CN113186133B - 一种高地芽孢杆菌s1012及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)S1012及其应用，所述的高地芽孢杆菌S1012已于2020年10月15日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO:61235。该菌株对青稞(H.Vulgare)、小麦(T.aestivum)体现出较高安全性，可开发为禾本科作物防除十字花科杂草的生物除草剂。

Description

一种高地芽孢杆菌S1012及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种高地芽孢杆菌S1012及其应用。

背景技术

农田杂草，以其极强的生命力及适应性侵占农田并危害农作物生长发育。我国草害严重的农田面积达200万hm²，每年因草害而损失粮食约75×10⁸kg。而化学除草作为当今杂草防控最为有效的措施，其开端可以追溯到19世纪末期的欧洲，施用波尔多液处理葡萄霜霉病。但是化学除草剂的长期使用会带来很多的危害，如使农产品和土壤中农药残留量超标；害虫天敌减少；自然生态链受到严重破坏等；最终导致农业生态环境的日益恶化。与化学除草剂相比，微生物源除草剂具有资源丰富，不易产生抗性杂草，对非靶标生物相对安全，经济效益客观，环境相容性好，在土壤中降解更快，大多对哺乳动物低毒等特点。因此，微生物农药的研究与开发成为当今农药研究与开发的一个重要方向。

近几年的研究表明，许多微生物的代谢产物会对植物的生长产生影响，比如造成植物的叶片、根茎以及组织发生病变，引起疾病；抑制或者促进一些植物种子的萌发及幼苗植物的生长。从目前的研究进展来看：微生物除草剂来源广泛，涉及细菌、真菌、放线菌以及极少数病毒，但是实际投入使用的微生物源资源却十分有限。微生物除草剂按其活性成分划分为活体微生物除草剂和其代谢产物除草剂，其中多数为活体微生物除草剂且作用机理不明。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种对十字花科杂草具有较强致病性的高地芽孢杆菌S1012，该菌株对青稞(H.Vulgare)、小麦(T.aestivum)体现出较高安全性，可开发为禾本科作物防除十字花科杂草的生物除草剂。

本发明具体通过以下技术方案实现：

本发明从青海察尔汗盐湖湖泥和湖水样品中分离纯化得到一株中度嗜盐菌菌株S1012。将菌株划线于培养基平板上活化，观察菌株生长的菌落形态及菌体形态特征，该菌株S1012为革兰氏阳性菌，呈白色，直杆状，链状排列，能运动，菌落表面光滑不粘稠，不透明，不隆起。

同时，菌株S1012在明胶液化、V-P测定、接触酶、甲基(M.R)、ONPG测定、甘露醇发酵和蔗糖发酵反应中均呈阳性，柠檬酸利用结果呈阴性，石蕊牛奶试验呈凝固状态，有或无氧分子参与均能分解葡萄糖，硝酸盐还原反应呈阴性。

提取菌株S1012的16S rDNA并测序，菌株S1012的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，长度为1376bp，将菌株S1012的16S rDNA序列提交至https://www.ezbiocloud.net网站，与数据库中已知的16S rDNA序列进行比对，下载与菌株S1012的16S rDNA序列同源性大于95％的菌株序列，通过MEGA 7.0软件，根据邻接法方法构建系统发育树。可知，菌株S1012与已知菌株Bacillus altitudinis(ASJC01000029)，亲缘关系最近，相似度高达100％；结合菌株S1012的形态学、生理生化特征及分子生物学鉴定结果，最终确定菌株S1012为高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)。

申请人将高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)S1012进行了保藏，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期为2020年10月15日，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC NO:61235。

在本发明的另一方面，提供了所述高地芽孢杆菌S1012在抑制十字花科杂草或野燕麦中的应用。

具体表现为所述高地芽孢杆菌S1012对野燕麦和十字花科杂草自生油菜(B.napus)有较强抑制作用，而对青稞(H.Vulgare)、小麦(T.aestivum)体现出较高安全性。

另外，所述高地芽孢杆菌S1012的发酵液或其菌悬液或其次级代谢产物在抑制十字花科杂草或野燕麦中的应用也在本发明的保护范围之内。

在本发明的另一方面，还提供了所述高地芽孢杆菌S1012的发酵液在作为制备除草剂中的应用。

所述高地芽孢杆菌S1012的发酵液的正丁醇萃取物溶液对自生油菜、野燕麦、藜和密花香薷均有不同程度的杀伤力杀伤力，尤其对十字花科的杂草自生油菜。

高地芽孢杆菌S1012通过常规的液体或固体培养，获得包括细菌菌体培养物，通过常规的液体发酵生产，然后加入表面活性剂如分散剂、稳定剂、湿润剂、粘结剂、消泡剂、崩解剂、抗冻剂等中的一种或几种，或吸附载体按一定比例混合后，制备成可湿性粉剂、水分散粒剂、悬浮剂、悬乳剂、水乳剂或微乳剂。

本申请高地芽孢杆菌S1012抑制杂草生长的机理：

MDA是植物在逆境或衰老时膜脂过氧化的分解产物之一，其含量多少象征着植物细胞膜遭受逆境的伤害程度和抗逆性的强弱。而抗氧化酶(SOD、POD、CAT)能够清除胁迫造成植物体内过剩的活性氧，维持活性氧代谢平衡，保护膜结构，使植物免受伤害。在菌株S1012正丁醇萃取物溶液处理2d后，无论是MDA含量，还是抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性都具有显著变化，MDA含量始终高于对照，而抗氧化酶(SOD、POD、CAT)2d以后活性均降低，这可能是由于胁迫超过了机体所能承受极限时，引起了SOD、POD和CAT活性的下降或破坏，导致膜脂质过氧化作用加剧，植物体的正常代谢被破坏，生长受到抑制。

本发明的有益效果为：

本发明提供了一株高地芽孢杆菌S1012，该菌株对十字花科杂草自生油菜(B.napus)有较强治病性，而对青稞(H.Vulgare)、小麦(T.aestivum)体现出较高安全性，可开发为禾本科作物防除十字花科杂草的生物除草剂，其对供试植物丙二醛(MDA)及抗氧化酶(SOD、POD、CAT)含量有显著影响，说明该菌株的除草机理是通过影响光合作用等正常代谢过程实现的。

附图说明

图1是本发明菌株S1012的培养性状(a)及革兰氏染色特征(b)；

图2是本发明菌株S1012的同源进化关系树；

图3是本发明菌株S1012正丁醇萃取物对自生油菜叶片丙二醛含量的影响；

图4是本发明菌株S1012正丁醇萃取物对自生油菜叶片CAT活性的影响；

图5是本发明菌株S1012正丁醇萃取物对自生油菜叶片SOD活性的影响；

图6是本发明菌株S1012正丁醇萃取物对自生油菜叶片POD活性的的影响。

具体实施方式

下面将结合本发明具体的实施例，对本发明技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

供试菌株：菌株S1012(Bacillus altitudinis)，由本课题组成员自青海察尔汗盐湖湖泥和湖水样品中分离纯化得到，保存于青海大学农林科学院生物技术研究所实验室4℃冰箱。

ATCC213改良培养基：MgSO₄·7H₂O 10g，CaCl₂·2H₂O 0.2g，K Cl 5g，蛋白胨2.5g，酵母膏10g，NaCl 30g，琼脂粉16g(液体培养基不加琼脂粉)，加蒸馏水至1000mL，pH 7.2-7.4。

供试作物：小麦(T.aestivum)青春38、青稞(H.Vulgare)昆仑14号、藜麦(C.quinoa)青白藜1号、蚕豆(V.faba)青蚕14号和玉米(Z.mays)纪元8号由青海大学农林科学院作物栽培研究所提供。

供试杂草及其种子：野燕麦(A.fatua)、自生油菜(B.napus)均由青海大学农林科学院提供。猪秧秧(G.aparine)、藜(C.album)、密花香薷(E.densa)由青海大学农林科学院提供。

实施例1菌株的鉴定

1)形态学鉴定

将从青海察尔汗盐湖湖泥和湖水样品中分离纯化得到的菌株S1012划线于培养基平板上活化，观察菌株生长的菌落形态及菌体形态特征，参照《伯杰氏细菌鉴定手册(第8版)》的方法，进行菌株形态学鉴定。

形态学鉴定结果显示(图1)，菌株S1012为革兰氏阳性菌，直杆状，链状排列，能运动，菌落表面光滑不粘稠，不透明，不隆起；菌株S1012呈白色。

2)生理生化特征鉴定

《伯杰氏细菌鉴定手册(第8版)》以及参照《常见细菌系统鉴定手册》对活性高的菌株进行柠檬酸盐利用试验、接触酶、葡萄糖氧化发酵、糖、醇类发酵、甲基红(M.R)、V-P测定、O-硝基苯-β-D吡喃半乳糖苷酶(ONPG)测定、硝酸盐还原、石蕊牛奶测试以及明胶液化等生理生化指标的测定。

生理生化特征实验结果如表1所示，活性菌株S1012在明胶液化、V-P测定、接触酶、甲基(M.R)、ONPG测定、甘露醇发酵和蔗糖发酵反应中均呈阳性，柠檬酸利用结果呈阴性，石蕊牛奶试验呈凝固状态，有或无氧分子参与均能分解葡萄糖。S1012硝酸盐还原反应呈阴性。

表1菌株S1012的生理生化特征

3)分子生物学鉴定

菌株16S rDNA提取按照上海生工生物工程(上海)股份有限公司的柱式细菌DNA提取试剂盒的程序操作。选取细菌16S rDNA通用引物F27(5′-AGAGTTT GATCCTGGCTCA GG-3′)和P1541(5′-AAGGAGGTGGTGATCCAGCCG CA-3′)。PCR扩增体系如下：10×Buf fer 2.5mL，模板DNA1μL Taq酶(5U/μL)0.2μL，Dntp(2.5mmol/μL)2μL，引物F27(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAGG-3')和引物P1541(5'-AAGGAGGTGGTGAT CCAGCCGC A-3')(10pmol/μL)各1μL，补水至25μL。反应条件为：94℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃80s，共30个循环；72℃10min。PCR反应条件：94℃变性45s，50℃退火45s，72℃延伸75s，50μL反应体系30个循环。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测，回收产物送至上海生工测序。所得到的16S r DNA全序列与从EzBioCloud等数据库中获得的16S r DNA序列进行比对，通过Mega 7.0软件以邻接法方法构建系统发育进化树，Bootstrap置信值估算重复次数1000次。

经测序，菌株S1012 16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，长度为1376bp，将测序得到的序列登录Genbank，获取登录号MW114892。将菌株S1012的16S rDNA序列提交至https://www.ezbiocloud.net网站，与数据库中已知的16S rDNA序列进行比对，下载与菌株S1012的16S rDNA序列同源性大于95％的菌株序列，通过MEGA7.0软件，根据邻接法方法构建系统发育树(图2)。由图2可知，菌株S1012与已知菌株Bacillus altitudinis(ASJC01000029)，亲缘关系最近，相似度高达100％；结合菌株S1012的形态学、生理生化特征及分子生物学鉴定结果，最终确定菌株S1012为高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)。

申请人将菌株S1012进行了保藏，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期为2020年10月15日，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCCNO:61235。

实施例2抑制野燕麦种子生长活性的测定

取保存的菌株S1012，将其活化接种于ATCC213改良固体培养基平板上，放置于37℃的培养箱中培养48h。将培养好的嗜盐菌菌株接种于装瓶量为800mL的ATCC213改良液体培养基中，放置于37℃恒温摇瓶柜中，以180r/min的转速振荡培养7d收获发酵液，发酵液经抽滤去菌体后，装入3000mL的梨形漏斗中依次用等量的乙酸乙酯、正丁醇萃取3遍，萃取获得的有机相溶液经旋转蒸发仪减压浓缩得到乙酸乙酯和正丁醇萃取物。再用质量分数0.2％的吐温-80水溶液配制浓度为5、10、20、和50mg/mL的萃取物溶液，备用。

挑选饱满、无损伤的野燕麦种子，用5％的次氯酸钠溶液消毒，同时用磁力搅拌器搅拌10min，再用无菌水搅拌冲洗3次，将种子用吸水纸吸干后，放置于28℃的生长箱中。催芽48h后，挑选露白一致的供试种子分别放入铺有双层高压灭菌滤纸的玻璃培养皿中(Φ＝9cm)，每皿16粒供试杂草种子。采用平皿法测定萃取物溶液的抑草活性，每个处理分别加入不同浓度的萃取物溶液5mL。以质量分数0.2％的吐温-80水溶液对照，每个处理3次重复。将培养皿放置于25℃的人工气候箱中培养，培养期间补充种子及幼苗生长所需水分。7d后测定杂草种子的根长、芽长并计算抑制率，公式如下：

根长抑制率＝(对照根长-处理根长)/对照根长×100％；

芽长抑制率＝(对照芽长-处理芽长)/对照芽长×100％。

数据采用IBM SPSS Statistics 25.0软件进行统计分析，应用Duncan’s新复极差法进行各处理间的差异显著性分析，数据以平均值±标准差表示。

由表2可知。正丁醇萃取物在浓度为10、20和50mg/mL时，对野燕麦根长表现出较强的抑制活性，抑制率分别为60.97％、84.97％和87.03％。乙酸乙酯萃取物在浓度为50mg/mL时，对野燕麦根长表现出较强的抑制活性，抑制率达68.72％。正丁醇萃取物和乙酸乙酯萃取物浓度为50mg/mL时，对野燕麦的根长和芽长均具有较强的抑制活性，抑制率分别为68.72％和66.57％。

表2菌株S1012发酵液萃取物抑制野燕麦种子生长活性的测定

实施例3菌株S1012发酵液萃取物抑制自生油菜种子生长活性的测定

方法同实施例2，公示材料挑选饱满、无损伤的自生油菜种子。

由表3可知，当正丁醇萃取物浓度在5mg/mL时，便对自生油菜根长表现出较强的抑制活性，抑制率达81.64％；在10mg/mL以上时对自生油菜芽长、根长均表现出明显的抑制活性，抑制率为可达100％。乙酸乙酯萃取物在20mg/mL以上表现出较强抑制活性。

表3菌株S1012发酵液萃取物抑制自生油菜种子生长活性的测定

实施例4杀草谱测定

杀草谱测定参照中华人民共和国农业行业标准(NY/T 1155.8—2007)作物安全性评价方法，根据选取杂草的受害症状和严重程度，评价药剂的除草活性。采用下列分级方法进行评价：

1级：全部死亡；

2级：相当于空白对照区杂草的0～2.5％；

3级：相当于空白对照区杂草的2.6％～5％；

4级：相当于空白对照区杂草的5.1％～10％；

5级：相当于空白对照区杂草的10.1％～15％；

6级：相当于空白对照区杂草的15.1％～25％；

7级：相当于空白对照区杂草的25.1％～35％；

8级：相当于空白对照区杂草的35.1％～67.5％；

9级：相当于空白对照区杂草的67.6％～100％。

野燕麦(A.fatua)、自生油菜(B.napus)、猪秧秧(G.aparine)、藜(C.album)和密花香薷(E.densa)经浓度为10、20和40mg/mL的正丁醇萃取物溶液处理7d后结果显示，浓度为40mg/mL的正丁醇萃取物溶液对自生油菜、野燕麦、藜和密花香薷均有不同程度的杀伤力杀伤力，尤其对十字花科的杂草自生油菜，对猪秧秧不致病。在10mg/mL和20mg/mL剂量时对藜、野燕麦和自生油菜防效降低，对猪秧秧和密花香薷不致病(表4)。

表4不同浓度菌株S1012正丁醇萃取物的杀草谱测定

实施例5作物安全性评价

作物安全性评价的执行同样依据上述行业标准。供试植物在茎叶喷雾法处理后，分别在处理1、3、5、7、9和14d定期观察作物和杂草的生长状态，目测法进行颜色变化(黄化、白化、变紫等)、形态变化(新叶畸形、扭曲等)和生长变化(脱水、枯萎、矮化、簇生等)等主要药害症状的记录。

作物安全性评价根据表5的药害分级标准调查并记录。

表5药害分级标准

小麦(T.aestivum)青春38、青稞(H.Vulgare)昆仑14号、藜麦(C.quinoa)青白藜1号、蚕豆(V.faba)青蚕14号和玉米(Z.mays)纪元8号在10、20和40mg/mL浓度的正丁醇萃取物处理下，供试作物的药害程度随正丁醇萃取物溶液浓度升高而加重。在40mg/mL浓度的正丁醇萃取物溶液处理下，玉米叶片症状明显，叶片失水，干枯萎蔫，叶片卷曲，并伴随叶片白化，植株矮化；藜麦叶片干枯萎蔫凋零，随之茎秆出现萎蔫，倒伏，植株死亡；小麦叶片失绿，卷曲，尖端干枯，白化；藜麦叶片尖端干枯，白化；蚕豆仅出现零星药害斑点，随着时间的推移，症状消失。在10和20mg/mL浓度的正丁醇萃取物溶液处理下，小麦、玉米和藜麦药害程度轻重不一，蚕豆和青稞安全(表6)。

表6不同浓度菌株S1012正丁醇萃取物作物安全性评价

实施例6供试杂草生理生化指标变化的测定

植物受到逆境胁迫时，细胞中会积累渗透调节物质并提高抗氧化酶类活性，这是植物在逆境下得以生存的两种重要机制。渗透调节物质丙二醛(MDA)同时也是膜脂过氧化的产物，其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度；而另一类需要测定的主要指标为一系列抗氧化酶的活力。

药剂喷施及采样：配制40mg/mL的菌株S1012正丁醇萃取物溶液备用。选择花盆温室培育到三叶期的自生油菜，用手持喷壶将配制好的S1012正丁醇萃取物溶液均匀喷洒到供试杂草叶片上，以质量分数0.2％的吐温-80水溶液做对照，每个处理重复三次，每盆施药量为15mL。分别在喷施萃取物溶液1、2、3、4、5、6、7、8d后采样。

丙二醛(MDA)含量测定：采用过氧化脂质硫代巴比妥酸法，测定40mg/mL S1012正丁醇萃取物溶液处理自生油菜1、2、3、4、5、6、7、8d后丙二醛(MDA)含量。

超氧化物歧化酶活力(SOD)测定：采用氮蓝四唑(NBT)光化还原法，测定40mg/mLS1012正丁醇萃取物溶液处理自生油菜1、2、3、4、5、6、7、8d后超氧化物歧化酶活力。

过氧化氢酶活力(CAT)测定：采用紫外吸收法，测定40mg/mL S1012正丁醇萃取物溶液处理自生油菜1、2、3、4、5、6、7、8d后过氧化氢酶活力。

过氧化物酶活力(POD)测定：采用愈创木酚显色法，测定40mg/mL S1012正丁醇萃取物溶液处理自生油菜1、2、3、4、5、6、7、8d后过氧化物酶活力。

如图3所示，菌株S1012正丁醇萃取物处理过的自生油菜的丙二醛(MDA)含量明显高于对照，在1～3d丙二醛含量急剧上升，3d以后有下降趋势，但丙二醛含量仍高于对照，到了第8d丙二醛含量仍一直高于对照，对照组丙二醛(MDA)含量几乎保持平稳状态，没有大幅波动。

如图4所示，菌株S1012正丁醇萃取物处理过的自生油菜过氧化氢酶活力(CAT)活性在1～2d呈现上升趋势，在2d以后，与对照相比，处理组CAT活性呈持续降低趋势。对照组CAT活性基本稳定在一定范围内。

如图5所示，对照组超氧化物歧化酶活力(SOD)在1～8d活性基本上平稳，相比较，菌株S1012正丁醇萃取物处理过的自生油菜SOD活性呈现先增后剧降的趋势，在1～3d呈上升趋势，3d以后呈现下降趋势。

如图6所示，菌株S1012正丁醇萃取物处理过的自生油菜过氧化物酶活力(POD)活性随时间变化呈现出直线下降趋势，在1～3d时处理组POD活性高于对照组。在3d以后，与对照相比，处理组POD活性呈直线下降趋势。

综上，本申请菌株S1012正丁醇萃取物溶液对目标杂草处理7d后，40mg/mL的正丁醇萃取物溶液对自生油菜、藜、密花香薷、野燕麦均具有不同程度的致病性。其中，其对十字花科自生油菜致病力最强，对藜科藜、唇形科密花香薷和禾本科野燕麦的致病性较弱，而对茜草科猪秧秧不致病；同时，40mg/mL的正丁醇萃取物溶液对主要农作物玉米和藜麦具有致病性，对小麦和青稞致病性较弱，对蚕豆安全，说明该浓度以下的正丁醇萃取物溶液适宜于蚕豆田间防除十字花科杂草。在10和20mg/mL下，正丁醇萃取物溶液对青稞和蚕豆安全，对玉米、小麦和藜麦仍有药害；对目标杂草野燕麦、藜和密花香薷致病性减弱，对自生油菜致病性较强。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

序列表

<110> 青海省农林科学院

<120> 一种高地芽孢杆菌S1012及其应用

<160> 5

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1376

<212> DNA

<213> 高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)

<400> 1

cctcaccgac ttcgggtgtt gcaaactctc gtggtgtgac gggcggtgtg tacaaggccc 60

gggaacgtat tcaccgcggc atgctgatcc gcgattacta gcgattccag cttcacgcag 120

tcgagttgca gactgcgatc cgaactgaga acagatttgt gggattggct aaaccttgcg 180

gtctcgcagc cctttgttct gtccattgta gcacgtgtgt agcccaggtc ataaggggca 240

tgatgatttg acgtcatccc caccttcctc cggtttgtca ccggcagtca ccttagagtg 300

cccaactgaa tgctggcaac taagatcaag ggttgcgctc gttgcgggac ttaacccaac 360

atctcacgac acgagctgac gacaaccatg caccacctgt cactctgtcc ccgaagggaa 420

agccctatct ctagggttgt cagaggatgt caagacctgg taaggttctt cgcgttgctt 480

cgaattaaac cacatgctcc accgcttgtg cgggcccccg tcaattcctt tgagtttcag 540

tcttgcgacc gtactcccca ggcggagtgc ttaatgcgtt agctgcagca ctaaggggcg 600

gaaaccccct aacacttagc actcatcgtt tacggcgtgg actaccaggg tatctaatcc 660

tgttcgctcc ccacgctttc gctcctcagc gtcagttaca gaccagagag tcgccttcgc 720

cactggtgtt cctccacatc tctacgcatt tcaccgctac acgtggaatt ccactctcct 780

cttctgcact caagtttccc agtttccaat gaccctcccc ggttgagccg ggggctttca 840

catcagactt aagaaaccgc ctgcgagccc tttacgccca ataattccgg acaacgcttg 900

ccacctacgt attaccgcgg ctgctggcac gtagttagcc gtggctttct ggttaggtac 960

cgtcaaggtg caagcagtta ctcttgcact tgttcttccc taacaacaga gctttacgat 1020

ccgaaaacct tcatcactca cgcggcgttg ctccgtcaga ctttcgtcca ttgcggaaga 1080

ttccctactg ctgcctcccg taggagtctg ggccgtgtct cagtcccagt gtggccgatc 1140

accctctcag gtcggctacg catcgtcgcc ttggtgagcc gttacctcac caactagcta 1200

atgcgccgcg ggtccatctg taagtgacag ccgaaaccgt ctttcatcct tgaaccatgc 1260

ggttcaagga actatccggt attagctccg gtttcccgga gttatcccag tcttacaggc 1320

aggttaccca cgtgttactc acccgtccgc cgctaacatc cgggagcaag ctccct 1376

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

agagtttgat cctggctcag g 21

<210> 3

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

aaggaggtgg tgatccagcc gca 23

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

agagtttgat cctggctcag g 21

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

aaggaggtgg tgatccagcc gca 23

Claims (5)

1.一种高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）S1012，其特征在于，所述的高地芽孢杆菌S1012已于2020年10月15日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO:61235。

2.权利要求1所述的高地芽孢杆菌S1012在抑制自生油菜或野燕麦中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的高地芽孢杆菌S1012对青稞、小麦安全。

4.权利要求1所述高地芽孢杆菌S1012的发酵液或其菌悬液或其次级代谢产物在抑制自生油菜或野燕麦中的应用。

5.权利要求1所述高地芽孢杆菌S1012的发酵液在作为制备自生油菜或野燕麦除草剂中的应用。

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