CN110292051A - 一种果蔬病害抑制剂及其应用 - Google Patents

一种果蔬病害抑制剂及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110292051A
CN110292051A CN201910584619.4A CN201910584619A CN110292051A CN 110292051 A CN110292051 A CN 110292051A CN 201910584619 A CN201910584619 A CN 201910584619A CN 110292051 A CN110292051 A CN 110292051A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aspergillus
tabin aspergillus
tabin
cucumber
application
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910584619.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110292051B (zh
Inventor
赵娟
刘霆
刘伟成
刘德文
卢彩鸽
吴慧玲
张殿朋
董丹
张涛涛
田兆丰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Original Assignee
Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences filed Critical Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Priority to CN201910584619.4A priority Critical patent/CN110292051B/zh
Publication of CN110292051A publication Critical patent/CN110292051A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110292051B publication Critical patent/CN110292051B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种果蔬病害抑制剂及其应用。该果蔬病害抑制剂含有塔宾曲霉，该塔宾曲霉的菌株号为QF05，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.13563。塔宾曲霉QF05对果蔬作物上的番茄灰霉病菌、辣椒炭疽病菌、黄瓜枯萎病菌、马铃薯早疫病菌、黄瓜细菌性角斑病菌均具有抑制作用。塔宾曲霉QF05无菌发酵滤液可显著提高辣椒种子的发芽率和显著促进胚根的伸长。塔宾曲霉QF05含菌代谢物有效促进了黄瓜真叶的生长，有效提高了黄瓜的株高，有效增加了黄瓜的产量。

Description

一种果蔬病害抑制剂及其应用
本申请是申请号为201710098885.7、申请日为2017年02月23日、发明创造名称为“一株防病促生的塔宾曲霉及其代谢产物的制备和应用”的分案申请。
技术领域
本发明属于微生物农药技术领域，具体涉及一种果蔬病害抑制剂及其应用。
背景技术
随着园艺设施栽培的发展和保护地种植面积的扩大，果蔬作物病害发生普遍并给人们的生产、生活造成严重的经济损失。目前国内外关于果蔬作物病害防治的研究主要是从选育优良抗病品种、种子消毒处理、加强栽培管理措施、喷施化学药剂等几个方面进行综合防治，并以化学防治为主。长时间使用单一类型杀菌剂和不合理的施药技术导致病原菌产生抗药性，防治效果逐年下降，同时带来化学农药残留超标、环境污染、生物多样性破坏等一系列问题。生物防治具有对环境兼容性好、对人畜安全、不易产生抗药性等优点。微生物农药以其高效广谱、安全环保等优势正逐步引领科研及市场的发展。因此，开发可以逐步替代化学农药的新型生物农药产品对于果蔬作物病害绿色防控具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何抑制果蔬作物病原菌并促进果蔬作物生长。
为解决以上技术问题，本发明提供了一株塔宾曲霉。
本发明所提供的塔宾曲霉，是塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)，其菌株号为QF05，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.13563。下文简称塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05。
塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05具有序列表中序列1所示的ITS序列和序列表中序列2所示的钙调蛋白基因序列，塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05在PDA培养基上菌丝生长茂盛，产生大量黑色孢子；在CYA培养基上菌落正面黑棕色，背面淡黄色；在MEA培养基上菌落中央灰黑色，外围灰白色，背面淡黄色。40倍光学显微镜下可看到菌株QF-05分生孢子梗顶端膨大成顶囊，顶囊近球形，其上着生小梗；分生孢子球形，黑褐色。
塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的代谢物也属于本发明的保护范围。塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的代谢物是将塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)QF05在微生物液体发酵培养基中培养得到的物质。
为解决以上技术问题，本发明提供了病原菌抑制剂。
本发明所提供的病原菌抑制剂，含有塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05和/或塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的代谢物。
上述病原菌抑制剂的活性成分可为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05和/或塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的代谢物，上述病原菌抑制剂的活性成分还可含有其他生物成分或非生物成分，上述病原菌抑制剂的其他活性成分本领域技术人员可根据对病原菌的抑制效果确定。
上述病原菌抑制剂中，所述病原菌抑制剂可对下述至少一种病原菌具有抑制作用：
A、番茄灰霉病菌；
B、辣椒炭疽病菌；
C、黄瓜枯萎病菌；
D、马铃薯早疫病菌；
E、黄瓜角斑病菌。
为解决以上技术问题，本发明提供了病害抑制剂。
本发明所提供的病害抑制剂，含有塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05和/或塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的代谢物。
上述病害抑制剂的活性成分可为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05和/或塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的代谢物，上述病害抑制剂的活性成分还可含有其他生物成分或非生物成分，上述病害抑制剂的其他活性成分本领域技术人员可根据对病害的抑制效果确定。
上述病害抑制剂中，所述病害为下述至少一种：
a、番茄灰霉病；
b、辣椒炭疽病；
c、黄瓜枯萎病；
d、马铃薯早疫病；
e、黄瓜细菌性角斑病。
塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05和/或塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)QF05的代谢物的下述任一种应用也属于本发明的保护范围：
1)在抑制病原菌中的应用；
2)在制备病原菌抑制剂中的应用；
3)在抑制病害中的应用；
4)在制备病害抑制剂中的应用。
上述应用中，所述病原菌可为下述至少一种：
A、番茄灰霉病菌；
B、辣椒炭疽病菌；
C、黄瓜枯萎病菌；
D、马铃薯早疫病菌；
E、黄瓜角斑病菌。
所述病害可为下述至少一种：
a、番茄灰霉病；
b、辣椒炭疽病；
c、黄瓜枯萎病；
d、马铃薯早疫病；
e、黄瓜细菌性角斑病。
上文中，所述病原菌抑制剂和病害抑制剂中，除所述活性成分外，还含有载体。所述载体可为农药领域常用的且在生物学上是惰性的载体。所述载体可为固体载体或液体载体；所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物；所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种；所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇；所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水；所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。
所述病原菌抑制剂和病害抑制剂中，塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05可以分生孢子、菌丝或含有分生孢子和/或菌丝的培养物的形式存在。
所述病原菌抑制剂和病害抑制剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
根据需要，所述病原菌抑制剂和病害抑制剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。
塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05和/或塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)QF05的代谢物的下述任一种应用也属于本发明的保护范围：
H、在促进植物种子萌发中的应用；
I、在促进植物种子胚根生长中的应用；
J、在促进植物真叶生长中的应用；
K、在提高植物株高中的应用；
L、在提高植物产量中的应用。
上述应用中，所述植物可为下述任一种植物：
P1)黄瓜或辣椒；
P2)黄瓜属植物或辣椒属植物；
P3)葫芦科植物或茄科植物；
P4)种子植物；
P5)双子叶植物。
上文中，塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的代谢物可从塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的发酵液中获得。所述塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)QF05的代谢物可为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的无菌代谢物或塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物。塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)QF05的无菌代谢物(无菌发酵滤液)具体可按照如下方法制备，在液体培养基中培养塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05，过滤除去液体培养物(发酵液)中的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05即得到塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的无菌代谢物。塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物具体可按照如下方法制备，在液体发酵培养基中培养塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05，将含有塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05及其代谢物的发酵液进行灭菌即得到塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物。
本申请中，所述番茄灰霉病菌可为灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、所述辣椒炭疽病菌可为辣椒刺盘孢(Colletotrichum capsici)、所述黄瓜枯萎病菌可为尖孢镰刀菌黄瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)、所述马铃薯早疫病菌可为细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)、所述黄瓜细菌性角斑病菌可为丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)。
本发明以果蔬病害病原菌为靶标，通过对特殊生境中的微生物资源进行筛选，获得具有一株兼具防病促生作用的微生物菌种-塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05，为制备微生物农药新产品提供新资源。
塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05对果蔬作物上的番茄灰霉病菌、辣椒炭疽病菌、黄瓜枯萎病菌、马铃薯早疫病菌和黄瓜角斑病菌均具有抑制作用；对辣椒种子发芽、黄瓜植株生长具有促进作用。与对照相比，塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的无菌发酵滤液10倍稀释液降低了辣椒种子的发芽率，但是显著增加了辣椒的胚根长度，增幅达26.0％；塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液50倍稀释液处理的辣椒种子的发芽率与对照相同，但是显著增加了辣椒的胚根长度，增幅达58.9％；塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液100倍稀释液处理的辣椒种子不但发芽率比对照增加了11.1％，而且显著增加了辣椒的胚根长度，增幅达149.3％(表2)。说明塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05可显著提高辣椒种子的发芽率和显著促进胚根的伸长。塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05含菌代谢物能够促进黄瓜真叶生长，提高黄瓜株高，增加黄瓜产量。塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05繁殖速度快，能够人工培养，培养条件简单、容易保存，适于工业化生产，具有良好的开发应用前景。
保藏说明
菌种名称：塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)
菌株编号：QF05
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2017年1月19日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.13563
附图说明
图1为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的菌落和孢子形态，其中a、c、e和b、d、f分别是菌株QF05采用三点法接种查氏酵母膏琼脂(CYA)培养基和麦芽汁琼脂(MEA)培养基上的菌落形态、孢子囊、分生孢子。
图2为基于塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05钙调蛋白基因(calmodulin)构建的系统进化树，其中菌株QF05与Aspergillus tubingensis菌株(FN594558、EF661151、KC796385)聚在同一分支上，相似性达99％。图中，框中的菌株为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05。
图3为塔宾曲霉Aspergillus tubingensis菌株QF05对常见植物病原菌的空间竞争作用，其中a、b、c、d分别为菌株QF05对黄瓜枯萎病菌、辣椒炭疽病菌、番茄灰霉病菌、马铃薯早疫病菌的竞争抑制作用。a、b、c、d中，上侧平板为单接病原菌对照，下侧平板为病原菌与塔宾曲霉Aspergillus tubingensis菌株QF05对峙培养。
图4为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液对黄瓜角斑病菌(a)和辣椒炭疽病菌(b)的抑制作用，其中CK为对照。
图5为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液对辣椒种子发芽的促进效果，其中CK为对照，10×、50×、100×分别为塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)QF05无菌发酵滤液10倍、50倍、100倍稀释液。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所用到的病原菌公众可从野外采集，也可从北京市农林科学院获得，以重复本申请实验：
番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.cucumerinum)、小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cereali)、串珠镰刀病菌(Fusariummoniliforme)、桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichumcapsici)、茄子青枯病菌(Ralstonia solanacearum)、大白菜黑腐病菌(Xanthomonascampestris pv.campsetris)(王俊丽等.一株芽孢杆菌QD-10的鉴定及生防特性分析.中国生物防治学报,2014,30(4):564-572.)；
马铃薯早疫病菌(Alternaria tenuissima)(Zheng,et al.Characterization ofAlternaria species associated with potato foliar diseases in China.Plantpathology,2015,64:425-433.)；
甘兰枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.conglutinans)、黄瓜角斑病菌(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)(卢彩鸽等.一株甘兰枯萎病拮抗细菌的筛选、鉴定及其抑菌活性测定.华北农学报,2014,29(1):195-202.)。
实施例1、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的分离与鉴定
1.1菌株分离
该菌株从中国青海省青藏高原特殊生境土样中分离获得。菌株采用稀释平板法分离，具体操作方法如下：称取土样10g放入90ml无菌水中振荡均匀即为10-1浓度的菌液，用1ml无菌移液管吸取1ml 10-1浓度的菌液于一管9ml无菌水中，摇匀即为10-2浓度的菌液，同样方法，依次稀释到10-4。将上述10-2、10-3和10-4土壤菌液分别涂布到PDA平板上，吹干后倒置于25℃培养箱中培养3-5d，将分离到的真菌单菌落纯化后转接到PDA斜面上培养，待长好后，置于冰箱中保存。取编号为QF05的菌株进行下述鉴定。
1.2菌株鉴定
1.2.1菌株形态观察
挑取菌株QF05的菌丝体接种到PDA培养基上，25℃培养4d获得平板种。将菌株QF05采用三点法接种查氏酵母膏琼脂(CYA)培养基和麦芽汁琼脂(MEA)培养基上，25℃培养4d，观察其菌落形态，光学显微镜下观察孢子囊、分生孢子。结果表明菌株QF05在PDA培养基上菌丝生长茂盛，产生大量黑色孢子；在CYA培养基上菌落正面黑棕色，背面淡黄色；在MEA培养基上菌落中央灰黑色，外围灰白色，背面淡黄色。40倍光学显微镜下可看到菌株QF05分生孢子梗顶端膨大成顶囊，顶囊近球形，其上着生小梗；分生孢子球形，黑褐色(图1)。鉴于上述形态特征，将菌株QF05初步鉴定为曲霉属(Aspergillus sp.)。
其中，马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基：马铃薯去皮，200g切成小块，加水煮沸30min，4层纱布过滤，加20g葡萄糖，琼脂17g，蒸馏水定容到1000mL，煮沸混匀，121℃条件下灭菌20min，得到PDA培养基。
查氏酵母膏琼脂(CYA)培养基：K2HPO4 1g，查氏浓缩液10ml，酵母抽提物5g，蔗糖30g，琼脂15g，蒸馏水定容到1000mL，121℃条件下灭菌20min，得到查氏酵母膏琼脂(CYA)培养基。查氏浓缩液：NaNO3 30g，KCl 5g，MgSO4·7H2O 5g，FeSO4·7H2O 0.1g，ZnSO4·7H2O0.1g，CuSO4·5H20 0.05g，蒸馏水定容到100mL。
麦芽汁琼脂(Malt extract agar,MEA)培养基：麦芽提取物20g，蛋白胨1g，葡萄糖20g，琼脂15g，蒸馏水定容到1000mL，121℃条件下灭菌20min，得到麦芽汁琼脂培养基。
1.2.2菌株分子生物学鉴定
挑取菌株QF05的菌丝体接种到PDA培养基上，25℃培养4d后收集菌丝体，CTAB法提取菌株QF05的基因组DNA，采用通用引物ITS1/ITS4扩增其ITS区基因序列，采用特殊引物CMD5/CMD6扩增其钙调蛋白(calmodulin)基因序列。测序结果采用Blast软件在GenBank进行同源性比较，Clustal X软件进行多序列比对，MEGA5.0软件中Neighbor-Joining法构建系统进化树。
经测序获得菌株QF05的rDNA-ITS序列(序列表中序列1)和钙调蛋白基因序列(序列表中序列2)，根据ITS序列分析结果，菌株QF05与Aspergillus tubingensis、Aspergillus niger、Aspergillus vadensis等相似性均达到99％，因此将其归为曲霉属(Aspergillus sp.)。根据钙调蛋白基因测序和系统发育分析结果，菌株QF05与Aspergillus tubingensis相似性达99％，并与Aspergillus tubingensis菌株(FN594558、EF661151、KC796385)聚在同一系统分支。综合以上结果将菌株QF05鉴定为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)。
塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05已于2017年1月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.13563。下文简称塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05或菌株QF05。
实施例2、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05对供试病原菌的竞争抑制作用
挑取平板上生长好的直径为7mm的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05菌饼和供试病原菌菌饼，分别对称接种至PDA培养基上距中心2cm的位置，对照不接种塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05菌饼，只接种供试病原菌菌饼，每个处理三次重复，25℃培养4d观察病原菌生长情况。供试病原菌包括：番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、串珠镰刀病菌(Fusarium moniliforme)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)、小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cereali)、马铃薯早疫病菌(Alternaria tenuissima)、甘兰枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.conglutinans)、桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)。
结果表明塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05对番茄灰霉病菌(Botrytiscinerea)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.cucumerinum)和马铃薯早疫病菌(Alternaria tenuissima)生长均有竞争抑制作用，对其他四株供试病原没有抑制作用(图3和表1)。
表1、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05对供试病原真菌的竞争抑制作用
注：“+”表示有抑制作用，“-”表示无抑制作用。
实施例3、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液对供试病原菌的抑制作用
1、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液的制备
接种环挑取平板上生长好的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05接种到装有100mL液体发酵培养基的500mL三角瓶中，25℃摇床150rpm振荡培养4d，收集发酵液，采用0.22μm微孔滤膜过滤发酵液除去培养物中的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05菌体，得到塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液。
其中，液体发酵培养基为麦芽糖20g、甘油20ml、牛肉膏30g、蛋白胨30g、用蒸馏水定容到1000mL，121℃条件下灭菌20min，得液体发酵培养基。
2、抑菌作用
供试病原菌包括黄瓜角斑病菌(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)、茄子青枯病菌(Ralstonia solanacearum)、大白菜黑腐病菌(Xanthomonas campestrispv.campsetris)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)。将黄瓜角斑病菌(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)、茄子青枯病菌(Ralstonia solanacearum)、大白菜黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campsetris)分别均匀涂布于LB固体培养基上，将辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)均匀涂布于PDA固体培养基上。
其中LB固体培养基为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g,NaCl 10g，琼脂17g，蒸馏水定容到1000mL，121℃条件下灭菌20min。PDA固体培养基为：马铃薯去皮，200g切成小块，加水煮沸30min，4层纱布过滤，加20g葡萄糖，琼脂17g，蒸馏水定容到1000mL，煮沸混匀，121℃条件下灭菌20min。
在打孔器打取的直径为7mm的孔中加入步骤1的塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)QF05无菌发酵滤液，每个处理三次重复，25℃培养2d测量对供试病原细菌的抑菌圈直径，25℃培养4d测量对供试病原真菌的抑菌圈直径，对照为加入未接种塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的步骤1的液体发酵培养基。结果表明，塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液对黄瓜角斑病菌(Pseudomonas syringaepv.lachrymans)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)具有抑制作用，抑菌圈直径分别为16.67±0.58mm、12.33±0.58mm(图4)，对茄子青枯病菌(Ralstonia solanacearum)和大白菜黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campsetris)未见抑制作用。
实施例4、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液(无菌代谢物)促进种子发芽
1、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液稀释液制备
接种环挑取平板上生长好的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05接种到装有100mL液体发酵培养基的500mL三角瓶中，25℃摇床150rpm振荡培养4d，收集发酵液。将该发酵液12000rpm离心10min取上清液，采用0.22μm微孔滤膜过滤上清液除菌，得到塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液。将塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液分别用无菌水稀释10倍、50倍、100倍，得到塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)QF05无菌发酵滤液10倍稀释液、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液50倍稀释液和塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液100倍稀释液。
其中，液体发酵培养基为麦芽糖20g、甘油20ml、牛肉膏30g、蛋白胨30g、用蒸馏水定容到1000mL，121℃条件下灭菌20min，得液体发酵培养基。
2、种子发芽试验
选取颗粒饱满、大小一致的辣椒(京研国禧113)种子，采用塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)QF05无菌发酵滤液10倍稀释液、50倍稀释液和100倍稀释液浸泡种子，用等体积的步骤1的无菌液体发酵培养基作为对照。28℃培养24h，收集种子，无菌水冲洗干净种子后，将其放在铺有两层无菌水浸湿滤纸的培养皿中，28℃保湿培养5d，统计发芽率，测量胚轴、胚根长度。每个处理设三次重复，每次重复设10粒种子。
实验结果表明，与对照相比，塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液10倍稀释液降低了辣椒种子的发芽率，但是显著增加了辣椒的胚根长度，增幅达26.0％；塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液50倍稀释液处理的辣椒种子的发芽率与对照相同，但是显著增加了辣椒的胚根长度，增幅达58.9％；塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液100倍稀释液处理的辣椒种子不但发芽率比对照增加了11.1％，而且显著增加了辣椒的胚根长度，增幅达149.3％(图5和表2)。说明塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05可提高辣椒种子的发芽率和显著促进辣椒胚根的伸长。
表2、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液对辣椒种子发芽的影响
处理 发芽率％ 胚根长度(mm) 胚根长度增幅(％)
对照 90 10.56 -
10 80 13.31 26.0
50 90 16.78 58.9
100 100 26.33 149.3
注：10、50和100分别表示塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液10倍稀释液、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液50倍稀释液和塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05无菌发酵滤液100倍稀释液。
实施例5、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物促进植株生长
1、制备塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物
接种环挑取平板上生长好的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05接种到装有100mL液体发酵培养基的500mL三角瓶中，25℃摇床振荡培养培养4d，收集发酵液(含有塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05及其代谢物)。将该发酵液115℃灭菌20min即得到塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物。
其中，液体发酵培养基为麦芽糖20g、甘油20ml、牛肉膏30g、蛋白胨30g、用蒸馏水定容到1000mL，121℃条件下灭菌20min，得液体发酵培养基。
2、黄瓜植株栽培
在温室育苗盘中进行黄瓜常规化播种育苗，选用黄瓜品种为京研夏美。
待黄瓜植株长至两叶一心期，采用步骤1的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物进行蘸根处理，将黄瓜植株放置在含200ml步骤1的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物的烧杯中20min，然后移栽至盆。此后每7d每株黄瓜用100ml步骤1的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物灌根处理直至移栽后30d。整个试验过程以步骤1的无菌液体发酵培养基作对照。于黄瓜植株生长30d调查顶数两片真叶面积、株高，统计黄瓜产量至植株生长90d为止。每个处理设三次重复，每次重复10株幼苗。
结果表明，塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物促进了黄瓜真叶的生长，提高了黄瓜的株高，增加了黄瓜的产量(表3)。
表3塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物对黄瓜植株生物学性状和产量的影响
注：原液为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)QF05的含菌代谢物。
<110> 北京市农林科学院
<120> 一种果蔬病害抑制剂及其应用
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 600
<212> DNA
<213> 塔宾曲霉（Aspergillus tubingensis）
<400> 1
tccgtaggtg aacctgcgga ttttatcatg accgagtgcg ggtcctttgg gcccaacctc 60
ccatccgtgt ctattatacc ctgttgcttc ggcgggcccg ccgcttgtcg gccgccgggg 120
gggcgccttt gccccccggg cccgtgcccg ccggagaccc caacacgaac actgtctgaa 180
agcgtgcagt ctgagttgat tgaatgcaat cagttaaaac tttcaacaat ggatctcttg 240
gttccggcat cgatgaagaa cgcagcgaaa tgcgataact aatgtgaatt gcagaattca 300
gtgaatcatc gagtctttga acgcacattg cgccccctgg tattccgggg ggcatgcctg 360
tccgagcgtc attgctgccc tcaagcccgg cttgtgtgtt gggtcgccgt ccccctctcc 420
ggggggacgg gcccgaaagg cagcggcggc accgcgtccg atcctcgagc gtatggggct 480
ttgtcacatg ctctgtagga ttggccggcg cctgccgacg ttttccaacc attttttcca 540
ggttgacctc ggatcaggta gggatacccg ctgaacttaa gcatatcaat aagcggagga 600
<210> 2
<211> 582
<212> DNA
<213> 塔宾曲霉（Aspergillus tubingensis）
<400> 2
ccgagtacaa ggaggccttc tccctctttg tgagtgctcc ctgaatgaac ccccgatcac 60
tcaaattgat gtcctatctt aaccggctca taatgctaat gtattttcaa actcaatagg 120
acaaggatgg cgatggtggg tggaattctg tccccttcac gttttacctg tagcgcccga 180
tccgaccgcg ggatttcgac agctatttcc cccttcgatc tgaatcataa tactgatgta 240
atctggaaat aggccagatc accaccaagg agctcggcac tgtgatgcgc tccctcggcc 300
agaacccctc cgagtctgag cttcaggaca tgatcaacgg gttgacgctg acaacaacgg 360
aacgatcgac ttccccggta tgtgatagtc tacgcctgta aggcgggaat gccgtatgga 420
ttgtgattga cttttgccgc cagaattcct taccatgatg gctcgtaaga tgaaggacac 480
cgactccgag gaggaaatcc gcgaggcttt caaggtcttc gaccgcgaca acaatggttt 540
catctccgcc gcggagttgc gccacgttat gacctctatc gg 582

Claims (9)

1.塔宾曲霉的培养物，是将塔宾曲霉在微生物培养基中培养得到的物质，所述塔宾曲霉为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)，其菌株号为QF05，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.13563。
2.病原菌抑制剂，其特征在于：所述病原菌抑制剂含有权利要求1中所述的塔宾曲霉。
3.根据权利要求2所述的病原菌抑制剂，其特征在于：所述病原菌抑制剂对下述至少一种病原菌具有抑制作用：
A、番茄灰霉病菌；
B、辣椒炭疽病菌；
C、黄瓜枯萎病菌；
D、马铃薯早疫病菌；
E、黄瓜角斑病菌。
4.病害抑制剂，其特征在于：所述病害抑制剂含有权利要求1中所述的塔宾曲霉。
5.根据权利要求4所述的病害抑制剂，其特征在于：所述病害为下述至少一种：
a、番茄灰霉病；
b、辣椒炭疽病；
c、黄瓜枯萎病；
d、马铃薯早疫病；
e、黄瓜细菌性角斑病。
6.权利要求1中所述的塔宾曲霉的下述任一种应用：
1)权利要求1中所述的塔宾曲霉在抑制病原菌中的应用；
2)权利要求1中所述的塔宾曲霉在制备病原菌抑制剂中的应用；
3)权利要求1中所述的塔宾曲霉在抑制病害中的应用；
4)权利要求1中所述的塔宾曲霉在制备病害抑制剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述病原菌为下述至少一种：
A、番茄灰霉病菌；
B、辣椒炭疽病菌；
C、黄瓜枯萎病菌；
D、马铃薯早疫病菌；
E、黄瓜角斑病菌。
所述病害为下述至少一种：
a、番茄灰霉病；
b、辣椒炭疽病；
c、黄瓜枯萎病；
d、马铃薯早疫病；
e、黄瓜细菌性角斑病。
8.权利要求1中所述的塔宾曲霉的下述任一种应用：
H、权利要求1中所述的塔宾曲霉在促进植物种子萌发中的应用；
I、权利要求1中所述的塔宾曲霉在促进植物种子胚根生长中的应用；
J、权利要求1中所述的塔宾曲霉在促进植物真叶生长中的应用；
K、权利要求1中所述的塔宾曲霉在提高植物株高中的应用；
L、权利要求1中所述的塔宾曲霉在提高植物产量中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述植物为下述任一种植物：
P1)黄瓜或辣椒；
P2)黄瓜属植物或辣椒属植物；
P3)葫芦科植物或茄科植物；
P4)种子植物；
P5)双子叶植物。
CN201910584619.4A 2017-02-23 2017-02-23 一种果蔬病害抑制剂及其应用 Active CN110292051B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910584619.4A CN110292051B (zh) 2017-02-23 2017-02-23 一种果蔬病害抑制剂及其应用

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710098885.7A CN106591157B (zh) 2017-02-23 2017-02-23 一株防病促生的塔宾曲霉及其代谢产物的制备和应用
CN201910584619.4A CN110292051B (zh) 2017-02-23 2017-02-23 一种果蔬病害抑制剂及其应用

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710098885.7A Division CN106591157B (zh) 2017-02-23 2017-02-23 一株防病促生的塔宾曲霉及其代谢产物的制备和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110292051A true CN110292051A (zh) 2019-10-01
CN110292051B CN110292051B (zh) 2021-04-23

Family

ID=58587771

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710098885.7A Active CN106591157B (zh) 2017-02-23 2017-02-23 一株防病促生的塔宾曲霉及其代谢产物的制备和应用
CN201910584619.4A Active CN110292051B (zh) 2017-02-23 2017-02-23 一种果蔬病害抑制剂及其应用

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710098885.7A Active CN106591157B (zh) 2017-02-23 2017-02-23 一株防病促生的塔宾曲霉及其代谢产物的制备和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (2) CN106591157B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117551733A (zh) * 2023-11-08 2024-02-13 广东东森堂农业科技开发有限公司 猕猴桃花粉溃疡病检测方法及其试剂盒

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110257290B (zh) * 2017-06-28 2020-11-17 北京市农林科学院 一种植物病原菌抑制剂及其所用菌株与应用
CN108504582B (zh) * 2018-04-16 2020-09-29 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 菌种及其筛选方法与在延缓叶片衰老中的应用
CN110129210B (zh) * 2019-05-21 2020-05-15 天津农学院 一种棘孢曲霉菌株及其应用
CN114456944B (zh) * 2021-05-31 2023-07-07 中国农业大学 一种塔宾曲霉及包含该塔宾曲霉的复合微生物菌剂和应用
CN117187077B (zh) * 2023-07-24 2024-03-08 广东省科学院南繁种业研究所 复合菌群及其应用、植物青枯病的防治方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104694399A (zh) * 2015-03-27 2015-06-10 福建农林大学 一种具有抗病毒活性的菌株及其应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101766189B (zh) * 2008-12-29 2012-01-25 辽宁省农业科学院植物保护研究所 一种能促进黄瓜生长和防治黄瓜枯萎病的植物内生菌剂
CN103114046B (zh) * 2013-03-01 2014-09-24 淮海工学院 塔宾曲霉szx-6及其发酵液和发酵液提取物与用途
CN104046569B (zh) * 2014-05-05 2017-02-15 江南大学 一种高产糖化酶、α‑淀粉酶和酸性蛋白酶的塔宾曲霉及其应用
CN106187498A (zh) * 2016-07-17 2016-12-07 熊廷珍 增强植物抗病性的肥料及其生产工艺
CN106222096B (zh) * 2016-08-18 2018-02-23 滨州学院 一株塔宾曲霉菌ct1及其在盐碱地解磷方面的应用
CN106434391A (zh) * 2016-12-21 2017-02-22 中国科学院微生物研究所 一株高效溶磷的塔宾曲霉菌株及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104694399A (zh) * 2015-03-27 2015-06-10 福建农林大学 一种具有抗病毒活性的菌株及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SILVA, MARIA C. P. ET,AL: "Biogenic antimicrobial silver nanoparticles produced by fungi", 《APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY》 *
吴沣等: "塔宾曲霉的生物学特征及其对环境中Pb~(2+)的固定作用研究", 《环境科学学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117551733A (zh) * 2023-11-08 2024-02-13 广东东森堂农业科技开发有限公司 猕猴桃花粉溃疡病检测方法及其试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN106591157A (zh) 2017-04-26
CN110292051B (zh) 2021-04-23
CN106591157B (zh) 2019-08-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105886428B (zh) 一株微白黄链霉菌及其在微生物肥料中的应用
CN106591157B (zh) 一株防病促生的塔宾曲霉及其代谢产物的制备和应用
CN109055281B (zh) 贝莱斯芽胞杆菌zf2及其在植物病害防治中的应用
CN109182137B (zh) 一株防病促生的非洲哈茨木霉及其应用
CN107083349B (zh) 一株防病促生的白黑链霉菌及其代谢产物的制备与应用
CN102433282B (zh) 枯草芽孢杆菌nb12及其培养方法和应用
CN104630071B (zh) 一株多孢木霉及其应用
CN101525587B (zh) 一株链霉菌菌株及其应用
CN104694397A (zh) 一株球毛壳菌及其应用
CN110982725B (zh) 一种拮抗枯萎病和促生长的芽孢杆菌及其应用
CN107287130A (zh) 一种微白黄链霉菌菌株及其在农药中的应用
CN105199996A (zh) 一种用于防治番茄灰霉病的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN105062920A (zh) 一种多产色链霉菌菌株及其应用
CN110331100A (zh) 棘孢木霉sc012及其应用
CN111040976A (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN110982724A (zh) 一种拮抗植物病原菌和促生根的芽孢杆菌及其应用
CN113862160B (zh) 一株具有生防及诱导抗病作用的拟康宁木霉Tk905菌株及其应用
CN105695346B (zh) 一株毒杀植物寄生线虫的菌核青霉及其制备方法和应用
CN105695342B (zh) 康氏木霉菌tg-72及其在黄曲霉菌生物防治中的应用
CN108220211B (zh) 一株嗜油不动杆菌nmb17及其在植物病害防治中的应用
CN110157641A (zh) 一株防治玉米茎基腐病的生防细菌bv23及其应用
CN115873770B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治番茄病害中的应用
CN116790417A (zh) 能够抑制多种植物的病原菌并对多种作物有促生作用的假单胞菌及筛选方法和应用
CN113913303B (zh) 一种拟康宁木霉、浸根液及应用
CN103074237B (zh) 一株可可木霉及其在防治蔬菜病害中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant