CN113862160B - 一株具有生防及诱导抗病作用的拟康宁木霉Tk905菌株及其应用 - Google Patents

一株具有生防及诱导抗病作用的拟康宁木霉Tk905菌株及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株具有生防及诱导抗病作用的拟康宁木霉Tk905菌株及其应用，所述拟康宁木霉Tk905菌株于2021年9月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC No：61934。本发明研究显示，拟康宁木霉Tk905菌株及其发酵液对多种植物病原真菌生长均具有较明显抑制作用，且在后期能覆盖多种病原真菌，并在周围产生大量的分生孢子，表现出极强的竞争力及广谱抗植物病原真菌活性，同时拟康宁木霉Tk905菌株还可以诱导植物产生抗病性，具有巨大的生防潜力，具有较大的开发应用前景。

Description

一株具有生防及诱导抗病作用的拟康宁木霉Tk905菌株及其 应用
技术领域
本发明涉及农业微生物技术领域，更具体地，涉及一株具有生防及诱导抗病作用的拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)Tk905菌株及其应用。
背景技术
木霉(Trichoderma)在世界范围内广泛分布在自然界中，其含有很多对人类有重要经济价值的种群。近年来随着我国“化肥农药减量”政策的提出与实施，生物防治措施是其中重要的防治策略之一。而一些木霉菌株可用于生物肥料、生物杀虫剂中的生物效应剂及降解重金属等污染物的生物修复剂。在生物防治方面，木霉菌对一些植物叶部及地下部病原微生物及根结线虫等都能表现出良好的防治效果。以木霉为材料的生物杀菌剂在农业市场上蓬勃发展，全世界注册了超过250种的木霉制剂，超过50种不同木霉菌产品在推广使用。
木霉具有广谱性及适应性强的特点，并对病原菌具有多种拮抗机制。目前国内报道的木霉种类超过20种，主要有哈茨木霉(T.harzianum)、绿色木霉(T.viride)、钩状木霉(T.hamatum)、长枝木霉(T.longibrachiatum)、康氏木霉(T.koningii)、多孢木霉(T.polysporum)等。拟康宁木霉(T.koningiopsis)于2010年在我国首次报道。近年来，研究显示拟康宁木霉在生物防治上也有重要的潜力，例如中国专利CN103992958A公开了一株水稻秸秆降解真菌拟康宁木霉ZJC-1及其菌剂；中国专利CN104277984公开了一种拟康宁木霉ReTk1菌株及菌剂制备方法和应用，对油菜根肿病具有防效；中国专利CN110938551A公开了拟康宁木霉T-51菌株在西瓜枯萎病防治中的应用；中国专利CN105586274A公开了拟康宁木霉T-51菌株及其在番茄促生和灰霉病生物防治的应用；中国专利CN112143654A公开了一株拟康宁木霉菌及其在防治荔枝炭疽病中的应用。然而上述现有拟康宁木霉均只能对单一病原菌具有防效，并不具有广谱抗菌性和诱导抗病作用，由于不同的菌株间的防治潜力存在着一定的差异，因此开发挖掘具有广谱抗菌作用的拟康宁木霉菌株对于其开发应用具有重大的价值。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一株具有生防及诱导抗病作用的拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)Tk905菌株。
本发明的第二个目的在于提供所述拟康宁木霉Tk905菌株在防治植物真菌病或在制备植物病原真菌防治制剂中的应用。
本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
一株具有生防及诱导抗病作用的拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)Tk905菌株，所述菌株于2021年9月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCCNo：61934。
具体地，所述拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)Tk905菌株的ITS和TEF-1α的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～2所示。
本发明从采集自广东省的石斛根部分离纯化了一株木霉，经过形态学和分子生物学鉴定，确定该菌株为拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis，将其命名为拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)Tk905菌株，并于2021年9月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC No：61934，分类命名为Trichoderma koningiopsis Tk905，保藏地址为广东省广州市先烈中路100号。本发明进一步对Tk905菌株进行抑菌谱测试及无菌发酵液抑菌测试，结果显示本发明Tk905菌株对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.cubens race 4)、玉米小斑病菌(Helminthosporium maydis)、金丝皇菊枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、花生黑腐病菌(Calonectria ilicicola)、巴戟天根腐病菌(Lasiodiplodia pseudotheobromae)、柑橘褐斑病菌(Alternaria alternata)、广藿香蔓枯病菌(Stagonosporopsis sp.)及柑橘炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)均具有较明显抑制作用，其中对金丝皇菊枯萎病菌(Fusarium oxysporum)和玉米小斑病菌(Helminthosporium maydis)生长抑制作用最强，生长抑制率分别为70％和69％，拮抗等级均为Ⅱ级，且其在后期能覆盖金丝皇菊枯萎病菌菌落边缘及完全覆盖玉米小斑病菌整个菌落，Tk905菌株其无菌发酵液对上述病原真菌均有一定的抑制作用，对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubens race 4)的抑制效果最好，且能诱导香蕉产生抗病性抵抗枯萎病；表明Tk905菌株具有极强的生存竞争力、广谱抗植物病原真菌活性和诱导抗病作用。
因此，本发明还请求保护拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)Tk905菌株或其发酵液在诱导植物产生抗病性、抑制植物病原真菌生长或在制备抑制植物病原真菌生长的制剂中的应用。
优选地，所述植物病原真菌为香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubensrace 4)、玉米小斑病菌(Helminthosporium maydis)、金丝皇菊枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、花生黑腐病菌(Calonectria ilicicola)、巴戟天根腐病菌(Lasiodiplodiapseudotheobromae)、柑橘褐斑病菌(Alternaria alternata)、广藿香蔓枯病菌(Stagonosporopsis sp.)或柑橘炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)中的任意一种或多种。
进一步优选地，所述植物病原真菌为香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.cubens race 4)、玉米小斑病菌(Helminthosporium maydis)、金丝皇菊枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、花生黑腐病菌(Calonectria ilicicola)、巴戟天根腐病菌(Lasiodiplodia pseudotheobromae)、柑橘褐斑病菌(Alternaria alternata)、广藿香蔓枯病菌(Stagonosporopsis sp.)或柑橘炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)中的任意一种或多种。
本发明还提供拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)Tk905菌株或其发酵液在防治植物真菌病害或在制备防治植物真菌病害的制剂中的应用。
优选地，所述植物真菌病害为香蕉枯萎病、玉米小斑病、金丝皇菊枯萎病、花生黑腐病、巴戟天根腐病、柑橘褐斑病、广藿香蔓枯病或柑橘炭疽病中的任意一种或多种。
进一步优选地，所述植物病原病害为香蕉枯萎病、玉米小斑病、花生黑腐病、柑橘褐斑病、广藿香蔓枯病或柑橘炭疽病中的任意一种或多种。
基于上述应用，本发明还提供一种具有生防及诱导抗病作用的制剂，所述制剂包含所述拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)Tk905菌株或其发酵液。
优选地，所述发酵液为无菌发酵液。
优选地，所述发酵液为Tk905菌株的马铃薯葡萄糖培养基无菌发酵液或马铃薯蔗糖培养基无菌发酵液。
本发明还提供一种诱导植物产生抗病性或防治植物真菌病害的方法，通过向植物根部施用拟康宁木霉Tk905菌株或其发酵液。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一株具有生防及诱导抗病作用的拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)Tk905菌株，所述菌株于2021年9月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC No：61934。本发明研究显示，拟康宁木霉Tk905菌株及其发酵液对多种植物病原真菌生长均具有较明显抑制作用，且在后期能覆盖多种病原真菌，并在周围产生大量的分生孢子，表现出极强的竞争力及广谱抗植物病原真菌活性，同时拟康宁木霉Tk905菌株还可以诱导植物产生抗病性，具有巨大的生防潜力，具有较大的开发应用前景。
附图说明
图1为Tk905菌株的形态特征。A：PDA培养基上的菌落；B：分生孢子(10μm)；C：分生孢子梗和分生孢子，图B,C的标尺为10μm。
图2为基于TEF-1α序列构建菌株Tk905及其相关菌株的系统发育树。
图3为Tk905菌株与8种病原菌的对峙培养。A：玉米小斑病菌(Helminthosporiummaydis)，B：金丝皇菊枯萎病菌(Fusarium oxysporum)，C：花生黑腐病菌(Calonectriailicicola)，D：巴戟天根腐病菌(Lasiodiplodia pseudotheobromae)，E：柑橘褐斑病菌(Alternaria alternata)，F：广藿香蔓枯病菌(Stagonosporopsis sp.)，G：香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubens race 4)，H：柑橘炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)。图中所示菌落均为培养第7d的结果。
图4为Tk905菌株诱导处理后接种香蕉枯萎病菌36d后外部病症和内部病症。A、D：香蕉枯萎病菌4号小种处理组，B、E：香蕉枯萎病菌4号小种+TK095发酵物，C、F：清水CK对照。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
供试病原菌：香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubens race 4)、玉米小斑病菌(Helminthosporium maydis)、金丝皇菊枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、花生黑腐病菌(Calonectria ilicicola)、巴戟天根腐病菌(Lasiodiplodia pseudotheobromae)、柑橘褐斑病菌(Alternaria alternata)、广藿香蔓枯病菌(Stagonosporopsis sp.)、柑橘炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)均为仲恺农业工程学院植物健康创新研究院保存菌种。
供试培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potato Dextrose Agar，PDA)、马铃薯葡萄糖培养基(Potato Dextrose，PD)、马铃薯蔗糖培养基(Potato Sucrose，PS)、水琼脂培养基(Water Agar，WA)等均按照本领域常规方法制备。
实施例1拟康宁木霉菌株Tk905的分离鉴定
1、木霉菌株的采集、分离与纯化
木霉菌株样品来自广东省的石斛样品，取石斛根部，用自来水冲洗干净后，在PDA平板上进行组织分离后再在WA培养基上进行单菌丝纯化，将获得的菌株命名为Tk905。
2、木霉Tk905菌株的鉴定
(1)形态学鉴定：将已经纯化好的Tk905菌株接种至PDA培养基中，置于28℃的培养箱中进行培养，观察其菌落形态特征；利用显微镜(Eclipse80i photographicmicroscope，Nikon，Japan)拍摄其微观特征并进行测量。结合培养性状及微观特征对其进行鉴定。
结果：如图1所示，Tk905菌株在PDA培养基上的气生菌丝茂盛，培养48h左右菌落能长满整个8mm的培养皿。菌落初为白色，在PDA培养基上2-3d左右后开始从中间开始产孢，后期呈草坪状，没有产生明显的气味。分生孢子均匀分布在气生菌丝上，后期分生孢子堆绿色。分生孢子单胞，椭圆形至长椭圆形，壁光滑，直径大小(2.73～5.26)μm×(1.95～3.5)μm(3.57±0.55×2.70±0.36μm)。分生孢子梗直立，宽约2μm，具有明显的主轴，分生孢子梗直接产生瓶梗或产生二级分枝，分枝与主轴夹角稍小于90°，可育分枝的顶端产生2～5个涡状排列的瓶梗。未见厚垣孢子。根据Tk905菌株的培养特性和形态特征，初步确定其为拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis。
(2)分子生物学鉴定：收集PDA培养基培养的Tk905菌株的菌丝体，并采用CTAB法提取DNA。随后分别ITS1(5′-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3′)andITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)及EF1-728F(CATCGAGAAGTTCGAGAAGG)and EF1-986R(TACTTGAAGGAACCCTTACC)扩增该菌株的ITS和TEF-1α序列。PCR扩增产物送广州天一辉远有限公司进行双向测序。测序结果在NCBI的GenBank中进行BLAST比对分析，并将序列利用MIST(http://mmit.china-cctc.org/)进行分析。从GenBank中下载序列，采用Mega6.06软件以邻近法(Neighbor-Joining)构建TEF-1α基因的系统发育树，确定其分类地位。
结果：经测序，Tk905菌株的ITS和TEF-1α长度分别为604和354bp，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～2所示。与NCBI的GenBank数据库进行Blastn比对，Tk905菌株的ITS与拟康宁木霉的模式菌株(CBS119075，NR131281)的相似性为100％，与拟康宁木霉的其余菌株(MT111912、MN602617、MF616361、MH512944、KY111266、KC884758、EU718083和DQ379015)的相似性也为100％；比对上的133个序列中，50个均为拟康宁木霉，43个为木霉属(Trichoderma sp.)。Tk905菌株的TEF-1α与拟康宁木霉TK1菌株(MT120181)、JBHAW2006-14-1菌株(KJ871202)，CRM-RCH169菌株(KT619072)的相似性分别为100％、99.15％和98.59％，比对上的105个序列中101个均为拟康宁木霉。将Tk905菌株的TEF-1α序列在MIST比对结果显示其为拟康宁木霉。利用MEGA软件构建TEF-1α基因的系统发育树，发现Tk905菌株与其余拟康宁木霉聚为一支(图2)。结合菌落形态特征以及分子生物学鉴定该菌株为拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis。因此将其命名为拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)Tk905菌株，并将所述菌株于2021年9月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，菌种保藏号为GDMCC No：61934，分类命名为Trichoderma koningiopsisTk905，保藏地址为广东省广州市先烈中路100号。
实施例2木霉Tk905菌株抑菌谱、拮抗等级及抑菌活性测定
采用平板对峙法进行测定。分别用打孔器打取直径为5mm的Tk905菌株和8种植物病原菌菌饼，同时将Tk905菌株与各个病原菌菌饼分别接种于制备好的PDA平板两侧进行对峙培养，对照组则只接种各个病原菌，每个处理4个重复，接种后置于28℃恒温箱中培养。第二天开始每天观察菌落生长情况，并记录Tk905菌株和病原菌的对峙生长情况，根据十字交叉法分别在第3、5、7d记录病原真菌的菌落直径，根据菌丝生长抑制率公式计算抑菌效果。抑制率(％)＝[(对照病原菌菌落直径-与木霉菌对峙培养病原菌菌落直径)/对照病原菌菌落直径]×100。采用Excel进行数据处理，计算其标准差，并采用DPS软件的邓肯氏新复极差法进行差异显著性检验。
拮抗等级分级标准参照产祝龙等的分级标准：Ⅰ，木霉菌菌落占据培养皿面积＝100％；Ⅱ，3/4<木霉菌菌落占据培养皿面积<100％；Ⅲ，2/3<木霉菌菌落占据培养皿面积<3/4；Ⅳ，1/3<木霉菌菌落占据培养皿面积<2/3；Ⅴ，0<木霉菌菌落占据培养皿面积<1/3；Ⅵ，病原菌菌落占据培养皿面积为100％。
结果：对峙培养观察结果如表1和图3所示，表明Tk905菌株对供试的8种植物病原菌的生长均具有较明显抑制作用，其拮抗等级有所差异，除了巴戟天根腐病菌的拮抗等级Ⅳ以外，Tk905菌株对其余7种供试病原菌的拮抗等级均为Ⅱ。Tk905菌株在各病原菌的覆盖程度有所差异，Tk905菌株能覆盖巴戟天根腐病菌、玉米小斑病菌、柑橘褐斑病菌、柑橘炭疽病菌、广藿香蔓枯病菌及香蕉枯萎病菌等。虽然Tk905菌株在金丝皇菊枯萎病菌和花生黑腐病菌的覆盖程度较低，但是依然能在病原菌周围产生大量的孢子。尽管巴戟天黑腐病菌的病原物拟可可毛色二孢真菌生长速度极快，但是Tk905菌株依然能抑制其生长，甚至在后期能覆盖其菌丝上；由于木霉适应力较强，菌丝生长的速度较快，竞争力较强，容易与病原菌竞争营养和生存空间，从而达到控制病原菌侵染植物的效果。表明拟康宁木霉Tk905菌株对上述众多的植物病原真菌表现出极强的生存竞争力。
表1 Tk905菌株对8种病原菌生长的抑制作用
Figure GDA0003987389920000071
Figure GDA0003987389920000081
Figure GDA0003987389920000091
平板对峙试验统计具体结果如表2所示，Tk905木霉菌株对8种植物病原菌的生长均有不同程度的抑制作用，且其抑制作用存在一定的差异。接种后第7d，Tk905木霉菌株对其中对金丝皇菊枯萎病菌、玉米小斑病菌、柑橘炭疽病菌、香蕉枯萎病菌、柑橘褐斑病菌、广藿香蔓枯病菌、花生黑腐病菌和巴戟天根腐病菌的抑制率分别为70％、69％、66％、64％、61％、60％、50％和25％。
表2接种7天后Tk905木霉菌对8种病原菌的生长抑制率
Figure GDA0003987389920000092
注：表中数据为平板对峙接种后第7天的数值，数据形式为平均值±标准差。同列不同字母表示经Duncan新复极差法检验在P<0.05水平差异显著。下同。
实施例3木霉Tk905菌株无菌发酵液粗提物对病原物的抑制作用
无菌发酵液将菌株Tk905在PDA培养基上接种5mm菌饼进行活化培养48h，吸取1mL到装有100mL PDB培养基的300mL锥形瓶中；在28℃、180r/min避光振荡培养7d后，4℃、12000r/min离心发酵液，收集上清液；再用无菌滤膜(直径为0.22μm)过滤除菌，获得无菌发酵液。用移液枪吸取150μL无菌发酵液均匀涂布在PDA的表面，待其完全吸收后再接种新鲜培养的直径为5mm的8种病原菌菌柄至培养皿中央，以不涂布无菌发酵液的PDA作为对照。每个重复4次。抑制率的计算参照实施例2。
结果：如表3所示，Tk905菌株的无菌发酵液对病原菌均有一定的抑制作用，但是对不同的病原菌的抑制效果也存在着一定的差异。其中，Tk905菌株的PS和PD无菌发酵液对香蕉枯萎病菌的抑制效果较好，PS酵液在7d后对其的抑菌效果分别约为25.75％。
表3木霉Tk905菌株无菌发酵液对8种病原菌的生长抑制率
Figure GDA0003987389920000101
注：PS为用PS液体培养基发酵的无菌滤液与PDA混合后接菌的菌落直径，PD为用PD液体培养基发酵的无菌滤液与PDA混合后接菌的菌落直径。表中数据为平均值±标准差。-为未测时间点。
实施例4田间病害防治效果测试
(1)大棚试验：
将巴西组培苗，龄期约2个月(五叶一心)，移栽种植于花盆中约4d(上口直径9cm，盆高8cm)。营养土的比例(蛭石：土＝1:4)，每个处理的13个花盆各自放在一个长54cm，宽28cm深5cm的无孔托盘中。整个试验无孔托盘里都保持有自来水，把苗移栽在营养土后，全程没有施肥。试验地为大棚种植试验。灭菌剪刀剪去枪头约2cm，形成直径约的口径，用移液枪吸取Tk905发酵液和菌丝，每一株灌根处理8ml。灌Tk905发酵物十天后，将母液的浓度为4.6×107CFU/ml的香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubens race 4)14013孢子悬浮物灌根接种于Tk905发酵物+菌与14013处理组中，每一株灌根18ml。其中在接种香蕉镰刀菌14013前10d、7d、1d和接种后18d后，三个处理都将二甲基亚砜+吐温-80液用小型喷雾器喷于香蕉苗叶片正反面布满水珠。接种一个月后后观察，分别于36d时和43d调查其内外症状病情。
(2)病情分级标准：
香蕉苗外部症状病情分级标准：0级：叶片无症状，正常；1级：外围下部1～2片叶黄化，出现小面积黄色斑块，占叶面积的25％以下，其余叶片正常；3级：外围下部3～4片叶黄化，出现较大面积黄色斑块，占叶面积的25％～50％，其余叶片正常；5级：外围叶片黄化，出现大面积黄色斑块，占叶面积的50％以上，叶片出现萎蔫；7级：大部分叶片黄化、萎蔫，仅心叶正常；9级：植株萎蔫，枯萎死亡。
香蕉苗内部症状病情分级标准：0级：球茎、假茎组织白色，未见变褐；1级：球茎组织变褐面积占球茎面积的5％以下，假茎组织未见变褐；3级：球茎组织变褐面积占球茎面积的5％～15％，假茎组织未见变褐；5级：球茎组织变褐面积占球茎面积的16％～25％，假茎组织上部未见变褐，而下部出现浅褐色斑点状或褐色线条状病变；7级：球茎组织变褐面积占球茎面积的26％～50％，假茎上、下部出现褐色线条状病变；9级：球茎组织变褐面积占球茎面积的50％以上或全部腐烂，或植株枯萎死亡。
香蕉苗发病率评价标准：发病率(％)＝内部病情大于等于3级的株数/总株数×100
(3)病情指数与防治效果评价标准
Figure GDA0003987389920000111
Figure GDA0003987389920000112
(4)结果与分析
结果：接种43d后根据内外症状病情分级标准统计出表4，图4为36d后其中一个重复，三个处理，每个处理13株的外部病情症状图。从图4可以明显观察到14013处理组发病最严重。14013处理组外部病指33.3，内部病指57.26，发病率84.62％；Tk905发酵物+14013外部病指为15.23，内部病指为26.50，发病率46.15％，外部防效53.3％，内部防效53.71％。
试验结果表明：出现明显发病症状的时间为接种后30天，最初下部叶片出现明显局部的失绿发黄，随着时间推移，发黄的面积和变黄的叶片数增加，后期发黄的部位变灰褐色干枯，最后整片叶片干枯。长出新叶困难，植株矮化，下部假径出现黑褐色斑块，发病严重的整株干枯死亡。这是典型的香蕉枯萎病症状，不是生理性黄化。施用Tk905木霉发酵液可以普遍减轻病情，将试验的发病率从84.62％降低到46.15％，内部防效53.71％，外部防效53.3％。说明Tk905木霉发酵液能诱导巴西蕉抵抗枯萎病或者抑制香蕉枯萎病菌(Fusariumoxysporum f.sp.cubens race 4)侵染巴西蕉。如果能应用于生产上，可以有效防治香蕉枯萎病对巴西香蕉的危害，降低经济损失。
表4接种43d后各个处理内外症状病情
Figure GDA0003987389920000121
以上试验结果表明，本发明分离得到的拟康宁木霉Tk905菌株及其发酵液对多种植物病原真菌生长均具有较明显抑制作用，且在后期能覆盖多种病原真菌，并在周围产生大量的分生孢子，表现出极强的竞争力及广谱抗植物病原真菌活性，同时拟康宁木霉Tk905菌株还可以诱导植物产生抗病性，具有巨大的生防潜力，具有较大的开发应用前景。
序列表
<110> 仲恺农业工程学院
<120> 一株具有生防及诱导抗病作用的拟康宁木霉Tk905菌株及其应用
<141> 2021-10-19
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 604
<212> DNA
<213> 拟康宁木霉Tk905(Trichoderma koningiopsis Tk905)
<400> 1
tccgtaggtg aacctgcgga gggatcatta ccgagtttac aactcccaaa cccaatgtga 60
accataccaa actgttgcct cggcggggtc acgccccggg tgcgtcgcag ccccggaacc 120
aggcgcccgc cggagggacc aaccaaactc tttctgtagt cccctcgcgg acgttatttc 180
ttacagctct gagcaaaaat tcaaaatgaa tcaaaacttt caacaacgga tctcttggtt 240
ctggcatcga tgaagaacgc agcgaaatgc gataagtaat gtgaattgca gaattcagtg 300
aatcatcgaa tctttgaacg cacattgcgc ccgccagtat tctggcgggc atgcctgtcc 360
gagcgtcatt tcaaccctcg aacccctccg gggggtcggc gttggggatc gggaacccct 420
aagacgggat cccggccccg aaatacagtg gcggtctcgc cgcagcctct cctgcgcagt 480
agtttgcaca actcgcaccg ggagcgcggc gcgtccacgt ccgtaaaaca cccaacttct 540
gaaatgttga cctcggatca ggtaggaata cccgctgaac ttaagcatat caataagcgg 600
agga 604
<210> 2
<211> 354
<212> DNA
<213> 拟康宁木霉Tk905(Trichoderma koningiopsis Tk905)
<400> 2
catcgagaag ttcgagaagg taagctcatt tcactgcttt ttccaccacg cttggcacaa 60
tcgtgtccga caattctgtt ctcagtcttg tctgttttcc tcgcagcgta acaccccgct 120
tggcctgtct acccctcctt tggcagcaaa tttttctgct gcctcgtttg actttagtgg 180
ggtgccaatt ttttttggca accccgctat tgccactgtc cctcatccat cgtcccaaca 240
aaatgcactc gttcaatcgc atcgtctttt gactcgattt ctctatgatt cattgtgcta 300
atcatgcttc aatcaatagg aagccgccga actcggtaag ggttccttca agta 354

Claims (7)

1.一株具有生防作用的拟康宁木霉（Trichodermakoningiopsis）Tk905菌株，其特征在于，所述菌株于2021年9月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCCNo：61934。
2.权利要求1所述拟康宁木霉Tk905菌株或其发酵液在抑制植物病原真菌生长或在制备抑制植物病原真菌生长的制剂中的应用；所述植物病原真菌为香蕉枯萎病菌（Fusariumoxysporum f. sp. cubens race 4）、玉米小斑病菌（Helminthosporiummaydis）、金丝皇菊枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、花生黑腐病菌（Calonectriailicicola）、巴戟天根腐病菌（Lasiodiplodia pseudotheobromae）、柑橘褐斑病菌（Alternariaalternata）、广藿香叶枯病菌（Stagonosporopsissp.）或柑橘炭疽病菌（Colletotrichumgloeosporioides）中的任意一种或多种。
3.权利要求1所述拟康宁木霉（Trichodermakoningiopsis）Tk905菌株或其发酵液在防治植物真菌病害或在制备防治植物真菌病害的制剂中的应用；所述植物真菌病害的病原真菌为香蕉枯萎病菌（Fusariumoxysporum f. sp. cubens race 4）、玉米小斑病菌（Helminthosporiummaydis）、金丝皇菊枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、花生黑腐病菌（Calonectriailicicola）、巴戟天根腐病菌（Lasiodiplodia pseudotheobromae）、柑橘褐斑病菌（Alternariaalternata）、广藿香叶枯病菌（Stagonosporopsissp.）或柑橘炭疽病菌（Colletotrichumgloeosporioides）中的任意一种或多种。
4.一种具有生防作用的制剂，其特征在于，包含权利要求1所述拟康宁木霉Tk905菌株或其发酵液。
5.根据权利要求4所述制剂，其特征在于，所述发酵液为无菌发酵液。
6.根据权利要求4所述制剂，其特征在于，所述发酵液为Tk905菌株的马铃薯葡萄糖培养基无菌发酵液或马铃薯蔗糖培养基无菌发酵液。
7.一种防治植物真菌病害的方法，其特征在于，向植物根部施用权利要求1所述拟康宁木霉Tk905菌株或其发酵液；所述植物真菌病害的病原真菌为香蕉枯萎病菌（Fusariumoxysporum f. sp. cubens race 4）、玉米小斑病菌（Helminthosporiummaydis）、金丝皇菊枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、花生黑腐病菌（Calonectriailicicola）、巴戟天根腐病菌（Lasiodiplodia pseudotheobromae）、柑橘褐斑病菌（Alternariaalternata）、广藿香叶枯病菌（Stagonosporopsissp.）或柑橘炭疽病菌（Colletotrichumgloeosporioides）中的任意一种或多种。
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