JP4189224B2 - バチルス属に属する微生物及びそれを用いる防除剤 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、有害生物、特に、植物病原菌の生育の抑制能を有する微生物、該微生物を用いた防除剤等に関する。さらに詳しくは、本発明は、有害生物、特に、植物病原菌の生育を抑制する物質を産生する微生物、植物病原菌の生育を抑制すること及び／又は害虫を忌避することができる防除剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近代農業、特に、大規模な生産を目的とする農業においては、虫食いや病変部等がない見栄えのよい作物を得、かつ高収量を達成するために、化学合成農薬が使用されている場合があり、作物への該化学合成農薬の残留、該化学合成農薬による土壌、水等の環境の汚染等が懸念されている。そのため、いわゆる無農薬野菜、減農薬野菜等に注目が集まっている。
【０００３】
しかしながら、無農薬栽培には、手間がかかること、病害虫による被害を被りやすく、そのため、収量も減ること等の欠点があり、無農薬栽培を行なっている農家は、全体の数％にとどまっている。したがって、実質的に必要となる手間を減らす観点から、ほとんど化学合成農薬に頼っているのが現状である。
【０００４】
一方、化学合成農薬の代わりに、微生物を用いて、タバコ立枯病の病原菌、ナス科植物青枯病の病原菌、芝草病原菌、病原性糸状菌等の生育の抑制が試みられている。
【０００５】
具体的には、エンテロバクター属に属する微生物、例えば、タバコ根部から分離されたエンテロバクター クロアカエ Ｈ１８４株（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ Ｈ１８４）（ＦＥＲＭ ＢＰ−５０５７）の培養物は、タバコ植物の根部やナス科植物の根部に灌注することにより、タバコ立枯病の病原菌、ナス科植物青枯病の病原菌等の防除に用いられうることが知られている（特許文献１、特許文献２）。しかしながら、前記特許文献１及び特許文献２に記載のエンテロバクター属に属する微生物は、青枯病菌に対する拮抗作用を示すにすぎず、他の病原菌に対する拮抗作用を有するかどうかは不明である。
【０００６】
また、ストレプトミセス アルブラスは、スクレロティニア属、リゾクトニア属、ピシウム属、カーブラリア属、ゴイマイノマイセス属、コレットリカム属等に拮抗性を有しており、植物病原菌防除材等に利用されうることが知られている（特許文献３）。しかしながら、前記特許文献３に記載の植物病原菌防除材等は、芝草における病害に適用するためのものであり、他の植物に対する病原菌に適用できるかどうかは不明である。
【０００７】
さらに、バチルス属に属し、かつアフラトキシン分解性を有する微生物、具体的には、アフラトキシン分解性を有するバチルス サブチルスＤＢ９０１１株、及びバチルス プルミルスに属し、かつアフラトキシン分解性を有する微生物は、アフラトキシン生成能を有する真菌、特に、病原性糸状菌に対する発育抑制剤として使用されることが知られている（特許文献４、特許文献５）。特許文献４及び特許文献５に記載の発育抑制剤は、真菌、なかでも、アフラトキシン生成能を有する真菌、特に、病原性糸状菌の発育を抑制するものである。
【０００８】
【特許文献１】
特開平９−３７７７５号公報 段落番号００１０、表３及び表４
【特許文献２】
特開平１０−１３９６１０号公報 表５
【特許文献３】
特開平８−２４２８４６号公報 段落番号００４２、００４９
【特許文献４】
特開平５−１４６２８９号公報 段落番号００４６〜００５２
【特許文献５】
特開平５−２６８９４５号公報 段落番号００４８〜００５０
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、有害生物、特に、植物病原菌、真菌の酵母の生育を抑制する性質、広範囲の植物病原菌、例えば、複数又はそれ以上の植物病原菌に対する抗菌活性を発揮する性質、作物等の植物の生育環境に近い環境に生育する性質の少なくともいずれかの性質を有する微生物を提供することを目的とする。さらに、本発明は、広範囲、例えば、複数又はそれ以上の有害生物、具体的には、植物病原菌、真菌の酵母、害虫等により引き起こされる植物の病害を防ぐことが可能な防除剤を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明の要旨は、
〔１〕 植物病原菌の生育の抑制能を有する、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
〔２〕 植物病原菌が、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ エフ グレーバー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｆ ｇｌａｂｅｒ）、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ バー．オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｖａｒ． ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス ナイジャー ファン ティーゲム（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ｖａｎ Ｔｉｅｇｈｅｍ）、ムコル ヘマリス ヴェーマー エフ．ヘマリス（Ｍｕｃｏｒ ｈｉｅｍａｌｉｓ Ｗｅｈｍｅｒ ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）、ペニシリウム クリソゲナム ゾーム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ Ｔｈｏｍ）、リゾプス オリゼ ウェント アンド プリンセン ギーリングズ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅＷｅｎｔ ＆ Ｐｒｉｎｓｅｎ Ｇｅｅｒｉｎｇｓ）、カンジダ アルビカンス （ロビン） バークホント〔Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ （Ｒｏｂｉｎ） Ｂｅｒｋｈｏｎｔ〕、クリプトコッカス ネオフォーマンス （サンフェリス） ブィレミン〔Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ （Ｓａｎｆｅｌｉｃｅ） Ｖｕｉｌｌｅｍｉｎ〕、ピキア メンブラニ ファシエンス （イー．シー．ハンセン） イー．シー．ハンセン〔Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎｉ ｆａｃｉｅｎｓ （Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ） Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、サッカロマイセス セルビジエ マイヤー イーエクッス イー．シー．ハンセン〔Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ｍｅｙｅｒｅｘ Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、リゾクトニア ソラニ ケーン Ｏ−２８株（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｋｕｅｈｎ Ｏ−２８）、ロセリニア ネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ）、フザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ スプナシエ Ｏ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｓｐｎａｃｉａｅ Ｏ−２７）、及びフザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ ラディシス−ライコペルシチ Ｏ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ Ｏ−３４）からなる群より選ばれた少なくとも１種の微生物である、前記〔１〕記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
〔３〕 ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７８、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７９及びＦＥＲＭ Ｐ−１９１８０からなる群より選ばれた微生物である、前記〔１〕又は〔２〕記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
〔４〕 下記ａ）〜ｃ）：
ａ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
ｂ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の馴化培地、及び
ｃ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の抽出物
からなる群より選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有してなる、植物に対する有害生物の防除剤、
〔５〕 キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分をさらに含有してなる、前記〔４〕記載の防除剤、
〔６〕 害虫忌避成分が、キク科植物の抽出物又はショウガ植物の抽出物である、前記〔５〕記載の防除剤、
〔７〕 下記ａ）〜ｃ）：
ａ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
ｂ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の培養物、及び
ｃ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の抽出物
からなる群より選ばれた少なくとも１種を、植物又は該植物を生育させるための土壌に供給することを特徴とする、有害生物の防除方法、
〔８〕 キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分を植物又は該植物を生育させるための土壌にさらに供給する、前記〔７〕記載の有害生物の防除方法、
〔９〕 有害生物が、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ エフ グレーバー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｆｇｌａｂｅｒ）、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ バー．オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｖａｒ．ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス ナイジャー ファン ティーゲム（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ｖａｎ Ｔｉｅｇｈｅｍ）、ムコル ヘマリスヴェーマー エフ．ヘマリス（Ｍｕｃｏｒ ｈｉｅｍａｌｉｓ Ｗｅｈｍｅｒｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）、ペニシリウム クリソゲナム ゾーム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ Ｔｈｏｍ）、リゾプス オリゼ ウェント アンド プリンセン ギーリングズ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ Ｗｅｎｔ ＆ Ｐｒｉｎｓｅｎ Ｇｅｅｒｉｎｇｓ）、カンジダ アルビカンス（ロビン） バークホント〔Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ （Ｒｏｂｉｎ） Ｂｅｒｋｈｏｎｔ〕、クリプトコッカス ネオフォーマンス （サンフェリス） ブィレミン〔Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ （Ｓａｎｆｅｌｉｃｅ） Ｖｕｉｌｌｅｍｉｎ〕、ピキア メンブラニ ファシエンス （イー．シー．ハンセン） イー．シー．ハンセン〔Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎｉ ｆａｃｉｅｎｓ （Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ） Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、サッカロマイセス セルビジエ マイヤー イーエクッス イー．シー．ハンセン〔Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ｍｅｙｅｒ ｅｘ Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、リゾクトニア ソラニ ケーン Ｏ−２８株（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｋｕｅｈｎ Ｏ−２８）、ロセリニアネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ）、フザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ スプナシエ Ｏ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｓｐｎａｃｉａｅ Ｏ−２７）、フザリウムオキシスプラム エフ．スピーシーズ ラディシス−ライコペルシチ Ｏ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ Ｏ−３４）、エンドウヒゲナガアブラムシ及びコナガからなる群より選ばれた少なくとも１種である、前記〔７〕又は〔８〕記載の有害生物の防除方法、並びに
〔１０〕 配列番号：1 〜３いずれかに示される塩基配列を有する核酸、
に関する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明の微生物は、肥料から、本発明者らにより単離された微生物であり、植物病原菌の生育の抑制能を有するバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物である。
【００１２】
本発明の微生物は、植物病原菌の生育の抑制能を有するという優れた性質を有する。したがって、本発明の微生物によれば、植物病原菌を防除することができるという優れた効果を発揮する。また、本発明の微生物によれば、植物病原菌の生育を抑制し、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を発揮する。さらに、本発明の微生物は、広範囲の植物病原菌、例えば、複数又はそれ以上の植物病原菌に対する抗菌活性を発揮するという優れた性質を有する。したがって、本発明の微生物によれば、種々の土壌病害を防除することができるという優れた効果を発揮する。また、本発明の微生物は、植物の栽培時に通常用いられる肥料中から単離された微生物であり、作物等の植物の生育環境に近い環境に生育する性質を有する。したがって、本発明の微生物によれば、植物の生育等に及ぼす負の影響（例えば、生育阻害等）が実質的にないという優れた効果を発揮する。
【００１３】
本発明の微生物は、下記微生物学的性質：
（１）桿菌
（２）細胞の大きさ：０．７〜１．０μｍ×０．８〜２．０μｍ
（３）多形性：無
（４）運動性：有 （周毛）
（５）胞子の有無：有 （中央）
（６）グラム染色：陽性
（７）ＭＲテスト：陽性
（８）インドール産生：無
（９）クエン酸の利用：ｋｏｓｅｒ陰性、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ陽性
（１０）無機窒素源資化性：硝酸塩を資化するが、アンモニウム塩は資化しない
（１１）ウレアーゼ活性：無
（１２）オキシダーゼ活性：無
（１３）カタラーゼ活性：有
（１４）生育の範囲ｐＨ：４．０〜８．５
（１５）生育の範囲温度：３０〜５０℃
（１６）好気性
（１７）Ｏ−Ｆテスト：陰性
を有する。本発明の微生物としては、具体的には、バチルス スピーシーズ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．） Ａ−３、バチルス スピーシーズ Ａ−７及びバチルス スピーシーズ Ａ−１９にさらに分類される。なお、本発明の微生物のさらに詳細な微生物学的性質を、後述の実施例の表１〜表４に示す。
【００１４】
本発明の微生物であるバチルス スピーシーズ Ａ−３は、１６Ｓ ｒＤＮＡが、配列番号：１に示される塩基配列を含むものであり、バチルス スピーシーズ Ａ−７は、１６Ｓ ｒＤＮＡが、配列番号：２に示される塩基配列を含むものであり、バチルス スピーシーズ Ａ−１９は、１６Ｓ ｒＤＮＡが、配列番号：３に示される塩基配列を含むものである。
【００１５】
なお、本発明の微生物は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−３、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−７及びＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−１９と命名・表示され、それぞれ、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７８、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７９及びＦＥＲＭ Ｐ−１９１８０として、寄託日：２００２年１２月２６日、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター〔日本国茨城県つくば市東１−１−１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）〕に寄託されている。
【００１６】
本発明の微生物により生育を抑制する対象となる植物病原菌は、植物に感染し、病害を引き起こす細菌であり、具体的には、例えば、ほうれん草株腐病の病原菌として知られているリゾクトニア ソラニ ケーン〔Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ ｋｕｅｈｎ （例えば、Ｏ−２８株等）〕、ほうれん草萎凋病の病原菌として知られているフザリウム オキシスポラム エフ．スピーシーズスピナシエ Ｏ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｓｐｎａｃｉａｅ Ｏ−２７）、果樹紋羽病の病原菌として知られているロセリニア ネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ）、トマト根腐萎凋病の病原菌として知られているフザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ ラディシス−ライコペルシチ Ｏ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ Ｏ−３４）、さらには、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ エフ グレーバー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｆ ｇｌａｂｅｒ）、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ バー．オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｖａｒ． ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス ナイジャー ファン ティーゲム（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ｖａｎ Ｔｉｅｇｈｅｍ）、ムコル ヘマリス ヴェーマー エフ．ヘマリス（Ｍｕｃｏｒ ｈｉｅｍａｌｉｓ Ｗｅｈｍｅｒ ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）、ペニシリウム クリソゲナム ゾーム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ Ｔｈｏｍ）、リゾプス オリゼ ウェント アンド プリンセン ギーリングズ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ Ｗｅｎｔ＆ Ｐｒｉｎｓｅｎ Ｇｅｅｒｉｎｇｓ）、カンジダ アルビカンス （ロビン） バークホント〔Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ （Ｒｏｂｉｎ） Ｂｅｒｋｈｏｎｔ〕、クリプトコッカス ネオフォーマンス （サンフェリス） ブィレミン〔Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ （Ｓａｎｆｅｌｉｃｅ） Ｖｕｉｌｌｅｍｉｎ〕、ピキア メンブラニ ファシエンス （イー．シー．ハンセン） イー．シー．ハンセン〔Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎｉ ｆａｃｉｅｎｓ （Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ） Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、サッカロマイセス セルビジエ マイヤー イーエクッス イー．シー．ハンセン〔Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ｍｅｙｅｒ ｅｘ Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕等が挙げられる。
【００１７】
本発明の微生物の生育範囲温度は、具体的には、バチルス スピーシーズ Ａ−３については、２５〜４５℃であり、好ましくは、３７〜４０℃であり、バチルス スピーシーズ Ａ−７については、２５〜４５℃であり、好ましくは、３７〜４０℃であり、バチルス スピーシーズ Ａ−１９については、２５〜５０℃である。
【００１８】
また、本発明の微生物の生育範囲ｐＨは、具体的には、バチルス スピーシーズ Ａ−３については、ｐＨ４〜１０であり、好ましくは、４〜７であり、バチルス スピーシーズ Ａ−７については、ｐＨ４〜１０であり、好ましくは、ｐＨ４〜８であり、バチルス スピーシーズ Ａ−１９については、４〜８、好ましくは、４〜７である。
【００１９】
本発明の微生物の培養に用いられる培地としては、前記生育範囲ｐＨであり、かつ前記窒素源、炭素源、補助成分等を含有する培地であればよい。前記培地としては、具体的には、例えば、ポテトデキストロース培地〔ニッスイ社製、カタログ番号０５７０９、培地１リットルあたりの組成：ポテト抽出液末 ４．０ｇ、ブドウ糖 ２０ｇ、寒天 １５ｇ（ｐＨ６．０）〕、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｂｒｏｔｈ〔オキソイド（Ｏｘｏｉｄ）社製、カタログ番号２５０４２７、培地１リットルあたりの組成：Ｌａｂ−Ｌｅｍｃｏ ｐｏｗｄｅｒ（商品名） １ｇ、ペプトン ５ｇ、酵母エキス ２ｇ、塩化ナトリウム ５ｇ、寒天 １５ｇ（ｐＨ６．０）〕等が挙げられる。なお、前記培地、例えば、前記ポテトデキストロース培地及びＮｕｔｒｉｅｎｔ Ｂｒｏｔｈを液体培地として用いる場合、寒天を含まない組成とすればよい。
【００２０】
本発明の微生物による植物病原菌の生育の抑制能は、例えば、植物病原菌を播種した固体培地上に、本発明の微生物の培養物を供し、阻止円の形成の有無、阻止円の大きさを観察する評価方法により、評価されうる。前記固体培地としては、例えば、前記ポテトデキストロース培地等が挙げられ、好ましくは、植物病原菌の生育及び本発明の微生物の生育が良好であり、かつ阻止円の形成が確認可能な培地であることが望ましい。
【００２１】
なお、本発明の微生物による前記植物病原菌の生育の抑制能の発現は、培養条件、具体的には、培養温度、培養ｐＨ、培養時間、培養時における振盪度等について至適化することにより、最適化されうる。かかる培養条件の至適化は、種々の培養条件下に培養して得られた各種培養物について、前記評価方法により、阻止円の大きさを評価することにより容易に行なわれうる。
【００２２】
本発明の微生物は、肥料、コンポスト化過程にある堆積物を滅菌水等に懸濁し、ついで、得られた懸濁液を前記培地に塗布して、培養し、得られたコロニーについて、前記植物病原菌の生育を抑制すること、後述の実施例の表１〜表４に示される微生物学的性質等を指標として単離して、得ることができる。
【００２３】
本発明の微生物によれば、前記したように、植物病原菌の生育を抑制することができるため、本発明の微生物、その馴化培地又はその抽出物を有害生物等に対する防除剤として用いることができる。したがって、本発明により、防除剤が提供されうる。
【００２４】
本発明の防除剤は、下記ａ）〜ｃ）：
ａ）前記バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
ｂ）前記バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の馴化培地、及び
ｃ）前記バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の抽出物
からなる群より選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有する。したがって、本発明の防除剤によれば、土壌等への供給、肥料等への供給、植物の根部への供給、種子への供給等の簡便な手法により、有害生物により引き起こされる植物の病害等を防ぐことができるという優れた効果を発揮する。また、本発明の防除剤によれば、土壌に供給することにより、植物病原菌の生育を抑制し、それにより、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を発揮する。
【００２５】
本発明の防除剤は、キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分をさらに含有してもよい。
【００２６】
本発明の防除剤によれば、広範囲の植物病原菌、例えば、複数又はそれ以上の植物病原菌に対して抗菌活性を発揮し、かつ害虫を忌避することができる。したがって、本発明の防除剤は、種々の土壌病害を防除することができるという優れた効果を発揮する。
【００２７】
本発明の防除剤により防除されうる有害生物としては、前記植物病原菌等の微生物；コナガ〔Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ（Ｌｉｎｎａｕｓ）〕、エンドウヒゲナガアブラムシ〔Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｐｉｓｕｍ（Ｈａｒｒｉｓ）〕等が挙げられる。
【００２８】
前記「供給」としては、散布、混合、塗布、浸漬等が挙げられる。
【００２９】
本明細書においては、前記ａ）の「微生物」とは、培養後に得られた培養液又は微生物細胞自体をいう。前記ａ）の微生物は、本発明の微生物を、前述の適切な培地で、適切な培養条件下に培養することにより得られうる。
【００３０】
本明細書においては、前記ｂ）の「馴化培地」とは、培養後の培養液から、微生物細胞を除去して得られた培養産物をいう。前記ｂ）の馴化培地は、例えば、濾過、遠心分離等により、培養液から、微生物細胞を除去することにより得られうる。
【００３１】
本明細書においては、前記ｃ）の「抽出物」とは、前記ａ）の微生物又は前記ｂ）の馴化培地から抽出された産物をいう。前記ｃ）の抽出物は、例えば、
（Ｉ）前記微生物細胞を、リゾチーム等の溶菌性酵素、超音波、圧力、凍結等の手段により破砕し、得られた破砕物を慣用の精製法（例えば、塩析、カラムクロマトグラフィー、有機溶媒抽出等）により精製すること、
（II）前記馴化培地を慣用の精製法（例えば、塩析、カラムクロマトグラフィー、有機溶媒抽出等）により精製すること、
等により得られうる。
【００３２】
前記キク科植物としては、アーティチョーク、防虫菊等が挙げられる。また、ショウガ科植物としては、月桃等が挙げられる。
【００３３】
前記キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分としては、例えば、前記キク科植物又はショウガ科植物からアルコール抽出、熱水抽出、水蒸気蒸留方法等により抽出された抽出液（すなわち、エタノール抽出物、熱水抽出物、水蒸気蒸留抽出物等）等が挙げられる。具体的には、アーティチョークのエタノール抽出物、アーティチョークの熱水抽出物、月桃のエタノール抽出物、月桃の熱水抽出物、月桃の水蒸気蒸留抽出物等が挙げられる。
【００３４】
本発明の防除剤中の前記ａ）〜ｃ）の有効成分の含有量は、植物病原菌の生育を抑制するに十分な量であればよい。特に限定されないが、例えば、本発明の防除剤中の前記ａ）〜ｃ）の有効成分の量としては、微生物の量として、１×１０2 〜１×１０30 ｃｆｕ、好ましくは、１×１０3 〜１×１０15 ｃｆｕ、より好ましくは、１×１０5 〜１×１０12 ｃｆｕに相当する量等が挙げられる。また、使用時に、水、培地成分等で希釈して用いるためには、さらに、濃縮されたものであってもよい。
【００３５】
前記害虫忌避成分をさらに含有した本発明の防除剤中における該害虫忌避成分の含有量は、害虫忌避効果を発揮させるに十分な量であればよい。
【００３６】
本発明の防除剤の供給方法としては、例えば、用途に適した濃度で前記ａ）〜ｃ）の有効成分を含有した防除剤、又は用途に適した濃度で前記ａ）〜ｃ）の有効成分と前記害虫忌避成分とを含有した防除剤を、じょうろや噴霧器等を用いて、作物の苗、種子等を植える前の土壌に供給すること、作物の苗、種子等に直接供給すること等が挙げられる。本発明の防除剤を供給した土壌は、土壌病害菌の生育が抑制され、有用微生物の多く存在する環境となり土壌病害の起こりにくい土壌となる。
【００３７】
また、本発明の防除剤は、作物の種類及びその生育時期、植物病原菌の種類及びその活動時期、害虫の種類及びその発生時期等に合わせて施用されうる。
【００３８】
なお、本発明の防除剤の防除効果の評価は、例えば、
（ｉ）防除剤の供給による植物病原菌に対する阻止円の形成の有無又は該阻止円の大きさの測定を行なう評価方法、
（ii）防除剤を塗布した葉等に集まる害虫の有無又は害虫の死虫率の測定を行なう評価方法、
等により行なわれうる。ここで、前記（ｉ）の評価方法においては、阻止円を形成することが、該防除剤が、防除効果を有することの指標となり、阻止円の大きさが、防除効果の大きさに比例する。また、前記（ii）の評価方法においては、防除剤を塗布した葉等に害虫が集まらないこと及び害虫が死に至ることが、該防除剤が、防除効果を有することの指標となる。
【００３９】
本発明の微生物によれば、有害生物の防除方法が提供されうる。本発明の防除方法は、前記ａ）〜ｃ）からなる群より選ばれた少なくとも１種を、植物又は該植物を生育させるための土壌に供給することを特徴とする方法である。本発明の防除方法においては、キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分を植物又は該植物を生育させるための土壌にさらに供給してもよい。
【００４０】
本発明の防除方法において、前記ａ）〜ｃ）の供給量及び前記害虫忌避成分の供給量は、植物の種類、植物への供給箇所の大きさ、植物を生育させるための土壌の面積、防除対象の微生物の種類、防除対象の害虫の種類等により適宜設定することができる。前記ａ）〜ｃ）の供給量は、例えば、ほうれん草株腐れ病病原菌に対しては、土壌１ｍ3 あたり、微生物の量として、１×１０3 〜１×１０15ｃｆｕ、好ましくは、１×１０5 〜１×１０12 ｃｆｕとなる量であればよく、他の病原菌に対しても同様の量であればよい。また、前記害虫忌避成分の供給量は、前記害虫忌避成分を防除剤１Ｌ中２．５ｇ（乾燥重量）含有する場合、水により、５００〜１０，０００倍の濃度とし、防除効果を発揮しうる量となるように、土壌又は植物に撒布すればよい。
【００４１】
本発明の防除方法において、前記ａ）〜ｃ）と前記害虫忌避成分とは、前記防除剤として、植物又は該植物を生育させるための土壌に供給してもよい。
【００４２】
植物又は該植物を生育させるための土壌への前記ａ）〜ｃ）と前記害虫忌避成分との供給は、散布、混合、塗布、浸漬等により行なわれうる。具体的には、特に限定されないが、例えば、
− 本発明の微生物の培養液を、作物を栽培する前の土壌に混和、又は噴霧器により土壌に撒布すること、
− 本発明の微生物の馴化培地を、噴霧器により、作物が植えられた土壌又は作物に撒布すること、
− 本発明の微生物の馴化培地を結晶化又は粉末化させて得られた産物を、作物を栽培する前の土壌に混和又は作物が植えられた土壌に撒布すること、
−本発明の微生物の培養液を、ふすま、もみがら、土壌改良剤に添加し、固定させて得られた産物を、作物を栽培する前の土壌に混和又は該土壌に撒布すること、
− 本発明の微生物の馴化培地と、キク科植物又はショウガ科植物から、エタノール抽出液又は熱水抽出液とを混合して得られた防除剤又は、該馴化培地とエタノール抽出液又は熱水抽出液とのそれぞれを別々に、噴霧器を用いて、害虫の発生しやすい箇所に撒布するか、あるいは、作物又は土壌に撒布すること
等が挙げられる。
【００４３】
【実施例】
以下、本発明を実施例等により詳細に説明するが、本発明は、かかる実施例等により限定されるものではない。
【００４４】
実施例１
（１）供試試料の調製
株式会社カンサイ倉橋工場内のコンポスト化過程にある堆積物から１ヵ所あたり約１００ｇの堆積物を採取した。採取した堆積物のうち約１ｇと、滅菌生理食塩水１０ｍｌとを、２６ｍｌ容の試験管に入れた。得られた混合物を、ボルテックスミキサーで約５分間混合し、その後、２０分間室温（約２５℃）で放置し、１０％ 試料含有懸濁液（供試試料）を得た。得られた供試試料を、植物病原菌に対する阻止円形成試験に供した。
【００４５】
（２）対峙試験
植物病原菌として、
ａ）ほうれん草株腐病の病原菌〔リゾクトニア ソラニ ケーン（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｋｕｅｈｎ）〕
ｂ）ほうれん草萎凋病の病原菌〔フザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ スピナシエ Ｏ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｓｐｉｎａｃｉａｅ Ｏ−２７）〕
ｃ）果樹紋羽病の病原菌〔ロセリニア ネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ）〕、及び
ｄ）トマト根腐萎凋病の病原菌〔フザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ ラディシス−リオペルシチ Ｏ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｏｐｅｒｓｉｃｉ Ｏ−３４）〕
を用いた。
【００４６】
ポテトデキストロース培地〔ニッスイ社製、カタログ番号：０５７０９（１リットルあたりの組成：ポテト抽出液粉末 ４ｇ、ブドウ糖 ２０ｇ、寒天粉末 １５ｇ）〕 ３．９ｇを、イオン交換水 １００ｍｌに溶解し、得られた溶液を１２１℃で１５分間滅菌した。ついで、得られた滅菌培地 ２０ｍｌを、滅菌シャーレに入れ、固化させ、試験用培地を得た。
【００４７】
各植物病原菌を、前記試験用培地の中心部分に接種した。ついで、播種箇所から等間隔になるように、試験用培地に円形濾紙（直径８ｍｍ、厚手、アドバンテック社製）を四方に配置した。なお、前記円形濾紙は、使用前に、１２１℃で１５分間処理することにより滅菌された濾紙である。
【００４８】
前記（１）で得られた供試試料 １００μｌを、試験用培地の円形濾紙上に滴下した。
【００４９】
ついで、各試験用培地を、３０℃の恒温室内で、約１〜２週間インキュベートした。その後、各試験用培地上の阻止円を観察した。阻止円を形成した供試試料について、画線塗抹培養を繰返し行なうことにより、菌を純粋化した。
【００５０】
ついで、純粋化された菌を用いて、対峙試験を行なった。明確な阻止円の形成を、植物病原菌の生育抑制能を有する菌であることの指標とした。その結果、Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９が得られた。
【００５１】
（３）微生物学的性質の検討
得られたＡ−３、Ａ−７及びＡ−１９のそれぞれについて、微生物学的性質を調べた。各微生物学的性質は、慣用の方法により評価された。その結果を表１〜４に示す。
【００５２】
【表１】
【００５３】
【表２】
【００５４】
【表３】
【００５５】
【表４】
【００５６】
前記表１〜４に示される微生物学的性質及び１６ｓ ｒＤＮＡの塩基配列の解析結果から、前記Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９は、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する細菌であることが示唆された。
【００５７】
なお、前記Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９は、それぞれ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−３、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−７及びＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−１９と命名・表示され、寄託日：２００２年１２月２６日、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター〔日本国茨城県つくば市東１−１−１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）〕に、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７８、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７９及びＦＥＲＭ Ｐ−１９１８０として寄託されている。
【００５８】
実施例２
実施例１で得られたＡ−３、Ａ−７及びＡ−１９を、それぞれ、前記ポテトデキストロース培地に、１白金耳播種し、３０℃で２４時間、２４０ｒｐｍで振盪培養した。
【００５９】
試験例１ 円形濾紙法
前記防除剤による各種微生物の生育に対する抑制効果を、前記実施例２で得られた各馴化培地による該微生物の生育に対する阻止円の形成及び該阻止円の大きさを測定することにより評価した。
【００６０】
微生物としては、前記ａ）〜ｄ）の植物病原菌、酵母等を用いた。各微生物を、それぞれの培養に適した培地を用い、十分に生育するまで培養し、各微生物の培養物を得た。
【００６１】
ポテトデキストロース培地〔ニッスイ社製、カタログ番号：０５７０９（１リットルあたりの組成：ポテト抽出液粉末 ４ｇ、ブドウ糖 ２０ｇ、寒天粉末 １５ｇ）〕 ３．９ｇを、イオン交換水 １００ｍｌに溶解し、得られた溶液を１２１℃で１５分間滅菌した。ついで、得られた滅菌培地 ２０ｍｌを、滅菌シャーレに入れ、固化させ、試験用培地を得た。
【００６２】
ついで、得られた試験用培地上の中心部分に、５ｍｍ×５ｍｍ角で各種微生物を播種した。また、播種箇所から等間隔（２ｃｍ）になるように、試験用培地に１２１℃で１５分間滅菌した円形濾紙（直径８ｍｍ、アドバンテック社製、商品名：定性濾紙、厚手）を四方に配置し、該円形濾紙上に、実施例２で得られた培養液 １００μｌを滴下した。
【００６３】
ついで、各試験用培地を、３０℃の恒温室内で、前記ａ）及びｃ）については、約１週間インキュベートし、前記ｂ）及びｄ）については、約２週間インキュベートした。その後、各試験用培地上の阻止円の形成を観察した。その結果を表５に示す。
【００６４】
【表５】
【００６５】
その結果、表５に示すように、各種微生物に対して、明確な阻止円を形成することがわかった。すなわち、実施例１で得られた各細菌は、防除剤として有用であることが示された。また、実施例１で得られた各細菌は、複数の植物病原菌、植物病原菌等の生育を抑制し、さらには、酵母の生育の抑制能を有することが示され、特に、Ａ−３は、黄色色素を産生したため、新規菌株であることが示唆された。
【００６６】
実施例３
月桃（葉２ｋｇ／エタノール１８Ｌ、茎３．７８ｋｇ／エタノール１０Ｌ）又はアーティチョーク（葉４．３ｇ／エタノール２００ｍｌ）を、ロータリーエバポレーターを用いて濃縮し、エタノール抽出液〔月桃 約２０ｍｇ（月桃抽出物乾燥重量）／ｍｌ、アーティチョーク 約１００ｍｇ（アーティチョーク抽出物乾燥重量）／ｍｌ〕を得た。ついで、前記エタノール抽出液と、実施例２で得られた馴化培地とを混合し、エタノール抽出液の最終濃度が、１体積％、１０体積％又は５０体積％である被検試料を得た。
【００６７】
ここで、なお、月桃のエタノール抽出液から得られた１体積％−被検試料、１０体積％−被検試料及び５０体積％−被検試料のそれぞれに含まれる抽出物は、乾燥重量として、それぞれ、約０．９３μｇ、約９．３μｇ及び約４６．５μｇである。また、アーティチョークのエタノール抽出液から得られた１体積％−被検試料、１０体積％−被検試料及び５０体積％−被検試料のそれぞれに含まれる抽出物は、乾燥重量として、それぞれ、約４．６５μｇ、約４６．５μｇ、約２３２．５μｇである。
【００６８】
また、月桃（葉 １ｋｇ／イオン交換水 ４Ｌ、茎 １ｋｇ／イオン交換水 １Ｌ）又はアーティチョーク（葉 １００ｇ／イオン交換水 ３００ｍｌ）を沸騰水中で１時間煮沸し、ロータリーエバポレーター等により、熱水抽出液〔１００ｍｇ（抽出物乾燥重量）／ｍｌ〕を得た。ついで、前記熱水抽出液と、実施例２で得られた馴化培地とを混合し、熱水抽出液の最終濃度が、１体積％、１０体積％又は５０体積％である被検試料を得た１体積％−被検試料、１０体積％−被検試料及び５０体積％−被検試料のそれぞれに含まれる抽出物は、乾燥重量として、それぞれ、約４．６５μｇ、約４６．５μｇ、約２３２．５μｇである。
【００６９】
試験例２
（１）供試昆虫の調製
供試昆虫として、コナガと、エンドウヒゲナガアブラムシとを用いた。
【００７０】
コナガ及びエンドウヒゲナガアブラムシともに、２５±３℃、明条件１６時間−暗条件８時間の条件下、インキュベーター内で飼育した。
【００７１】
エンドウヒゲナガアブラムシについては、以下のようにして得られた虫体を用いた。ソラマメの芽出し（発芽から約４日〜１週間）の茎部分（豆の直上部分）に、産業用ワイパー〔商品名：キムワイプ（登録商標）（十条キンバリー株式会社製）〕 約１ｃｍ×１５ｃｍを巻きつけた。ついで、ワイパーを巻き付けた茎を、試験管（外径２５ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）に入れた。かかる試験管に、成虫数匹を入れ、産子させ、１〜２齢の幼虫を得た。また、同様に、成虫に産子させ、該成虫を除去した後、幼虫を生育して、成虫を得た。得られた１〜２齢の幼虫と成虫とを、以下の試験に用いた。
【００７２】
また、コナガについては、カイワレ大根と人工飼料（ニッチク薬品工業（株）社製、商品名：インセクタコナガ−０１２８）とを併用して累代飼育した個体群の脱皮直後の４齢幼虫を用いた。
【００７３】
（２）エンドウヒゲナガアブラムシに対する忌避効果の評価
有害生物の代表例として、エンドウヒゲナガアブラムシを用い、実施例３で得られた被検試料による該エンドウヒゲナガアブラムシに対する忌避効果を評価した。
【００７４】
ソラマメの芽出しの上部を、前記被検試料に１分間浸漬させ、その後、風乾した。ついで、ソラマメの芽出しと幼虫をカップに入れた。その後、カップに幼虫を入れた時点から開始して、２４時間毎に、観察し、１〜２齢の幼虫及び６〜７齢の成虫が、芽出しに寄りつくかどうかを指標として、忌避効果を評価した。なお、対照として、前記被検試料のかわりに、エタノール又は水に浸漬させたソラマメの芽出しを用いた。
【００７５】
その結果、対照であるエタノール又は水に浸漬させたソラマメの芽出しには、エンドウヒゲナガアブラムシが寄ってきたが、Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９のそれぞれから得られた各被検試料に浸漬させたソラマメのいずれにも寄りつかなかった。したがって、Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９は、エンドウヒゲナガアブラムシを忌避する性質を有することがわかった。
【００７６】
（３）コナガに対する忌避効果の評価
有害生物の一例として、コナガを用い、実施例３で得られた被検試料による該コナガに対する忌避効果を評価した。
【００７７】
忌避効果の評価には、キャベツの苗片（直径２ｃｍ）の両面に、前記被検試料２０μｌを塗布し、風乾させ、得られた処理苗片を用いた。前記処理苗片を、直径６ｃｍ、高さ２８ｃｍのカップ内に入れ、コナガ４齢幼虫を１カップあたり１匹を該カップにさらに入れた。２４時間毎にコナガが蛹になるまでの期間観察し、接触後の死虫率を調べた。なお、対照として、前記被検試料のかわりに、エタノール又は水で処理した対照苗片を用いた。また、処理苗片及び対照苗片を、２４時間毎に交換した。結果を表６〜９に示す。
【００７８】
【表６】
【００７９】
【表７】
【００８０】
【表８】
【００８１】
【表９】
【００８２】
その結果、対照であるエタノール又は水で処理した対照苗片には、コナガが寄ってきたが、月桃及びアーティチョークのそれぞれから得られた各被検試料で処理した処理苗片のいずれにも寄りつかなかった。したがって、月桃及びアーティチョークは、コナガを忌避する性質を有することがわかった。
【００８３】
試験例３
有害生物の代表例として、エンドウヒゲナガアブラムシ１〜２齢幼虫を用い、前記実施例３で得られた被検試料に対する該エンドウヒゲナガアブラムシの薬剤感受性を評価した。
【００８４】
ガラス管（直径８ｍｍ×高さ４０ｍｍ）の一端を、ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＦＩＬＭ（商品名：パラフィルム）で覆った。被検試料と人工飼料（組成を表１０に示す）との混合物 ２０μｌを、前記ガラス管上のパラフィルム部分に滴下し、その上を薄く伸張したパラフィルムで覆った。得られたものを、被検試料の有効量の評価のための餌として用いた。
【００８５】
【表１０】
【００８６】
前記餌に、円筒状に加工したゼラチンカプセル（和光純薬工業株式会社製、商品名：ゼラチンカプセルＮｏ．００を加工し使用した）をかぶせた。前記カプセル内に、エンドウヒゲナガアブラムシを入れ、ゴース（３ｃｍ×３ｃｍ角）とプラスチックチューブ（内径８ｍｍ、外径１１ｍｍ、高さ８ｍｍ）とで蓋をし、飼育瓶を得た。対照として、エタノール又は水と前記人工飼料との混合物 ２０μｌを用いた。
【００８７】
エンドウヒゲナガアブラムシを入れた後、１つの飼育瓶の中に1 〜２齢幼虫を３匹ずつ入れ、２３±３℃の条件下、２４時間毎に、脱皮数及び死虫数を観察し、評価を行なった。結果を表１１〜表１４に示す。
【００８８】
【表１１】
【００８９】
【表１２】
【００９０】
【表１３】
【００９１】
【表１４】
【００９２】
その結果、表１１及び表１２に示されるように、エンドウヒゲナガアブラムシは、月桃の茎のエタノール抽出液の含有量が１０体積％である被検試料に対し、１日目で、３３％の死虫率という高い感受性を示した。また、表１３及び表１４に示されるように、エンドウヒゲナガアブラムシは、アーティチョーク−株のエタノール抽出液又は熱水抽出液の含有量が５０体積％である被検試料に対し、１日目で、３３％の死虫率という高い感受性を示した。
【００９３】
実施例４
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液を含有した防除剤（１×１０2 〜１×１０ 30 ｃｆｕ相当量）を調製する。
【００９４】
得られた防除剤を、作物を栽培する前の土壌に混和、又は噴霧器により土壌に撒布する。その結果、土壌の環境を、植物病害に強い土壌に改良できる。
【００９５】
実施例５
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液から菌体を除去し、得られた馴化培地（１×１０2 〜１×１０ 30 ｃｆｕ相当量）を含有した防除剤を調製する。
【００９６】
得られた防除剤を、噴霧器により、作物が植えられた土壌又は作物に撒布する。その結果、作物の病害を防ぐことができる。
【００９７】
実施例６
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液から菌体を除去し、得られた馴化培地（１×１０2 〜１×１０ 30 ｃｆｕ相当量）を結晶化又は粉末化させ、防除剤を調製する。
【００９８】
得られた防除剤を、作物を栽培する前の土壌に混和又は作物が植えられた土壌に撒布する。その結果、作物の病害を防ぐことができる。
【００９９】
実施例７
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液（１×１０2 〜１×１０ 30 ｃｆｕ相当量）を、ふすまやもみがら、土壌改良剤に添加し、固定させる。得られた産物を、作物を栽培する前の土壌に混和又は該土壌に撒布する。その結果、植物病害を防ぐことができる。
【０１００】
実施例８
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液から菌体を除去し、馴化培地を得る。また、実施例３と同様に、キク科植物又はショウガ科植物から、エタノール抽出液又は熱水抽出液を調製する。ついで、馴化培地と、エタノール抽出液又は熱水抽出液とを含有した防除剤を調製する。
【０１０１】
得られた防除剤を、噴霧器を用いて、害虫の発生しやすい箇所に撒布するか、あるいは、作物又は土壌に撒布する。その結果、害虫忌避効果が得られ、かつ植物病害を防ぐことができる。
【０１０２】
【発明の効果】
本発明の微生物によれば、種々の植物病原菌を防除することができ、植物病原菌の生育を抑制し、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができ、種々の土壌病害を防除することができるという優れた効果を奏する。また、本発明の防除剤によれば、土壌等への供給、肥料等への供給、植物の根部への供給等の簡便な手法により種々の病害等を防ぐことができ、広範囲の植物病原菌に対して抗菌活性を発揮し、かつ害虫を忌避することができ、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を奏する。さらに、本発明の防除方法によれば、土壌等への供給、肥料等への供給、植物の根部への供給等の簡便な手法により種々の病害等を防ぐことができ、広範囲の植物病原菌に対して抗菌活性を発揮し、かつ害虫を忌避することができ、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を奏する。
【０１０３】
【配列表】
【発明の属する技術分野】
本発明は、有害生物、特に、植物病原菌の生育の抑制能を有する微生物、該微生物を用いた防除剤等に関する。さらに詳しくは、本発明は、有害生物、特に、植物病原菌の生育を抑制する物質を産生する微生物、植物病原菌の生育を抑制すること及び／又は害虫を忌避することができる防除剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近代農業、特に、大規模な生産を目的とする農業においては、虫食いや病変部等がない見栄えのよい作物を得、かつ高収量を達成するために、化学合成農薬が使用されている場合があり、作物への該化学合成農薬の残留、該化学合成農薬による土壌、水等の環境の汚染等が懸念されている。そのため、いわゆる無農薬野菜、減農薬野菜等に注目が集まっている。
【０００３】
しかしながら、無農薬栽培には、手間がかかること、病害虫による被害を被りやすく、そのため、収量も減ること等の欠点があり、無農薬栽培を行なっている農家は、全体の数％にとどまっている。したがって、実質的に必要となる手間を減らす観点から、ほとんど化学合成農薬に頼っているのが現状である。
【０００４】
一方、化学合成農薬の代わりに、微生物を用いて、タバコ立枯病の病原菌、ナス科植物青枯病の病原菌、芝草病原菌、病原性糸状菌等の生育の抑制が試みられている。
【０００５】
具体的には、エンテロバクター属に属する微生物、例えば、タバコ根部から分離されたエンテロバクター クロアカエ Ｈ１８４株（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ Ｈ１８４）（ＦＥＲＭ ＢＰ−５０５７）の培養物は、タバコ植物の根部やナス科植物の根部に灌注することにより、タバコ立枯病の病原菌、ナス科植物青枯病の病原菌等の防除に用いられうることが知られている（特許文献１、特許文献２）。しかしながら、前記特許文献１及び特許文献２に記載のエンテロバクター属に属する微生物は、青枯病菌に対する拮抗作用を示すにすぎず、他の病原菌に対する拮抗作用を有するかどうかは不明である。
【０００６】
また、ストレプトミセス アルブラスは、スクレロティニア属、リゾクトニア属、ピシウム属、カーブラリア属、ゴイマイノマイセス属、コレットリカム属等に拮抗性を有しており、植物病原菌防除材等に利用されうることが知られている（特許文献３）。しかしながら、前記特許文献３に記載の植物病原菌防除材等は、芝草における病害に適用するためのものであり、他の植物に対する病原菌に適用できるかどうかは不明である。
【０００７】
さらに、バチルス属に属し、かつアフラトキシン分解性を有する微生物、具体的には、アフラトキシン分解性を有するバチルス サブチルスＤＢ９０１１株、及びバチルス プルミルスに属し、かつアフラトキシン分解性を有する微生物は、アフラトキシン生成能を有する真菌、特に、病原性糸状菌に対する発育抑制剤として使用されることが知られている（特許文献４、特許文献５）。特許文献４及び特許文献５に記載の発育抑制剤は、真菌、なかでも、アフラトキシン生成能を有する真菌、特に、病原性糸状菌の発育を抑制するものである。
【０００８】
【特許文献１】
特開平９−３７７７５号公報 段落番号００１０、表３及び表４
【特許文献２】
特開平１０−１３９６１０号公報 表５
【特許文献３】
特開平８−２４２８４６号公報 段落番号００４２、００４９
【特許文献４】
特開平５−１４６２８９号公報 段落番号００４６〜００５２
【特許文献５】
特開平５−２６８９４５号公報 段落番号００４８〜００５０
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、有害生物、特に、植物病原菌、真菌の酵母の生育を抑制する性質、広範囲の植物病原菌、例えば、複数又はそれ以上の植物病原菌に対する抗菌活性を発揮する性質、作物等の植物の生育環境に近い環境に生育する性質の少なくともいずれかの性質を有する微生物を提供することを目的とする。さらに、本発明は、広範囲、例えば、複数又はそれ以上の有害生物、具体的には、植物病原菌、真菌の酵母、害虫等により引き起こされる植物の病害を防ぐことが可能な防除剤を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明の要旨は、
〔１〕 植物病原菌の生育の抑制能を有する、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
〔２〕 植物病原菌が、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ エフ グレーバー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｆ ｇｌａｂｅｒ）、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ バー．オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｖａｒ． ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス ナイジャー ファン ティーゲム（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ｖａｎ Ｔｉｅｇｈｅｍ）、ムコル ヘマリス ヴェーマー エフ．ヘマリス（Ｍｕｃｏｒ ｈｉｅｍａｌｉｓ Ｗｅｈｍｅｒ ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）、ペニシリウム クリソゲナム ゾーム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ Ｔｈｏｍ）、リゾプス オリゼ ウェント アンド プリンセン ギーリングズ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅＷｅｎｔ ＆ Ｐｒｉｎｓｅｎ Ｇｅｅｒｉｎｇｓ）、カンジダ アルビカンス （ロビン） バークホント〔Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ （Ｒｏｂｉｎ） Ｂｅｒｋｈｏｎｔ〕、クリプトコッカス ネオフォーマンス （サンフェリス） ブィレミン〔Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ （Ｓａｎｆｅｌｉｃｅ） Ｖｕｉｌｌｅｍｉｎ〕、ピキア メンブラニ ファシエンス （イー．シー．ハンセン） イー．シー．ハンセン〔Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎｉ ｆａｃｉｅｎｓ （Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ） Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、サッカロマイセス セルビジエ マイヤー イーエクッス イー．シー．ハンセン〔Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ｍｅｙｅｒｅｘ Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、リゾクトニア ソラニ ケーン Ｏ−２８株（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｋｕｅｈｎ Ｏ−２８）、ロセリニア ネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ）、フザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ スプナシエ Ｏ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｓｐｎａｃｉａｅ Ｏ−２７）、及びフザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ ラディシス−ライコペルシチ Ｏ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ Ｏ−３４）からなる群より選ばれた少なくとも１種の微生物である、前記〔１〕記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
〔３〕 ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７８、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７９及びＦＥＲＭ Ｐ−１９１８０からなる群より選ばれた微生物である、前記〔１〕又は〔２〕記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
〔４〕 下記ａ）〜ｃ）：
ａ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
ｂ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の馴化培地、及び
ｃ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の抽出物
からなる群より選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有してなる、植物に対する有害生物の防除剤、
〔５〕 キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分をさらに含有してなる、前記〔４〕記載の防除剤、
〔６〕 害虫忌避成分が、キク科植物の抽出物又はショウガ植物の抽出物である、前記〔５〕記載の防除剤、
〔７〕 下記ａ）〜ｃ）：
ａ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
ｂ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の培養物、及び
ｃ）前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の抽出物
からなる群より選ばれた少なくとも１種を、植物又は該植物を生育させるための土壌に供給することを特徴とする、有害生物の防除方法、
〔８〕 キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分を植物又は該植物を生育させるための土壌にさらに供給する、前記〔７〕記載の有害生物の防除方法、
〔９〕 有害生物が、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ エフ グレーバー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｆｇｌａｂｅｒ）、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ バー．オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｖａｒ．ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス ナイジャー ファン ティーゲム（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ｖａｎ Ｔｉｅｇｈｅｍ）、ムコル ヘマリスヴェーマー エフ．ヘマリス（Ｍｕｃｏｒ ｈｉｅｍａｌｉｓ Ｗｅｈｍｅｒｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）、ペニシリウム クリソゲナム ゾーム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ Ｔｈｏｍ）、リゾプス オリゼ ウェント アンド プリンセン ギーリングズ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ Ｗｅｎｔ ＆ Ｐｒｉｎｓｅｎ Ｇｅｅｒｉｎｇｓ）、カンジダ アルビカンス（ロビン） バークホント〔Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ （Ｒｏｂｉｎ） Ｂｅｒｋｈｏｎｔ〕、クリプトコッカス ネオフォーマンス （サンフェリス） ブィレミン〔Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ （Ｓａｎｆｅｌｉｃｅ） Ｖｕｉｌｌｅｍｉｎ〕、ピキア メンブラニ ファシエンス （イー．シー．ハンセン） イー．シー．ハンセン〔Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎｉ ｆａｃｉｅｎｓ （Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ） Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、サッカロマイセス セルビジエ マイヤー イーエクッス イー．シー．ハンセン〔Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ｍｅｙｅｒ ｅｘ Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、リゾクトニア ソラニ ケーン Ｏ−２８株（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｋｕｅｈｎ Ｏ−２８）、ロセリニアネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ）、フザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ スプナシエ Ｏ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｓｐｎａｃｉａｅ Ｏ−２７）、フザリウムオキシスプラム エフ．スピーシーズ ラディシス−ライコペルシチ Ｏ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ Ｏ−３４）、エンドウヒゲナガアブラムシ及びコナガからなる群より選ばれた少なくとも１種である、前記〔７〕又は〔８〕記載の有害生物の防除方法、並びに
〔１０〕 配列番号：1 〜３いずれかに示される塩基配列を有する核酸、
に関する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明の微生物は、肥料から、本発明者らにより単離された微生物であり、植物病原菌の生育の抑制能を有するバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物である。
【００１２】
本発明の微生物は、植物病原菌の生育の抑制能を有するという優れた性質を有する。したがって、本発明の微生物によれば、植物病原菌を防除することができるという優れた効果を発揮する。また、本発明の微生物によれば、植物病原菌の生育を抑制し、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を発揮する。さらに、本発明の微生物は、広範囲の植物病原菌、例えば、複数又はそれ以上の植物病原菌に対する抗菌活性を発揮するという優れた性質を有する。したがって、本発明の微生物によれば、種々の土壌病害を防除することができるという優れた効果を発揮する。また、本発明の微生物は、植物の栽培時に通常用いられる肥料中から単離された微生物であり、作物等の植物の生育環境に近い環境に生育する性質を有する。したがって、本発明の微生物によれば、植物の生育等に及ぼす負の影響（例えば、生育阻害等）が実質的にないという優れた効果を発揮する。
【００１３】
本発明の微生物は、下記微生物学的性質：
（１）桿菌
（２）細胞の大きさ：０．７〜１．０μｍ×０．８〜２．０μｍ
（３）多形性：無
（４）運動性：有 （周毛）
（５）胞子の有無：有 （中央）
（６）グラム染色：陽性
（７）ＭＲテスト：陽性
（８）インドール産生：無
（９）クエン酸の利用：ｋｏｓｅｒ陰性、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ陽性
（１０）無機窒素源資化性：硝酸塩を資化するが、アンモニウム塩は資化しない
（１１）ウレアーゼ活性：無
（１２）オキシダーゼ活性：無
（１３）カタラーゼ活性：有
（１４）生育の範囲ｐＨ：４．０〜８．５
（１５）生育の範囲温度：３０〜５０℃
（１６）好気性
（１７）Ｏ−Ｆテスト：陰性
を有する。本発明の微生物としては、具体的には、バチルス スピーシーズ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．） Ａ−３、バチルス スピーシーズ Ａ−７及びバチルス スピーシーズ Ａ−１９にさらに分類される。なお、本発明の微生物のさらに詳細な微生物学的性質を、後述の実施例の表１〜表４に示す。
【００１４】
本発明の微生物であるバチルス スピーシーズ Ａ−３は、１６Ｓ ｒＤＮＡが、配列番号：１に示される塩基配列を含むものであり、バチルス スピーシーズ Ａ−７は、１６Ｓ ｒＤＮＡが、配列番号：２に示される塩基配列を含むものであり、バチルス スピーシーズ Ａ−１９は、１６Ｓ ｒＤＮＡが、配列番号：３に示される塩基配列を含むものである。
【００１５】
なお、本発明の微生物は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−３、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−７及びＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−１９と命名・表示され、それぞれ、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７８、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７９及びＦＥＲＭ Ｐ−１９１８０として、寄託日：２００２年１２月２６日、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター〔日本国茨城県つくば市東１−１−１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）〕に寄託されている。
【００１６】
本発明の微生物により生育を抑制する対象となる植物病原菌は、植物に感染し、病害を引き起こす細菌であり、具体的には、例えば、ほうれん草株腐病の病原菌として知られているリゾクトニア ソラニ ケーン〔Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ ｋｕｅｈｎ （例えば、Ｏ−２８株等）〕、ほうれん草萎凋病の病原菌として知られているフザリウム オキシスポラム エフ．スピーシーズスピナシエ Ｏ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｓｐｎａｃｉａｅ Ｏ−２７）、果樹紋羽病の病原菌として知られているロセリニア ネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ）、トマト根腐萎凋病の病原菌として知られているフザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ ラディシス−ライコペルシチ Ｏ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ Ｏ−３４）、さらには、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ エフ グレーバー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｆ ｇｌａｂｅｒ）、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ バー．オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｖａｒ． ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス ナイジャー ファン ティーゲム（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ｖａｎ Ｔｉｅｇｈｅｍ）、ムコル ヘマリス ヴェーマー エフ．ヘマリス（Ｍｕｃｏｒ ｈｉｅｍａｌｉｓ Ｗｅｈｍｅｒ ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）、ペニシリウム クリソゲナム ゾーム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ Ｔｈｏｍ）、リゾプス オリゼ ウェント アンド プリンセン ギーリングズ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ Ｗｅｎｔ＆ Ｐｒｉｎｓｅｎ Ｇｅｅｒｉｎｇｓ）、カンジダ アルビカンス （ロビン） バークホント〔Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ （Ｒｏｂｉｎ） Ｂｅｒｋｈｏｎｔ〕、クリプトコッカス ネオフォーマンス （サンフェリス） ブィレミン〔Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ （Ｓａｎｆｅｌｉｃｅ） Ｖｕｉｌｌｅｍｉｎ〕、ピキア メンブラニ ファシエンス （イー．シー．ハンセン） イー．シー．ハンセン〔Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎｉ ｆａｃｉｅｎｓ （Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ） Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、サッカロマイセス セルビジエ マイヤー イーエクッス イー．シー．ハンセン〔Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ｍｅｙｅｒ ｅｘ Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕等が挙げられる。
【００１７】
本発明の微生物の生育範囲温度は、具体的には、バチルス スピーシーズ Ａ−３については、２５〜４５℃であり、好ましくは、３７〜４０℃であり、バチルス スピーシーズ Ａ−７については、２５〜４５℃であり、好ましくは、３７〜４０℃であり、バチルス スピーシーズ Ａ−１９については、２５〜５０℃である。
【００１８】
また、本発明の微生物の生育範囲ｐＨは、具体的には、バチルス スピーシーズ Ａ−３については、ｐＨ４〜１０であり、好ましくは、４〜７であり、バチルス スピーシーズ Ａ−７については、ｐＨ４〜１０であり、好ましくは、ｐＨ４〜８であり、バチルス スピーシーズ Ａ−１９については、４〜８、好ましくは、４〜７である。
【００１９】
本発明の微生物の培養に用いられる培地としては、前記生育範囲ｐＨであり、かつ前記窒素源、炭素源、補助成分等を含有する培地であればよい。前記培地としては、具体的には、例えば、ポテトデキストロース培地〔ニッスイ社製、カタログ番号０５７０９、培地１リットルあたりの組成：ポテト抽出液末 ４．０ｇ、ブドウ糖 ２０ｇ、寒天 １５ｇ（ｐＨ６．０）〕、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｂｒｏｔｈ〔オキソイド（Ｏｘｏｉｄ）社製、カタログ番号２５０４２７、培地１リットルあたりの組成：Ｌａｂ−Ｌｅｍｃｏ ｐｏｗｄｅｒ（商品名） １ｇ、ペプトン ５ｇ、酵母エキス ２ｇ、塩化ナトリウム ５ｇ、寒天 １５ｇ（ｐＨ６．０）〕等が挙げられる。なお、前記培地、例えば、前記ポテトデキストロース培地及びＮｕｔｒｉｅｎｔ Ｂｒｏｔｈを液体培地として用いる場合、寒天を含まない組成とすればよい。
【００２０】
本発明の微生物による植物病原菌の生育の抑制能は、例えば、植物病原菌を播種した固体培地上に、本発明の微生物の培養物を供し、阻止円の形成の有無、阻止円の大きさを観察する評価方法により、評価されうる。前記固体培地としては、例えば、前記ポテトデキストロース培地等が挙げられ、好ましくは、植物病原菌の生育及び本発明の微生物の生育が良好であり、かつ阻止円の形成が確認可能な培地であることが望ましい。
【００２１】
なお、本発明の微生物による前記植物病原菌の生育の抑制能の発現は、培養条件、具体的には、培養温度、培養ｐＨ、培養時間、培養時における振盪度等について至適化することにより、最適化されうる。かかる培養条件の至適化は、種々の培養条件下に培養して得られた各種培養物について、前記評価方法により、阻止円の大きさを評価することにより容易に行なわれうる。
【００２２】
本発明の微生物は、肥料、コンポスト化過程にある堆積物を滅菌水等に懸濁し、ついで、得られた懸濁液を前記培地に塗布して、培養し、得られたコロニーについて、前記植物病原菌の生育を抑制すること、後述の実施例の表１〜表４に示される微生物学的性質等を指標として単離して、得ることができる。
【００２３】
本発明の微生物によれば、前記したように、植物病原菌の生育を抑制することができるため、本発明の微生物、その馴化培地又はその抽出物を有害生物等に対する防除剤として用いることができる。したがって、本発明により、防除剤が提供されうる。
【００２４】
本発明の防除剤は、下記ａ）〜ｃ）：
ａ）前記バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
ｂ）前記バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の馴化培地、及び
ｃ）前記バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の抽出物
からなる群より選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有する。したがって、本発明の防除剤によれば、土壌等への供給、肥料等への供給、植物の根部への供給、種子への供給等の簡便な手法により、有害生物により引き起こされる植物の病害等を防ぐことができるという優れた効果を発揮する。また、本発明の防除剤によれば、土壌に供給することにより、植物病原菌の生育を抑制し、それにより、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を発揮する。
【００２５】
本発明の防除剤は、キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分をさらに含有してもよい。
【００２６】
本発明の防除剤によれば、広範囲の植物病原菌、例えば、複数又はそれ以上の植物病原菌に対して抗菌活性を発揮し、かつ害虫を忌避することができる。したがって、本発明の防除剤は、種々の土壌病害を防除することができるという優れた効果を発揮する。
【００２７】
本発明の防除剤により防除されうる有害生物としては、前記植物病原菌等の微生物；コナガ〔Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ（Ｌｉｎｎａｕｓ）〕、エンドウヒゲナガアブラムシ〔Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｐｉｓｕｍ（Ｈａｒｒｉｓ）〕等が挙げられる。
【００２８】
前記「供給」としては、散布、混合、塗布、浸漬等が挙げられる。
【００２９】
本明細書においては、前記ａ）の「微生物」とは、培養後に得られた培養液又は微生物細胞自体をいう。前記ａ）の微生物は、本発明の微生物を、前述の適切な培地で、適切な培養条件下に培養することにより得られうる。
【００３０】
本明細書においては、前記ｂ）の「馴化培地」とは、培養後の培養液から、微生物細胞を除去して得られた培養産物をいう。前記ｂ）の馴化培地は、例えば、濾過、遠心分離等により、培養液から、微生物細胞を除去することにより得られうる。
【００３１】
本明細書においては、前記ｃ）の「抽出物」とは、前記ａ）の微生物又は前記ｂ）の馴化培地から抽出された産物をいう。前記ｃ）の抽出物は、例えば、
（Ｉ）前記微生物細胞を、リゾチーム等の溶菌性酵素、超音波、圧力、凍結等の手段により破砕し、得られた破砕物を慣用の精製法（例えば、塩析、カラムクロマトグラフィー、有機溶媒抽出等）により精製すること、
（II）前記馴化培地を慣用の精製法（例えば、塩析、カラムクロマトグラフィー、有機溶媒抽出等）により精製すること、
等により得られうる。
【００３２】
前記キク科植物としては、アーティチョーク、防虫菊等が挙げられる。また、ショウガ科植物としては、月桃等が挙げられる。
【００３３】
前記キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分としては、例えば、前記キク科植物又はショウガ科植物からアルコール抽出、熱水抽出、水蒸気蒸留方法等により抽出された抽出液（すなわち、エタノール抽出物、熱水抽出物、水蒸気蒸留抽出物等）等が挙げられる。具体的には、アーティチョークのエタノール抽出物、アーティチョークの熱水抽出物、月桃のエタノール抽出物、月桃の熱水抽出物、月桃の水蒸気蒸留抽出物等が挙げられる。
【００３４】
本発明の防除剤中の前記ａ）〜ｃ）の有効成分の含有量は、植物病原菌の生育を抑制するに十分な量であればよい。特に限定されないが、例えば、本発明の防除剤中の前記ａ）〜ｃ）の有効成分の量としては、微生物の量として、１×１０2 〜１×１０30 ｃｆｕ、好ましくは、１×１０3 〜１×１０15 ｃｆｕ、より好ましくは、１×１０5 〜１×１０12 ｃｆｕに相当する量等が挙げられる。また、使用時に、水、培地成分等で希釈して用いるためには、さらに、濃縮されたものであってもよい。
【００３５】
前記害虫忌避成分をさらに含有した本発明の防除剤中における該害虫忌避成分の含有量は、害虫忌避効果を発揮させるに十分な量であればよい。
【００３６】
本発明の防除剤の供給方法としては、例えば、用途に適した濃度で前記ａ）〜ｃ）の有効成分を含有した防除剤、又は用途に適した濃度で前記ａ）〜ｃ）の有効成分と前記害虫忌避成分とを含有した防除剤を、じょうろや噴霧器等を用いて、作物の苗、種子等を植える前の土壌に供給すること、作物の苗、種子等に直接供給すること等が挙げられる。本発明の防除剤を供給した土壌は、土壌病害菌の生育が抑制され、有用微生物の多く存在する環境となり土壌病害の起こりにくい土壌となる。
【００３７】
また、本発明の防除剤は、作物の種類及びその生育時期、植物病原菌の種類及びその活動時期、害虫の種類及びその発生時期等に合わせて施用されうる。
【００３８】
なお、本発明の防除剤の防除効果の評価は、例えば、
（ｉ）防除剤の供給による植物病原菌に対する阻止円の形成の有無又は該阻止円の大きさの測定を行なう評価方法、
（ii）防除剤を塗布した葉等に集まる害虫の有無又は害虫の死虫率の測定を行なう評価方法、
等により行なわれうる。ここで、前記（ｉ）の評価方法においては、阻止円を形成することが、該防除剤が、防除効果を有することの指標となり、阻止円の大きさが、防除効果の大きさに比例する。また、前記（ii）の評価方法においては、防除剤を塗布した葉等に害虫が集まらないこと及び害虫が死に至ることが、該防除剤が、防除効果を有することの指標となる。
【００３９】
本発明の微生物によれば、有害生物の防除方法が提供されうる。本発明の防除方法は、前記ａ）〜ｃ）からなる群より選ばれた少なくとも１種を、植物又は該植物を生育させるための土壌に供給することを特徴とする方法である。本発明の防除方法においては、キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分を植物又は該植物を生育させるための土壌にさらに供給してもよい。
【００４０】
本発明の防除方法において、前記ａ）〜ｃ）の供給量及び前記害虫忌避成分の供給量は、植物の種類、植物への供給箇所の大きさ、植物を生育させるための土壌の面積、防除対象の微生物の種類、防除対象の害虫の種類等により適宜設定することができる。前記ａ）〜ｃ）の供給量は、例えば、ほうれん草株腐れ病病原菌に対しては、土壌１ｍ3 あたり、微生物の量として、１×１０3 〜１×１０15ｃｆｕ、好ましくは、１×１０5 〜１×１０12 ｃｆｕとなる量であればよく、他の病原菌に対しても同様の量であればよい。また、前記害虫忌避成分の供給量は、前記害虫忌避成分を防除剤１Ｌ中２．５ｇ（乾燥重量）含有する場合、水により、５００〜１０，０００倍の濃度とし、防除効果を発揮しうる量となるように、土壌又は植物に撒布すればよい。
【００４１】
本発明の防除方法において、前記ａ）〜ｃ）と前記害虫忌避成分とは、前記防除剤として、植物又は該植物を生育させるための土壌に供給してもよい。
【００４２】
植物又は該植物を生育させるための土壌への前記ａ）〜ｃ）と前記害虫忌避成分との供給は、散布、混合、塗布、浸漬等により行なわれうる。具体的には、特に限定されないが、例えば、
− 本発明の微生物の培養液を、作物を栽培する前の土壌に混和、又は噴霧器により土壌に撒布すること、
− 本発明の微生物の馴化培地を、噴霧器により、作物が植えられた土壌又は作物に撒布すること、
− 本発明の微生物の馴化培地を結晶化又は粉末化させて得られた産物を、作物を栽培する前の土壌に混和又は作物が植えられた土壌に撒布すること、
−本発明の微生物の培養液を、ふすま、もみがら、土壌改良剤に添加し、固定させて得られた産物を、作物を栽培する前の土壌に混和又は該土壌に撒布すること、
− 本発明の微生物の馴化培地と、キク科植物又はショウガ科植物から、エタノール抽出液又は熱水抽出液とを混合して得られた防除剤又は、該馴化培地とエタノール抽出液又は熱水抽出液とのそれぞれを別々に、噴霧器を用いて、害虫の発生しやすい箇所に撒布するか、あるいは、作物又は土壌に撒布すること
等が挙げられる。
【００４３】
【実施例】
以下、本発明を実施例等により詳細に説明するが、本発明は、かかる実施例等により限定されるものではない。
【００４４】
実施例１
（１）供試試料の調製
株式会社カンサイ倉橋工場内のコンポスト化過程にある堆積物から１ヵ所あたり約１００ｇの堆積物を採取した。採取した堆積物のうち約１ｇと、滅菌生理食塩水１０ｍｌとを、２６ｍｌ容の試験管に入れた。得られた混合物を、ボルテックスミキサーで約５分間混合し、その後、２０分間室温（約２５℃）で放置し、１０％ 試料含有懸濁液（供試試料）を得た。得られた供試試料を、植物病原菌に対する阻止円形成試験に供した。
【００４５】
（２）対峙試験
植物病原菌として、
ａ）ほうれん草株腐病の病原菌〔リゾクトニア ソラニ ケーン（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｋｕｅｈｎ）〕
ｂ）ほうれん草萎凋病の病原菌〔フザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ スピナシエ Ｏ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｓｐｉｎａｃｉａｅ Ｏ−２７）〕
ｃ）果樹紋羽病の病原菌〔ロセリニア ネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ）〕、及び
ｄ）トマト根腐萎凋病の病原菌〔フザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ ラディシス−リオペルシチ Ｏ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｏｐｅｒｓｉｃｉ Ｏ−３４）〕
を用いた。
【００４６】
ポテトデキストロース培地〔ニッスイ社製、カタログ番号：０５７０９（１リットルあたりの組成：ポテト抽出液粉末 ４ｇ、ブドウ糖 ２０ｇ、寒天粉末 １５ｇ）〕 ３．９ｇを、イオン交換水 １００ｍｌに溶解し、得られた溶液を１２１℃で１５分間滅菌した。ついで、得られた滅菌培地 ２０ｍｌを、滅菌シャーレに入れ、固化させ、試験用培地を得た。
【００４７】
各植物病原菌を、前記試験用培地の中心部分に接種した。ついで、播種箇所から等間隔になるように、試験用培地に円形濾紙（直径８ｍｍ、厚手、アドバンテック社製）を四方に配置した。なお、前記円形濾紙は、使用前に、１２１℃で１５分間処理することにより滅菌された濾紙である。
【００４８】
前記（１）で得られた供試試料 １００μｌを、試験用培地の円形濾紙上に滴下した。
【００４９】
ついで、各試験用培地を、３０℃の恒温室内で、約１〜２週間インキュベートした。その後、各試験用培地上の阻止円を観察した。阻止円を形成した供試試料について、画線塗抹培養を繰返し行なうことにより、菌を純粋化した。
【００５０】
ついで、純粋化された菌を用いて、対峙試験を行なった。明確な阻止円の形成を、植物病原菌の生育抑制能を有する菌であることの指標とした。その結果、Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９が得られた。
【００５１】
（３）微生物学的性質の検討
得られたＡ−３、Ａ−７及びＡ−１９のそれぞれについて、微生物学的性質を調べた。各微生物学的性質は、慣用の方法により評価された。その結果を表１〜４に示す。
【００５２】
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
前記表１〜４に示される微生物学的性質及び１６ｓ ｒＤＮＡの塩基配列の解析結果から、前記Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９は、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する細菌であることが示唆された。
【００５７】
なお、前記Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９は、それぞれ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−３、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−７及びＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． Ａ−１９と命名・表示され、寄託日：２００２年１２月２６日、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター〔日本国茨城県つくば市東１−１−１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）〕に、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７８、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７９及びＦＥＲＭ Ｐ−１９１８０として寄託されている。
【００５８】
実施例２
実施例１で得られたＡ−３、Ａ−７及びＡ−１９を、それぞれ、前記ポテトデキストロース培地に、１白金耳播種し、３０℃で２４時間、２４０ｒｐｍで振盪培養した。
【００５９】
試験例１ 円形濾紙法
前記防除剤による各種微生物の生育に対する抑制効果を、前記実施例２で得られた各馴化培地による該微生物の生育に対する阻止円の形成及び該阻止円の大きさを測定することにより評価した。
【００６０】
微生物としては、前記ａ）〜ｄ）の植物病原菌、酵母等を用いた。各微生物を、それぞれの培養に適した培地を用い、十分に生育するまで培養し、各微生物の培養物を得た。
【００６１】
ポテトデキストロース培地〔ニッスイ社製、カタログ番号：０５７０９（１リットルあたりの組成：ポテト抽出液粉末 ４ｇ、ブドウ糖 ２０ｇ、寒天粉末 １５ｇ）〕 ３．９ｇを、イオン交換水 １００ｍｌに溶解し、得られた溶液を１２１℃で１５分間滅菌した。ついで、得られた滅菌培地 ２０ｍｌを、滅菌シャーレに入れ、固化させ、試験用培地を得た。
【００６２】
ついで、得られた試験用培地上の中心部分に、５ｍｍ×５ｍｍ角で各種微生物を播種した。また、播種箇所から等間隔（２ｃｍ）になるように、試験用培地に１２１℃で１５分間滅菌した円形濾紙（直径８ｍｍ、アドバンテック社製、商品名：定性濾紙、厚手）を四方に配置し、該円形濾紙上に、実施例２で得られた培養液 １００μｌを滴下した。
【００６３】
ついで、各試験用培地を、３０℃の恒温室内で、前記ａ）及びｃ）については、約１週間インキュベートし、前記ｂ）及びｄ）については、約２週間インキュベートした。その後、各試験用培地上の阻止円の形成を観察した。その結果を表５に示す。
【００６４】
【表５】
その結果、表５に示すように、各種微生物に対して、明確な阻止円を形成することがわかった。すなわち、実施例１で得られた各細菌は、防除剤として有用であることが示された。また、実施例１で得られた各細菌は、複数の植物病原菌、植物病原菌等の生育を抑制し、さらには、酵母の生育の抑制能を有することが示され、特に、Ａ−３は、黄色色素を産生したため、新規菌株であることが示唆された。
【００６６】
実施例３
月桃（葉２ｋｇ／エタノール１８Ｌ、茎３．７８ｋｇ／エタノール１０Ｌ）又はアーティチョーク（葉４．３ｇ／エタノール２００ｍｌ）を、ロータリーエバポレーターを用いて濃縮し、エタノール抽出液〔月桃 約２０ｍｇ（月桃抽出物乾燥重量）／ｍｌ、アーティチョーク 約１００ｍｇ（アーティチョーク抽出物乾燥重量）／ｍｌ〕を得た。ついで、前記エタノール抽出液と、実施例２で得られた馴化培地とを混合し、エタノール抽出液の最終濃度が、１体積％、１０体積％又は５０体積％である被検試料を得た。
【００６７】
ここで、なお、月桃のエタノール抽出液から得られた１体積％−被検試料、１０体積％−被検試料及び５０体積％−被検試料のそれぞれに含まれる抽出物は、乾燥重量として、それぞれ、約０．９３μｇ、約９．３μｇ及び約４６．５μｇである。また、アーティチョークのエタノール抽出液から得られた１体積％−被検試料、１０体積％−被検試料及び５０体積％−被検試料のそれぞれに含まれる抽出物は、乾燥重量として、それぞれ、約４．６５μｇ、約４６．５μｇ、約２３２．５μｇである。
【００６８】
また、月桃（葉 １ｋｇ／イオン交換水 ４Ｌ、茎 １ｋｇ／イオン交換水 １Ｌ）又はアーティチョーク（葉 １００ｇ／イオン交換水 ３００ｍｌ）を沸騰水中で１時間煮沸し、ロータリーエバポレーター等により、熱水抽出液〔１００ｍｇ（抽出物乾燥重量）／ｍｌ〕を得た。ついで、前記熱水抽出液と、実施例２で得られた馴化培地とを混合し、熱水抽出液の最終濃度が、１体積％、１０体積％又は５０体積％である被検試料を得た１体積％−被検試料、１０体積％−被検試料及び５０体積％−被検試料のそれぞれに含まれる抽出物は、乾燥重量として、それぞれ、約４．６５μｇ、約４６．５μｇ、約２３２．５μｇである。
【００６９】
試験例２
（１）供試昆虫の調製
供試昆虫として、コナガと、エンドウヒゲナガアブラムシとを用いた。
【００７０】
コナガ及びエンドウヒゲナガアブラムシともに、２５±３℃、明条件１６時間−暗条件８時間の条件下、インキュベーター内で飼育した。
【００７１】
エンドウヒゲナガアブラムシについては、以下のようにして得られた虫体を用いた。ソラマメの芽出し（発芽から約４日〜１週間）の茎部分（豆の直上部分）に、産業用ワイパー〔商品名：キムワイプ（登録商標）（十条キンバリー株式会社製）〕 約１ｃｍ×１５ｃｍを巻きつけた。ついで、ワイパーを巻き付けた茎を、試験管（外径２５ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）に入れた。かかる試験管に、成虫数匹を入れ、産子させ、１〜２齢の幼虫を得た。また、同様に、成虫に産子させ、該成虫を除去した後、幼虫を生育して、成虫を得た。得られた１〜２齢の幼虫と成虫とを、以下の試験に用いた。
【００７２】
また、コナガについては、カイワレ大根と人工飼料（ニッチク薬品工業（株）社製、商品名：インセクタコナガ−０１２８）とを併用して累代飼育した個体群の脱皮直後の４齢幼虫を用いた。
【００７３】
（２）エンドウヒゲナガアブラムシに対する忌避効果の評価
有害生物の代表例として、エンドウヒゲナガアブラムシを用い、実施例３で得られた被検試料による該エンドウヒゲナガアブラムシに対する忌避効果を評価した。
【００７４】
ソラマメの芽出しの上部を、前記被検試料に１分間浸漬させ、その後、風乾した。ついで、ソラマメの芽出しと幼虫をカップに入れた。その後、カップに幼虫を入れた時点から開始して、２４時間毎に、観察し、１〜２齢の幼虫及び６〜７齢の成虫が、芽出しに寄りつくかどうかを指標として、忌避効果を評価した。なお、対照として、前記被検試料のかわりに、エタノール又は水に浸漬させたソラマメの芽出しを用いた。
【００７５】
その結果、対照であるエタノール又は水に浸漬させたソラマメの芽出しには、エンドウヒゲナガアブラムシが寄ってきたが、Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９のそれぞれから得られた各被検試料に浸漬させたソラマメのいずれにも寄りつかなかった。したがって、Ａ−３、Ａ−７及びＡ−１９は、エンドウヒゲナガアブラムシを忌避する性質を有することがわかった。
【００７６】
（３）コナガに対する忌避効果の評価
有害生物の一例として、コナガを用い、実施例３で得られた被検試料による該コナガに対する忌避効果を評価した。
【００７７】
忌避効果の評価には、キャベツの苗片（直径２ｃｍ）の両面に、前記被検試料２０μｌを塗布し、風乾させ、得られた処理苗片を用いた。前記処理苗片を、直径６ｃｍ、高さ２８ｃｍのカップ内に入れ、コナガ４齢幼虫を１カップあたり１匹を該カップにさらに入れた。２４時間毎にコナガが蛹になるまでの期間観察し、接触後の死虫率を調べた。なお、対照として、前記被検試料のかわりに、エタノール又は水で処理した対照苗片を用いた。また、処理苗片及び対照苗片を、２４時間毎に交換した。結果を表６〜９に示す。
【００７８】
【表６】
【表７】
【表８】
【表９】
その結果、対照であるエタノール又は水で処理した対照苗片には、コナガが寄ってきたが、月桃及びアーティチョークのそれぞれから得られた各被検試料で処理した処理苗片のいずれにも寄りつかなかった。したがって、月桃及びアーティチョークは、コナガを忌避する性質を有することがわかった。
【００８３】
試験例３
有害生物の代表例として、エンドウヒゲナガアブラムシ１〜２齢幼虫を用い、前記実施例３で得られた被検試料に対する該エンドウヒゲナガアブラムシの薬剤感受性を評価した。
【００８４】
ガラス管（直径８ｍｍ×高さ４０ｍｍ）の一端を、ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＦＩＬＭ（商品名：パラフィルム）で覆った。被検試料と人工飼料（組成を表１０に示す）との混合物 ２０μｌを、前記ガラス管上のパラフィルム部分に滴下し、その上を薄く伸張したパラフィルムで覆った。得られたものを、被検試料の有効量の評価のための餌として用いた。
【００８５】
【表１０】
前記餌に、円筒状に加工したゼラチンカプセル（和光純薬工業株式会社製、商品名：ゼラチンカプセルＮｏ．００を加工し使用した）をかぶせた。前記カプセル内に、エンドウヒゲナガアブラムシを入れ、ゴース（３ｃｍ×３ｃｍ角）とプラスチックチューブ（内径８ｍｍ、外径１１ｍｍ、高さ８ｍｍ）とで蓋をし、飼育瓶を得た。対照として、エタノール又は水と前記人工飼料との混合物 ２０μｌを用いた。
【００８７】
エンドウヒゲナガアブラムシを入れた後、１つの飼育瓶の中に1 〜２齢幼虫を３匹ずつ入れ、２３±３℃の条件下、２４時間毎に、脱皮数及び死虫数を観察し、評価を行なった。結果を表１１〜表１４に示す。
【００８８】
【表１１】
【表１２】
【表１３】
【表１４】
その結果、表１１及び表１２に示されるように、エンドウヒゲナガアブラムシは、月桃の茎のエタノール抽出液の含有量が１０体積％である被検試料に対し、１日目で、３３％の死虫率という高い感受性を示した。また、表１３及び表１４に示されるように、エンドウヒゲナガアブラムシは、アーティチョーク−株のエタノール抽出液又は熱水抽出液の含有量が５０体積％である被検試料に対し、１日目で、３３％の死虫率という高い感受性を示した。
【００９３】
実施例４
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液を含有した防除剤（１×１０2 〜１×１０ 30 ｃｆｕ相当量）を調製する。
【００９４】
得られた防除剤を、作物を栽培する前の土壌に混和、又は噴霧器により土壌に撒布する。その結果、土壌の環境を、植物病害に強い土壌に改良できる。
【００９５】
実施例５
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液から菌体を除去し、得られた馴化培地（１×１０2 〜１×１０ 30 ｃｆｕ相当量）を含有した防除剤を調製する。
【００９６】
得られた防除剤を、噴霧器により、作物が植えられた土壌又は作物に撒布する。その結果、作物の病害を防ぐことができる。
【００９７】
実施例６
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液から菌体を除去し、得られた馴化培地（１×１０2 〜１×１０ 30 ｃｆｕ相当量）を結晶化又は粉末化させ、防除剤を調製する。
【００９８】
得られた防除剤を、作物を栽培する前の土壌に混和又は作物が植えられた土壌に撒布する。その結果、作物の病害を防ぐことができる。
【００９９】
実施例７
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液（１×１０2 〜１×１０ 30 ｃｆｕ相当量）を、ふすまやもみがら、土壌改良剤に添加し、固定させる。得られた産物を、作物を栽培する前の土壌に混和又は該土壌に撒布する。その結果、植物病害を防ぐことができる。
【０１００】
実施例８
実施例２と同様に、Ａ−３、Ａ−７又はＡ−１９を培養し、得られた培養液から菌体を除去し、馴化培地を得る。また、実施例３と同様に、キク科植物又はショウガ科植物から、エタノール抽出液又は熱水抽出液を調製する。ついで、馴化培地と、エタノール抽出液又は熱水抽出液とを含有した防除剤を調製する。
【０１０１】
得られた防除剤を、噴霧器を用いて、害虫の発生しやすい箇所に撒布するか、あるいは、作物又は土壌に撒布する。その結果、害虫忌避効果が得られ、かつ植物病害を防ぐことができる。
【０１０２】
【発明の効果】
本発明の微生物によれば、種々の植物病原菌を防除することができ、植物病原菌の生育を抑制し、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができ、種々の土壌病害を防除することができるという優れた効果を奏する。また、本発明の防除剤によれば、土壌等への供給、肥料等への供給、植物の根部への供給等の簡便な手法により種々の病害等を防ぐことができ、広範囲の植物病原菌に対して抗菌活性を発揮し、かつ害虫を忌避することができ、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を奏する。さらに、本発明の防除方法によれば、土壌等への供給、肥料等への供給、植物の根部への供給等の簡便な手法により種々の病害等を防ぐことができ、広範囲の植物病原菌に対して抗菌活性を発揮し、かつ害虫を忌避することができ、土壌病害を生じにくい土壌に改良することができるという優れた効果を奏する。
【０１０３】
【配列表】
Claims (8)
- ムコル ヘマリス ヴェーマー エフ．ヘマリス（Ｍｕｃｏｒ ｈｉｅｍａｌｉｓ Ｗｅｈｍｅｒ ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）、リゾプス オリゼ ウェント アンド プリンセン ギーリングズ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ Ｗｅｎｔ ＆ Ｐｒｉｎｓｅｎ Ｇｅｅｒｉｎｇｓ）、カンジダ アルビカンス （ロビン） バークホント〔Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（Ｒｏｂｉｎ） Ｂｅｒｋｈｏｎｔ〕、クリプトコッカス ネオフォーマンス（サンフェリス） ブィレミン〔Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ （Ｓａｎｆｅｌｉｃｅ） Ｖｕｉｌｌｅｍｉｎ〕、ピキア メンブラニ ファシエンス （イー．シー．ハンセン） イー．シー．ハンセン〔Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎｉ ｆａｃｉｅｎｓ （Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ） Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕及びサッカロマイセス セルビジエ マイヤー イーエックス イー．シー．ハンセン〔Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ｍｅｙｅｒ ｅｘ Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕からなる群である植物病原菌の生育の抑制能を有する、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７８、ＦＥＲＭ Ｐ−１９１７９及びＦＥＲＭ Ｐ−１９１８０からなる群より選ばれたバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物。
- 下記ａ）〜ｃ）：
ａ）請求項１記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
ｂ）請求項１記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の馴化培地、及び
ｃ）請求項１記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の抽出物
からなる群より選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有してなる、植物に対する有害生物の防除剤。 - キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分をさらに含有してなる、請求項２記載の防除剤。
- 害虫忌避成分が、キク科植物の抽出物又はショウガ植物の抽出物である、請求項３記載の防除剤。
- 下記ａ）〜ｃ）：
ａ）請求項１記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物、
ｂ）請求項１記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の培養物、及び
ｃ）請求項１記載のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する微生物の抽出物
からなる群より選ばれた少なくとも１種を、植物又は該植物を生育させるための土壌に供給することを特徴とする、有害生物の防除方法。 - キク科植物又はショウガ科植物由来の害虫忌避成分を植物又は該植物を生育させるための土壌にさらに供給する、請求項５記載の有害生物の防除方法。
- 有害生物が、アスペルギルス フラバス リンク フリーズエフ グレーバー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓ ｆ ｇｌａｂｅｒ）、アスペルギルス フラバス リンク フリーズ バー．オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ Ｌｉｎｋ Ｆｒｉｅｓｖａｒ． ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス ナイジャー ファン ティーゲム（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ｖａｎ Ｔｉｅｇｈｅｍ）、ムコルヘマリス ヴェーマー エフ．ヘマリス（Ｍｕｃｏｒ ｈｉｅｍａｌｉｓ Ｗｅｈｍｅｒ ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）、ペニシリウム クリソゲナム ゾーム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ Ｔｈｏｍ）、リゾプス オリゼ ウェント アンド プリンセン ギーリングズ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ Ｗｅｎｔ ＆ Ｐｒｉｎｓｅｎ Ｇｅｅｒｉｎｇｓ）、カンジダ アルビカンス （ロビン） バークホント〔Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ （Ｒｏｂｉｎ） Ｂｅｒｋｈｏｎｔ〕、クリプトコッカス ネオフォーマンス （サンフェリス） ブィレミン〔Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ （Ｓａｎｆｅｌｉｃｅ） Ｖｕｉｌｌｅｍｉｎ〕、ピキア メンブラニ ファシエンス （イー．シー．ハンセン） イー．シー．ハンセン〔Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎｉ ｆａｃｉｅｎｓ （Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ） Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、サッカロマイセス セルビジエ マイヤー イーエックス イー．シー．ハンセン〔Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ｍｅｙｅｒ ｅｘ Ｅ．Ｃ．Ｈａｎｓｅｎ〕、リゾクトニア ソラニ ケーン Ｏ−２８株（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｋｕｅｈｎ Ｏ−２８）、ロセリニア ネカトリクス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ）、フザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ スプナシエ Ｏ−２７株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｓｐｎａｃｉａｅ Ｏ−２７）、フザリウム オキシスプラム エフ．スピーシーズ ラディシス−ライコペルシチ Ｏ−３４株（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｒｕｍ ｆ．ｓｐ．Ｒａｄｉｃｉｓ−ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ Ｏ−３４）、エンドウヒゲナガアブラムシ及びコナガからなる群より選ばれた少なくとも１種である、請求項５又は６記載の有害生物の防除方法。
- 配列番号：１ 〜３いずれかに示される塩基配列を有する核酸。
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