BR112019019686A2 - síntese de inibidor de mcl-1 - Google Patents

Abstract

a presente invenção refere-se a intermediários e métodos para sintetizar o composto 1. composto 1

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para SÍNTESE DE INIBIDOR DE MCL-1.

Antecedentes [001] Leucemia de Células Mieloides 1 (Mcl-1) é um membro antiapoptótico importante da família de proteínas BCL-2 e um regulador central da sobrevivência celular. A amplificação do gene MCL1 e/ou sobre-expressão da proteína Mcl-1 têm sido observadas em múltiplos tipos de câncer e estão habitualmente implicadas no desenvolvimento tumoral. De fato, MCL1 é um dos genes mais frequentemente amplificados em câncer humano. Em muitas malignidades, Mcl-1 é um fator de sobrevivência crítico e foi mostrado que medeia a resistência a fármacos para uma variedade de agentes anticancerígenos.

[002] Mcl-1 promove a sobrevivência celular por ligação a proteínas pró-apoptóticas tais como Bim, Noxa, Bak e Bax e neutralização das suas atividades indutoras de morte. Assim, a inibição de Mcl-1 libera estas proteínas pró-apoptóticas, conduzindo frequentemente à indução de apoptose em células tumorais dependentes de Mcl-1 para sobreviverem. Deste modo, visar terapeuticamente Mcl-1 isoladamente ou em combinação com outras terapias é uma estratégia promissora para tratar uma pluralidade de malignidades e para ultrapassar a resistência a fármacos em muitos cânceres humanos. O composto quimicamente denominado ácido (/?_a)-(+)-17-cloro-5,13,14,22-tetrametil-28oxa-2,9-ditia-5,6,12,13,22-penta-azaheptaciclo[27.7.1.1⁴’⁷.0¹¹’¹⁵.0¹⁶’²¹. Q2024_O30,35_{]octatrjaconta}_₁ (37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35tridecaeno-23-carboxílico (referido como Composto 1):

Composto 1

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2/61 é um potente inibidor de Mcl-1, como descrito em mais detalhe abaixo. Por conseguinte, existe uma necessidade de desenvolver novos métodos para sintetizar o Composto 1 de uma maneira eficiente.

Breve Sumário [003] São aqui fornecidos processos e intermediários úteis para a síntese do Composto 1:

s

Cl

S'

N

N-N

Composto 1 [004] Em algumas modalidades, são divulgados os seguintes intermediários e quaisquer seus sais e a sua síntese:

<^Ν^χΝ·

Br ^H ,o,

ci· o

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Breve Descrição dos Desenhos [005] A Figura 1 ilustra o diagrama de difração de raios X em pó da Forma A ácido (/?_a)-17-cloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oxa-2,9-ditia-

5.6.12.13.22- penta- azaheptaciclo[27.7.1.1⁴’⁷.0¹¹’¹⁵.0¹⁶’²¹ 0²⁰’²⁴.0³⁰’³⁵]octatriaconta1 (37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridecaeno-23-carboxílico mono-hidratado.

[006] A Figura 2 ilustra a calorimetria diferencial de varrimento (DSC) e os traços de análise termogravimétrica (TGA) da Forma A ácido (F?_a)-17-cloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oxa-2,9-ditia-5,6,12,13,22penta-azaheptaciclo[27.7.1.1⁴’⁷O¹¹’¹⁵O¹⁶’²¹O²⁰’²⁴O³⁰’³⁵]octatriaconta1 (37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridecaeno-23-carboxílico mono-hidratado.

Descrição Detalhada [007] Em algumas modalidades, são aqui fornecidos processos e intermediários úteis para a síntese do ácido (/?_a)-(+)-17-cloro-5,13,

14.22- tetrametil-28-oxa-2,9-ditia-5,6,12,13,22-penta-azaheptaciclo [27.7.1.1 v.o¹¹’¹⁵.O¹⁶’²¹ 0²⁰’²⁴ O³⁰’³⁵]octatriaconta-1 (37),4(38),6,11,14,16, 18,20,23,29,31,33,35-tridecaeno-23-carboxílico (Composto 1):

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N-N

Composto 1 [008] O composto 1 é um potente inibidor de Mcl-1 como ilustrado no Exemplo 1, infra, e pode ser útil no tratamento de câncer, incluindo malignidades hematológicas tais como leucemia mieloide aguda, mieloma múltiplo, linfoma de células do manto, leucemia linfocítica crônica, linfoma difuso de grandes células B, linfoma de Burkitt, linfoma folicular e tumores sólidos, por exemplo, câncer do pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer do pulmão de células pequenas (SCLC), câncer da mama, neuroblastoma, câncer da próstata, melanoma, câncer pancreático, câncer uterino, endometrial e do cólon. Devido à complexidade estrutural do Composto 1, chegar a uma síntese eficiente pode ser um aspecto importante no desenvolvimento do Composto 1 como um potencial tratamento de câncer.

Intermediários [009] Em algumas modalidades, é divulgado (2-(2-(2-bromo-3clorofenil)hidrazono)hexanodioato de E/Z)-dimetila de (E/Z)-dimetila (Intermediário 1):

Intermediário 1 [0010] Em algumas modalidades, é divulgado um composto de fórmula (d):

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em que R1 é um grupo protetor ou hidrogênio. Em algumas modalida des, R1 é p-metoxibenzila. Em algumas modalidades, o composto de fórmula (a) é ácido (±)-3-(2-carboxietil)-6-cloro-7-(3-(((4-metoxibenzil) óxi)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-1 -metil-1 H-indol-2-carboxílico (Intermediário 6):

[0011] Em algumas modalidades, é divulgado um composto de fórmula (e):

(e) em que R1 é um grupo protetor ou hidrogênio. Em algumas modalidades, R1 é p-metoxibenzila. Em algumas modalidades, o composto de fórmula (b) é ácido (/?_a)-3-(2-Carboxietil)-6-cloro-7-(3-(((4-metoxibenzil)

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6/61 óxi)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-1 -metil-1 H-indol-2-carboxílico

-(1/?)-1-(2-nitrofenil)etanamina (sal 1:1) (Intermediário 7):

Intermediário 7 [0012] Em algumas modalidades, é divulgado 5-(((4-hidroxinaftalen-2-il)tio)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-carboxilato (Intermediário 12):

o

Intermediário 12 [0013] Em algumas modalidades, é divulgado um 3-(((3-(hidroximetil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1-ol (Intermediário 13):

Intermediário 13 [0014] Em algumas modalidades, é divulgado 3-(((3-(clorometil)-1metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1 -ol (Intermediário 14):

Intermediário 14

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7/61 [0015] Em algumas modalidades, é divulgado acetato de 3-(((3(clorometil)-l -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1 -il (Intermediário 15):

Cl

Intermediário 15 [0016] Em algumas modalidades, é divulgado acetato de 3-(((3((acetiltio)metiI)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1 -ila (Intermediário 16):

Intermediário 16.

Síntese [0017] Em algumas modalidades, é divulgado um método de sintetizar (2-(2-(2-bromo-3-clorofenil)hidrazono)hexanodioato de E/Z)-dimetila (Intermediário 1):

,o, ^{Br H} o^o

Intermediário 1 [0018] Compreendendo as etapas de (i) contatar 2-bromo-3-cloroanilina com 2-oxociclopentano-1-carboxilato de metila com um agente de diazotização em um sistema aquoso acídico; (ii) adicionar 2oxociclopentano-1-carboxilato de metila e uma base aquosa ao siste

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8/61 ma aquoso acídico; (iii) isolar a hidrazona resultante; (iv) contatar a hidrazona com uma solução ácida; e (v) isolamento de 2-(2-(2-bromo3-clorofenil)hidrazono)hexanodioato de (EZZ)-dimetila (Intermediário 1). Em algumas modalidades, o agente de diazotização é NaNO2, Ca(NO2)2 ou KNO2. Em algumas modalidades, 0 agente de diazotização é NaNO2. Em algumas modalidades, 0 sistema aquoso acídico compreende um ácido prótico e água. Em algumas modalidades, 0 ácido prótico é ácido clorídrico. Em algumas modalidades, a base aquosa é acetato de potássio, hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, carbonato de potássio, carbonato de sódio ou fosfato de potássio. Em algumas modalidades, a base aquosa é acetato de potássio. Em algumas modalidades, a solução acídica compreende um ácido e um álcool. Em algumas modalidades, a solução acídica compreende ácido sulfúrico concentrado e metanol, ácido metanossulfônico e metanol ou ácido p-toluenossulfônico e metanol. Em algumas modalidades, a solução acídica compreende ácido sulfúrico concentrado e metanol.

[0019] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de 7-bromo-6-cloro-3-(3-metóxi-3-oxopropil)-1 H-indol-2-carboxilato de metila (Intermediário 2):

Intermediário 2 [0020] Compreendendo as etapas de (i) contatar 2-(2-(2-bromo-3clorofenil)hidrazono)hexanodioato de (E/Z)-dimetila (Intermediário 1) com uma solução acídica; e (ii) isolamento de 7-bromo-6-cloro-3-(3metóxi-3-oxopropil)-1H-indol-2-carboxilato de metila (Intermediário 2). Em algumas modalidades, a solução acídica compreende um ácido e um álcool. Em algumas modalidades, a solução acídica compreende

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9/61 ácido sulfúrico concentrado e metanol, ácido metanossulfônico e metanol ou ácido p-toluenossulfônico e metanol. Em algumas modalidades, a solução acídica compreende ácido sulfúrico concentrado e metanol. Em algumas modalidades, o método de síntese do Intermediário 2 compreende ainda a etapa de aquecer a solução acídica antes do isolamento do Intermediário 2.

[0021] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de um composto de fórmula (a):

Br

(a) em que R1 é um grupo protetor ou hidrogênio, compreendendo as etapas de: (i) contato de 1,5-dimetil-1H-pirazol-3-carboxilato de etila com um agente redutor na presença de um primeiro solvente para formar uma primeira solução; (ii) isolar (1,5-dimetil-1 H-pirazol-3-il) metanol; (iii) contato de (1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)metanol com um agente de bromação na presença de um segundo solvente para formar (4bromo-1,5-dimetil-1H- pirazol-3-il)metanol; (iv) isolar (4-bromo-1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)metanol; (v) contato de (4-bromo-1,5-dimetil-1Hpirazol-3-il)metanol com uma base, opcionalmente, um catalisador de transferência de fase, e um precursor do grupo protetor em um terceiro solvente; e (v) o isolamento do composto de fórmula (a). Em algumas modalidades, o agente redutor é selecionado de hidreto de alumínio e lítio (LAH), hidreto de diisobutilalumínio (DIBAL), boro-hidreto de lítio (L1BH4), hidreto de bis(2-metoxietóxi)alumínio de sódio (Red-AI®) e boro-hidreto de sódio (NaBhk). Em algumas modalidades, 0 agente redutor é hidreto de alumínio e lítio. Em algumas modalidades, 0 primeiro solvente é selecionado de tolueno, THF, 2-metiltetrahidrofurano, MTBE, metanol, etanol e éter dietílico. Em algumas modalidades, 0 primeiro solvente é 0 tetra-hidrofurano. Em algumas modali

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10/61 dades, o segundo solvente é o tetra-hidrofurano. Em algumas modalidades, o agente de bromação é a 1,3-dibromo-5,5-dimetil-hidantoína (DBDMH). Em algumas modalidades, o agente de bromação é Nbromosuccinimida. Em algumas modalidades, a base é hidróxido de lítio, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidreto de sódio, hidreto de lítio ou hidreto de potássio. Em algumas modalidades, utiliza-se um catalisador de transferência de fase, por exemplo BU4N HSO4 ou cloreto de benziltrimetilamônio. Em algumas modalidades, a base é hidróxido de potássio e 0 catalisador de transferência de fase é 0 bissulfato de tetrabutilamônio. Em algumas modalidades, 0 precursor do grupo protetor é 1-(clorometil)-4-metoxibenzeno. Em algumas modalidades, R1 é p-metoxibenzila. Em algumas modalidades, 0 composto de fórmula (a) é 4-bromo-3-(((4- metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1Hpirazol (Intermediário 3):

Intermediário 3 [0022] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de um composto de fórmula (b):

O 0

B em que R1 é um grupo protetor ou hidrogênio, compreendendo as etapas de: (I) fazer contatar um composto de fórmula (a) com um agente de metalização na presença de um solvente; (ii) adicionar 2isopropóxi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano; (iii) adição de uma

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11/61 solução de solvente acídico; e (iv) isolar o composto de fórmula (b). Em algumas modalidades, o agente de metalização é n-butil-lítio. Em algumas modalidades, o solvente é o tetra-hidrofurano. Em algumas modalidades, a solução de solvente acídico compreende ácido acético e tolueno. Em algumas modalidades, R1 é p-metoxibenzila. Em algumas modalidades, o composto de fórmula (a) é 4-bromo-3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol (Intermediário 3). Em algumas modalidades, o composto de fórmula (b) é 3-(((4-metoxibenzil) óxi) metil)-! ,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol (Intermediário 4):

Intermediário 4 [0023] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de um composto de fórmula (c):

em que R1 é um grupo protetor ou hidrogênio, compreendendo as etapas de: (i) contatar um composto de fórmula (b) com 7-bromo-6cloro-3-(3-metóxi-3-oxopropil)-1H-indol-2-carboxilato de metila (Intermediário 2) com um catalisador de paládio na presença de uma base e solvente; e (ii) isolar o composto de fórmula (c). Em algumas modalidades, o catalisador de paládio é selecionado de tetraquis (trifenilfosfina)paládio(O), bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfina)dicloropaládio

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12/61 (II) e dicloreto de 1,1 '-bis(di-terc-butilfosfino) ferrocene de paládio. Em algumas modalidades, a base é carbonato de potássio ou fosfato de potássio. Em algumas modalidades, o catalisador de paládio é dicloreto de 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferroceno de paládio. Em algumas modalidades, o solvente é dioxano, água ou uma combinação destes. Em algumas modalidades, R1 é p-metoxibenzila. Em algumas modalidades, o composto de fórmula (b) é 3-(((4- metoxibenzil)óxi)metil)-1,5dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol (Intermediário 4). Em algumas modalidades, o composto de fórmula (c) é (±)-6cloro-3-(3-metóxi-3-oxopropil)-7-(3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4 il)-1H-indol-2-carboxilato (Intermediário 5):

Intermediário 5 [0024] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de um composto de fórmula (d):

em que R1 é um grupo protetor ou hidrogênio, compreendendo as etapas de (i) contatar um composto de fórmula (c) com um agente de metilação em um solvente; (ii) tratar o derivado metilado resultante com um reagente de hidrólise de éster e (iii) isolar o composto de fórmula (d). Em algumas modalidades, o composto de fórmula (c) é o Intermediário 5. Em algumas modalidades, o reagente de hidrólise de éster é uma base de hidróxido selecionada de hidróxido de lítio, hidró

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13/61 xido de potássio e hidróxido de sódio. Em algumas modalidades, ο agente de metilação é selecionado de iodeto de metila, dimetilsulfato e dimetilformamida-dimetilacetal (DMF-DMA). Em algumas modalidades, o agente de metilação é dimetilformamida-dimetilacetal. Em algumas modalidades, o solvente é tolueno.

[0025] Em algumas modalidades, R1 é p-metoxibenzila. Em algumas modalidades, o composto de fórmula (c) é (±)-6-cloro-3-(3-metóxi3-oxopropil)-7-(3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4 il)-1H-indol-2-carboxilato (Intermediário 5). Em algumas modalidades, o composto de fórmula (d) é ácido (±)-3-(2-carboxietil)-6-cloro-7-(3(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-1 -metil-1 H-indol2-carboxílico (Intermediário 6):

[0026] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de um composto de fórmula (e):

em que R1 é um grupo protetor ou hidrogênio, compreendendo as etapas de: (i) contatar um composto de fórmula (d) com cloridrato de (1R)-1-(2-nitrofenil)etanamina na presença de uma base e de um solvente; e (ii) isolamento do composto de fórmula (e). Em algumas modalidades, a base é hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, diiso

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14/61 propiletilamina ou trietilamina. Em algumas modalidades, a base é hidróxido de sódio. Em algumas modalidades, o solvente é água, THF, metanol, etanol, isopropanol, n-butanol, metiletilcetona ou uma combinação destes. Em algumas modalidades, o solvente é água, etanol ou uma combinação destes. Em algumas modalidades, R1 é p-metoxibenzila. Em algumas modalidades, o composto de fórmula (d) é ácido (±)-3-(2-carboxietil)-6-cloro-7-(3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-1 -metil-1 H-indol-2-carboxílico (Intermediário 6). Em algumas modalidades, o composto de fórmula (e) é ácido (R_a)-3(2-Carboxietil)-6-cloro-7-(3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1Hpirazol-4-il)-1 -metil-1 H-indol-2-carboxílico -(1 R)-1 -(2-nitrofenil) etanamina (sal 1:1) (Intermediário 7):

Intermediário 7 [0027] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de 6-cloro-7-(3-(hidroximetil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-3-(3-metóxi-3-oxopropil)-1-metil-1H-indol-2-carboxilato de (Ra)-metila (Intermediário 8):

Intermediário 8 compreendendo as etapas de (i) contato de um composto de fórmula (e) com um ácido na presença de um primeiro solvente; (ii) isolamento

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15/61 do componente de ácido livre de um composto de fórmula (e); (iii) tratamento do ácido livre com um agente de metilação ou metanol em urn segundo solvente; (iv) remover o grupo protetor, opcionalmente em um terceiro solvente; e (v) isolar 6-cloro-7-(3-(hidroximetil)-1,5-dimetil-1Hpirazol-4-il)-3-(3-metóxi-3-oxopropil)-1 -metil-1 H-indol-2-carboxilato de (/?_a)-metila (Intermediário 8). Em algumas modalidades, o composto de fórmula (e) é ácido (R_a)-3-(2-carboxietil)-6-cloro-7-(3-(((4-metoxibenzil)óxi) metil)-1,5-d imetil-1 H-pirazol-4-il)-1 -metil-1 H-indol-2-carboxílico -(1/?)-1-(2-nitrofenil)etanamina (sal 1:1) (Intermediário 7). Em algumas modalidades, o primeiro solvente é tetra-hidrofurano, tolueno ou uma combinação destes. Em algumas modalidades, o agente de metilação é DMF-DMA. Em algumas modalidades, o segundo solvente é tolueno. Em algumas modalidades, o terceiro solvente é metanol. Em algumas modalidades, o grupo protetor é removido por cloreto de acetila. Em algumas modalidades, o grupo protetor é removido por cloreto de acetila em metanol. Em algumas modalidades, o grupo protetor é removido por um ácido, por exemplo, ácido clorídrico formado in situ através de reação de cloreto de acetila com metanol.

[0028] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de 6-cloro-7-(3-(hidroximetil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-3-(3-hidroxipropil)-1-metil-1H-indol-2-carboxilato de (/?_a)-metila (Intermediário 9):

Intermediário 9 compreendendo as etapas de (i) contatar 6-cloro-7-(3-(hidroximetil)1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-3-(3-metóxi-3-oxopropil)-1-metil-1 H-indol-2carboxilato de (/?_a)-metila (Intermediário 8) com um agente redutor na presença de um solvente; e (ii) isolar 6-cloro-7-(3-(hidroximetil)-1,5

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16/61 dimetil-1 H-pirazol-4-i l)-3-(3-h id roxi propi I)-1 -metil-1 H-indol-2-carboxilato de (/?a)-metila (Intermediário 9). Em algumas modalidades, o agente redutor é hidreto de di-isobutil-alumínio. Em algumas modalidades, o solvente é THF, hexano ou uma combinação destes.

[0029] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de 5-(clorometil)-1 -metil-1 H-pirazol-3-carboxilato de metila (Intermediário 10):

Intermediário 10 compreendendo as etapas de (i) contato de 1-metil-1 H-pirazol-3,5dicarboxilato de dimetila com um agente redutor na presença de um solvente; (ii) isolamento de 3-(hidroximetil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-carboxilato de metila; (iii) contato de 3- (hidroximetil)-l-metil-1 H-pirazol-5carboxilato de metila com um agente de cloração; e (iv) isolamento de 5-(clorometil)-1 -metil-1 H-pirazol-3-carboxilato de metila (Intermediário 10). Em algumas modalidades, o solvente é uma mistura de metanol e 2-metiltetra-hidrofurano. Em algumas modalidades, o agente redutor é boro-hidreto de sódio ou boro-hidreto de lítio. Em algumas modalidades, o agente redutor é boro-hidreto de sódio. Em algumas modalidades, o solvente é metanol, etanol, água, 2-metiltetra-hidrofurano, dimetilacetamida, DCM, THF, éter ciclopentilmetílico, acetonitrila ou uma mistura destes. Em algumas modalidades, o solvente é uma mistura de metanol e 2-metiltetra-hidrofurano.

[0030] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de acetato de 3-(acetiltio)naftalen-1 -ila (Intermediário 11):

OAc

Intermediário 11

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17/61 [0031] compreendendo as etapas de (i) contatar o 4-hidroxinaftaleno-2-sulfonato de sódio com trifenilfosfina e iodo em um solvente; (ii) isolamento de 3-mercaptonaftalen-1-ol; (Iii) contatar 3mercaptonaftalen-1-ol com um agente de acilação na presença de uma base amina e um catalisador nucleófilo; e (iv) isolar o acetato de 3-(acetiltio)naftalen-1-ila (Intermediário 11). Em algumas modalidades, o solvente é acetonitrila. Em algumas modalidades, o agente de acilação é anidrido acético ou cloreto de acetila Em algumas modalidades, o agente de acilação é o anidrido acético. Em algumas modalidades, a base amina é selecionada de trietilamina, piridina ou diisopropiletilamina. Em algumas modalidades, a base amina é trietilamina. Em algumas modalidades, o catalisador nucleofílico é selecionado de entre 4dimetilaminopiridina, piridina e N-metilimidazol. Em algumas modalidades, o catalisador nucleofílico é 4-dimetilaminopiridina.

[0032] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de 5-(((4-hidroxinaftalen-2-il)tio)metil)-1 -metil-1 H-pirazol-3-carboxilato (Intermediário 12):

Intermediário 12 compreendendo as etapas de (i) contato de acetato de 3-(acetiltio)naftalen-1-ila (Intermediário 11) com 5-(clorometil)-1-metil-1H-pirazol-3-carboxilato de metila (Intermediário 10) na presença de uma base e um solvente; e (ii) isolar 5-(((4-hidroxinaftalen-2-il)tio)metil)-1 metil-1H-pirazol-3-carboxilato (Intermediário 12). Em algumas modalidades, a base é selecionada de carbonato de potássio, hidróxido de lítio, 1,8-diazabicicto[5.4.0]undec-7-eno, hidróxido de sódio, hidróxido

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18/61 de potássio e etóxido de sódio. Em algumas modalidades, a base é carbonato de potássio. Em algumas modalidades, o solvente é selecionado de metanol, etanol, água e suas combinações. Em algumas modalidades, o solvente é metanol.

[0033] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de 3-(((3-(hidroximetil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1 ol (Intermediário 13):

Intermediário 13 [0034] compreendendo as etapas de (i) contatar o 5 -(((4hidroxinaftalen-2-il)tio)metil)-1 -metil-1 H-pirazol-3-carboxilato de metila (Intermediário 12) com um agente redutor em um solvente; e (ii) isolar 3-(((3-(hidroximetil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1 -ol (Intermediário 13). Em algumas modalidades, o agente redutor é hidreto de diisobutilalumínio. Em algumas modalidades, o solvente é tetrahidrofurano, hexanos ou uma combinação destes.

[0035] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de 3-(((3-(clorometil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1-ol (Intermediário 14):

ci

Intermediário 14 compreendendo as etapas de (i) contatar o 3-(((3-(hidroximetil)-1-metil1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1-ol (Intermediário 13) com um agente

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19/61 de cloração; e (ii) isolar 3-(((3-(clorometil)-1-metil-1H-pirazol-5-il)metil) tio) naftalen-1-ol (Intermediário 14). Em algumas modalidades, o solvente é selecionado de THF, diclorometano, dimetilformamida e suas combinações. Em algumas modalidades, o solvente é dimetilformamida. Em algumas modalidades, o agente de cloração é cloreto de metanossulfonila ou cloreto de tionila. Em algumas modalidades, o agente de cloração é cloreto de metanossulfonila. Em algumas modalidades, o etapa (i) compreende ainda cloreto de lítio.

[0036] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de acetato de 3-(((3-(clorometil)-1-metil-1H-pirazol-5-il)metil)tio) naftalen-1-il (Intermediário 15):

ci

Intermediário 15 compreendendo as etapas de (i) contatar o 3-(((3-(clorometil)-1-metil1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1-ol (Intermediário 14) com anidrido acético, opcionalmente uma base amina, e um catalisador nucleofílico em um solvente; e (ii) isolar acetato de 3-(((3-(clorometil)-1-metil-1Hpirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1-il (Intermediário 15). Em algumas modalidades, a base amina é trietilamina. Em algumas modalidades, o catalisador nucleofílico é selecionado de entre 4-dimetilaminopiridina, Nmetilimidazol ou piridina. Em algumas modalidades, o catalisador nucleofílico é 4-dimetilaminopiridina. Em algumas modalidades, o solvente é acetonitrila.

[0037] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de acetato de 3-(((3-((acetiltio)metil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil) tio) naftalen-1-il (Intermediário 16):

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20/61

Intermediário 16 compreendendo as etapas de (i) contatar o acetato de 3-(((3-(clorometil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1-il (Intermediário 15) com tioacetato de potássio em um solvente; e (ii) isolar acetato de 3(((3-((acetiltio)metil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1 -il (Intermediário 16). Em algumas modalidades, o solvente é acetonitrila.

[0038] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese de 17-cloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oxa-2,9-ditia-5,6,12,13,22penta-azaheptaciclo[27.7.1.1⁴’⁷.0¹¹¹⁵.0¹⁶’²¹0²⁰’²⁴O³⁰’³⁵]octatriaconta (37), 4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridecaeno-23-carboxilato de (/?a)-(+)-metila

compreendendo as etapas de: (i) contato de 6-cloro-7-(3-(hidroximetil)1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-3-(3-hidroxipropil)-1-metil-1 H-indol-2-carboxilato de (/?_a)-metila (Intermediário 9) com um agente de sulfonilação na presença de uma base aprótica e um solvente para formar uma primeira solução; (ii) adicionar um sal de iodeto à primeira solução; (iii) isolar 6-cloro-7-[3-(iodometil)-1,5-dimetil-pirazol-4-iI]-1 -metil-3-(3-metilPetição 870190094446, de 20/09/2019, pág. 36/81

21/61 sulfoniloxipropil)indol-2-carboxilato de metila; (iv) contato de acetato de 3-(((3-((acetiltio)metil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1 -il (Intermediário 16) com metóxido de sódio em metanol para formar uma segunda solução; (v) adicionar 6-cloro-7-[3-(iodometil)-1,5-dimetilpirazol-4-iI]-1 -metil-3-(3-metilsulfoniloxipropil)indol-2-carboxilato de metila à solução; e (vi) isolar 17-cloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oxa-2,9ditia-5,6,12,13,22-penta-azaheptaciclo[27.7.1.1⁴⁷,o¹¹·¹⁵Ό¹⁶·²¹ Ό²⁰·²⁴. O³⁰’³⁵]octatriaconta-1 (37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridecaeno-23-carboxilato de (/?_a)-(+)-metila. Em algumas modalidades, a base aprótica é diisopropiletilamina ou N-metilmorfolina. Em algumas modalidades, a base aprótica é diisopropiletilamina. Em algumas modalidades, o agente de sulfonilação é selecionado a partir de anidrido de metanossulfonila, cloreto de metanossulfonila e anidrido p-toluenossulfônico. Em algumas modalidades, o agente de sulfonilação é o anidrido de metanossulfonila. Em algumas modalidades, o solvente é um solvente aprótico. Em algumas modalidades, o solvente aprótico é tetra-hidrofurano. Em algumas modalidades, o sal iodeto é o iodeto de lítio.

[0039] Em algumas modalidades, é divulgado um método de síntese do Composto 1:

N-N

Composto 1 compreendendo as etapas de (i) contatar (/?_a)-(+)-metil 17-cloro5,13,14,22-tetrametil-28-oxa-2,9-ditia-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciclo

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22/61 [27.7.1.1 v.o¹¹’¹⁵.O¹⁶’²¹0²°’²⁴.0³⁰’³⁵]octatriaconta-1 (37),4(38),6,11,14,16,

18.20.23.29.31.33.35- tridecaeno-23-carboxilato com um reagente de hidrólise de éster em um solvente e (ii) isolando ácido (R_a)-(+)-17cloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oxa-2,9-ditia-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciclo [27.7.1.1⁴’⁷O¹¹’¹⁵O¹⁶’²¹O²⁰’²⁴O³⁰’³⁵]octatriaconta-1(37),4(38),6,11,

14.16.18.20.23.29.31.33.35- tridecaeno-23-carboxílico. Em algumas modalidades, o reagente de hidrólise de éster é uma base de hidróxido selecionada de hidróxido de lítio, hidróxido de sódio e hidróxido de potássio. Em algumas modalidades, a base é hidróxido de sódio. Em algumas modalidades, o solvente é selecionado de metanol, etanol, isopropanol, DMSO, água e suas combinações.

[0040] O termo isolado significa qualquer método apropriado para obter um composto desejado a partir da mistura reacional. O termo isolado inclui extração, filtração, secagem, cristalização, evaporação, cromatografia (por exemplo, HPLC, cromatografia em coluna), eliminador de metais e semelhantes. O termo isolado inclui métodos para obter compostos não purificados e purificados a partir de uma mistura reacional. Em algumas modalidades, um composto pode ser isolado a partir de uma mistura reacional por extração e o próximo etapa na reação pode ser realizado mesmo quando o composto não foi purificado ou removido do solvente. Um perito na técnica seria capaz de determinar os meios apropriados para isolar um composto desejado da mistura reacional.

[0041] O termo grupo protetor inclui grupos protetores de hidroxila, por exemplo, benzila, p-metoxibenzila (PMB), tetra-hidropiranila (THP), p-metoxifenila (PMP) e t-butildimetilsilila (TBDMS),

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23/61

perito na técnica seria capaz de identificar grupos protetores de hidroxila apropriados sem experimentação indevida.

[0042] O termo precursor do grupo protetor inclui reagentes que adicionam grupos protetores a uma porção desejada. Em algumas modalidades, o precursor do grupo protetor é um precursor do grupo protetor hidroxila, por exemplo, cloreto de benzila, 4-metoxifenol, bromometilpirazol, di-hidropirano, p-metoxifenol, clorometilpirazol, t-butildimetilclorossilano, t-butildimetilclorossilano e 1-(clorometil)-4-metoxibenzeno. Um perito na técnica seria prontamente capaz de identificar o precursor do grupo protetor apropriado sem experimentação indevida.

[0043] O termo agente redutor inclui hidreto de alumínio e lítio, boro-hidreto de sódio, hidreto de diisobutilalumínio e similares.

[0044] O termo solvente inclui solventes não polares, solventes apróticos e solventes próticos. O termo solvente não polar inclui pentano, ciclopentano, hexano, heptano, ciclo-hexano, benzeno, tolueno, clorofórmio, éter dietílico, éter ciclopentilmetílico, éter terc-butilmetílico, éter terc-amilmetílico, diclorometano e metiletilcetona. O termo solvente aprótico inclui tetra-hidrofurano, acetato de etila, acetona, dimetilformamida, acetonitrila, 2-metiltetra-hidrofurano, 1,4-dioxano, dimetilacetamida e dimetilsulfóxido. O termo solvente prótico inclui nbutanol, álcool isopropílico, n-propanol, etanol, metanol, ácido acético e água. Em algumas modalidades, o solvente pode incluir combina

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24/61 ções de qualquer um dos solventes anteriores. Um perito na técnica seria rotineiramente capaz de determinar o solvente apropriado ou combinações de solvente para uma reação particular.

[0045] O termo agente de bromação inclui 1,3-dibromo-5,5-dimetil-hidantoína (DBDMH) e N-bromossuccinimida (NBS).

[0046] O termo agente de diazotização inclui nitrito de sódio (NaNO2), nitrito de cálcio (Ca(NO2)2) e nitrito de potássio (KNO2).

[0047] O termo agente de metalização inclui n-butil-lítio (n-BuLi).

[0048] O termo agente de hidrólise de éster inclui hidróxido de sódio (NaOH), hidróxido de potássio (KOH), hidróxido de lítio (LiOH), cloreto de sódio (NaCI) e iodeto de lítio (Lil).

[0049] O termo base inclui acetato de potássio (KOAc), carbonato de potássio (K2CO3), carbonato de sódio (Na2COs), fosfato de potássio (K3PO4), hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, bis(trimetilsilil)amida de sódio (NaHMDS), bis(trimetilsilil)amida de lítio (LiHMDS), hidreto de sódio (NaH), bissulfato de t-butil amônio, n-butil-lítio, t-butil-lítio (t-BuLi), hidróxido de magnésio, zinco, lítio, diisopropilamida de lítio (LDA), amida de sódio (NaNH2), t-butóxido de potássio, piridina, trietilamina (TEA), diisopropiletilamina (DIEA), 1,8-diazabiciclo [5.4.0] undec-7-eno (DBU), metóxido de sódio (NaOMe) e etóxido de sódio (NaOEt). O termo base também inclui catalisadores básicos de transferência de fase, por exemplo, bissulfato de tetrabutilamônio (BU4 HSO4), cloreto de benziltrimetilamônio, polietilenoglicol e seus derivados, 18-coroa-6 e outros éteres de coroa.

[0050] O termo ácido inclui ácido clorídrico (HCI), ácido sulfúrico (H2SO4), ácido p-toluenossulfônico (p-TsOH), ácido metanossulfônico e ácido acético. Em algumas modalidades, 0 ácido é concentrado.

[0051] O termo álcool inclui metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol e álcool t-butílico.

[0052] O termo agente redutor inclui hidreto de alumínio e lítio

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25/61 (LAH), complexo borano-dimetilsulfureto, complexo borano-tetrahidrofurano, hidreto de diisobutilaluminio (DIBAL), boro-hidreto de litio (L1BH4), hidreto de bis(2-metoxietóxi)alumínio de sódio (Red-AI® ) e boro-hidreto de sódio (NaBhk).

[0053] O termo agente de metilação inclui iodeto de metila, sulfato de dimetila e dimetilformamida-dimetilacetal (DMF-DMA).

[0054] O termo agente de acilação inclui anidrido acético e cloreto de acetila.

[0055] O termo catalisador nucleofílico inclui dimetilaminopiridina (DMAP), piridina e N-metilimidazole.

[0056] O termo base amina inclui trietilamina, piridina e diisopropiletilamina.

[0057] O termo agente de sulfonilação inclui anidrido tósico, cloreto de metanossulfonila, cloreto de p-toluenossulfonila e anidrido de metanossulfonila.

[0058] O termo sal de iodeto inclui iodeto de lítio, iodeto de sódio e iodeto de potássio.

[0059] Em algumas modalidades, 0 termo catalisador de paládio inclui dicloreto de 1,T-bis(di-terc-butilfosfino)ferroceno-paládio, [1,1bis(di-terc-butilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(ll) (Pd 188, PdCb(dtbpf)), (/?)-(-)-4,12-bis(difenilfosfino)-[2.2]-paraciclopano (R-Phanephos), (S)-(-)4,12-bis(difenilfosfino)-[2.2]-paraciclofano (S-Phanephos), metanossulfonato de (2-Diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropil-1 ,T-bifenil)[2-(2'-amino1,1’-bifenil)]paládio(ll) (XPhos-G3-Paladaciclo, XPhos-Pd-G3), metanossulfonato de (2-Diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropóxi-1 ,T-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paládio(ll) (RuPhos-G3-Paladaciclo, RuPhos-Pd-G3), metanossulfonato de (2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropóxi-1,1 'bifenil)[2-(2'-amino-1,1 '-bifenil)]paládio(l I) (RuPhos-G3-Paladaciclo, RuPhos-Pd-G3), metanossulfonato de [(2-Di-ciclo-hexilfosfino-3,6dimetóxi-2',4',6'-triisopropil-1,T-bifenil)-2-(2'-amino-1 ,T-bifenil)]palá

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26/61 dio(ll) (BrettPhos G3), tBuXPhos-Pd-G3, metanossulfonato de [(2-Diterc-butilfosfino-2',4',6'-triisopropil-1,1 '-bifenil)-2-(2'-amino-1,1 '-bifenil)] paládio(ll) (tBu XPhos G3), tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) e bis(diterc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfina)dicloropaládio(ll) [0060] Em algumas modalidades, o Composto 1 pode ser sintetizado como estabelecido nos Esquemas l-VII:

Esquema I

htemsiáiârw 1 2

A = i) NaNO2, HCI aq; ii) 2-oxociclopentano-1-carboxilato de metila,

KOAc aq; iii) H2SO4, MeOH

B = H2SO4, MeOH

Esquema II

C = i) L1AIH4, THF; ii) NBS iii) PMBCI, KOH, Bu₄NHSO₄, THF

D = i) n-BuLi, THF; ii) i-PrOBPin

Esquema III

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27/61

fetermedlário g

E = Pd(di-t-BPF) Cl₂, K2CO3, 1,4-dioxano, H₂O

F = i) DMF-DMA, PhMe; ii) NaOH aq, MeOH

G = cloridrato de (1R)-1-(2-nitrofenil)etanamina, NaOH, EtOH, H2O

H = i) aq HCI, PhMe, THF; ii) DMF-DMA, PhMe; iii) AcCI, MeOH

I = iBu₂AIH, THF

Esquema IV

Intermediário 1G

J = i) NaBH₄, MeOH, MeTHF

Esquema V o

Intermediário 11

K = i) PPh₃, l₂, MeCN; ii) Ac2O, Et₃N, DMAP

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28/61

|fíWfs§diàfí& 15 iíitenswdiárôo iç

L = K2CO3, MeOH

M = i-Bu₂AIH, THF

N = MeSO₂CI, LiCI, DMF

O = Ac₂O, DMAP, MeCN

P = KSAc, MeCN

Esquema VII

ÍRtefwteifistto s tnterme&ârid 16

írrtemseâíárfe 17

Ceréissosío 1

Q = i) intermediário 9, (MeSO2)2O, i-Pr2NEt; ii) Lil, MeCN; iii) em recipiPetição 870190094446, de 20/09/2019, pág. 44/81

29/61 ente separado, Intermediário 16, NaOMe, MeOH; iv) solução de iii) adicionado ao composto de ii) em MeCN; v) adição em DMSO quente R = NaOH, DMSO, EtOH, H₂O Exemplos [0061] Aspectos da presente revelação podem ser adicionalmente definidos por referência aos seguintes exemplos não limitadores, os quais descrevem em detalhe a preparação de certos compostos e intermediários da presente revelação e métodos para o uso dos compostos da presente revelação. Será aparente para os peritos na técnica que muitas modificações, tanto nos materiais como nos métodos, podem ser praticadas sem abandonar o escopo da presente revelação.

[0062] A menos que afirmado em contrário:

todas as sínteses foram realizadas à temperatura ambiente, isto é, na faixa de 17 a 25°C, e sob uma atmosfera de um gás inerte, tal como nitrogênio, salvo indicação em contrário;

as evaporações foram realizadas por evaporação rotativa ou utilizando equipamento Genevac ou evaporador Biotage v10 sob pressão reduzida;

purificações por cromatografia em gel de silica foram realizadas em um sistema automatizado Novasep Hipersep® ou Teledyne Isco CombiFlash® Rf ou Teledyne Isco CombiFlash® Companion® embalado usando silica Kromasil® 60-10-SIL (partículas de 10 pm, 60 A de tamanho de poro) ou usando as Colunas de Silica RediSep Rf Gold™ pré-embaladas (20-40 pm, partículas esféricas), Cartuchos GraceResolv™ (silica Davisil®) ou cartuchos Silicycle (40 - 63 pm).

cromatografia analítica quiral foi realizada em uma coluna Waters X5 SFC-MS com detecção por UV ou uma Waters UPC2 SFCMS com UV e detecção por ELSD ou um sistema de HPLC Agilent 1100 com detecção por UV.

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30/61 os rendimentos, quando presentes, não são necessariamente os máximos alcançáveis;

em geral, as estruturas dos compostos isolados foram confirmadas por espectroscopia de RMN; os valores dos desvios químicos de RMN foram medidos na escala delta, usando o pico residual do solvente como padrão interno [os espectros de ressonância magnética de prótons foram determinados usando utilizando um espectrômetro Bruker Ultrashield Avance III de 500 MHz equipado com uma criosonda QCI, espectrômetro Bruker Ultrashield Avance III de 400 MHz equipado com uma sonda BBFO, um instrumento Bruker Avance 500 (500 MHz), Bruker Avance 400 (400 MHz), Bruker Avance 300 (300 MHz) ou Bruker DRX (300 MHz)]; as medições foram recolhidas a 27°C a menos que especificado em contrário; foram usadas as seguintes abreviaturas: s, singleto; d, dupleto; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto; dd, dupleto de dupletos; ddd, dupleto de dupleto de dupletos; bs, sinal largo.

em geral, os compostos isolados foram também caracterizados por espectroscopia de massa após cromatografia líquida, usando um UPLC Waters equipado com um espectrômetro de massa Waters SQ ou QDa (Temp, da coluna 30 °C ou 40 °C, UV = 220-300 nm ou 210-400 nm ou 190-400 nm, Espec. de Massa = ESI com troca positivo/negativo) a uma taxa de fluxo de 1 mL/min usando um sistema solvente de 97% de A + 3% de B até 3% de A + 97% de B ao longo de 1,50 min (tempo de processamento total com equilibração de novo para as condições de partida, etc., 1,70 min), em que A = ácido fórmico a 0,1% ou ácido trifluoroacético a 0,05% em água (para manipulação acídica) ou hidróxido de amônio a 0,1% em água (para manipulação básica) e B = acetonitrila. Para análise acídica a coluna utilizada foi uma Waters Acquity HSS T3 (1,8 pm, 2,1 x 50 mm ou 2,1 x 30 mm), ou uma Waters Acquity BEH C18 (1,7 pm, 2,1 x 50 mm ou 2,1 x 30

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31/61 mm), para análise pH-médio, se utilizou uma coluna Waters Acquity BEH C18 (1,7 pm, 2,1 x 50 mm) e para análise básica se utilizou uma coluna Waters Acquity BEH C18 (1,7 pm, 2,1 x 50 mm ou 2,1 x 30 mm). Alternativamente, foi utilizado um gradiente de solvente de 2 a 98% B ao longo de 1,5 min (tempo total de execução com equilíbrio de volta às condições de partida 2 min), onde A = ácido fórmico a 0,1% em água e B =ácido fórmico a 0,1% em acetonitrila acídica) ou A = 0,1% de hidróxido de amônio em água e B = acetonitrila (para manipulação básica). Alternativamente, foi utilizado um gradiente de solvente de 92% de A + 5% de B + 3% de C a 7% de A + 90% de B + 3% de C ou 90% de A + 5% de B + 5% de D a 5% de A + 90% de B + 5% de D ao longo de 3,6 min (tempo de ciclo total com equilibração de volta às condições iniciais, etc., 5,1 min), onde A = água, B = acetonitrila, C = TFA a 1% em água e D = 250 mM acetato de amônio em água; o íon molecular relatado corresponde a [M+H]+, a menos que especificado de outra forma; para moléculas com múltiplos padrões isotópicos (Br, Cl, etc.), o valor relatado é aquele obtido com a maior intensidade, a menos que especificado de outra forma.

em geral, a pureza em % em peso dos compostos foi determinada contra um padrão de referência interno adequado (por exemplo, 1,2,4,5-tetracloro-3-nitrobenzeno, ácido maleico ou benzoato de benzila) por RMN de próton sob condições quantitativas.

reações de larga escala foram realizadas em reatores equipados com camisas de transferência de calor e servidos com equipamento auxiliar apropriado; e foram usadas as seguintes abreviaturas:

MeCN acetonitrila aq. aquoso conc. concentrado

DCM diclorometano

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32/61

di-t-BPF	1,1 '-bis(di-terc-butilfosfino)ferroceno
DIBAH	hidreto de diisobutilalumínio
DMAP	4-dimetilaminopiridina
DMF	N,N-dimetilformamida
DMF-DMA	Ν,Ν-dimetilformamida dimetilacetal
DMSO	dimetilsulfóxido
e.e.	excesso enantiomérico
ES	modo de eletropulverização
HPLC	cromatografia líquida de alto desempenho
IPA	álcool isopropílico
LAH	hidreto de lítio e alumínio
MS	espetrometria de massa
MTBE	éter de metil terc-butila
NBS	N-bromossuccinimida
RMN	ressonância magnética nuclear
PMB	4-metoxibenzila
TFA	ácido trifluoroacético
THF	tetra-hidrofurano
UPLC	cromatografia líquida de ultradesempenho
% em peso	percentagem em peso

Intermediário 1: (2-(2-(2-bromo-3-clorofenil)hidrazono)hexanodioato de E/Z)-dimetila

[0063] Uma mistura de 2-bromo-3-cloroanilina (2,00 kg, 9,69 mol), ácido clorídrico (36% em peso, 4,85 L, 58,1 mol) e água (5 L) foi agitada durante 1 h. A solução resultante foi arrefecida a 0°C, depois foi gradualmente adicionada uma solução de NaNÜ2 (702 g, 10,2 mol) em água (2,4 L) ao longo de 1 h a 0-5°C. Após agitação durante 1 h, adi

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33/61 cionou-se gradualmente 2-oxociclopentano-1-carboxilato de metila (1,38 kg, 9,69 mol) a 0-5°C. Em seguida, uma solução de KOAc (13,3 kg, 136 mol) em água (20 L) foi adicionada gradualmente. Deixou-se a solução resultante reagir durante mais 45 min a 0-5°C. A solução foi então extraída três vezes com DCM (12 L por extração). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 L) e, em seguida, carregados para um outro reator contendo uma solução de ácido sulfúrico conc. (4,75 kg, 48,5 mol) em MeOH (3,1 kg). A solução resultante foi deixada reagir durante 3 h a 10-20°C. A solução foi concentrada para cerca de 8 L e depois completaram-se dois ciclos de adição de MeOH (18 L por ciclo) e realizou a destilação do solvente (18 L por ciclo) sob pressão reduzida. A suspensão resultante foi arrefecida a 0-10°C, agitada durante 1 h e, em seguida, filtrada. O sólido foi lavado com MeOH (2 x 2 L) e depois secou-se em um forno sob pressão reduzida para dar (2-(2-(2-bromo-3-clorofenil)hidrazono) hexanodioato de E/Z)-dimetila, (Intermediário 1, 3,3 kg, 94% em peso, 82%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 391. ¹H RMN (500 MHz, CLOROFÓRMIOd, 27°C) δ 1,98 (m, 2H), 2,41 (t, 2H), 2,59 (t, 2H), 3,66 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 7,05 (dd, 1H), 7,17-7,23 (m, 1H), 7,49 (dd, 1H), 12,48 (s I, 1H).

Intermediário 2: 7-Bromo-6-cloro-3-(3-metóxi-3-oxopropil)-1 H-indol-2carboxilato de metila cr [0064] Uma solução de (2-(2-(2-bromo-3-clorofenil)hidrazono) hexanodioato de E/Z)-dimetila (Intermediário 1, 3,3 kg, 93,7% em peso, 7,9 mol) em ácido sulfúrico conc. (8,4 kg, 84 mol) e MeOH (26 L) foi agitada durante 72 h a 80°C. A mistura reacional foi arrefecida a 0 °C. Os sólidos resultantes foram recolhidos por filtração, lavados com

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MeOH (2 L) e depois secos em uma estufa de vácuo a 40 °C para dar

2,5 kg de sólido. O sólido foi combinado com outros 3 lotes preparados da mesma maneira aproximadamente na mesma escala, para dar um total de 11,9 kg de produto não purificado, derivado de 13,6 kg (93,7% em peso, 32,5 mol) do material de partida.

[0065] Metade do produto não purificado foi adicionado a MeOH em agitação (36 L). A mistura foi aquecida a 65°C e a solução resultante foi mantida a 65°C durante 1 h antes de ser arrefecida a 0°C. A suspensão resultante foi agitada a 0°C durante 1 hora e depois filtrada. O bolo de filtração foi lavado com MeOH (3 L) e seco em um forno de vácuo a 40°C. Isto foi repetido com o material restante e os materiais foram combinados para dar 9,7 kg de sólido. 3,7 kg deste foi misturado com carvão (0,74 kg), DCM (3,4 L) e MeOH (34 L) e a lama foi aquecida a 65-70°C durante 1 h. A suspensão foi arrefecida a 55°C e filtrada. O bolo de filtração foi lavado com DCM (10 L) e, em seguida, os filtrados combinados foram concentrados a cerca de 8 L por destilação do solvente sob vácuo. Dois ciclos de adição de MeOH (10 L) e destilação do solvente (10 L) sob vácuo foram completados e depois a suspensão resultante foi combinada com outras suspensões preparadas de forma semelhante a partir do sólido remanescente. A suspensão combinada foi arrefecida a 0 °C e agitada durante 1 h antes de ser filtrada. O bolo de filtração foi lavado com MeOH (3 L) e seco em um forno de vácuo a 40 °C para produzir 7-bromo-6-cloro-3-(3-metóxi-3-oxopropil)1 H-indol-2-carboxilato de metila (Intermediário 2, 9,4 kg, 97,7% em peso, 76%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 374. ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe, 27°C), δ 2,60 (t, 2H), 3,26 (t, 2H), 3,53 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 7,28 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 11,62 (s I, 1H).

Intermediário 3: 4-Bromo-3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1Hpirazol

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Br

[0066] LAH (1,05 M em THF, 15,0 kg, 17,4 mol) foi gradualmente adicionado a uma solução agitada de 1,5-dimetil-1H-pirazol-3-carboxilato de etila (5,33 kg, 31,7 mol) em THF (10,7 L) durante 1,5 h a 423°C, seguido de THF (1,0 L). Após 30 min, a solução foi arrefecida a 15°C, depois, enquanto continuava a arrefecer, foi gradualmente adicionada uma solução de água (0,66 L, 37 mol) em THF (1,9 L) ao longo de 20 min. Adicionou-se NaOH aq. (15% em peso, 0,66 L, 2,8 mol) ao longo de alguns minutos, seguido de água (2,0 L). A suspensão resultante foi agitada durante 20 minutos a 4-11°C e depois filtrou-se sob sucção. Os sólidos recolhidos foram lavados quatro vezes com THF (10,7 L por lavagem) para dar (1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)metanol na forma de uma solução nos filtrados recolhidos.

[0067] O reator foi lavado com HCI a 1 M, água e THF antes de carregar os filtrados de novo. Carregaram-se três porções de NBS (1,82 kg por porção, 99,4% em peso, 30,6 mol no total), agitando durante 7-8 min a 19-27°C entre porções e depois durante 45 min, depois a 21-28°C. Uma solução preparada a partir de Na2SO₃ (0,81 kg, 99% em peso, 6,4 mol), NaOH (50% em peso em água, 4,6 kg, 57 mol) e água (16 L) foi então adicionada e a mistura resultante foi agitada durante 10 min a 25 -26°C. As camadas foram separadas e a camada inferior foi lavada com THF (16 L). As camadas superiores foram combinadas e evaporadas até à secura para dar (4-bromo-l, 5-dimetil-IHpirazol-3-il)metanol como um sólido.

[0068] Este (4-bromo-1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)metanol não purificado foi redissolvido em THF (18,8 L) e aquecido com agitação a 50°C, depois bissulfato de tetrabutilamônio (0,32 kg, 0,95 mol), 1(clorometil)-4-metoxibenzeno (5,4 L, 97,6% em peso, 40 mol) e uma lavagem de linha THF (2,8 L) foram adicionados. Adicionou-se gradu

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36/61 almente KOH (45% em peso, 13,7 L, 159 mol) ao longo de 45 min para a mistura vigorosamente agitada a 47-57°C, antes de continuar a agitar durante 4 h a 55-50 °C. A mistura foi então arrefecida a 20°C e mantida com agitação durante 63 horas. A mistura foi reaquecida a 50°C, foi adicionada água (18,7 L) e a mistura foi agitada durante 10 min. A camada inferior foi removida e a solução remanescente no reator foi arrefecida a 20°C. Adicionou-se 4-bromo-3-(((4-metoxibenzil) óxi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol (0,01 kg, 0,03 mol) como semente de cristalização seguido de heptano (32 L), gradualmente ao longo de 45 min, durante a qual a cristalização começou. A suspensão foi mantida com agitação durante 30 min a 20°C antes de carregar gradualmente mais heptano (22 L) ao longo de 45 min e arrefecimento a 0°C. Após 17 h, mais heptano (11 L) foi adicionado. Após mais 1 h a 0°C, a suspensão foi filtrada sob sucção. O bolo de filtração foi lavado com uma mistura arrefecida (0°C) de heptano (17 L) e THF (4,3 L) e depois seca em um forno de vácuo a 40°C para dar 4-bromo-3-(((4-metoxibenzil) óxi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol (Intermediário 3, 8,78 kg, 96% em peso, 82%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 325. ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe, 27°C) δ 2,22 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 4,32 (s, 2H), 4,39 (s, 2H), 6,87 - 6,93 (m, 2H), 7,22 - 7,27 (m, 2H).

Intermediário 4: 3-(((4-Metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 H-pirazol

O 0

B

PMBO \\ /

N-N [0069] Butil-lítio (15% em peso em hexano, 7,27 kg, 17,3 mol) foi gradualmente adicionado a uma suspensão agitada de 4-bromo-3-(((4metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol (Intermediário 3, 5,27 kg, 96% em peso, 15,6 mol) em THF (43 L) a -73°C a -66°C durante

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1,5 h. A solução resultante foi agitada por 1,7 h a -77°C a -66°C, em seguida, 2-isopropóxi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (3,4 L, 16 mol), seguido por uma lavagem de linha com THF (3,0 L), foi adicionado ao longo de 15 min. A solução foi agitada por 1,5 h a -77°C a -63°C, em seguida, uma solução de ácido acético (0,89 L, 16 mol) em tolueno (25,3 L) foi gradualmente adicionada ao longo de 15 min a -77°C a 58°C. A mistura foi então aquecida a 20°C antes do aquecimento e destilação do solvente (48 L) a 67-82°C (pressão atmosférica). A mistura foi arrefecida para 65°C, foi adicionada água (25,5 L) e a mistura foi agitada durante 10 min. A camada inferior foi removida e depois mais solvente (25,4 L) foi removido por destilação a 72-119°C (pressão atmosférica; temperatura final do vapor 108°C). A solução resultante foi arrefecida a 40°C e diluída com heptano (50,6 L) ao longo de 10 min, tempo durante o qual a mistura foi arrefecida a 21°C e iniciou-se a cristalização espontânea. 3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-4(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol ( 29 g) foi então adicionado como semente. A suspensão foi agitada a aproximadamente 21°C durante 0,6 h, arrefecida até aproximadamente -5°C durante

1,5 h, depois mantida durante a noite (18 h) a essa temperatura. A suspensão foi filtrada sob sucção e depois o bolo de filtração foi lavado com heptano frio (~ 0^o ) antes da secagem em um forno a vácuo a 40°C para dar 3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (Intermediário 4, 4,50 kg, 99% em peso, 77%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 373. ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe, 27°C) δ 1,23 (s, 12H), 2,34 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 4,40 (s, 2H), 4,42 (s, 2H), 6,85 - 6,91 (m, 2H), 7,20 - 7,25 (m, 2H).

Intermediário 5: 6-Cloro-3-(3-metóxi-3-oxopropil)-7-(3-(((4-metoxibenzil) óxi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-1H-indol-2-carboxilato de (±)metila

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[0070] 3-(((4-Metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (Intermediário 4, 3,30 kg, 99% em peso, 8,78 mol), 7-bromo-6-cloro-3-(3-metóxi-3-oxopropil)-1Hindol-2-carboxilato de metila (Intermediário 2, 3,20 kg, 97,7 % em peso, 8,35 mol), K2CO3 (1,60 kg, 11,6 mol) e dicloreto de 1,1'-bis(di-tercbutilfosfino)ferroceno-paládio (0,132 kg, 0,203 mol) foram carregados em um reator de 100 L sob nitrogênio. O espaço de topo do reator foi então evacuado e novamente cheio com nitrogênio três vezes. 1,4Dioxano (26,3 L) e água (3,3 L) foram aspergidos com nitrogênio sob pressão reduzida durante 5-10 min, antes de serem adicionados sequencialmente e a mistura resultante foi aquecida a 80°C com agitação durante 5 h. A mistura reacional foi arrefecida para 20°C e mantida durante a noite (16 h) antes de se diluir com MTBE (33 L) e água (33 L). Foi adicionada /V-acetilcisteína (0,165 kg, 1,01 mol) e a mistura foi agitada durante 15 min. A camada inferior, uma vez assentada, foi removida. A camada superior foi então lavada sequencialmente com ácido clorídrico (37% em peso, 2,7 L, 33 mol) em água (30 L) e depois água (32 L) para dar uma solução de MTBE de 6-cloro-3-(3-metóxi-3oxopropil)-7-(3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)1 H-indol-2-carboxilato de (±)-metila (Intermediário 5, 22,9 kg, 19,1% em peso, 97%).

Intermediário 6: Ácido (±)-3-(2-carboxietil)-6-cloro-7-(3-(((4-metoxibenzil) óxi)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-1-metil-1 H-indol-2-carboxílico

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[0071] Uma solução de MTBE de 6-cloro-3-(3-metóxi-3-oxopropil)7-(3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-d imetil-1 H-pirazol-4-il)-1 H-indol-2carboxilato de (±)-metila (Intermediário 5, 22,94 kg, 19,1% em peso, 8,12 mol) foi agitada com um sequestrante de paládio à base de silica funcionalizado com mercaptopropila (Quadrasil™ MP, 1,1 kg) e toluene (44 L) a 20 °C durante 1 h. A suspensão foi filtrada e os sólidos residuais foram lavados com tolueno (13 L). Os filtrados combinados foram concentrados por destilação do solvente (44 L) a 75-107°C. DMFDMA (5,5 L, 41 mol) foi então adicionado a 91°C. A solução foi aquecida a refluxo, mantida durante 22 h a aproximadamente 108°C, durante a qual quatro porções de solvente (2, 4,5, 4,5 e 4,4 L) foram destiladas (imediatamente após atingir o refluxo, depois de 2,0, 3,4 e 4,8 h) e depois arrefecidas a 55°C. Uma solução de NaCI (2,2 kg) em água (20 I) foi carregada, depois a mistura bifásica resultante foi removida do vaso e filtrada de novo através de um filtro de 5 pm em linha. Agitou-se a mistura peneirada a 50-53°C durante 10 min e depois, uma vez assentada, removeu-se a camada inferior. MeOH (22 L) e uma solução de NaOH aq. (3,3 kg, 50% em peso, 41 mol) em água (18 L) foram adicionados e agitou-se a mistura bifásica resultante a 55 °C durante 3 h. Após assentamento, as camadas foram removidas para recipientes separados. A camada inferior (contendo o produto) foi então devolvida ao reator e agitada a 55°C. A solução de ácido acético (4,6 kg, 77 mol) em água (4,4 L) foi então gradualmente adicionada ao longo de 25 min, seguido por uma semente de cristalização de ácido 3-(2-car

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40/61 boxietil)-6-cloro-7-(3-(((4-metoxibenzil))óxi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-

4-il)-1-metil-1H-indol-2-carboxílico (0,02 kg, 0,04 mol). A mistura foi mantida a 49-56°C durante 2 h, arrefecida a 20°C durante 2 h e depois mantida a 20°C durante 13 h. A suspensão resultante foi filtrada sob sucção. Utilizou-se água (11 L) para lavar o reator e o bolo de filtração, que foi então parcialmente seco no filtro continuando a sucção durante 6 h à temperatura ambiente e completamente seco em um forno de vácuo a 40°C para dar ácido (±)-3-(2-carboxietil)-6-cloro-7-(3-(((4metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-1 -metil-1 H-indol-2carboxílico (Intermediário 6, 3,78 kg, 99,0% em peso, 86%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 526. ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe, 27°C) δ 2,01 (s, 3H), 2,50 - 2,57 (m, 2H), 3,18 - 3,29 (m, 2H), 3,40 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 4,08 (d, 1H), 4,14 (d, 1H), 4,19 (d, 1H), 4,21 (d, 1H), 6,64 - 6,69 (m, 2H), 6,69-6,74 (m, 2H), 7,25 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 12,71 (s I, 1H).

Intermediário 7: Ácido (R_a)-3-(2-carboxietil)-6-cloro-7-(3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-1 -metil-1 H-indol-2-carboxílico - (1R)-1-(2-nitrofenil)etanamina (sal 1:1)

PMBO

[0072] NaOH (50% em peso em água, 0,95 L, 18 mol), seguido de uma lavagem com etanol (1,8 L), foi adicionado a uma suspensão agitada de ácido (±)-3-(2-carboxietil)-6-cloro-7-(3-(((4-metoxibenzil)óxi) meti I)-1,5-d imeti I-1H-pirazol-4-i I)-1 -metil-1 H-indol-2-carboxílico (Intermediário 6, 9,38 kg, 97,5 (% em peso, 17,4 mol) e cloridrato de (1/?)1-(2-nitrofenil)etanamina (2,48 kg, 91% em peso, 11,1 mol) em água

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41/61 (7,4 kg) e etanol (64 L) a 20 °C. Enquanto, aquecendo a solução resultante a 78°C, iniciou-se a cristalização espontânea do produto (a ou abaixo de 41°C). Após aquecimento a 78°C, completaram-se três ciclos de arrefecimento da suspensão para 63°C durante 1,3 h, aquecimento de volta para 78°C durante 0,6 h e manutenção durante 10 min. A suspensão foi então arrefecida a 63°C durante 1,2 h, depois a 20°C durante 1,6 h, antes de se manter a 20°C durante a noite e depois filtrar sob sucção. Utilizou-se etanol (18 L) para lavar o reator e o bolo de filtração. Uma vez bem desumedecido, o bolo de filtração foi devolvido ao reator. (Este sólido tem tipicamente aproximadamente 92% e.e. do di-ácido desejado). Água (7,3 L) e etanol (66 L) foram carregados e o conteúdo do reator foi aquecido com agitação a 78°C. A suspensão resultante foi arrefecida a 63°C durante 1,3 h, depois a 20°C durante 1,6 h, antes de se manter a 20°C durante a noite e depois filtrar sob sucção. Utilizou-se etanol (18 L) para lavar o reator e o bolo de filtração. O bolo de filtração foi seco em um forno de vácuo a 40°C para dar ácido (R_a)-3-(2-carboxietil)-6-cloro-7-(3-(((4metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-1 -metil-1 H-indol-2carboxílico - (1R)-1-(2-nitrofenil)etanamina (sal 1:1) (Intermediário 7, 5,23 kg, 97,5% em peso, 99,0% e.e., 7,36 mol) com rendimento de 42,3%; m/z (ES+), [M+H]⁺ = 526 (ácido), 167 (amina). ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe, 27°C) δ 1,49 (d, 3H), 2,00 (s, 3H), 2,61 (t, 2H), 3,10 3,22 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 4,11 (d, 1H), 4,14 (d, 1H), 4,17 (d, 1H), 4,22 (d, 1H), 4,66 (q, 1H), 6,67 - 6,72 (m, 2H), 6,75 - 6,80 (m, 2H), 7,18 (d, 1H), 7,54 - 7,60 (m, 1H), 7,63 (d, 1H), 7,76 - 7,82 (m, 1H), 7,90-7,94 (m, 1H), 7,93-7,97 (m, 1H), 9,16 (s I, 3H).

[0073] Detalhes do método HPLC para análise da pureza quiral: coluna = Chiralpak AD-H (4,6 x 250 mm, 5 pm); temperatura = 25 °C; fase móvel = 70: 30 hexano: etanol em volume contendo TFA a 0,2%, fluindo a 1,0 mL/min; detecção por UV a 254 nm; volume inj. = 10 pl_

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42/61 (isto pode ser ajustado para atingir um limite adequado de detecção); tempos de retenção de 4,8 e 13,7 min para os enantiômeros R_a e S_a, respectivamente.

Intermediário 8: 6-Cloro-7-(3-(hidroximetil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)3-(3-metóxi-3-oxopropil)-1-metil-1 H-indol-2-carboxilato de (R_a)-metila

\ [0074] Foi adicionado ácido clorídrico (37% em peso, 0,77 L, 9,2 mol) a uma suspensão com agitação de(R_a)-3-(2-carboxietil)-6-cloro-7(3-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-1 -metil-1 H-indol-2-carboxílico - (1R)-1-(2-nitrofenil)etanamina (sal 1:1) (Intermediário 7, 5,23 kg, 97,5% em peso, 7,36 mol) em THF (20,5 L) e água (20,5 L) a 45°C. Após 5 min, foi adicionado tolueno (41 L) e a mistura foi agitada durante 10 min. A camada inferior foi removida e a camada superior foi diluída com tolueno (20,5 L) e concentrada por destilação do solvente (60 L) sob pressão reduzida (590 mbar) a 48-92 °C. Foi adicionado DMF-DMA (3,45 L, 25,8 mol) à mistura resultante a 90 °C, originando uma solução que foi aquecida a refluxo, mantida a refluxo (98 °C) durante 8 h, depois arrefecida e mantida a 49°C durante 16 h. Foi adicionado DMF-DMA (1,0 L, 7,5 mol) e a mistura foi sujeita a refluxo a 100 °C durante mais 3,6 h antes de arrefecer para 50 °C. Foi adicionada água (12,7 L) e a mistura foi agitada durante 15 min. A camada inferior foi removida. MeOH (20 L) foi adicionado à camada superior, seguido por uma adição gradual de 10 min de cloreto de acetila (2,15 L, 29,9 mol) à solução agitada. A solução foi aquecida a 60°C durante 21 h e depois transferida para recipientes. Tolueno (10 L) e

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K2CO3 (2,56 kg, 18,4 mol) em água (20,5 L) foram carregados no reator vazio e a mistura foi aquecida a 55 °C. A solução de reação completada foi então gradualmente adicionada de volta ao reator ao longo de 20 min, seguida por uma lavagem com tolueno (10 L). A agitação foi parada após mais 10 min a 55°C e, uma vez estabilizada, a camada inferior foi removida. A camada superior foi concentrada por destilação do solvente (21 L) sob pressão reduzida (540 mbar) a 55-93°C. A solução foi diluída com heptano (10 L) a 50°C e depois semeada com 6cloro-7-(3-(hidroximetil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metóxi-3-oxopropil)-1-metil-1H-indol-2-carboxilato de (R_a)-metila (16 g, 0,037 mol). Depois de deixar a cristalização estabelecer durante 1 h a 50°C, adicionou-se gradualmente mais heptano (20 L) ao longo de 1 h. A suspensão foi então arrefecida a 20°C durante 2 h e agitada durante 65 h antes de ser filtrada sob sucção. O bolo de filtração foi lavado com heptano (10 L) e depois seco em um forno de vácuo a 40 °C para dar 6cloro-7-(3-(hidroximetil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metóxi-3-oxopropil)-1-metil-1H-indol-2-carboxilato de (R_a)-metila (Intermediário 8, 2,85 kg, 98% em peso, 87%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 434. ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe, 27°C) δ 1,95 (s, 3H), 2,57 - 2,64 (m, 2H), 3,17 - 3,33 (m, 2H), 3,44 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 4,13 (dd, 1H), 4,23 (dd, 1H), 4,72 (dd, 1H), 7,26 (d, 1H), 7,72 (d, 1H).

Intermediário 9: 6-Cloro-7-(3-(hidroximetil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)3-(3-hidroxipropil)-1 -metil-1 H-indol-2-carboxilato de (R_a)-metila

\ [0075] 6-Cloro-7-(3-(hidroximetil)-1,5-d imetil-1 H-pirazol-4-il)-3-(3metóxi-3-oxopropil)-1-metil-1H-indol-2-carboxilato de (R_a)-metila (In

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44/61 termediário 8, 2,25 kg, 98% em peso, 5,08 mol) foi dissolvido em THF (13,3 L) e a solução resultante foi arrefecida a -45°C. Adicionou-se em seguida DIBAH (20,3% em peso em hexano; 11,0 kg, 15,7 mol) durante 1,1 h a ou abaixo de -41 °C. A mistura reacional foi mantida a aproximadamente -45°C por mais 4,4 h, tempo durante o qual três outras porções de DIBAH (20,3% em hexano; 1,32; 0,25 e 0,07 kg; 1,88; 0,36 e 0,10 mol) foram adicionadas após 1,4 2,8 e 3,7 h. Adicionou-se então IPA (2,2 L, 29 mol) à mistura reacional, antes de se aquecer a 20°C durante 2 h e mantendo a essa temperatura durante 2,5 h.

[0076] Entretanto, noutro reator, foram carregados tartarato de sódio e potássio tetra-hidratado (6,47 kg, 22,9 mol) e água (22 L). Após alguns minutos de agitação a 20°C, formou-se uma solução e depois adicionou-se acetato de isopropila (22 L). A mistura bifásica resultante foi aquecida a 50°C.

[0077] A mistura reacional de redução de éster foi transferida para o tartarato aquoso agitado vigorosamente e mistura de acetato de isopropila a 50°C durante 20 min, seguido por um enxaguamento de THF (1,5 L). Continuou-se a agitação vigorosa a 50°C durante 1,9 h. A camada inferior foi removida. A camada superior foi lavada com água (4,45 L), depois foi removida e filtrada de volta para o reator através de um filtro de 5 pm em linha, seguido por uma lavagem em linha com 1,1 L de acetato de isopropila. A solução foi concentrada por destilação do solvente (32 L) a 58-74°C (pressão atmosférica) e depois arrefecida a 20°C. A solução foi transferida para um recipiente menor, seguido por uma lavagem em linha com acetato de isopropila (1,1 L) e, em seguida, continuou a ser concentrada (a aproximadamente 9 L) destilando mais solvente (15 L) a 73-85°C (pressão atmosférica). A solução em agitação foi em seguida arrefecida para 70°C, semeada com 6-cloro-7(3-(hidroximetil)-1,5-d imeti I-1 H-pirazol-4-i l)-3-(3-h id roxi propi I)-1 -metil1 H-indol-2-carboxilato de (/?_a)-metila (2 g, 97,9% em peso, 5 mmol),

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45/61 arrefecida a 20°C durante 1 h e mantida a 20°C durante 24 h. A suspensão resultante foi filtrada sob sucção. O bolo de filtração foi lavado com acetato de isopropila (2,2 L) e depois seco em um forno de vácuo a 40°C para dar 6-cloro-7-(3-(hidroximetil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)3-(3-hidroxipropil)-1-metil-1 H-indol-2-carboxilato de (Ra)-metila (Intermediário 9, 1,76 kg, 98,0% em peso, 84%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 406. ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe, 27°C) δ 1,68 - 1,77 (m, 2H), 1,96 (s, 3H), 2,93 - 3,05 (m, 2H), 3,43 (s, 3H), 3,42 - 3,48 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 4,14 (dd, 1H), 4,23 (dd, 1H), 4,48 (t, 1H), 4,71 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,71 (d, 1H).

Intermediário 10: 5-(Clorometila)-1 -metil-1 H-pirazol-3-carboxilato de metila

[0078] Adicionou-se carbonato de sódio (2,14 kg, 20,2 mol) a uma solução agitada de 1-metil-1 H-pirazol-3,5-dicarboxilato de dimetila (7,95 kg, 40,1 mol) em MeOH (80 L) a 20 ± 5°C. A suspensão foi agitada durante 0,5 h e depois filtrada. O bolo de filtração foi lavado com 2-metilTHF (16 L) e depois os filtrados voltaram ao reator, seguido de 2-metilTHF (24 L). A solução foi arrefecida a 15 ± 3°C e boro-hidreto de sódio (3,05 kg, 80,7 mol) foi carregado em dez porções a 15 ± 3°C. A mistura foi agitada durante 2 h a 18 ± 3°C após a adição de NaBH4. Extinguiu-se depois gradualmente carregando acetona (16,4 kg, 283 mol) a 18 ± 3°C, depois agitou-se durante 1 h a 20 ± 5°C. HCI aq. (37% em peso, ~ 8,6 kg, 87 mol) foi então lentamente adicionado, mantendo a temperatura abaixo de 30°C, para ajustar o pH a 2-3, em seguida a mistura foi agitada durante 1 h. Na2CO₃ aq. (~ 4 L) foi, em seguida, lentamente adicionado para ajustar o pH a 5-6, depois a mistura foi agitada durante 3 h. A mistura foi filtrada e o bolo de filtração foi lavado com DCM (16 L). Os filtrados foram concentrados até apro

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46/61 ximadamente 20 L por destilação sob pressão reduzida, não aquecendo acima de 40°C, depois diluídos com DCM (40 L) e concentrados novamente por destilação do solvente (aprox. 40 L) sob pressão reduzida. DCM (80 L) e água purificada (32 L) foram carregadas e a mistura resultante foi agitada durante pelo menos 10 min. A fase inferior (orgânica) foi coletada e a fase superior (aquosa) foi extraída quatro vezes com mais DCM (40 L por porção). As fases orgânicas combinadas foram concentradas para aproximadamente 20 L por destilação a vácuo abaixo de 40°C. DCM (80 L) foi adicionado e a solução foi novamente concentrada por destilação do solvente (aprox. 40 L). A resultante solução de 5-(hidroximetil)-1-metil-1H-pirazol-3-carboxilato de metila foi, em seguida, diluída com DCM (80 L) e arrefeceu-se a 10 ± 5°C, depois do que o cloreto de tionila (4,80 kg, 40,4 mol) foi adicionado gradualmente, mantendo a temperatura abaixo de 15°C. A mistura foi então agitada durante 1 h a 20 ± 5°C. A mistura foi concentrada até não mais do que 20 L por destilação a vácuo abaixo de 40°C, depois foram adicionados DCM (64 L) e água purificada (80 L). Após a separação de fases, a fase inferior (orgânica) foi lavada duas vezes com Na2COs aq. (9% em peso, 80 L por porção) e depois com água purificada (80 L). A fase orgânica lavada foi concentrada até aproximadamente 14 L por destilação a vácuo abaixo de 40°C. Dois ciclos de adição lenta de heptano (40 L) e depois destilação a vácuo até aproximadamente 24 L a menos de 45°C foram então completados. Adicionouse mais heptano (40 L) e a suspensão resultante foi agitada a 20 ± 5°C durante pelo menos 0,5 h antes da filtração. O bolo de filtração foi lavado com heptano (8,0 L) e depois seco em um forno de vácuo a 45°C para dar 5-(clorometila)-1-metil-1H-pirazol-3-carboxilato de metila (Intermediário 10, 4,87 kg, 64% ); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 189. ¹H RMN (500 MHz, CDCb, 27°C) δ 3,91 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 4,59 (s, 2H), 6,82 (s, 1H).

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Intermediário 11: Acetato de 3-(acetiltio)naftalen-1-ila

OAc [0079] Uma mistura agitada de MeCN (102 L), 4-hidroxinaftaleno2-sulfonato de sódio (17,00 kg, 69,05 mol), trifenilfosfina (65,1 kg, 248 mol) e iodo (14,0 kg, 55,2 mol) foi aquecida a 80±5°C por 6 h. A mistura foi arrefecida e agitada a 0±5°C durante pelo menos 2 horas. Os sólidos residuais foram removidos por filtração para dar o 3-mercaptonaftaleno-1-ol em bruto dissolvido nos filtrados (contendo também uma grande quantidade de óxido de trifenilfosfina), que foram recarregados no reator seguido por DMAP (0,84 kg, 6,9 mol). Mantendo a temperatura abaixo de 25°C, trietilamina (21,0 kg, 207 mol) e depois anidrido acético (17,6 kg, 173 mol) foram gradualmente adicionados. A mistura foi agitada durante 2 h a 15-20 °C e depois destilada sob pressão reduzida para menos de 85 L, não aquecendo acima de 45 °C. DCM (85 L) foi adicionado e depois a mistura foi destilada sob pressão reduzida para menos de 85 L, não aquecendo acima de 40°C. Adicionou-se mais DCM (170 L) e depois lavou-se a mistura com água (170 L), seguido de NaCI aq. (17% em peso, 170 L). A fase orgânica inferior foi destilada sob pressão reduzida para menos de 51 L, não aquecendo acima de 40°C. Depois, completaram-se três ciclos de diluição da solução com MeOH (85 L) e destilação sob pressão reduzida até menos de 51 La menos de 40°C para dar uma solução metanólica de acetato de 3-(acetiltio)naftalen-1-il (Intermediário 11), 40,9 kg, 31,3% em peso, 49,2 mol) com 71% de rendimento. A solução, que também contém uma grande quantidade de óxido de trifenilfosfina, foi usada diretamente na preparação do Intermediário 12.

Intermediário 12: 5-(((4-Hidroxinaftalen-2-il)tio)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-carboxilato de metila

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[0080] Acetato de 3-(acetiltio)naftalen-1-il (Intermediário 11, 40,9 kg, 31,3% em metanol, 49,2 mol), metanol (64 L) e K2CO3 (13,6 kg, 98,4 mol) foram agitados a 15-20 °C . Adicionou-se, gota a gota 5(clorometila)-l-metil-1 H-pirazol-3-carboxilato de metila (Intermediário 10, 7,40 kg, 39,2 mol) mantendo a temperatura abaixo de 25 °C. A suspensão foi então agitada durante 2 h a 20-25°C. Em resposta à análise por HPLC, mais quatro porções de 5-(clorometila)-1 -metil-1 Hpirazol-3-carboxilato de metila (Intermediário 10, 0,46 kg, 2,4 mol, por porção) foram carregadas, agitadas durante 1 h a 20- 25°C após cada porção. Adicionou-se gradualmente água purificada (109 L) a 15-20 °C, a mistura resultante foi agitada durante pelo menos 2 h, depois deixada a assentar durante pelo menos 3 h. Os licores foram removidos via tubagem, deixando os sólidos pegajosos sedimentados no reator, aos quais foi então adicionado etanol (25,5 L). A mistura foi agitada durante pelo menos 1 h a 15±5°C antes de filtrar a suspensão obtida. O bolo de filtração foi lavado com etanol (6,4 L) e depois seco em um forno de vácuo a 45 ± 5°C para dar 5-(((4-hidroxinaftalen-2il)tio)metil)-1 -metil-1 H-pirazol-3-carboxilato de metila (Intermediário 12, 13,05 kg, 99,3% em peso, 81%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 329. ¹H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) δ 3,72 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 4,39 (s, 2H), 6,63 (s, 1H), 6,79 (d, 1H), 7,28 - 7,32 (m, 1H), 7,38 (ddd, 1H), 7,45 (ddd, 1H), 7,72 (d, 1H), 8,07 (d, 1H), 10,55 (s I, 1H).

Intermediário 13: 3-(((3-(Hidroximetil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio) naftalen-1-ol

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[0081] 5-(((4-Hidroxinaftalen-2-il)tio)metil)-1-metil-1 H-pirazol-3carboxilato de metila (Intermediário 12, 12,7 kg, 99,3% em peso, 38,4 mol) foi dissolvido em THF (254 L) a 30 ± 5°C e depois a solução foi arrefecida a 15 ± 5°C. Adicionou-se lentamente DIBAH (1 M em hexano, 155 L, 155 mol) mantendo a temperatura a 15 ± 5°C. A mistura foi então agitada durante 0,5 h a 20 ± 5°C, analisada por HPLC, e depois transferida gradualmente para ácido clorídrico aquoso (4 M, 114 L, 456 mol) a 5-20°C. A mistura bifásica foi destilada sob vácuo a menos de 40°C até não mais do que aproximadamente 120 L. A pasta resultante foi arrefecida a 15 ± 5°C, depois filtrada. O bolo de filtração foi lavado com água purificada (25 L) e depois recarregado no reator, juntamente com DCM (57 L) e THF (6,4 L). Após agitar a mistura durante pelo menos 10 h a 20 ± 5°C, filtrou-se. O bolo de filtração foi lavado com DCM (25 L) e depois seco em um forno de vácuo a 45 ± 5°C para dar 3-(((3-(hidroximetil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1 -ol (Intermediário 13, 10,45 kg, 95,5% em peso, 87%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 301. ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe, 27°C) δ 3,77 (s, 3H), 4,28 (s, 2H), 4,37 (s, 2H), 4,87 (s I, 1H), 6,14 (s, 1H), 6,81 (d, 1H), 7,35 (d, 1H), 7,39 (ddd, 1H), 7,47 (ddd, 1H), 7,72 - 7,75 (m, 1H), 8,03 - 8,06 (m, 1H), 10,34 (s, 1H).

Intermediário 14: 3-(((3-(Clorometil)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio) naftalen-1-ol s

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50/61 [0082] Cloreto de metanossulfonila (6,28 kg, 54,8 mol) foi gradualmente adicionado a uma mistura agitada de 3-(((3-(hidroximetil)-1metil-1H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1-ol (Intermediário 13, 10,30 kg, 95,5% em peso, 32,7 mol), cloreto de lítio anidro (2,91 kg, 68,6 mol) e DMF (51,5 L) mantendo a temperatura abaixo de 10°C. A mistura foi agitada durante 2 h a 15-20 °C. EtOAc (155 L) foi então adicionado, seguido por água purificada (155 L) e a mistura foi bem misturada. A camada inferior foi removida e a camada superior foi lavada duas vezes com NaCI aq. (17% em peso; 155 L por porção). A camada superior foi então destilada a vácuo para menos de 50 L abaixo de 35°C. O heptano (155 L) foi então lentamente adicionado a 30 ± 5°C antes de arrefecer a mistura para 0-5°C. Depois de agitar a suspensão durante pelo menos 1 hora, filtrou-se. O bolo de filtração foi lavado com heptano (10,3 L) e depois seco em um forno de vácuo a 30-35°C para dar 3(((3-(clorometil)-1-metil-1H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1-ol (Intermediário 14, 9,72 kg, 95,3% em peso, 89%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 319.¹H RMN (500 MHz, CDCh, 27°C) δ 3,80 (s, 3H), 4,07 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 6,11 (s, 1H), 6,70 (d, 1H), 7,38 - 7,42 (m, 1H), 7,45 - 7,52 (m, 2H), 7,52 (si, 1H), 7,68-7,74 (m, 1H), 8,16 - 8,20 (m, 1H).

Intermediário 15: Acetato de 3-(((3-(clorometil)-1-metil-1H-pirazol-5il)meti l)tio)naftalen-1 -ila

Cl [0083] Anidrido acético (3,65 kg, 35,8 mol) foi carregado gradualmente a uma mistura agitada de 3-(((3-(clorometil)-1-metil-1H-pirazol-

5-il)metil)tio)naftalen-1-ol (Intermediário 14, 9,51 kg, 95,3% em peso, 28,4 mol), DMAP (360 g, 2,95 mol) e MeCN (95 L), mantendo a tempe

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51/61 ratura abaixo de 25°C. A mistura foi agitada durante 2 h a 15-20 °C. EtOAc (95 L) foi então adicionado, seguido de NaCI aq. (10% em peso, 95 L). Após mistura completa, a camada inferior foi removida. A camada superior foi lavada com mais duas porções de NaCI aq. (10% em peso, 95 L por porção) e depois três ciclos de destilação a vácuo abaixo de 40°C até menos de 29 L e em seguida adição de MTBE (95 L) foram realizadas. A mistura foi destilada a vácuo abaixo de 40°C até menos de 48 L, agitada durante pelo menos 1 h a cerca de 20°C, depois arrefecida a 0-5°C. Adicionou-se lentamente heptano (95 L) e agitou-se a suspensão a 0-5°C durante pelo menos 1 hora antes de filtrar. O bolo de filtração foi lavado com heptano (17 L) e depois seco em um forno de vácuo a 35-40°C para dar acetato de 3-(((3-(clorometil)-1metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1 -ila (Intermediário 15, 8,67 kg, 96,1% em peso, 81%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 361. ¹H RMN (500 MHz, CDCh, 27°C) δ 2,46 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 4,11 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 6,10 (s, 1H), 7,19 (d, 1H), 7,48 - 7,55 (m, 2H), 7,65 - 7,67 (m, 1H), 7,73 - 7,79 (m, 1H), 7,79 - 7,85 (m, 1H).

Intermediário 16: Acetato de 3-(((3-((acetiltio)metil)-1-metil-1H-pirazol5-i l)meti l)t io)naftalen-1 -ila

[0084] Tioacetato de potássio (4,15 kg, 36,3 mol) foi adicionado a uma mistura de acetato de 3-(((3-(clorometil)-1-metil-1H-pirazol-5il)metil)tio)naftalen-1-ila (Intermediário 15, 8,62 kg, 96,1% em peso, 23,0 mol) e MeCN (86 L), mantendo a temperatura abaixo de 25°C. A mistura foi agitada durante 3 h a 15-20 °C. EtOAc (86 L) foi então adicionado, seguido por água (86 L). Após mistura completa, a camada

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52/61 inferior foi removida. A camada superior foi lavada com duas porções de NaCI aq. (15% em peso, 86 L por porção) e depois quatro ciclos de destilação a vácuo abaixo de 40°C até menos de 29 L e depois adição de MTBE (86 L x 3 e 60 L no ciclo final) foi realizada. A mistura foi agitada a 30-35°C durante pelo menos 1 h, arrefecida até e depois agitada abaixo de 10°C durante pelo menos 1 h, depois adicionou-se lentamente heptano (86 L). A suspensão foi arrefecida até e mantida a 05°C durante pelo menos 1 h antes da filtração. O bolo de filtração foi lavado com heptano (17 L) e depois seco em um forno de vácuo a 3540°C para dar acetato de 3-(((3-((acetiltio)metil)-1-metil-1H-pirazol-5il)metil)tio)naftalen-1-ila (Intermediário 16, 8,44 kg, 97% em peso, 89%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 401. ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe, 27°C) δ 2,28 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,91 (s, 2H), 4,42 (s, 2H), 6,04 (s, 1H), 7,36 (d, 1H), 7,53 (ddd, 1H), 7,58 (ddd, 1H), 7,82 (d, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,90 (d, 1H).

Intermediário 17: 17-Cloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oxa-2,9-ditia-

5,6,12,13,22-penta-azaheptaciclo[27.7.1.1 ν.ο¹¹·¹⁵.Ο¹⁶·²¹ .o²⁰·²⁴.0³⁰·³⁵] octatriaconta-1 (37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridecaeno23-carboxilato de (R_a)-(+)-metila

[0085] Uma solução de anidrido metanossulfônico (1,20 kg, 6,89 mol) em MeCN (2,5 L) foi adicionada a uma solução de 6-cloro-7-(3(h id roximeti I)-1,5-d imeti I-1 H-pirazol-4-i l)-3-(3-h id roxi propi I)-1 -metil-1Hindol-2-carboxilato de (Ra)-metila (Intermediário 9, 1,19 kg, 97,6%,

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2,86 mol) e /V^/V-diisopropiletilamina (1,5 L, 8,6 mol) em THF (8,7 L) ao longo de 15 min a 0-30°C, seguido por uma lavagem em linha com MeCN (0,3 L). A solução resultante foi agitada a 20°C durante 5 h antes de arrefecer até aproximadamente -5°C. Enquanto isso, uma solução Lil (1,53 kg, 11,4 mol) foi preparada por sua adição em porções (0,25 kg por porção) com MeCN (13 L) a menos de 30°C. A solução Lil foi gradualmente adicionada à mistura reacional de mesilação ao longo de 20 min a cerca de -5°C, seguido por uma lavagem em linha com MeCN (1,2 L). A pasta resultante foi aquecida a 5 °C e agitada a essa temperatura durante 5 h antes de ser arrefecida até aproximadamente -15 °C e mantendo durante 16 h. Tolueno (5,8 L), água (11,6 L) e, em seguida, uma solução de ácido clorídrico (37% em peso, 0,23 L, 2,8 mol) em água (1,1 L) foram sequencialmente adicionados, seguido por uma lavagem em linha com água (0,12 L). A temperatura da mistura reacional permaneceu igual ou inferior a -9°C durante as adições. A camada inferior foi removida e adicionou-se água (11,6 L) à camada superior e a mistura resultante foi agitada e aquecida a 0°C. A camada inferior foi removida e a camada superior foi lavada duas vezes mais com água (11,6 L por lavagem) a aproximadamente 0 °C, misturando bem antes de sedimentar e remover a camada inferior de cada vez. A solução lavada remanescente no reator foi então concentrada por destilação do solvente (8 L) sob pressão reduzida (210 a 250 mbar, 30°C a 52°C), antes da diluição com MeCN (2,9 L) e refluxo durante 30 min a 500 mbar, a fim de desgaseificar completamente a solução. Foi então arrefecida e mantida a 0°C durante 69 h (ao longo do fim-desemana) antes de repetir o refluxo de pressão reduzida sob nitrogênio em caso de qualquer entrada de ar durante o período de espera prolongado. Esta solução de 6-cloro-7-[3-(iodometil)-1,5-dimetil-pirazol-4il]-1-metil-3-(3-metilsulfoniloxipropil)indol-2-carboxilato de metila foi, em seguida, arrefecida a -14°C.

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54/61 [0086] Em paralelo, uma mistura de acetato de 3-(((3-((acetiltio) metiI)-1 -metil-1 H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1 -ila (Intermediário 16, 1,40 kg, 97,8 (% em peso, 3,42 mol) e MeOH (7,25 L) foi aquecida a refluxo e mantida em refluxo sob nitrogênio durante 30 min antes de ser arrefecida até 0 °C. O metóxido de sódio metanólico (25% em peso, 1,6 L, 7,0 mol) foi então adicionado gradualmente ao longo de 10 min, antes de aquecer a solução resultante até 20°C e manter aí durante 1,7 h. Uma porção desta solução (aprox. 0,35 M; 6,6 L, aprox. 2,3 mol) foi gradualmente adicionada à solução de 6-cloro-7-[3(iodometil)-l ,5-dimetil-pirazol-4-il]-1 -metil-3-(3-metilsulfoniloxipropil) indol-2-carboxilato de metila a partir de cima a aproximadamente -15°C, ao longo de 20 min. A mistura resultante foi mantida a -10 °C durante 1,4 h. Outra porção da solução dissódica de 3-(((1 -metil-3(sulfidometil)-1H-pirazol-5-il)metil)tio)naftalen-1-olato (aprox. 0,35 M; 1,5 L, aprox. 0,53 mol) foi adicionada antes de manter a mistura reacional a -10 °C durante 18 h. A mistura foi aquecida até 20 °C e removida do vaso de reação, seguido por lavagem com MeOH (0,6 L). O DMSO foi carregado e foi aquecido com agitação a 100°C. Em seguida, a solução de intermediário (aprox. 15 L) foi bombeada de volta para o reator ao longo de 2,8 h a 100 °C, seguido por uma lavagem com DMSO (0,6 L). Depois de se manter a mistura reacional a 100°C durante 0,8 h e depois arrefecê-la até um pouco abaixo de 60°C, adicionou-se tolueno (29 L) e água (5,8 L). A temperatura da mistura foi ajustada a 50 °C e então foi realizada uma mistura de NaOH aq. (50% em peso, 160 g, 2,02 mol) e água (0,9 L), seguida por uma lavagem com água (0,12 L). Após 10 min, a camada inferior foi removida. A camada superior foi lavada com uma solução de NaCI (1,74 kg) em água (18,6 L) a 53°C e depois concentrada por destilação do solvente (6 L) a 160 mbar e temperatura da camisa 85°C para dar uma solução de tolueno do produto bruto (19,2 kg, 6,1% em peso, 1,7 mol). Foi

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55/61 combinada com uma outra solução (18,6 kg, 5,7% em peso, 1,5 mol) preparada a partir de 6-cloro-7-(3-(hidroximetil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-

4-il)-3-(3-hidroxipropil)-1-metil-1H-indol-2-carboxilato de (/?_a)-metila (Intermediário 9, 1,19 kg, 98,0% em peso, 2,87 mol) seguindo o mesmo procedimento. A solução combinada foi purificada em porções (0,84 L por porção, 51 porções) por cromatografia em uma coluna comprimida (20 cm de diâmetro x 22 cm de comprimento) de silica Kromasil® (3,0 kg, 10 pm de tamanho de partícula, 60 pg de tamanho de poro), eluindo com uma mistura de tolueno e etanol (relação de volume aproximada de 93% de tolueno: 7% de etanol). As frações do produto foram evaporadas sob pressão reduzida a 50°C em duas partes, até cessar a destilação, para se obter o produto (91 g e 2,40 kg) como uma espuma. Os lotes foram dissolvidos em DMSO (148 g e 3,22 kg) para dar soluções em DMSO de17-Cloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oxa-2,9-ditia-

5,6,12,13,22-pentaazaheptaciclo[27.7.1.1⁴’⁷.0¹¹’¹⁵.0¹⁶’²¹.0²⁰’²⁴.0³⁰’³⁵]octatriaconta-1(37), 4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridecaeno-23-carboxilato de (Ra)-(+)-metila (Intermediário 17, 239 g, 32,2% em peso, 0,112 mol e 5,63 kg, 37,9% em peso, 3,11 mol) em um rendimento combinado de 56%; m/z (ES+), [M+H]⁺ = 686. ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe, 27°C) δ 1,97 (s, 3H), 2,16 - 2,27 (m, 1H), 2,32 - 2,42 (m, 1H), 2,89 (d, 1H), 3,08 (d, 1H), 3,07 - 3,14 (m, 1H), 3,16 (d, 1H), 3,36 - 3,42 (m, 1H),

3,43 (d, 1H), 3,48 (s, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,77 - 3,83 (m,

1H), 3,84 (s, 3H), 4,13 (td, 1H), 4,22 (d, 1H), 4,29 (d, 1H), 4,77 (s, 1H),

6,65 (d, 1H), 7,18 (d, 1H), 7,39 - 7,40 (m, 1H), 7,44 - 7,48 (m, 1H),

7,47 - 7,51 (m, 1H), 7,71 - 7,74 (m, 1H), 7,90 (d, 1H), 8,08 - 8,12 (m, 1H).

Composto 1: Ácido (/?_a)-(+)-17-cloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oxa-2,9ditia-5,6,12,13,22-penta-azaheptaciclo[27.7.1.1⁴⁷,o¹¹·¹⁵.0¹⁶·²¹ Ό²⁰·²⁴. O³⁰’³⁵]octatriaconta-1 (37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridePetição 870190094446, de 20/09/2019, pág. 71/81

56/61 caeno-23-carboxílico

N-N [0087] 17-cloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oxa-2,9-ditia-5,6,12,13,22penta-azaheptaciclo[27.7.1.1⁴’⁷O¹¹’¹⁵O¹⁶’²¹O²⁰’²⁴O³⁰’³⁵]octatriaconta1 (37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridecaeno-23-carboxilato de (/?a)-(+)-metila (Intermediário 17, 37,9% em peso em DMSO contendo 57,3% em peso de DMSO, 2,81 kg, 1,55 mol), DMSO (2,81 kg) e etanol (1,68 kg) foram carregados em um reator de 20 L e a solução foi aquecida com agitação a 50°C. NaOH (50% em peso em água; 186 g, 2,33 mol), seguido por uma lavagem em linha com água (267 mL), foi então adicionado. Após 1,5 h, adicionou-se ácido acético (267 mL, 4,66 mol). Etanol aquoso (34,5% em peso; 3,0 L) foi então adicionado, seguido por uma semente de cristalização da Forma A do ácido (/?_a)(+)-17-cloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oxa-2,9-ditia-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciclo[27.7.1.14,7.011,15.016,21.020,24.030,35]octatriaconta1 (37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridecaeno-23-carboxílico mono-hidratado (0,8 g, 0,001 mol). A mistura foi agitada a 50°C durante 4,5 h, depois mais duas porções (4,2 e 1,3 L) de etanol aquoso (34,5% em peso) foram gradualmente adicionadas (durante 4,1 e 0,7 h respectivamente). A suspensão foi arrefecida para 20°C ao longo de 2 h e mantida a 20°C durante 17 h. A suspensão foi filtrada sob sucção e o bolo de filtração foi lavado duas vezes com etanol aquoso (34,5% em peso; 2,7 L por lavagem), antes da secagem em um forno de 40°C sob vácuo para se obter a Forma A de ácido (/?_a)-(+)-17-cloroPetição 870190094446, de 20/09/2019, pág. 72/81

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5,13,14,22-tetrameti l-28-oxa-2,9-d itia-5,6,12,13,22-penta-azaheptaciclo[27.7.1.1⁴’⁷.0¹¹ ’¹⁵.0¹⁶’²¹0²⁰’²⁴O³⁰’³⁵]octatriaconta-1 (37),4(38),6,11,14, 16,18,20, 23,29,31,33,35-tridecaeno-23-carboxilico mono-hidratado (Composto 1, 1,01 kg, 99,4% em peso, 99,9% e.e., 94%); m/z (ES+), [M+H]⁺ = 672. ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe, 27°C) δ 1,96 (s, 3H), 2,16 - 2,28 (m, 1H), 2,30 - 2,42 (m, 1H), 2,88 (d, 1H), 3,06 (ddd, 1H), 3,12 (d, 1H), 3,18 (d, 1H), 3,42 (d, 1H), 3,41 - 3,48 (m, 1H), 3,51 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,84 (td, 1H), 4,09 (td, 1H), 4,25 (d, 1H), 4,28 (d, 1H), 4,75 (s, 1H), 6,67 (d, 1H), 7,13 (d, 1H), 7,37 - 7,40 (m, 1H), 7,43 - 7,47 (m, 1H), 7,45 - 7,50 (m, 1H), 7,68 - 7,74 (m, 1H), 7,84 (d, 1H), 8,07-8,13 (m, 1H), 13,36 (s I, 1H).

[0088] Detalhes do método HPLC para análise da pureza quiral: coluna = ChiralPak IE-3, 3 pm 4,6 x 250 mm; temperatura = 40 °C; fase móvel = 50:50 etanohhexano em volume contendo TFA a 0,1%, fluindo a 0,8 mL/min; detecção por UV a 305 nm; volume inj. = 10 pL (isto pode ser ajustado para atingir um limite adequado de detecção); tempos de retenção de 8,5 e 11,5 min para os enantiômeros R_a e S_a, respectivamente.

[0089] XRPD da Forma A é mostrado na Figura 1 e os resultados estão tabulados abaixo (Tabela 1).

Tabela 2. Picos de XRPD para a Forma A

Ângulo (2θ±0,2°)	Intensidade (%)
18,2	100,0
12,5	87,7
14,4	82,7
8,4	75,8
17,2	70,4
26,8	64,4
10,7	59,0
27,7	55,9
30,2	45,6
23,0	42,0

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20,5	40,5
19,2	39,4
7,0	35,9
25,0	35,3
17,6	34,5
23,7	34,4
19,8	33,4
24,5	31,8
22,0	30,9
20,9	30,8
24,2	28,8
37,6	27,1
31,5	26,9
22,3	26,5
13,9	25,3
13,7	23,9
29,0	23,9
34,5	22,9
26,3	21,3
13,1	20,8
29,4	20,7
15,6	19,8
36,9	17,9
15,1	17,9
36,4	16,7
32,8	16,6
38,2	16,2
28,6	16,1
35,5	14,9

[0090] A análise de DSC indicou que a Forma A sofre um evento endotérmico de dessolvação com um início a cerca de 121°C e um pico a cerca de 158°C, seguido de um evento endotérmico de fusão/decomposição com um início a cerca de 181°C e um pico a cerca de 194°C. TGA indicou que a Forma A exibe uma perda de massa de cerca de 4,0% por aquecimento desde cerca de 25°C até cerca de 160°C. Um termograma representativo de DSC/TGA da Forma A é

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59/61 mostrado na Figura 2.

[0091] A análise da estrutura dos cristais isolados confirmou que a Forma A é uma forma mono-hidratada. Dados cristalográficos: Grupo espacial monoclínico P2(1), dimensões de célula unitária: a = 13,83(3) A, b = 7,578(14) A, c = 33,57(6) A, β = 90,23(2)°, V= 3518(12) A³. Análise de Difração de Raios X em Pó (XRPD) [0092] A análise XRPD foi realizada usando um difractômetro Bruker D4, que é comercialmente disponibilizado pela Bruker AXS Inc™ (Madison, Wisconsin). Os espectros de XRPD foram obtidos por montagem de uma amostra (aproximadamente 20 mg) do material para análise em uma única montagem em bolacha de cristal único de silício (por exemplo, um suporte de amostras de difração de raios X Bruker com fundo zero de silício) e espalhamento da amostra em uma camada fina com o auxílio de uma lâmina de microscópio. A mostra foi submetida a rotação a 30 revoluções por minuto (para melhorar a estatística das contagens) e irradiada com raios X gerados por um tubo de cobre de focagem longa-fina operado a 40 kV e 40 mA com um comprimento de onda de 1,5406 Angstroms (isto é, cerca de 1,54 Angstroms). A amostra foi exposta durante 1 segundo por incremento de 0,02 graus 2-teta (modo de varredura contínua) ao longo da gama de 2 graus até 40 graus 2-teta no modo teta-teta. O tempo de processamento foi 31 min, 41 s.

[0093] Os valores de XRPD 20 podem variar em um intervalo razoável, por exemplo, no intervalo ± 0,2° e tais intensidades de XRPD podem variar quando medidas para essencialmente a mesma forma cristalina por uma variedade de motivos, incluindo, por exemplo, orientação preferencial. Os princípios de XRPD estão descritos em publicações, tais como, por exemplo, Giacovazzo, C. et al. (1995), Fundamentais of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins, R. e Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry,

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John Wiley & Sons, Nova lorque, e Klug, Η. P. & Alexander, L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, Nova lorque.

Análise de DSC [0094] A análise de DSC foi realizada em amostras preparadas de acordo com métodos padrão usando um calorímetro de DSC Q SERIES™ Q1000 disponibilizado pela TA Instruments® (New Castle, Delaware). Uma amostra (aproximadamente 2 mg) foi pesada em um recipiente de amostras de alumínio e transferida para o DSC. O instrumento foi purgado com nitrogênio a 50 mL/min e dados foram recolhidos entre cerca de 22°C e 300°C, usando uma taxa de aquecimento dinâmica de cerca de 10°C/minuto. Os dados térmicos foram analisados usando software padrão, por exemplo, Universal V.4.5A da TA INSTRUMENTS®.

Análise de Termogravimetría (TGA) [0095] TGA foi realizada em amostras preparadas de acordo com métodos padrão usando um analisador de termogravimetría Q SERIES™ Q5000 da TA Instruments INSTRUMENTS® (New Castle, Delaware). Uma amostra (aproximadamente 5 mg) foi colocada em um recipiente de amostras de alumínio e transferida para o forno de TGA. O instrumento foi purgado com nitrogênio a 50 mL/min e os dados foram recolhidos entre 25°C e 300°C, usando uma taxa de aquecimento dinâmica de 10°C/minuto. Os dados térmicos foram analisados usando software padrão, por exemplo, Universal V.4.5A da TA INSTRUMENTS®.

Exemplo 1: Atividade in vitro do Composto 1

Ensaio de Atividade de Caspase: Este é um ensaio celular para medir a indução de apoptose em células MOLP-8 (mieloma múltiplo), KMS12-BM (mieloma múltiplo), MV4;11 (leucemia mieloide aguda), e NCIH23 (câncer do pulmão de células não pequenas) após 6 h de trata

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61/61 mento com inibidores de Mcl-1. No primeiro dia, 3000 (MOLP-8, KMS12-BM, MV4;11) ou 1250 (NCI-H23) células/poço foram semeadas com 50 pl_ de meio de crescimento (IMDM + FBS 10% + L-Glu a 2 mM para MV4;11 e RPMI-1640 + FBS 10% + L-Glu a 2 mM para todas as outras) em microplacas brancas de 384 poços e foram incubadas durante a noite (37°C, 5% de CO2, 80% de UR). No segundo dia, as células foram tratadas com Composto 1 usando um manejador acústico de líquidos ECHO (diluição em série 10 pontos de semi-log, 31,5 μΜ de concentração máxima, concentração de DMSO final 0,3%). Após 6 h de incubação (37°C, 5% de CO2, 80% de UR), 25 μΙ_ de reagente Caspase-GIo 3/7 (Promega) foram adicionados a cada poço e as placas foram incubadas à temperatura ambiente durante 30 min protegidas da luz. A luminescência foi registrada usando um leitor de microplacas Infinite M200 (Tecan) com um tempo de integração de 100 ms. Os valores de IC50 foram calculados usando 0 software de análise GeneData e são mostrados na Tabela 2 abaixo.

Tabela 2. Resultados do ensaio de Atividade de Caspase in vitro

Linhagem celular	Composto I
	Atividade de Caspase, EC50 (nM)
MOLP-8	30
KMS-12-BM	43
MV4;11	20
NCI-H23	193

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Claims (1)

1. REIVINDICAÇÃO

   1. Composto selecionado, caracterizado pelo fato de que apresenta a partir de:

   

   

   ou um seu sal.