atividade proteolítica e são pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas quando comparadas com a sequência de polipeptídeo de comprimento total da enzima precursora.
[0088] Em uma outra modalidade, a invenção se refere às variantes de subtilisina compreendendo as mutações conservativas não pertencentes ao domínio funcional da respectiva subtilisina protease. Dependendo da % de valores de identidade aplicáveis como providos acima, as variantes de subtilisina desta modalidade têm atividade proteolítica e são pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% similares quando comparadas com a sequência de polipeptídeo de comprimento total da enzima precursora.
[0089] As proteases (C), incluindo serina proteases, de acordo com a invenção têm “atividade proteolítica” ou “atividade de protease” ou “atividade proteolítica”. Esta propriedade está relacionada com a atividade hidrolítica de uma protease (proteólise, que significa hidrólise de ligações peptídicas que ligam os aminoácidos juntos em uma cadeia polipeptídica) nos substratos contendo proteína, por exemplo, caseína, hemoglobina e BSA. Quantitativamente, a atividade proteolítica está relacionada com a taxa de degradação da proteína por uma protease ou enzima proteolítica em um curso definido de tempo. Os métodos para analisar a atividade proteolítica são bem conhecidos na literatura (ver por exemplo, Gupta er al. (2002), Appl. Microbiol. Biotechnol. 60: 381-395). A atividade proteolítica como tal pode ser determinada usando-se Succinil-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilida (Suc- AAPF-pNA, AAPF curto; ver por exemplo, DelMar et al. (1979), Analytical Biochem 99, 316-320) como substrato. pNA é clivado da molécula de substrato pela clivagem proteolítica, resultando em liberação de cor amarela de pNA livre que pode ser quantificada medindo-se a ODaos.
[0090] As variantes de protease podem ter atividade proteolítica quando as ditas variantes de protease exibem pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou 100% da atividade proteolítica da respectiva protease precursora.
[0091] Preferivelmente, o valor pI (ponto isoelétrico) da subtilisina protease usado na presente invenção está na faixa de pH 7,0 a pH 10,0, preferivelmente de pH 8,0 a pH 9,5. Lipases e cutinases
[0092] Em uma modalidade, as composições inventivas compreendem pelo menos uma lipase (C). As “Lipases”, “enzima lipolítica”, “esterase lipídica”, todas aludidas como uma enzima da classe EC 3.1.1 (“éster carboxílico hidrolase”). Uma tal enzima (C) pode ter atividade de lipase (ou atividade lipolítica; triacilglicerol lipase, EC 3.1.1.3), atividade de cutinase (EC 3.1.1.74; as enzimas tendo atividade de cutinase podem ser aqui chamadas de cutinase), atividade de esterol esterase (EC 3.1.1.13) e/ou atividade de éster ceroso hidrolase (EC 3.1.1.50). As lipases incluem aquelas de origem bacteriana ou fúngica.
[0093] As lipases (C) comercialmente disponíveis incluem, mas não são limitadas àquelas vendidas sob os nomes comerciais Lipolase&, LipexO, Lipolex& e Lipoclean&d (Novozymes A/S), Lumafast (originalmente da Genencor) e Lipomax (Gist-Brocades/ agora DSM).
[0094] Em um aspecto da invenção, uma lipase adequada é selecionada das seguintes: * lipases de Humicola (sinônimo Thermomyces), por exemplo, de H. lanuginosa (T. lanuginosus) como descrita na EP 258068, EP 305216, WO 92/05249 e WO 2009/109500 ou de H. insolens como descrita na WO 96/13580, * lipases derivadas de Rhizomucor miehei como descritas na WO 92/05249.
* lipase de cepas de Pseudomonas (algumas destas agora renomeadas para Burkholderia), por exemplo, de P. alcaligenes ou P. pseudoalcaligenes (EP 218272, WO 94/25578, WO 95/30744, WO 95/3538], WO 96/00292), P. cepacia (EP 331376), P. stuizeri (GB 1372034), P. fluorescens, Pseudomonas sp. cepa SD705 (WO 95/06720 e WO 96/27002), P. wisconsinensis (WO 96/12012), Pseudomonas mendocina (WO 95/14783), P. glumae (WO 95/35381, WO 96/00292) * lipase de Streptomyces griseus (WO 2011/150157) e S. pristinaespiralis (WO 2012/137147), Streptomyces lipases tipo GDSL (WO 2010/065455), * lipase de Thermobifida fusca como descrita na WO 2011/084412, * lipase de Geobacillus stearothermophilus como descrita na WO 2011/084417,
* Bacillus lipases, por exemplo, como descritas na WO 00/60063, lipases de B. subtilis como descritas em Dartois et al. (1992), Biochemica et Biophysica Acta, 1131, 253-360 ou WO 2011/084599, B. stearothermophilus (JP S64-074992) ou B. pumilus (WO 91/16422).
* Lipase de Candida antarctica como descrita na WO 94/0154].
* cutinase de Pseudomonas mendocina (US 5389536, WO 88/09367) * cutinase de Magnaporthe grisea (WO 2010/107560), * cutinase de Fusarum solani pisi como descrita na WO 90/09446, WO 00/34450 e WO 01/92502 * cutinase de Humicola lanuginosa como descrita na WO 00/34450 e WO 01/92502
[0095] As lipases (C) adequadas também incluem aquelas aludidas como aciltransferases ou perhidrolases, por exemplo, aciltransferases com homologia para lipase A de Candida antarctica (WO 2010/111143), aciltransferase de Mycobacterium smegmatis (WO 2005/056782), perhidrolases da família CE7 (WO 2009/67279) e variantes da perhidrolase de M. smegmatis em particular a variante SS4V (WO 2010/100028).
[0096] As lipases adequadas incluem também aquelas que são variantes das lipases e/ou cutinases descritas acima que têm atividade lipolítica. Tais variantes de lipase adequadas são por exemplo, aquelas que são desenvolvidas pelos métodos como descritos na WO 95/22615, WO 97/04079, WO 97/07202, WO 00/60063, WO 2007/087508, EP 407225 e EP
260105.
[0097] As lipases/cutinases (C) adequadas incluem também aquelas que são variantes das lipases/cutinases descritas acima que têm atividade lipolítica. As variantes de lipase/cutinase adequadas incluem variantes com pelo menos 40 a 100% de identidade quando comparadas com a sequência de polipeptídeo de comprimento total da enzima precursora como descrita acima. Em uma modalidade as variantes de lipase/cutinase tendo atividade lipolítica podem ser pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas quando comparadas com a sequência de polipeptídeo de comprimento total da enzima precursora como descrita acima.
[0098] Em uma outra modalidade, as composições inventivas compreendem pelo menos uma variante da lipase/cutinase compreendendo as mutações conservativas não pertencentes ao domínio funcional da respectiva lipase/cutinase. As variantes de lipase/cutinase de tais modalidades tendo atividade lipolítica podem ser pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% similares quando comparadas com a sequência de polipeptídeo de comprimento total da enzima precursora.
[0099] As lipases (C) têm “atividade lipolítica”. Os métodos para determinar a atividade lipolítica são bem conhecidos na literatura (ver por exemplo, Gupta er al. (2003), Biotechnol. Appl. Biochem. 37, p. 63-71). Por exemplo, a atividade de lipase pode ser medida pela hidrólise da ligação de éster no substrato de palmitato de para-nitrofenila (pNP-Palmitato, C:16) e libera pNP que é amarela e pode ser detectada a 405 nm.
[00100] As variantes de lipase podem ter atividade lipolítica de acordo com a presente invenção quando as ditas variantes de lipase exibem pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos
40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou 100% da atividade lipolítica da respectiva lipase precursora.
[00101] Em uma modalidade da presente invenção, uma combinação de pelo menos duas das lipases (C) anteriores pode ser usada.
[00102] A lipase (C) pode ser usada na sua forma não purificada ou em uma forma purificada, por exemplo, purificada com a ajuda de métodos de adsorção bem conhecidos, tais como as técnicas de adsorção de fenil sefarose.
[00103] Em uma modalidade da presente invenção, as lipases (C) são incluídas na composição inventiva em uma tal quantidade que uma composição inventiva acabada tem uma atividade de enzima lipolítica na faixa de 100 a 0,005 LU/mg, preferivelmente 25 a 0,05 LU/mg da composição. Uma Unidade de Lipase (LU) é aquela quantidade de lipase que produz 1 umol de ácido graxo titulável por minuto em um pH star. sob as seguintes condições: temperatura 30ºC.; pH = 9,0; substrato é uma emulsão de 3,3% em peso de óleo de oliva e 3,3% de goma arábica, na presença de 13 mmol/l de Ca?* e 20 mmol/l de NaCl em 5 mmol/l de tampão Tris.
[00104] Em uma modalidade da presente invenção, as proteases (C) são incluídas na composição inventiva em uma tal quantidade que uma composição inventiva acabada tem uma atividade de enzima proteolítica na faixa de 0,1 a 50 GU.
[00105] É preferido o uso de uma combinação de lipase (C) e protease (C) nas composições, por exemplo 1 a 2% em peso de protease (C) e 0,1 a 0,5% em peso de lipase (C).
[00106] No contexto da presente invenção, uma enzima (C) é chamada estável quando a sua atividade enzimática “disponível na aplicação” é igual a 100% quando comparada com a atividade enzimática inicial antes do armazenamento. Uma enzima pode ser chamada estável dentro desta invenção se a sua atividade enzimática disponível na aplicação for pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% quando comparada com a atividade enzimática inicial antes do armazenamento.
[00107] Em uma modalidade, a atividade lipolítica disponível depois do armazenamento a 37ºC durante 30 dias é pelo menos 60% quando comparada com a atividade lipolítica inicial antes do armazenamento.
[00108] Subtraindo a % de 100% dá a “perda de atividade enzimática durante o armazenamento” quando comparada com a atividade enzimática inicial antes do armazenamento. Em uma modalidade, uma enzima é estável de acordo com a invenção quando essencialmente nenhuma perda de atividade enzimática ocorre durante o armazenamento, isto é a perda na atividade enzimática é igual a 0% quando comparada com a atividade enzimática inicial antes do armazenamento. Essencialmente nenhuma perda de atividade enzimática dentro desta invenção pode significar que a perda de atividade enzimática é menor do que 30%, menor do que 25%, menor do que 20%, menor do que 15%, menor do que 10%, menor do que 9%, menor do que 8%, menor do que 7%, menor do que 6%, menor do que 5%, menor do que 4%, menor do que 3%, menor do que 2% ou menor do que 1% quando comparada com a atividade enzimática inicial antes do armazenamento.
[00109] Em uma modalidade, a perda de atividade lipolítica depois do armazenamento a 37ºC durante 30 dias é menor do que 40% quando comparada com a atividade lipolítica inicial antes do armazenamento.
[00110] A perda reduzida de atividade enzimática dentro desta invenção pode significar que a perda de atividade enzimática é reduzida em pelo menos 5%, em pelo menos 10%, em pelo menos 15%, em pelo menos 20%, em pelo menos 25%, em pelo menos 50%, em pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% quando comparada com a atividade enzimática inicial antes do armazenamento.
[00111] Em uma modalidade da presente invenção sais (a) são usados em combinação com inibidores da serina protease conhecidos per se. Os exemplos de inibidores de serina protease são ácido bórico, um borato ou um outro derivado do ácido borônico ou um aldeído peptídico. O inibidor pode ter uma constante de inibição para uma serina protease Ki (M, mol/L) de 1E- 12 a 16-03; mais preferido 1E-11 a 16-04; ainda mais preferido: 16-10 a 1E- 05; ainda mais preferido 1E-10 a 16-06; o mais preferido 16-09 a 1E-07. É preferido, não obstante, usar sal (A) nas formulações inventivas sem inibidores com base em boro.
[00112] As composições inventivas são preferivelmente usadas como composições detergentes. É possível, não obstante, usar as composições inventivas em campos adicionais, por exemplo na fabricação de coro. Em uma tal composição inventiva, a enzima (C) e preferivelmente a lipase (C) pode estar presente em uma quantidade de 0,01 a 4,0% em peso, preferidos são 0,1 a 1,5% em peso. Em aplicações não detergentes, a razão em peso de sal (A):a lipase (C) na faixa de 0,5:1 a 50:1 é preferida, mais preferida de 5:1 a 20:1 e ainda mais preferida de 5:1 a 10:1. Outros ingredientes em uma composição líquida não detergente podem ser selecionados de polióis e as misturas de polióis, por exemplo sorbitol, glicerol e propileno glicol, cada um em quantidades de 1 a 60%, quantidades pequenas de tensoativos não iônicos (da softanol) O a 5%, íons de cálcio 0,001% a 0,5%, água. Os exemplos adicionais são preservantes, por exemplo, 2-fenoxietanol.
[00113] As composições inventivas podem conter um ou mais ingredientes outros que não sal (A), tensoativo (B) ou enzima (C), por exemplo de solventes orgânicos, fragrâncias, corantes, biocidas, preservantes, hidrótropos, construtores, modificadores de viscosidade, polímeros, tampões, desespumantes e aditivos anticorrosão.
[00114] Em uma modalidade da presente invenção, as composições de acordo com a presente invenção podem compreender um ou mais de solventes orgânicos, por exemplo etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, sec-butanol, etileno glicol, propileno glicol, 1,3-propano diol, butano diol, glicerol, diglicol, propil diglicol, butil diglicol, hexileno glicol, éter metílico de etileno glicol, éter etílico de etileno glicol, éter propílico de etileno glicol e fenoxietanol, preferidos são etanol, isopropanol ou propileno glicol. Quantidades preferidas de solventes orgânicos são 0,5 a 25% em peso, referindo-se à composição inventiva inteira. Especialmente quando as composições inventivas são entregues em bolsas ou similares, 8 a 25% em peso de solvente(s) orgânico(s).
[00115] Os exemplos de fragrâncias são silicato de benzila, 2-(4-terc- butilfenil) 2-metilpropional, comercialmente disponível como Lilialº e hexil cinamaldeído.
[00116] Os exemplos de corantes são Azul Ácido 9, Amarelo Ácido 3, Amarelo Ácido 23, Amarelo Ácido 73, Pigmento Amarelo 101, Verde Ácido 1, Solvente Verde 7 e Verde Ácido 25.
[00117] As composições detergentes líquidas inventivas podem conter de uma ou mais preservantes ou biocidas. Os biocidas e preservantes previnem alterações das composições detergentes líquidas inventivas devido aos ataques de microrganismos. Os exemplos de biocidas e preservantes são BTA (1,2,3-benzotriazol), cloretos de belzacônio, 1,2-benzisotiazolin-3-ona (“BIT”), 2-metil-2H-isotiazol-3-ona (“MIT”) e 5-cloro-2-metil-2H-isotiazol- 3-ona (“CIT”), ácido benzóico, ácido sórbico, butil-carbamato de iodopropinila (TPBC”), diclorodimetil-hidantoína (“DCDMH”), bromocloro-
dimetil-hidantoína (““BCDMH”) e dibromodimetil-hidantoína (“DBDMH”).
[00118] Os exemplos de modificadores de viscosidade são ágar-ágar, carragenina, tragacanto, goma arábica, alginatos, pectinas, hidroxietil celulose, hidroxipropil celulose, amido, gelatina, goma de alfarrobeira, poli(met)acrilatos reticulados, por exemplo ácido poliacrílico reticulado com bis-(met)acrilamida, além disso ácido silícico, argila tal como — mas não limitada a — montmorilonita, zeólito, dextrina e caseína.
[00119] Hidrótropos no contexto com a presente invenção são compostos que facilitam a dissolução de compostos que exibem solubilidade limitada em água. Os exemplos de hidrótropos são de solventes orgânicos tais como etanol, isopropanol, etileno glicol, 1,2-propileno glicol e adicionalmente de solventes orgânicos que são miscíveis em água sob condições normais sem limitação. Os exemplos adicionais de hidrótropos adequados são os sais de sódio do ácido tolueno sulfônico, de ácido xileno sulfônico e de ácido cumeno sulfônico.
[00120] Os exemplos de polímeros são especialmente ácido poliacrílico e seus respectivos sais de metal alcalino, especialmente seu sal de sódio. Um polímero adequado é em particular o ácido poliacrílico, preferivelmente com um peso molecular médio M, na faixa de 2.000 a 40.000 g/mol, preferivelmente 2.000 a 10.000 g/mol, em particular 3.000 a 8.000 g/mol, cada um parcial ou totalmente neutralizado com álcali, especialmente com sódio. Também de adequabilidade são policarboxilatos copoliméricos, em particular aqueles de ácido acrílico com ácido metacrílico e de ácido acrílico ou ácido metacrílico com ácido maléico e/ou ácido fumárico. O ácido poliacrílico e seus respectivos sais de metal alcalino podem servir como agentes antirredeposição de sujeira.
[00121] Os exemplos adicionais de polímeros são polivinilpirrolidonas (PVP). As polivinilpirrolidonaso podem servir como inibidores da transferência de corante.
[00122] Os exemplos adicionais de polímeros são tereftalatos de polietileno, tereftalatos de polioxietileno e tereftalatos de polietileno que são encapuzados na extremidade com um ou dois grupos hidrofílicos por molécula, os grupos hidrofílicos sendo selecionados de CH;CH;CH7-SO;Na, CH;CH(CH;7-SO;3Na),; e CH;CH(CH3SO,Na)CH;-SO;Na.
[00123] Os exemplos de tampões são monoetanolamina e NN,N- trietanolamina.
[00124] Os exemplos de desespumantes são silicones.
[00125] Em uma modalidade da presente invenção, as composições inventivas podem conter um ou mais construtores outros que não o sal (A).
[00126] As composições inventivas podem conter até 40% em peso de um construtor detergente outro que não o sal (A), tal como, mas não limitado a zeólito, fosfato, fosfonato, citrato, construtores poliméricos, ou amino- carboxilatos tais como os sais de metal alcalino de iminodissuccinatos, por exemplo IDS-Na,, além disso ácido nitrilotriacético (“NTA”), ácido metilglicina diacético (“MGDA”), ácido glutâmico ácido diacético (“GLDA”), ácido etilenodiaminotetraacético (“EDTA”) ou ácido dietilenotriaminopentaacético (“DTPA”). Os sais de metal alcalino preferidos são os sais de potássio e especialmente os sais de sódio.
[00127] Os exemplos adicionais de construtores detergentes são polímeros com grupos de complexação como, por exemplo, polietilenoimina em que 20 a 90% em mol dos átomos de N carregam pelo menos um grupo CH;COO' e os respectivos sais de metal alcalino dos sequestrantes acima, especialmente seus sais de sódio.
[00128] Os exemplos adicionais de polímeros adequados são polialquilenoiminas, por exemplo polietilenoiminas e polipropileno iminas. Os polialquilenoiminas podem ser usados como tais ou como derivados poli alcoxilados, por exemplos etoxilados ou propoxilados. As polialquilenoiminas contêm pelo menos três unidades de alquilenoimina por molécula.
[00129] Em uma modalidade da presente invenção, a dia unidade de alquilenoimina é uma unidade de alquileno C3x-Cio diamina , por exemplo um 1,2-propilenodiamina, preferivelmente um a,ow-alquileno-C7-Ci,o diamina, por exemplo 1,2-etilenodiamina, 1,3-propilenodiamina, 1,4-butilenodiamina, 1,5- pentilenodiamina, 1,6-hexanodiamina (também sendo aludida como 1,6- hexilenodiamina), 1,8-diamina ou 1,10-decanodiamina, ainda mais preferidos são 1,2-etilenodiamina, 1,3-propilenodiamina, 1,4-butilenodiamina e 1,6- hexanodiamina.
[00130] Em uma outra modalidade da presente invenção, o dito polialquilenoimina é selecionado de unidade de polialquilenoimina, preferivelmente uma unidade polietilenoimina ou polipropilenoimina.
[00131] O termo “polietilenoimina” no contexto da presente invenção não apenas se refere aos homopolímeros de polietilenoimina mas também às polialquilenoiminas contendo elementos estruturais de NH-CH;-CH;-NH Junto com outros elementos estruturais de alquileno diamina, por exemplo elementos estruturais de NH-CH;-CH;-CH,;-NH, elementos estruturais de NH-CH;-CH(CH;3)-NH, elementos estruturais de NH-(CH>),-NH, elementos estruturais de NH-(CH>);-NH ou elementos estruturais de (NH-(CH>);-NH mas os elementos estruturais de NH-CH;-CH;- NH sendo na maioria com respeito ao compartilhamento molar. As polietilenoiminas preferidas contêm elementos estruturais de NH-CH,;-CH,-NH sendo na maioria com respeito ao compartilhamento molar, por exemplo totalizando 60% em mol ou mais, mais preferivelmente totalizando pelo menos 70% em mol, referindo-se a todos os elementos estruturais de alquilenoimina. Em uma modalidade especial, o termo polietilenoimina se refere àqueles polialquilenoiminas que carregam apenas um ou zero elemento estrutural de alquilenoimina por unidade de polietilenoimina que é diferente de NH-CH;-CH,-NH.
[00132] O termo “polipropilenoimina” no contexto da presente invenção não apenas se refere aos homopolímeros de polipropilenoimina mas também às polialquilenoiminas contendo elementos estruturais de NH-CH;- CH(CH;3)-NH junto com outros elementos estruturais de alquileno diamina, por exemplo elementos estruturais de NH-CH;-CH;-CH,;-NH, elementos estruturais de NH-CH2-CH2-NH, elementos estruturais de NH-(CH>),-NH, elementos estruturais de NH-(CH>);-NH ou elementos estruturais de (NH- (CH>);-NH mas os elementos estruturais de NH-CH;-CH(CH;3)-NH sendo na maioria com respeito ao compartilhamento molar. As polipropilenoiminas preferidas contêm elementos estruturais de NH-CH;-CH(CH;3)-NH sendo na maioria com respeito ao compartilhamento molar, por exemplo totalizando 60% em mol ou mais, mais preferivelmente totalizando pelo menos 70% em mol, referindo-se a todos os elementos estruturais de alquilenoimina. Em uma modalidade especial, o termo polipropilenoimina se refere àquelas polialquilenoiminas que carregam apenas um ou zero elemento estrutural de alquilenoimina por polipropileno-imina unidade que é diferente de NH-CH;- CH(CH;3)-NH.
[00133] As ramificações podem ser grupos alquilenoamino tais como, mas não limitados a grupos de -CH;-CH;-NH, ou grupos de (CH>);-NH>2. As ramificações mais longas podem ser, por exemplos, grupos de -(CH;)3- N(CH;CH;CH.NH;); ou -(CH;)-N(CH;CHINH>);. As polietilenoiminas altamente ramificadas são, por exemplo, dendrímeros de polietilenoimina ou moléculas relacionadas com um grau de ramificação na faixa de 0,25 a 0,95, preferivelmente na faixa de 0,30 a 0,80 e de modo particularmente preferível pelo menos 0,5. O grau de ramificação pode ser determinado por exemplo pela espectroscopia de C-RMN ou "“N-RMN, preferivelmente em D2O e é definido como segue: DB = D+T/D+T+L com D (dendrítico) correspondendo à fração dos grupos amino terciários, L (linear) correspondendo à fração dos grupos amino secundários e T (terminal) correspondendo à fração dos grupos amino primários.
[00134] Dentro do contexto da presente invenção, as unidades de polietilenoimina ramificadas são unidades de polietilenoimina com DB na faixa de 0,25 a 0,95, de modo particularmente preferível na faixa de 0,30 a 0,90% e de modo muito particularmente preferível pelo menos 0,5. As unidades de polietilenoimina preferidas são aquelas que exibem pouca ou nenhuma ramificação, assim predominantemente lineares ou unidades de polietilenoimina lineares.
[00135] No contexto da presente invenção, grupos CH; não estão sendo considerados como ramificados.
[00136] Em uma modalidade da presente invenção a polialquilenoimina pode ter um valor de amina primária na faixa de 1 a 1000 mg de KOH/g, preferivelmente de 10 a 500 mg de KOH/g, mais preferido de 50 a 300 mg de KOH/g. O valor de amina primária pode ser determinado de acordo com ASTM D2074-07.
[00137] Em uma modalidade da presente invenção a polialquilenoimina pode ter um valor de amina secundária na faixa de 10 a 1000 mg de KOH/g, preferivelmente de 50 a 500 mg de KOH/g, mais preferido de 50 a 500 mg de KOH/g. O valor da amina secundária pode ser determinado de acordo com ASTM D2074-07.
[00138] Em uma modalidade da presente invenção a polialquilenoimina pode ter um valor de amina terciária na faixa de 1 a 300 mg de KOH/g, preferivelmente de 5 a 200 mg de KOH/g, mais preferido de a 100 mg de KOH/g. O valor da amina terciária pode ser determinado de acordo com ASTM D2074-07.
[00139] Em uma modalidade da presente invenção, O compartilhamento molar de átomos N terciários é determinado pela espectroscopia de "N-RMN. No caso que o valor da amina terciária e O resultado de acordo com a espectrometria de MC-RMN são inconsistentes, aos resultados obtidos pela espectroscopia de C-RMN será dada a preferência.
[00140] Em uma modalidade da presente invenção, o peso molecular médio M, da dita polialquilenoimina está na faixa de 250 a 100.000 g/mol, preferivelmente até 50.000 g/mol e mais preferivelmente de 800 até 25.000 g/mol. O peso molecular médio M, de polialquilenoimina pode ser determinado pela cromatografia de permeação de gel (GPC) do respectivo intermediário de polialquilenoimina, com 1,5% em peso de ácido fórmico aquoso como eluente e metacrilato de poli-hidroxietila reticulado como fase estacionária.
[00141] A dita polialquilenoimina pode ser livre ou alcoxilada, a dita alcoxilação sendo selecionada de etoxilação, propoxilação, butoxilação e combinações de pelo menos dois dos anteriores. Preferência é dada ao óxido de etileno, 1,2-Óxido de propileno e as misturas de óxido de etileno e 1,2- óxido de propileno. Se misturas de pelo menos dois óxidos de alquileno são aplicadas, elas podem ser reagidas por etapas ou simultaneamente.
[00142] Em uma modalidade da presente invenção, uma polialquileno- imina alcoxilada carrega pelo menos 6 átomos de nitrogênio por unidade.
[00143] Em uma modalidade da presente invenção, polialquilenoimina é alcoxilada com 2 a 50 moles de óxido de alquileno por grupo NH, preferivelmente 5 a 30 moles de óxido de alquileno por grupo NH, ainda mais preferido 5 a 25 moles de óxido de etileno ou 1,2-6xido de propileno ou combinações destes por grupo NH. No contexto da presente invenção, uma unidade NH, é contada como dois grupos NH. Preferivelmente, todos - ou quase todos — os grupos NH são alcoxilados e não existe nenhuma quantidade detectável de grupos NH deixados.
[00144] Dependendo da fabricação de tal polialquilenoimina alcoxilada, a distribuição do peso molecular pode ser estreita ou ampla. Por exemplo, a polidispersividade Q = M,/M, na faixa de 1 a 3, preferivelmente pelo menos 1,2 e mais preferivelmente 1,2 a 2,5, ou “também pode ser maior do que 3 e até 20, por exemplo 3,5 a 15 e — no caso das distribuições de peso molecular amplas — mais preferido na faixa de 4 a 5,5.
[00145] Em uma modalidade da presente invenção, a polidispersividade Q da polialquilenoimina alcoxilada está na faixa de 2 a 10.
[00146] Em uma modalidade da presente invenção a polialquilenoimina alcoxilada é selecionada de polietilenoimina polietoxilada, polipropilenoimina etoxilada, a,mw-hexanodiaminas etoxiladas, polietilenoimina etoxiladas e propoxiladas, polipropilenoimina etoxiladas e propoxiladas e a,w-hexanodiaminas etoxiladas e polipropoxiladas.
[00147] Em uma modalidade da presente invenção o peso molecular médio M, (número médio) de polietilenoimina alcoxilada está na faixa de
2.500 a 1.500.000 g/mol, determinada pela GPC, preferivelmente até
500.000 g/mol.
[00148] Em uma modalidade da presente invenção, a polialquilenoimina alcoxilada média é selecionada de a,w-hexanodiaminas etoxiladas e a,w-hexanodiaminas etoxiladas e polipropoxiladas, cada uma com um peso molecular médio M, (número médio) na faixa de 800 a 500.000 g/mol.
[00149] Em uma modalidade alternativa da presente invenção, as composições inventivas não são construídas, isto é, essencialmente livres de construtor de detergente adicional.
[00150] Em uma modalidade da presente invenção, as composições líquidas inventivas podem compreender de cerca de 0,1% a cerca de 15%, mais particularmente de 0,25% a 10% e mais particularmente de cerca de 0,5% a 5% de sal (A).
[00151] Assim, uma formulação de enzima líquida estabilizada pode conter 0,5 a 20% em peso, particularmente 1 a 10% em peso, de enzima (C) (total de protease e segunda enzima opcional) e 0,01% a 10% de sal (A), mais particularmente 0,05 a 5% em peso e o mais particularmente 0,1% a 2% em peso de sal (A).
[00152] Os construtores de succinato são preferivelmente usados na forma de seus sais solúveis em água, incluindo os sais de sódio, potássio, amônio e alcanolamônio. Os exemplos específicos de construtores de succinato incluem: laurilsuccinato, miristilsuccinato, palmitilsuccinato, 2- dodecenilsuccinato — (preferido), — 2-pentadecenilsuccinato e similares. Laurilsuccinatos são os construtores preferidos do grupo acima.
[00153] As composições inventivas permitem uma formulação flexível, mesmo com conteúdo de água alto ou baixo. Foi adicionalmente o objetivo prover uma composição que tivesse excelente vida de prateleira, especialmente com respeito à(s) enzima(s) nela contida(s). As composições inventivas são, portanto, excelentemente apropriada para lavagem de tecidos. Portanto, um aspecto adicional da presente invenção está direcionado para o uso das composições inventivas para a lavagem de tecidos. Em particular, as formulações inventivas líquidas são excelentemente apropriadas para a lavagem de tecidos.
[00154] As composições detergentes inventivas podem ser usadas como composições de limpeza de tecido, composições de limpeza de superfície dura, composições de limpeza de serviço leve incluindo composições de limpeza de louça e composições detergentes para lavadora de louça automática.
[00155] Um aspecto adicional da presente invenção está direcionado para o uso de um sal (A) para a estabilização de enzimas. Os sais (A) foram definidos em mais detalhes acima.
[00156] Um aspecto adicional da presente invenção é um processo para fabricar as composições inventivas, daqui em diante também aludido como processo de fabricação inventivo. O processo de fabricação inventivo compreende as etapas de (a) misturar (A) pelo menos um sal (A), e
(C) pelo menos uma enzima, (b) adicionar pelo menos um tensoativo (B) selecionado de tensoativos anfotéricos e aniônicos e não iônicos.
[00157] As etapas (a) e (b) podem ser realizadas em qualquer ordem. Entretanto, em modalidades nas quais o tensoativo (B) pode levar à formação de espuma é preferido primeiro misturar o sal (A) e a enzima (C) e depois adicionar o tensoativo (B).
[00158] A mistura de sal (A) e enzima (C) pode ser realizada em qualquer tipo de vaso. Preferivelmente, espumação e taxas de alto cisalhamento durante a mistura sejam evitadas. Os dispositivos preferidos são misturadores tubulares e misturadores estáticos.
[00159] Em uma modalidade preferida do processo de fabricação inventivo, o sal (A) é um composto da fórmula geral (1) (R);N*-(CH)NC(RNR)-(0-X)1-0-C(O)-R' A (D) em que n é selecionado de 1 a 12, m é selecionado de zero a 50, R' é selecionado de alquila C1-Cio, linear ou ramificada e arila Cçs-Cio, em que R' pode carregar uma ou mais hidroxila ou grupos C=O ou COOH, parcial ou totalmente neutralizados, se aplicável, R? são os mesmos ou diferentes e selecionados de alquila Cr- Cio, fenila, Rº e Rº são os mesmos ou diferentes e selecionados de hidrogênio e alquila C1-Ca, X é alquileno C7-C,, e A" é um contraíon, inorgânico ou orgânico. As variáveis R!', R?º, m, ne A' são como definidas acima. Preferivelmente, Rº no composto de acordo com a fórmula geral (1) são todos metila.
[00160] Em uma modalidade preferida do processo de fabricação inventivo, o sal (A) tem um contrafon selecionado de haleto, sulfato, carbonato, tartarato, citrato, lactato e metanossulfonato.
[00161] Em uma modalidade preferida do processo de fabricação inventivo a pelo menos uma enzima (C) é selecionada de protease, amilase e lipase.
[00162] A invenção será adicionalmente ilustrada pelos exemplos de trabalho.
[00163] Observações gerais: as percentagens são por cento em peso a menos que especificamente de outro modo mencionado.
[00164] A % em peso de enzimas aludidas como a preparação de enzima como usadas e comercialmente disponíveis — a % em peso de proteína pura é muito mais baixa — por isso o número de rotatividade/mg como descrito é importante.
[00165] A acetilcolina (A.12) foi adquirida da Sigma Aldrich. O contraíon foi cloreto.
[00166] O precursor de (A.14) pode ser produzido diretamente ao invés do uso de HCl na etoxilação de trimetilamina ou via reação de hidrogeno carbonato de colina com metanossulfônico, ver Constantinescu et al em Chem. Eng. Data, 2007, 52 1280-1285.
I. Síntese de Sais (A)
[00167] Com base nas quantidades de água separada por destilação e pela espectroscopia de IR seria mostrado as reações de esterificação foram completas.
[00168] Ácido metanossulfônico a 90% se refere a uma mistura de 10% de água e ácido metanossulfônico a 90%.
L.1 Síntese de sal inventivo (A.1)
[00169] Uma quantidade de 225 g de (1,5 mole) ácido tartárico foi dissolvida em 280 g de uma solução aquosa a 75% em peso de cloreto de colina (1,5 mole). A água foi removida dentro de 45 minutos em um evaporador rotativo (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 100 a 120ºC, 50 a 80 mbar. Uma quantidade de 15 g de ácido metanossulfônico aquoso a 90% em peso foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de evaporação rotativa a pressão foi continuamente reduzida para 10 mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 200 g de dietileno glicol. Uma quantidade de 617 g de um líquido amarelado foi obtida. Uma alíquota de 200 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 7,8 g de etanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.1) foi obtido.
1.2 Síntese de sal inventivo (A.2)
[00170] Uma quantidade de 150 g de ácido tartárico (1,0 mole) foi dissolvida em 374 g de uma solução aquosa a 75% em peso de cloreto de colina (2,0 moles). A água foi removida dentro de 45 minutos em um evaporador rotativo (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 100 a 120ºC, 50 a 80 mbar. Uma quantidade de 15 g de ácido metanossulfônico a 90% em peso foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de evaporação rotativa a pressão foi continuamente reduzida para 10 mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 200 g de dietileno glicol. Uma quantidade de 607 g de um líquido amarelado foi obtida. Uma alíquota de 200 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 8,7 g de etanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.2) foi obtido.
1.3 Síntese de sal inventivo (A.3)
[00171] Uma quantidade de 210 g de ácido cítrico mono-hidratado (1,0 mol) foi dissolvida em 374 g de uma solução aquosa a 75% em peso de cloreto de colina (2,0 moles). A água foi removida dentro de 45 minutos em um evaporador rotativo (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 100 a 120ºC, 50 a 80 mbar. Uma quantidade de 18 g de ácido metanossulfônico a 90% em peso foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de evaporação rotativa, a pressão foi continuamente reduzida para 10 mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 200 g de dietileno glicol. Uma quantidade de 607 g de um líquido amarelado foi obtida. Uma alíquota de 200 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 10,3 g de etanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.3) foi obtido.
1.4 Síntese de sal inventivo (A.4)
[00172] Uma quantidade de 210 g de ácido cítrico mono-hidratado (1,0 mol) foi dissolvida em 561 g de uma solução aquosa a 75% em peso de cloreto de colina (3,0 moles). A água foi removida dentro de 45 minutos em um evaporador rotativo (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 100 a 120ºC, 50 a 80 mbar. Uma quantidade de 18 g de ácido metanossulfônico a 90% em peso foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de evaporação rotativa a pressão foi continuamente reduzida para 10 mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 270 g de dietileno glicol. Uma quantidade de 868 g de um líquido amarelado foi obtida. Uma alíquota de 200 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 9,6 g de etanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.4) foi obtido.
1.5 Síntese de sal inventivo (A.5)
[00173] Uma quantidade de 210 g de ácido cítrico mono-hidratado (1,0 mol) foi dissolvida em 485 g de uma solução aquosa a 75% em peso de metanossulfonato de colina (2,0 mol). A água foi removida dentro de 45 minutos em um evaporador rotativo (frasco de 2 1) - temperatura do banho de óleo de 100 a 120ºC, 50 a 80 mbar. Uma quantidade de 18 g de ácido metanossulfônico a 90% em peso foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de evaporação rotativa a pressão foi continuamente reduzida para 10 mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 200 g de dietileno glicol. Uma quantidade de 663 g de um líquido amarelado foi obtida. Uma alíquota de 200 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 12,5 g de etanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.5) foi obtido.
1.6 Síntese de sal inventivo (A.6)
[00174] Uma quantidade de 98,1 g de anidrido maléico (1,0 mol) foi misturada com 363 g de metanossulfonato de colina (2,0 moles) como substância seca. A mistura foi aquecida em um evaporador rotativo a 135ºC. Depois de uma hora de mistura uma quantidade de 12 g de ácido metanossulfônico (puro) foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de mistura a pressão foi continuamente reduzida para 10 mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 200 g de dietileno glicol. Uma quantidade de 653 g de um líquido amarelado foi obtida. Uma alíquota de 200 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 8,9 g de etanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.6) foi obtido. 1,7 Síntese de sal inventivo (A.7)
[00175] Uma quantidade de 210 g de ácido cítrico mono-hidratado (1,0 mol) foi dissolvida em 437 g de uma solução aquosa a 70% em peso de cloreto de beta-metil colina (HO-CH(CH;3)-CH3-N(CH;3)3 Cl, 2,0 moles). À água foi removida dentro de 45 minutos em um evaporador rotativo (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 100 a 120ºC, 50 a 80 mbar. Uma quantidade de 18 g de ácido metanossulfônico a 90% em peso foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de evaporação rotativa a pressão foi continuamente reduzida para mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 200 g de dietileno glicol. Uma quantidade de 676 g de um líquido amarelado foi obtida. Uma alíquota de 200 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 12,3 g de etanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.7) foi obtido.
1.8 Síntese de sal inventivo (A.8)
[00176] Uma quantidade de 105 g de ácido cítrico mono-hidratado (0,5 mol) foi dissolvida em 327 g de uma solução aquosa a 70% em peso de cloreto de beta-metil colina (1,5 mol). A água foi removida dentro de 45 minutos em um evaporador rotativo (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 100 a 120ºC, 50 a 80 mbar. Uma quantidade de 13 g de ácido metanossulfônico a 90% em peso foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de evaporação rotativa a pressão foi continuamente reduzida para 10 mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 170 g de dietileno glicol. Uma quantidade de 471 g de um líquido amarelado foi obtida. Uma alíquota de 200 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 21,7 g de trietanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.8) foi obtido.
1.9 Síntese de sal inventivo (A.9)
[00177] Uma quantidade de 210 g de ácido cítrico mono-hidratado (1,0 mol) foi dissolvida em 520 g de uma solução aquosa a 70% em peso de cloreto de beta-n-propil colina (2,0 moles). A água foi removida dentro de 45 minutos em um evaporador rotativo (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 100 a 120ºC, 50 a 80 mbar. Uma quantidade de 18 g de ácido metanossulfônico a 90% foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de evaporação rotativa a pressão foi continuamente reduzida para 10 mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 250 g de propileno glicol. Uma quantidade de 774 g de um líquido amarelado foi obtida. Uma alíquota de 200 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 11,9 g de etanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.9) foi obtido.
1.10 Síntese de sal inventivo (A.10)
[00178] Uma quantidade de 210 g de ácido cítrico mono-hidratado (1,0 mol) foi dissolvida em 520 g de uma solução aquosa de 70% de cloreto de dimetilmonobutilcolina (2,0 moles). A água foi removida dentro de 45 minutos em um evaporador rotativo (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 100 a 120ºC, 50 a 80 mbar. Uma quantidade de 18 g de ácido metanossulfônico a 90% foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de evaporação rotativa a pressão foi continuamente reduzida para 10 mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 200 g de propileno glicol. Uma quantidade de 788 g de um líquido amarelado. Uma alíquota de 200 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 11,4 g de etanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.10) foi obtido. L.11 Síntese de sal inventivo (A.11)
[00179] Uma quantidade de 105 g de ácido cítrico mono-hidratado (0,5 mol) foi dissolvida em 397 g de uma solução aquosa a 60% em peso de cloreto de dimetil n-octilcolina (1,0 mol). A água foi removida dentro 90 minutos em um evaporador rotativo (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 100 a 120ºC, 50 a 80 mbar. Uma quantidade de 9,5 g de ácido metanossulfônico a 90% foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de evaporação rotativa a pressão foi continuamente reduzida para 10 mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 200 g de propileno glicol. Uma quantidade de 470 g de um líquido amarelado foi obtida. Uma alíquota de 200 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 8,9 g de etanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.11) foi obtido.
1.13 Síntese de sal inventivo (A.13)
[00180] Uma quantidade de 85 g ácido gálico (ácido 3,4,5-tri-hidróxi- benzóico, 0,5 mol) foi dispersa em 121 g de uma solução aquosa a 75% em peso de metanossulfonato de colina (0,5 mol). A água foi removida dentro 90 minutos em um evaporador rotativo (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 100 a 120ºC, 50 a 80 mbar. Uma quantidade de 8 g de ácido metanossulfônico a 90% foi adicionada e a temperatura foi elevada para 145ºC em uma pressão de 800 mbar. Depois de uma hora de evaporação rotativa a pressão foi continuamente reduzida para 10 mbar enquanto a água foi removida por mais 4,5 h a 145ºC. Uma substância amarelada clara foi obtida depois foi diluída com 100 g de dietileno glicol. Uma quantidade de 271 g de um líquido amarelado foi obtida. Uma alíquota de 100 g do líquido assim obtido foi neutralizada com 4,6 g de etanolamina até um valor de pH de 6 a 6,5 (10% em água). O sal inventivo (A.13) foi obtido. Sais comparativos:
[00181] C-(A.15) Cloreto de colina, solução aquosa a 75% em peso, comercialmente disponível da BASF SE
[00182] C-(A.16) Uma quantidade de 75 g (0,5 mol) de ácido tartárico foi dissolvida às porções (unidades de 15 g) em 206 g de uma solução aquosa a 80% em peso de bicarbonato de colina (1,0 mol). A solução foi agitada até que a evolução de CO, cessasse. A água foi removida dentro de 90 minutos pela evaporação rotativa (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 120ºC, 10 mbar. Uma substância clara foi obtida depois foi diluída com 150 g de dietileno glicol. 390 g de uma solução clara foram obtidos, C-(A.16).
Nenhuma formação de éster pôde ser detectada.
[00183] C-(A.17): Uma quantidade de 105 g (0,5 mol) de ácido cítrico mono-hidratado foi dissolvida às porções (unidades de 20 g) em 206 g de uma solução aquosa a 80% em peso de bicarbonato de colina (1,0 mol). A solução foi agitada até que a evolução de CO, cessasse. A água foi removida dentro de 90 minutos pela evaporação rotativa (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 120ºC, 10 mbar. Uma substância clara foi obtida depois foi diluída com 150 g de dietileno glicol. 412 g de uma solução clara foram obtidos, C- (A.17). Nenhuma formação de éster pôde ser detectada.
[00184] C-(A.18): Uma quantidade de 105 g (0,5 mol) de ácido cítrico mono-hidratado foi dissolvida às porções (unidades de 20 g) em 309 g de uma solução aquosa a 80% em peso de bicarbonato de colina (1,5 mol). A solução foi agitada até que a evolução de CO, cessasse. A água foi removida dentro de 90 minutos pela evaporação rotativa (frasco de 2 1) — temperatura do banho de óleo de 120ºC, 10 mbar. Uma substância clara foi obtida depois foi diluída com 150g de dietileno glicol. 497 g de uma solução viscosa clara foram obtidas, C-(A.18). Nenhuma formação de éster pôde ser detectada.
[00185] C-(A.19): ácido cítrico mono-hidratado, C-(A.20): sal monossódico do ácido cítrico, C-(A.21): sal dissódico do ácido cítrico, C- (A.22): sal trissódico do ácido cítrico. C-(A.19), C-(A.20), C-(A.21) e C- (A.22) são compostos construtores conhecidos usados em formulações detergentes. II Testes de aplicação II.1 Formação de formulações líquidas estáveis
[00186] As formulações detergentes líquidas de água baixa com glicóis como dietileno glicol ou DPG e consequentemente a solubilidade é inevitável. Os sais (A.1) a (A.11) e C-(A.16) a C-(A.18) são cada um solúveis em dietileno glicol e/ou dipropileno glicol e consequentemente podem ser formulados sem água.
[00187] 50 g de C-(A.19), C-(A.20), C-(A.21) e C-(A.22) foram cada um combinados em um frasco junto com 100 g de dietileno glicol e aquecidos a 100ºC durante 30 minutos sob agitação. A fonte de aquecimento foi removida e as suspensões brancas resultantes foram esfriadas até a temperatura ambiente em um período de 10 horas. As pastas fluidas resultantes foram filtradas (filtro de papel) e as tortas de filtro lavadas duas vezes com 50 g de isopropanol. Os compostos isolados C-(A.19), C-(A.20), C-(A.21) e C-(A.22) foram gravimetricamente determinados, mostrando que na ausência de água nem C-(A.19) nem C-(A.20) nem C-(A.21) nem C- (A.22) não podem ser usados devido à solubilidade insuficiente. As seguintes quantidades foram obtidas como tortas de filtro: C-(A.19): 44,0 g; C-(A.20): 45,8 g; C-(A.21): 47,2 g; C- (A.22): 48,2 g II.2 Teste de estabilidade de enzima
[00188] A estabilidade no armazenamento de lipase e protease em água foi avaliada a 37ºC.
[00189] As formulações de teste base foram fabricadas fabricando-se as formulações bases I a VI misturando-se os componentes de acordo com a Tabela 1.
[00190] O respectivo sal (A) ou composto comparativo foi adicionado, se aplicável, à respectiva formulação base nas quantidades como indicadas na Tabela 1.
[00191] A Enzima (C) foi adicionada, à respectiva formulação base nas quantidades como indicadas na Tabela 1. A quantidade de enzima como provida na Tabela | se refere à proteína ativa. Lipase ou protease foi adicionada, dependendo de qual atividade enzimática foi medida.
[00192] Lipolase& 100L (CAS-No. 9001-62-1, EC-No. 232-619-9) foi adquirida da Sigma-Aldrich.
[00193] Savinase& 16,0L (CAS-No. 9014-01-1, EC-No. 232-752-2)
foi adquirida da Sigma-Aldrich.
[00194] Água foi adicionada para realizar o equilíbrio para 100.
[00195] A atividade de lipolase em certos pontos no tempo como indicado na Tabela 2 foi determinada utilizando-se valerato de p-nitrofenol (2,4 mM de pNP-C5 em 100 mM de Tris pH 8,0, 0,01% de Triton X100) como um substrato. A absorção foi medida a 20ºC a cada 30 segundos em 5 minutos a 405 nm. A inclinação (a absorbância aumenta a 405 nm por minuto) da curva de absorção dependente do tempo está diretamente proporcional à atividade da lipase.
[00196] A Tabela 2 mostra a atividade da lipase nas formulações líquidas medidas depois do armazenamento; 1 a 30 dias a 37ºC. Os valores da atividade lipolítica providos na Tabela 2 foram calculados com referência ao valor de 100% determinado na formulação de referência no tempo 0.
[00197] A nomenclatura das formulações é como segue: o número em Romano antes do ponto final caracteriza a formulação base, o número em Arábico o tipo de sal. Zero: no sal (A). “C-”: formulações comparativas. Tabela 1: Formulações líquidas de lavagem de roupas Ingredientes [o em peso na formulação Lo E E mo E NV NM Referência | (B.D hs B EF bs bh bs 6 (B.2) E (B.3) EB AR E BB E 6h bs |
ED O TO E BB | [EX A SN ND [orbital Dj Pero |Propileno gticol RB | [Gee tar bs [Ca-formiato Bavinasee = bs bs bs bs hbs bs [| Lipelaseer ba ba ba ba ba ba [| "| (B.1): n-alquila Ci8-(OCH2CH2)25-OH (B.2): Combinação de alquila Cio-Cis-poliglicosídeo (B.3): Alquila Cio-C12> benzenossulfonato de sódio (B.4): Cumenossulfonato de sódio (B.5): Lauretsulfato de sódio — n-C12H25-0-(CH2CH20)3-SO;Na (B.6): n-CiHos(CH;) NO * para testes comparativos os experimentos foram repetidos sem enzimas ** para os testes comparativos sem sais (a) as ditas quantidades de sal (A) foram substituídas com a mesma quantidade de dietileno glicol.
[00198] A atividade enzimática da protease foi medida em um fotômetro de filtro de interferência de um canal Thermo Fisher Scientific Gallery (fabricado pela Thermo Fisher Scientific) pela titulação com N- succinil-Ala-Ala-Pro-Phe-p-pitroanilida em DMSO.
A liberação de para- nitroanilina resultou em um aumento de absorbância a 405 nm e é proporcional à atividade enzimática medida em unidades PROT.
Um PROT é a quantidade de enzima que libera 1 umol de para-nitroanilina de 1 MM de N- succinil-Ala-Ala-Pro-Phe-p-pitroanilida por minuto no pH de 9,0 e 37ºC.
Na Tabela 2, a atividade de lipase nas formulações e formulações comparativas foi determinada depois do armazenamento; 1 a 30 dias a 37ºC.
Uma atividade de 100% se refere à atividade em ambiente aquoso e concentração idêntica.
Tabela 2: Resultados dos testes de estabilidade 1d Ba d 10d 5d Pod B5d Bod Fórmula — ka) base BB ka) hi ho bs bs br bb bk5 kb8 ps | kn bs bs bb kb kB hs bo ks o | E116 (ao) bs bo k ks bi ko 66 bs ba | En kam b bo kB ho 6 E Bb B po | EL — fC(a18) ps bi kk 6h 6 bs 6 bb bo | Emo ko ba b kB bh Bb à bh ps po | m2 ka» bs ba b bo kB kB kk bs 8 | ms kas ho ho b7 bs b3 k kk hp po | m6 ao hoo ho bo bs ba b bo kB kB | m8 fam bs ba bo kB kk kk hs hp kb8 | mo fan br b bo kB kB kw E mw hs h6h6 | mo faio — bs bs bb kb kk kk 6h hs 63 | mz faiz ho b bs bs kB bs bo Ens fais bs bs bb bs Bb ho 6 ps bp | Emo kero bs b3 kb ha kb bh E Bb pa | ma ao ho b bs b bo ks kk kk hb7 | me ao hos hoo hoi br ba bo kb kB kb | mo ao br bs b3 kb kB kk hr bh 6h | mo faio bs bs bb kB EEE ho hs b3 bo | Mu fai br bs b kB kB bh m ho 3 | Me faiz ho bs b bs bp kB kk bs 6a | emo fa oo b2 ho ho BE Bb 6bk bb hs | Em kia) hor b3 8 kb8 bo Bb BR bs po | kEm2 ki2) bs b hs kb hs bB bs bp ho | kmvo bkro ——k bs kB ho bo Bs hs bBb< 6b3 | Wi kn b b b b kb kk E bh mm |
1d Bad 154 PR psd —Bod Fórmula la) ase W3 ka) bo ho bs bs bo k kk hk ha | W4 ao hor hoo b7 b3 bo k kk kB 63 | Ws ka bs bs bi kb k kb hk bs ps | Emv16 kia bs bo kB kb bs hà Bb bs ps | Emv1 kam bs b kB ha kb bb h& bb 63 | cvs kkas bs bi kB bh Bb ho h& bb bs | Evo kero kk ko hs kb8 bo bh hn Bb bo | m2 ka» b ba bo kB k k 6h ha o | nN4 ko hi b ba b k k kk hs mm | Ws k5 hi ho bs bs ba kB kk bh ha | W7 kn bs bs bz kk k kk bs ho kb6 | Wu fai —b bs bi kb kB bh 63 kb8 o | N3 faiz bs bs bb kB kk ho kh E hs | Evis tais bs bs kb ha b3 ba h bb Bo | Evi6 ao bs bb kB ho bs bb ho BB bs | Evo hero — bb ho h kb bh kk bb Bm bs | M4 ao ho bo bs bi kB kb kk bs bs | MS kas5 bo b bs b kk bh br ho kb3 | Me ao bs bo kB kk kk ha ho kb | | Mu faiom br b kb kB kk hs bs hp bs | Evri8g fis bs bo kb bs Bb to E bB Bb | Atividade de protease:
[00199] A atividade de savinase em certos pontos no tempo como indicado na Tabela 3 foi determinada pela utilização de Succinil-Ala-Ala-Pro- Phe-p-nitroanilida (Suc-AAPF-pNA, AAPF curto) como substrato. pDpNA é clivado da molécula de substrato pela clivagem proteolítica, resultando em liberação de cor amarela de pNA livre que foi determinado medindo-se a ODaos. A medição foi feita a 20ºC.
[00200] A Tabela 3 exibe a atividade de protease medida em formulações líquida depois do armazenamento durante 1 a 30 dias a 37ºC. Os valores da atividade proteolítica providos na Tabela 3 foram calculados referindo-se à 100% do valor determinado na formulação de referência no tempo O.
[00201] A nomenclatura das formulações é como segue: o número romano antes do ponto final caracteriza a formulação base, o número arábico o tipo de sal (A. o sal inventivo (o componente (a)); C-(A.ft) composto comparativo). Zero (“0”): nenhum sal, mas dietileno glicol.
Tabela 3: Atividades de protease com e sem sais (a) TO 1d Bd bd 154 pod psd Boa Fórmula la) base bo — bE 8 6 EL AD bo ba pr 5 bo bh BR Bb bo | LA (a ho b7 bs hs bo bo hs Bb bb | ENNNTO) E6 ao bs b3 kB bs bo bo hs ho bh | Al bs br BB fã Bb Bb be BB 116 .c(a16) b8 b1 B4 bs ho Bb Bo b3 ho fam bs po Ep ho bb Pb bo bb e |) Mo P€ero 6 Pb bb ph bh 6h 6 ph l6 (ão pr bo pr E bo bo bo Hm be me as ba bs b bs kb8 bo E mz faiz bs bs b bb ho ki bo Bb Bb | 7 Cain br ba bb hi 6 e bb bb À MB CAS) Evo pero kb bg k ho ho Bb tb b3 3 | Wi an 8 bb Bb ho be be bh Pb bo | 2 2 bb po bo Ve ão BB br b BM o bo br EB Bb ais) Bb bo b ka bo ho BB bs hs | -VLO — Bero gt b3 kb ho ho bp bh bp bh Ma fan br bo kk bs kb bi bb bh bo | MT (AD Mo fam bb b 5 MIL [AlD -vLIS5 ciais Bs bo EB kb kk BB bh bp ho ) II.3 Testes de limpeza de têxteis
[00202] O desempenho detergente destas formulações na limpeza de dois tipos de tecidos de teste foi realizado. As amostras de pano de teste compreenderam uma sujeira complexa contendo componentes proteináceos e graxos devido ao processo CFT assim como as amostras de pano de teste contiveram um tipo graxo/particulado de sujeira.
[00203] O teste foi realizado como segue: um monitor de multi mancha contendo 8 pedaços de tecido sujo padronizados, cada um de 2,5 x 2,5 cm no tamanho e costurado nos dois lados a um carreador de poliéster foi lavado Junto em um launder-O-meter com 2,5 g de pano de algodão e 5 g/L do detergente lavar roupas líquido de teste, Tabela 4.
[00204] As condições foram como segue: Dispositivo: Launder-O- Meter da SDL Atlas, Rock Hill, USA. Líquido de lavagem: 250 ml, tempo de lavagem: 60 minutos, temperatura de lavagem: 30ºC. Dureza da água: 2,5 mmol/L; Ca:Mg:HCO; 4:1:8.
[00205] A razão de tecido para líquido 1:12 depois do ciclo de lavagem, os monitores de multi mancha foram enxaguados em água, seguido pela secagem na temperatura ambiente em um período de tempo de 14 horas.
[00206] Os seguintes panos de teste pré-sujos foram usados: CFT C-S-10: manteiga em algodão CFT C-S-62: banha, colorido no algodão CFT C-S-68 EMPA 112: chocolate no algodão EMPA 141/1: batom no algodão EMPA 125: wÍk20D: pigmento e gordura tipo sebo no pano misto de poliéster/algodão CFT C-S-70: chocolate, creme musse wik = Tecidos de teste wfk GmbH, Krefeld EMPA = Swiss Federal Institute of Materials Testing CFT = Center for Test Material B.V.
[00207] O nível total de limpeza foi avaliado usando medições de cor. Os valores de reflectância das manchas sobre os monitores foram medidos usando um espectrômetro de reflectância de esfera (tipo SF 500 da Datacolor, USA, faixa de comprimento de onda de 360 a 700 nm, geometria óptica d/8º) com um filtro de corte de UV a 460 nm. Neste caso, com a ajuda da classificação do espaço de cor CIE-Lab, o brilho L *, o valor a * no eixo de cor vermelha - verde e o valor b * no eixo de cor amarelo - azul, foram medidos antes e depois da lavagem e calculados em média para as 8 manchas do monitor. A mudança do valor de cor (A E), definido e calculado automaticamente pelas ferramentas de avaliação de cor na seguinte equação: A E=A Deltaa*2+A Delta b* 2++ A Delta L*2,
[00208] A E é uma medida do efeito de limpeza obtido. Todas as medições foram repetidas seis vezes para produzir um número médio. Observe que valores À E mais altos mostram limpeza melhor. Uma diferença de 1 unidade pode ser detectada por uma pessoa habilitada. Um leigo pode detectar 2 unidades facilmente. Os resultados são mostrados na Tabela 5. Ruy = reflectância da sujeira lavada R, = reflectância pura
[00209] O aumento na detergência devido ao construtor foi calculado como: Um total de 6 réplicas de cada pano foi conduzido durante este estudo; um nível de confiança estatística de 90 a 95% foi calculado.
[00210] As formulações de teste foram fabricadas fazendo-se as formulações VII a XIII pela mistura dos componentes de acordo com a Tabela 4.
[00211] O respectivo sal (A) ou composto comparativo foi adicionado, se aplicável, à respectiva formulação base nas quantidades providas na Tabela
4.
[00212] Lipolase& 100L foi adicionada, se aplicável, à respectiva formulação base nas quantidades providas na Tabela 4.
[00213] Savinase& 16,0L foi adicionada, se aplicável, à respectiva formulação base nas quantidades providas na Tabela 4.
[00214] Água foi adicionada para realizar o equilíbrio para 100. Tabela 4: Formulações líquidas de lavagem de roupas u m x 1 1 XI [05 O O E O Ba E | Ba ho ho ho ho || [EX UE 2X O SN Serbia RR [258707 O O RR O a Ei E ICa-formiato RR E ISavinase 16.0 bs hs | ILipotase ha E ha ba ba |
Ingredientes em peso na formulação No vm x x XI XT XII BB Ft bs bs pp bs bs kh || (B.1): n-alquila Cis-(OCH2CH2)25-OH (B.2): Combinação de alquila Cio-Cis poliglicosídeo (B.3): alquila Cio-C12 benzenossulfonato de Sódio (B.4): Cumenossulfonato de Sódio (B.5): Lauretsulfato de Sódio — n-C12H25-O0-(CH2CH20)3-SO;Na (B.6): n-Ci2H2s(CH;).N>O
[00215] A Lipolase foi presente antes do armazenamento em uma quantidade de 7500 LU/ml
[00216] O aumento na detergência devido ao sal (A) foi calculado como: um total de 6 exemplos de cada pano foi conduzido durante este estudo; um nível de confidência estatística de >90% foi calculado. A Tabela 5 mostra a soma de AE do monitor de multimancha acima mencionado. Os testes de launder-O-meter foram executados com formulação recém preparada (para) e com armazenamento a uma temperatura de armazenamento a 37ºC durante 2 meses. Como uma aproximação uma semana a 37ºC é equivalente a 342 semanas a 20ºC.
ê ã SO AT =|| nun =| [= Man of! || e se mo mio 2 E Ses Ss Ss ss je 2 2 2/2 2/2 2|< 3 &% < 3 ã E e S/c = So un alo a os eo se e a lee o ES ES E e SER &/E fe/2) 5 5/38 2/ 2/8 /2/2/s 8 < << & 8 É | 26 | se | 20 | 6a | so | so] em | — | so | eu | 29 | 1a | 5 | 2a [so] = [10] e | 29 | oe SIE EE EEE E e 2 E 8/5 8/8 ae 2/38) S/S Ee Se SS se s/a se 2 e as e 2 bx mm < Sa 2|é 2 Elalalm= =| =/ o =| mn Sn el eee lalala lo SE S/A E/S e 8 = 2/8 8/ 8 s/8 8/8 [8/2/8288 | 2/2 2 Se e 2 2 E 2 S/S 2 2/22 /2]/2/2=/2 Oja 4 OS
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[00217] Para testes comparativos sem sais (a) os últimos foram substituídos pela mesma quantidade de dietileno glicol.

Claims (15)

REIVINDICAÇÕES
1. Composição, caracterizada pelo fato de que contém (A) pelo menos um sal de acordo com a fórmula geral (1) (RN -(CHo):C(RNR)-(0-X)1-0-C(O)-R' A” (D) em que n é selecionado de 1 a 12, m é selecionado de zero a 50, R' é selecionado de alquila C,-Cçk não substituída, alquila C1- Cio substituída, linear ou ramificada, -C«Hs, para -HO-C«H,y, o,p- dihidroxifenila e 3,4,5-trihidróxi-fenila, em que R' pode carregar uma ou mais hidroxila ou grupos C=O ou COOH, parcial ou totalmente neutralizados, se aplicável, R? são os mesmos ou diferentes e selecionados de alquila C1- Cio, fenila, R? e Rº são os mesmos ou diferentes e selecionados de hidrogênio e alquila C1-Ca, X é alquileno C7-C, e A é um contrafon orgânico, (B) pelo menos um tensoativo selecionado de tensoativos anfotéricos e aniônicos e não iônicos.
2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o sal (A) tem um contraíon selecionado de tartarato, citrato, lactato e metanossulfonato.
3. Composição de acordo com a reivindicação | ou 2, caracterizada pelo fato de que a dita composição adicionalmente contém (C) pelo menos uma enzima.
4. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a pelo menos uma enzima (C) é selecionada de protease, amilase e lipase.
5. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a dita composição é líquida na temperatura ambiente.
6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que R? no composto de acordo com a fórmula geral (1) são todos metila.
7. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a dita composição contém 0,5 a 30% em peso de sal (A).
8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o sal (A) contém como impureza um composto (A'*) (R9);N*-(CH>).C(R)(R$)-(0-X) .-OH R!-COO- em que as variáveis R!, Rº, X, n e m são os mesmos como no sal (A) correspondente.
9. Uso de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de ser para a lavagem de tecidos.
10. Uso de um sal (A) de acordo com a fórmula geral (1) (RI;N*-(CH)C(RNR?)-(O0-X)1-0-C(O)-R' A (D, caracterizado pelo fato de que n é selecionado de 1 a 12, m é selecionado de zero a 50, R' é selecionado de alquila C,-Cçk não substituída, alquila C1- Cio substituída, linear ou ramificada, -C«Hs, para -HO-C«H,y, o,p- dihidroxifenila e 3,4,5-trihidróxi-fenila, em que R' pode carregar uma ou mais hidroxila ou grupos C=O ou COOH, parcial ou totalmente neutralizados, se aplicável, R? são os mesmos ou diferentes e selecionados de alquila C1-
Cio, fenila, R? e Rº são os mesmos ou diferentes e selecionados de hidrogênio e alquila C1-Ca, X é alquileno C7-C, e A' é um contrafon orgânico, para a estabilização de enzimas.
11. Processo para fabricar uma composição, caracterizado pelo fato de que o dito processo compreende as etapas de (a) misturar (A) pelo menos um sal (A) que é um composto da fórmula geral (1), e (C) pelo menos uma enzima (R);N*-(CH)C(RNRº)-(0-X)1-O-C(O)-R' A (D) em que n é selecionado de 1 a 12, m é selecionado de zero a 50, R' é selecionado de alquila C1-Cio, linear ou ramificada e arila Cç6-C1o, em que R' pode carregar uma ou mais hidroxila ou grupos C=O ou COOH, parcial ou totalmente neutralizados, se aplicável, R? são os mesmos ou diferentes e selecionados de alquila Cr- Cio, fenila, R? e Rº são os mesmos ou diferentes e selecionados de hidrogênio e alquila C1-Ca, X é alquileno C7-C, e A' é um contrafon orgânico (b) adicionar pelo menos um tensoativo (B) selecionado de tensoativos anfotéricos e aniônicos e não iônicos.
12. Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o sal (A) tem um contrafon selecionado de tartarato, citrato,
lactato e metanossulfonato.
13. Processo de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma enzima (C) é selecionada de proteases, amilases e lipases.
14. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, caracterizado pelo fato de que R? no composto de acordo com a fórmula geral (1) são todos metila.
15. Sal de acordo com a fórmula geral (CH3);N*-(CH2)CH(R?)-O-C(O0)-R* (A') (ID, caracterizado pelo fato de que (A!) é selecionado de tartarato e citrato, Ri é selecionado de hidrogênio e alquila Cy-C4, e em que Ró é selecionado de -CH;-C(OH)(COOX?)-CH;- COOX? e -CH(OH)-CH(OH)-COOX! em que X' é selecionado de hidrogênio, metal alcalino e (CH3);N"'-(CH3)2- e em que X? são os mesmos ou diferentes e selecionados de hidrogênio, metal alcalino e (CH3);N*-(CH;>)2-.
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