CN1194099C - 快速检测有机磷农药残留的鱼酯酶试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种快速检测有机磷农药残留的鱼酯酶试剂，包括鱼酯酶、辅剂A、B，附带一张标准比色卡。鱼酯酶制备方法为以草鱼或鲫鱼等为原料，去鳞及内脏，剔除粗骨，肉切成小块，称重，按鱼肉与缓冲液重量1∶2的比例加入pH7.0-7.8的0.1moL/L的PBS缓冲液，打浆，离心，过滤上清去除液面脂肪，冷冻干燥即可。A辅剂为酯类物质，如醋酸胆碱，B辅剂为显色剂，如甲基红和溴甲酚绿。本发明的优点是稳定性好，操作便捷，成本低廉，可在家庭、市场、蔬菜生产地等现场进行，不需任何仪器。
Description
本发明涉及有机磷农药检测用的酯酶及其辅剂的制备。
目前农药残留检测法主要是仪器分析法，虽然能准确测出残留量，但需要贵重仪器，前处理操作繁琐，需受过专门训练的人员才可掌握，只能用于实验室，很难适应现场简单快速和大量样品残留分析的要求。当前我国农药快速检测法中以生物测定法、酶法应用较多。中国农业科学院植物保护研究所以实验室饲育的敏感性家蝇为试验材料，以这种家蝇接触供试食品后的中毒程度来表示该种食品的含毒程度，用这种方法对食品中杀虫剂、杀菌剂、除草剂以及其他污染物进行测定，这种方法缺点是要有与该产品同时种植的未施农药的产品作为对照方能保证结果的准确，而且耗时很长，不适宜现场检测。近年来国内还出现快速检测蔬菜中有毒农药残留的“速测袋”和“速测卡”，通过从猪肝、牛肝、马血、羊血、蝇头、植物组织等得来的胆碱酯酶进行显色比较进行检测，由于这些来源的酶活性差，灵敏度低，所使用的显色物质不稳定，受叶绿素等外界因素干扰较大而显色不明显，结果判断困难，经常出现漏检现象，而且成本较高，应用中缺点较多。
本发明的目的是提供一种高灵敏度可在家庭、市场、生产地等现场快速检测有机磷农药的高活力高灵敏度的鱼酯酶及其辅剂。
本发明包括鱼酯酶、辅剂A和B，附标准比色卡。鱼酯酶来源于草鱼或鲫鱼等的酯酶制剂，辅剂A为含醋酸胆碱的物质，辅剂B为甲基红和溴甲酚绿的混合显色剂。
鱼酯酶制备：以草鱼或鲫鱼等为原料，去鳞及内脏，剔除粗骨，肉切成小块，按鱼肉与缓冲液重量1∶2的比例加入pH7.0-7.8、0.1moL/L的PBS缓冲液，打浆，离心，过滤上清以除去液面脂肪，冷冻干燥即可。
辅剂A制备：将醋酸胆碱溶于有机溶剂，有机溶剂为丙酮或酒精，加入可溶性淀粉搅拌混匀，醋酸胆碱与可溶性淀粉的重量比为1∶1000，最后自然挥发去除有机溶剂即可。
辅剂B制备：用溴甲酚绿和甲基红混合物与可溶性淀粉搅拌混匀即可，溴甲酚绿和甲基红混合物与可溶性淀粉重量比为1∶1000，溴甲酚绿与甲基红重量比为1∶1。
标准比色卡制作：根据不同浓度的农药在检测时所显示的颜色制备。
本发明的应用原理是：酯酶将醋酸胆碱分解为醋酸和胆碱，显色剂在酸性条件下显红色，随pH值升高，颜色变浅，而有机磷类农药可对酯酶造成抑制，使得醋酸胆碱不能分解产生醋酸，进而不能使显色剂显红色，所以根据最终显色程度可判断蔬菜中有机磷农药是否超标。
检测方法：将待检测的溶液倒入装有鱼酯酶的试管中，1-2分钟后加入辅剂A和辅剂B，1-2分钟后看待测液出现深红色，说明农药残留未超标，如果与标准比色卡比较，则可概略知道农药含量。使用形式除可用塑料管外，还可以采用试管、皿、袋的形式，配以比色计还可以速测计形式使用。
本发明既可检测蔬菜中有机磷农药残留，也可以检测水果、地下水、粮食中的有机磷农药残留。
本发明具有如下优点：
(1)稳定性好：鱼酯酶经冷冻干燥后，常温、避光条件下放置两年活力仍很高；辅剂加入辅料后为固态形式，保存期比一般溶液形式有效期大大延长。
(2)灵敏度强：对有机磷农药氨基甲酸酯农药检测限极低，最低达0.5ppm。
(3)耗时短：一般操作者一次可同时处理多个样，从取样到测定完成平均测定一个样品只需3-5分钟。
(4)操作便捷：鱼酯酶和辅剂制备简单；应用时可在家庭、农贸市场、蔬菜基地等现场进行，不需任何仪器。
(5)成本低廉：酶制剂原料来源非常广泛，价格低廉，提取产率很高；辅剂费用几乎可以忽略。
实施例：
1.草鱼酯酶制备：以草鱼为原料，去鳞及内脏，剔除粗骨，肉切成小块，称重，按鱼肉与缓冲液重量1∶2的比例加入pH7.0-7.8的0.1moL/L的PBS缓冲液，打浆，离心，过滤上清去除液面脂肪，冷冻干燥，按20mg/管分装于透明或半透明塑料管，扣盖密封备用。
2.辅剂A制备：称取醋酸胆碱20mg溶于酒精，加入可溶性淀20g粉，混匀，酒精量必须淹没可溶性淀粉，然后自然挥发掉酒精，按20mg/份分装于小塑料管，扣盖密封备用。
3.辅剂B制备：称溴甲酚绿和甲基红各10mg，碾成粉状，与20g可溶性淀粉搅拌混匀，按20mg/份分装于小塑料管，扣盖密封备用。
4.菜样：取少许青菜，切碎，混匀，取大约5g放置小容器中，加水约10mL，振摇几下，静置，往酯酶管加入样液约4mL，2分钟后加入辅剂A和辅剂B，2分钟后若出现深红色，则证明农药残留未超标；若出现浅红色或无色，则农药残留超标。跟特制的比色卡比较，则可概略定量农药残留量。
5.水果：取少许水果，切碎，混匀，取大约5g放置小容器中，加水约10mL，振摇几下，静置，往酯酶管加入样液约4mL，2分钟后加入辅剂A和辅剂B，2分钟后若出现深红色，则证明农药残留未超标；若出现浅红色或无色，则农药残留超标。跟特制的比色卡比较，则可概略定量农药残留量。
6.地下水：往酯酶管加入样液约4mL，2分钟后加入辅剂A和辅剂B，2分钟后若出现深红色，则证明农药残留未超标；若出现浅红色或无色，则农药残留超标。跟特制的比色卡比较，则可概略定量农药残留量。
7.粮食：取大约5g粮食放置小容器中，加水约10mL，振摇几下，静置，往酯酶管加入样液约4mL，2分钟后加入辅剂A和辅剂B，2分钟后若出现深红色，则证明农药残留未超标；若出现浅红色或无色，则农药残留超标。跟特制的比色卡比较，则可概略定量农药残留量。
Claims (4)
1.快速检测有机磷农药残留的鱼酯酶试剂，其特征在于由鱼酯酶、辅剂A和辅剂B组成，鱼酯酶为来源于草鱼或鲫鱼的酯酶制剂，辅剂A为含醋酸胆碱的粉状物，辅剂B为含溴甲酚绿和甲基红的混合显色剂。
2.根据权力要求1所的快速检测有机磷农药残留的鱼酯酶试剂，其特征在于所述的鱼酯酶的制备以草鱼或鲫鱼等鱼类为原料，去鳞、剔除粗骨，肉切成小块，称重，按鱼肉与缓冲液重量1∶2的比例加入pH7.0-7.8、0.1moL/L的PBS缓冲液，打浆，离心，过滤上清去除液面脂肪，冷冻干燥而成。
3.根据权力要求1所述的快速检测有机磷农药残留的鱼酯酶试剂，其特征在于所述的辅剂A为醋酸胆碱与可溶性淀粉的混合物，醋酸胆碱与可溶性淀粉的重量比为1∶1000。
4.根据权力要求1所的述快速检测有机磷农药残留的鱼酯酶试剂，其特征在于所的辅剂B为含溴甲酚绿和甲基红及可溶性淀粉的混合物，溴甲酚绿和甲基红重量比为1∶1，溴甲酚绿和甲基红混合物与可溶性淀粉重量比1∶1000。
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