BG60739B2 - Трипептиди,влияещи върху централната нервна система и метод за тяхното получаване - Google Patents

Трипептиди,влияещи върху централната нервна система и метод за тяхното получаване Download PDF

Info

Publication number
BG60739B2
BG60739B2 BG98367A BG9836794A BG60739B2 BG 60739 B2 BG60739 B2 BG 60739B2 BG 98367 A BG98367 A BG 98367A BG 9836794 A BG9836794 A BG 9836794A BG 60739 B2 BG60739 B2 BG 60739B2
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
mmol
solution
pyroglutamyl
carbonyl
mixture
Prior art date
Application number
BG98367A
Other languages
English (en)
Inventor
Lajos Kisfaludy
Tamas Szirtes
Lajos Balaspiri
Eva Palosi
Laszlo Szporny
Adam Sarkadi
Original Assignee
Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Rt.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Rt. filed Critical Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Rt.
Publication of BG60739B2 publication Critical patent/BG60739B2/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • C07K5/0825—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp and Glp-amino acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/26—Psychostimulants, e.g. nicotine, cocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/10—Drugs for disorders of the endocrine system of the posterior pituitary hormones, e.g. oxytocin, ADH
    • A61P5/12—Drugs for disorders of the endocrine system of the posterior pituitary hormones, e.g. oxytocin, ADH for decreasing, blocking or antagonising the activity of the posterior pituitary hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06043—Leu-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06052—Val-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C07K5/06147—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and His-amino acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C07K5/06173—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and Glp-amino acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Трипептидите имат обща формула х-y-w-nн2, в коятох означава групата l-пироглутамил, d-пироглутамил, l-2-кето-имидазолидин-4-карбонил, l-6-кетопипеколил, l-тиазолидин-4-карбонил, l-пролил или оротил;y означава групата -l-левцин, l-норвалил или l-хистидил и w е групата -l-пролил, d-пролил, l-тиазолидин-4-карбонил, l-хомопропил, l-левцин, l-изолевцин, l-метионил, l-пипеколил, d-пипеколил или w-nн2-групата означава пиролидил или пиперидил и при условие, че х е l-пироглутамил и y е l-хистидил, w означава група, различна от l-пролил.

Description

(54) ТРИПЕПТИДИ, ВЛИЯЕЩИ ВЪРХУ ЦЕНТРАЛНАТА НЕРВНА СИСТЕМА, И МЕТОД ЗА ПОЛУЧАВАНЕТО ИМ
Изобретението се отнася до нови трипептиди, които влияят върху централната нервна система и до фармацевтични композиции, които ги съдържат, както и до метод за тяхното получаване.
Новите съединения съгласно изобретението отговарят на общата формула x-y-w-nh2 в която X представлява групата -Lпироглутамил, D-пироглутамил, L-2-кето-имидазолидин-4-карбонил, L-6-кетопипеколил, Lтиазолидин-4-карбонил, L-пролил или оротил;
Y представлява групата на L-левцил, Lнорвалил или L-хистидил и
W представлява групата - L-пролил, Dпролил, Ь-тиазолидин-4-карбонил, L-хомопролил, L-левцил, Е-изолевцил,Ь-метионил, Lпипеколил, D-пипеколил или W-NHj-групата означава пиролидил или пиперидил, при условие че, ако X е L-пироглутамил и Y е Lхистидил, W представлява група, различна от L-пролил.
Фармацевтично приемливите комплекси на тези съединения попадат в обсега на това изобретение.
Новите трипептидни производни с обща формула I представляват структурни аналози на Е-пироглутамил-Е-хистидил-Е-пролинамид (Glp-His-Pro-NH2), известен също като хормон, освобождаващ тиротропин (TRH), в който някои от аминокиселинните групи са заместени с други аминокиселинни групи, дефинирани по-горе, и евентуално остатъкът -W-NH2 означава пиролидилна или пиперидилна група.
Съществуването на TRH е известно от 60-те години, но структурата му е изяснена едва през 1969 г. от R. Guillemin и др. потвърдена през 1970 г. от независими изследвания, ръководени от A. Schally и др. (вж. C.Y.Bowers et al., Endokrinology 86, 1143/1970/; R.Burgus et al., C.R.Acad.Sci./-Paris/269, 1870/1969/).
Трипептидът TRH, описан първоначално като фактор, който регулира освобождаването на тиротропин (TSH) в хипофизата на бозайници. Последващо изследване разкри, че биологичната функция на този трипептид не се ограничава само до освобождаването на тиротропин, а че влияе и на централната нервна система (CNS) (вж.М.Р.Рю^кФТ et al., Science 178,417/1972; AJ.Prange et al., Lancet 2, 999/1972/). Установено е, че TRH покрай хормоналната си функция значително намалява продължителността на съня, предизвикан от барбитурати или алкохол, спира хипотермията, причинена от различни лекарства, и повишава двигателната активност. Един допълнителен важен фактор на влиянията на TRH върху централната нервна система е забавянето на каталепсията, предизвикана от халоперидол. В терапевтичната практика се появи необходимост от TRH аналози, които проявяват само слаб ефект върху хипофизата, но оказват същата или по-висока степен на влияние върху централната нервна система, отколкото TRH. С тази цел са синтезирани съединенията, изброени в патенти на DE № 2 343 035 2 343 037 2449 167 2 514 381 2 609 154 и 2 639 393 и патент на BE № 819 198. Тази обширна изследователска работа, чиито резултати и опити са описани от A.J.Prangle et al., (“The Role of Hormones in Depression”, Life Sciences 20q 1305/1977/) и от A.V.Schally et.al., (“Hypothalmic Regulatory Hormones”), Ann.Rev. Biochem.47, 89/1978/), не доведе до резултати, задоволяващи всички терапевтични нужди.
Установено е, че когато системно се заместват отделни аминокиселини в трипептидите TRH с други аминокиселини, се получават нови съединения, които не показват хормоналната характеристика на TRH или имат само минимум хормонални влияния, докато влиянията върху CNS се запазват или засилват понякога до значителна степен. От практическа важност в това отношение са съединенията, в които His е заместен с линейна или разклонена алифатна аминокиселинна група във 2 позиция. За да се получат повече селективни биологични влияния е благоприятно да се замени пироглутамиловата пръстенова система на молекулата с групата на 6-кетопипеколиновата киселина.
Трипептидите с обща формула 1 с получават от съответните аминокиселини или аминокиселинни производни по известни методи на пептидната химия, предимно като
а) се използва съединение с обща формула w-nh2 като изходно вещество, като W е дефинирано, както горе, молекулата на необходимия пептид се изгражда на етапи чрез методите на присъединяване, използвани в пептидната химия, за предпочитане като се използват активирани естери, смесени анхидриди или дициклохексилкарбодиимид, или
б) съединение с обща формула w-nh2 в която W е дефинирано, както по-горе, се ацилира с азид, получен от дипептидхидразид с обща формула z-x-y-nh-nh2 в която Z означава бензилоксикарбонил, a X и Y са дефинирани, както по-горе, и защитната група Z на съединение с обща формула
Z-X-Y-W-NH, получено по един от посочените методи, като Ζ,Χ,Υ и W са дефинирани, както по-горе, се отцепва (предимно чрез каталитично хидриране) и полученото съединение с обща формула I се отделя от реакционната смес и/или евентуално се превръща във фармацевтично приемлив комплекс.
Когато трипептидите се изграждат на етапи, съединението с обща формула W-NH2, използвано предимно в излишък, реагира с активирано производно особено с пентафлуорофенилов естер на защитена аминокиселина с обща формула BO-C-Y-OH, в която ВОС означава трет-бутоксикарбонилна група. При тази реакция за извънредно малко време (няколко минути), се получава съответно дипептидно производно с обща формула BOC-Y-WNH2. Реакционната смес може да се обработи много лесно и полученият продукт е обикновено достатъчно чист, за да се използва директно в следващия етап.
Същите дипептидни производни с обща формула BOC-Y-W-NH2 могат да се получат обаче и чрез други присъединителни методи, като напр. се използва смесен анхидрид или свободна киселина в присъствие на дициклохексилкарбодиимид.
Полученото дипептидно производно с обща формула BOC-Y-W-NH2 се подлага на ацидолиза, за да се получи свободният дипептид с обща формула H-Y-W-NH2, и това последно съединение реагира предимно с пентаф луорфенилов естер на защитена аминокиселина с обща формула Z-X-OH, при което по много изгоден начин се получава съответният трипептиден дериват с обща формула Z-X-Y-Wnh2.
Методът, при който изходното вещество с обща формула W-NH2 се ацилира с азид, получен от дипептидхидразид с обща формула Z-X-Y-NH2, има предимството, че съответните хидразидни междинни продукти кристализират лесно и по този начин могат да се изолират с висока чистота.
Съединенията с обща формула 1, в която X означава пироглутамилова група могат да се получат като пироглутаминовият пръстен се образува само в последния етап на синтеза. В този случай в молекулата се вкарва като трета аминокиселина глутамин и полученият трипептид с обща формула Gln-Y-W-NH2 се загрява няколко минути в оцетна киселина.
Защитените трипептидни производни с обща формула Z-X-Y-W-NH2, получени по един от описаните методи и могат да се превърнат в съответните свободни трипептиди с обща формула I предимно чрез каталитично хидриране. Получените крайни продукти могат да се пречистят чрез обикновено прекристализиране или повторно утаяване, а ако е необходимо може да се използва и колонна хроматография за същата цел.
Фармакологичните въздействия на трипептидните производни с обща формула I са изследвани със следните биологични методи.
1) Инхибиране на каталепсия в плъхове, причинена от халоперидол (вж. J.Delay ahd P.Deniker: Compt. Rend.Congr.Med.Alenistes Neurologistes, 19, 497, Luxembourg, 1952). Опитите са извършени върху мъжки плъхове Wistar с тегло 160 до 180 g. 40 mg/kg от 4-(р-хлорфенил) -1 - (3-/р-флуорбензоил/-пропил) -пиперидин-4-ол (халоперидол) се прилага подкожно на животните и 120 min след това третиране, животните се проверяват за поява на каталепсия. Плъховете се разделят на групи от по 10 животни и се третират интравенозно с TRH или с новите TRH аналози. Животните от контролната група получават физиологичен разтвор. Ефектите на прекратяване на каталепсията от отделните съединения се определят на 15, 30,60,90 и 120 min след третирането. Животните, които не са променили положението си 30 sec след поставяне на тяхната пред на лапа на височина 7 cm, се класифицират като каталептични. Животните, които не показват признаци на каталепсия, се преброяват и стойностите EDJ0 на съединенията се изчисляват от тези данни чрез пълен анализ.
2) Засилване на двигателната активност, предизвикана в мишки чрез L-Dopa (вж.ТЬе Thyroid Axis, Drugs and Behavior, p. 116, A.J. Prage Jr.,Raven Press, New York, 1974). Опитите се провеждат c групи от по 15 мъжки мишки, тежащи 18 до 22 g. Първоначално животните се третират интраперитонеално с 40 mg/kg Nметил-И-пропаргил-бензиламин (Pargyline) и след това се вкарва интрапериотонеална доза от 20 mg/kg TRH или TRH-аналог, последвана от интраперитонеална доза от 100 mg/kg LDopa. Двигателната активност на животните се регистрира 30,60 и 90 min след това третиране и нивото на усилване се изразява в проценти спрямо резултатите, наблюдавани с TRH. Данните са представени в таблица 1.
3) Ефект на възстановяване от хипотермия вследствие на въздействието на резерпин, изследван върху мишки (вж. B.M.Askew: Life Sci. 2,725-730/1963/). Опитите са проведени върху групи от по 10 мъжки мишки, тежащи 18 до 22 g. Резерпинът се подава на животните като интраперитонеална доза по 5 mg/kg, 16 h покъсно животните се третират с 20 mg/kg TRH или изследвания трипептид. Ректалната температура на животните се измерва преди подаването на резерпин (обозначено в таблица 1 с “норм.”), 16 h след подаването на резерпин (обозначено в табл.1 с “рез.”), освен това 1 и 2 часа след подаването на трипептида (обозначено в табл.1 с “набл.време”). Данните, представени в табл.1, представляват средните стойности на температурите, наблюдавани при 10 животни.
4) Влияние върху продължителността на съня, причинен от хексобарбитал. Опитите се провеждат върху групи от по 10 мъжки мишки. Животните се третират интравенозно с 60 mg/ kg натриев хексобарбитал (Evipan; Bayer), и 10 минути по-късно на животните се подават интраперитонеално 20 mg/kg TRH или изследвания трипептид. Времетраенето на съня на животните се регистрира, стойностите се усредняват за всяка отделна група и резултатите се изразяват като проценти спрямо контролната група. Резултатите са представени в таблица 1.
5) Етанолна наркоза (вж. J.M.Cott et.al., J.Pharm. Exp.Ther. 196,594/1976/). Опитите се провеждат върху групи от по 20 мишки CFLP (LATI) от двата пола, всяка от които тежи 18 до 20 g, 4.5 g етанол се вкарват интраперитонеално в животните и 10 min по-късно животните се третират интраперитонеално с 20 mg/kg от изследвания пептид. Регистрира се времетраенето на съня на животните, стойностите се усредняват за всяка отделна група и резултатите се изразяват като проценти спрямо контролната група. Резултатите са представени в таблица 1.
6) Хормонална активност (TSH-ефект), изследвана върху плъхове.
Опитите се провеждат върху групи от по 7 или 8 мъжки плъхове Wistar, тежащи по 200 g. Животните се третират интравенозно с 20 mg/kg TRH или изследвания трипептид. TSH реакцията на животните се оценява 15 min след това третиране чрез радиоимунен анализ на кръвната плазма. Относителната активност се изчислява чрез четириточковия метод, използвайки компютър ТРА 101, като активността на TRH се приема за 100%.
Данните за биологичната активност на съединенията с обща формула 1, представляващи по-голям интерес, определени по горните методи, са представени в таблица 1.
Таблица 1
Ипхиб. на ката- Усилване на двиг. Ефект на Възстановяване лспсия, причинна ефект от L-Dopa, от хипотермия, след рез.
Намаляване на продължителността на от халоперицол %
Ректална темп., *С съня (% спрямо
X - Y - Z - NH; време след______ набл.време контр.животни) TSH
X Y z mg/kg min 30' 60' 90' норм. рез. lh 2h хексоб. етанол е<Ьект
Крс Leu Pro 23.5 60 319 80 127 36.3 24.5 32.0 33.9 37 79 2.7
Крс Nva Pro 10.6 30 36 45 65 36.3 23.9 33.1 32.5 51 46 0
Glp Leu Tea 31.4 120 171 142 52 36.2 24.9 33.1 32.2 39 58 0
Glp Leu Pip 38.5 120 201 89 112 36.4 24.6 30.7 31.0 38 60 7.2
Glp Nva Tea 56 30 195 147 79 36.5 23.8 31.4 30.7 69 51 0
Крс Nva Tea 60.3 30 103 38 70 36.4 23.6 30.4 29.0 61 48 -
Крс Nva HPro 35.3 15 63 30 108 36.3 20.7 26.5 32.2 76 35 —
D-Glp Leu Pro 70 15 54 58 115 36.5 27.4 25.8 25.6 97 54 0
Kic Leu Pro 80 30 118 70 98 35.5 24.1 27.7 28.8 59 69 0
TRW KO 15 TOD ДЮ ΊΐίΟ 36.2 25.9 355 30.2 56 35 100
Продължителност на сън, причинен от хексобарбитал: (X ± SE) = 38.4 ± 1.36 min.
Продължителност на сън, причинен от етанол: (X ± SE) = 46.9 ± 2.17 min.
Данните от таблица 1 показват, че новите аналози на TRH, в които две или три от аминокиселините в молекулата на TRH са заместени с други аминокиселини, проявяват значително въздействие върху централната нервна система. В това отношение особено се предпочитат тези съединения, в които His в положение 2 в молекулата на TRH е заместена с правоверижна или разклонена алифатна аминокиселинна група. TRH аналозите, в които групата Glp е заместена с 6-кето-пипеколинова киселина, са също толкова предпочитани от същата гледна точка. Тези производни показват минимално хормонално влияние, ако има такова, характерно за TRH, докато влиянията върху централната нервна система са много по-големи, понякога надвишават това на TRH осем пъти.
Новите трипептиди съгласно изобретението и техните фармацевтично приемливи соли или комплекси могат да се прилагат при терапия под форма на обикновени фармацевтични композиции. Тези фармацевтични композиции съдържат активни вещества съгласно изобретението в комбинация с минерални или органични носители, подходящи за ентерално или парентерално подаване. Фармацевтичните композиции могат да бъдат напр. под формата на таблетки, дражета, инжекции, изсушени чрез замразяване композиции и др. и могат да се приготвят по методи, известни във фармацевтичната промишленост.
Изобретението е обяснено подробно със следните примери, които не изчерпват всички възможности. Съкращенията, използвани в примерите са обичайните, прилагани в пептидната химия (ВжЛ.ВоП. Chem.247, 977/1972/). Допълнителните съкращения, които се появяват в примерите, имат следните значения:
HPro-L-хомопролон,
К1к-Е-2-кето-имидазолидин-4-карбоксилна киселина,
Kpc-L-6-кето-пипеколинова киселина,
Ого-оротова киселина,
Pip-L-пипеколинова киселина,
Тса-Е-тиазолидин-4-карбоксилна киселина,
DCC-дициклохексилкарбодиимид,
DCU-дициклохексилкарбамид
PFPOH - пентафлуорофеноли
DMFA-диметилформамид.
Точките на топене, посочени в приме-рите, се определят с апарат, тип Dr.Tottili (Buchi). Оптичното въртене се измерва с поляриметър Perkin-Elmer, тип 141. При тънкослойната хроматография, прилагана за идентифицира не или разделяне, се използват хроматографски плочки със силикагел с качество “кизелгел G по Stahl” (Е.Merck, Darmstadt) като адсорбент и за проявяване на хроматограмите се използват със следните смеси от разтворители:
(1) хлороформ:метанол 9:1 (2) етилацетат: (пиридин:оцетна киселина:вода 20:6:11) 95:5 (3) етилацетат: (пиридин.оцетна киселина:вода 20:6:11) 9:1 (4) етилацетат: (пиридин:оцетна киселина.вода 20:6:11) 8:2 (5) етилацетат: (пиридин.оцетна киселина:вода 20:6:11) 3:2 (6) етилацетат: (пиридин:оцетна киселина: вода 20:6:11) 2:3
Петната се проявяват с разтвор на нинхидрин. Плочките се изсушават при 105°С за около 5 минути след напръскване, след което хроматограмите се обработват с хлор, после, след аерацията се третират с разтвор на о-толуидин-калиев йодид.
Когато за разделяне на веществата се прилага колонна хроматография, като адсорбент се използва силикагел от клас “кизелгел G” (Е.Мегск) с размер на частиците от 0.062 до 0.2 mm.
Разтворите се изпаряват под вакуум в апарат “Rotavapor R” (Buchi) при температура, която не превишава 50°С.
Пентафлуорофенилните естери на ВОСзащитените аминокиселини се получават съгласно метода на L.Kisfaludy et al. (Ann.1973, 1421).
Пример 1. L-пироглутамил-Е-левцил— пипеколен амид етап. Хидрохлорид на L-левцил-Е-пипеколен амид 1,54 g (12 mmol)
H-Pip-NH2 са суспендирани в 20 ml DMFA и 5.16 g (13 mmol) BOC-Leu-OPFP и 1.68 ml (12 mmol) триетиламин се прибавят към суспензията при разбъркване. Сместа се бърка 6 часа, след което полученият разтвор се изпарява във вакуум и масленият остатък се разтваря в 60 ml хлороформ. 0.2 ml 2-диметиламиноетиламин се прибавя към разтвора, сместа се оставя за 5 минути, след което се разтръсква три пъти с по 20 ml In солна киселина, три пъти с по 20 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и накрая с 20 ml вода. Органичната фаза се суши над безводен натриев сулфат и след това се изпарява. Масленият остатък се разтваря в 3 ml етилацетат и се прибавя 10 ml 5п разтвор на солна киселина в етилацетат. След престояване 1 час, реакционната смес се разрежда с етер, отделилата се утайка се филтрува и се суши във вакуум над безводен натриев хидроксид. Получава се 3.13 g (94% от изчисленото за НPip-NH2) H-Leu-Pip-NH2.HC1; RfM).46.
етап. Бензилоксикарбонил-Е-пироглутамил-Е-левцил-Е-пипеколен амид
3.13 g (11.2 mmol) H-Leu-Pip-NH2.HC1 и 4.49 g (11.5 mmol) Z-Glp-OPFP се разтварят в 35 mml DMFA и 1.57 mml (11.2 mmol) триетиламин се прибавят към разтвора. След 5 min разбъркване се прибавят допълнително 1.57 ml (11.2 mmol) триетиламин към реакционната смес, разбъркването продължава още 20 min и след това сместа се изпарява във вакуум. Остатъкът се разтваря в 90 ml хлороформ, разтворът се измива два пъти с по 30 ml In солна киселина, три пъти с по 30 ml In разтвор на натриев карбонат и накрая-с 30 ml вода. Органичната фаза се суши над безводен натриев сулфат и след това се изпарява. Аморфният остатък се стрива със студен етер, етерната фаза се декантира и масленият остатък се втвърдява под n-хексан. Получените 4.7 g непречистен аморфен продукт се прекристализират от смес от етилацетат и етер и се получават 3.32 g (61%) Z-Glp-Leu-Pip-NH2; m.p. 143144°С Rf4 = 0.51, [а] θ25 = -97.20 (c=l %, в оцетна киселина).
Анализ: изчислено за C25H34O6N4 (м.т.:486.57):С: 61.71%,Н: 11.51%, N: 11.51%; намерено: С: 61.67%, Н:7.05%, N: 11.40% етап. L-пироглутамил-Е-левцил-Е-пипеколен амид
2.1 g (4.32 mmol) Z-Glp-Leu-Pip-NH2 се разтваря в 40 ml метанол. Добавя се 0,2 g 100% паладий върху въглен и през сместа се барботира водород в продължение на 1 час. Катализаторът се филтрува, филтратът се изпарява и остатъкът се стрива в етер. Полученият непречистен продукт (1.48 g) се разтваря в 20 ml вода, разтворът се обезцветява, филтрува и в бистрия филтрат се разтварят 4 g натриев хлорид. Водният разтвор се екстрахира три пъти с по 10 ml хлороформ. Хлороформните разтвори се събират, сушат над безводен натриев сулфат, изпаряват се и аморфният остатък се стрива със смес от етилацетат и етер. Получава се 1.33 g (87.5%) Glp-Leu-Pip-NH2; Rf5 = 0.60, £a]D xs = -86.40 (c== 1%, в оцетна киселина).
Пример 2. Амид на Ь-пироглутамил-Ьлевцил-Б-тиазолидин-4-карбоксилна киселина етап. Амидхидрохлорид на L-левцилБ-тиазолидин-4-карбоксилна киселина
1.81 g (11 mmol) H-Tca-NH2.HC1 (S.Ratner, H.T.Clarke, J.Am. Chem. Soc.59, 200/ 1937/) се суспендират в 30 ml DMFA и към суспензията се прибавят 3.97 g (10 mmol) ВОСLeu-OPFP, 1.49 g (11 mmol) 1-хидроксибензотриазол и 1.22 ml (11 mmol) N-метилморфолин. Полученият разтвор се оставя да стои през нощта при стайна температура, след това се изпарява във вакуум и остатъкът се разтваря в 80 ml хлороформ. Хлороформният разтвор се промива три пъти с по 20 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и накрая с 10 ml вода, суши се над безводен натриев сулфат и се изпарява във вакуум. Пенообразният аморфен остатък се разтваря в 5 ml етилов ацетат и се прибавят 10 ml разтвор на 7п солна киселина в етилов ацетат. След 1 h престояване, реакционната смес се разрежда с етер, отделената утайка се филтрува и се суши във вакуум над безводен натриев хидроксид. Получава се 1.84 g (65% от изчисленото за BOC-Leu-OPFP)H-Leu-Tca-NH2.HCl; Rf5.0.25, m.m.l70-174°C, разлагане.
етап. Амид на бензилоксикарбонил-Lпироглутамил-Ь-левцил-1.-тиазолидин-4-карбоксилна киселина
1.69 g (6 mmol) H-Leu-TCa-NH2.HCl се суспендира в 20 ml DMFA и към суспензията се прибавят 2.7 g (6.3 mmol) Z-Glp-OPFP и 0.84 ml (6 mmol) триетиламин. Реакционната смес се бърка в продължение на 20 минути, изпарява се във вакуум, остатъкът се разтваря в 50 ml хлороформ и разтворът се промива два пъти с по 10 ml In солна киселина, три пъти с по 10 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и накрая с 10 ml вода. Органичният разтвор се суши над безводен натриев сулфат и се изпарява във вакуум. Остатъкът се стрива с етер и получените 2.4 g непречистен продукт се утаяват отново от смес на етилацетат и етер. Получава се 1.64 g (56%) Z-Glp-LeuTCa-NH2; m.m. 108-110°C, Rf4 = 0.46, [a] ^=130.30° (c = 1%, в оцетна киселина).
етап. Амид на Ь-пироглутамил-Ь-левцил-Ь-тиазолидин-4-карбоксилна киселина
1.62 g (3.3 mmol)Z-Glp-Leu-Tca-NH2 се разтварят в 6 ml ледено студен 3.5 η разтвор на бромводородна киселина и разтворът се оставя 1.5 часа при 0 -5°С. След това реакционната смес се разрежда с етер, разредителят се декантира и масленият остатък се разтваря в 20 ml вода. Водният разтвор се неутрализира с твърд натриев хидрогенкарбонат, измива се три пъти с по 10 ml етер, изпарява се във вакуум и остатъкът се разтваря в 20 ml хлороформ. Хлороформният разтвор се суши над безводен натриев сулфат, изпарява се и аморфният остатък се стрива с етер. Получените 1.13 g непречистен продукт се разтварят в смес от разтворители (4), разтворът се подава на колона, напълнена с 20 g силикагел, и колоната се елуира със същата смес от разтворители. Фракциите, съдържащи чистият продукт, се събират и продуктът се изолира. Полученото 0,78 g аморфно вещество се разтваря в 20 ml вода, разтворът се обезцветява, филтрува се и бистрият филтрат се суши при замръзване. Получават се 0.62 g (53%) Glp-Leu-Tca-NH2; Rf 5 = 0.53, [а] р25 = -145.00 (c=l%, в оцетна киселина).
Пример 3. Б-пироглутамил-Б-левцил-Опролинамид етап. Бензилоксикарбонил-Б-пироглутамил-Б-левцил-О-пролинамид
1.54 g (5.8 mmol) H-Leu-D-Pro-NH2.HC1 се разтваря в 20 ml DMFA и 0.81 ml (5.8 mmol) триетиламин и 2.58 g (6.6 mmol) Z-Glp-OPFP се добавят към разтвора. Реакционната смес се разбърква 5 min и се добавя 0.81 ml (5.8 mmol) триетиламин, разбъркването продължава още 10 min и сместа се изпарява във вакуум. Остатъкът се разтваря в 60 ml хлороформ и разтворът се измива трикратно с по 15 ml 1 η солна киселина, три пъти с по 15 1 In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и накрая с 15 1 вода. Органичната фаза се изсушава над безводен натриев сулфат, изпарява се и аморфният остатък се стрива с етер. Полученият 2.1 g непречистен продукт се прекристализира от 5 ml етилацетат и се получава 1.8 g (66%) ZGlp-Leu-D-Pro-NH2; m.m. 153-157°С, Rf 4 = 0.38, [a]D 25—24.50 (c = 1%, в оцетна киселина).
етап. Б-пироглутамин-Б-левцил-Dпролинамид 1.5 g (3.25 mmol) Z-Glp-Leu-DPro-NHj се разтварят в 90 ml метанол, добавят се 0.3 g катализатор 10% паладий върху въглен и през сместа се барботира водород в продължение на 1 час. Катализаторът се отфилтрува, филтратът се изпарява и аморфният ос татък се стрива с етер. Полученият 0.94 g непречистен продукт се разтваря във вода, разтворът се обезцветява, филтрува и бистрият филтрат се суши чрез замразяване. Получават се 0.87 g (79%) Glp-Leu-D-Pro-NH2; Rf 3 = 0.47, [alp25 = + 8.4° (c = 1%), в оцетна киселина).
Пример 4. Амид на Ь-пироглутамил-Ьнорвалил-Е-тиазолидин-4-карбоксилна киселина етап. Амид на L-норвалил-Е-тиазолидин-4-карбоксилна киселина
8.0 g (20 mmol) BOC-Nva-OH.DCHA се суспендира в 60 ml етер, добавят се 20 ml 2 η сярна киселина и сместа се разклаща, докато твърдата фаза се разтвори напълно. Етерният разтвор се отделя, измива се още веднъж с 20 ml 2п сярна киселина и веднъж с 20 ml вода, суши се над безводен натриев сулфат и се изпарява. Масленият остатък се разтваря в 40 ml DMFA. Към разтвора се добавят 2.8 ml (20 mmol) триетиламин, сместа се охлажда до -15°С и на капки към сместа се подават 2.5 ml (20 mmol) пивалоилхлорид с такава скорост, че температурата на сместа да остане под -5°С. Получената суспензия се разбърква при същата температура 10 min, за да се получи разтвор на смесени анхидриди. Добавя се 3.1 ml (22 mmol) триетиламин към суспензия от 3.72 g (22 mmol) H-Tca-NH2.HC1 в 30 ml DMFA и отделената утайка се филтрува. Филтратът се добавя на капки към горния разтвор на смесените анхидриди при температура под -5°С. След добавянето сместа се разбърква 30 min при 10°С, оставя се през нощта да престои в хладилник и след това се изпарява във вакуум. Остатъкът се разтваря в 100 ml хлороформ, разтворът се измива трикратно с по 20 ml солна киселина, три пъти с по 20 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и накрая с 20 ml вода, суши се над безводен натриев сулфат и след това се изпарява. Масленият остатък се разтваря в 20 ml етилацетат, разтворът се охлажда до температура под 5°С и се добавят 20 ml 5п разтвор на солна киселина в етилацетат. Реакционната смес се държи в ледена баня 1 h, след това се разрежда с етер, отделената утайка се филтрува и суши във вакуум над безводен натриев хидроксид. Получава се 3.77 g (70% от изчисленото количество за BOCNva-OH.DCHA) H-Nva-Tca-NHj.HCI; Rf 5 = 0.20.
етап. Амид на бензилоксикарбонил-L пироглутамил-Ь-норвалил-Е-тиазолидин-4карбоксилна киселина 2.8 g (10.5 mmol) H-NvaTca-NH2.HC1 се суспендират в 50 ml DMFA и към разбъркваната суспензия се добавят 1.47 ml (10.5 mmol) триетиламин и 5.15 g (12 mmol) Z-Glp-OPFP. След 5 минути се добавя допълнително 1.47 ml (10.5 mmol) триетиламин, реакционната смес се бърка още 10 минути и след това се изпарява във вакуум. Остатъкът се разтваря в 100 ml хлороформ, разтворът се измива трикратно с по 20 ml солна киселина, три пъти с по 20 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и накрая с 20 ml вода. Органичният остатък се суши над безводен натриев сулфат и се изпарява. Аморфният остатък с стрива с етер и полученият 4.6 g непречистен продукт се прекристализира от смес на етилацетат и етер. Получава се 3.2 g (64%) Z-Gip-Nva-Tca-NH2; m.m. 116-118°С, Rf 4 = 0.45, [a]D 25 = -129.00 (c = 1%, в оцетна киселина).
етап. Амид на Ь-пироглутамил-Е-норвалил-Ь-тиазолидин-4-карбоксилна киселина 4.76 g (10 mmol) Z-Glp-Nva-Tca-NH2 се разтварят в 20 ml 3.5 η леденостуден разтвор на бромоводородна киселина в ледена оцетна киселина и полученият разтвор се оставя да престои 1.5 h при 0-5°С. Реакционната смес се разрежда с етер и разтворителят се декантира. Масленият остатък се разтваря в 50 ml вода, разтворът се неутрализира с твърд натриев хидрогенкарбонат, измива се три пъти с по 20 ml етер и след това се изпарява. Остатъкът се разтваря в 100 ml хлороформ, разтворът се изсушава над безводен натриев сулфат, изпарява се и аморфният остатък се стрива с етер. Получените 3 g непречистен продукт се пуска през колона, напълнена със силикагел и колоната се елуира със смес от разтворители (4). Фракциите, които съдържат чист продукт, се обединяват и продуктът се изолира. Останалите 2.18 g аморфно вещество се разтварят в 40 ml вода, разтворът се обезцветява, филтрува и филтратът се суши чрез замразяване. Получават се 1.84 g (54%) Glp-Nva-Tca-NH2; Rf 5 = 0.50, [ajp25 = - 145.6° (c= 1%, в оцетна киселина).
Пример 5. Ь-пироглутамил-Ь-норвалилL-левцинамид.
етап. Трет-бутоксикарбонил-Ь-норвалил-Ь-левцин естер.
BOC-Nva-OH, отделно от 8.0 g (20 mmol) на съответната DCHA-сол, както е описано в етап 1 на пример 4 и 3.82 g (21 mmol) H-Leu-OMe.HCl се разтварят в 60 ml хлороформ и към разтвора се добавя 2.94 ml (21 mmol) триетиламин. Разтворът се охлажда с лед и при разбъркване се добавя разтвор на
4.33 g (21 mmol) DDC в 40 ml хлороформ. Реакционната смес се оставя да престои през нощта при 5°С, чрез филтруване се отстранява отделеното DDC, филтратът се измива три пъти с по 30 ml In солна киселина, три пъти с по 30 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и накрая с 30 ml вода, суши се над безводен натриев сулфат и след това се изпарява. Кристалният остатък се стрива с n-хексан, филтрува и полученият непречистен продукт - 6.65 g се прекристализира от смес на 5 ml етилацетат и 20 ml петролев етер. Получава се 5.20 g (75%) BOC-Nva-Leu-OMe; m.m.l00-1010C, R( 2 = 0.84, [a]D25 = -47.50 ( c= 1%, в метанол).
етап. Трет-бутоксикарбонил-Б-норвалил-Б-левцинамид
5.0 g (14.5 mmol) BOC-Nva-Leu-OME се разтваря в 50 ml етанол и в разтвора се пропуска амонячен газ в продължение на 0.5 часа при охлаждане с лед. Разтворът престоява една нощ при стайна температура след това се охлажда отново, насища се с амонячен газ и се изпарява след престой от 4 часа. Кристалният остатък се прекристализира от смес на етилацетат и етер. Получава се 4,37 g (91%) BOC-Nva-Leu-NH2; m.m.l58-159°C, Rf 2 = 0.60, [a]D 25 =-48.7° (c = 1%, в метанол).
етап. Е-норвалил-Е-левцинамид хидрохлорид
4.12 g (12.5 mmol) BOC-Nva-Leu-NH2 се суспендира в 15 ml етилацетат. Към суспензията се прибавят 20 ml 6 η разтвор на солна киселина в етилацетат. След един час престой реакционната смес се разрежда с етер, отделената утайка се филтрува и полученият 3.64 g непречистен продукт се прекристализира от 25 ml метанол. Получава се 2.75 g (83%) НNva-Leu-NH2; m.m. 215-216°С, Rf5 = 0.45, [aJD25 = -4.47° (с = 1%,, в метанол).
етап. Бензилоксикарбонил-Б-пироглутамил-Б-норвалил-Б-левцинамид
2.67 g (10 mmol) H-Nva-Leu-NH2HC1 се разтваря в 30 ml DM FA u се добавят 1.4 ml (10 mmol) триетиламин. Отделената утайка се филтрува и към филтрата се добавя 4.72 g (11 mmol) Z-Glp-OPFP. След 5 min към сместа се добавя допълнително 1.4 ml (10 mmol) триетиламин и след 10 минути сместа се изпарява във вакуум. Остатъкът се стрива с етер и полученият 5.5 g непречистен продукт се прекристализира от етанол. Получава се 3.84 g (81%) Z-Glp-Nva-Leu-NH2; m.m. 241-242°С, Rf4 = 0.55, [a]D 25= -62.6° (c = 1%, в оцетна киселина).
етап. Е-пироглутамил-Е-норвалил-Елевцинамид
3.8 g (8 mmol) Z-Glp-Nva-Leu~NH2 се разтваря в 200 ml оцетна киселина, добавя се катализатор: 0.8 g 10% паладий върху въглен и през сместа се барботира водород в продължение на 1 час. Катализаторът се филтрува и гелоподобният остатък се стрива с етер. Получават се 2.7 g (99%) Glp-Nva-Leu-NH2; m.m 240°С (разлагане), Rf5 = 0.57, [aJD23 = 55.8° (с = 1%, в оцетна киселина).
Пример 6. L-пироглутамил-Е-норвалилL-изолевцинамид етап. Трет-бутоксикарбонил-Б-норвалил-Б-изолевцинамид
3.7 g (19 mmol) H-Ile-NH2HC1 се разтварят в DMFA и към разтвора при разбъркване се добавят 2.7 ml (19 mmol) триетиламин и 6.63 g (13 mmol) BOC-Nva-OPFP. След 5 min към сместа се добавя допълнително 2.4 ml (17.3 mmol) триетиламин, сместа се разбърква допълнително 10 min и се изпарява във вакуум. Остатъкът се разтваря в 10 ml хлороформ. Разтворът се измива два пъти с по 20 ml 1 η солна киселина, три пъти с по 20 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и след това с 20 ml вода, суши се над безводен натриев сулфат и се изпарява. Кристалният остатък се стрива с етер и се получава 4.7 g (83%) ВОСNva-Ile-NH2; m.m. 192-194°С, RfM).60, [a] D25 = -43.7® (c = 1%, в метанол).
етап. L-норвалил-Е-изолевцинамид хидрохлорид.
4.5 g (13.7 mmol) BOC-Nva-Ile-NH2 се суспендира в 20 ml етилацетат и към суспензията се добавя 12 ml 6 η разтвор на солна киселина в етилацетат. След един час престой сместа се разрежда с етер и отделената утайка се филтрува. Полученият 3.6 g непречистен продукт се прекристализира от смес на метанол и етер, за да се получат 3.5 g (96%) H-Nva-Ile-HH2.NC1; m.m.254-255°C, КР = 0.45, [a]D25 = +3.8° (c= 1 %, в метанол).
етап. Бензилоксикарбонил-Б-норвалил9
L-изолевцинамид
3.3 g (12.4 mmol) H-Nva-Ile-NH2.HC1 ce разтваря в 40 ml DMFA u към разтвор при разбъркване се добавят 1.74 ml (12.4 mmol) триетиламин и 5.85 g (13.6 mmol) Z-Glp-OPFP. След 5 минути към сместа се добавя още 1.74 ml (12.4 mmol) триетиламин, след което сместа желира за няколко секунди. Гелът се разрежда с етер и получената смес се съхранява 2 часа в хладилник и след това се филтрува. Получава се 5.1 g (86%) Z-Glp-Nva-Ile-NH2; m.m 252253°С, Rf4=0.60, [a] D25 = -57.5° (c=l %, в оцетна киселина).
етап.Ь-пироглутамил-Ь-норвалил-Ьизолевцинамид
4.75 g (10 mmol) Z-Glp-Nva-Ile-NH2 се разтваря в 200 ml оцетна киселина, добавя се 1 g катализатор 10% паладий върху въглен и в продължение на един час през сместа се барботира водород. Катализаторът се филтрува, филтратът се изпарява, след което остатъкът се стрива с етер. Получава се 3.34 g (98%) Glp-Nva-Ile-NH2; m.m. 267-270°С (разлагане), Rfs=0.61, [a] D25 = -50.2° (с = 1 %, в оцетна киселина) .
Пример 7. Ь-пироглутамил-Ь-норвалилL-метионинамид етап. Трет-бутоксикарбонил-Ь-норвалил-Ь-метионинметил естер.
BOC-Nva-OH отделен от 4.78 g (12 mmol) на съответната DCHA-сол, както е описано в 1-ви етап на пример 4, и 2.6 g 13 mmol) НMet-OMe.HCl се разтварят в 40 ml хлороформ. Добавя се 1.82 ml (13 mmol) триетиламин. Сместа се охлажда с лед и при разбъркване се добавя разтвор на 2.58 g (12.5 mmol) DCC в 20 ml хлороформ. Реакционната смес се оставя да престои през нощта при 5°С, след това отделеното количество DCU се филтрува. Филтратът се измива два пъти с по 20 ml 1 η солна киселина, три пъти с по 20 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и след това с 20 ml вода, изсушава се над безводен натриев сулфат и се изпарява. Масленият остатък се кристализира от петролев етер и полученият 3.42 g непречистен продукт се прекристализира от смес на етилацетат и петролев етер. Получава се 3.08 g (71%) BOC-Nva-Met-OMe; m.m. 6970°С, Rf2 = 0.81, [a]D25 = -42.7° (c = 1%, в метанол).
етап. Трет.бутоксикарбонил-Ь-норвалил-Ь-метионинамид
1.81 g (5 mmol) BOC-Nva-Met-OMe се разтваря в 20 ml метанол, и през разтвора се пропуска амонячен газ в продължение на 0.5 часа при охлаждане с лед. Реакционната смес се оставя през нощта при стайна температура и след това се съхранява няколко часа на студено. Отделеният кристален продукт се филтрува, за да се получат 1.27 g от желания продукт. Филтратът се изпарява и остатъкът се прекристализация от 5 ml етанол, за да се получи допълнително 0.35 g от продукта. Така се получава 1.62 g (93%) BOC-Nva-Met-NH2; m.m. 166-167°С, RP= 0.57, [а] О“=-40.90 (c= 1 %,в метанол).
етап. Ь-норвалил-Ь-метионинамидхидрохлорид
4.5 g (13 mmol) BOC-Nva-Met-NH2 се суспендира в 20 метилацетат и към суспензията се добавят 20 ml 6 η разтвор на солна киселина в етилацетат. След един час престой сместа се разрежда с етер, отделената утайка се филтрува и суши във вакуум над безводен натриев хидроксид. Получените 4 g непречистен продукт се прекристализират от смес на метанол и етер. Получава се 3.28 g (89%) H-Nva-Met-NH2.HC1; m.m. 198-200°С, Rf5 = 0.40, [a]D2^ +10.2° (c=l%, в метанол).
етап. Трет-бутоксикарбонил-Ь-глутамил-Ь-норвалил-Ь-метионинамид
2.84 g (10 mmol) H-Nva-Met-NH2.HC1 се суспендира в 40 ml DNFA и към суспензията се прибавят при разбъркване 1.4 ml (10 mmol) триетиламин и 4.53 g (11 mmol) ВОСGln-OPFP. След 5 min към сместа се прибавя още 1.4 ml (10 mmol) триетиламин и след допълнително разбъркване от 10 min гъстата суспензия се изпарява във вакуум. Твърдият остатък се стрива с етанол, за да се получи 4.82 g непречистен продукт. Това вещество се смесва с 50 ml етанол, сместа се загрява до кипене, охлажда се и получената суспензия се съхранява на хладно в продължение на няколко часа. Утайката се отфилтрува, за да се получи 4.08 g (86%) BOC-Gln-Nva-Met-NH2; m.m.237238°С, Rf4 = 0.43, [a]D25=-37.1° (c = 1%, в оцетна киселина).
етап. Ь-пироглутамил-Е-норвалил-Ьметионинамид
3.8 g (8 mmol) BOC-Gln-Met-Nva-NH2 се разтваря в 100 ml 98% мравчена киселина, разтворът се оставя да стои два часа при стайна температура и след това се изпарява във вакуум. Масленият остатък се разтваря в 50 ml оцетна киселина, разтворът се кипва за 2 min и след това се изпарява във вакуум. Гелоподобният остатък се стрива с етер, за да се получи 2.8 g (98%) Glp-Nva-Met-NH2; m.m. 249-250°С (разлагане), Rf5 = 0.58, (a]D25 = 48.4° (c = 1%, в оцетна киселина).
Пример 8. М-(Ь-пироглутамил-Ь-левцил)-пиролидин етап. 1Ч-(к-левцил)-пиролидинхидрохлорид
3.46 g (15 mmol) BOC-Leu-OH се разтваря в 50 ml етилацетат, прибавя се 2.1 ml (15 mmol) триетиламин и сместа се охлажда до 15°С. 1.97 ml (16 mmol) п и вал оил хлорид се добавя на капки към разбъркваната смес с такава скорост, че температурата да остане под 10°С, получената суспензия се бърка 10 минути и след това се прибавя на капки 1.37 ml (16.5 mmol) пиролидин при същата температура. След като приключи прибавянето, сместа се бърка при -10°С още 30 минути и след това се оставя да стои 3 часа при 5°С. Реакционната смес се разтръсква три пъти с по 10 ml In солна киселина, три пъти с по 10 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и след това се 10 ml вода, суши се над безводен натриев сулфат и се изпарява във вакуум. Масленият остатък се разтваря в 5 ml етилацетат и се прибавя 10 ml 5 η разтвор на солна киселина в етилацетат. След 1 час престой, разтворът се разрежда с етер и се екстрахира с вода. Водният разтвор се измива с етер, алкализира се с калиев карбонат и след това се екстрахира с хлороформ. Хлороформният разтвор се суши над безводен натриев сулфат, изпарява се, масленият остатък се разтваря в 10 ml етер и с концентриран разтвор на солна киселина в етилацетат, pH на разтвора се регулира на 3. Отделените кристали филтруват, за да се получи 2.41 g (73%) H-Leu-пиролидин. HCI; m.m. 170-174°С (разлагане), Rf5 =0.37.
етап. 1Ч-(бензилоксикарбонил-Ь-пироглутамил-Ь-левцил) -пиролидин.
1.7 g (7.7 mmol) H-Leu-пиролидин. HCI,3.0 g (7 mmol) Z-Glp-OPFP и 1.08 ml (7.7 mmol) триетиламин се разтварят в 20 ml хлороформ и след 5 минути към разтвора се прибавя още 0.98 ml (7 mmol) триетиламин. Разтворът се оставя да престои 5 минути, след което се разрежда с 30 ml хлороформ и се измива два пъти с по 10 ml In солна киселина, три пъти с по 10 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и накрая с 10 ml вода. Хлороформният разтвор се изсушава над безводен натриев сулфат. Масленият остатък се кристализира от n-хексан и получените 2.85 g непречистен продукт се прекристализират от смес на етанол и етер. Получава се 2.14 g (71%) Z-Glp-Leu-пиролидин; m.m. 109-110°С, Rf4 = 0.55, [3)^=-53.3° (с=1%, в оцетна киселина).
Анализ: изчислено за C23H3I05N3 (м.ш.: 429.52): С:64.32%, Н: 7.27%, N:9.78%; намерено: С:64.31%, Н:7.47%, N:9.78%.
етап. М-(пироглутамил-к-левцил)-пиролидин
2.0 g (4.66 mmol) Z-Glp-Leu-пиролидин се разтваря в 400 ml метанол, към разтвора се прибавят 0.4 g катализатор 10% паладий върху въглен и през сместа се барботира водород в продължение на 1 час. Катализаторът се филтрува, филтратът се изпарява, масленият остатък се разтваря в етер и разтворът се оставя да престои през нощта на хладно място. Отделените кристали се филтруват, за да се получи 1.25 g (91%) Glp-Leu-пиролидин; m.m,103-104°C, Rf5 = 0.65, [a]DM= -31.6° (c = 1%, в оцетна киселина). Анализ за аминокиселини: Glu=1.00 (1.0), Leu=1.00 (1.0).
Пример 9. 61-(1-пироглутамил-к-левцил)-пиперидин етап: М-(Ь-левцил)-пиперидинхидрохлорид
3.46 g (15 mmol) BOC-Leu-OH се разтваря в 50 ml етилацетат, прибавят се 2.1 ml (15 mmol) триетиламин и разтворът се охлажда до 15°С. Сместа се разбърква при същата температура и на капки се прибавят 1.97 ml (16 mmol) пивалоилхлорид, а след тях - 1.65 ml (16.5 mmol) пиперидин. Между въвеждането на двата реагента, сместа се разбърква за 10 минути. След като прибавянето приключи, сместа се разбърква още 30 минути при -10°С и след това се оставя да престои през нощта в хладилник. Отделената утайка се филтрува, филтратът се промива три пъти с по 10 ml In солна киселина, три пъти с по 10 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и след това с 10 ml вода, суши се над безводен натриев сулфат и се изпарява. Масленият остатък се разтваря в 15 ml 4 η разтвор солна киселина в етилацетат, сместа се оставя да престои 1 час, след това се разрежда с етер и през нощта се съхранява в хладилник. Утайката се филтрува, за да се получи 2.0 g (57%, изчислено за ВОСLeu-OH) H-Leu-пиперидин. HCI; m.m.123125°С, Rf5 = 0.45.
етап. М-(бензилоксикарбонил-Ь-пироглутамил-Ь-левцил)-пиперидин
1.81 g (7.7 mmol) H-Leu-пиперидин. HCI, 3.0 g (7 mmol) Z-Glp-OPFP и 1.08 ml (7.7 mmol) триетиламин се разтварят в 20 ml хлороформ и след 5 минути престой се добавя още 0.98 ml (7 mmol) триетиламин. Разтворът се оставя да престои още 5 минути, след това се разрежда с 30 ml хлороформ и се промива два пъти с по 10 ml 1 η солна киселина, три пъти с 1 η разтвор на натриев хидрогенкарбонат и накрая с 10 ml вода. Хлороформният разтвор се суши над безводен натриев сулфат и след това се изпарява. Получава се кристализиращо масло, което се стрива със смес от етер и п-хексан. Полученият 2.75 g непречистен продукт се прекристализира от смес на етанол и етер, за да се получи 2.21 g (71%) Z-Glp-Leuпиперидин; m.m.l 13-115°С, Rf4 = 0.69, [a]DM = -42.5° (с = 1%, в оцетна киселина).
Анализ: изчислено за C24H33O5N3 (м.т.: 443.55):С: 64.99%, Н: 7.50%,N:9.47%; намерено: С:64.90%, Н: 7.72%, N:9.53%.
етап: М-(Ь-пироглутамил-Е-левцил)пиперидин
2.0 g (4.51 mmol) Z-Glp-Leu-пиперидин се разтварят в 40 ml метанол, към разтвора се прибавят 0.4 g катализатор 10% паладий върху въглен и през сместа се барботира водород в продължение на един час. Катализаторът се отфилтрува, филтратът се изпарява и остатъкът се изкристализира от етер. Получават се
1.12 g (81 %) Glp-leu-пиперидин; m.m. 99-100°С, Rf5 = 0.71, [aJD25 = +30.4° (с = 1%, в оцетна киселина). Анализ за аминокиселини: Glu = 0.95 (1.0), Leu = 1.00 (1.0).
Пример 10. Е-тиазолидин-4-карбонил-Ьлевцил-Ь-пролинамид етап. Е-тиазолидин-4-карбонил-Е-левцил-И-пролинамид
5.13 g (22 mmol) ВОС-Тса-ОН и 4.05 g (22 mmol) PFPOH се разтварят в 60 ml етилацетат. При разбъркване и охлаждане с лед се добавя 4.12 g (20 mmol) DCC. Реакционната смес се бърка 2 часа при 0 до -5°С, след това утаеният DCU се филтрува и филтратът се изпарява. Масленият остатък се разтваря в 50 ml n-хексан, разтворът се промива пет пъти с по 25 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и два пъти с по 25 ml вода, суши се над безводен натриев сулфат и след това се изпарява. Получените 7.32 g маслен ВОС-ТсаOPFP се разтварят в 20 ml DMFA и разтворът се излива в суспензия от 5.23 g (20 mmol) НLeu-Pro-NH2.HC1 в 30 ml DMFA. Към разбъркваната смес, охлаждана с лед, се прибавя 2.8 ml (20 mmol) триетиламин. След 5 минути се добавя още 2.8 ml (20 mmol) триетиламин, сместа се бърка още 20 минути и след това се изпарява във вакуум. Масленият остатък се разтваря в 100 ml хлороформ, разтворът се разклаща три пъти с по 30 ml In солна киселина, три пъти с по 30 ml на In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и после с 30 ml вода, суши се над безводен натриев сулфат и се изпарява, за да се получи 8.84 g ВОС-ТсаLeu-Pro-NH2 като маслен остатък. Това вещество се разтваря в 15 ml етилацетат и се прибавя 15 ml 6п разтвор на солна киселина в етилацетат. След 1 час престой, реакционната смес се разрежда с етилацетат, отделената утайка се стрива, филтрува се и се суши във вакуум над безводен натриев хидроксид. Получените 8.05 g трипептидамидхидрохлорид се разтварят в 80 ml вода, разтворът се разклаща три пъти с по 20 ml етер, pH на водната фаза се регулира на 8 с натриев хидрогенкарбонат и алкалният разтвор се екстрахира пет пъти с по 20 ml хлороформ. Хлороформните разтвори се обединяват, изсушават над безводен натриев сулфат и изпаряват. Остатъкът се стрива с етер, за да се получат 5.20 g (76%) H-Tca-Leu-Pro-NH2; m.m. 159-160«С, Rf5 = 0.63, [a[D25 = - 162.9° (c= 1 %, в оцетна киселина).
Пример 11. Ь-2-кетоимидазолидин-4карбонил-Е-левцил-Е-пролинамид етап. Пентафлуорофенилов естер на бензилоксикарбонил-Е-2-кетоимидазолидин-4карбоксилна киселина.
10.56 g (40 mmol) Z-Kic-OH и 8.09 g(44 mmol) PFPOH се разтварят в 100 ml смес 1:2 на DMFA и диоксан и към разбърквания разтвор, охлаждан с лед, се добавя 9.06 g (44 mmol) DCC. Реакционната смес се бърка 1.5 часа при 0-5°С, след това отделеният DCU се филтрува и филтратът се изпарява. Масленият остатък изкристализира от n-хексан и получените 16.46 g непречистен продукт се прекристализират от 50 ml етилацетат. Получава се 12.75 g (74%) Z-Kic-OPFP; m.m. 146-148°C, Rf1 = 0.53, [a]D25 = -42.1° (c = 1 %, в етилацетат).
Анализ: изчислено за С18Нп05М2Р5 (м.т.: 430.29): С: 50.25%, Н: 2.58, N: 6.51%, F: 22.08%; намерено: С: 49.88%, Н: 2.35%, N: 6.66%, F: 21.81%.
етап. Бензилоксикарбонил-Ь-2-кетоимидазолин-4-карбонил-Б-левцил-Б-пролинамид
2.38 g (9 mmol) H-Leu-Pro-NH2.HC1 се суспендира в 30 ml DNFA и към суспензията се прибавят 3.87 g (9 mmol) Z-Kic-OPFP и 1.26 ml (9 mmol) триетиламин. След 5 минути бъркане се прибавят допълнително 1.26 ml (9 mmol) триетиламин, сместа се бърка още 20 минути и после се изпарява във вакуум. Остатъкът се разтваря в 50 ml хлороформ, разтворът се разклаща два пъти с по 10 ml In солна киселина и три пъти с по 10 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат, суши се над безводен натриев сулфат и се изпарява. Масленият остатък изкристализира от етер. Получените 3.31 g непречистен продукт се варят в 30 ml етилацетат, суспензията се оставя за няколко часа да изстине и след това твърдото вещество се филтрува. Получава се 3.0 g (70%) Z-Kic-LeuPro-NH2; m.m. 172-174°C, Rf^O.ie, [aJD^102.6° (c = 1%, в оцетна киселина).
Анализ: изчислено за C23H3|06N5 (м.т.: 473.50): С:58.34%, Н: 6.60%, N: 14.79%; намерено: С: 57.52%, Н: 6.62%, N: 14.62%.
етап. Ь-2-кетоимидазолидин-4-карбонил-L-левцил- L- пролинамид
1.2 g (2.54 mmol) Z-Kic-Leu-Pro-NH2 се разтваря в 30 ml вода, прибавят се 0.25 g катализатор 10% паладий върху въглен и през сместа се барботира водород в продължение на 4 часа. Катализаторът се филтрува, филтратът се изпарява и аморфният остатък се суши във вакуум над фосфорен пентоксид. Получените 0.75 g непречистен продукт се разтварят във вода, разтворът се обезцветява, филтрува и бистрият филтрат се суши чрез замразяване. Получава се 0.61 g (71%) KicLeu-Pro-NH2; Rf5 = 0.35, [aJD25 = -90.4° (c = 1 %, в оцетна киселина).
Пример 12. Б-6-кетопиперидин-2-карбонил-Ь-левцил-Б-пролинамид етап. Пентафлуорофенилов естер на L-6-кетопипеколинова киселина
4.3 g (30 mmol) L-6-кетопипеколинова киселина и 6.07 g (33 mmol) PFPOH се разтварят в 100 ml хлороформ и към разбърквания разтвор, при охлаждане с лед, се прибавя 6.8 g (33 mmol) DCC. Реакционната смес се бърка при 0°С в продължение на 1 час и след това се оставя през нощта в хладилник. Отделеното DCU се филтрува, филтратът се изпарява и кристалинният остатък се стрива с п-хексан. Получените 9.87 g непречистен продукт се разтварят в 20 ml етилацетат, разтворът се поставя в хладилник за 1 час, след което се обезцветява с въглен, филтрува се и филтратът се изпарява. Масленият остатък се разтваря в смес от 5 ml етилацетат и 20 ml n-хексан, разтворът се оставя през нощта в хладилник, отделените кристали се филтруват. Получава се
6.34 g (68.5%) Kpc-OPFP; m. m.=96-99°C, [a] D25^-30.0° (c= 1%, в етилацетат).
Анализ: изчислено за C12H803NF3 (м.т.: 309.20): С:46.62%,Н: 2.61%, N:4.53%, F: 30.72%; намерено: С:46.37%, H:2.88%,N: 4.26%, F: 30.51%.
етап. Ь-6-кетопиперидин-2-карбонилЬ-левцил-Ь-пролинамид
1.32 g (5 mmol) H-Leu-Pro-NH2.HC1 се суспендира в 20 ml DMFA и към разбъркваната суспензия, охлаждана с лед, се прибавят
l. 61 g (5.2 mmol) Kpc-OPFP и 0.7 ml (5 mmol) триетиламин. След 5 минути бъркане се прибавя допълнително 0.7 ml (5 mmol) триетиламин, сместа се бърка още 20 минути и после се изпарява във вакуум. Кристалинният остатък се стрива с етер, кристалите се филтруват и се промиват с етер и студен хлороформ. Получава се 1.27 g (72%) Kpc-Leu-Pro-NH2;
m. m. 214-216-ОС, RF=0.41, [3)0^ = -80.3° (с = 1 %, в оцетна киселина). Анализ за аминокиселини: α-амино-адипинова киселина: 0.99 (1.0), Leu: 1.00(1.0), Рго:0.98 (1.0).
Пример 13. Е-6-кетопиперидин-2-карбонил-L-норвал ил-L-пролинамид
2.38 g (9.5 mmol) H-Nna-Pro-NH2.HC1 се суспендира в 30 ml DMFA и към разбъркваната суспензия, охлаждана с лед, се прибавят 3.09 g (10 mmol) Kpc-OPFP и 1.33 ml (9.5 mmol) триетиламин, сместа се бърка още 20 минути и после се изпарява във вакуум. Кристалинният остатък се стрива с етер, филтрува се и се промива със студен алкохол върху филтъра. Получените 3.66 g непречистен продукт се разтварят във вода, разтворът се обезцветява, филтрува, бистрият филтрат се изпарява и кристалинният остатък се стрива с 10 ml алкохол. Сместа се оставя да престои на хладно място и след това веществото се филтрува. Получава се 2.10 g (65%) Kpc-Nva-Pro-NH2; m.m,192-193°C, Rf5 = 0.31, [a]D25= -83.2° (c = 1 %, в оцетна киселина).
Пример 14. О-пироглутамил-Ь-левцилL-пролинамид етап. Пентафлуорфенилов естер на бензилоксикарбонил-О-пироглутаминова киселина.
4.55 g (18 mmol) Z-D-Glp-OH и 3.68 g (20 mmol) PFPOH се разтварят в 50 ml етилацетат и към разбърквания разтвор, охлаждан с лед, се прибавя 4.12 g (20 mmol) DDC. Реакционната смес се бърка при 0°С в продължение на един час, отделеното DCU се филтрува, филтратът се изпарява и масленият остатък се изкристализира от n-хексан. Получените 7.3 g непречистен продукт се разтварят в 20 ml етилацетат, разтворът се оставя за един час в хладилник, обезцветява се с въглен, филтрува се и филтратът се изпарява. Масленият остатък се разтваря в 5 ml етилацетат и продуктът се утаява от разтвора с 20 ml n-хексан. Получава се 6.60 g (85%) Z-D-Glp-OPFP; m.m.: 8182°С, Rf‘=0.84, [a] D2^ +40.1° (c= 1 %, в етилацетат) .
Анализ: изчислено за Ο19Η12Ο5ΝΡ5 (м.т.: 429.30):С:53.16%, Н;2.82%, Ν: 3.26%, F:22.13%, намерено: С:53.28%, Н: 3.04%, N: 3.02%,F: 21.86%.
етап. Бензилоксикарбонил-О-пироглутамил-Ь-левцил-Б-пролинамид
3.24 g (9.5 mmol) H-Leu-Pro-NH2.HC1 се суспендира в 50 ml DMFA и към разбъркваната суспензия, охлаждана с лед, се прибавят
5.6 g (13 mmol) Z-D-Glp-OPFP и 1.72 ml (12.3 mmol) триетиламин. След 5 минути бъркане се прибавят допълнително 1.33 ml (9.5 mmol) триетиламин. След 5 минути бъркане се прибавя допълнително 1.72 ml (12.3 mmol) триетиламин, сместа се бърка още 20 минути и след това се изпарява във вакуум. Остатъкът се разтваря в 120 ml хлороформ, разтворът се разклаща два пъти с по 30 ml In солна киселина, три пъти с по 10 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат и след това с 30 ml вода, суши се над безводен натриев сулфат и накрая се изпарява. Масленият остатък изкристализира от етер, за да се получат 5.31 g непречистен продукт. Непречистеният продукт се вари в 50 ml етилацетат, суспензията се държи 3 часа в хладилник и утайката се филтрува. Получава се 4.61 g (80%) Z-D-Glp-Leu-ProNH2; m.m. 189-194°C, RfM).44, [a[D25=- 31.2° (c = 1%, в оцетна киселина).
етап. О-пироглутамил-Б-левцил-Ьпролинамид
4.48 g (9.5 mmol) Z-D-Glp-Leu-Pro-NH2 се разтваря в 200 ml метанол, към разтвора се прибавя 0.9 g катализатор 10% паладий върху въглен и през сместа се барботира водород в продължение на един час. Катализаторът се филтрува, филтратът се изпарява и аморфният остатък се стрива с етер. Получените 3.07 g непречистен продукт се разтварят във вода, разтворът се обезцветява, филтрува и бистрият филтрат се суши чрез замразяване. Получава се 2.90 g (90.5%) D-Glp-Leu-ProNH2; Rf5 = 0.40, [a]Dy = -23.6° (c = 1%, в оцетна киселина).
Пример 15. Амид на оротил-Ь-хистидил-Ь-пипеколинова киселина етап. Оротил-Ь-хистидин метилов естер
24.2 g (100 mmol) H-His-OMe.2HCl се разтваря в 120 ml смес на DMFA и диоксан 1:1 и към разтвора се прибавя 17.41 g (100 mmol) монохидрат и оротовата киселина. Разтворът се охлажда до 0°С и се прибавят
11.5 g (100 mmol) N-хидроксисукцинимид, 11.1 ml (100 mmol) N-метилморфолин и накрая 20.6 g (100 mmol) DCC. Реакционната смес се бърка 1 час при 0°С и през нощта при стайна температура. След това сместа се държи 2 часа в хладилник, отделеният DCU се филтрува и филтратът се изпарява. Остатъкът изкристализира от вода, кристалите се филтруват и промиват върху филтъра с 5 % воден разтвор на лимонена киселина и вода. Получава се
11.6 g (38%) Oro-His-OMe; m.m. 258-262°С, Rf5 = 0.40.
Анализ: изчислено за C12H1305N5 (M.m.: 307.27):N: 22.79%, намерено: Ν: 22.51%.
етап. Оротил-хистидин-хидразид
9.21 g (30 mmol) Oro-His-OMe се разтваря в 120 ml DMFA и в разтвора се излива
7.35 ml (150 mmol) хидразинхидрат. Реакционната смес се оставя да престои 2 дена при стайна температура, след това се разрежда със 100 ml етилацетат и се оставя през нощта в хладилник. Отделената утайка се филтрува и непречистеният продукт се прекристализира от метанол. Получава се 8.07 g (88%) Ого
His-N2H3; m.m.250-260°C, RF=0.35.
Анализ: изчислено за CUH13O4N7 (м.т.: 307.28): Ν: 31.91%, намерено: Ν: 30.75%.
етап. Амид на оротил-Ь-хистидил-Ьпипеколинова киселина
5.0 g (16.28 mmol) Oro-His-N2H3 се суспендира в 135 ml DMFA и в суспензията се излива 5.99 ml 8.1 η разтвор на солна киселина в диоксан (=48.84 mmol НС1). Полученият разтвор се охлажда до -15°С, при разбъркване се добавя на капки 2.13 ml (17.9 mmol) третбутилнитрит. След това сместа се бърка 20 минути при -10°С и към нея се прибавят на капки 4.56 ml (32.56 mmol) триетиламин, разтвор на 2.05 g (16.28 mmol) H-Pip-NH2 в 10 ml DMFA и накрая още 2.28 ml (16.28 mmol) триетиламин при -10°С. След като добавянето приключи, сместа се бърка при -10°С още 1 час и след това се оставя през нощта при 2°С. Утайката се филтрува, филтратът се изпарява във вакуум и остатъкът се стрива с етилацетат. Получава се 4.6 g (74%) непречистен продукт. 1.3 g от този продукт се подават на колона, напълнена със смес от карбоксиметилцелулоза 23 и карбоксиметилцелулоза 52 в съотношение 1:1 и колоната се елуира с 0.005 до 0.1 моларен воден разтвор на амониев ацетат (рН=5). Фракциите, които съдържат чистия продукт, се обединяват и сушат чрез замразяване, за да се получат 820 mg аморфен Oro-His-Pip-NH2; Rf5 = 0.10, [a] D24 = -19.00 (c= 1%, във вода). Анализ за аминокиселини: His: 1.00 (1.0), Pip: 0.94 (1.0).
Пример 16. Амид на оротил-Ь-хистидилD-пипеколинова киселина
5.0 g (16.28 mmol) Oro-His-N2H3 се суспендира в 135 ml DMFA и в суспензията се излива 5.99 ml 8.1 η разтвор на солна киселина в диоксан (=48.84 mmol НС1). Полученият разтвор се охлажда до -15°С, при разбъркване се добавя на капки 2.13 ml (17.9 mmol) третбутилнитрит. След това сместа се бърка 20 минути при -10°С и към нея се прибавят на капки 4.56 ml (32.56 mmol) триетиламин, разтвор на 2.05 g (16.28 mmol) H-D-Pip-NH2 в 10 ml DMFA и накрая още 2.28 ml (16.28 mmol) триетиламин при -10°С. След като добавянето приключи, сместа се бърка при -10°С още 1 час и след това се оставя през нощта при 2°С. Утайката се филтрува, филтратът се изпарява във вакуум и остатъкът се стрива с етилацетат. Получава се 4.1 g (66%) непречистен продукт.
1.3 g от този продукт се подават на колона, напълнена със смес от карбоксиметилцелулоза 23 и карбоксиметилцелулоза 52 в съотношение 1:1 и колоната се елуира с 0.005 до 0.1 моларен воден разтвор на амониев ацетат (рН=5). Фракциите, които съдържат чистия продукт, се обединяват и сушат чрез замразяване, за да се получат 795 mg аморфен ОгоHis-D-Pip-NH2; Rf5 = 0.10, [a]D24= +13.5° (с = 1%, във вода). Анализ за аминокиселини: His: 1.00 (1.0), Pip: 0.96 (1.0).
Пример 17. Оротил-Ь-хистидил-Ь-хомопролинамид
5.0 g (16.28 mmol) Oro-His-N2H3 се суспендира в 135 ml DMFA и в суспензията се излива 5.99 ml 8.1 η разтвор на солна киселина в диоксан (=48.84 mmol НС1). Полученият разтвор се охлажда до -15°С и при разбъркване се добавя на капки 2.13 ml (17.9 mmol) третбутилнитрит. След това сместа се бърка 20 минути при -10 °C и към нея се прибавят на капки 4.56 ml (32.56 mmol) триетиламин, разтвор на 2.05 g (16.28 mmol) H-HPro-NH2 в 10 ml DMFA и накрая още 2.28 ml (16.28 mmol) триетиламин при -10°С. След като добавянето приключи, сместа се бърка при -10°С още 1 час и след това се оставя през нощта при 2°С. Утайката се филтрува, филтратът се изпарява във вакуум и остатъкът се стрива с етилацетат. Получава се 4.2 g (67%) непречистен продукт.
1.3 g от този продукт се подават на колона, напълнена със смес от карбоксиметилцелулоза 23 и карбоксиметилцелулоза 52 в съотношение 1:1 и колоната се елуира с 0.005 до 0.1 моларен воден разтвор на амониев ацетат (рН=5). Фракциите, които съдържат чистия продукт, се обединяват и сушат чрез замразяване, за да се получат 802 mg аморфен Oro-His-HPro-NH2; RF = 0.10, [a] D24= 12.8° (c = 1%, във вода). Анализ за аминокиселини: His: 1.00 (1.0), НРго: 0.96 (1.0).
Пример 18. Амид на L-6-кетопиперидин2-карбонил-Е-норвалил-Ь-тиазолидин-4-карбоксилна киселина
2.55 g (9.5 mmol) H-Nva-Tca-NH2.HC1 се суспендира в 30 ml DMFA и към разбъркваната суспензия, охлаждана с лед, се прибавят 3.09 g (10 mmol) Kpc-OPFP и 1.33 ml (9.5 mmol) триетиламин. След 5 минути бъркане се прибавя допълнително 1.33 ml (9.5 mmol) триетиламин, сместа се бърка още 20 минути и после се изпарява във вакуум. Масленият остатък се покрива с етер и се оставя през нощта в хладилник, при което продуктът кристализира. Кристалите се филтруват, мият се с етер и студен алкохол и непречистеният продукт, тежащ 3.25 g, се разтваря във вода. Разтворът се обезцветява, филтрува се, филтратът се изпарява и непречистеният остатък се стрива с 20 ml етанол. Сместа се оставя да престои през нощта на хладно място, твърдото вещество се филтрува. Получава се 2.0 g (59%) Kpc-NvaTca-NH2; m.m.l83-185°C, Rf5=0.47, [a]D25 = 136.00 (c=l%, в оцетна киселина).
Пример 19. Ь-6-кетопиперидин-2-карбонил-Ь-норвалил-Ь-хомопролинамид етап. 2.29 g (10 mmol) BOC-HPro-OH се разтваря в 30 ml етилацетат, към разтвора се прибавя 1.4 ml (10 mmol) триетиламин, сместа се охлажда до -10°С и след това на капки се прибавя 1.3 ml (10 mmol) изобутилхлорформат. След 15 минути бъркане в реакционната смес се вкарва амонячен газ в продължение на 0.5 часа при -10°С и след това сместа се оставя да стои 2 часа при 0-5 °C. Утайката се филтрува, филтратът се изпарява и масленият остатък се разтваря в 30 ml хлороформ. Този разтвор се промива 2 пъти с по 10 ml In солна киселина, 2 пъти с по 10 ml 1 η разтвор на натриев хидрогенкарбонат и след това с 10 ml вода, суши се над безводен натриев сулфат и се изпарява. Масленият остатък изкристализира от п-хексан, за да се получи 1.95 g непречистен продукт. Този непречистен продукт се прекристализира от смес на етилацетат и етер, за да се получи
l. 78 g (78%) BOC-HPro-NH2; m.m. 138-140°С, Rf2 = 0.43, [aJD2* = -24.85° (c = 1%, в оцетна киселина). Анализ: изчислено за ChH2OO3N2 (м.т.: 228.29): С: 57.87%, Н: 8.83%, N: 12.27%, намерено: С: 57.60%, Н: 8.89%, N: 12.11%.
етап. L-хомопролинамидхидрохлорид
1.6 g (7 mmol) ВОС-НРго-МН2 се разтваря в 10 ml топъл етилацетат. Разтворът се охлажда до стайна температура и се прибавя 10 ml 6п разтвор на солна киселина в етилацетат. Реакционната смес се оставя да престои един час, след това се разрежда с етер, отделената утайка се стрива и се филтрува. Получава се 1.05 g (91%) H-HPro-NH2.HCl
m. m,178-180°C, Rf6 = 0.32, [a] D25 = +26.2° (c= 1 %, метанол).
етап. Ь-норвалил-Ь-хомопролинамидхидрохлорид
0.99 g (6 mmol) H-HPro-NH2.HCl се суспендира в 20 ml DMFA и към суспензията се прибавя с бъркане 0.84 ml (6 mmol) триетиламин и 2.3 g (6 mmol) BOC-Nva-OPFP. След 15 минути се прибавя допълнително 0.84 ml (6 mmol) триетиламин, сместа се бърка още 1 час и след това се изпарява във вакуум. Остатъкът се разтваря в 50 ml хлороформ, разтворът се промива 2 пъти с по 10 ml In солна киселина 2 пъти с по 10 ml In разтвор на натриев хидрогенкарбонат, суши се над безводен натриев сулфат и се изпарява. Масленият остатък се разтваря в 6 ml етилацетат и се прибавят 10 ml 6п разтвор на солна киселина в етилацетат. След един час престой сместа се разрежда с етер, отделената аморфна утайка се стрива с разтворителя, филтрува се и се суши във вакуум над безводен натриев хидроксид. Получава се 1.22 g (89.5%) НNva-HPro-NH2.HCl, Rf5=0.12.
етап. Е-6-кетопиперидин-2-карбонилL-норвалил- L-хомопролинамид
1.22 g (5.37 mmol) H-Nva-HPro-NH2.HCl се разтваря в 20 ml DMFA и към разтвора се прибавя 0.75 ml (5.37 mmol) триетиламин и
1.7 g (5.5 mmol) Kpc-OPFP. След 5 минути бъркане се прибавя допълнително 0.75 ml (5.37 mmol) триетиламин, сместа се бърка още 20 минути и след това се изпарява във вакуум. Остатъкът се стрива с етер, отделените 1.8 g аморфен непречистен продукт се подават на колана,, напълнена с 40 g силикагел и колоната се елуира със смес от разтворители (4). 1.11 g от желания продукт се изолират от фракциите, които съдържат това съединение в чисто състояние. Веществото се разтваря във вода, разтворът се обезцветява, филтрува и бистрият филтрат се суши чрез замразяване. Получава се 1.0 g (53%) Kpc-Nva-HPro-NH2; Rf5 = 0.35, [aJD25 —44.6° (c = 1%, в оцетна киселина).

Claims (11)

  1. Патентни претенции:
    1. Пептиди с обща формула x-y-w-nh2
    X представлява групата L-пироглутамил, D-пироглутамил, L-2-кетоимидазолидин4-карбонил, L-6-кетопипеколил, L-тиазолидин-4-карбонил, L-пролил или оротил;
    Y представлява групата L-левцил или
    L-норвалил и
    W представлява групата D-пролил, Lтиазолидин-4-карбонил, L-хомопролил, Lлевцил, L-изолевцил, L-метионил, L-пипеколил или D-пипеколил, или W-NH2-rpynaTa означава пиролидил или пиперидил, или техен фармацевтично приемлив комплекс.
  2. 2. Амид на Ь-пироглутамил-Ь-левцилL-пипеколинова киселина.
  3. 3. Амид на Ь-пироглутамил-Ь-левцилЬ-тиазолидин-4-карбоксилна киселина.
  4. 4. Амид на Ь-пироглутамил-Ь-норвалилЬ-тиазолидин-4-карбоксилна киселина.
  5. 5. Ь-2-кетоимидазолидин-4-карбонил-Ьлевцил-Бпролинамид.
  6. 6. к-6-кетопиперидин-2-карбонил-Е-лсвцил-Ь-пролинамид.
  7. 7. Ь-6-кетопиперидин-2-карбонил-Ьнорвалил - L-пролинамид.
  8. 8. О-пироглутамил-Ь-левцил-Ь-пролинамид.
  9. 9. Амид на Ь-6-кетопиперидин-2-карбонил-Ь-норвалил-Ь-тиазолидин-4-карбоксилна киселина.
  10. 10. Ь-6-кетопиперидин-2-карбонил-Е- норвалил-Ь-хомопролинамид.
  11. 11. Фармацевтичен състав за приложение при (а) намаляване продължителността на съня, причинен от барбитурати или алкохол, 5 и/или (б) потискане на хипотермията, предизвикана от различни лекарства и/или (в) повишаване на двигателната активност и/или (г) забавяне на каталепсията, предизвикана от халоперидол, съдържащ ефективно коли10 чество от активно вещество, включващо наймалко едно съединение с формула X-Y-W-NH2, в която
    X представлява групата L-пироглутамил, О-пироглутамил,Ь-2-кетоимидазолидин-4-карбонил, L-6-кетопипеколил, Ь-тиазолидин-4карбонил, L-пролил или оротил;
    Y представлява групата L-левцил или L-норвалил и
    W представлява групата D-пролил, Lтиазолидин-4-карбонил, L-хомопролил, L-левцил, L-изолевцил, L-метионил, L-пипеколил или D-пипеколил, или W-NH2-rpynaTa означава пиролидил или пиперидил, или негов фармацевтично приемлив комплекс и фармацевтичен носител или разредител.
BG98367A 1979-06-28 1994-01-10 Трипептиди,влияещи върху централната нервна система и метод за тяхното получаване BG60739B2 (bg)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU79RI718A HU180926B (en) 1979-06-28 1979-06-28 Process for preparing trh analogues,tripeptide amides infectives on the central nerve sysrhem

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BG60739B2 true BG60739B2 (bg) 1996-01-31

Family

ID=11001101

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG98367A BG60739B2 (bg) 1979-06-28 1994-01-10 Трипептиди,влияещи върху централната нервна система и метод за тяхното получаване

Country Status (23)

Country Link
US (1) US4386073A (bg)
JP (1) JPS568354A (bg)
AT (1) AT380259B (bg)
AU (1) AU538621B2 (bg)
BE (1) BE884015A (bg)
BG (1) BG60739B2 (bg)
CA (1) CA1188296A (bg)
CH (1) CH650519A5 (bg)
CS (1) CS241028B2 (bg)
DD (1) DD151745A5 (bg)
DE (1) DE3024256A1 (bg)
DK (1) DK149610C (bg)
FI (1) FI73224C (bg)
FR (1) FR2460291A1 (bg)
GB (1) GB2058079B (bg)
HU (1) HU180926B (bg)
IL (1) IL60406A (bg)
IT (1) IT1174678B (bg)
NL (1) NL192575C (bg)
PL (1) PL123822B1 (bg)
SE (1) SE447389B (bg)
SU (1) SU1085505A3 (bg)
YU (1) YU43220B (bg)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU184481B (en) * 1981-10-02 1984-08-28 Richter Gedeon Vegyeszet Process for producing tripeptides for diminishing appetite
CA1256650A (en) * 1983-03-25 1989-06-27 Toshinari Tamura Process of producing 2-azetidinone-4-substituted compounds, and medicaments containing the compounds
GB2146026A (en) * 1983-09-07 1985-04-11 Tanabe Seiyaku Co Peptides and process for preparing the same
JPS60190795A (ja) * 1984-03-09 1985-09-28 Takeda Chem Ind Ltd ペプタイド
US4608365A (en) * 1984-03-30 1986-08-26 University Of Southern California Treatment of neurologic functions
US4719207A (en) * 1984-06-25 1988-01-12 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. CNS active substituted azetidinone compounds
IL75641A (en) * 1984-07-10 1990-11-05 Tanabe Seiyaku Co 1-methyl-4,5-dihydro-orotyl-histidyl-prolinamide,its preparation and pharmaceutical compositions comprising it
IE58849B1 (en) * 1984-12-18 1993-11-17 Gruenenthal Chemie Use of dipeptide derivatives for the manufacture of medicaments for the treatment of patients with amyotrophic lateral sclerosis
JPS6222797A (ja) * 1985-07-19 1987-01-30 Tanabe Seiyaku Co Ltd 新規ペプタイド
IT1202426B (it) * 1987-01-26 1989-02-09 Poli Ind Chimica Spa Derivato di acido tiazolidin-4-carbossilico,sua preparazione e composizioni farmaceutiche che lo contengono
JPH06104079B2 (ja) * 1988-07-14 1994-12-21 日東紡績株式会社 新規な酵素活性測定用基質
FR2649110B1 (fr) * 1989-06-29 1994-10-21 Adir Nouveaux derives peptidiques, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP0473993B1 (en) * 1990-08-17 1996-04-17 Japan Tobacco Inc. Novel peptide derivatives and their pharmaceutical use
HU206374B (en) * 1990-09-03 1992-10-28 Richter Gedeon Vegyeszet Process for producing pentapeptide and its salts specifically inhibiting proliferation of epidermic cells, as well as pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient
IT1244548B (it) * 1991-02-06 1994-07-15 Poli Ind Chimica Spa Derivati della 5-oxo-l-prolina e loro applicazioni farmaceutiche
US20050233973A1 (en) * 1997-10-09 2005-10-20 Albert Sattin Tri-peptides for antidepressant applications
US20020151502A1 (en) * 1997-10-09 2002-10-17 Albert Sattin Tri-peptides for neurological and neurobehavior applications
US20030175350A1 (en) * 2000-07-11 2003-09-18 Katsuji Sugita Enteric preparations containing physiologically active peptides
EP1321151A4 (en) * 2000-08-31 2009-07-15 Shionogi & Co MEANS FOR THE TREATMENT OF PARKINSON
US8143369B2 (en) * 2009-06-02 2012-03-27 International Business Machines Corporation Polymers bearing pendant pentafluorophenyl ester groups, and methods of synthesis and functionalization thereof
JP6847948B2 (ja) * 2016-07-14 2021-03-24 昭和電工株式会社 メラニン産生抑制剤、美白剤、線維芽細胞活性化剤、コラーゲン及び／又はエラスチン産生促進剤、及びシワ改善剤

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2343037A1 (de) * 1973-08-25 1975-03-06 Hoechst Ag Arzneimittel mit antidepressiver wirkung
US3959248A (en) * 1974-04-03 1976-05-25 Merck & Co., Inc. Analogs of thyrotropin-releasing hormone
DE2449167C2 (de) * 1974-10-16 1984-05-24 Grünenthal GmbH, 5190 Stolberg N-Acyl-L-histidyl-L-prolinamide, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zubereitungen
SE408300B (sv) * 1974-10-16 1979-06-05 Gruenenthal Chemie Sett att framstella nya dipeptidderivat
JPS5944308B2 (ja) * 1976-03-23 1984-10-29 武田薬品工業株式会社 ペプタイド

Also Published As

Publication number Publication date
BE884015A (fr) 1980-12-29
AU5972080A (en) 1981-01-08
DD151745A5 (de) 1981-11-04
NL8003766A (nl) 1980-12-30
GB2058079A (en) 1981-04-08
JPS568354A (en) 1981-01-28
DE3024256A1 (de) 1981-01-08
IL60406A (en) 1984-10-31
NL192575B (nl) 1997-06-02
FI73224C (fi) 1987-09-10
CA1188296A (en) 1985-06-04
SE8004745L (sv) 1980-12-29
DK149610B (da) 1986-08-11
IT1174678B (it) 1987-07-01
SU1085505A3 (ru) 1984-04-07
JPH0159278B2 (bg) 1989-12-15
NL192575C (nl) 1997-10-03
FR2460291A1 (fr) 1981-01-23
SE447389B (sv) 1986-11-10
IL60406A0 (en) 1980-09-16
IT8023097A0 (it) 1980-06-26
YU169580A (en) 1984-04-30
DE3024256C2 (bg) 1991-01-24
PL225269A1 (bg) 1981-05-08
DK149610C (da) 1987-05-04
ATA334780A (de) 1985-09-15
YU43220B (en) 1989-06-30
FI73224B (fi) 1987-05-29
CS241028B2 (en) 1986-03-13
AT380259B (de) 1986-05-12
DK274580A (da) 1980-12-29
FI802058A (fi) 1980-12-29
CS458380A2 (en) 1985-06-13
FR2460291B1 (bg) 1984-11-23
US4386073A (en) 1983-05-31
GB2058079B (en) 1983-03-02
CH650519A5 (de) 1985-07-31
AU538621B2 (en) 1984-08-23
PL123822B1 (en) 1982-11-30
HU180926B (en) 1983-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG60739B2 (bg) Трипептиди,влияещи върху централната нервна система и метод за тяхното получаване
IE60128B1 (en) Hydroxylamine derivatives,their preparation and use as medicaments
US4086219A (en) Nonapeptides and methods for their production
US4299821A (en) Tripeptides acting on the central nervous system and a process for the preparation thereof
CA1158236A (en) Process for the preparation of novel substituted phenylacetic acid amide compounds
US4060603A (en) Histidine derivatives
GB2077719A (en) (N-(Cycloalkyl)amino acid compounds and compositions containing same
KR890002085B1 (ko) 디히드로오로트산 유도체의 제조방법
US6265381B1 (en) Orally-active elastase inhibitors
US4111923A (en) Octapeptides and methods for their production
SE461042B (sv) Peptider med tillvaextbefraemjande aktivitet jaemte veterinaera kompositioner innehaallande naemnda peptider
US4456594A (en) N-Carboxyalkylproline-containing tripeptides
FR2595705A1 (fr) Derives de gonadoliberine contenant un acide aminocarboxylique aromatique en position 6, compositions pharmaceutiques et veterinaires les contenant et procede pour les preparer
US4400511A (en) 2-Substituted octahydropyrrolo(1,2-A)-pyrazine-3-carboxylic acids
US5508385A (en) Tripeptide derivatives containing pyroglutamic acid residue
HU181402B (en) Process for preparing new peptides with psychopharmacological activity
WO1988005049A1 (en) Novel compounds
EP0207680B1 (en) Chemical compounds
IE44485B1 (en) Dipeptide derivatives
GB2109796A (en) Anorexigenic tripeptides, process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them
EP0080283A1 (en) N-carboxyalkylproline-containing tripeptides
RU2086561C1 (ru) Способ получения нонапептидэтиламида
US4213895A (en) N-[N-[N-[N-[N-(5-Oxo-L-prolyl)-L-histidyl]-L-tryptophyl]-L-seryl]-L-tyrosyl]glycine azide, an intermediate of the releasing agent of luteinizing hormone (LW) and of follicle stimulating hormone (FSH)
KR820001616B1 (ko) 테트라펩타이드의 제조방법
KR870000371B1 (ko) 폴리펩타이드 유도체의 제조방법