BR0215777B1 - Composition, method for preparing the same, pharmaceutical composition for preventing and treating cardioischemia, cerebrosis, cerebral arterial oclusion and for improving micro-circulation of the brain, and use of compound - Google Patents

Abstract

"composto, método para preparar o mesmo, composição farmacêutica para prevenir e tratar cardioisquemia, cerebroisquemia, oclusão arterial cerebral e para melhorar microcirculação do cérebro, e uso do composto". a invenção refere-se a novos 2-(<244>-hidroxipentil) benzoatos sintéticos, à sua preparação e as composições farmacêuticas contendo estes sais como ingredientes ativos. a invenção também se refere ao uso dos compostos para prevenir e tratar cardioisquemia, cerebroisquemia e oclusão arterial cardíaca ou cerebral (obstrução) e semelhantes.

Description

“COMPOSTO, MÉTODO PARA PREPARAR O MESMO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA PREVENIR E TRATAR CARDIOISQUEMIA, CEREBROISQUEMIA, OCLUSÃO ARTERIAL CEREBRAL E PARA MELHORAR MICROCIRCULAÇÃO DO CÉREBRO, E USO DO COMPOSTO” CAMPO TÉCNICO

Esta invenção refere-se a novos (2-(a-hidroxipentil) benzoatos quimicamente sintéticos, às suas preparações e às composições farmacêuticas contendo os sais como ingredientes ativos. Esta invenção também se refere aos usos dos compostos na prevenção e tratamento das doenças como cardioisquemia, cerebroisquemia, oclusões arteriais do cérebro e coração, etc.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A apoplexia cerebral isquêmica aguda é uma doença comum com elevada incidência (12-18 casos por dezenas de milhares) e uma elevada taxa de mortalidade (6-12 casos por dezenas de milhares) que ameaçam seriamente a saúde humana, deixando, com ffeqüência, seqüelas nos sobreviventes e impondo uma carga pesada para a família do paciente e a sociedade. Assim, seria altamente valioso desenvolver uma droga para prevenir e tratar a doença. Muitos pesquisadores têm estudado o mecanismo da doença (apoplexia cerebral isquêmica aguda) desde os anos 80, e têm proposto teorias como metabolismo de energia, envenenamento excitatório, dano oxidativo, sobrecarga de cálcio e muitas outras teorias com o fim de desenvolver drogas altamente eficazes e de baixa toxicidade. No entanto, uma droga terapêutica ainda se encontra em desenvolvimento. As drogas, como antagonistas de cálcio, antagonistas de receptor excitatório, removedores de radicais livres, estão sendo clinicamente usadas, mas seus efeitos são duvidosos. As drogas trombolíticas, como t-PA, estão sendo usadas para o tratamento de apoplexia cerebral isquêmica aguda (no prazo de 6 horas de sua incidência), e são eficazes, mas o perigo de hemorragia não foi resolvido. Assim, ainda se focaliza o desenvolvimento em novas drogas para tratar a apoplexia cerebral isquêmica. A doença cardíaca coronariana também é uma doença severa que afeta a saúde humana. Devido à arterosclerose coronária e à formação de trombos, é induzido um trauma isquêmico do músculo cardíaco. Por esta razão, têm-se realizado um trabalho de ponta visando o desenvolvimento de novas drogas para prevenir e tratar aterosclerose coronária, prevenir a formação de trombos e dilatar a artéria coronária.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO O objeto da presente invenção consiste em prover novos (2-(a-hidroxipentil) benzoatos que podem inibir de modo significante a agregação de plaquetas e melhorar a microcirculação cerebral e ser eficazes para cardioisquemia, cerebroisquemia, oclusões arteriais do cérebro e coração.

Outro objeto da presente invenção consiste em prover um método sintético de produção de (2-(a-hidroxipentil) benzoatos.

Ainda outro objeto da presente invenção consiste em prover uma composição farmacêutica que pode prevenir e tratar cardioisquemia, cerebroisquemia, oclusões arteriais do cérebro e coração. O quarto objeto da presente invenção consiste em prover o uso dos compostos e composições farmacêuticas acima na prevenção e tratamento de cardioisquemia, cerebroisquemia, oclusões arteriais do cérebro e coração e a melhora da microcirculação cerebral. A presente invenção provê um composto da fórmula geral (I): em que n=l,2, M é um íon de metal monovalente, como K+, Na+, Li+; um íon 2+ 2^. 2+ de metal divalente, como Ca , Mg , Zn ; ou um grupo básico orgânico, como anilino, benzil amino, morfolinila ou dietilamino. O método de preparação da presente invenção é como a seguir: 1. Preparação de (2-(a-hidroxipentil) benzoatos de fórmula geral (I) em que M é um íon de metal monovalente: Dissolvendo uma 3-n-butil-isobenzofuran-l-(3H)-ona racêmica equivalente em um meio de hidrólise e solvente de reação de abertura de anel, adicionar uma quantidade equivalente ou levemente em excesso de uma base monovalente. Após isto, a reação de hidrólise e abertura de anel é conduzida sob temperatura de 10-100°C, durante 0,5-6 horas, para dar (2-(a-hidroxipentil) benzoatos de fórmula geral (1) em que M é um íon de metal monovalente. O solvente para a hidrólise e reação de abertura de anel pode ser qualquer um dentre metanol, etanol, acetona, isopropanol, água ou mistura de H20-álcool (ou cetona). O solvente de cristalização pode ser qualquer um dentre metanol, etanol, propanol, isopropanol, acetona, acetato de acetila, clorofórmio, éter, diclorometano, benzeno, tolueno, éter de petróleo, ou uma mistura de dois ou três dos solventes acima com diferentes proporções; base monovalente pode ser uma base inorgânica, como uma base inorgânica quimicamente pura, por exemplo hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, ou hidróxido de lítio, etc.; ou uma base orgânica quimicamente pura, como metóxido de sódio (ou potássio), etóxido de sódio (ou potássio), etc. 2. Preparação de (2-(cc-hidroxipentil) benzoatos de fórmula geral (I), em que M é um íon de metal divalente: (2-(a-hidroxipentil) benzoato de fórmula geral (I), em que M é um íon de metal monovalente (por exemplo sódio ou potássio) é dissolvido em um solvente, então uma quantidade equivalente ou em leve excesso de sal de metal divalente quimicamente puro é adicionada e uma reação de troca de íons é conduzida sob a temperatura de 10-100°C durante 0,5-10 horas para dar os (2-(a-hidroxipentil) benzoatos de fórmula geral (I), em que M é um íon de metal divalente. O meio de solvente de reação é metanol, etanol, acetona, isopropanol, água ou uma mistura de água-álcool (ou cetona); sal de metal divalente pode ser cloreto de magnésio, cloreto de cálcio ou cloreto de zinco, o solvente de cristalização pode ser metanol, etanol, isopropanol, acetato de acetila, clorofórmio, éter, diclorometano, ou uma mistura de dois ou três dos solventes acima em diferentes proporções. 3. Preparação de (2-(a-hidroxipentil) benzoatos de fórmula geral (I) em que M é uma base orgânica: (1) (2-(a-hidroxipentil) benzoato de fórmula geral (I) em que M é um íon de metal monovalente (por exemplo sódio ou potássio) é dissolvido em um solvente, então um ácido inorgânico é adicionado à solução para ajustar o valor de pH a 6,0-2,0 na temperatura de -20 - 20°C, preferivelmente -20 - 0°C, para acidular o (2-(a-hidroxipentil) benzoato e obtém-se o ácido (2-(a-hidroxipentil) benzóico. (2) Após completar a reação, um solvente orgânico de extração é adicionado à solução e o ácido livre ácido (2-(a-hidroxipentil) benzóico é extraído com método de extração comum a uma temperatura de -20 - 0°C. Uma solução orgânica contendo ácido (2-(a-hidroxipentil) benzóico é obtida e a solução é mantida para uso sob uma temperatura de -20-10°C, preferivelmente -20~0°C. (3) A solução obtida na etapa acima, é adicionada uma solução que contém uma quantidade equivalente ou em leve excesso de base monovalente para o ácido (2-(a-hidroxipentil) benzóico, por exemplo uma solução de álcool de hidróxido de potássio, na temperatura de -10~0°C, para dar o (2-(a-hidroxilpentil) benzoato da presente invenção em que M é um íon de metal mono valente, como potássio. Após a reação ser conduzida de modo suficiente, com o mesmo método de purificação que o do método de preparação 1, prepara-se o composto da presente invenção, isto é, (2-(a-hidroxilpentil) benzoato, em que M é um íon de metal monovalente. (4) A solução obtida na etapa (2), é adicionada uma solução que contém uma quantidade equivalente ou em leve excesso de base divalente ou um sal de metal divalente para o ácido (2-(a-hidroxipentil) benzóico, por exemplo uma solução de álcool de hidróxido de cálcio, sob a temperatura de - 10 ~0°C, para dar o (2-(a-hidroxipentil) benzoato da presente invenção em que M é um íon de metal divalente, como cálcio. Após a reação ser conduzida de modo suficiente, com o mesmo método de purificação que o método de preparação 2, prepara-se o composto da presente invenção, isto é, (2-(a-hidroxilpentil) benzoato, em que M é um íon de metal divalente. (5) A solução obtida na etapa (2), é adicionada uma solução que contém uma quantidade equivalente ou em leve excesso de base orgânica ao ácido (2-(a-hidroxipentil) benzóico, por exemplo anilina quimicamente pura, sob uma temperatura de -10 ~ 0°C, para dar o (2-(a-hidroxipentil) benzoato da presente invenção, em que M é uma base orgânica, como anilina. Após a reação ser conduzida de modo suficiente, com o mesmo método de purificação que o método de preparação 2, é preparado o composto da presente invenção, isto é, (2-(a-hidroxilpentil) benzoato, em que M é um íon de metal divalente. O ácido usado na reação de acidulação pode ser qualquer um dentre um ácido clorídrico ou ácido sulfurico concentrado ou diluído; a temperatura deve ser controlada na faixa de -20~+20°C; o solvente orgânico para extrair o ácido (2-(a-hidroxipentil) benzóico pode ser qualquer um dentre éter, acetato de etila, clorofórmio, diclorometano, benzeno, tolueno, éter de petróleo, n-hexano, ou ciclohexano; a base monovalente é selecionada dentre hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, hidróxido de lítio, metóxido de sódio (ou potássio), ou etóxido de sódio (ou potássio); o sal de metal inorgânico divalente ou base inorgânica divalente é selecionada dentre MgCl2, MgC03, CaCl2, CaC03, ZnCl2, ZnC03, MgS04, Zn(OH)2, Mg(OH)2, ou Ca(OH)2; a base orgânica é selecionada dentre anilina, benzilamina, morfolina ou dietilamina; o solvente para dissolver o (2-(a-hidroxilpentil) benzoato, em que M é um sal de metal monovalente, pode ser qualquer um dentre H20, MeOH-H20, EtOH-H20, acetona-H20, isopropanol-H20.

Verificou-se que os presentes compostos mostram bons efeitos sobre a prevenção e a terapêutica para cardioisquemia e cerebroisquemia, além disso, os presentes compostos também têm efeitos farmacológicos de agregação anti-plaquetas, oclusão arterial de efeito terapêutico no cérebro e coração, e efeito de melhora da microcirculação cerebral, etc.

Os presentes compostos tem demonstrado, a partir de testes com animais, excelentes efeitos na proteção de dano isquêmico do coração, agregação anti-plaquetas e alívio de danos provocados por oclusão cerebral-arterial, além disso, não foram verificados efeitos colaterais como excitação ou hemorragia. A composição farmacêutica da presente invenção compreende uma quantidade eficaz para tratamento do composto da presente invenção como um ingrediente ativo e um veículo farmaceuticamente aceitável.

Os compostos e composições farmacêuticas da presente invenção podem ser usados para a preparação de drogas que podem prevenir e tratar cardioisquemia e cerebroisquemia, oclusão arterial do coração e cérebro, melhora de micro-circulações cardíacas e cerebrais. O acima mencionado “veículo farmaceuticamente aceitável” significa os veículos de drogas comuns, como diluentes, excipientes, cargas como amido, sacarídeos; aglutinantes como derivados de celulose, alginatos, gelatina e polivinilpirrolidona; agentes umectantes como glicerol; agentes desintegrantes como agar, carbonato de cálcio e bicarbonato de sódio; aceleradores de ressorção, como compostos de amônio quaternário; agentes tensoativos como álcool cetílico; veículos adsortivos, como caulim e bentonita; lubrificantes como talco, estearato de cálcio ou magnésio; e polietileno glicóis; ainda mais, outros auxiliares como aromas e adoçantes também podem ser adicionados.

Os compostos desta invenção podem ser administrados oralmente e intravenosamente aos pacientes em necessidade deste tratamento em uma forma de formulação farmacêutica. Quando administrados oralmente, eles podem ser administrados na forma de dosagem como comprimidos, partículas ou cápsulas. E podem estar na forma de soluções ou suspensões oleosas/aquosas para injeção. As formas de dosagem preferidas são comprimidos, cápsulas e injeções.

As formas de dosagem das presentes composições farmacêuticas podem ser preparadas por procedimentos comuns na arte. Por exemplo, os compostos desta invenção podem ser misturados com um ou mais veículos e formados em uma forma de dosagem desejada. A presente composição farmacêutica preferivelmente contém ingredientes ativos em uma relação em peso de 3:2, mais preferivelmente 1:1. A dose do presente composto pode variar com base na via de administração, idade, peso, tipo de doença e severidade da doença do paciente sendo tratado. Uma dose diária típica pode ser de 50mg a 600mg por dia, preferivelmente 100-200 mg por dia, que pode ser administrada uma vez ou mais vezes.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Os seguintes exemplos são apenas ilustrativos e não destinados a limitar o escopo da presente invenção.

Exemplo 1 Preparação de 2-(a-hidroxipentil) benzoato de potássio racêmico (a seguir também referido como dl- 2-(a-hidroxipentil) benzoato de potássio, ou d/-PHPB) Dissolvendo c//-3-n-butil-isobenzofuran-l-(3H)-ona (8,5 g, 0,045 mol) em 20 ml metanol, foi adicionada uma solução de 10 ml de metanol de KOH (2,6 g, 0,046 mol). A solução de reação foi agitada sob refluxo durante uma hora. Após isto, a análise TLC (éter de petróleo- acetona = 10:1) e coloração de vapor de I2 demonstraram que o material de partida tinha desaparecido. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para dar um resíduo amarelo pegajoso, que foi deixado cristalizar no refrigerador após adição de 20 ml de clorofórmio. O produto bruto foi recristalizado em MeOH-CHCl3, e foi obtido um cristal granular branco (10,07 g, rendimento = 91,50%).

Exemplo 2 Preparação de d/-2-(a-hidroxipentil) benzoato de potássio Dissolvendo <7/-3-n-butil-isobenzofuran-1 -(3H)-ona (0,63 g, 3,3 mmol) em 10 ml metanol, foi adicionada uma solução de 10 ml de metanol de KOH (0,19 g, 3,4 mmol). A solução de reação foi agitada sob refluxo durante uma hora. Após isto, a análise TLC (éter de petróleo - acetona = 10:1) e coloração de vapor de I2 demonstraram que o material de partida tinha desaparecido. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para dar um resíduo amarelo pegajoso, que foi deixado cristalizar no refrigerador após adição de 5 ml de clorofórmio. O produto bruto foi recristalizado em MeOH-CHCl3, e foi obtido um cristal granular branco (0,6 g, rendimento = 73,56%).

Exemplo 3 Preparação de ri/-2-(a-hidroxipentil) benzoato de potássio Dissolvendo í//-2-(a-hidroxipentil) benzoato de sódio (1,96 g, 8,5 mmol) em 10 ml de H20, a solução foi resfriada a cerca de 0 °C em um banho de sal-gelo. O pH foi ajustado a 2,0-3,0 com IN HC1 e a solução foi extraída rapidamente com éter frio (3x20ml). O extrato de éter foi combinado e secado com Na2S04 anidro a uma temperatura baixa durante 3 h e então filtrado rapidamente sob a baixa temperatura. Foi adicionada ao filtrado uma solução de 20 ml de metanol de K2CO3 anidro (0,58 g, 4,2 mmol) e a mistura agitada rapidamente em temperatura ambiente. Um sólido branco apareceu na solução de éter e a solução foi mantida durante 24 horas, então um sólido branco foi filtrado e secado (1,4 g, rendimento = 66,67%).

Exemplo 4 Preparação de d/-2-(a-hidroxipentil) benzoato de potássio Dissolvendo d/-2-(a-hidroxipentil) benzoato de sódio (1,78 g, 7,7 mmol) em cerca de 10 ml de H20, a solução foi resfriada a cerca de 0 °C em um banho de sal-gelo. O pH foi ajustado a 2,0-3,0 com IN HC1 e a solução foi extraída rapidamente com éter frio (3x20 ml). A camada de éter foi combinada e secada com Na2S04 anidro em uma baixa temperatura durante 2 horas e então filtrada rapidamente sob a baixa temperatura. Foi gotejada, no filtrado, uma solução de 10 ml metanol de KOH (0,43 g, 7,7 mmol) e a mistura foi mantida em um banho de sal-gelo em temperatura ambiente. Após concentrar sob pressão reduzida, o resíduo foi recristalizado com MeOH-éter. Um sólido branco foi obtido (1,3 g, rendimento = 68,42%). O d/-2-(a-hidroxipentil) benzoato de potássio, como preparado de acordo com os procedimentos dos exemplos 1 a 4, é um cristal granular branco. p.f. 151-152 °C IV (KBr) 3198 cm'1 (u0h), 2933 cm*1 (υαο)» 1577,1561 (uCoo) Ή-RMN (300MHz, DMSO) δ (ppm) 7,65 (dd, > 6,3 Hz, 2,7 Hz, 1H), 7,17-7,05 (m, 3H), 4,32 (t, 1H), 3,40 (s,lH), 1,80-1,55 (m, 2H), 1,38-1,04 (m, 4H), 0,81 (t, 3H) Análise elementar Ci2Hi5C>3K(FW246,35) C(%) H(%) K(%) Calculado 58,51 6,14 15,87 Encontrado 58,24 6,01 15,84 MS (EI) m/z 133 (50, Exemplo 5 Preparação de c//-2-(a-hidroxipentil) benzoato de sódio Dissolvendo cf/-3-n-butil-isobenzofuran-l-(3H)-ona (4,6 g, 0,024 mol) em 20 ml de metanol, 10 ml de solução aquosa de NaOH (0,86 g, 0,022 mol) foram adicionados. A solução de reação foi agitada sob refluxo durante 2 horas. Após isto, análise TLC (éter de petróleo-acetona = 10:1) e coloração de vapor de I2 demonstraram que o material de partida tinha desaparecido. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para dar um resíduo amarelo pegajoso, que não cristalizou nos solventes como clorofórmio, acetona, éter ou metanol, etc. Uma quantidade pequena de resíduo foi solidificada com éter-acetato de etila (10:1) para dar um sólido branco, que era muito hidroscópico e se tomou pegajoso após filtração. O resíduo amarelo foi lavado com éter por várias vezes e desidratado com benzeno anidro, secado sob pressão reduzida para dar um sólido espumado branco (3,67 g, rendimento = 65,91%).

Exemplo 6 Preparação de J/-2-(a-hidroxipentil) benzoato de sódio Dissolvendo d/-3-n-butil-isobenzofuran-1 -(3H)-ona (7,6 g, 0,04 mol) em 20 ml metanol, uma solução nova de metanol (20 ml) de metóxido de sódio (0,92 g, 0,04 mol de Na) foi adicionada. A solução de reação foi agitada sob refluxo durante 2 h. Após isto, análise TLC (éter de petróleo — acetona = 10:1) e coloração de vapor de I2 demonstraram que o material de partida tinha desaparecido. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para dar um resíduo amarelo pegajoso, que não cristalizou nos solventes como clorofórmio, acetona, éter ou metanol, etc. O resíduo amarelo foi lavado com éter por várias vezes e desidratado com benzeno anidro, secado sob pressão reduzida para dar um sólido espumado branco (6,4 g, rendimento = 69,56%).

Exemplo 7 Preparação de <7/-2-(a-hidroxipentil) benzoato de sódio Dissolvendo J/-PHPB (1,0 g, 0,004 mol) em 10 ml de H20, a solução foi resfriada a cerca de 0 °C em um banho de sal-gelo. O pH foi ajustado a 2,0-3,0 com IN HC1 e a solução foi extraída rapidamente com éter frio (3x20 ml). O extrato de éter foi combinado e secado com Na2SC>4 anidro a uma baixa temperatura durante 2 h e então filtrado rapidamente sob uma baixa temperatura. Foi adicionada, ao filtrado, uma solução de 20 ml metanol de Na2C03 anidro (0,58 g, 4,2 mmol) e a solução se tomou turva e voltou a ficar límpida após 3 h de permanência no banho de sal-gelo. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para dar um resíduo amarelo pegajoso, que foi lavado com éter várias vezes e desidratado com benzeno anidro, secado sob pressão reduzida para dar um sólido espumado branco (0,4 g, rendimento = 42,78%).

Exemplo 8 Preparação de dl- 2-(a-hidroxipentil) benzoato de sódio Dissolvendo <f/-PHPB (2,4 g, 0,01 mol) em 20 ml de H20, a solução foi resfriada a cerca de 0 °C em um banho de sal-gelo. O pH foi ajustado a 2,0-3,0 com IN HC1 e a solução foi extraída rapidamente com éter frio (3x20 ml). O extrato de éter foi combinado, então uma solução de 20 ml metanol de NaOH (0,39 g, 0,01 mol), a solução resultante foi mantida durante a noite no banho de sal-gelo. Após concentração sob pressão reduzida, um resíduo amarelo pegajoso foi obtido, sendo processado como acima, e dando um sólido espumado branco (1,2 g, rendimento = 53,48%). O d/-2-(a-hidroxipentil) benzoato de sódio, como preparado de acordo como os procedimentos dos exemplos 5 a 8 acima, é um sólido branco espumado. IV (película) 3398 cm'1 (υ0Η), 2969 cm’1 (uCH3)> 1578, 1394 cm'1 (oCOo) ‘H-RMN (300MHz, DMSO) δ (ppm) 7,70 (dd, J= 6,9 Hz, 1,8 Hz, 1H), 7,17-7,07 (m, 3H), 4,39 (t, 1H), 1,65-1,48 (m, 2H), 1,39-1,10 (m, 4H), 0,83 (t, 3H) Exemplo 9 Preparação de <i/-2-(a-hidroxipentil) benzoato de lítio Dissolvendo d/-3-n-butil-isobenzofuran-l-(3H)-ona (1,2 g, 0,006 mol) em 15 ml metanol, foi adicionado LiOH: H20 (0,26 g, 0,006 mol). A solução de reação foi agitada sob refluxo durante 2 h. Após isto, a análise de TLC (éter petróleo-acetona=10:l) e coloração de vapor de I2 demonstraram que o material de partida tinha desaparecido. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para dar um cristal branco (1,1 g, rendimento = 81,38%). p.f. 134-136 °C IV (KBr) 3323 cm'1 (υ0Η), 2931 cm'1 (ucm), 1604, 1414 cm'1 (uCoo) ‘H-RMN (300MHz, DMSO) δ (ppm) 7,66 (dd,lH), 7,17-7,16 (m, 3H), 4,32(t,lH), 1,78-1,54 (m,2H), 1,27-1,02 (m, 4Η), 0,84 (t,3H) Análise elementar Ci2Hi503Li(FW214,19) C(%) H(%) Li(%) Calculado 67,29 7,06 3,24 Encontrado 67,34 6,87 3,26 Exemplo 10 Preparação de <7/-2-(a-hidroxipentil) benzoato de cálcio Dissolvendo <#-3-n-butil-isobenzofuran-l-(3H)-ona (1,4 g, 7,1 mmol) em 15 ml metanol foram adicionados 20 ml de solução aquosa de NaOH (0,28g, 7,0 mmol). A solução de reação foi agitada sob refluxo durante 2 h. Após isto, a análise TLC (éter de petróleo- acetona = 10:1) e coloração de vapor de I2 demonstraram que o material de partida tinha desaparecido. Cloreto de cálcio (0,4 g, 4,5 mmol) foi dissolvido em 40 ml de H20, e a solução tinha sido gotejada na solução de reação acima. A reação foi realizada em um banho de água a 60 °C durante 2 h, e o pH foi ajustado a cerca de 7 com IN HC1 e então a solução de reação foi filtrada. O filtrado foi concentrado a 10 ml sob pressão reduzida e um sólido branco apareceu. A solução com· o sólido branco aparecido foi mantida durante 30 min e então filtrada. O bolo de filtro foi lavado várias vezes com água e H20-MeOH (1:1), respectivamente, até não poder ser detectado íon cloreto. O aquecimento do bolo de filtro até secagem deu um sólido branco (1,08 g, rendimento = 33,23%).

Exemplo 11 Preparação de d/-2-(cc-hidroxipentil) benzoato de cálcio Dissolvendo d/-3-n-butil-isobenzofiiran-l-(3H)-ona (1,1 g, 5,8 mmol) em 20 ml etanol anidro, foram adicionados 10 ml de solução aquosa de NaOH (0,39 g, 9,8 mmol). A solução de reação foi agitada sob refluxo durante 2 h. Após isto, a análise TLC (éter de petróleo- acetona = 10:1) e coloração de vapor de I2 demonstraram que o material de partida tinha desaparecido. A solução de reação foi resfriada a cerca de 0 °C em um banho de gelo-sal, e acidulada a pH 5,0~6,0 com IN HC1, mais 20 ml de etanol foram adicionados para dissolver o sólido branco precipitado. Pó de carbonato de cálcio (0,33 g, 3,3 mmol) foi adicionado e a solução de reação foi agitada com vigor sob baixa temperatura e mantida durante a noite. Um sólido branco apareceu da solução de reação e a solução de reação foi filtrada. O bolo de filtro foi lavado várias vezes com H20-Me0H. O aquecimento do bolo de filtro forneceu, até secar, um sólido branco (0,65 g, rendimento = 24,73%).

Exemplo 12 Preparação de c#-2-(a-hidroxipentil) benzoato de cálcio Cloreto de cálcio (0,12 g, 0,002 mmol) foi dissolvido em 20 ml H20, e aquecido a cerca de 60 °C. Foram adicionados à solução 10 ml de solução aquosa de <#-PHPB (0,5 g, 0,001 mol). Após um tempo, um sólido branco apareceu e a reação foi continuada por mais 3 h. Após isto, a solução de reação foi filtrada e o bolo de filtro lavado com água quente e secado sob aquecimento para obter um sólido branco (0,21 g), e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e lavado com água quente e aquecido até secar, obtendo-se mais 0,15 g de sólido branco. O sólido branco total combinado foi 0,36 g (rendimento = 78,02%). <#-2-(a-hidroxipentil) benzoato de cálcio como preparado de acordo com os procedimentos dos exemplos 9 a 12 é um sólido branco, que decompõe acima de uma temperatura de 252°C. IV (KBr) 3323 cm'1 (u0h), 2931 cm'1 (υαη), 1604, 1414 cm'1 (dCoo) ]H-RMN (300MHz, DMSO) δ (ppm) 7,56 (d, 1H), 7,24-7,05 (m, 3H), 4,55 (t,lH), 1,71-1,52 (m,2H), 1,26-1,04 (m, 4Η), 0,80 (t,3H) Análise elementar C24H3o06Ca (FW454,57) C(%) H(%) Ca(%) Calculado 63,41 6,65 8,82 Encontrado 63,20 6,61 9,02 Exemplo 13 Preparação de sal de benzil amina de ácido dl-2-(a-hidroxipentil) benzóico Dissolvendo d/-3-n-butil-isobenzofuran-l-(3H)-ona (l,4g, 7,1 mmol) em 15 ml metanol, foram adicionados 20 ml de solução aquosa de NaOH (0,28 g, 7,0 mmol). A solução de reação foi agitada sob refluxo durante 2 h. Após isto, a análise TLC (éter de petróleo- acetona = 10:1) e coloração de vapor de I2 demonstraram que o material de partida tinha desaparecido. A solução de reação foi resfriada a cerca de 0 °C em um banho de gelo-sal, e acidulada com IN HC1 a pH 3,0-4,0, e a solução foi extraída rapidamente com éter frio (3x10 ml). O extrato de éter foi combinado e secado com Na2S04 anidro em uma baixa temperatura e então filtrado. Benzil amina (0,9 ml, 8,24 mmol) foi adicionada à solução de reação e a solução de reação foi mantida durante a noite em banho de sal-gelo. Após concentrar sob pressão reduzida, um resíduo pegajoso amarelo foi obtido e um sólido branco (1,07 g) separado com a adição de éter de petróleo - éter, que foi recristalizado em acetato de etila para dar um cristal branco (0,61 g, rendimento = 26,28%). p.f. 86-88 °C IV (KBr) 3396 cm'1 (υ nh)> 2927 cm"1 (br, υΟΗ), 1637 cm'1 (i)c-c) 1515 cm'1 (^coo) 'H-RMN (300MHz, DMSO) 6 (ppm) 7,65 - 7,13 (m,9H), 4,67 (t, 1H, CH), 3,95 (d, 2H, CH2), 1,58- 1,66 (m,2H, CH2), 1,14-1,34 (m,4H, CH2CH2), 0,82(t,3H,CH3) Análise elementar Ci9H25N03(FW315,41) C(%) H(%) Ca(%) Calculado 72,35 7,99 4,44 Encontrado 72,32 7,98 4,76 MS (EI) m/z 133(50, Exemplo 14 Preparação de composições farmacêuticas Comprimidos O ingrediente ativo, amido, celulose microcristalina e carboximetil celulose de sódio foram triturados e misturados. A mistura foi umedecida homogeneamente e pulverizada, sendo então peneirada e secada e então novamente peneirada. O estearato de magnésio e talco foram misturados com a mistura acima e ela foi comprimida em comprimidos, e estes foram revestidos com um revestimento de película (que pode ser hidroxipropilmetil celulose e outros). Cada comprimido contém 50~200 mg de ingrediente ativo.

Exemplo 15 Preparação de composições farmacêuticas Cápsulas O ingrediente ativo e excipientes foram misturados e peneirados. A mistura assim obtida foi colocada em cápsulas duras solúveis no estômago com quantidades determinadas. Cada cápsula contém 50-200 mg de ingrediente ativo.

Exemolo 16 Preparação de composições farmacêuticas Solução intravenosa O ingrediente ativo foi dissolvido em uma quantidade apropriada de água para injeção ou solução salina isotônica e então filtrado. Ajustar o pH a 10,5 (que pode variar de 9,0 a 10,5) com quantidade apropriada de NaOH. A solução intravenosa foi colocada em frascos sob condição esterilizante.

Exemplo 17 Preparação de composições farmacêuticas Injeção intravenosa liofilizada O ingrediente ativo foi dissolvido em uma quantidade apropriada de água para injeção e o pH foi ajustado a 9,0-10,0 com NaOH. A solução foi filtrada e secada por congelamento para dar um bolo ou pó. A injeção liofilizada pode ser injetada e transfundida intravenosamente após ser dissolvida em solução NaCl a 0,9% para injeção ou injeção de glucose a 5%.

Exemplo de teste 1: Efeito dos presentes compostos sobre a área do infarto após isquemia cerebral local em ratos (1) Materiais e métodos Animal: Ratos Wistar machos (250 - 280 g), do Animal Center of the Chinese Academy of Medicai Sciences Drogas: ú?/-PHPB foi dissolvido em água duplamente destilada.

Cloreto de 2,3,5-trifenil tetrazólio (TTC) foi adquirido de Beijing Chemical Plant. Métodos: Oclusão de artéria cerebral média (MCAO): Os ratos foram anestesiados por monohidrato de tricloroacetaldeído (350 mg/kg, ip). A artéria carótida comum esquerda foi exposta através de uma incisão média no pescoço e cuidadosamente dissecada para ficar livre dos nervos circundantes. A artéria carótida interna e a artéria carótida externa foram isoladas. Então, uma sutura de náilon de 4 cm de comprimento e 0,26 mm de diâmetro foi inserida através da artéria carótida externa proximal dentro da artéria carótida interna por uma extensão de 2,0 mm a partir da bifurcação. As feridas foram suturadas e os ratos soltos. A temperatura ambiente foi mantida a 24-25 °C durante o teste.

Grupos: Os animais foram divididos em dois grupos, 1) grupo de administração: J/-PHPB (200 mg/kg) e HC1 (pH 1,6) 0,5 ml (para imitar a condição ácida do estômago humano) foram administrados pela boca (p.o.) 30 minutos antes da isquemia; 2) grupo de controle: água destilada duplamente e HC1 (pH 1,6) 0,5 ml foram administrados pela boca (p.o.) 30 minutos antes da isquemia.

Medida do infarto: Os animais anestesiados foram decapitados 24 horas após MCAO. Cada cérebro foi rapidamente removido e mantido em solução salina resfriada com gelo (0-4 °C). Após 10 minutos, a seção coronal foi dividida em cinco pedaços após a remoção do bulbo olfativo, cerebelo, e tronco cerebral inferior. Quando do corte, o primeiro corte foi no ponto central da linha de conexão do polo anterior do cérebro e o quiasma óptico, o segundo corte foi no sítio do quiasma óptico, e o terceiro foi no sítio da base do infimdíbulo, e o quarto entre a base do infimdíbulo e o polo caudal do lóbulo posterior. O cérebro fatiado foi mantido em 5 ml de solução de TTC (4%) e K2HPO4 (1M), sombreado e incubado a 37 °C durante 30 min. Durante a incubação, as lâminas foram viradas a cada 7-8 minutos. Após a coloração, o tecido cerebral normal mostrou uma cor rosada, mas o tecido infartado mostrou uma cor branca. O tecido infartado foi separado do tecido normal e pesado. A área do infarto foi calculada a partir da porcentagem em peso do tecido do infarto para o tecido cerebral total. (2) Resultado: Efeito de dl- PHBP para as áreas de infarto cerebral nos ratos de MCAO permanente A tabela 1 mostra a área do infarto, a área do grupo tratado com J/-PHBP é 19,83+3,53%, e de controle é 26,99+3,51%. O infarto é reduzido de modo significante (P<0,01) no grupo tratado comparado com o controle. Tabela 1 ** Ρ < 0,01 versus grupo de controle (3) Conclusão 2-(a-hidroxipentil) benzoato de potássio, c/Z-PHPB) reduziu de modo significante o dano ao tecido cerebral induzido por MCAO e diminuiu as áreas de infarto.

Exemplo de teste 2: O efeito dos presentes compostos na agregação de plaquetas 1) Materiais e métodos Animal: Ratos Wistar machos (260 - 280 g), do Animal Center of the Chinese Academy of Medicai Sciences Drogas: 2-(l-hidroxipentil) benzoato de potássio, c//-PHPB) ADP, obtido do Shanghai Institute of Biochemistry, Academia Sinica.

Equipamento: Agregômetro de plaquetas (tipo PAT-4a MEGURO-KU, TÓQUIO, JAPÃO.

Grupos: Animais foram divididos em quatro grupos: 1) Grupo de controle: água destilada duplamente (400 mg/kg) foi administrada pela boca (p.o.) 30 minutos antes da amostragem do sangue; 2) D/-PHPB (400 mg/kg) foi administrado pela boca (p.o.) 30 minutos antes da amostragem do sangue; 3) D/-PHPB (400 mg/kg) foi administrado pela boca (p.o.) 60 minutos antes da amostragem do sangue; 4) D/-PHPB (200 mg/kg) foi administrado pela boca (p.o.) 30 minutos antes da amostragem do sangue; Método: Após administração oral de d7-PHPB, sangue foi retirado da carótida dos ratos em pontos de tempo de 30 e 60 minutos, respectivamente. O plasma rico em plaquetas (PRP) e plasma pobre em plaquetas (PPP) foram preparados por procedimento comum. De acordo com o método descrito por Bom, PRP (200 μΐ) foram colocados no agregômetro de plaquetas e pré-incubados a 37 °C durante 5 minutos e então ADP com a concentração final de 5 pmol/L foi adicionado para induzir a agregação de plaquetas. A agregação máxima foi medida 5 minutos após a adição de ADP. (2) Resultados A tabela 2 mostra o efeito inibidor sobre a agregação de plaquetas induzido por ADP.

Tabela 2 ** P< 0,01, * P< 0,05 versus grupo de controle (3) Conclusão: 2-(l-hidroxipentil) benzoato de potássio, í//-PHPB) inibe de modo significante a agregação de plaquetas comparada com o grupo de controle.

Exemplo de teste 3: Os efeitos protetores de <#-PHPB em arritmia cardíaca induzida por isquemia-reperfusão em corações isolados de ratos 1) Materiais e métodos Animal: Ratos Wistar machos (250 - 300 g), do Animal Center of the Chinese Academy of Medicai Sciences, agrupados de modo aleatório.

Drogas: dl-PHPB, NaCl, de Beijing Chemical Reagent Factory No. 2, KC1, e MgSC>4, Beijing Shuanghuan Chemical Reagents Factory, KH2P04, Beijing Yili Fine Chemicals Co. Ltd.

NaHC03, Beijing Chemical Reagents Company Glucose, Beijing Guohua Chemical Reagents Factory CaCl2, Sigma Aparelho: Sistema de perfusão Langendoff; XD-7100 ECG, Shanghai Medicai Electronic Devices Factory Métodos: (1) Remover rapidamente o coração do rato após decapitar e colocá-la em solução K-H a 4 °C, fixar a aorta no sistema de perfusão; (2) Perfundir o coração com solução de K-H, 6-8 ml/min, 37+0,5°C, sob a pressão de cerca de 60 mm H2O; (3) Conectar os dois eletrodos de cobre no ápice cardíaco e o fundo do átrio direito e gravar o cardiograma; (4) Perfurar sob a ramificação descendente anterior esquerda da artéria coronária com linha 3/0; (5) Perfundir o coração durante 10 min e gravar o cardiograma normal; (6) Ligar a ramificação descendente anterior esquerda da artéria coronária para fazer uma isquemia miocardiana durante 15 minutos; (7) Prender a linha e terminar a perfusão, gravar a mudança de cardiograma durante 30 minutos (principalmente em fibrilação ventricular (VF) e taquicardia ventricular (VT) espasmódica); (8) Dissolver o í/Z-PHPB a pH 1,5 em uma concentração desejada, adicionar 0 mesmo em solução K-H e realizar as experiências. (2) Resultados: A tabela 3 mostra os efeitos protetores de dl- PHPB em arritmia cardíaca induzida por isquemia-reperfusão em corações isolados em ratos Tabela 3 VT: taquicardia ventricular VF: fibrilação ventricular VE: batidas ectópicas ventriculares *P<0,05, **P<0,01, ***P<0,001 comparado com o grupo de controle (3) Conclusão D/-PHPB pode encurtar de modo significante a duração de arritmia e VT induzida por isquemia-reperfusão em corações isolados em ratos, diminui a incidência de taquicardia ventricular espasmódica, e mostra signifícantes proteções nos danos isquêmicos dos corações na concentração de 1 θ'4 mol/L.

DISPONIBILIDADE INDUSTRIAL

Os novos (2-(oc-hidroxipentil) benzoatos podem ser usados para a preparação de composições farmacêuticas, sendo usados para a prevenção e tratamento de doenças como isquemia cardíaca, isquemia cerebral, oclusão arterial (obstrução) do coração e cérebro, e outros.

REIVINDICAÇÕES

Claims (9)

1. Composição farmacêutica para prevenir e tratar cardioisquemia, cerebroisquemia, oclusão arterial cerebral e para melhorar a microcirculação do cérebro, caracterizada pelo fato de compreender uma quantidade efetiva de um composto de fórmula (I) em que M é um íon de metal monovalente, um íon de metal divalente, ou um grupo de base orgânico selecionado dentre o grupo anilínio, grupo benzil amônio, grupo morfolínio e grupo dietil-amônio, e em que n é 1 ou 2, e um veículo farmaceuticamente aceitável.

2. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que M é um íon potássio, um íon sódio, ou um íon lítio.

3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que M é um íon cálcio, um íon magnésio ou um íon zinco.

4. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que está na forma de um comprimido, cápsula, injeção ou injeção liofilizada.

5. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que M é um íon sódio ou potássio.

6. Uso do composto da seguinte fórmula geral (I): em que M é um íon de metal monovalente, um íon de metal divalente, ou um grupo de base orgânico selecionado dentre um grupo anilínio, um grupo benzil amônio, um grupo morfolínio e grupo dietil-amônio e em que n é 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser na preparação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de cardioísquemia, cerebroisquemia, oclusões arteriais de coração e cérebro.

7. Uso do composto, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que M é um íon potássio, um íon sódio, ou um íon lítio.

8. Uso do composto, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que M é um íon cálcio, um íon magnésio, ou um íon zinco.

9. Uso do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 8, caracterizado pelo fato de que o composto pode ser feito em comprimidos, cápsulas, injeções ou injeções liofilizadas.