CN112961782B - 高粱附球菌、含有该菌的菌剂和除草剂及它们的应用 - Google Patents
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
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Abstract
本发明涉及杂草生物防治领域，公开了一种高粱附球菌、含有该菌的菌剂和除草剂及它们的应用。具体地，本发明提供了一株高粱附球菌，其中，所述高粱附球菌(Epicoccum sorghinum)的保藏编号为CGMCC No.21039。本发明提供的高粱附球菌可用于农业生产上防治阔叶杂草。本发明的高粱附球菌能够侵染多种阔叶杂草，且致病力较强，能够达到显著控制小飞蓬等目标杂草的目的。该高粱附球菌对环境安全，杀草谱较广，有开发成生物除草剂的巨大潜力。
Description
技术领域
本发明涉及杂草生物防治领域，具体地，涉及一株高粱附球菌、含有该菌的菌剂和除草剂及它们的应用。
背景技术
小飞蓬(horseweed)是菊科白酒草属越年生或一年生草本植物，拉丁学名为Conyza canadensis，是我国农田中存在的主要恶杂草之一。小飞蓬原产于北美洲，现在全世界范围内广泛分布，是我国分布最广的外来入侵杂草之一。小飞蓬植株高大，繁殖能力强，竞争力强，主要为害秋熟作物如甘薯、大豆、棉花，以及果园、茶园等，又是棉铃虫和棉椿象的中间寄主，严重影响作物产量和质量。
化学防治是目前防治农田小飞蓬的主要手段，然而随着化学除草剂的长期使用，也带来了诸如环境污染、农产品农药残留、杂草抗药性上升等负面影响。相对于化学除草剂，微生物除草剂具有环境友好、对作物安全性高、杂草不容易产生抗性等特点，因此研究和开发微生物除草剂具有广阔的前景。然而，目前罕有小飞蓬生物防治的研究和报道，因此，提供一种能够用于小飞蓬等田间杂草防治的微生物，具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题，提供了一株高粱附球菌、含有该菌的菌剂和除草剂及它们的应用，为小飞蓬等田间杂草的生物防治及新型生物除草剂的开发提供依据。
为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种高粱附球菌，所述高粱附球菌(Epicoccum sorghinum)的保藏编号为CGMCC No.21039。
本发明第二方面提供一种菌剂，该菌剂含有上述的高粱附球菌。
优选地，所述菌剂含有所述高粱附球菌的活菌体、死菌体和发酵产物中的至少一种，优选为活菌体和/或发酵产物。
优选地，所述菌剂为液态菌剂和/或固态菌剂，优选为液态菌剂。
本发明第三方面提供一种除草剂，所述除草剂包括上述的高粱附球菌和/或上述的菌剂。
优选地，所述除草剂中所述高粱附球菌的分生孢子数不少于106cfu/mL。
优选地，所述除草剂的制备方法包括：将所述高粱附球菌经发酵培养得到发酵液，将所述发酵液经吸附除去菌丝体、稀释得到分生孢子液。
优选地，所述发酵培养的条件至少满足：接种量为1×102-3×102cfu/mL、温度为20-35℃、转速为120-200r/min、时间为8-12天。
本发明第四方面提供上述的高粱附球菌、上述的菌剂、上述的除草剂在防治杂草中的应用。
优选地，所述杂草为阔叶杂草，优选为小飞蓬、一年蓬、钻形紫菀、空心莲子草、红花酢酱草和铁苋菜中的至少一种。
通过上述技术方案，本发明的有益效果为：
本发明提供的高粱附球菌能够侵染多种阔叶杂草，且致病力较强，能够起到有效防治阔叶杂草的目的，该高粱附球菌杀草谱较广，具有进一步开发成生物除草剂的潜力；本发明提供的高粱附球菌分离自田间自然发病的小飞蓬叶片，因此该高粱附球菌及含有该菌的菌剂和除草剂释放到自然界后没有生态或环境方面的隐患，是一种绿色、安全、环境友好型的生物防治媒介。
本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
生物保藏
本发明提供的菌株为高粱附球菌(Epicoccum sorghinum)，并于2020年12月23日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.21039。
附图说明
图1是实施例1中高粱附球菌(FP07菌株)在PDA平板上的菌落形态；
图2是实施例1中高粱附球菌(FP07菌株)的分生孢子形态；
图3是实施例2中制得的除草剂对小飞蓬叶片的浸染效果图；
图4是实施例2中制得的除草剂对小飞蓬叶片的防治效果图。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
第一方面，本发明提供了一株高粱附球菌，其中，所述高粱附球菌(Epicoccumsorghinum)的保藏编号为CGMCC No.21039。
本发明提供的高粱附球菌从湖南农业大学耘园基地自然发病的小飞蓬叶片样本中分离得到。所述高粱附球菌的分离可以采用本领域常规的用于新菌株分离的方法，例如可以采用组织分离法。
组织分离法具体可以包括：用无菌水将田间自然发病的小飞蓬叶片漂洗后，沿病健交界处剪成小块，将组织小块依次置于体积分数为70％的乙醇-水溶液和质量分数为1％的次氯酸钠溶液中分别表面消毒30和60s，将表面消毒后的小飞蓬叶片组织用无菌蒸馏水漂洗3-4次以彻底清除组织表面残留的消毒剂；再将小飞蓬叶片组织块置于灭菌的培养皿内，于超净工作台内吹干，将吹干后的小飞蓬叶片组织置于灭菌的PDA平板上，在25-35℃下恒温培养，待真菌长出菌落后用灭菌的接种针挑取菌丝至新的PDA平板内，产孢后挑取单孢子进行纯化得到纯培养菌株；将纯培养菌株的分生孢子悬浮液回接至小飞蓬幼苗，接种后2-5d出现明显的水浸状病斑，切取发病组织重新进行分离培养，所得分离物与原接种病原物一致，完成了柯赫氏法则验证，证明分离物是小飞蓬致病菌，得到分离菌株。
本发明的发明人将分离菌株进行了形态学鉴定和分子生物学鉴定，结果显示，该菌株为高粱附球菌(Epicoccum sorghinum)，并于2020年12月23日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.21039。
本发明提供的高粱附球菌经过发酵培养能够产生大量的高粱附球菌的活菌体和/或发酵产物。本发明对发酵培养方法没有特别的限制，只要通过该发酵培养方法可以使所述高粱附球菌大量增殖即可。例如，可以将高粱附球菌转入平板培养基上进行活化，随后挑取菌落转入液体培养基中使得接种量为1×102-3×102cfu/mL，在温度为20-35℃、转速为120-200r/min的条件下，进行振荡培养8-12天后得到发酵液。其中，所述培养基可以为本领域常规使用的培养基，例如，平板培养基可以为PDA培养基，液体培养基可以为PDB培养基。
第二方面，本发明提供了一种菌剂，其中，该菌剂含有上述的高粱附球菌。
在本发明中，对所述菌剂中高粱附球菌的浓度没有特别的限制，可以根据具体的情况进行具体的选择。
根据本发明，所述菌剂优选含有所述高粱附球菌的活菌体、死菌体和发酵产物中的至少一种，更优选为活菌体和/或发酵产物。在本发明中，术语“发酵产物”指的是高粱附球菌在发酵或培养过程中产生的代谢产物(包括胞内代谢产物和/或胞外代谢产物)。本发明所提供的高粱附球菌菌体包括分生孢子和菌丝体，所述菌剂可以含有所述高粱附球菌的分生孢子和/或菌丝体，优选为含有所述高粱附球菌的分生孢子。
根据本发明，对所述菌剂的剂型没有特别的限制，可以根据预定用途的不同，将其制备成不同的剂型，并添加相应的辅料(赋形剂)等成分，例如所述菌剂可以为液态菌剂(例如可以为分生孢子液或其稀释液)和/或固态菌剂，优选为液态菌剂。其中，在何种剂型的菌剂中添加何种辅料为本领域技术人员所熟知，在此不再详细说明。
另外，本发明的发明人在研究过程中发现，虽然本发明提供的高粱附球菌是从自然发病的小飞蓬叶片上分离得到的，但其对田间常见的其他阔叶杂草(如一年蓬、钻形紫菀、空心莲子草、红花酢酱草和铁苋菜等)均有一定的防治作用。
第三方面，本发明提供了一种除草剂，其中，所述除草剂包括上述的高粱附球菌和/或上述的菌剂。
根据本发明，除草剂中含有所述高粱附球菌的活菌体、死菌体和发酵产物中的至少一种，所述除草剂中还可以包括其他除草有效成分，所述其他除草有效成分包括化学物质和/或生物活体。优选情况下，所述除草剂中所述高粱附球菌的分生孢子数不少于106cfu/mL。进一步优选地，所述除草剂中所述高粱附球菌的分生孢子数为106-108cfu/mL。
根据本发明，所述除草剂的制备方法包括：将所述高粱附球菌经发酵培养得到发酵液，将所述发酵液经吸附除去菌丝体、稀释得到含有所述高粱附球菌的分生孢子的分生孢子液。示例性地，所述发酵液采用纱布过滤的方式吸附除去菌丝体，再利用无菌水稀释成分生孢子数不少于106cfu/mL的分生孢子液。
第四方面，本发明还提供了上述的高粱附球菌、上述的菌剂、上述的除草剂在防治杂草中的应用，优选为在防治阔叶杂草中的应用。示例性地，所述阔叶杂草可以为小飞蓬、一年蓬、钻形紫菀、空心莲子草、红花酢酱草和铁苋菜中的至少一种。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
以下实施例中，PDA培养基的组分为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂粉15g、1000mL蒸馏水、自然pH，121℃高压蒸汽灭菌30min；
PDB培养基的组分为：马铃薯200g、葡萄糖20g、1000mL蒸馏水、自然pH，121℃高压蒸汽灭菌30min；
以下实施例中，高粱附球菌对杂草的侵染率和鲜重防效通过下列计算公式得出：
侵染率(％)＝发病叶片数/处理总叶片数×100％，
鲜重防效(％)＝(对照平均鲜重-处理平均鲜重)/对照平均鲜重×100％；
健康的小飞蓬、一年蓬、钻形紫菀、空心莲子草、红花酢酱草、铁苋菜等阔叶杂草以及马唐等禾本科杂草的叶片采集自湖南农业大学耘园基地，其他原料和试剂均为市售品。
实施例1
(1)用无菌水将田间自然发病的小飞蓬叶片漂洗两次，沿病健交界处剪成小块，将组织小块先置于体积分数为70％的乙醇溶液中表面消毒30s、再置于质量分数为1％的次氯酸钠溶液中表面消毒60s；表面消毒后的小飞蓬叶片组织用无菌蒸馏水漂洗3-4次以彻底清除组织表面残留的消毒剂，随后将小飞蓬叶片组织块置于灭菌的培养皿内，于超净工作台内吹干；
(2)将步骤(1)中吹干后的小飞蓬叶片组织置于灭菌的PDA平板上，28℃恒温培养箱内培养，待真菌长出菌落后用灭菌的接种针挑取菌丝至新的PDA平板内，产孢后挑取单孢子进行纯化得到纯培养菌株；
(3)将步骤(2)得到的纯培养菌株分生孢子悬浮液回接至小飞蓬幼苗，接种后3d出现明显的水浸状病斑，切取发病组织重新进行分离培养，所得分离物与原接种病原物一致，完成了柯赫氏法则验证，证明分离物是小飞蓬致病菌，将其命名为FP07；
小飞蓬生防真菌FP07的形态学鉴定和分子生物学鉴定
形态学鉴定：将纯化好的FP07菌株接种至PDA平板，观察菌株在PDA平板上的菌落形态，如图1所示，待产孢后在电子显微镜下观察FP07菌株的分生孢子形态，如图2所示；FP07菌株在PDA平板上的菌落形态为白色，菌丝致密，能分泌红褐色色素，分生孢子无色，椭圆形，无隔，单生；
分子生物学鉴定：采用真菌基因组DNA提取试剂盒提取FP07菌株的DNA，利用通用引物ITS4/ITS5和Bt2a/Bt2b分别扩增FP07的ITS(internal transcribed spacerregions)和TUB(β-tubulin)基因序列并测序，其中，ITS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，TUB基因核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；将ITS和TUB基因序列提交到NCBI，GenBank号分别为MN096383和MN095294。将ITS和TUB基因序列在NCBI中进行BLAST，发现FP07菌株的ITS和TUB基因均与高粱附球菌(Epicoccum sorghinum)高度同源。
根据形态学鉴定和分子生物学鉴定结果，得出所述菌株为高粱附球菌(Epicoccumsorghinum)，并于2020年12月23日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.21039。
实施例2
将实施例1得到的FP07菌株转入新鲜的PDA平板上进行活化，然后挑取菌落转入液体PDB培养基中使得接种量为2×10cfu/mL，在温度为28℃、转速为160r/min的条件下发酵培养10天得到发酵液，将发酵液用四层纱布过滤去除菌丝体后，用无菌水稀释成分生孢子数为106cfu/mL的分生孢子液作为除草剂。
实施例3
将实施例1得到的FP07菌株转入新鲜的PDA平板上进行活化，然后挑取菌落转入液体PDB培养基中使得接种量为1×102cfu/mL，在温度为20℃、转速为120r/min的条件下发酵培养12天得到发酵液，将发酵液用四层纱布过滤去除菌丝体后，用无菌水稀释成分生孢子数为107cfu/mL的分生孢子液作为除草剂。
实施例4
将实施例1得到的FP07菌株转入新鲜的PDA平板上进行活化，然后挑取菌落转入液体PDB培养基中使得接种量为3×102cfu/mL，在温度为35℃、转速为200r/min的条件下发酵培养8天得到发酵液，将发酵液用四层纱布过滤去除菌丝体后，用无菌水稀释成分生孢子数为108cfu/mL的分生孢子液作为除草剂。
测试例1
采集健康的小飞蓬、一年蓬、钻形紫菀、空心莲子草、红花酢酱草、铁苋菜等阔叶杂草以及马唐等禾本科杂草的叶片，用打孔器将实施例2中活化后的FP07菌株平板打成直径为6mm的菌丝块，将菌丝块贴在上述7种杂草的叶片上，以不加入菌丝块的小飞蓬叶片作为对照，均置于光照培养箱中保湿培养，7天后观察FP07菌株对各种杂草叶片的侵染效果，计算侵染率，结果见表1，其中，FP07菌株对小飞蓬叶片的浸染效果和对照如图3所示。
测试例2
在塑料盆钵中种植小飞蓬、一年蓬、钻形紫菀、空心莲子草、红花酢酱草、铁苋菜等阔叶杂草以及马唐等禾本科杂草，按照每亩用药液量为30L实施例2制得的除草剂，对上述7种杂草分别进行茎叶喷雾处理，以不喷雾处理的小飞蓬作为对照，14天后统计除草剂对不同杂草的鲜重防效，计算鲜重防效，结果见表1。其中，FP07菌株对小飞蓬叶片的防治效果和对照如图4所示。
表1
| 杂草类别 | 侵染率/％ | 鲜重防效/％ |
| 小飞蓬 | 100.00±0.00 | 90.28±2.13 |
| 一年蓬 | 95.57±1.96 | 82.47±1.68 |
| 钻形紫菀 | 94.43±1.96 | 76.38±2.34 |
| 空心莲子草 | 100.00±0.00 | 62.84±1.56 |
| 红花酢酱草 | 94.43±1.96 | 84.32±2.43 |
| 铁苋菜 | 91.1±1.91 | 77.56±1.74 |
| 马唐 | 5.56±1.93 | 12.24±0.56 |
表1的实验结果表明，本发明分离得到的FP07菌株(高粱附球菌)对多种阔叶杂草具有较强的侵染能力和防治效果，对禾本科杂草基本没有侵染效果。其中，对小飞蓬、一年蓬、钻形紫菀、空心莲子草、红花酢酱草、铁苋菜的侵染率均达到90％以上，对小飞蓬、一年蓬、钻形紫菀、红花酢酱草、铁苋菜的鲜重防效均达到75％以上，其中，对小飞蓬的鲜重防效最好，达到90.28％。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 湖南省烟草公司长沙市公司湖南农业大学中国烟草中南农业试验站湖南省烟草公司衡阳市公司湖南省烟草公司湘西自治州公司湖南省烟草公司郴州市公司湖南省烟草公司永州市公司
<120> 高粱附球菌、含有该菌的菌剂和除草剂及它们的应用
<130> 2021.1.18
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 508
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 1
tgcggaagga tcattaccta gagttgtagg ctttgcctgc tatctcttac ccatgtcttt 60
tgagtacctt acgtttcctc ggtgggttcg cccaccgatt ggacaaattt aaaccctttg 120
cagttgaaat cagcgtctga aaaaacttaa tagttacaac tttcaacaac ggatctcttg 180
gttctggcat cgatgaagaa cgcagcgaaa tgcgataagt agtgtgaatt gcagaattca 240
gtgaatcatc gaatctttga acgcacattg cgccccttgg tattccatgg ggcatgcctg 300
ttcgagcgtc atttgtacct tcaagctctg cttggtgttg ggtgtttgtc tcctgtagac 360
tcgccttaaa acaattggca gccggcgtat tgatttcgga gcgcagtaca tctcgcgctt 420
tgcactcata acgacgacat ccaaaagtac atttttacac tcttgacctc ggatcaggta 480
gggatacccg ctgaacttaa gcatatca 508
<210> 2
<211> 515
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 2
gtagggtcgc gatatggcgc gcctctcctg agcgtcaaca aaaccccgcg ttctcctgga 60
gccagcacaa cattggatga aacaccagct aacgtctgct ttgcgcgcaa caggttcacc 120
tccagaccgg tcagtgcgta agtacaccac tgctaccttc tctcatggac tgcagctcac 180
aatggatagg gtaaccaaat cggtgccgcc ttctggcaga ccatctccgg cgagcatggc 240
ctcgacggct ccggtgtcta caacggcacc tcggacctcc agctcgagcg catgaacgtc 300
tacttcaacg aggtactaga aatgacactc ttcccataga cggactgcga gtgctgacct 360
tccacaggcc tctggcaaca agttcgttcc ccgtgccgtc ctcgtcgatc tggagcccgg 420
cacaatggac gctgtccgcg ctggtccctt cggtcagctc ttccgtcccg acaacttcgt 480
cttcggccag tctggtgctg gtaacaactg ggcaa 515
Claims (3)
1.含有高粱附球菌（Epicoccum sorghinum）的除草剂在防治杂草中的应用，其特征在于，所述高粱附球菌的保藏编号为CGMCC No.21039，所述杂草为钻形紫菀和/或红花酢酱草；所述除草剂中所述高粱附球菌的分生孢子数不少于106cfu/mL。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述除草剂的制备方法包括：将所述高粱附球菌经发酵培养得到发酵液，将所述发酵液经吸附除去菌丝体、稀释得到分生孢子液。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述发酵培养的条件为：接种量为1×102-3×102cfu/mL、温度为20-35℃、转速为120-200r/min和时间为8-12天。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2953697A1 (en) * | 2014-06-26 | 2015-12-30 | Geoffrey Von Maltzahn | Endophytes, associated compositions, and methods of use thereof |
| CN104770372A (zh) * | 2015-03-07 | 2015-07-15 | 安徽农业大学 | 细交链孢菌酮酸在制备微生物源杀菌剂中的应用 |
| CN106497800A (zh) * | 2016-12-07 | 2017-03-15 | 广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所 | 从红花醡浆草上分离高粱茎点霉的方法及该霉的应用 |
| KR102010471B1 (ko) * | 2018-09-18 | 2019-08-13 | 한국화학연구원 | 스트렙토마이세스 드로즈도윅치이 kra16-334 균주 및 이의 용도 |
Non-Patent Citations (3)
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|---|
| Differential sensitivity to the potential bioherbicide tenuazonic acid probed by the JIP-test based on fast chlorophyll fluorescence kinetics;Shiguo Chen et al.;Environmental and Experimental Botany;第112卷;第1-15页 * |
| Recent advances in tenuazonic acid as a potential herbicide;Shiguo Chen, and Sheng Qiang;Pesticide Biochemistry and Physiology;第143卷;第252-257页 * |
| Shiguo Chen, and Sheng Qiang.Recent advances in tenuazonic acid as a potential herbicide.Pesticide Biochemistry and Physiology.2017,第143卷第252-257页. * |
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