KR890002085B1

KR890002085B1 - 디히드로오로트산 유도체의 제조방법

Info

Publication number: KR890002085B1
Application number: KR1019850004874A
Authority: KR
Inventors: 히로시 스가노; 류이지 이시다; 미지오 야마무라
Original assignee: 다나베 세이야꾸 가부시끼가이샤; 마쯔바라 이지로
Priority date: 1984-07-10
Filing date: 1985-07-09
Publication date: 1989-06-16
Also published as: CA1248698A; SG59992G; AU580311B2; US4665056A; DK313785A; ES545053A0; HU199876B; DE3577443D1; EP0168042B1; KR860001102A; IL75641A; FI83525C; MY101747A; ES8800208A1; FI852533L; AU4442185A; DK171354B1; ES557144A0; ES8707738A1; FI83525B

Abstract

내용 없음.

Description

디히드로오로트산 유도체의 제조방법

본 발명은 신규의 1-메틸-4,5-디히드로-오로트산 유도체의 제조방법에 관한 것이다. 더욱 특히, 본 발명은 하기 구조식(I)의 1-메틸-4,5-디히드로오로틸-히스티딜-프롤린아미드 또는 약제학적으로 허용되는 이의 산부가염의 제조방법에 관한 것이다.

TPH(즉, 티로트로핀 방출 호르몬; L-피로글루타밀-L-히스티딜-L-프롤린아미드)는 뇌 이기능(dysfunction)에 의한 의식 질환 치료용 약제로서 유용하지만; 동시에 의식 질환의 치료효과에 대한 바람직하지 않은 작용으로 여겨지는 TSH(티로이드 자극 호르몬)-방출작용이 있는 것으로 알려져 있다. 이와 관련하여, 미합중국 특허 제4,100,152호 및 제4,045,556호에는 (2,3,4,5-테트라히드로-2-옥소-L-5-푸란카보닐)-L-히스티딜-L-프롤린아미드와 오로틸-L-히스티딜-L-프롤린-아미드가 TRH에 비하여 부작용이 더 적으며, 의식 질환에 대한 치료효과를 나타내는 것으로 기술되어 있다.

여러가지 연구의 결과로서, 본 발명자들은 본 발명의 화합물(I)이 중추신경계 질환(예를들어, 의식질환)의 치료 또는 예방용 약제로서 유용하다는 것을 밝혀내었다. 즉, 본 발명의 화합물(I)은 TRH 및 이의 유도체에 비하여 부작용(예를들어, TSH-방출작용)이 비교적 적고, 중추신경계에 대한 활성작용(예를들어, 펜토바르비탈 마취에 대한 길항효과, 자발 운동 작용에 대한 증가효과, 레세르핀-유도된 냉각에 대한 길항효과, L-도파작용에 대한 상승효과)가 훨씬 더 강하다는 특성이 있다.

본 발명에 의하면, 화합물(I) 또는 약제학적으로 허용되는 이의 산부가염은 하기의 단계 또는 단계들로 제조할 수 있다.

(A) 하기 일반식(Ⅱ)의 1-메틸-4,5-디히드로-오로트산 화합물 또는 이의 반응성 유도체를 하기 일반식(III)의 히스티딜-프롤린아미드 화합물, 이의 염과 축합시키거나, (B) 하기 일반식(IV)의 1-메틸-4,5-디히드로오로틸-히스티딘 화합물, 이의 염 또는 이의 반응성 유도체를 하기 구조식(V)의 프롤린아미드 또는 이의 염과 축합시키거나, (C) 하기 일반식(VI)의 1-메틸-4,5-디히드로오로틸-히스티딜-프롤린 화합물, 이의 염 또는 이의 반응성 유도체를 상응하는 이의 아미드로 전환시키고, (D) 상기의 반응단계(A),(B) 또는 (C)에서 수득된 생성물 중의 X¹및/또는 X²가 보호된 아미노기(들)인 경우, 보호기(들)을 제거하고, (E) 경우에 따라, 생성물을 약제학적으로 허용되는 이의 산 부가염으로 전환시킨다.

상기식에서, X¹및 X²는 각각 이미노기 또는 보호된 아미노기이다.

출발화합물(III) 내지 (VI)은 유리형태 또는 이의 염의 형태로 사용할 수 있다. 화합물(III) 내지 (VI)의 염의 예로는 염산염, 브롬화수소산염, 황산염 또는 질산염 등의 무기산 부가염, 토실레이트, 메탄설포네이트 또는 트리플루오로아세테이트 등의 유기산 부가염 등이 포함된다.

화합물(II),(IV) 또는 (VI)의 반응성 유도체의 적합한 예로는 상응하는 산 할라이드(예를들어, 클로라이드, 브로마이드), 혼합 무수물(예를들어, 알킬 카보네이트와의 혼합 무수물), 활성 에스테르(예를들어, 펜타클로로페놀, P-니트로페놀, 2,4-디니트로페놀, N-히드록시-석신이미드, N-히드록시프탈이미드, 1-히드록시벤조트리아졸 또는 1-히드록시-2-피롤리돈과의 에스테르), 산 아지드 및 이미다졸, 4-치환된-이미다졸 또는 트리아졸과의 아미드 등의 다른 반응성 유도체가 포함된다. 또한, 알킬 에스테르(예를들어, 메틸 또는 에틸 에스테르) 및 아르알킬 에스테르(예를들어, 벤질 에스테르) 등의 에스테르를 화합물(VI)의 반응성 유도체로서 사용할 수도 있다.

한편, 펩티드 합성에서 일반적으로 보호 아미노기(들)로 사용된 각종 보호기를 보호기(들)(X¹및/또는 X²)로서 사용할 수 있다. 이러한 보호기 X¹및 X²의 예로는 포름일, 아세틸 및 프로피오닐 등의 저급 알카노일; 벤조일 등의 치환되거나 비치환된 벤조일; 메톡시카보닐, 에톡시카보닐 및 3급-부톡시카보닐등의 저급 알콕시카보닐; 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐 등의 모노-, 디-또는 트리할로게노-저급 알콕시카보닐; 벤질옥시카보닐 및 P-메톡시벤질옥시카보닐 등의 치환되거나 비치환된 벤질옥시 카보닐; 벤질, P-메톡시벤질 및 3,4-디메톡시-벤질 등의 치환되거나 비치환된 페닐-저급 알킬; 및 벤조히드릴 및 트리틸 등의 디- 또는 트리페닐-저급알킬; 토실 등의 치환되거나 비치환된 페닐술포닐; 및 0-니트로페닐 술펜일 등의 치환되거나 비치환된 페닐술펜일 등이 포함된다.

[반응단계(A) 및 (B)]

화합물(II) 또는 이의 반응성 유도체와 화합물(III) 또는 이의 염과의 축합반응 및 화합물(IV), 이의 염 또는 이의 반응성 유도체와 화합물(V) 또는 이의 염과의 축합반응은 펩티드 합성에서의 통상적인 방법으로 수행할 수 있다. 예를들어, 화합물(II)이 반응성 유도체와 화합물(III) 또는 이의 염과의 축합반응 및 화합물(IV)의 반응성 유도체와 화합물(V) 또는 이의 염과의 축합반응은 용매중에서 산 수용체의 존재하에 또는 부재하에 수행할 수 있다. 산 수용체의 적당한 예에는 알칼리 금속 수산화물(예를들어, 수산화칼륨, 수산화나트륨), 알칼리금속 탄산염(예를들어, 탄산나트륨, 탄산칼륨), 알칼리 금속 중탄산염(예를들어, 중탄산나트륨, 중탄산칼륨), 트리알킬 아민(예를들어, 트리메틸아민, 트리에틸아민), N,N-디알킬아닐린), 예를들어, N,N-디메틸아닐린), N,N-디에틸아닐린, 피리딘, N-알킬모르폴린(예를들어, N-메틸모르폴린) 등이 포함된다. 용매로서는 디옥산, 테트라히드로푸란, 아세토니트릴, 메틸렌 클로라이드, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 에틸 아세테이트, 피리딘, 아세톤 및 물이 포함된다. 반응은 -50 내지 50℃, 특히 -15 내지 5℃에서 수행하는 것이 바람직하다.

한편, 화합물(II)와 화합물(III) 또는 이의 염과의 축합반응 및 화합물(IV) 또는 이의 염과 화합물(V) 또는 이의 염과의 축합반응은 탈수제의 존재하에 용매중에서 수행할 수 있다. 탈수제의 적합한 예로는 디시클로헥실 카보디이미드, N-시클로-헥실-N'-모르폴리노카보디이미드, N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)키보디이미드, 옥시염화인, 삼염화인, 염화티오닐, 염화옥살릴, 트리페닐포스핀 등이 포함된다. 디메틸포름아미드 및 옥시염화인, 디메틸포름아미드 및 염화옥살릴, 디메틸포름아미드 및 포스겐 또는 디메틸포름아미드 및 염화티오닐로부터 제조한 빌스마이어(vilsmeier)시약을 탈수제로서 사용할 수 있다. 반응은 -50 내지 50℃, 특히 -20 내지 0℃에서 수행하는 것이 바람직하다. 디옥산, 테트라히드로푸란, 아세토니트릴, 클로로포름, 염화메틸렌, 디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 에틸 아세테이트, 피리딘, 아세톤 및 물이 용매로서 적합하다.

[반응단계(C)]

화합물(VI), 이의 염 또는 이의 반응성 유도체를 상응하는 이의 아미드로 전환시키는 반응은 통상적인 방법으로, 즉 암모니아 또는 암모니아-방출물질로 처리하여 수행할 수 있다. 예를들어, 이러한 아미드화 반응은 화합물(VI) 또는 이의 염을 탈수제의 존재하에 용매중에서 암모니아 또는 암모니아-방출물질로 처리하여 수행한다. 반응 용액중에서 암모니아를 발생시키거나 방출하는 화합물을 본 발명의 암모니아-방출물질로서 사용할 수 있다. 이러한 암모니아-방출물질에는, 예를들어, 염화암모늄, 탄산암모늄 등이 포함된다. 또한, 반응단계(A) 및 (B)에서 언급한 바와 동일한 탈수제를 본 단계에서 사용할 수도 있다. 이러한 반응은 -20 내지 20℃, 특히 -5 내지 5℃에서 수행하는 것이 바람직하다. 용매로서는 디메틸포름아미드, 디메틸술폭시드 및 테트라히드로푸란이 적합하다.

또한, 아미드화 반응은 예를들어, 화합물(VI)의 반응성 유도체를 산 수용체의 존재하에 또는 부재하에 용매중에서 암모니아 또는 암모니아-방출물질로 처리하여 수행한다. 또한, 반응단계(A) 및 (B)에서 언급한 바와 동일한 산 수용체를 본 단계에서 사용할 수도 있다. 반응은 -20 내지 20℃에서 수행하는 것이 바람직하다. 용매로서는 메탄올, 에탄올, 디메틸포름아미드 및 디메틸술폭시드 등이 적합하다.

[반응단계(D)]

단계(A),(B) 또는 (C)에서 수득한 생성물 중의X¹및/또는 X²가 보호기(들)인 경우, 이러한 보호기(들)은 통상적인 방법으로 생성물로부터 쉽게 제거할 수 있다. 예를들어, 보호기(들)은 가수분해, 전기분해, 염기처리, 산처리, 환원, 산화 또는 이들의 조합으로 제거할 수 있다. 특히, 예를들어, 보호기가 벤조일인 경우, 화합물을 염기로 처리하여 보호기를 제거할 수 있다. 이러한 염기의 예에는, 암모니아, 모노- 또는 디-저급 알킬 아민(이러한 경우에 저급알키기는, 예를들어, 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 n-부틸이다) 및 나트륨 알콕사이드(예를들어, 나트륨 메톡사이드, 나트륨 에톡사이드) 등이 포함된다. 본 반응은 용매(예를들어, 메탄올, 에탄올)의 존재하에 또는 부재하에 수행할 수 있다. 이러한 반응은 -5 내지 0℃에서 수행하는 것이 바람직하다. 보호기가 벤조일, 아세틸, 3급-부톡시카보닐, 벤즈히드릴, 트리틸 또는 P-니트로페닐술페닐인 경우, 화합물을 산으로 처리하여 보호기를 제거할 수 있다. 이러한 산의 적합한 예로는 포름산, 트리플루오로아세트산, 벤젠술폰산, P-톨루엔술폰산, 염화수소 또는 브롬화수소 등이 포함된다. 이러한 반응은 용매(예를들어, 물, 메탄올, 에탄올, 아세트산 또는 디옥산)의 존재하에 또는 부재하에 수행할 수 있다. 이러한 반응은 -30 내지 70℃에서 수행하는 것이 바람직하다. 보호기가 벤질옥시카보닐, P-메톡시-벤질옥시카보닐, 벤질 또는 P-메톡시벤질인 경우, 이러한 보호기는 촉매적 수소화 반응으로 제거할 수 있다. 이러한 촉매적 수소화 반응은 0 내지 100℃에서 수행하는 것이 바람직하며, 바람직한 촉매의 예로는 팔라듐-탄산바륨, 팔라듐-목탄 및 팔라듐-블랙 등이 포함된다. 반응용매로서는 메탄올-에탄올, 테트라히드로푸란 및 물이 적합하다. 보호기가 메톡시카보닐 또는 에톡시카보닐인 경우, 화합물을 가수분해하거나, 염기 처리하여 보호기를 제거할 수 있다. 가수분해 반응은 통상적인 방법으로, 예를들면, 화합물을 수산화칼륨 등의 염기, 또는 염산 또는 브롬화수소산 등의 산으로 처리하여 수행할 수 있다. 이러한 가수분해반응은 내지 70℃에서 수행하는 것이 바람직하다. 보호기가 토실인 경우, 전기분해, 염기 처리 또는 1-히드록시 벤조트리아졸로 처리하여 보호기를 제거할 수 있다.

[반응단계(E)]

상기의 반응단계(들)에서 수득한 생성물은, 필요시, 통상적인 방법에 따라 화합물을 화학량론적 등몰량의 산으로 처리하여 이의 산 부가염으로 전환시킬 수 있다.

상기의 반응에서, 출발화합물(II) 내지 (VI)는 광학적 활성 이성체 또는 이의 혼합물 형태로 사용할 수 있다. 상기의 본 발명의 반응은 라세미화없이 진행되기 때문에, 화합물(I)은 화합물(II) 내지 (VI)의 상응하는 광학적 활성 이성체를 사용함으로써 광학적 활성 이성체 형태로 쉽게 수득한다.

출발화합물 중에서, 화합물(II)는 예를들면, 4,5-디히드로오로트산[참조:J. Am, Chem. Soc., 75, 6086(1953)]을 산 수용체(예를들어; 트리에틸아민)의 존재하에 -50 내지 50℃에서 벤질 할라이드와 반응시키고, 생성된 벤질 4,5-디히드로오로테이트를 산 수용체(예를들어, 수소화나트륨)의 존재하에 -50 내지 100℃에서 메틸화제(예를들어, 요오드화 메틸)와 반응시키고, 필요시, 수득한 벤질 1-메틸-4,5-디히드로-오로테이트의 3-위치에 보호기를 도입한 다음, 생성물을 촉매적 수소화 반응시켜 이로부터 벤질기를 제거시킴으로써 제조할 수 있다.

화합물(IV)는 펩티드 합성의 통상적인 방법에 따라 화합물(II)를 히스티딘 또는 N^Im-보호된 히스티딘과 축합시켜 제조할 수 있다. 또한, 화합물(VI)는 펩티드 합성의 통상적인 방법에 따라 화합물(II)를 히스티딜-프롤린과 축합시키거나 화합물(IV)를 프롤린과 축합시켜 제조할 수 있다.

본 발명의 화합물(I)은 이중에 포함된 3개의 비대칭 탄소원자 때문에 8개의 광학이성체 형태로 존재할 수 있지만, 8개의 모든 광학이성체 또는 이들의 혼합물은 본 발명의 범주에 포함된다. 그러나, 이들 이성체 중에서, 약제용으로서는 (1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린 아미드가 특히 바람직하다.

화합물(I)은 유리염기 또는 이의 산 부가염으로서 약제용으로 사용할 수 있다. 화합물(I)의 약학적으로 허용되는 산 부가염은, 예를들어, 염산염, 브롬화수소산염, 황산염 또는 질산염 등의 무기산 부가염; 및 아세테이트, 말레에이트, 타르트레이트, 석시네이트, 시트레이트, 메탄술포네이트, 말레이트, 옥살레이트, 또는 벤젠술포네이트 등의 유기상 부가염이다. 화합물(I) 또는 약학적으로 허용되는 이의 산 부가염은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있다. 또한, 화합물(I) 또는 이의 염은 경구 또는 비경구로 투여하기에 적합한 약학적, 부형제와 결합되거나 혼합된 동일한 화합물을 함유하는 약학적 제제형으로 사용할 수 있다. 적합한 부형제는, 예를들어, 전분, 락토스, 글루코스, 인산칼륨, 옥수수 전분, 아라비아 고무, 스테아르산 또는 기타의 공지된 약제용 부형제이다. 약학적 제제는, 예를들어, 정제, 분제, 캅셀제, 또는 과립제 등의 고체형; 또는 예를들어, 액제 또는 현탁액제 등의 액체형일 수 있다. 또한, 비경구 투여시, 약학적 제제는 주사형으로 사용할 수 있다.

전술한 바와 같이 본 발명의 화합물(I)은 미합중국 특허 제4,100,152호 및 제4,045,556호에 기술된 TRH 또는 이의 유도체에 비하여 부작용(예를들어, TSH-방출작용)이 비교적 적고, 중추신경계에 대한 활성효과(예를들어, 펜토바르비탈 마취에 대한 길항효과, 자발운동작용에 대한 증가효과, 레세르핀-유도된 냉각에 대한 길항효과 및 L-도파작용에 대한 상승효과)가 더욱 강하다.

TRH 자체는 경구투여시 실질적인 치료효과를 나타내지 않지만, 화합물(I)은 경구투여에 의해 우수한 치료작용을 나타낸다는 특징이 있다. 따라서, 본 발명의 화합물(I)은 전술한 TRH 또는 이의 유도체보다 각성제, 자발운동 흥분제 또는 도파민 상승제로서 훨씬 더 유용하다. 또한, 화합물(I)은 인간을 포함한 온혈동물에서, 예를들면, 의식질환, 쇼트 어텐션 스판(short attention span), 언어장해, 의지박약, 렌녹스(Lennox)증후군, 노인성 치매, 최면제 중독, 자폐증, 과운동증, 정신분열병, 억울증 및 파킨슨증후군 등의 중추신경계 질환을 치료 또는 예방하는데 유용하다.

화합물(I) 또는 이의 염의 치료 용량은 투여경로:환자의 연령, 체중 및 상태: 및 치료하려는 특별한 질병에 좌우된다. 그러나, 일반적으로 1일 체중 kg당 0.5μg 내지 5mg의 용량; 특히 경구투여할 경우 1일 체중 kg당 10μg 내지 1mg의 용량:또는 비경구 투여할 경우(예를들어, 정맥내, 근육내 또는 피하) 1일 체중 kg당 1μg 내지 100μg의 용량으로 사용할 수 있다.

명세서 및 특허청구의 범위를 통해, "1-메틸-4,5-디히드로오로트산" 및 "1-메틸-4,5-디히드로오로탈"이란 각각 1-메틸-1,2,3,4,5,6-헥사히드로-2,6-디옥소-4-피리미딘카복실산 및 1-메틸-1,2,3,4,5,6-헥시히드로-2,6-디옥소-4-피리미딘카보닐을 의미한다.

본 발명의 실제적이고 현재-바람직한 양태를 하기 실험예 및 실시예에서 구체적으로 나타내며, 하기 실험예 1 내지 4에서 사용한 시험 화합물은 하기와 같다:

[시험 화합물:]

본 발명의 화합물:(1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드

제1번:(2,3,4,5-테트라히드로-2-옥소- L-5- 푸란카보닐)-L-히스티딜-L-프롤린아미드(미합중국 특허 제4,100,152호)

제2번:오로틸-L-히스티딜-L-프롤린-아미드(미합중국 특허 제4,045,556호)

[실험예 1]

경구투여로 평가한 시험 화합물의 약학적 활성

(방법)

(1) 레세르핀-유도된 냉각에 대한 길항효과:레세르핀(3mg/kg)을 피하투여한지 약 17 내지 20시간 후, 체온이 30℃ 이하인 수컷 STD/ddY마우스를 본 실험에서 사용한다. 증류수에 용해시킨 시험 화합물을 쥐에 경구투여하고, 시험 화합물을 투여한지 30,60,120,180 및 300분 후에 직장의 온도를 측정한다. 약물을 투여한 마우스 그룹의 체온증가를 시험 화합물 용액 대신에 증류수를 투여한 대조군의 마우스의 체온과 비교한다.

(2) 자발운동작용에 대한 증가효과:수컷 STD/ddY 마우스를 각각 30분 동안 앰블로미터(Ambulometer)[즉, 오하라 이카 캄파니(OHARA IKA CO.)에서 제조한 자발운동작용 측정용 기구]중에 넣어 기구에 적응시킨다. 이후, 증류수에 용해시킨 시험 화합물을 마우스에 경구투여하고, 시험 화합물을 투여한 후 즉시 자발운동작용을 3시간 동안 측정한다. 대조군의 마우스에는 시험 화합물 용액 대신에 증류수를 쥐에 대조군에 투여한다.

(3) 펜토바르비탈 마취에 대한 길항효과:증류수에 용해시킨 시험 화합물을 수컷 STD/ddY 마우스에 경구투여한다. 시험 화합물을 투여한지 15분 후, 펜토바르비탈 나트륨을 55mg/kg의 용량으로 마우스에 복강내 투여한다. 정향반사의 소실에서 이의 회복까지의 시간으로 마취기간을 측정한다. 대조군의 마우스에는 시험 화합물 용액 대신에 증류수를 투여한다.

[결과]

결과는 하기 표 1 및 표 2에 기재한다.

[표 1]

주:a):TRH 타르트레이트 치료효과를 1로 하고 각 시험 화합물 대 TRH 타르트레이트의 효력비를 평행선 정량 분석법으로 계산한다.

[표 2]

주:B):최소 유효 용량이란 대조군 마우스의 용량에 비하여 펜토바르비탈 마취기간의 감소를 초래하거나 자발운동 작용을 만족스러울 정도로 증가시키기에 필요한 최소용량을 의미한다.

[실험 2]

비경구투여로 평가한 시험 화합물의 약물학적 활성

(방법)

(1) 레세르핀-유도된 냉각에 대한 길항효과/및 자발운동작용에 대한 증가효과:생리식염액 중에 용해시킨 시험 화합물을 마우스에 복강내투여하고, 자발운동작용에 대한 증가효과를 측정하는데 있어서 자발운동작용을 시험 화합물 투여 후 즉시 60분 동안 측정하는 이외에는 시험 1에서 기술된 바와 동일한 방법으로 실험을 수행한다.

(2) 펜토바르비탈 마취에 대한 길항효과:펜토바르비탈 나트륨을 55mg/kg의 용량으로 수컷 STD/ddY 마우스에 복강내 투여한다. 펜토바르비탈 나트륨을 투여한지 10분 후, 생리식염액에 용해시킨 시험 화합물을 정향반사가 손실된 마우스에 정맥내투여한다. 시험 화합물 투여 마지막에서 정향반사를 회복할 때까지의 시간으로 마취기간을 측정한다. 대조군의 마우스에는 시험 화합물 용액 대신에 생리식염액을 투여한다.

(3) 도파민작용에 대한 상승효과:레세르핀을 3mg/kg의 용량으로 수컷 STD/ddY 마우스에 피하투여하고, 약 16 내지 20시간 후, L-도파를 200mg/kg의 용량으로 마우스에 복강내 투여한다. L-도파를 투여한지 30분 후, 생리식염액 중에 용해된 시험 화합물은 마우스에 복강내투여한다(시험 화합물로서 TRH를 사용하는 경우, 이는 L-도파를 투여한지 45분 후에 투여한다). L-도파를 투여한지 1시간 후부터 시작하여 15분 동안 아니멕스(ANIMEX)[즉, 페라드 캄파니(FERAD Co.가 제조한 자발운동작용 측정용 기구]로 자발운동작용을 측정한다. 대조군 마우스에는 시험 화합물 용액 대신에 생리식염액을 투여한다.

[결과]

결과는 하기 표 3에 기재한다.

[표 3]

주:c):TRH의 치료효과를 1로 하고 각 시험 화합물 대 TRH의 효력비를 평행선 정량 분석법으로 계산한다.

[실험 3]

[방법]

TSH-방출작용(부작용):0.1% BSA(소 혈청 알부민)-함유 생리식염액에 용해시킨 시험 화합물을 수컷 JCL:SD 래트에 정맥내 투여한다. 투여한지 15분 후, 마취하에 복부대동맥으로부터 혈액을 채취한다. "이중-항체 방사선면역" 정량분석법[참조:Midgley et al., Endocrinology., 79,10(1966)]으로 혈청 TSH 수준을 측정한다. 대조군 래트에는 BSA-함유 생리식염액을 시험 화합물 용액 대신에 투여한다.

[결과]

결과는 하기 표 4에 기재한다.

[표 4]

주:c):TRH-방출작용에 대한 TRH의 효과를 1로 하고, 각 시험 화합물 대 TRH의 효력비를 평행선 정량 분석법으로 계산한다.

d):공개된 자료[참조:Chemical & Pharmaceutical Bulletine" 28(6) 1667-1672(1980)].

e):공개된 자료[참조:"Thyrotropin-Releasing Hormone", 327-340(1983), Edited by Griffiths, E.C.; Bennett, G.W.Raven:New York, N.Y.].

[실험 4]

[방법]

급성독성:시험 화합물을 수컷 STD/ddY 마우스에 정맥내투여하고, 시험 화합물을 투여한지 24시간 후에 이의 급성 독성(LD₅₀)을 마우스의 사망률로부터 측정한다.

[결과]

결과는 하기 표 5에 기재한다.

[표 5]

주:d):공개된 자료[참조:Brain Research Reviews., 4, 389, (1982)].

[실시예 1]

1-메틸-L-4,5-디히드로오로트산 1.03g 및 N-히드록시석신이미드 760mg을 디메틸포름아미드 20ml에 용해시키고, 여기에 디시클로헥실카보디이미드 1.4g을 0℃에서 가한다. 이 혼합물을 동일한 온도에서 1.5시간 동안 교반한다. L-히스티딜-L-피롤린아미드 디히드로브로마이드 2.8g 및 트리에틸아민 2ml를 냉각하에 상기 혼합물에 가하고, 이 혼합물을 0 내지 15℃에서 2일 동안 교반한다. 불용성 물질을 여과하고, 여액을 감압하에 농축시켜 디메틸포름아미드를 제거한다. 잔류물을 묽은 염산에 용해시킨 다음, 불용성 물질을 여과한다. 여액을 클로로포름으로 세척하고, 중탄산나트륨으로 알칼리화한 다음, 스티렌-디비닐벤젠 공중합체수지(상표명 "MIC GEL(HP-20p"하에서 미쯔비시 케이칼 인더스트리스 리미티드에서 제조; 이후 간단히 "CHP-20p 수지"라고 언급함)로 충진된 칼럼사이로 통과시킨다. 이 칼럼을 300ml의 물로 세척한 다음, 목적한 생성물을 물로 용출시킨다. 파울리(Pauly)반응에 양성인 분획을 모아서 동결건조시킨다. 이렇게 하여 수득한 생성물을 물로 결정화하고, 물로부터 재결정화한다. 결정을 감압하에 60℃에서 3일 동안 건조시킨다. (1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드·1/2H₂O를 1g 수득한다.

융점:158 내지 160℃(분해)

[α]²⁵ _D-16.4°(c=1, H₂O)

[실시예 2]

(1) 1-메틸-L-4,5-디히드로오로트산 1.56g 및 N-히드록시석신이미드 1.15g을 30ml의 디메틸포름아미드 30ml에 용해시키고, 여기에 디시클로헥실카보디이미드 2.06g을 0℃에서 가한다. 이 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한다. 이렇게 하여 수득한 용액을 이후에서 "용액 A"라고 한다. 한편, 벤질 L-히스티딜-L-프롤리네이트·2HCl 3.43g을 디메틸포름아미드에 용해시키고 여기에 트리에틸아민 1.67g을 가한다. 이 혼합물을 0℃에서 20분동안 교반하고, 불용성 물질을 여과한다. 여액을 "용액 A"에 가하고 혼합물을 0℃에서 4시간 동안 교반한 다음, 10℃에서 1일 동안 교반한다. 불용성 물질을 여과하고, 여액을 감압하에 40℃에서 농축시켜 디메틸포름아미드를 제거한다. 잔류물을 물에 용해시키고, 불용성 물질을 여과한다.

중탄산나트륨을 사용하여 여액을 pH 8로 조정한 다음, CHP-20p 수지로 충진된 칼럼 사이로 통과시킨다. 이 칼럼을 500ml의 물로 세척하고, 계속해서 20% 메탄올 500ml 및 50% 메탄올 300ml로 세척한다. 이어서, 목적한 생성물을 70% 메탄올로 용출시킨다. 파울리 반응에 양성인 분획을 용출액으로부터 모으고, 감압하에 농축시켜 벤질{(1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤리네이트를 오일로서 3.65g 수득한다.

IRυ최대 클로로포름(Cm^-1):3300, 1725,1680

상기에서 수득한 생성물 650mg을 1N-HCl에 용해시킨 다음, 동결건조시켜 벤질(1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤리네이트·HCl·H₂O를 분말로서 690mg 수득한다.

[α]²² _D-39.8°(c=0.5, H₂O)

IRυ 최대 뉴졸(Cm^-1):1720,1640 내지 1680

NMR(DMSO-d₆,δ):1.7 내지 2.4(m,4H), 2.90(s,3H), 2.4 내지 3.9(m,6H), 3.9 내지 4.2(m,1H), 4.3 내지 4.5(m,1H), 4.6 내지 5.0(m,1H), 5.09(s,2H), 7.2 내지 7.5(m,5H), 8.96(s,1H)

Mass(m/e):496(M⁺)

(2) 700mg의 벤질(1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤리네이트를 20ml의 메탄올에 용해시키고, 여기에 팔라듐-블랙 20mg을 가한다. 이 혼합물을 실온에서 3시간 동안 수소가스 중에서 교반시킨다. 이 반응혼합물에 20ml의 물을 가하고, 촉매를 여과한다. 여액을 증발시켜 용매를 제거한다. 잔류물을 메탄올로 결정화하여 (1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히드티딜-L-프롤린·5/4H₂O를 290mg 수득한다.

융점:233 내지 236℃(분해)

[α]²⁰ _D-17.2°(c=0.5, H₂O)

IRυ 최대 뉴졸(Cm^-1):1715,1680,1630

NMR(D₂O,δ):1.7 내지 2.4(m,4H), 2.6 내지 3.9(m,6H), 3.03(s,3H), 4.0 내지 4.45(m,2H), 4.95(t,1H), 7.27(s,1H), 8.57(s,1H)

(3) (1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린 4.29g, N-히드록시석신아미드 1.15g, 디시클로헥실카보디이미드 2.26g 및 디메틸포름아미드 30ml의 혼합물을 0℃에서 40분동안 교반하고, 실온에서 80분 동안 교반한다. 이어서, 이 혼합물에 0℃에서 15% 암모니아-메탄올 30ml를 가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 및 실온에서 1시간 동안 교반한다. 불용성 물질을 여과하고, 여액을 증발시켜 디메틸포름아미드를 제거한다. 잔류물을 물 20ml에 용해시키고, 불용성 물질을 다시 여과한다. 중탄산나트륨을 사용하여 여액을 pH 8로 조절한 다음, CHP-20p 수지로 충진된 칼럼사이로 통과시킨다. 칼럼을 2l의 물로 세척한 다음, 목적한 생성물을 10% 메탄올로 용출시킨다. 파울리 반응에 양성인 분획을 모으고, 감압하에 농축시킨다. 잔류물을 물 10ml에 용해시키고, 냉장고에 넣어둔다. 결정성 침전물을 여과하여 모으고, 물로 세척한 다음, 25℃에서 하루 동안 건조시켜 (1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드·7/2H₂O를 3.3g 수득한다.

융점:72 내지 75℃

[α]²⁵ _D-13.6°(c=1, H₂O)

IRυ 최대 뉴졸(Cm^-1):3400,3250,1710,1660.1610,1540

[실시예 3]

(1) 3-벤조일-1-메틸-L-4,5-디히드로오로트산 900mg, N-히드록시석신이미드 449mg 및 디시클로헥실 카보디이미드 782mg을 디메틸포름아미드 13ml에 용해시키고, 혼합물을 0℃에서 40분 동안 교반한 다음, 실온에서 80분 동안 교반한다. 반응혼합물을 -5℃로 냉각시키고, 여기에 L-히스티딜-L-프롤린아미드·2HBr 1.4g 및 트리에틸아민 0.94ML을 가한다. 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 및 10℃에서 하루 동안 교반한다. 불용성 물질을 여과하고, 여액을 증류시켜 용매를 제거한다. 잔류물을 1% HCl 50ml에 용해시키고, 클로로포름으로 세척한다. 중탄산나트륨을 사용하여 수층을 pH 8로 조절하고 냉장고에서 하루 동안 넣어둔다. 여과하여 침전물을 모으고, 물로 세척한 다음, 50℃에서 건조시켜 (3-벤조일-1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드를 1.05g 수득한다.

융점:228 내지 230℃(분해)

[α]²³ _D+27.2°(c=0.5, 디메틸포름아미드)

IRυ 최대 뉴졸(Cm^-1):3400,3200,1738,1680,1620

NMR(DMSO-d₆,δ):1.6 내지 2.2(m,4H), 2.6 내지 3.8(m,6H), 3.00(s,3H), 4.0 내지 4.8(m,2H), 4.9 내지 5.1(m,1H), 6.9 내지 7.1(m,2H), 7.3 내지 7.8(m,6H), 8.1(br,1H), 8.65(br,1H).

(2) 510mg의 (3-벤조일-1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드를 3ml의 메탄올에 용해시키고, 15% 암모니아-메탄올 136mg을 가한다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 증류시켜 메탄올을 제거한다. 잔류물에 물 5ml를 가하고, 불용성 물질을 여과시킨다. 수층을 에틸 아세테이트로 세척하고, 1ml 부피로 농축시킨다. 잔류물을 냉장고에 하루 동안 방치한 다음, 여과하여 결정성 침전물을 모으고, 이어서 물로 세척한 다음, 25℃에서 하루 동안 건조시킨다. 이렇게 하여 (1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드·7/2 H₂O를 400mg 수득한다.

본 생성물의 물리화학적 특성은 실시예 2-(3)에서 수득한 샘플의 물리화학적 특성과 동일하다.

[실시예 4]

(1) 1-메틸-L-4,5-디히드로오로트산 6.37g 및 95% 펜타클로로페놀 11.3g을 디메틸포름아미드 80ml에 용해시키고, 여기에 -5 내지 0℃에서 디시클로헥실카보디이미드 8.3g을 가한 다음, 이 혼합물을 동일한 온도에서 1시간 동안 교반한다. 여기에 벤질히스티디네이트 디-토실레이트[참조:Bull. Chem. Soc. Jap., 31, 784(1958)] 21.8g 및 트리에틸아민 75mg을 -5 내지 0℃에서 가한다. 이 혼합물을 5℃에서 2시간 동안 및 실온에서 하루 동안 교반한다. 불용성 물질을 여과하고, 여액을 감압하에 농축시킨다. 잔류물을 물 80ml에 용해시키고, 에테르 80ml로 세척한 다음, 감압하에 농축시킨다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용매:클로로포름:메탄올=4:1)로 정제한 다음, 메탄올로 재결정화한다. 벤질(1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티디네이트 6.0g을 수득한다.

융점:194 내지 195℃

[α]²¹ _D-21.8℃ (c=0.5, 디메틸포름아미드)

IRυ 최대 뉴졸(Cm^-1):3300,3200,1735,1710,1660

(2) 벤질(1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티디네이트 2.7g을 물 50ml 중에 용해시키고, 여기에 팔라듐-블랙 50ml를 가한다. 혼합물을 실시예 2-(2)에서 기술한 바와 동일한 방법으로 처리하여(1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딘·1/4H₂O를 분말로서 1.8g 수득한다.

[α]²¹ _D+68.8°(C=0.5, H₂O)

IRυ 최대 뉴졸(Cm^-1):1720,1660

(3) 디시클로헥실카보디이미드 1.23g을 (1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딘 1.56g, N-히드록시석신이미드 565mg 및 디메틸포름아미드 15ml의 혼합물에 -10 내지 -5℃에서 가하고, 이 혼합물을 동일한 온도에서 30분 동안 교반한다. 여기에 L-프롤린아미드 570mg을 가하고, 이 혼합물을 -5 내지 0℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 실온에서 하루 동안 교반한다. 반응시킨 후, 불용성 물질을 여과시키고, 물 50ml로 세척한다. 여액과 세척액을 합한 다음, 클로로포름으로 세척한다. 중탄산나트륨을 사용하여 용액을 pH8로 조절하고 CHP-20p 수지로 충진된 칼럼사이로 통과시킨다. 칼럼을 물 200ml로 세척한 다음, 목적한 생성물을 20% 메탄올로 용출시킨다. 파울리 반응에 양성인 분획을 용출액으로부터 모으고, 갑압하에 농축시킨다. 잔류물을 냉각시키고, 여과하여 결정성 침전물을 모은다. (1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드·7/2 H₂O를 결정으로서 1.17g 수득한다.

[실시예 5]

(1) 1-메틸-L-4,5-디히드로오르트산 516mg 및 N-히드록시석신이미드 345mg을 디메틸포름아미드 9ml에 용해시키고, 여기에 디시클로헥실카보디이미드 680mg을 0 내지 5℃에서 가한다. 이 혼합물을 동일한 온도에서 40분 동안 및 실온에서 80분 동안 교반한다. N^1m-토실-L-히스티딜-L-프롤린아미드 트리플루오로아세테이트[참조:Bull. Chem. Soc. Jap., 49, 1595(1976)] 1.6g 및 트리에틸아민 0.5ml를 혼합물에 가하고, 10℃에서 하루 동안 교반한다. 반응 후, 혼합물을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 클로로포름 30ml에 용해시킨다. 불용성 물질을 여과시키고, 여액을 물로 세척한 다음, 건조시킨다. 혼합물을 감압하에 농축시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용매:클로로포름:에틸 아세테이트:메탄올=5:4:2)로 정제시켜 (1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-N^1m토실-L-히스티딜-L-프롤린아미드를 분말로서 1.2g 수득한다.

[α]²⁵ _D+8.3°(C=1, 디메틸포름아미드)

IRυ 최대 뉴졸(Cm^-1):1720,1680,1670,1640

(2) (1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-N^1m-토실-L-히스티딜-L-프롤린아미드 1.2g을 25% 암모니아-메탄올 10ml에 용해시키고, 실온에서 하루 동안 방치한다. 혼합물을 감압하에 농축시킨 다음, 잔류 물을 물 10ml에 용해시키고, 클로로포름으로 세척한다. 수용액을 3ml 부피로 농축시키고, 냉각시킨다. 여과하여, 결정성 침전물을 모으고, 물로 세척한 다음, 건조시켜(1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드·7/2H₂O를 620mg 수득한다. 본 생성물의 물리화학적 특성은 실시예 2-(3)에서 수득한 샘플의 물리화학적 특성과 동일하다.

[실시예 6]

(1) 디시클로헥실카보디이미드 1.24g을 3-3급-부톡시카보닐-1-메틸-DL-4,5-디히드로오로트산 1.36g, N-히드록시석신이미드 690mg 및 디메틸포름아미드 20ml의 혼합물에 0 내지 5℃에서 가한다. 이 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반한다. L-히스티딜-L-프롤린아미드·2HBr 2.06g 및 트리에틸아민 1.7ml를 -5 내지 0℃에서 반응혼합물에 가하고, 혼합물을 10℃에서 하루 동안 교반한다. 불용성 물질을 여과한 다음, 여액을 감압하에 농축시킨다. 20% 시트르산 수용액 30ml를 잔류물에 첨가하고, 불용성 물질을 여과한다. 여액을 중탄산나트륨을 사용하여 여액을 pH 8로 조절하고, 염화나트륨으로 포화시킨다. 이어서, 여액을 클로로포름으로 추출하고 추출물을 농축시킨다. 잔류물을 n-헥산으로 결정화하고, 결정성 침전물을 여과시켜 (3-3급-부톡시카보닐-1-메틸-DL-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드-4H₂O·1/2 n-헥산을 2.1g 수득한다.

융점:80 내지 90℃

[α]²² _D-16.8°(C=1, 디메틸포름아미드)

(2) (3-3급-부톡시카보닐-1-메틸-DL-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드·4H₂O·1/2 n-헥산 1g 및 트리플루오로아세트산 3ml의 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한다. 혼합물을 감압하에 농축시켜 트리플루오로아세트산을 제거한다. 잔류물을 물 20ml에 용해시키고, 중탄산나트륨을 사용하여 pH 8로 조절한다. 이 용액을 CHP-20p 수지로 충진된 칼럼에 도입한다. 칼럼을 300ml의 물로 세척한 다음, 목적한 생성물을 20% 메탄올로 용출시킨다. 파울리 반응에 양성인 분획을 모으고, 동결건조시켜 (1-메틸-DL-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드·H₂O를 560mg 수득한다.

[α]²² _D-65.6°(C=1, H₂O)

IRυ 최대 뉴졸(Cm^-1):3250,1720,1660

[제조예 1]

(1) 1-4,5-디히드로오로트산[참조:J. Am. Chem. Soc., 75, 6086(1953)] 5.0g을 디메틸포름아미드 80ml에 현탁시키고, 여기에 트리에틸아민 4.4ml 및 벤질 브로마이드 3.76ml를 가한다. 이 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반한다. 트리에틸아민 6.6ml 및 벤질브로마이드 3.76ml를 혼합물에 가하고, 이 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반한다. 혼합물을 감압하에 농축시켜 용매를 제거한다. 잔류물을 물을 가하고, 침전된 결정을 여과하여 모은 다음, 물로 세척하고, 이어서 메탄올로 재결정화한다. 벤질 L-4,5-디히드로오로테이트를 5.8g 수득한다.

융점:187 내지 189℃

[α]²⁵ _D+56.3°(C=1, 디메틸포름아미드)

(2) 벤질 L-4,5-디히드로오로테이트 6.6g을 디메틸포름아미드 66ml에 용해시키고, 여기에 요오드화메틸 5ml를 가한다. 수소화나트륨(62% 오일분산) 1.29g을 22 내지 28℃에서 혼합물에 가하고, 혼합물을 25℃에서 40분 동안 교반한다. 이어서, 아세트산을 사용하여 혼합물을 pH 4로 조절하고, 감압하에 40℃ 미만의 온도에서 농축시켜 디메틸포름아미드를 제거한다. 잔류물을 에틸 아세테이트를 가하고, 여과하여 침전된 결정을 모은 다음, 에틸 아세테이트로 세척하고, 이어서 건조시킨다. 결정에 물을 가하고, 수성 혼합물을 20분 동안 교반한다. 결정을 여과하여 모으고, 에틸 아세테이트로 재결정화한다. 벤질 1-메틸-L-4,5-디히드로오로테이프를 3.25g 수득한다.

융점:162 내지 164℃

[α]²⁵ _D+51.7°(C=1, 디메틸포름아미드)

(3) 벤질 1-메틸-L-4,5-디히드로오로테이트 4g을 테트라히드로푸란 80ml에 용해시키고, 여기에 에탄올 340ml를 가한다. 5% 팔라듐-목탄 0.4g을 혼합물에 가하고, 이 혼합물을 실온에서 대기압하에 수소기체 대기중에서 진탕시킨다. 반응이 종결된 후, 불용성 믈질을 여과한다. 여액을 감압하에 농축시켜 건고시키고 잔류물을 메탄올로 재결정화한다. 1-메틸-L-4,5-디히드로오로트산을 1.9g을 수득한다.

융점:214 내지 216℃

[α]²⁰ _D+49.2°(C=1, 디메틸포름아미드)

본 생성물은 실시예 1의 출발 화합물로서 사용할 수 있다.

[제조예 2]

(1) 디시클로헥실카보디이미드 2.61g을 N^α-3급-부톡시카보닐-N^1m-토실-L-히스티딘 5g, 벤질 L-프롤리네이트 HCl 2.94g, 트리에틸아민 1.23g 및 테트라히드로푸란 50ml의 혼합물에 가한다. 상기의 첨가 반응은 0℃에서 행하고, 이 혼합물을 실온에서 하루 동안 교반한다. 반응후, 불용성 물질을 여과하고, 여액을 증발시켜 용매를 제거한다. 잔류물에 에틸 아세테이트를 가하고, 혼합물을 1N-황산, 포화 중탄산나트륨 수용액 및 식염용액으로 계속 세척한다. 에틸 아세테이트층을 건조시키고, 증발시켜 용매를 제거한다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼에 도입한다. 칼럼을 에테르로 세척한 다음, 목적한 생성물을 에틸 아세테이트로 용출시킨다. 용축액을 농축, 건고시켜 벤질(N^α-3급-부톡시카보닐-N^1m-토실-L-히스티딜)-L-프롤리네이트를 오일로서 6.0g 수득한다.

(2) 벤질(N^α-3급-부톡시카보닐-N^lm-토실-L-히스티딜)-L-프롤리네이트 6.0g을 테트라히드로푸란 50ml에 용해시키고, 여기에 1-히드록시벤조트리아졸 4.1g을 가한다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한다. 반응 후, 혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 잔류물에 에틸 아세테이트와 1N-황산을 가한다. 불용성 물질을 여과한 다음, 여액으로부터 수성층을 분리하고, 중탄산나트륨을 사용하여 pH 8로 조절하고, 에틸 아세테이트로 추출한다. 추출물을 건조시킨 다음, 증발시켜 용매를 제거한다. 이렇게 하여 수득한 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용매:클로로포름:메탄올=9:1)로 정제하여 벤질(N^α-3급-부톡시카보닐-L-히스티딜)-L-프롤리네이트를 오일로서 4.5g 수득한다.

IRυ 최대 클로로포름최대(Cm^-1):3400,3300

(3) 벤질(N^α-3급-부톡시카보닐-L-히스티딜)-L-프롤리네이트 4.5g을 15% HCl-디옥산 40ml에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한다. 반응혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 잔류물에 디이소프로필에테르를 가한다. 침전된 분말을 여과하여 모으고, 이디소프로필 에테르로 세척한 다음, 감압하에 건조시켜 벤질 L-히스티딜-L-프롤리네이트·2HCl을 4.0g(수율:정량적) 수득한다. 본 생성물은 정제시키지 않고 실시예 2의 출발화합물로서 사용할 수 있다.

[제조예 3]

(1) 벤질 1-메틸-L-4,5-디히드로오로테이트 2.62g 및 트리에틸 아민 10g을 디옥산 25ml에 현탁시킨다. 벤조일 클로라이드 2.81g을 실온에서 현탁액에 가하고, 혼합물을 60 내지 65℃에서 3시간 동안 교반한다. 반응혼합물을 증발시켜 용매를 제거한 다음, 잔류물에 클로로포름을 가하고, 혼합물을 물로 세척한다. 혼합물을 실리카 겔 크로마토그리피(용매:클로로포름)로 정제하고, 증발시켜 용매를 제거한다. 잔류물을 에틸 아세테이트-n-헥산(1:1)으로 재결정화하여 벤질 3-벤조일-1-메틸-L-4,5-디히드로오로테이트를 1.6g 수득한다.

융점:110 내지 111℃

[α]²⁵ _D+63.0°(C=0.5, 메탄올)

(2) 10% 팔라듐-목탄 150mg 및 에탄올 30ml를 벤질 3-벤조일-1-메틸-L-4,5-디히드로오로테이트 1.5g에 가하고, 혼합물을 실온에서 수소가스중에서 40분 동안 교반한다. 촉매를 여과한 다음, 여액을 증류시켜 용매를 제거한다. 잔류물을 n-헥산으로 결정화하고, 에틸 아세테이트-n-헥산(5:1)으로 재결정하여 3-벤조일-1-메틸-L-4,5-디히드로오로트산을 850mg 수득한다.

융점:185 내지 187℃

[α]²⁴ _D+95.2°(C=0.5, 메탄올)

본 생성물은 실시예 3의 출발 화합물로서 사용할 수 있다.

[제조예 4]

(1) 벤질 1-메틸-DL-4,5-디히드로오로테이트 1.31g, 디-3급-부틸 디카보네이트 1.2g, 트리에틸아민 0.7ml, 4,4-디메틸아미노피리딘 0.06g, 테트라히드로푸란 1.7ml 및 디메틸포름아미드 3ml의 혼합물을 25 내지 27℃에서 2시간 동안 교반한다. 반응혼합물을 감압하에 농축시킨다. 잔류물을 에틸아세테이트 30ml에 용해시키고, 물 및 10% 시트르산 수용액으로 세척한다. 이어서, 용액을 건조시키고, 증발시켜 용매를 제거한 다음, 잔류물을 에테르-n-헥산으로 결정화하여 벤질 3-3급-부톡시카보닐-1-메틸-DL-4,5-디히드로오로테이트를 0.7g 수득한다.

융점:157 내지 159℃

IRυ 최대 뉴졸(Cm^-1):1760,1745,1695

(2) 벤질-3-3급-부톡시카보닐-1-메틸-DL-4,5-디히드로오로테이트 600mg, 10% 팔라듐-목탄 200mg 및 메탄올 30ml의 혼합물을 실온에서 대기압하에 수소기체 대기중에 3시간 동안 진탕시킨다. 반응후, 불용성 물질을 여과하고, 여액을 감압하에 농축시킨다. 잔류물을 에틸 아세테이트-n-헥산으로 재결정화하여 3-3급-부톡시카보닐-1-메틸-DL-4,5-디히드로오로트산을 400mg 수득한다.

융점:129 내지 130℃

IRυ 최대 뉴졸(Cm^-1):1795,1740,1725,1675

본 생성물을 실시예 6의 출발 화합물로서 사용할 수 있다.

Claims

하기 일반식(II)의 1-메틸-4,5-디히드로오로트산 또는 이의 반응성 유도체를 하기 일반식(III)의 히드티딜-프롤린아미드 또는 이의 염과 축합시킴을 특징으로 하여, 하기 구조식(I)의 1-메틸-4,5-디히드로오로틸-히스티딜-프롤린아미드 또는 약제학적으로 허용되는 이의 산 부가염을 제조하는 방법.

상기식에서, X¹및 X²는 각각 이미노그룹 또는 보호된 이미노그룹이다.
제1항에 있어서, 구조식(I)의 화합물이 (1-메틸-L-4,5-디히드로오로틸)-L-히스티딜-L-프롤린아미드 또는 약제학적으로 허용되는 이의 산 부가염인 방법.
하기 일반식(IV)의 1-메틸-4,5-디히드로오로틸-히스티딘, 이의 염 또는 이의 반응성 유도체를 하기 구조식(V)의 프롤린아미드 또는 이의 염과 축합시킴을 특징으로 하여, 하기 구조식(I)의 1-메틸-4,5-디히드로오로틸-히스티딜-프롤린아미드 또는 약제학적으로 허용되는 이의 산 부가염을 제조하는 방법.

상기식에서, X¹및 X²는 각각 독립적으로 이미노그룹 또는 보호된 이미노그룹이다.
하기 일반식(VI)의 1-메틸-4,5-디히드로오로틸-히스티딜-프롤린 화합물, 이의 염 또는 이의 반응성 유도체를 상응하는 이의 아미도로 전환시킴을 특징으로 하여, 하기 구조식(I)의 1-메틸-4,5-디히드로오로틸-히스티딜-프롤린아미드 또는 약제학적으로 허용되는 이의 산 부가염을 제조하는 방법.

상기식에서, X¹및 X²는 각각 독립적으로 이미노그룹 또는 보호된 이미노그룹이다.
제1항에 있어서, 수득한 생성물중 X¹또는 X², 또는 X¹및 X²가 보호된 이미노그룹(들)인 경우, 추가로 수득한 생성물로부터 보호그룹(들)을 제거하는 방법.
제3항에 있어서, 수득한 생성물중 X¹또는 X², 또는 X¹및 X²가 보호된 이미노그룹(들)인 경우, 추가로 수득한 생성물로부터 보호그룹(들)을 제거하는 방법.
제4항에 있어서, 수득한 생성물중 X¹또는 X², 또는 X¹및 X²가 보호된 이미노그룹(들)인 경우, 추가로 수득한 생성물로부터 보호그룹(들)을 제거하는 방법.