BR112013030228B1

BR112013030228B1 - cepas de bactérias que pertencem ao gênero bacillus, agente microbiológico e método para cultivar plantas

Info

Publication number: BR112013030228B1
Application number: BR112013030228-3A
Authority: BR
Inventors: Yusuke Amaki; Keijitsu Tanaka; Motoki Tanaka; Akitomo Takahashi
Original assignee: Sds Biotech K. K
Priority date: 2011-05-26
Filing date: 2012-05-21
Publication date: 2021-03-16
Also published as: US20170027177A1; AU2012259893B2; CN103703120B; BR112013030228A2; WO2012161160A1; US9504257B2; CA2836726A1; US10219517B2; EP2716748A4; CA2836726C; IL229514A0; NZ617974A; ES2616911T3; US20140179528A1; EP2716748B1; CL2013003374A1; EP2716748A1; PT2716748T; MX348159B; ZA201308830B

Abstract

"CEPA QUE PERTENCE AO GÊNERO BACILLUS, AGENTE MICROBIOLÓGICO E MÉTODO DE CULTIVO DE PLANTA". A presente invenção refere-se às cepas de Bacillus sp. AT-332 (NITE BP-1095) e AT-79 (NITE BP-1094) isoladas da natureza; e um promotor de crescimento de planta, um agente de controle de nematódeo e um agente de controle de doença de planta contendo as cepas como bactérias ativas. As cepas de Bacillus sp., cepas AT-332 e AT- 79 podem promover o crescimento de plantas úteis, e são eficazes no controle tanto de uma ampla faixa de várias doenças de planta quanto no dano de nematódeo, devido a uma cultura contendo um metabólito secundário das cepas, ou bactérias vivas cultivadas e isoladas das cepas sendo introduzidas a um corpo de planta ou ao solo para o crescimento das mesmas.

Description

CAMPO TÉCNICO

[001] A presente invenção refere-se a um novo micro-organismoútil para controlar doenças de planta e dano do nematódeo e promover o crescimento das plantas. Especificamente, a presente invenção refere-se às cepas AT-332 e AT-79 de Bacillus sp., que são um novo micro-organismo que exibe muitos efeitos superiores no controle de doenças de planta e dano do nematódeo e promover o crescimento de plantas em comparação aos micro-organismos que pertencem a um Bacillus amiloliquefaciens intimamente relacionado descrito na literatura; e um agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e um promotor de crescimento de planta contendo o corpo do fungo e a cultura dos micro-organismos.

ANTECEDENTES DA TÉCNICA

[002] Um método principal para controlar as doenças de planta eos nematódeos é um método usando pesticidas químicos, e pesticidas químicos permitiram a produção estável de culturas até hoje. Entretanto, recentemente, ficou difícil controlar completamente o impacto no ambiente devido ao uso contínuo de pesticidas químicos e o aparecimento de bactérias resistentes a fármaco pelos pesticidas químicos convencionais; e doenças tal como uma doença bacteriana que é difícil controlar estão se desenvolvendo em um problema principal. Consequentemente, a tecnologia de controle biológica usando um micro-organismo isolado da natureza chama uma atenção crescente e alguns pesticidas de micro-organismo foram comercialmente produzidos. Entretanto, os pesticidas microbiológicos convencionais têm um defeito em que o efeito não é estável e doenças aplicáveis são menores em comparação aos pesticidas químicos. Nestas circunstâncias, houve uma demanda crescente quanto a um novo pesticida microbiológico que tem novas doenças aplicáveis e exibe um efeito de controle estável.

[003] Como um agente de controle de doença de planta usandoum micro-organismo, um agente de Talaromyces flavus, um agente de Pseudomonas fluorescens, um agente de vilurência de Erwinia carotovora, um agente de Trichoderma atroiviride, um agente de Bacillus simplex, um agente de Bacillus subtilis e similares são registrados como um pesticida microbiológico e foi usado.

[004] Como um agente de controle de nematódeo usando ummicro-organismo, um agente de Pasteuria penetrans e um agente de Monacrosporium phymatophagumsão registrados como um pesticida microbiológico e foi usado.

[005] A especificação da Patente Japonesa No. 2955655(Documento de Patente 1) descreve um agente de controle de doença de planta usando bactérias que pertencem ao Bacillus amiloliquefaciens. O ingrediente ativo do agente de controle de doença de planta é o produto do micro-organismo e a bactéria per senão é usada como um pesticida. Além disso, o alvo de controle é uma doença causada por bactérias filamentosas e o documento não descreve o controle da doença bacteriana. A publicação JP-A-2009-247302 (Documento de Patente 2) descreve um pesticida de micro-organismo que pode controlar a doença por bactérias filamentosas e a doença bacteriana ao mesmo tempo em que as células de bactéria viáveis per sesão eficazes, porém o documento não tem nenhuma descrição no controle de nematódeo.

[006] A especificação da Patente Japonesa No. 3471815(Documento de Patente 3; WO 98/050422) descreve um agente de controle de doença de planta usando bactérias de Bacillus que podem ser usadas para uma ampla faixa de doenças de planta e eficazes em lagartas da raiz de milho, porém o documento não tem nenhuma descrição no controle de nematódeo. A especificação da Patente Japonesa No. 4071036 (Documento de Patente 4; US 2004/265292) descreve a cepa de Bacillus sp. D747 que pode ser usada para controlar doenças de planta e insetos prejudiciais, porém o documento não tem nenhuma descrição no controle de nematódeo.

[007] A especificação da Patente Japonesa No. 3471811(Documento de Patente 5; WO 96/032840) descreve um agente de controle de nematódeo usando bactérias de gênero Bacillus. O ingrediente ativo do agente de controle de nematódeo é as bactérias ou esporo da cepa Bacillus firmus tendo uma atividade antinematódeo, porém, o documento não tem nenhuma descrição no controle de doença de planta. A especificação da Patente Japonesa No. 4359653 (Documento de Patente 6; WO 1997/012980) descreve um método para controlar nematódeos usando uma toxina produzida por uma nova cepa de Bacillus thuringiensis, porém, o documento não tem nenhuma descrição no controle de doença de planta.

[008] Na agricultura, fertilizantes químicos são um materialagrícola importante que influencia o rendimento das culturas. Entretanto, 30 a 50% dos componentes de fertilizante químico não são utilizados nas culturas, porém, difundidos no ambiente, que causa eutroficação de rios e contaminação de água subterrânea. Uma quantidade grande de combustíveis fósseis é usada na produção de fertilizantes químicos e o custo de produção dos fertilizantes químicos está aumentando junto com os preços disparados de combustíveis fósseis. Além disso, óxido de nitrogênio (NOx) como um produto de decomposição de um fertilizante de nitrogênio é dito ser cerca de 300 vezes mais eficiente em emissões de estufa do que o gás carbônico, e há preocupação crescente a cerca do efeito estufa. Espera-se que a escassez de alimento no futuro seja devido ao crescimento da população global e, portanto, o uso de um material para aumentar a produtividade de cultura é inevitável e há necessidade crescente quanto a um material mais ambientalmente amigável para substituir os fertilizantes químicos convencionais.

[009] Na luz de tais circunstâncias, estudos foram feitosprincipalmente em uma ampla faixa de bactérias de Rhizobium, bactérias de Pseudomonas e bactérias de Bacillus. Entretanto, muito pouco está em uso prático porque eles são menos eficazes.

[0010] Como discutido acima, nenhuma bactéria de Bacillus que éem geral eficaz nas doenças de planta, disponível no controle de nematódeos e é eficaz na promoção do crescimento de planta foi conhecido até hoje.

DOCUMENTOS DA TÉCNICA ANTERIOR Documentos de Patente

[0011] Documento de Patente 1: Patente Japonesa No. 2955655

[0012] Documento de Patente 2: JP-A-2009-247302

[0013] Documento de Patente 3: Patente Japonesa No. 3471815

[0014] Documento de Patente 4: Patente Japonesa No. 4071036

[0015] Documento de Patente 5: Patente Japonesa No. 3471811

[0016] Documento de Patente 6: Patente Japonesa No. 4359653

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO Problema ser Resolvido pela Invenção

[0017] Um objetivo da presente invenção é isolar um novo microorganismo da natureza para fornecer, qual micro-organismo tem efeitos de controlar de múltiplas doenças de planta, controlar nematódeos e/ou promover o crescimento de planta.

[0018] Outro objetivo da presente invenção é fornecer um agentede controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e um promotor de crescimento de planta, que contêm o micro-organismo supracitado como bactérias ativas e podem ser usados como um pesticida biológico (agentes microbiológicos).

Meios para Resolver o Problema

[0019] Como um resultado de estudos intensivos para resolver oproblema, os presentes inventores tiveram sucesso no isolamento de uma nova cepa que pertence ao gênero Bacillus da natureza, cuja cepa tem efeitos de controlar múltiplas doenças de planta, controlar nematódeos e promover o crescimento de planta, e concluída a presente invenção.

[0020] A presente invenção refere-se à cepa descrita em 1 a 4abaixo, o agente microbiológico em 5 a 8 abaixo e o método para cultivar plantas em 9 abaixo.1. Uma cepa compreendendo 16S rDNA representada pela sequência base No. 2 ou 3.2. A cepa como descrito no 1 acima, em que a cepa per se e/ou a cultura da cepa mostra(m) os efeitos de controlar doenças de planta, controlar nematódeos e/ou promover o crescimento de planta.3. A cepa de Bacillus sp. AT-332 como descrito em 1 ou 2 acima, contendo 16S rDNA representado pela sequência base No. 2.4. A cepa de Bacillus sp. AT-79 como descrito em 1 ou 2 acima, contendo 16S rDNA representado pela sequência base No. 3.5. Um agente microbiológico contendo a cepa e/ou a cultura da cepa descrita em qualquer um dentre 1 a 4 acima como um ingrediente ativo.6. O agente microbiológico como descrito em 5 acima, que é um agente de controle de doença de planta.7. O agente microbiológico como descrito em 5 acima, que é um agente de controle de nematódeo.8. O agente microbiológico como descrito em 5 acima, que é um promotor de crescimento de planta. 9. Um método para cultivar as plantas, tratar as plantas com o agente microbiológico descrito em qualquer um dentre 5 a 8 acima. EFEITOS DA INVENÇÃO

[0021] As cepas AT-332 e AT-79 de Bacillus sp. da presenteinvenção podem controlar uma ampla faixa de várias doenças de planta e nematódeos e também, podem promover o crescimento de plantas úteis devido à cultura (incluindo células de bactéria viáveis) ou bactérias vivas cultivadas e isoladas das cepas que são apresentadas a um corpo de planta tais como as raízes, talos, folhas, sementes e frutas ou ao solo de cultura.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0022] A Figura 1 mostra a árvore filogenética molecular usando asequência base de 16S rDNA de cepas AT-332 e AT-79 de Bacillus sp.. Na figura, os números perto das ramificações são os valores de carga de entrada e uma barra de escala é mostrada à esquerda inferior.

[0023] A Figura 2 fotografias (a) a (d) mostram o efeito da promoçãodo crescimento da planta da cepa AT-332 no teste básico (Exemplo 12 e Exemplos Comparativos 12-13).

[0024] A Figura 3 mostra o efeito da promoção do crescimento derepolho chinês das cepas AT-332 e AT-79 em um teste de pote (Exemplo 13).

MODO PARA REALIZAR A INVENÇÃO

[0025] Os presentes inventores avaliaram que os micro-organismosde várias plantas, solos e similares com a finalidade de desenvolver recentemente um pesticida microbiano seguro e superior e/ou fertilizante microbiano que tem um amplo espectro antibacteriano contra várias doenças de planta, mostram atividade antinematódeo e têm efeito da promoção do crescimento de planta. Como um resultado, os presentes inventores fizeram uma descoberta útil que a cepa isolada do solo coletado em Ibaraki Prefecture mostra um amplo espectro antibacteriano contra várias doenças de planta, mostra atividade inseticida alta contra nematódeose tem efeito da promoção do crescimento de planta.

[0026] Ambas as cepas desse modo recentemente isoladas (cepaAT-332 e cepa AT-79) são bacilos móveis gram-positivos como está claro a partir das características bacteriológicas a ser descritas depois, e crescem e formam esporos sob uma condição aeróbica. Ambas as cepas tornaram-se positivas tanto na reação de catalase quanto na reação de oxidase. Além disso, como resultado da identificação com base na sequência de cerca de 1500 bp-base da lateral de terminal 5' de 16S rDNA, as cepas foram confirmadas ser uma nova cepa que pertence ao gênero Bacillus relacionado ao Bacillus amiloliquefaciens. Devido às características superiores de ter efeitos em uma ampla faixa de doenças de planta, o efeito de alto controle sobre os nematódeos e efeito da promoção do crescimento de planta, as cepas AT-332 e AT-79 foram identificadas como uma nova cepa e designadas como as cepas AT-332 e AT-79 do Bacillus sp. relacionadas ao Bacillus amiloliquefaciens.

[0027] A cepa AT-332 e a cepa AT-79 de Bacillus sp. da presenteinvenção foram depositadas como cepa Bacillus sp. AT-332 e Bacillus sp. AT-79 com a instituição depositária, Biological Resource Center, National Institute of Technology and Evaluation (2-5-8 Kazusakamatari, Kisarazu-shi, Chiba 292-0818 JAPAN) (data de depósito original (data aceita): 2 de maio de 2011; Número de acesso: NITE BP-1095 e NITE BP-1094).

[0028] As características bacteriológicas de Bacillus sp. AT-332(NITE BP-1095) são descritas abaixo. As características bacteriológicas foram determinadas em referência aos seguintes documentos.

[0029] PRIEST (F.G.), GOODFELLOW (M.), SHUTE (L.A.) andBERKELEY (R.C.W.): Bacillus amiloliquefaciens sp. nov., nom. rev. Int. J. Syst. Bacteriol., 1987, 37, 69-71 and Bergey's Manual of SystematicBacteriology, Second Edition volume 3.

(1) Propriedade morfológica

[0030] Forma: bactéria em forma de bastão

[0031] Tamanho: largura de 0,8 a 0,9 μm e comprimento de 1,5 a2,0 μm

[0032] Mobilidade: +

[0033] Estado epifítico do flagelo: peritricoso

[0034] Presença ou ausência de esporos: + (quase-terminal)

(2) Características culturais

[0035] Meio de cultura: meio de ágar nutriente (30°C)

[0036] Forma: circular

[0037] Proeminência: plana

[0038] Periferia: margem inteira

[0039] Estado da superfície: lisa

[0040] Viscosidade: viscosa

[0041] Transparência: opaca

[0042] Tonalidade da cor: cor creme

[0043] Brilho: fosco

[0044] Produção de pigmento: não produtivo

(3) Características fisiológicas

[0045] Gram manchamento: +

[0046] Redução de nitrato: -

[0047] Reação de desabsorção de nitrogênio: -

[0048] teste MR: -

[0049] teste VP: +

[0050] Geração de indol: -

[0051] Geração de sulfeto de hidrogênio: -

[0052] Hidrólise do amido: +

[0053] Uso de ácido cítrico: - (Koser)

[0054] + (Christensen)

[0055] Uso de fonte de nitrogênio inorgânica: - (nitrato)

[0056] + (sal de amônio)

[0057] Urease: -

[0058] Oxidase: +

[0059] Catalase: +

[0060] Faixa para crescimento pH 5: +

[0061] pH 8: +

[0062] pH 9: +

Temperatura para crescimento 37°C:

[0063] 45°C: +

[0064] 50°C: +

[0065] 55°C: -

[0066] Crescimento em condição anaeróbica: -

[0067] teste OF (oxidação/fermentação): - / -

Produção de ácido/produção de gás a partir de açúcares:

[0068] L-arabinose: + / -

[0069] D-glicose: + / -

[0070] D-frutose: + / -

[0071] Maltose: + / -

[0072] Lactose: - / -

[0073] D-sorbitose: + / -

[0074] Inositol: + / -

[0075] D-xilose: + / -

[0076] D-manose: + / -

[0077] D-galactose: - / -

[0078] Sacarose: + / -

[0079] Trealose: + / -

[0080] D-manitol: + / -

[0081] Glicerina: + / -

[0082] Atividade de β-galactosidase: -

[0083] Atividade de arginina di-hidrolase: -

[0084] Atividade de lisina descarboxilase: -

[0085] Atividade de triptofano desaminase: -

[0086] Atividade de Gelatinase: +

[0087] As características bacteriológicas de Bacillus sp. AT-79(NITE BP-1094) são descritas abaixo.

(1) propriedade morfológica

[0088] Forma: bactéria em forma de bastão

[0089] Tamanho: largura de 0,8 a 0,9 μm e comprimento de 1,5 a2,0 μm

[0090] Mobilidade: +

[0091] Estado epifítico do flagelo: peritricoso

[0092] Presença ou ausência de esporos: + (quase-terminal)

(2) Características culturais

[0093] Meio de cultura: meio de ágar nutriente (30°C)

[0094] Forma: circular

[0095] Proeminência: plana

[0096] Periferia: margem inteira

[0097] Estado da superfície: lisa

[0098] Viscosidade: viscosa

[0099] Transparência: opaca

[00100] Tonalidade da cor: cor creme

[00101] Brilho: fosco

[00102] Produção de pigmento: não produtivo

(3) Características fisiológicas

[00103] Gram manchamento: +

[00104] Redução de nitrato: -

[00105] Reação de desabsorção de nitrogênio: -

[00106] teste MR: -

[00107] teste VP: +

[00108] Geração de indol: -

[00109] Geração de sulfeto de hidrogênio: -

[00110] Hidrólise do amido: +

[00111] Uso de ácido cítrico: - (Koher)

[00112] + (Christensen)

[00113] Uso de fonte de nitrogênio inorgânica: - (nitrato)

[00114] + (sal de amônio)

[00115] Urease: -

[00116] Oxidase: +

[00117] Catalase: +

Faixa para crescimento pH 5: +

[00118] pH 8: +

[00119] pH 9: +

Temperatura para crescimento 37°C:

+

[00120] 45°C: +

[00121] 50°C: +

[00122] 55°C: -

[00123] Crescimento em condição anaeróbica: -

[00124] teste OF (oxidação/fermentação): - / -

Produção de ácido/produção de gás a partir de açúcares:

[00125] L-arabinose: + / -

[00126] D-glicose: + / -

[00127] D-frutose: + / -

[00128] Maltose: + / -

[00129] Lactose: - / -

[00130] D-sorbitose: + / -

[00131] Inositol: + / -

[00132] D-xilose: + / -

[00133] D-manose: + / -

[00134] D-galactose: - / -

[00135] Sacarose: + / -

[00136] Trealose: + / -

[00137] D-manitol: + / -

[00138] Glicerina: + / -

[00139] Atividade de β-galactosidase: -

[00140] Atividade de arginina di-hidrolase: -

[00141] Atividade de lisina descarboxilase: -

[00142] Atividade de triptofano desaminase: -

[00143] Atividade de Gelatinase: +

[00144] As sequências base da lateral de terminal 5' de 16S rDNA da cepa de Bacillus sp. AT-332 e AT-79 da presente invenção são representadas por sequência No. 2 e sequência No. 3, respectivamente.

[00145] A sequência No. 2 e sequência No. 3 diferem-se uma da outra apenas em duas bases na base No. 444 e base No. 1242. Base No. 444 é guanina (g) em sequência No. 2 e adenina (a) em sequência No. 3, e base No. 1242 é adenina (a) em sequência No. 2 e guanina (g) em sequência No. 3.

[00146] Portanto, o micro-organismo da presente invenção é caracterizado tendo a sequência base da sequência No. 1 incluindo as sequências supracitadas No. 2 e No. 3 (isto é, base No. 444 e base No. 1242 são representadas por "r") a partir da lateral de terminal 5' de 16S rDNA.

[00147] Na presente invenção, a sequência base de 16S rDNA foi analisada como abaixo.

[00148] Matriz de InstaGene (produzida por BIO RAD Laboratories, Inc., California (CA), U.S.A.) foi usada para extração de DNA;PrimeSTAR HS DNA Polimerase (produzido por Takara Bio Inc.) foi usada para PCR; o Kit de Sequenciamento de Ciclo BigDye Terminator v3.1 (produzido por Applied Biosystems, California (CA), U.S.A.) foi usado para determinar a sequência de ciclo, respectivamente. Os iniciadores usados (de acordo com "Gene Analysis Method - method for determining the base sequence of 16S rRNA gene", Yasuyoshi Nakagawa et al., editado pela Society for Actinomycetes Japan, Classification and identification of Actinomycetes, pp. 88-117, Business Center for Academic Societies Japan, 2001) foram 9F, 339F, 785F, 1099F, 536R, 802R, 1242R e 1541R. A sequência foi identificadausando ABI PRISM 3100 genetic Analizer System (produzido por Applied Biosystems, California (CA), U.S.A.).

[00149] Como um resultado da procura por homologia com base na base de dados de sequência base internacional (GenBank/DDBJ/EMBL) usando BLAST (ALTSCHUL, (S.F.) et al., Gapped BLAST e PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acid Res. 1997.25, 3389-3402), a sequência base de 16S rDNA da cepa AT-332 e cepa AT-79 teve um alto grau de homologia com o 16S rDNA derivado do gênero Bacillus, e ambas as cepas tiveram a homologia mais alta de 99,9% com 16S rDNA da cepa de Bacillus amiloliquefaciens BCRC11601. Por outro lado, como um resultado da procura por homologia com base na base de dados da sequência base internacional (GenBank/DDBJ/EMBL), nenhuma sequência base de 16S rDNA das cepas AT-332 e AT-79 comparou-se exatamente a sequência base de 16S rDNA derivada do gênero Bacillus.

[00150] Na presente invenção, a análise filogenética molecular foi realizada como abaixo.

[00151] 16S rDNA derivada da cepa padrão a partir do grupo de cepaque foi assumido estar intimamente relacionado foi obtido da base de dados da sequência base internacional (GenBank/DDBJ/EMBL) para realizar a análise filogenética molecular usando 1500 bp da sequência base de 16S rDNA obtida no anterior.

[00152] 16S rDNA usada para a análise filogenética molecular foi derivada a partir das seguintes cepas. - Bacillus subtilis, IAM12118T (AB042061) - Bacillus subtilis subsp. spizizenii, NBRC101239T (AB325584) - Bacillus mojavensis, IFO15718 T (AB021191) - Bacillus vallismortis, DSM11031 T (AB021198) - Bacillus amiloliquefaciens, BCRC11601 T (EF433406) - Bacillus atrophaeus, JCM9070 T (AB021181) - Bacillus aerophilus, 28K T (AJ831844) - Bacillus sonorensis, BCRC17416 T (EF433411) - Bacillus licheniformis, DSM13 T (AE017333) - Bacillus altitudinis, 41KF2b T (AJ831842) - Bacillus cereus ATCC14579 T (NC_004722)BSL2

[00153] "T" ao término do nome da cepa significa a cepa padrão dasespécies. BSL significa que a cepa é um nível de bio segurança (nível 2 ou mais alto é indicado). Os códigos nos parênteses indicam o número de acesso.

[00154] A árvore filogenética molecular obtida é mostrada na Figura 1.

[00155] Os números perto das ramificações são os valores de cargade entrada e uma barra de escala é mostrada à esquerda inferior.

[00156] Visto que a cepa AT-332 e a cepa AT-79 têm a propriedade que não realiza a redução de nitrato como mencionado acima, suas características micológicas não comparam exatamente aquelas de Bacillus amiloliquefaciens descrito no Manual de Bergey. Da mesma forma, a partir do resultado da análise de 16S rDNA, as cepas AT-332 e AT-79 são consideradas ser intimamente relacionada ao Bacillus amiloliquefaciensporém não podem ser identificadas como Bacillus amiloliquefaciens e cepa AT-332 e cepa AT-79 foi determinada ser uma nova cepa que pertence ao gênero Bacillus.

[00157] A cepa AT-332 e a cepa AT-79 de Bacillus sp. da presente invenção são permitidas crescerem por meios conhecidos tal como a cultura estática em um meio sólido e a cultura líquida e o tipo do meio disponível, condições de cultura e similares não estão particularmente limitados contanto que elas permitam as bactérias sobreviverem e crescerem. Exemplos do meio incluem um meio contendo glicose, peptona, extrato de fermento e similares bem como um meio geral tal como um extrato de carne. Da mesma forma, diferente de um meio líquido, um meio sólido tal como um meio de inclinação de ágar e um meio de placa diferente de um meio líquido podem ser usados.

[00158] Todas as fontes de carbono que a cepa AT-332 e cepa AT- 79 podem utilizar podem ser usadas para o meio. Exemplos específicos incluem várias fontes de carbono sintéticas ou naturais em que a cepa AT-332 e cepa AT-79 podem utilizar diferentes açúcares tais como glicose, galactose, lactose, sacarose, maltose, extratos de malte, melados residuais, xarope de amido e hidrolisado de amido.

[00159] Semelhantemente, várias substâncias sintéticas e naturais que as cepas supracitadas podem utilizar, tais como uma substância contendo nitrogênio orgânico incluindo peptona, extrato de carne, extrato de levedura, pó de soja e licor macerado do milho podem ser usadas para a fonte de nitrogênio do meio.

[00160] De acordo com um método convencional para cultivar micro-organismos, sais inorgânicos tal como sal dietético e sal fosfórico, sais de metal tal como cálcio, magnésio e ferro e micronutrientes, tais como vitaminas e aminoácidos podem ser adicionados quando necessário.

[00161] A cultura pode ser realizada sob uma condição aeróbia tal como a cultura de agitação e cultura de aeração. A temperatura da cultura é 20 a 40°C e preferivelmente 25 a 35°C, pH é 5 a 8 e preferivelmente 6 a 7, e o período de cultura é de um a quatro dias e preferivelmente dois a três dias.

[00162] A cultura contendo o corpo bacteriano da cepa AT-332 e cepa AT-79 de Bacillus sp. da presente invenção tem a propriedade de controlar várias doenças de planta, controlar nematódeos e promover o crescimento de plantas úteis.

[00163] Várias doenças de planta podem ser prevenidas e os nematódeos podem ser controlados permitindo-se o produto processado da cultura contendo o corpo bacteriano da cepa AT-332 e cepa AT-79 de Bacillus sp. da presente invenção, mistura da cultura e outros componentes e similares; o produto processado de células de bactéria cultivadas separadas obtidas submetendo-se o produto de cultura ao tratamento de separação centrífugo ou lavando-se as células de bactéria, a mistura de células de bactéria cultivadas separadas e outros componentes, e similares; um diluente dos mesmos com um líquido ou um sólido e similares existirem no corpo da planta tais como as raízes, talos, folhas, sementes e frutas ou no solo de arvoredo.

[00164] A cepa AT-332 e a cepa AT-79 de Bacillus sp. da presente invenção está disponível como agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e um promotor de doença de planta em qualquer estado de células nutritivas, esporos ou a mistura de ambos contanto que as bactérias estejam vivas. Da mesma forma, as cepas podem ser usadas se os componentes do meio de cultura forem misturados visto que eles estão após o cultivo ou se eles estão em um estado onde os componentes diferentes de células de bactéria são removidos lavando-se com água destilada e similares.

[00165] A cepa AT-332 e a cepa AT-79 de Bacillus sp. da presente invenção podem controlar a doença de planta causada por fungos e bactérias que pertencem a Oomycetes, Ascomycetes, Basidiomycetes e Deuteromycetes dependendo do tipo de aplicação e pode controlar o nematódeo fitoparasítico, tais como Ditilenchus dipasaci, Ditilenchus destructor, Pratilenchus sp., Meloidogyne sp., Heterodera sp. and Globodera spp.. As cepas podem promover o crescimento de culturas, vegetais, frutas, flores e legumes ao mesmo tempo.

[00166] Especificamente, as bactérias ofensivas em que a cepa AT- 332 e cepa AT-79 de Bacillus sp. da presente invenção podem controlar incluem Pyricularia oryzae, Cochliobolus miyabeanus, Rhizoctonia solani e Gibberella fujikuroi que infestam arroz; Erysiphe graminis f.sp. hordei, Erysiphe graminis f.sp. tritici, Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia recondita f.sp. tritici, Puccinia hordei, Gibberella zeae, Pyrenophorateres, Typhula incarnata, Typhula ishikariensis, Sclerotiniaborealis, Micronectriella nivalis, Ustilago nuda, Tilletia caries, Tilletia toetida, Tapesia yallundea, Phynchosporium secalis f.sp. hordei, Septoria tritici e Lentosphaeria nodorum que infestam trigos; Diaporthe citri, Elsinoe fawcettii, Phytophthora citrophthora, Penicillium digitatum e Penicillium italicum de plantas cítricas; Monilinia mali, Valsa ceratosperma, Podosphaera leucotricha, Alternaria alternataapple pathotype, Venturia inaequalis, Gymnosporangium yamadae, Botryosphaeria berengeriana f.sp. piricola, Zygophiala jamaicensis, Gloeodes pomigena, Mycosphaerella pomi, Glomerella cingulata e Diplocarponmali de maçãs; Venturia nashicola, Alternaria alternatajapanese pear pathotype, Physalospora piricola e Gymnosporangium asiaticum de peras; Monilinia fructicola, Cladosporium carpophilum e Phomopsis sp. de pêssegos; Pseudocercospora vitis, Marssonina viticola, Elsinoe ampelina, Glomerella cingulata, Uncinula necator, Phakopsora ampelopsidis e Phomopsis sp. de uvas; Phillactinia kakicola, Colletotrichum gloeosporioides, Cercospora kaki e Mycosphaerella nawae de caquis; Cladosporium carpophilum de ameixas; Monilinia fructicola de Prunus avium; Sphaerotheca fuliginea, Didymella bryoniae, Colletotorichum legenarium de gourds; Alternaria solani, Cladosporium fulvum de tomates; Phomopsis vexans e Erysiphe cichoracearum de berinjelas; Alternaria japonica, Alternaria bracicae, Alternaria brassicicola e Cercosporella brassicae de vegetais do gênero brassica; Pucciniaallii de cebolas verdes; Pythium ultimum e Pythium zigiberis de gengibres; Sphaerotheca humuli e Glomerella cingulata de morangos; Cercospora kikuchii, Elsinoe glycines e Diaporthe phaseolorum var. sojae de sojas; Cercospora canescens e Uromyces phaseoli var. azukicola de feijões azuki; Colletotrichum lindemuthianum de feijões marrom; Cercosporidium personatum, Cercospora arachidicola e Shaceloma arachidis de amendoins; Erysiphe pisi de ervilhas; Alternaria solani de batatas; Exobasidium reticulatum, Elsinoe leucospila, Pestalotiopsis theae e Pestalotiopsis longiseta de chás; Alternaria longipes, Erysiphe cichoracearum e Colletotrichum gloeosporioides de tabacos; Cercospora beticola de beterrabas; Curvularia geniculata e Ceratobasidium spp. de gramados; Diplocarpon rosae e Shaerotheca pannosa de rosas; Septoria obesa e Puccinia horiana de crisântemos; e Botrytis cinerea e Sclerotinia sclerotiorum de várias plantas de cultura, porém não limitadas a estes.

[00167] O agente de controle de doença de planta da presente invenção inclui um agente de controle de doença pós-colheita para as culturas armazenadas após a colheita, particularmente para prevenir frutas e similares da deterioração. Não há nenhum limite nos tipos de culturas em que o agente de controle de doença pós-colheita da presente pode ser aplicado, e exemplos incluem frutas tais como morango, uva, figo, cítricas, pêssego, melão, melancia, maçã, pera, banana e abacaxi e vegetais, tais como um pepino, tomate, repolho chinês, repolho, cebola galesa, cebola, cenoura, rabanete japonês, gengibre, pimentão verde, berinjela, abóbora e broto de feijão. Não há nenhum limite nos tipos de fungos que causam a doença pós-colheita e exemplos incluem Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides e Alternaria alternata.

[00168] Exemplos de nematódeos que as cepas AT-332 e AT-79 de Bacillus sp. da presente invenção podem controlar incluem Meloidogyne sp., tais como espécies de Meloidogyne hapla, Meloidogyne incognita, Meloidogyne javanica e Meloidogyne; Globodera spp., tais como Globodera rostochiensis e outras espécies de Globodera; Heterodera sp., tais como espécies de Heterodera avenae, Heterodera glycines, Heterodera schachtii, Heterodera trifolii e Heterodera; espécies de Anguiana que pertencem à Anguina funesta; espécies de Aphelenchoides; Belonolaimus longicaudatus e outras espécies que pertencem à Belonolaimus; Bursaphelenchus xilophilus que pertence à Bursaphelenchus xilophilus e outras espécies de Bursaphelenchus; espécies de Criconema, espécies de Criconemella, espécies de Criconemoides e espécies de Mesocriconema que pertencem à Criconemoides; Ditilenchus destructor, Ditilenchus dipsaci e outras espécies que pertencem à Ditilenchus; espécies de Dolichodorus que pertencem aos nematódeos de awl; Heliocotilenchus multicinctus que pertence à Helicotilenchus e outras espécies de Helicotilenchus; espécies de Hemicycliophora e espécies de Hemicriconemoides que pertencem a nematódeos tubulares e de estrutura tubular; espécies de Hirshmanniella; espécies de Hoploaimus que pertencem a Hoplolaimus; espécies de Nacobbus que pertencem à Nacobbus; Longidorus elongatus que pertence à Longidorus e outras espécies de Longidorus; Pratilenchus neglectus, Pratilenchus penetrans, Pratilenchus curvitatus, Pratilenchus goodeyi e outras espécies de Pratilenchus que pertencem à Pratylenchus sp.; Radopholus similis e outras espécies que pertencem à Radopholus; Rotilenchus robustus e outras espécies de Rotilenchus que pertencem à Rotilenchulus reniformis; Scutellonema species; Trichodorus primitivus e outras espécies de Trichodorus que pertence aos nematódeos da raiz curta e grossa; espécies de Paratrichodorus; Tilenchorhynchus claytoni, Tilenchorhynchus dubius e outras espécies que pertencem à Tilenchorhynchus; espécies de Tilenchulus que pertencem à Tilenchulus semipenetrans; e espécies de Xiphinema que pertencem à Xiphinema americanum, porém não limitadas a estas.

[00169] A cepa AT-332 e a cepa AT-79 de Bacillus sp. da presente invenção são especialmente úteis para controlar espécies de Meloidogyne, espécies de Globodera, espécies de Heterodera, espécies de Pratilenchus, espécies de Radopholus, espécies de Rotilenchus e espécies de Tilenchulus, e em particular podem ser usadas adequadamente para exterminar as espécies de Meloidogyne, espécies de Pratilenchus, espécies de Globodera e espécies de Heterodera.

[00170] Exemplos de culturas que a cepa AT-332 e cepa AT-79 de Bacillus sp. da presente invenção podem promover o crescimento incluem culturas de cereal tais como arroz, trigo e milho; vegetais tais como cenoura, pepino, rabanete japonês, abóbora, alface, berinjela, tomate, repolho, batata, repolho chinês, margarida coroa, mostarda japonesa, espinafre, pimentão verde, cebola galesa, cebola, gengibre, alho, morango; cogumelos tal como o cogumelo shiitake; árvores frutíferas, tais como caqui, pera, laranja, uva, maçã e pêssego; flores e plantas ornamentais tais como crisântemo, tulipa e rosa; e legumes tais como soja, gergelim e amendoim.

[00171] O agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e promotor de crescimento de planta da presente invenção contêm a cepa AT-332 e cepa AT-79 de Bacillus sp. que pode controlar as doenças de planta e nematódeos e têm um efeito de promoção do crescimento de planta como mencionado acima como um micro-organismo indicado.

[00172] No agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e promotor de crescimento de planta da presente invenção, a cepa AT-332 ou cepa AT-79 pode ser usada isoladamente ou em combinação. Da mesma forma, o mutante de cada dentre as cepas pode ser usado. O mutante é aquele que possui a propriedade bacteriológica supracitada da cepa AT-332 e AT-79 e uma atividade de controlar as doenças de planta, controlar nematódeos e promover o crescimento de planta. Uma cepa de mutante natural, uma cepa de mutante causada por raio ultravioleta ou agente químico de mutagênese, uma cepa de fusão de célula e uma cepa geneticamente modificada, ou similares, podem ser usadas.

[00173] Quando as bactérias vivas da cepa AT-332 e cepa AT-79 são usadas no agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e promotor de crescimento de planta da presente invenção é preferível adicionar as bactérias ao corpo da planta a uma concentração de 105 a 1010 unidades/ml.

[00174] Quando o produto de cultura da cepa AT-332 e/ou da cepa AT-79 é usado, a dosagem pode ser determinada adequadamente em casos individuais das bactérias viáveis supracitadas.

[00175] Como o agente microbiológico (o agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e promotor de crescimento de planta) da presente invenção, o e/ou de células de bactéria cultivam produto da cepa AT-332 e cepa AT-79 pode ser usada isoladamente. Ou o agente microbiológico pode ser diluído com um líquido inerte ou um veículo sólido ser usado como um agente farmacológico com adição do tensoativo, enquanto dispersando o agente e outro adjuvante como precisado. Exemplos de formulação específica incluem formulação granular, formulação de pó, pó umectável, o agente de suspensão e formulação de emulsão.

[00176] Exemplos de veículo incluem talco, bentonita, caulim, argila, terra diatomácea, carbono branco, vermiculita, hidrato de cal, sulfato de amônio, areia de sílica, ureia, veículo sólido poroso e veículos líquidos, tais como água, álcool isopropílico, metil naftaleno, xileno, cicloexanona e alquileno glicol. Exemplos do tensoativo e agente de dispersão incluem sais de ácido dinaftilmetanossulfônico, sais de éster de ácido sulfúrico de álcool, sais de ácido lignina sulfônico, sais de ácido alquilarilsulfônico, éteres de polioxietileno glicol, monoalquilato de polioxietileno sorbitano e éteres de polioxietileno alquilarila. Exemplos do adjuvante incluem carboximetilcelulose, polietileno glicol, propileno glicol, goma Arábica e goma xantana; e exemplos do agente crioprotetor incluem leite desnatado e agente de proteção de pH. A quantidade das bactérias vivas e/ou produto de cultura da cepa AT-332 e cepa AT-79, o tempo de aplicação e a quantidade de aplicação podem ser adequadamente determinados dependendo de cada caso das bactérias viáveis anteriores.

[00177] O agente microbiológico (agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e promotor de crescimento de planta) da presente invenção podem conter ingredientes ativos diferentes daqueles da presente invenção: isto é, inseticidas, outros agentes bactericidas, herbicidas, reguladores de crescimento de planta e fertilizantes. Da mesma forma, o agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e promotor de crescimento de planta da presente invenção podem conter a cepa de outras espécies em combinação com a cepa AT-332 e/ou cepa AT-79.

[00178] Exemplos dos componentes bactericidas incluem bitertanol, bromuconazol, ciproconazol, difenoconazol, diniconazol, enilconazol, epoxiconazol, fluquinconazol, fenbuconazol, flusilazol, flutriafol, hexaconazol, imibenconazol, ipconazol, metconazol, miclobutanil, penconazol, propiconazol, protioconazol, simeconazol, triadimefona, triadimenol, tebuconazol, tetraconazol, triticonazol, procloraz, pefurazoato, imazalil, triflumizol, ciazofamida, benomila, carbendazim, tiabendazol, fuberidazol, etaboxam, etridiazol, ácido fumárico de oxipoconazol, himexazol, azoxiestrobina, dimoxiestrobina,enestroburina, fluoxaestrobina, cresoxim-metila, metominostrobina, orizastrobina, picoxiestrobina, piracloestrobina, trifloxiestrobina, carboxina, benalaxila, boscalida, bixafeno, fenexamida, flutolanil, furametpir, mepronil, metalaxila, mefenoxam, ofurace, oxadixila, oxicarboxina, pentiopirade, tifluzamida, tianidil, dimetomorfe, flumorfe, flumetover, fluopicolida, carpropamida, diclocimete, mandipropamida, fluazinam, pirifenox, bupirimato, ciprodinil, fenarimol, ferinzona,mepanipirim, nuarimol, pirimetanil, triforina, fempiclonil, fludioxonil, aldimorfe, dodemorfe, fempropimorfe, tridemorfe, fempropidina,iprodiona, procimidona, vinclozolina, famoxadona, fenamidona,octilinona, probenazol, anilazina, diclomezina, piroquilona, proquinazida, triciclazol, captafol, captano, dazomete, folpete, fenoxanil, quinoxifeno, amissulbrom, manzebe, manebe, metam, metiram, ferbam, propinebe, tiuram, zinebe, ziram, dietofencarbe, iprovalicarbe, bentiavalicarb-isopropila, cloridrato de propamocarbe, tiofanato metila, piribencarbe, mistura de Bordeaux, cloreto de cobre básico, sulfeto de cobre básico, hidróxido cúprico, 8-hidroxiquinolina de cobre, dodina, albesilato de iminoctadina, acetato de iminoctadina, guazatina, casugamicina, estreptomicina, polioxina, oxitetraciclina, validamicina A, binapacrila, dinocape, dinobutona, ditianona, isoprotiolano, edifenfos, iprobenfos, fosetila, fosetil alumínio, pirasofos, tolclofos-metila, clorotalonil, diclofluanide, flussulfamida, hexiaclorobenzeno, ftalida, pencicurona, quintozeno, ciflufenamida, cimoxanil, dimetirimol, etirimol, furalaxila, metrafenona, espiroxamina, amobam, enxofre, enxofre de cal, eclomezol, bicarbonato de potássio, bicarbonato de cálcio, tiadiazina, tecloftalam, triazina, sulfonato de nonilfenol de cobre, hidróxi isoxazol, fluoroimida, policarbamato, metassulfocarbe, EDDP, IBP, tolfempirade, fluopiram, isotianil e isopirazam, porém não limitados a estes.

[00179] Exemplos dos componentes inseticidas incluem acetamiprida, pimetrozina, fenitrotiona, acefato, carbarila, metomila, cartape, cihalotrina, etofemprox, teflubenzurona, flubendiamida, flufenoxurona, tebufenozida, fempiroximato, piridabeno, imidacloprida, buprofezina, BPMC, MIPC, malationa, metidationa, fentiona, daiazinona, oxideprofos, vamidotiona, etiofencarbe, pirimicarbe, permetrina, cipermetrina, bifentrina, halfemprox, silafluofeno, nitempiram, clorfluazurona, metoxifenozida, tebufempirade, pirimidifeno, celtano, propargita, hexitiazox, clofentezina, espinosade, milbemectina, BT (Bacillus thuringiensis), indoxacarbe, metaflumizona, clorfenapir, fipronil, etoxazol, acequinocila, pirimifos-metila, acrinatrina, quinometionato, clorpirifos, abamectina, benzoato de emamectina, óxido de fembutatina, terbufos, etoprofos, cadusafos, fenamifos, fensulfotiona, DSP, diclofentiona, fostiazato, oxamila, isoamidofos, fostietano, isazofos, tionazina, benfuracarbe, espirodiclofeno, etiofencarbe, azinfos-metila, dissulfotona, metiocarbe, oxidemeton- metila, parationa, ciflutrina, beta-ciflutrina, tebupirimfos, espiromesifeno, endossulfano, amitraz, tralometrina, acetoprol, etiprol, etiona, triclorfona, metamidofos, diclorvos, mevinfos, monocrotofos, dimetoato, formetanato, formotiona, mecarbam, tiometona, nalede, metil parationa, cianofos, diamidafos, albendazol, oxibendazol, fembendazol, oxfendazol, propafos, sulprofos, protiofos, profenofos, isofenfos, temefos, fentoato, dimetilvinfos, clorfenvinfos, tetraclorvinfos, foxim, isoxationa, piraclofos, clorpirifos, piridafentiona, fosalona, fosmete, dioxabenzofos, quinalfos, piretrina, aletrina, praletrina, resmetrina, permetrina, teflutrina, fempropatrina, alfa-cipermetrina, lambda- cialotrina, delta-metrina, fenvalerato, esfenvalerato, flucitrinato, fluvalinato, cicloprotrina, tiodicarbe, aldicarbe, alanicarbe, metolcarbe, xililcarbe, propoxur, fenoxicarbe, fenotiocarbe, bifenazato, carbofurano, carbosulfano, enxofre, pirifluquinazona, furatiocarbe, diafentiurona, diflubenzurona, hexaflumurona, novalurona, lufenurona, clorfluazurona, hidróxido de tricicloexiltina, oleato de sódio, oleato de potássio, metoprene, hidroprene, binapacril, clorobenzilato, fenisobromolato, tetradifona, bensultape, benzomato, cromafenozida, halofenozida, endossulfano, diofenolano, tolfempirade, triazamato, sulfato de nicotina, tiacloprida, tiametoxam, clotianidina, dinotefurano, fluazinam, piriproxifeno, fluacripirim, hidrametilnona, ciromazina, TPIC, tiociclam, fenazaquina, complexo de polinactina, azadiractina, rotenona, amido de hidroxipropila, messulfenfos, fosfocarbe, aldoxicarbe, metam sódico, tartarato de morantel, dazomete, cloridrato de levamisol, triclamida, piridalila, clorantraniliprol, cienopirafeno e ciflumetofeno, porém não limitados a estes.

[00180] O agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e promotor de crescimento de planta da presente invenção podem ser diretamente aplicados visto que eles são ou aplicados como uma solução diluída com água e similares. O método de aplicação do agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e promotor de crescimento de planta da presente invenção não está particularmente limitado e exemplos dos mesmos incluem um método de pulverizar o agente diretamente sobre as plantas e pestes de inseto, um método de pulverizar o agente no solo, um método de adicionar o agente à água e fertilizante a ser aplicado em plantas e o solo e um método de revestir as sementes com o agente. Além disso, é desejável adequadamente ajustar a quantidade de aplicação do produto de fármaco visto que a quantidade de aplicação varia dependendo da doença e da peste de inseto a ser controlada, as culturas como o objeto da aplicação, o método de aplicação, tendência de ocorrência das doenças, grau do dano, condições ambientais e as formulações a serem usadas.

[00181] Como discutido acima, a cepa AT-332 e cepa AT-79 da presente invenção tem uma doença ampla e espectro nematicida e podem controlar vários tipos de doenças de planta e nematódeos, e podem promover o crescimento da planta. Visto que o agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e promotor de crescimento de planta da presente invenção compreendendo estas cepas são altamente seguros para o ambiente e têm efeitos de controle em vários tipos de doenças e nematódeos, o agente de controle de doença de planta pode prevenir uma ampla faixa de doenças e nematódeos sem usar outros meios em combinação e pode ser usado como um pesticida biológico e/ou fertilizante biológico que pode(m) promover o crescimento de plantas úteis também.

EXEMPLOS

[00182] A presente invenção será descrita em mais detalhes com o Exemplo de Produção, Exemplos de Formulação, Exemplos e Exemplos Comparativos, porém, a presente invenção não está limitada a estes exemplos.

Cultura da cepa AT-332 e cepa AT-79

[00183] A cepa AT-332 e a cepa AT-79 foram isoladas do solo contendo raízes de planta.

[00184] Em detalhes, 1 g de um solo seco obtido coletando-se o solo em Moriya City em Ibaraki Prefecture, Japão em Agosto de 2009 e submetendo-o ao tratamento com aquecimento (80°C, durante 10 minutos) foi suspenso na água esterilizada. A suspensão foi diluída com a taxa de diluição de 102 a 104 vezes e a cultura separada da suspensão foi realizada no meio de caldo nutriente (Eiken Chemical Co., Ltd.) (28°C, durante três dias) e as colônias formadas foram isoladas. As colônias isoladas foram cultivadas em um meio de batata dextrose ágar e as cepas eficazes em relação aos patógenos de várias doenças de planta foram encontradas. As cepas foram também submetidas à cultura de agitação em um meio líquido de batata dextrose, e a cepa AT-332 e cepa AT-79 de Bacillus sp. foram isoladas como uma cepa que tem uma atividade contra a larva de segundo estágio de Meloidogyne sp. de batata doce

[00185] O método para identificação de cada dentre as cepas, os vários métodos de análise e resultados dos mesmos, e propriedades bacteriológicas são aqueles descritos em "Modo para Realizar a Invenção".

Exemplo de Produção 1: Cultivo e preparação da cepa AT-332

[00186] Como uma pré-cultura, um sedimento das bactérias preservadas da presente invenção (cepa A-332) foi inoculado em 60 ml por frasco de um meio de caldo nutriente (disponível de Eiken Chemical Co., Ltd.) em um frasco cônico de 500 ml com tampa, e submetido à cultura de agitação usando um agitador giratório em 180 rpm e 28°C durante um dia.

[00187] 60 mL da cultura obtida pela pré-cultura anterior foraminoculados em um fermentador de jarro com um volume de 5000 ml contendo 2.000 ml de meio de LB (20 g de peptona, 10 g de extrato de fermento, 20 g de cloreto de sódio e água para o resto) e cultivados como a cultura principal em 500 rpm, taxa de aeração de 1 l/hora e 35°C durante três dias.

[00188] Cerca de 1.800 g da cultura foram obtidos pela cultura principal anterior. A concentração da célula de bactéria foi cerca de 8,0 x 109 CFU/ml.

[00189] Cerca de 140 g do pó seco foram obtidos congelando-se 1.800 g do produto de cultura obtido a -80°C, seguido secando-se por congelamento sob pressão reduzida e pulverização. A concentração da célula de bactéria do pó foi cerca de 1,0 x 1011 CFU/g.

Exemplo de Produção 2: Cultivo e preparação da cepa AT-79

[00190] Como uma pré-cultura, um sedimento das bactérias preservadas da presente invenção (cepa AT-79) foi inoculado em 60 ml por frasco de um meio de caldo nutriente (disponível de Eiken Chemical Co., Ltd.) em um frasco cônico de 500 ml com tampão, e submetido à cultura de agitação usando um agitador giratório em 180 rpm e 28°C durante um dia.

[00191] 60 ml da cultura obtida pela pré-cultura anterior foraminoculados em um fermentador de jarro com um volume de 5000 mL contendo 2.000 ml de meio de LB (20 g de triptona, 10 g de extrato de fermento, 20 g de cloreto de sódio e água para o resto) e cultivados como a cultura principal em 500 rpm, taxa de aeração de 1 l/hora e 35°C durante três dias.

[00192] Cerca de 1.700 g de cultura foram obtidos pela cultura principal anterior. A concentração de célula de bactéria do pó foi cerca de 9,0 x 109 CFU/g.

[00193] Cerca de 130 g do pó seco foram obtidos congelando-se 1.700 g do produto de cultura obtido a -80°C, seguido secando-se por congelamento sob pressão reduzida e pulverização. A concentração de célula de bactéria do pó foi cerca de 1,0 x 1011 CFU/g.

[00194] Exemplos de Formulação são determinados abaixo. Aqui, a palavra "parte(s)" significa uma parte(s) em massa.

Exemplo de Formulação 1: Pó Umectável

[00195] 60 partes do pó seco obtido pelo Exemplo de Formulação 1,25 partes de terra de diatomácea, 5 partes de carbono branco, 8 partes de sulfonato de lignina e 2 partes de sulfonato de alquil naftaleno foram misturadas e pulverizadas para desse modo obter o pó umectável.

Exemplo de Formulação 2: Formulação granular

[00196] 5 Partes do pó seco obtido pelo Exemplo de Formulação 1,25 partes de bentonita, 66 partes de talco, 2 partes de sulfonato de dodecilbenzeno e 2 partes de sulfonato de lignina foram misturadas e pulverizadas. Depois de adicionar cerca de 20 partes de água a isto e amassar a mistura por uma máquina de amassadura, o resultante foi granulado por um granulador e seco, e em seguida o tamanho dos grânulos foi regulado para obter uma formulação granular.

Exemplo de Formulação 3: Pó Umectável

[00197] 60 Partes do pó seco obtido pelo Exemplo de Formulação 2,25 partes de terra diatomácea, 5 partes de carbono branco, 8 partes de sulfonato de lignina e 2 partes de sulfonato de alquil naftaleno foram misturadas e pulverizadas para desse modo obter o pó umectável.

Exemplo de Formulação 4: Formulação granular

[00198] 5 Partes do pó seco obtido pelo Exemplo de Formulação 2,25 partes de bentonita, 66 partes de talco, 2 partes de sulfonato de dodecilbenzeno e 2 partes de sulfonato de lignina foram misturadas e pulverizadas. Depois de adicionar cerca de 20 partes de água a isto e amassar a mistura por uma máquina de amassadura, o resultante foi granulado por um granulador e secado, e em seguida o tamanho dos grânulos foi regulado para obter uma formulação granular.

[00199] Em seguida, Exemplos e Exemplos Comparativos para testar os efeitos do agente de controle de doença de planta, agente de controle de nematódeo e promotor de crescimento de planta da presente invenção são descritos abaixo.

Exemplo 1 e Exemplo 1 Comparativo: Teste para os efeitos em relação à explosão do arroz

[00200] As doses suficientes dos pós umectáveis diluídos nosExemplos de Formulação 1 e 3 com a taxa de diluição de 250 vezes foram pulverizadas com uma pistola de spray no arroz (variedade: Koshihikari, 15 plantas por hill) crescido em uma estufa para o estágio de desdobramento da terceira folha em um pote de plástico de 6 cm em diâmetro. Como um exemplo comparativo, o pó umectável de Impression (produzido por SDS Biotech K.K.) com a taxa de diluição de 250 vezes foi da mesma forma submetido ao teste da mesma maneira. No dia seguinte, a suspensão dos esporos do patógeno da explosão de arroz (Pyricularia oryzae) foi pulverizada e inoculada. Depois de manter os potes em um ambiente de umidade a 22°C durante 24 horas, os potes foram permitidos manter-se em estufa sete dias e o número de lesões nas folhas inoculadas foi investigado para desse modo determinar o valor preventivo. O valor preventivo (%) foi calculado com base no número de lesões das folhas na região não tratada. Como pode ser visto a partir dos resultados mostrados na Tabela 1, pelo tratamento com o agente microbiológico da presente invenção, a incidência da explosão de arroz foi muito reduzida em comparação à região não tratada, e os efeitos de controle significativamente altos foram obtidos. Tabela 1

Exemplo 2 e Exemplo 2 Comparativo: Teste para os efeitos em antracnose do pepino

[00201] Doses suficientes dos pós umectáveis nos Exemplos de Formulação 1 e 3 com a taxa de diluição de 250 vezes foram pulverizadas por uma pistola de spray na primeira e segunda folhas de pepinos (variedade: Tokiwa Hikari No. 3 tipo p) crescidas em uma estufa para o estágio de desdobramento da terceira folha em um pote de plástico de 6 cm em diâmetro. Como um exemplo comparativo, o diluente do pó umectável de Impression (produzido por SDS Biotech K.K.) com a taxa de diluição de 250 vezes foi da mesma forma submetido ao teste da mesma maneira. No dia seguinte, a suspensão dos esporos de Colletorichum lagenarium do pepino foi pulverizada e inoculada. Depois de manter os potes em um ambiente de umidade a 22°C durante 24 horas, os potes foram permitidos manter-se em estufa durante sete dias e a taxa da área doente na primeira e segunda folhas foram investigados com olhos para desse modo determinar o valor preventivo. O valor preventivo (%) foi calculado com base na taxa da área doente na região sem tratamento. Como pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 2, pelo tratamento com o agente microbiológico da presente invenção, a incidência de Colletorichum lagenarium do pepino foi muito reduzida em comparação à região não tratada, e os efeitos de controle significativamente altos foram obtidos.Tabela 2

Exemplo 3 e Exemplo 3 Comparativo: Teste para os efeitos emPhytophthora infestans no tomate

[00202] Doses suficientes dos pós umectáveis nos Exemplos de Formulação 1 e 3 com a taxa de diluição de 250 vezes foram pulverizadas por uma pistola de spray nos tomates (variedade: Bloco de açúcar) crescidos em uma estufa para o estágio de desdobramento da quinta folha em um pote de plástico de 6 cm em diâmetro. Como um exemplo comparativo, o diluente do pó umectável de Impression (produzido por SDS Biotech K.K.) com a taxa de diluição de 250 vezes foi da mesma forma submetido ao teste da mesma maneira. No dia seguinte, a suspensão dos zoósporos de Phytophthora infestans no tomate foi pulverizada e inoculada. Depois de manter os potes em um ambiente de umidade a 22°C durante 16 horas, os potes foram permitidos manterem- se em estufa três dias e a taxa da área doente na terceira, quarta e quinta folhas foi investigada com olhos para desse modo determinar o valor preventivo. O valor preventivo (%) foi calculado com base na taxa da área doente na região sem tratamento. Como pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 3, pelo tratamento com o agente microbiológico da presente invenção, a incidência de Phytophthora infestans no tomate foi muito reduzida em comparação à região não tratada, e os efeitos de controle significativamente altos foram obtidos. Tabela 3

Exemplo 4 e Exemplo 4 Comparativo: Teste para os efeitos emPseudoperonospora cubensis no pepino

[00203] Doses suficientes dos pós umectáveis nos Exemplos de Formulação 1 e 3 com a taxa de diluição de 250 vezes foram pulverizadas por uma pistola de spray nos pepinos (variedade: Hikari No. 3 tipo p) crescidos em uma estufa para o estágio de desdobramento da terceira folha em um pote de plástico de 6 cm em diâmetro. Como um exemplo comparativo, o diluente do pó umectável de Impression (produzido por SDS Biotech K.K.) com a taxa de diluição de 250 vezes foi da mesma forma submetido ao teste da mesma maneira. No dia seguinte, a suspensão de zoósporos de Pseudoperonospora cubensis no pepino foi pulverizada e inoculada. Depois de manter os potes em um ambiente de umidade a 22°C durante 18 horas, os potes foram permitidos manter-se em estufa três dias e a taxa da área doente na primeira e segunda folhas foi investigada com olhos para desse modo determinar o valor preventivo. O valor preventivo (%) foi calculado com base na taxa da área doente na região sem tratamento. Como pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 4, pelo tratamento com o agente microbiológico da presente invenção, a incidência de Pseudoperonospora cubensis no pepino foi muito reduzida em comparação à região não tratada, e os efeitos de controle significativamente altos foram obtidos. Tabela 4

Exemplo 5 e Exemplo 5 Comparativo: Teste para os efeitos em AltenariaAlternaria mali na maçã

[00204] Folhas de maçãs (variedade: Orin) foram coletadas e as doses suficientes dos pós umectáveis nos Exemplos de Formulação 1 e 3 com a taxa de diluição de 250 vezes foram pulverizadas por uma pistola de spray no lado da parte de trás das folhas. Como um exemplo comparativo, o diluente do pó umectável de Impression (produzido por SDS Biotech K.K.) com a taxa de diluição de 250 vezes foi da mesma forma submetido ao teste da mesma maneira. Depois de pulverizar, as folhas foram secadas ao ar e a suspensão dos esporos de Altenaria Alternaria mali na maçã foi também pulverizada e inoculada. Depois que as folhas foram deixadas manter-se a 20°C em condição úmida durante quatro dias, a taxa da área doente foi investigada com olhos para desse modo determinar o valor preventivo. O valor preventivo (%) foi calculado com base na taxa da área doente na região sem tratamento. Como pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 5, pelo tratamento com o agente microbiológico da presente invenção, a incidência de Altenaria Alternaria mali na maçã foi muito reduzida em comparação à região não tratada, e os efeitos de controle significativamente altos foram obtidos. Tabela 5

Exemplo 6 e Exemplo Comparativo 6: Teste para os efeitos em Sphaerotheca fuliginea do pepino (Teste em campo)

[00205] O teste foi realizado na estufa de propriedade da companhia usando pepinos (região de teste: 4 m2/região; 10 plantas/região; em triplicata). A doença foi permitida ocorrer naturalmente. O pó umectável nos Exemplos de Formulação 1 e 3 com a taxa de diluição de 500 vezes, foi pulverizado 1.000 vezes e 2.000 vezes quatro vezes em intervalos de sete dias e o valor preventivo (%) foi calculado a partir da taxa da área de doença nas folhas. O pó umectável de Impression (SDS Biotech K.K.) com a taxa de diluição de 500 vezes e 1.000 vezes, pó umectável de Botokiller (Idemitsu Kosan Co., Ltd.) com a taxa de diluição de 1.000 vezes, pó umectável de Botopika (Idemitsu Kosan Co., Ltd.) com a taxa de diluição de 2.000 vezes, grânulo dispersível em água de Ecoshot (Kumiai Chemical Industry Co., Ltd.) com a taxa de diluição de 1.000 vezes e pó umectável de Morestan (Agro-Kanesho Co., Ltd.) com a taxa de diluição de 3.000 vezes foram usados como um agente comparativo. A incidência da doença na região não tratada foi de 47,4%. O valor preventivo (%) foi calculado com base na incidência na região sem tratamento. Como pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 6, pelo tratamento com o agente microbiológico da presente invenção, a incidência de Sphaerotheca fuliginea do pepino foi muito reduzida em comparação à região não tratada, e os efeitos de controle significativamente altos foram obtidos. Um efeito notavelmente mais alto foi bem confirmado no campo quando comparado aos agentes de Bacillus subtilis comercialmente disponíveis convencionais (pó umectável de Impression (Documento de Patente 3), pó umectável de Botokiller, pó umectável de Botopica, grânulo dispersível em água de Ecoshot (Documento de Patente 4)) usados como um agente comparativo. O agente microbiológico da presente invenção com a taxa de diluição de 500 vezes mostrou um efeito muito alto equivalente ao pó umectável de Morestan que é um agente químico. Tabela 6

Exemplo 7 e Exemplo Comparativo 7: Teste para os efeitos em Botrytis cinerea da berinjela (Teste em campo)

[00206] O teste foi realizado na estufa de propriedade da companhia usando berinjelas (região de teste: 5,6 m2/região; 7 plantas/região; em triplicata). A doença foi permitida ocorrer naturalmente. O pó umectável nos Exemplos de Formulação 1 e 3 com a taxa de diluição de 500 vezes e 1.000 vezes foi pulverizado quatro vezes em intervalos de sete dias e o valor preventivo (%) foi calculado a partir da incidência nas frutas. O pó umectável de Impression (SDS Biotech K.K.) com a taxa de diluição de 500 vezes e 1.000 vezes, pó umectável de Botokiller (Idemitsu Kosan Co., Ltd.) com a taxa de diluição de 1.000 vezes, pó umectável de Botopika (Idemitsu Kosan Co., Ltd.) com a taxa de diluição de 2.000 vezes, grânulo dispersível em água de Ecoshot (Kumiai Chemical Industry Co., Ltd.) com a taxa de diluição de 1.000 vezes e Savior Flowable 20 (Syngenta Japan K.K.) com a taxa de diluição de 1.500 vezes foram usados como um agente comparativo. A incidência da doença na região não tratada foi de 15%. O valor preventivo (%) foi calculado com base na incidência na região sem tratamento. Como pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 7, pelo tratamento com o agente microbiológico da presente invenção, a incidência de Botrytis cinerea foi muito reduzida em comparação à região não tratada, e os efeitos de controle significativamente altos foram obtidos. Um efeito notavelmente mais alto foi bem confirmado no campo quando comparado aos agentes de Bacillus subtilis comercialmente disponíveis convencionais (pó umectável de Impression, pó umectável de Botokiller, pó umectável de Botopica, grânulo dispersível em água de Ecoshot) usados como um agente comparativo. O agente microbiológico da presente invenção com a taxa de diluição de 500 vezes mostrou um efeito muito alto equivalente para Savior Flowable 20 que é um agente químico. Tabela 7

Exemplo 8 e Exemplo Comparativo 8: Teste para os efeitos em Burkholderia plantarii

[00207] O arroz com semente (variedade: Koshihikari) foi imerso para ser inoculado na suspensão de Burkholderia plantarii (1 x 108 CFU/ml), que foi obtida pela cultura de agitação no meio líquido PD a 27°C durante 52 horas durante uma hora sob pressão reduzida para desse modo preparar as sementes infectadas com Burkholderia plantarii. As sementes infectadas com Burkholderia plantarii foram imersas na solução de pó umectável do Exemplo de Formulação 1 e Exemplo de Formulação 3 com a taxa de diluição de 100 vezes. Depois que a solução foi removida, as sementes foram mantidas em um ambiente com umidade de 32 °C durante um dia para estimular a germinação. Como um agente comparativo, a solução de Impression (SDS Biotech K.K.) com a taxa de diluição de 100 vezes foi da mesma forma submetida ao teste da mesma maneira. As sementes estimuladas pela germinação foram semeadas em uma xícara de plástico tendo um diâmetro de 6 cm preenchidas com solo de cultura. As mudas foram mantidas em um ambiente para suspender as mudas a 30°C durante três dias depois de semear e em um ambiente de umidade a 25°C durante 15 dias. Em seguida, todas as mudas foram investigadas quanto à presença da doença para determinar a taxa de muda doente. O valor preventivo (%) foi calculado com base na taxa de muda doente na região não tratada. A quantidade da semeadura por xícara foi de 3 g de arroz de semente seca (90 a 110 grãos). Como pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 8, pelo tratamento com o agente microbiológico da presente invenção, a taxa das mudas doentes de Burkholderia plantarii foi muito reduzida em comparação à região não tratada, e os efeitos de controle significativamente altos foram obtidos. Tabela 8

Exemplo 9 e Exemplo Comparativo 9: Teste para o efeito emRhizoctonia solani.

[00208] 3 g do produto de cultura de Rhizoctonia solani em ummeio de farelo de trigo foram misturados em 500 ml de solo esterilizado a ser preenchido em um pote de plástico, e 1 g da formulação granular do Exemplo de Formulação 2 e Exemplo de Formulação 4 foi misturado no solo, respectivamente. Como um agente comparativo, 84 mg de pó umectável de Impression foram da mesma forma submetidos ao teste da mesma maneira. Pepinos (variedade: Sagami-hanjiro) foram semeados e depois de cultivar os pepinos a 23°C durante uma semana, a taxa de germinação foi investigada. O efeito de controle (% do título de controle) foi calculado com base na taxa da semeadura doente na região não tratada. Como pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 9, pelo tratamento com o agente microbiológico da presente invenção, a taxa das semeaduras doentes de Rhizoctonia solani foi muito reduzida em comparação à região não tratada, e os efeitos de controle significativamente altos foram obtidos. Tabela 9

Exemplo 10 e Exemplo Comparativo 10: Atividade contra a larva de segundo estágio de Meloidogyne sp. de batata doce

[00209] A atividade nematicida em relação à larva de segundo estágio de Meloidogyne sp. de batata doce chocada dentro de 24 horas da cápsula de ovo coletada das raízes de berinjelas (variedade: Juryo). Cada uma das soluções da Formulação 1 e Formulação 3 com a taxa de diluição de 100 vezes (uma solução Tween 20 com a taxa de diluição de 5.000 vezes) e uma quantidade equivalente da larva de segundo estágio de Meloidogyne sp. de batata doce (aproximadamente 50 minhocas) foi adicionada a uma microplaca de 24 orifícios. Como um agente comparativo, a solução de Impression (SDS Bioteck K.K.) com a taxa de diluição de 100 vezes foi da mesma forma submetida ao teste da mesma maneira. A placa foi selada e colocada em uma incubadora a 28°C e umidade relativa de cerca de 50%. Depois de 72 horas, o índice de mortalidade foi investigado por uma observação por um microscópio estereoscópico. Naquele momento, os nematódeos imóveis foram considerados como estando mortos. A taxa nematicida foi calculada de acordo com a expressão descrita abaixo. Como pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 10, pelo tratamento com o agente microbiológico da presente invenção, uma atividade nematicida extremamente alta foi obtida em relação à larva de segundo estágio de Meloidogyne sp. de batata doce. Expressão 1 Taxa nematicida = (número de nematódeos mortos / número de nematódeos testados) x 100 Tabela 10

Exemplo 11 e Exemplo Comparativo 11 (Teste para o efeito de controle contra Meloidogyne sp. de batata doce

[00210] Em um pote 1/10.000 a-Wagner, cada uma da formulação granular do Exemplo de Formulação 2 e Exemplo de Formulação 4 foi uniformemente misturada no solo infectado com Meloidogyne sp. de batata doce na taxa de 40 kg/10 e um tomate de tamanho pequeno (variedade: Bloco de açúcar) foi plantado neste. Como um agente comparativo, pó umectável de Impression (SDS Biotech K.K.) foi da mesma forma submetido ao teste da mesma maneira na taxa de 3,3 kg/10 a. Um mês depois da plantação assentada, o grau de dano às raízes (grau do nódulo da raiz) foi classificado e avaliado de acordo com os critérios descritos abaixo. O índice do nódulo da raiz foi determinado de acordo com a expressão como abaixo para calcular o título de controle. Como pode ser visto a partir dos resultados na Tabela 11, pelo tratamento com o agente microbiológico da presente invenção, os danos da raiz causados por Meloidogyne sp. de batata doce foram muito reduzidos em comparação à região não tratada, e os efeitos de controle significativamente altos foram obtidos.

[00211] Grau de dano 0: Nenhum nódulo da raiz foi observado. 1: Os nódulos da raiz são à primeira vista dificilmente notáveis, porém, alguns podem ser encontrados. 2: Alguns nódulos da raiz são observados. 3: Quantidade moderada dos nódulos da raiz é observada. 4: Vários nódulos da raiz são observados por toda parte da rizosfera. Expressão 2 Índice do nódulo da raiz = (S (grau do dano x número de unidades)/toda a população investigada x 4) x 100 Valor preventivo = (1 - Índice do nódulo da raiz na região tratada/Índice do nódulo da raiz na região não tratada) x 100 Tabela 11

Exemplo 12 e Exemplos Comparativos 12 a 13: Efeito de promover o crescimento da planta da cepa AT-332 (teste básico)

[00212] Um teste básico em placa de petri foi realizado com respeito à Arabidopsis thaliana para medir o efeito da promoção do crescimento de planta da cepa A-332. Depois de imergir as sementes de Arabidopsis thaliana em hipoclorito de sódio a 1% durante 20 minutos, as sementes são imersas em solução de etanol a 70% durante dois minutos para esterilizarem a superfície das sementes. Depois disso, as sementes foram lavadas com água destilada estéril a ser usada para o teste. Um meio de sal de Murashige e Skoog (pH 5,7) contendo ágar a 0,8% foi vertido em uma placa de petri estéril de divisão dual e usado para um teste depois de ser resfriado.

[00213] As AT-332 (Exemplo 12), Bacillus subtilis GB03 (Exemplo Comparativo 12) e Bacillus subtilis MBI600 (Exemplo Comparativo 13) foram inoculadas respectivamente em um disco de papel estéril colocado em uma das porções divididas da placa de petri acima, e as sementes germinadas de Arabidopsis thaliana foram inoculadas na outra porção da placa de petri. A placa inoculada com as bactérias e Arabidopsis thaliana foi mantida a 22°C (12 horas na luz/12 horas sendo cortadas da luz) durante dez dias e o estado de crescimento da planta foi observado. Os resultados são mostrados em fotografias (a) a (d) na Figura 2 incluindo os resultados do controle (Figura 2 (a)) onde as bactérias não foram inoculadas. Um efeito notável de promover o crescimento de planta foi confirmado com a AT-332 (Exemplo 12; (b)) em comparação ao Bacillus subtilis GB03 (Exemplo Comparativo 12; fotografia (c)) e Bacillus subtilis MBI600 (Exemplo Comparativo 13; fotografia (d)), que são realmente vendidos e usados no mercado dos Estados Unidos.

Exemplo 13: Efeito de promover o crescimento de planta das cepas AT- 332 e AT-79 (teste em pote)

[00214] Um teste em pote foi realizado com respeito às mudas de repolho chinês para medir o efeito de promoção de crescimento de planta das cepas AT-332 e AT-79. Depois de cultivar as cepas AT-332 e AT-79 em um meio de LB líquido durante 24 horas, as células de bactéria foram coletadas por centrifugação. As células de bactéria coletadas foram suspensas em uma solução aquosa de cloreto de sódio a 0,85% a estar contida em uma concentração de 1 x 109 CFU/ml. 40 ml da suspensão foram misturados por 1kg do solo de cultura previamente esterilizado para servir como o solo tratado. Por outro lado, 40 ml de solução aquosa de cloreto de sódio a 0,85% foram misturados por 1 kg do solo de cultura previamente esterilizado para servir como o solo não tratado. 100 g de cada solo tratado e solo não tratado foram postos em um pote de plástico (70 mm em diâmetro x 68 mm em altura) respectivamente, e as sementes de repolho chinês (variedade: Repolho Chinês Nozaki No. 2) foram semeadas no pote. Subsequentemente, os potes foram colocadas em estufa mantida a 22°C e o peso fresco do repolho chinês crescido foi medido depois de 30 dias. Os resultados são mostrados na Figura 3. Um efeito explícito de promover o crescimento de cultura das cepas AT-332 e AT-79 foi confirmado.

Claims

1. Bactéria da Cepa de Bacillus sp. AT-332, caracterizada pelo fato de que apresenta o número de acesso NITE BP-1095 e contém 16S rDNA definido pela SEQ ID NO: 2, e em que a bactéria é estabilizada numa forma seca e com carbono branco.

2. Bactéria da cepa de Bacillus sp. AT-79, caracterizada pelo fato de que apresenta o número de acesso NITE BP-1094 e contém 16S rDNA definido pela SEQ ID NO: 3, e em que a bactéria é estabilizada numa forma seca e com carbono branco.

3. Bactéria, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a bactéria per se mostra um efeito de controlar doenças de planta, controlar nematódeos e/ou promover o crescimento de planta.

4. Agente microbiológico, caracterizado pelo fato de que contém:bactérias selecionadas do grupo que consiste em: a) Bacillus sp. cepa AT-332, em que apresenta o número de acesso NITE BP-1095 e contém 16S rDNA definido pela SEQ ID NO: 2; e (b) Bacillus sp. cepa AT-79, em que apresenta o número de acesso NITE BP-1094 e contém 16S rDNA definido pela SEQ ID NO: 3; e/ou cultura da referida bactéria; e um líquido inerte ou um veículo sólido;carbono branco; eágua.

5. Agente microbiológico, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que é um agente de controle de doença de planta.

6. Agente microbiológico, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que é um agente de controle de nematódeo.

7. Agente microbiológico, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que é um promotor de crescimento de planta.

8. Método para cultivar as plantas, caracterizado pelo fato de que consiste em tratar as plantas com o agente microbiológico como definido em qualquer uma das reivindicações 4 a 7, em que o agente contém água como um líquido inerte e tem as bactérias em uma concentração de 105 a 1010 unidades/ml.