CN111778190B - 一株防治根结线虫病的短短芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一株防治根结线虫病的短短芽孢杆菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111778190B
CN111778190B CN202010685127.7A CN202010685127A CN111778190B CN 111778190 B CN111778190 B CN 111778190B CN 202010685127 A CN202010685127 A CN 202010685127A CN 111778190 B CN111778190 B CN 111778190B
Authority
CN
China
Prior art keywords
microbial inoculum
strain
culture
knot nematode
root knot
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010685127.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111778190A (zh
Inventor
莫明和
刘鲁民
王瑞宾
陈佳清
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Dianlu Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Shandong Dianlu Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Dianlu Biotechnology Co ltd filed Critical Shandong Dianlu Biotechnology Co ltd
Priority to CN202010685127.7A priority Critical patent/CN111778190B/zh
Publication of CN111778190A publication Critical patent/CN111778190A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111778190B publication Critical patent/CN111778190B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/08—Bacillus brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及一株短短芽孢杆菌及其应用，属于微生物农药、微生物肥料技术领域。短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)DL01菌株，DL01菌株已于2020年6月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCC No.20096。本发明的微生物菌体及其代谢产物，能与农药常规吸附载体和助剂混合制成DL01菌剂。DL01菌株在制备用于防治根结线虫病的菌剂中的应用。利用DL01菌株制备的菌剂，能高效防治中药材根结线虫病，具有使用成本低、防效高、无残留、对人畜安全的特点。

Description

一株防治根结线虫病的短短芽孢杆菌及其应用
技术领域：
本发明涉及一株短短芽孢杆菌在防治北方根结线虫病方面的应用，属微生物农药、微生物菌剂技术领域。
背景技术：
作物病原线虫在全球每年造成的直接经济损失高达1570亿美元，其中危害最重、造成损失最大的是根结线虫，在中药材上的危害和损失尤其突出。目前，我国中药材种植面积 66.7万hm2以上，中药材产区1000余个，中药材种植已经成为我国很多地方农民脱贫致富的主要经济来源。三七、西洋参和人参是中药材的当家品种；近年来，北方根结线虫(Meloidogyne hapla)在这三种药材上展蔓延迅速、泛滥成灾，常年发病率在20％以上，减产率35％以上，甚至绝产。化学杀线虫剂的使用引起了严重的农药残留问题，严重制约我国中药产品走向国际市场，直接影响了中药在国际市场上的竞争力。近年来受到国际贸易中绿色、技术等贸易壁垒的影响，中药产品的出口贸易现状不容乐观。针对药材根结线虫病，开发高效、安全生物防治技术迫在眉睫。
短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)是一种具有拮抗多种植物病原真菌、细菌和线虫的生防菌，它能够分泌短杆菌肽(gramieidin)、短杆菌酪肽(tyrocidine)、胞外多糖、几丁质酶以及羟苯乙酯等多种抗菌物质抑制病原菌生长(陕西科技大学学报，2017,5:145-155)；也有报道称短短芽孢杆菌对爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)二龄幼虫有很好的杀灭效果 (Journal of Zhejiang University Science，2005，6B(6):496-501)，对南方根结线虫(Meloidogyne incogntta)引起的黄瓜根结线虫病有很好的防效(中国农业科学，2016,49:2945-2954)。然而，目前短短芽孢杆菌对北方根结线虫的活性及其在中药材上的应用未见报道，进而凸显本发明所用微生物的功能特异性。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术之不足，而提供一种防治北方根结线虫病的生防细菌。
本发明具体是这样实现的：
本发明人采用细菌传统分离方法，从采自云南省文山州的三七块茎中分离内生细菌，以感染三七的北方根结线虫二龄幼虫(J2)为靶标，筛选获得了对J2具有杀灭活性的细菌短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)DL01菌株。DL01菌株已于2020年6月16日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院 3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏号：CGMCC No.20096，分类命名：短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)。
DL01菌株为革兰氏阳性或革兰氏染色不定的严格好氧细菌，具有运动性，细胞杆状，长0.7-0.9μm，宽3.0–5.0μm，细胞单生或成对生长。椭球形的芽孢位于细胞近端部的孢囊内。在牛肉膏蛋白胨培养基上培养24-36h后形成直径为1-3mm的菌落，菌落有光泽、油脂状，淡黄色。DL01菌株的过氧化氢酶和氧化酶呈阳性，硝酸盐还原反应呈阳性；能够水解干酪素、DNA、明胶和吐温60，但不能水解淀粉和尿素。DL01菌株的生长适宜温度范围在25-37℃，在pH 6.0-9.0的范围内能生长，最适生长pH为6.0-7.0；DL01菌株在牛肉膏蛋白胨培养基上耐受NaCl的最高浓度为5％(w/v)。DL01菌株能利用D-果糖、D-葡萄糖、甘油、麦芽糖、甘露醇、核糖、海藻糖及一些其它的碳水化合物。DL01菌株基因组的G+C 含量为48.7mol％；利用通用引物27f和1492r经PCR扩增DL01菌株的16S rRNA基因获得的序列在GeneBank公共数据库的序列号为JF899267，此序列和基因组的G+C含量是鉴定该菌株的主要分子特征依据。
一株防治根结线虫病的短短芽孢杆菌的应用，该芽孢杆菌在制备用于防治根结线虫病的菌剂中的应用。
一株防治根结线虫病的短短芽孢杆菌的制剂包括如下步骤：
1)DL01菌株试管斜面种子培养：将该菌株接种到LB培养基斜面上，28-32℃下培养1-3天后获得斜面种子；
2)DL01菌株液体种子培养：将斜面种子接种到装有牛肉膏蛋白胨液体培养基的三角瓶中，28-32℃，150-180rpm条件下摇床培养2-3天获得液体种子；
3)DL01菌株发酵罐大量培养：将液体种子按体积比为3％的比例接入1000升发酵罐中的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，培养条件控制在：温度32℃，搅拌速度150rpm，发酵时间72小时。
4)DL01菌剂制备：经发酵罐培养获得的微生物菌体及其代谢物与2倍体积的硅藻土混合后在65℃以下烘干或晾干至水分含量小于5％，粉碎后制成；DL01菌株在菌剂中的活菌数含量在3×109CFU/克以上。
所述步骤1)的培养条件为30℃下培养2天。
所述步骤2)的培养条件为30℃下培养2天。
本发明的有益效果在于：
本发明人从三七内生菌中筛选到的短短芽孢杆菌DL01菌株对北方根结线虫的卵和二龄幼虫有很好的活性，盆栽和田间试验亦表现出良好的防效。然而，目前短短芽孢杆菌对北方根结线虫的活性及其在中药材上的应用未见报道，进而凸显本发明所用微生物的功能特异性。
1、利用DL01菌株制备的菌剂对中药材北方根结线虫病的防效可达70％以上。
2、利用DL01菌株制备的菌剂，能高效防治中药材根结线虫病，具有使用成本低、无残留、对人畜安全的特点。
具体实施方式：
下面结合实施例对本发明作进一步的详述。实施例中的微生物菌剂，按微生物发酵常规方法及微生物菌剂制备常规方法制成。
实施例1
DL01菌株的培养及菌剂制备
1)DL01菌株试管斜面种子培养：将该菌株接种到LB培养基斜面上，28℃下培养1天后获得斜面种子。
2)DL01菌株液体种子培养：将斜面种子接种到装有牛肉膏蛋白胨液体培养基的三角瓶中，28℃，150-180rpm条件下摇床培养2天获得液体种子。
3)DL01菌株发酵罐大量培养：将液体种子按3％(V/V)的比例接入发酵罐中的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在1000升发酵罐中的培养条件控制在：温度32℃，搅拌速度150rpm，发酵时间72小时。
4)DL01菌剂制备：经发酵罐培养获得的微生物菌体及其代谢物与适量的硅藻土混合后在65℃以下烘干或晾干至水分含量小于5％，粉碎后制成。DL01菌株在菌剂中的活菌数含量在3.5×109CFU/克。
实施例2
DL01菌株的培养及菌剂制备
1)DL01菌株试管斜面种子培养：将该菌株接种到LB培养基斜面上，培养条件为30℃下培养2天后获得斜面种子。
2)DL01菌株液体种子培养：将斜面种子接种到装有牛肉膏蛋白胨液体培养基的三角瓶中，培养条件为30℃下培养2天获得液体种子。
3)DL01菌株发酵罐大量培养：将液体种子按3％(V/V)的比例接入发酵罐中的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在1000升发酵罐中的培养条件控制在：温度32℃，搅拌速度150rpm，发酵时间72小时。
4)DL01菌剂制备：经发酵罐培养获得的微生物菌体及其代谢物与适量的硅藻土混合后在65℃以下烘干或晾干至水分含量小于5％，粉碎后制成。DL01菌株在菌剂中的活菌数含量为4.0×109CFU/克。
实施例3
DL01菌株的培养及菌剂制备
1)DL01菌株试管斜面种子培养：将该菌株接种到LB培养基斜面上，32℃下培养3天后获得斜面种子；
2)DL01菌株液体种子培养：将斜面种子接种到装有牛肉膏蛋白胨液体培养基的三角瓶中，32℃，150-180rpm条件下摇床培养3天获得液体种子；
3)DL01菌株发酵罐大量培养：将液体种子按体积比为3％的比例接入1000升发酵罐中的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，培养条件控制在：温度32℃，搅拌速度150rpm，发酵时间72小时。
4)DL01菌剂制备：经发酵罐培养获得的微生物菌体及其代谢物与2倍体积的硅藻土混合后在65℃以下烘干或晾干至水分含量小于5％，粉碎后制成；DL01菌株在菌剂中的活菌数含量在3.0×109CFU/克。
实施例4
DL01菌剂对北方根结线虫卵和二龄幼虫的杀灭效果的室内生测
线虫制备：从云南省澜沧县林下三七种植基地采集感染北方根结线虫的三七病株,从根瘤中分离获得卵，浓度约100粒/微升。将部分卵于28℃下孵化5-7天,经漏斗过滤和离心浓缩后获得北方根结线虫二龄幼虫(J2),浓度约200条/微升。
试验处理：将实施例1所得活菌数含量为3.5×109CFU/克的DL01菌剂用自来水分别稀释800倍、1000倍和1200倍，取2毫升稀释液于塑料平皿中，每皿中加入5微升卵悬液或5微升J2悬液，以自来水替代DL01菌剂稀释液为对照，每处理3个重复。
检测方法：对测试杀卵活性的处理，将所有平皿在室内放置24小时，离心去除上清液后收集卵，将卵放入原来的平皿，进入2毫升自来水，28℃下孵化5天后分别计数未孵化的卵粒数，按公式计算卵孵化抑制率。对测试杀J2活性的处理，将所有平皿在室内放置24小时，计数各处理的J2死亡数量，按公式计算J2死亡率。
卵孵化抑制率(％)＝(处理中未孵化卵粒数-对照中未孵化卵粒数)/计数卵粒总数×100
J2死亡率(％)＝(处理中J2死亡数-对照中J2死亡数)/计数线虫总数×100
试验结果：表1显示DL01菌剂对北方根结线虫的卵和J2有很好的杀灭活性，用DL01菌剂稀释800、1000、1200倍处理卵和J2，24小时时对卵的孵化抑制率分别为100％、95.27％和84.62％；对J2的致死率分别为100％、100％和92.51％。
表1.DL01菌剂对北方根结线虫卵和二龄幼虫(J2)的活性
Figure BDA0002587274080000041
注：同一列数据后的字母相同表示差异不显著，反之差异显著。
实施例5
DL01菌剂防治三七根结线虫病的田间试验
试验地点：云南省澜沧县林下三七种植基地。
试验作物：三七。
供试药剂：实施例3所得DL01菌剂，活菌数含量为3.0×109个/克，按本发明上述方法制备；10％噻唑膦颗粒剂。
试验方法：设如下五个处理，每处理3个重复，每重复500株三七。
处理1：DL01菌剂1公斤/亩。整地时，将菌剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理2：DL01菌剂3公斤/亩。整地时，将菌剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理3：DL01菌剂5公斤/亩。整地时，将菌剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理4：10％噻唑膦颗粒剂2公斤/亩。整地时，将颗粒剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理5：不施用任何杀线虫药剂的空白对照。
各处理的药剂均匀混入耕作层土壤中，按常规方法移栽三七苗和进行肥水管理。三七苗生长180天时，各处理随机拔出100株三七，对根瘤进行分级和统计，计算病情指数和防效。
根瘤分级标准如下:
0级：无根瘤；1级：1-20％的根系有根瘤；2级：21-40％的根系有根瘤；3级：41-60％的根系有根瘤；4级：61-80％的根系有根瘤；5级：81-100％的根系有根瘤)。
病情指数(％)＝(n1×1+n2×2+n3×3+n4×4+n5×5)/(S×5)×100
n1-n5分别代表根瘤病级指数1-5级相应的植株总数，S代表调查的植株总数。
防效(％)＝100(1-x/y)，x、y分别代表处理和空白对照的病情指数。
试验结果：表2显示每亩施用1公斤、3公斤、5公斤的DL01菌剂对三七根结线虫病的防效分别为74.48％、82.79％和85.17％。5公斤/亩的DL01菌剂对三七根结线虫病的防效与2公斤10％噻唑膦颗粒剂的防效(86.69％)相当。
表2.DL01菌剂对三七根结线虫病的防治效果
Figure BDA0002587274080000051
Figure BDA0002587274080000061
注：同一列数据后的字母相同表示差异不显著，反之差异显著。
实施例6
DL01菌剂防治西洋参根结线虫病的田间试验
试验地点：山东省文登市西洋参种植基地。
试验作物：西洋参。
供试药剂：实施例1所得DL01菌剂，活菌数含量为3.5×109个/克，按本发明上述方法制备；10％噻唑膦颗粒剂。
试验方法：设如下五个处理，每处理3个重复，每重复500株西洋参。
处理1：DL01菌剂1公斤/亩。整地时，将菌剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理2：DL01菌剂3公斤/亩。整地时，将菌剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理3：DL01菌剂5公斤/亩。整地时，将菌剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理4：10％噻唑膦颗粒剂2公斤/亩。整地时，将颗粒剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理5：不施用任何杀线虫药剂的空白对照。
各处理的药剂均匀混入耕作层土壤中，按常规方法移栽西洋参苗和进行肥水管理。西洋参苗生长180天时，各处理随机拔出100株三七，对根瘤进行分级和统计，计算病情指数和防效。
根瘤分级标准如下:
0级：无根瘤；1级：1-20％的根系有根瘤；2级：21-40％的根系有根瘤；3级：41-60％的根系有根瘤；4级：61-80％的根系有根瘤；5级：81-100％的根系有根瘤)。
病情指数(％)＝(n1×1+n2×2+n3×3+n4×4+n5×5)/(S×5)×100
n1-n5分别代表根瘤病级指数1-5级相应的植株总数，S代表调查的植株总数。
防效(％)＝100(1-x/y)，x、y分别代表处理和空白对照的病情指数。
试验结果：表3显示每亩施用1公斤、3公斤、5公斤的DL01菌剂对西洋参根结线虫病的防效分别为71.77％、79.57％和86.48％。5公斤/亩的DL01菌剂对西洋参根结线虫病的防效与2公斤10％噻唑膦颗粒剂的防效(87.48％)相当。
表3.DL01菌剂对西洋参根结线虫病的防治效果
Figure BDA0002587274080000071
注：同一列数据后的字母相同表示差异不显著，反之差异显著。
实施例7
DL01菌剂防治人参根结线虫病的田间试验
试验地点：吉林省通化市人参种植基地。
试验作物：人参。
供试药剂：实施例2所得DL01菌剂，活菌数含量为4.0×109个/克，按本发明上述方法制备；10％噻唑膦颗粒剂。
试验方法：设如下五个处理，每处理3个重复，每重复100株人参。
处理1：DL01菌剂1公斤/亩。整地时，将菌剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理2：DL01菌剂3公斤/亩。整地时，将菌剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理3：DL01菌剂5公斤/亩。整地时，将菌剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理4：10％噻唑膦颗粒剂2公斤/亩。整地时，将颗粒剂均匀撒施于土面上，并用翻耕机将其混入土壤中。
处理5：不施用任何杀线虫药剂的空白对照。
各处理的药剂均匀混入耕作层土壤中，按常规方法移栽人参苗和进行肥水管理。人参苗生长180天时，各处理随机拔出50株人参，对根瘤进行分级和统计，计算病情指数和防效。
根瘤分级标准如下:
0级：无根瘤；1级：1-20％的根系有根瘤；2级：21-40％的根系有根瘤；3级：41-60％的根系有根瘤；4级：61-80％的根系有根瘤；5级：81-100％的根系有根瘤)。
病情指数(％)＝(n1×1+n2×2+n3×3+n4×4+n5×5)/(S×5)×100
n1-n5分别代表根瘤病级指数1-5级相应的植株总数，S代表调查的植株总数。
防效(％)＝100(1-x/y)，x、y分别代表处理和空白对照的病情指数。
试验结果：表4显示每亩施用1公斤、3公斤、5公斤的DL01菌剂对人参根结线虫病的防效分别为64.43％、70.35％和87.08％。5公斤/亩的DL01菌剂对西洋参根结线虫病的防效与2公斤10％噻唑膦颗粒剂的防效(87.86％)相当。
表4.DL01菌剂对人参根结线虫病的防治效果
Figure BDA0002587274080000081
注：同一列数据后的字母相同表示差异不显著，反之差异显著。
实际应用效果表明：利用DL01菌株制备的菌剂，当有效活菌数大于3亿CFU/克时，施用5公斤/亩对三七、西洋参、人参根结线虫病的防效均大于85％，与化学杀线虫剂噻唑膦的防效相当，但DL01菌剂为生物制品，还具有无残留、对人畜安全、保障药材品质等的优点。

Claims (6)

1.一株防治根结线虫病的短短芽孢杆菌，其特征在于，该芽孢杆菌为短短芽孢杆菌DL01菌株，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC:20096；所述DL01菌株制备的菌剂对中药材北方根结线虫病的防效达70%以上。
2.利用权利要求1所述的防治根结线虫病的短短芽孢杆菌制备的菌剂，其特征在于，包括如下步骤：
1）DL01菌株试管斜面种子培养：将该菌株接种到LB培养基斜面上，28-32℃下培养1-3天后获得斜面种子；
2）DL01菌株液体种子培养：将斜面种子接种到装有牛肉膏蛋白胨液体培养基的三角瓶中，28-32℃，150-180 rpm条件下摇床培养2-3天获得液体种子；
3）DL01发酵罐大量培养：将液体种子按体积比为3％的比例接入1000升发酵罐中的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，培养条件控制在：温度32℃，搅拌速度150 rpm，发酵时间72小时；
4）DL01菌剂制备：经发酵罐培养获得的微生物菌体及其代谢物与2倍体积的硅藻土混合后在65℃以下烘干或晾干至水分含量小于5%，粉碎后制成； DL01菌株在菌剂中的活菌数含量在3×109 CFU/克以上。
3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述步骤1）的培养条件为30℃下培养2天。
4.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述步骤2）的培养条件为30℃下培养2天。
5.权利要求1所述的短短芽孢杆菌在防治北方根结线虫病的菌剂中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述北方根结线虫病包括三七、西洋参、人参的北方根结线虫病。
CN202010685127.7A 2020-07-16 2020-07-16 一株防治根结线虫病的短短芽孢杆菌及其应用 Active CN111778190B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010685127.7A CN111778190B (zh) 2020-07-16 2020-07-16 一株防治根结线虫病的短短芽孢杆菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010685127.7A CN111778190B (zh) 2020-07-16 2020-07-16 一株防治根结线虫病的短短芽孢杆菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111778190A CN111778190A (zh) 2020-10-16
CN111778190B true CN111778190B (zh) 2022-03-08

Family

ID=72767858

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010685127.7A Active CN111778190B (zh) 2020-07-16 2020-07-16 一株防治根结线虫病的短短芽孢杆菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111778190B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113215021B (zh) * 2021-02-24 2023-05-16 云南省烟草公司普洱市公司 一株产尿素细菌菌株及其在烟草栽培中的应用
CN116083328B (zh) * 2023-04-11 2023-06-13 山东康惠植物保护有限公司 一种暹罗芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6001637A (en) * 1997-08-22 1999-12-14 Agraquest, Inc. Bacillus pumilus strain for controlling corn rootworm, nematode and armyworm infestations
CN103703120B (zh) * 2011-05-26 2015-04-15 Sds生物技术株式会社 属于芽孢杆菌属的菌株、微生物制剂及植物的栽培方法
KR101708325B1 (ko) * 2015-04-06 2017-02-20 전남대학교산학협력단 식물기생선충에 대해 살선충 활성을 가지는 아스퍼질러스 나이거 f22 균주 및 이의 용도
CN106479938B (zh) * 2016-12-09 2019-05-17 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一种短短芽孢杆菌菌株及其应用
CN109136123B (zh) * 2018-07-23 2021-05-25 云南大学 一株线虫生防菌及其应用
CN111154671B (zh) * 2019-12-19 2023-03-31 云南天腾化工有限公司 一种生防菌及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111778190A (zh) 2020-10-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112899201B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌及其应用以及防治香蕉枯萎病的方法
CN103045515A (zh) 一种甲基营养型芽孢杆菌的生物菌剂及其制备方法和应用
CN109136123B (zh) 一株线虫生防菌及其应用
CN110669691B (zh) 一种防治植物线虫病害的巨大芽孢杆菌及其应用
CN111778190B (zh) 一株防治根结线虫病的短短芽孢杆菌及其应用
CN104450560B (zh) 一株杀线虫鞘氨醇杆菌菌株及其应用
CN112359000A (zh) 一株高效生防假单胞菌及其在水稻病害防治中的应用
CN115960766A (zh) 一种防治青枯病的微生物及其应用
CN110129212B (zh) 一株不产黄曲霉毒素的黄曲霉菌peas-10及其用途
CN108841764B (zh) 一株生防细菌及其应用
CN113549570B (zh) 罗汉果土传病原菌的土壤拮抗细菌制剂、微生物菌肥及应用
CN109749953B (zh) 蜡样芽孢杆菌、菌剂及其制备方法和应用
CN112094770B (zh) 一株高地芽孢杆菌及其活性物质复配液与菌剂在防治根结线虫病中的应用
CN110791459B (zh) 一株用于防控连作百合土传枯萎病的枯草芽孢杆菌及其应用
CN116463239B (zh) 一种奇异链霉菌bd2233、油悬浮剂及其应用
CN108998395B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN109182189B (zh) 一株高产的氧化微杆菌及其应用
CN110373362A (zh) 一株蜡状芽孢杆菌及其在防治马铃薯环腐病中的应用
CN114703069B (zh) 一种黑附球菌发酵产物、制备方法及其应用
CN109868237A (zh) 一种巨大芽孢杆菌及其应用
CN113652374B (zh) 一种7-羟基环庚三烯酚酮在防治作物黄萎病中的应用
CN115197853A (zh) 内生菌Epicoccum thailandicumLF-28菌株及其应用
CN110724640B (zh) 番茄根结线虫生防菌、其制剂及其应用
CN110885771A (zh) 用于提升植烟土壤微生态环境水平的生物菌剂
CN116179640B (zh) 一种高效筛选香蕉枯萎病拮抗菌的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant