CN113913303B - 一种拟康宁木霉、浸根液及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种拟康宁木霉、浸根液及应用，涉及人参病害防治技术领域。菌株分类学名称为拟康宁木霉Trichodermakoningiopsis，生物材料名称为Tri112。该拟康宁木霉不仅具有对人参致病菌的拮抗作用，而且还对人参根、茎、叶生长具有显著的促生作用。通过拟康宁木霉改良农田土栽参，极大程度上保护了土壤微生物种群结构，有效提升了土壤微生物种群的生物丰度，使得土壤更适合人参的栽培。在农田土栽参的过程中施用该菌剂，种植人参种苗，保证了较高的存苗率。

Description

一种拟康宁木霉、浸根液及应用

技术领域

本发明涉及人参病害防治技术领域，具体而言，涉及一种拟康宁木霉、浸根液及应用。

背景技术

人参是名贵的多年生药用植物，生长发育年限长，生长环境条件较严，人参的栽培模式主要分为伐林地种参和农田地种参。由于国家已明确禁止伐林栽参，目前人参种植模式主要是以农田种参为主。由于普通农田存在土壤容重低、易板结、养分含量低等问题，直接栽参人参病害发生严重，致使人参产量低质量差。而且有的地块还存在农药残留的问题，不适合人参的生长。

目前，常规的解决方法是对农田土壤改良后进行人参栽培。农田栽参是通过对普通农田的土壤进行改造，使其土壤中的养分、微生物群落等达到适合人参生长的需求。现有技术基本上是将土壤改良剂(由芽孢杆菌、多元维生素、米曲霉、微量元素等多种物质组合而成)均匀撒在土壤表面来改良种植人参的土壤环境；或者使用微生物复合菌发酵液与玉米秸秆、豆饼、麦麸、大蒜素微乳剂按比例混合施用于农田土或老参地，防治土传病害，从而提高人参的产量。

关于人参促生，提高产量方面的研究中，多数是在人参生长过程中将易消耗营养元素磷、钾、铁、硼、锰等与植物生长调节剂配合施用，通过在人参的各个生长阶段喷施，从而促进其生长发育增加产量。

木霉(Trichoderma spp)是一类世界分布的土壤习居丝状真菌，因为对多种植物病害有良好的生防潜力而被广泛研究。木霉的生防机制主要包括对病原菌的重寄生和抗生作用、竞争以及对植物的促生和诱导抗性作用。木霉防治植物真菌性病害的主要机制包括提高植物抗性。有研究表明从土壤中分离得到有益微生物菌哈茨木霉、钩状木霉、黑附球菌、多孢木霉、球毛壳菌能有效防治人参主要病害并对人参有促生作用。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种拟康宁木霉、浸根液及应用以解决上述技术问题。

发明人筛选分离出一种新的木霉，经鉴定，其属于拟康宁木霉种。具体地，本发明是这样实现的：

本发明提供了一种拟康宁木霉，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2021年8月19日，保藏编号为CGMCC No.23210，菌株分类学名称为拟康宁木霉Trichodermakoningiopsis，生物材料名称为Tri112。检测结果为存活。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述拟康宁木霉的菌落培养特征为：在PDA培养基上培养3天，能蔓延至整个培养皿，白色的气生菌丝茂盛；培养后期，菌丝外延形成绿色的分生孢子。

本发明还提供了一种拟康宁木霉在土壤改良中的应用，应用是针对人参栽培的土壤改良；

在本发明一种可选的实施方式中，土壤改良是以拟康宁木霉分生孢子悬浮液作为土壤改良剂。

本发明还提供了一种拟康宁木霉在制备浸根液、浸根粉或菌剂中的应用。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述浸根液、浸根粉或菌剂以拟康宁木霉为主要有效成分；

在本发明一种可选的实施方式中，浸根液、浸根粉或菌剂以拟康宁木霉分生孢子悬浮液为主要有效成分。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述浸根液、浸根粉或菌剂中含拟康宁木霉的量为1×10⁸cfu·ml^-1～3×10⁸cfu·ml^-1。

本发明还提供了一种拟康宁木霉在人参致病菌防治中的应用，人参致病菌选自如下至少一种：人参黑斑病菌(Alternaria panax)、人参菌核病菌(Sclerotiniaschinseng)、人参炭疽病菌(Colletotrichum panacicola)、人参锈腐病菌(Ilyonectriarobusta)和人参根腐病菌(Fusarium oxysporum)。

本发明提供了一种拟康宁木霉在人参促生中的应用。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述人参生长调节剂促生的应用是指：使用拟康宁木霉的分生孢子悬浮液对人参进行灌根处理。

本发明具有以下有益效果：

本发明筛选出一种拟康宁木霉，该拟康宁木霉不仅具有对人参致病菌的拮抗作用，而且还对人参根、茎、叶生长具有显著的促生作用。通过拟康宁木霉改良农田土栽参，极大程度上保护了土壤微生物种群结构，有效提升了有益土壤微生物种群的生物丰度。

在农田土栽参的过程中施用该菌剂，使得土壤更适合人参的栽培。种植人参种苗，保证了较高的存苗率。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为Tri112与人参致病菌对峙培养平板图；

图2为Tri112系统发育树；

图3为Tri112处理土壤细菌在门水平上系统分类图；

图4为Tri112处理土壤真菌在门水平上系统分类图；

图5为对照土壤和Tri112处理土壤人参生长情况；

图6为对照土壤和Tri112处理土壤西洋参生长情况。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。

发明人筛选分离出了一种拟康宁木霉，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2021年8月19日，保藏编号为CGMCC No.23210，菌株分类学名称为拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis，生物材料名称为Tri112。检测结果为存活。

其菌落培养特征为：在PDA培养基上培养3天，能蔓延至整个培养皿，白色的气生菌丝茂盛，菌落无明显的环纹出现，初为白色；培养后期，菌丝外延形成绿色的分生孢子。

在培养皿边缘随机产生分生孢子堆。分生孢子单生或簇生，椭圆形，壁光滑，直径大小(3.2～5.6)μm×(2.5～3.4)μm；分生孢子梗直立，垂直对立分支，在分生孢子梗顶端直接产生瓶梗。瓶梗直或弯曲，圆烧瓶形或中部膨大明显。根据菌株Tri112的培养特性和形态特征，初步确定该菌株为拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)。

发明人设计引物对分离出的菌株的rDNA-ITS序列进行了测序分析。经测序可知，该菌株的rDNA-ITS序列长度为580bp，序列如下SEQ ID NO.1所示。

GCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACCATACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGGACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGATCGGGAACCCCTAAGACGGGATCCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCA。

发明人进一步应用BLAST和DNAMAN等软件进行序列分析，将分离出的菌株的ITS序列通过BLAST比对，能在GenBank中找到同源性非常高的相近菌株序列。其中与Tri112菌株相似性最高的是Trichoderma koningiopsis，同源性达到100％。进一步地根据MEGA6.06软件以UPGMA法构建系统发育树发现，Tri112与T.koningiopsis同属一个遗传分枝，亲缘关系十分接近。结合形态学分类和分子生物学鉴定结果，可以确认本发明的菌株Tri112为拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)。

本发明还提供了一种拟康宁木霉在土壤改良中的应用。土壤改良是以拟康宁木霉分生孢子悬浮液作为土壤改良剂。

本发明还提供了一种拟康宁木霉在制备土壤改良剂中的应用，该应用是针对人参栽培的土壤改良。研究表明，本发明提供的拟康宁木霉可以调节并改良土壤中的营养元素(例如磷、钾、铁、硼、锰等元素)。使得土壤更适合人参的栽培。

在本发明一种可选的实施方式中，土壤改良剂包括拟康宁木霉分生孢子悬浮液。

拟康宁木霉分生孢子悬浮液通过如下方法制得：将拟康宁木霉Tri112培养液经多层无菌纱布过滤，滤液经血球计数板计数，将孢子悬浮液分散至羧甲基纤维素钠(CMC)溶液中，获得孢子悬浮液。

上述土壤改良剂可以是通过喷施或播撒等方式实现土壤的改良。

上述土壤改良剂可以是液态或粉剂。

本发明还提供了一种拟康宁木霉在制备浸根液、浸根粉或菌剂中的应用。

上述浸种剂中可以根据需要选择添加防腐剂、抗氧化剂、增色剂等添加剂。

可选的，上述的菌剂为拟康宁木霉的发酵液或拟康宁木霉的冻干粉。

上述的菌剂的剂型包括不限于液体制剂、固态菌剂、膏状菌剂、悬浮剂、乳液、喷雾剂或半固态菌剂。

在一种可选的方式中，上述拟康宁木霉可以是真空冷冻干燥制备的菌粉或者喷雾干燥制备的菌粉。在使用时，将菌粉进行溶解。

在一种可选的方式中，上述发酵液为拟康宁木霉在真菌培养基上培养的发酵液。

通过浸根液、浸根粉或菌剂施用后，人参可以表现为：人参的病害减少，人参须根发达，存苗率以及干重和鲜重有了显著的提升。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述浸根液、浸根粉或菌剂以拟康宁木霉为主要有效成分；

在本发明一种可选的实施方式中，浸根液、浸根粉或菌剂以拟康宁木霉分生孢子悬浮液为主要有效成分。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述浸根液、浸根粉或菌剂中含拟康宁木霉的量为1×10⁸cfu·ml^-1～3×10⁸cfu·ml^-1。可选的，上述拟康宁木霉的量是指拟康宁木霉的分生孢子悬浮液的孢子含量。

本发明还提供了一种拟康宁木霉在人参致病菌防治中的应用，人参致病菌选自如下至少一种：人参黑斑病菌(Alternaria panax)、人参菌核病菌(Sclerotiniaschinseng)、人参炭疽病菌(Colletotrichum panacicola)、人参锈腐病菌(Ilyonectriarobusta)和人参根腐病菌(Fusarium oxysporum)。

需要说明的是，上述防治是指，经过拟康宁木霉的施用后，人参的病原菌表现出如下至少一种的现象均在本发明的保护范围之内：病原菌的数量减少、病原菌的种类变少、或者病原菌的生长受阻或不再生长等。

本发明提供了一种拟康宁木霉在人参促生中的应用。

在本发明应用较佳的实施方式中，人参生长调节剂促生的应用是指：使用拟康宁木霉的分生孢子悬浮液对人参进行灌根处理。

本发明提供的拟康宁木霉还可以用于制备肥料，例如作为叶肥或根肥。上述的叶肥或根肥可以是水溶性肥，也可以其他溶解性质的肥料。

上述的肥料可以作为基肥使用，也可以与其他的有机肥、无机肥或有机-无机肥复混施用。

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)购自青岛海博生物技术有限公司，产品编号：HB0233。

发酵的培养液为马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)。PDB培养基中包括：马铃薯200g/L，葡萄糖10g/L，蒸馏水1000ml。

培养的温度为25℃，时间为96h，条件为180r/min。

发酵后经过滤获得孢子。

实施例1

本实施例提供了拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)Tri112菌株的筛选、分离和鉴定方法。

本发明提供的拟康宁木霉自吉林省吉林市左家镇人参种植基地的人参根际土壤中分离得到。

根际土采用稀释涂布平板法，取10g人参根际土加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中于150r/min摇床上振荡30min，从锥形瓶中吸取1mL混合均匀的土壤悬浊液，用无菌水进行梯度稀释，分别从10^-3、10^-4、10^-5三个梯度中吸取200μL加到PDA培养基平板上涂布均匀，将平板放于25℃培养3d，挑取平板上的木霉单菌落菌丝转接到PDA培养基上进行纯化。纯化菌株于4℃保存。

在PDA培养基上培养3天，能蔓延至整个培养皿，白色的气生菌丝茂盛，菌落无明显的环纹出现，初为白色；培养后期，菌丝外延形成绿色的分生孢子。

在培养皿边缘随机产生分生孢子堆。分生孢子单生或簇生，椭圆形，壁光滑，直径大小(3.2～5.6)μm×(2.5～3.4)μm；分生孢子梗直立，垂直对立分支，在分生孢子梗顶端直接产生瓶梗。瓶梗直或弯曲，圆烧瓶形或中部膨大明显。根据菌株Tri112的培养特性和形态特征，初步确定该菌株为拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)。

发明人设计引物对分离出的菌株的rDNA-ITS序列进行了测序分析。经测序可知，该菌株的rDNA-ITS序列长度为580bp，序列如下SEQ ID NO.1所示。

GCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACCATACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGGACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGATCGGGAACCCCTAAGACGGGATCCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCA。

发明人进一步应用BLAST和DNAMAN等软件进行序列分析，将分离出的菌株的ITS序列通过BLAST比对，能在GenBank中找到同源性非常高的相近菌株序列。其中与Tri112菌株相似性最高的是Trichoderma koningiopsis，同源性达到100％。进一步地根据MEGA6.06软件以UPGMA法构建系统发育树(参照图2所示)发现，Tri112与T.koningiopsis同属一个遗传分枝，亲缘关系十分接近。结合形态学分类和分子生物学鉴定结果，可以确认本发明的菌株Tri112为拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)。

实施例2

本实施例进行拟康宁木霉对人参致病菌的拮抗作用实验。

选择5种人参主要病害的致病菌：人参黑斑病菌(Alternaria panax)、人参菌核病菌(Sclerotinia schinseng)、人参炭疽病菌(Colletotrichum panacicola)、人参锈腐病菌(Ilyonectria robusta)、人参根腐病菌(Fusarium oxysporum)，以上五种人参致病菌株均由中国农业科学院特产研究所药用植物栽培团队提供。将保存的木霉菌Tri112和病原菌菌株分别转接到PDA平板上，于25℃黑暗条件下恒温培养7d后，用5mm打孔器在菌落边缘打取菌饼。采用两点对峙平板培养法，分别放置于PDA平板的对称两边，菌饼间距3cm，只接种病原菌为对照(CK)，每处理重复3次，接种后置于25℃恒温培养箱培养7d，观察测量菌落的直径，抑制率计算公式如下：抑菌率(％)＝(对照菌落半径－处理菌落半径)/对照菌落半径×100。

对峙培养结果参照图1所示。对照组和对峙组均为培养7天的试验图片，对照的病原菌生长较快，而对峙培养中的木霉菌丝迅速占领生长空间，对峙培养3d即可观察到对病原菌的拮抗作用，病原菌的生长明显受限；7d后木霉菌将病原菌包围，占据整个培养皿，使病原菌几乎不再生长。在平板对峙培养过程中，菌株Tri112对人参黑斑病菌(Alternariapanax)、人参菌核病菌(Sclerotinia schinseng)、人参炭疽病菌(Colletotrichumpanacicola)、人参锈腐病菌(Ilyonectria robusta)、人参根腐病菌(Fusariumoxysporum)的抑菌率分别为87.81％、93.24％、94.51％、92.69％、90％。

本实施例证明，拟康宁木霉Tri112菌株对人参几种主要病害的致病菌具有明显地抑制生长作用，说明拟康宁木霉对人参是安全的，对病害有一定防治作用。

实施例3

本实施例进行拟康宁木霉对农田土栽培人参的促生长作用实验。

采用盆栽试验法测定拟康宁木霉Tri112菌株对人参的促生作用，菌株培养液的制备：将拟康宁木霉Tri112试管斜面种活化，取2个5mm菌饼接种于用250mL三角瓶装的100mL马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中，在170r/min，25℃下培养48h，获得种子液；将拟康宁木霉Tri112种子液以10％(体积比)接种于发酵培养液中培养，在170r/min，25℃下培养96h，获得培养液；将拟康宁木霉Tri112培养液经2层无菌纱布过滤，滤液经血球计数板计数，将孢子悬浮液分散至6g·L-1羧甲基纤维素钠(CMC)溶液中，获得孢子悬浮液，孢子含量为1～3×10⁸个/ml^-1；马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)的制备方法：土豆200g/L，葡萄糖10g/L，蒸馏水1000mL，pH为6.8～7.2。1000mL三角瓶中装量为300mL培养液，用双层封口膜封好三角瓶口，121℃湿热灭菌30min，冷却后备用。

将农田土(未栽参的普通玉米田土壤，使用前用20目网筛筛除秸秆石头等杂质)装入直径为20cm花盆，每盆装土2kg。选择大小一致且生长良好的一年生人参幼苗进行移栽，每盆6株，每处理4盆。将制备好的拟康宁木霉Tri112孢子悬浮液(含菌量约为1～3×10⁸cfu·ml^-1)，用无菌水稀释10倍液，人参幼苗先用Tri112孢子悬浮液蘸根处理，培土栽好后取30ml Tri112孢子悬浮液灌根。对照组给予新鲜的PDB液体培养基。

待人参苗长到90d后，分别将处理组和对照组的完整人参苗挖出，取各处理人参根系土壤，提取土壤样品总基因组，检测土壤微生物群落结构变化。观察并测量人参的各项生长指标。

Tri112处理组和对照组的土壤基因组经16S测序分别得到1750、1683个OTUs。其中处理组细菌涵盖了29门、80纲、171目、280科、447属，对照组细菌涵盖了29门、81纲、172目、278科、440属；经ITS1测序处理组真菌涵盖了9门、25纲、61目、110科、189属，对照组真菌涵盖了9门、22纲、54目、108科、190属。在门的水平上，处理组和对照组的人参土壤细菌优势菌群前两位相同(图3)，依次为变形菌门(Proteobacteria)(32.07％—40.37％)、酸杆菌门(Acidobacteria)(19.98％—26.41％)。但是细菌中的芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)、Patescibacteria在添加Tri112生物菌剂处理土壤中地位不同(图3)。细菌变形菌门(Proteobacteria)、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、放线菌门(Actinobacteria)是Tri112处理后的关键微生物，添加Tri112生物菌剂后其丰度均显著高于对照(P＜0.05)。

在门的水平上，处理组和对照组人参土壤真菌优势菌群均为子囊菌门(Ascomycota)，添加Tri112生物菌剂后的土壤中真菌担子菌门(Basidiomycota)丰度为第二位，被孢霉菌门(Mortierellomycota)丰度分别为第三位，二者多样性丰度值均高于对照组(图4)。

因此，从微生物多样性结果分析：变形菌门、芽单胞菌门、放线菌门、担子菌门、被孢霉菌门是Tri112改良农田栽参的关键微生物。

将整株人参洗去根部泥土，测量其整株鲜重和根鲜重指标。然后105℃烘干至恒温，测整株干重和根干重。

测量后的结果统计如下表所示。

处理	地上鲜重(g)	根鲜重(g)	地上干重(g)	根干重(g)	存苗率
						Tri112	1.12±0.05a	1.72±0.04a	0.22±0.01a	0.47±0.02a	77.8％
CK	0.9±0.05b	1.56±0.12b	0.15±0.02b	0.36±0.05b	50％

上述结果显示，人参一个生育周期结束后，从人参的整体长势来看，须根发达，存苗率为77.8％，对照组仅为50％，表面采用拟康宁木霉Tri112孢子悬浮液灌根处理可以有效提升存苗率。

Tri112处理的人参鲜重比CK的鲜重增加了15.45％，干重比CK增加了35.30％。说明施用Tri112有利于人参干物质积累，对人参有明显的促生作用。

实施例4

本实施例进行拟康宁木霉对人参枯叶病的防治作用实验。

人参枯叶病主要是人参种植在农田土中，生长期展叶开花后，叶片出现从叶尖或边缘干枯、卷曲，逐渐向主叶脉和叶柄处蔓延，发生趋势从老叶向新叶扩展，最后整株地上部分枯死。严重影响植物光合作用，导致人参产量和品质急剧下降。

实验方法同实施例3。

结果表明(图5)：对照组出现农田土栽参的典型症状，人参叶尖及边缘干枯——人参枯叶病，添加Tri112的处理组人参枯叶病的症状几乎未出现或有所缓解，说明Tri112能有效缓解人参枯叶病的发生。

实施例5

本实施例进行拟康宁木霉对西洋参枯叶病的防治作用实验。

西洋参枯叶病同人参枯叶病发生情况相似，由于种植在农田土中，生长期展叶开花后，叶片出现从叶尖或边缘干枯、卷曲，逐渐向主叶脉和叶柄处蔓延，发生趋势从老叶向新叶扩展，最后整株地上部分枯死。严重影响植物光合作用，导致西洋参产量下降。

选择农田土栽培西洋参的地块作为试验基地，处理小区面积设为1.5m×1.5m，每个处理3次重复；在5月下旬施用拟康宁木霉Tri112孢子悬浮液灌根处理，孢子悬浮液(含菌量约为1～3×10⁸cfu·ml^-1)稀释10倍后，间隔10～15d施用一次，共施3次。观察西洋参生长情况。

调查结果显示(图6)：未做任何处理的对照组叶尖及边缘干枯——西洋参枯叶病，Tri112处理组枯叶病发病程度明显低于对照组。说明Tri112可以有效缓解西洋参枯叶病的发生。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国农业科学院特产研究所

<120> 一种拟康宁木霉、浸根液及应用

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 577

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

gcggagggat cattaccgag tttacaactc ccaaacccaa tgtgaaccat accaaactgt 60

tgcctcggcg gggtcacgcc ccgggtgcgt cgcagccccg gaaccaggcg cccgccggag 120

ggaccaacca aactctttct gtagtcccct cgcggacgtt atttcttaca gctctgagca 180

aaaattcaaa atgaatcaaa actttcaaca acggatctct tggttctggc atcgatgaag 240

aacgcagcga aatgcgataa gtaatgtgaa ttgcagaatt cagtgaatca tcgaatcttt 300

gaacgcacat tgcgcccgcc agtattctgg cgggcatgcc tgtccgagcg tcatttcaac 360

cctcgaaccc ctccgggggg tcggcgttgg ggatcgggaa cccctaagac gggatcccgg 420

ccccgaaata cagtggcggt ctcgccgcag cctctcctgc gcagtagttt gcacaactcg 480

caccgggagc gcggcgcgtc cacgtccgta aaacacccaa cttctgaaat gttgacctcg 540

gatcaggtag gaatacccgc tgaacttaag catatca 577

Claims (11)

1.一种拟康宁木霉（Trichoderma koningiopsis），其特征在于，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2021年8月19日，保藏编号为CGMCC No.23210，菌株分类学名称为拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis。

2.根据权利要求1所述的拟康宁木霉，其特征在于，所述拟康宁木霉的菌落培养特征为：在PDA培养基上培养3天，能蔓延至整个培养皿，白色的气生菌丝茂盛；培养后期，菌丝外延形成绿色的分生孢子。

3.一种如权利要求1或2所述的拟康宁木霉在土壤改良中的应用，其特征在于，所述应用是针对人参栽培的土壤改良。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述土壤改良是以拟康宁木霉分生孢子悬浮液作为土壤改良剂。

5.一种如权利要求1或2所述的拟康宁木霉在制备浸根液、浸根粉或菌剂中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述浸根液、浸根粉或菌剂以所述拟康宁木霉为主要有效成分。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述浸根液、浸根粉或菌剂以拟康宁木霉分生孢子悬浮液为主要有效成分。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述浸根液、浸根粉或菌剂中含所述拟康宁木霉的量为1×10⁸cfu·ml^-1~3×10⁸cfu·ml^-1。

9.一种如权利要求1或2所述的拟康宁木霉在人参致病菌防治中的应用，其特征在于，所述人参致病菌为如下至少一种：人参黑斑病菌(Alternaria panax)、人参菌核病菌(Sclerotinia schinseng)、人参炭疽病菌(Colletotrichum panacicola)、人参锈腐病菌(Ilyonectria robusta)和人参根腐病菌(Fusarium oxysporum)。

10.一种如权利要求1或2所述的拟康宁木霉在人参促生中的应用。

11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述人参促生的应用是指：使用拟康宁木霉的分生孢子悬浮液对人参进行灌根处理。

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