JPH06329678A - 多環式化合物及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【構成】 式ＩのＮ−（テトラヒドロピラン−４−イル
オキシ−アルカノイル）−スタウロスポリン誘導体、そ
れを製造するための中間体および式Ｉで表される化合物
を含有する薬理組成物。 （式中、Ｒ₁ は水素、ヒドロキシ、低級アルコキシ又は
オキソ；Ｒ₂ は水素又はＣ_1-4 アルキル、そしてＲ₃ は
水素又はＣ_1-4 アルキルである） 【効果】 式Ｉの化合物は高い度合の選択性でタンパク
質キナーゼＣを阻害でき、腫瘍阻害活性として利用でき
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明はＮ−アシル化スタウロスポリン誘
導体、即ち、Ｎ−（テトラヒドロピラン−４−イルオキ
シ−アルカノイル）−スタウロスポリン誘導体、その製
造のための方法及び中間体、それらの化合物を含んで成
る薬理組成物、医薬品としてのその利用、並びにその中
間体の製造のための方法に関する。

【０００２】本発明にかかわる誘導体の基本的な要素で
あるスタウロスポリンは１９７７年に、ストレプトマイ
セス スタウロスポレウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｅｕｓ）ＡＷＡＹＡ，ＴＡＫＡ
ＨＡＳＨＩとＯＭＵＲＡ、種ｎｏｖ．ＡＭ２２２８２の
培養物から既に単離されている（Ｓ，Ｏｍｕｒａら、
Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．３０，２７５−２８１（１９７
７）を参照のこと）。現在まで、スタウロスポリンの絶
対配置ではなく、相対配置のみが知られている。絶対配
置は最近になってＮ．Ｆｕｎａｔｏら、Ｔｅｔｒａｈｅ
ｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒ ３５：８，１２５１−１２５
４（１９９４）により公開されており、そして構造体の
鏡像に関連しており、スタウロスポリンの相対配置を概
述する論文において現在利用されている。尚、Ｔｅｔｒ
ａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓの論文の中では、「現
在まで一般に利用されているスタウロスポリンについて
の立体化学表示法は再考すべき」との文字通りの推奨が
されている。その絶対配置は現在まで知られていない
が、それは「スタウロスポリン誘導体」としての表示に
より、はっきりと規定（定義）されている。従って、従
来の文献との比較に基づく誤解を避けるため、オリジナ
ルの構造式を本明細書でも用いている。

【０００３】スタウロスポリンはタンパク質キナーゼＣ
に対する強力な阻害活性を示すが、しかしながらその他
のタンパク質キナーゼも同じくらいに高い度合いで阻害
するので、治療用途に必要とされる選択性を有していな
い。常用のアシル基、例えばベンゾイルにより置換され
たスタウロスポリン誘導体はもっと選択性ではあるが、
そのようなＮ−アシル化スタウロスポリン誘導体は一般
に比較的可溶性でなく、従って適当な薬理投与形態に製
剤化しにくいことがある。

【０００４】本発明の目的は新規なスタウロスポリン誘
導体であって、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）に対す
る、特にタンパク質キナーゼＣの「慣用」のアイソタイ
プα，β−１，β−２及びγ、主としてＰＫＣ−α及び
ＰＫＣ−γに対するスタウロスポリンの阻害活性を保持
しながら、その他のタンパク質キナーゼ及びタンパク質
キナーゼＣのその他のアイソタイプに対して実質的に活
性が弱い誘導体を提供することにある。加えて、提供す
べき該スタウロスポリン誘導体は経口投与したときに活
性が高く、且ついかなる多大な困難性を伴うことなく適
当な薬理投与形態へと製剤化されるように十分に可溶性
であるべきである。

【０００５】本発明は特に式ＩのＮ−（テトラヒドロピ
ラン−４−イルオキシ−アルカノイルオキシ）−スタウ
ロスポリン誘導体

【化３】 （式中、Ｒ₁ は水素、ヒドロキシ、低級アルコキシ又は
オキソであり、Ｒ₂ は水素又はＣ_1-4 アルキルであり、
そしてＲ₃ はＣ_1-4 アルキル、又は好ましくは水素であ
る）、その製造のための方法及び中間体、そのような化
合物を含んで成る薬理組成物、医薬品としてのその利
用、並びに中間体の製造のための方法に関する。

【０００６】式Ｉより明らかとなっている配置は絶対立
体化学ではなく、相対立体化学のみを表示することを意
図している。前述した通り、絶対立体化学はおそらく次
式Ｉａにより示される。

【化４】

【０００７】Ｃ−Ｒ₂ 原子での配置は（Ｄ）又は
（Ｌ）、好ましくは（Ｄ）である。低級アルコキシＲ₁
はＣ₁ −Ｃ₇ アルコキシ、好ましくはＣ_1-4 アルコキ
シ、特にメトキシである。Ｃ_1-4 アルキルのＲ₂ 又はＲ
₃ は好ましくはメチルである。

【０００８】式Ｉの化合物は価値ある薬理特性を示す：
例えば、それらは高い度合いの選択性で酵素タンパク質
キナーゼＣを阻害する。リン脂質−及びカルシウム−依
存性タンパク質キナーゼＣは細胞の中で複数の形態で認
められ、そして様々な基礎的過程、例えばシグナル伝
達、増殖及び分化、更にはホルモン及び神経伝達物質の
放出に関与する。その酵素の活性化は細胞膜のリン脂質
のレセプター仲介加水分解により、又は一定の腫瘍促進
活性物質との直接的な相互作用により及ぼされる。細胞
のレセプター仲介シグナル伝達に対する感受性はタンパ
ク質キナーゼＣの（シグナル伝達因子としての）活性を
改変することによりかなり影響を受けうる。タンパク質
キナーゼＣの活性に影響を及ぼすことのできる化合物は
腫瘍阻止、抗炎症、免疫調節及び抗菌活性成分として利
用でき、そしてアテローム症、並びに心臓血管系及び中
枢神経系の障害に対する薬剤としての価値さえもあるこ
とがある。

【０００９】Ｔ．ＵｃｈｉｄａとＣ．Ｒ．Ｆｉｌｂｕｒ
ｎのＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５９，１２３１１−４
（１９８４）に記載の手順に従って精製したブタ脳タン
パク質キナーゼＣを、タンパク質キナーゼＣに対する阻
害活性を決定するために用いた。タンパク質キナーゼＣ
に対する式Ｉの化合物の阻害活性をＤ．Ｆａｂｂｒｏ
ら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２３
９，１０２−１１１（１９８５）の手順に従って決定し
た。この試験において、式Ｉの化合物は約０．０１〜
０．０５mmol／ｌほどの低いＩＣ₅₀でタンパク質キナー
ゼＣを阻害した。他方、式Ｉの化合物はその他の酵素、
例えばタンパク質キナーゼＡ及びチロシンタンパク質キ
ナーゼをはるかに高い濃度、例えば１００倍以上の濃度
で阻害し、これは式Ｉの化合物の選択性を実証する。

【００１０】上記の試験において用いたブタ脳タンパク
質キナーゼＣはタンパク質キナーゼの様々なサブタイプ
（アイソタイプ）の混合物である。ブタ脳タンパク質キ
ナーゼＣの代りに上記の試験において純粋な組換アイソ
タイプを用いると、式Ｉの化合物は優先的に「慣用」の
アイソタイプのα，β−１，β−２及びαを阻害し、他
方、「非慣用」アイソタイプδ，ε及びη並びに「異
常」なアイソタイプζは極めて低い程度でしか阻害され
ず、そしてあるケースにおいては全く阻害されない。

【００１１】組換ＰＫＣアイソタイプは下記の方法でク
ローン、発現及び精製した：

【００１２】バクロウィルス（ｖａｃｕｌｏｖｉｒｕ
ｓ）の助けによる様々なタンパク質の生産、並びにそれ
らのクローニング及びＳｆ９昆虫細胞からの単離はＭ．
Ｄ．ＳｕｍｍｅｒｓとＧ．Ｅ．Ｓｍｉｔｈの「Ａ ｍａ
ｎｕａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｂａｃｕｌｏｖｉｒ
ｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｎｓｅｃｔ ｃｅｌ
ｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｒｃｅｄｕｒｅ」Ｔｅｘａｓ
Ａｇｒｉｃｕｌ．Ｅｘｐｔｌ．Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌ
ｌ．（１９８７），１５５５に記載の通りに実証した。
Ｓｆ９細胞の中でのＰＫＣ−α（ウシ）、ＰＫＣ−β１
（ヒト）、ＰＫＣ−β２（ヒト）及びＰＫＣ−γ（ヒト
／ウシハイブリド）の発現のための組換ウィルスの構築
及び単離はＳｔａｂｅｌらに記載の方法で行った〔Ｓ．
Ｓｔａｂｅｌ，Ｍ．ＬｉｙａｎａｇｅとＤ．Ｆｒｉｔｈ
の「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋ
ｉｎａｓｅ Ｃ ｉｓｏｚｙｍｅｓ ｉｎ ｉｎｓｅｃ
ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ
ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ」Ｍｅｔ
ｈ．Ｎｅｕｒｏｓｃ．（１９９３）〕。Ｓｆ９細胞の中
でのＰＫＣアイソタイプの生産はＳｔａｂｅら（前記参
照）に記載の方法で実施し、そして酵素の精製はＭｃＧ
ｌｙｎｎらの論文に記載の方法に従って行った（Ｅ．Ｍ
ｃＧｌｙｎｎ，Ｊ．Ｌｉｅｂｅｔａｎｚ，Ｓ．Ｒｅｕｔ
ｅｎｅｒ，Ｊ．Ｗｏｏｄ，Ｎ．Ｍ，Ｌｙｄｏｎ，Ｈ．Ｈ
ｏｆｓｔｅｔｔｅｒ，Ｍ．Ｖａｎｅｋ，Ｔ．Ｍｅｙｅｒ
とＤ．Ｆａｂｂｒｏの「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ
ｐａｒｔｉａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ ｒａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ−
δ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ−ζ
ｉｎ ｉｎｓｅｃｔ ｃｅｌｌｓ ｕｓｉｎｇ ｒｅｃ
ｏｍｂｉｎａｎｔ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ」Ｊ．Ｃｅ
ｌｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．４９，２３９−２５０（１９９
２））。組換ＰＫＣ−δ（ラット）、ＰＫＣ−ε（ラッ
ト）、ＰＫＣ−ζ（ラット）及びＰＫＣ−η（マウス）
の作製、並びにそれらの発現及び精製については、それ
ぞれＬｉｙａｎａｇｅら〔「Ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａ
ｓｅ Ｃ ｇｒｏｕｐＢ ｍｅｍｂｅｒｓ ＰＫＣ−
δ，−ε，−ζａｎｄＰＫＣ−λ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏ
ｎ ｏｆ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂ
ｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａ
ｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ」Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２８３，
７８１−７８７（１９９２）」及びＭｃＧｌｙｎｎら
（上記参照）に従っており、転写ベクターｐＡｃ３６０
をＰＫＣ−ηの発現のために用いることを更に特徴とす
る〔Ｖ．ＬｕｃｋｏｗとＭ．Ｓｕｍｍｅｒｓの「Ｔｒｅ
ｎｄｓｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ
ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ」Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ６， ４７−５５（１９８
８）〕。

【００１３】上記の方法により得た組換ＰＫＣアイソト
ープの活性の測定は脂質及びカルシウム（補助因子）抜
きで行った。補助因子抜きでリン酸化した硫酸プロタミ
ンを基質として用いた。酵素の活性はγ−〔³²Ｐ〕−Ａ
ＴＰから硫酸プロタミンへの ³²Ｐの転移を反映する。硫
酸プロタミンは４個のＣ末端アルギニン残変をそれぞれ
含んで成るポリペプチドの混合物である。リン酸の取込
みは下記の条件のもとで測定した：最終濃度で２０mMの
トリス−ＨＣＬ，pH７．４，１０mMのＭｇ〔Ｎ
Ｏ₃ 〕₂ ，０．５mg／mlの硫酸プロタミン、１０μＭの
ＡＴＰ（０．１μＣｉのγ−〔³²Ｐ〕−ＡＰＰ；１０Ｃ
ｉ／mol ：Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｌｉｔｔｌｅ Ｃｈａｌ
ｆｏｎｔ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）、様々な濃
度の阻害化合物、及び０．５〜２．５Ｕ（ユニット：ユ
ニットは、１分間におけるタンパク質のmg当りの、１nm
の³²Ｐを前述のγ−〔³²Ｐ〕−ＡＴＰからヒストンＨＩ
〔Ｓｉｇｍａ，タイプＶ−Ｓ〕に転移させる酵素の量）
の酵素を含む反応混合物１００μｌ。反応は酵素の添加
及び３２℃にすることによって開始させた。反応時間は
２０分とした。次に反応は５０μｌのアリコートをＰ８
１クロマトグラフィー紙（Ｗｈａｔｍａｎ，Ｍａｉｄｓ
ｔｏｎｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）に浸すこと
によって停止させた。Ｊ．Ｊ．ＷｉｔｔとＲ．Ｒｏｓｋ
ｏｓｋｉ「Ｒａｐｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ
ａｓｓａｙ ｕｓｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈｏ−ｃｅｌｌ
ｕｌｏｓｅ−ｐａｐｅｒ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ」Ａｎ
ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，６６，２５３−２５８（１９７
５）に記載の洗浄工程により未結合のγ−〔³²Ｐ〕−Ａ
ＴＰ及びヌクレオチドフラグメントを除去した後、基質
のリン酸化をシンチレーション測定によって決定した。
この試験において、式Ｉの化合物はタンパク質キナーゼ
Ｃ（ＰＫＣ）の様々なアイソタイプを、ＰＫＣ−α及び
ＰＫＣ−γの場合は約０．００１〜０．１μmol ／ｌほ
どの低いＩＣ₅₀で、ＰＫＣ−β−１及びＰＫＣ−β−２
の場合は約０．０１〜０．０８μmol ／ｌ，ＰＫＣ−
δ，ＰＫＣ−ε及びＰＫＣ−ηの場合は０．０３〜１０
μmol ／ｌ、そしてＰＫＣ−ζの場合は４μmol ／ｌ以
上のＩＣ₅₀で阻害した。

【００１４】タンパク質キナーゼＣに対する上述の阻害
活性に基づいて単に予測される通り、式Ｉの化合物は増
殖抑制特性を示し、これはヒトＴ₂₄膀胱癌細胞の増殖に
対する式Ｉの化合物の阻害活性を決定している下記の別
の試験において直接実証されうる。それらの細胞を、多
湿インキュベーターの中で３７℃で、大気中に５％の容
量のＣＯ₂ を伴って、５％（ｖ／ｖ）の仔牛血清の添加
されているイーグルの最少必須培地の中でインキュベー
トする。癌細胞（１，０００〜１，５００）を９６穴マ
イクロタイタープレートの中に入れ、そして上述の条件
で一夜インキュベートする。試験化合物を系列希釈にお
いて１日目に加える。このプレートを上述の条件で５日
間インキュベートする。その間、コントロール培養物は
少なくとも４回細胞分裂する。インキュベーション後、
細胞を３．３％（ｗ／ｖ）の水性グルタルアルデヒド溶
液で固定し、水で洗い、そして０．０５％（ｗ／ｖ）の
水性メチレンブルー溶液で染める。洗浄後、染色液を３
％（ｗ／ｖ）の水性塩酸で溶離させる。細胞の数に正比
例するウェル当りの吸光密度（ＯＤ）を吸光光度計（Ｔ
ｉｔｅｒｔｅｋ ｍｕｌｔｉｓｋａｎ）を用いて６６５
nmで測定する。ＩＣ ₅₀は次式によりコンピューターシス
テムで計算する。

【数１】

【００１５】ＩＣ₅₀値は、ウェル当りの細胞数が、イン
キュベーション期間の終了時においてコントロール培養
物中の細胞の数の５０％のみであるような活性成分の濃
度として定義される。式Ｉの化合物の場合、このように
して得られたＩＣ₅₀値は約０．０１〜０．９μmol ／
ｌ、特に約０．０３〜０．９μmol ／ｌである。

【００１６】式Ｉの化合物の抗腫瘍活性はインビボでも
実証できうる：ヒト膀胱腫瘍Ｔ₂₄細胞の移植してある雌
のバルブ／Ｃ無毛マウスを抗腫瘍活性を決定するために
用いた。経口フォーレン（ｆｏｒｅｎｅ）ナルコーシス
下にある動物に、約２５mgの固形腫瘍を動物の左側腹部
上の皮膚の下に０日目に置き、そしてその小さな切創を
縫合クリップで閉じた。移植の６日後、マウスを６匹の
動物のグループにランダムに分け、そして処置を開始し
た。処置は、様々な投与量におけるジメチルスルホキシ
ド／ツイーン８０／塩化ナトリウム溶液中の式Ｉの化合
物の毎日の経口又は腹膜腔内投与により１５日間にわた
って実施した。腫瘍をノギスで週に２回測定し、そして
腫瘍の容積を計算した。この試験において、毎日３mg／
kgの式Ｉの化合物の経口又は腹膜腔内投与は未処置のコ
ントロール動物における１０〜１５％の腫瘍容積に至る
平均腫瘍容積低下をもたらした。

【００１７】上記した特性に基づき、式Ｉの化合物は特
に腫瘍阻害活性成分として、例えば膀胱及び皮膚の腫瘍
の処置に利用できうる。式Ｉの化合物を他の化学治療剤
と組合せて癌の処置に利用したとき、それらは耐性（多
重薬剤耐性）の発生を阻止するか、又は他の化学治療剤
に対する既に現存している耐性をなくさせる。それらは
タンパク質キナーゼＣ調節因子について前述した他の用
途にとっても適切であり、そしてタンパク質キナーゼＣ
の阻害に応答性な障害の処置において特に利用されう
る。

【００１８】式Ｉの化合物は一定のチロシンキナーゼ、
例えば特にＰＤＧＦレセプターキナーゼを、０．０８μ
mol ／ｌのＩＣ₅₀ほどでも阻止する。

【００１９】ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）は非常に
よく認められる成長因子であり、これは正常な増殖並び
に病理的な細胞増殖、例えば発癌現象、更には血管の平
滑筋細胞の障害、例えばアテローム症及び血栓症におい
て重要な役割を果たしている。

【００２０】タンパク質キナーゼＣ及びＰＤＧＦレセプ
ターキナーゼの阻害はそのような点で、細胞増殖を調節
する観点と同様に見かけ上相乗的に働く。

【００２１】インビトロでのＰＤＧＦ刺激化レセプター
チロシンキナーゼ活性の阻害を、Ｅ．Ａｎｄｒｅｊａｕ
ｓｋａｓ−ＢｕｃｈｄｕｎｇｅｒとＵ．Ｒｅｇｅｎａｓ
ｓのＣａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２，５３５３
−５３５８（１９９２）に記載のそれと類似の方法でバ
ルブ／ｃ ３Ｔ３細胞のＰＤＧＦレセプター免疫複合体
において測定した。上記においてより詳しく説明した式
Ｉの化合物は０．０８μmol ／ｌ以下の濃度でＰＤＧＦ
−依存性無細胞レセプターリン酸化を阻害した。

【００２２】完全細胞の中でのＰＤＧＦレセプターチロ
シンキナーゼの阻害は、Ｅ．Ａｎｄｒｅｊａｕｓｋａｓ
−ＢｕｃｈｄｕｎｇｅｒとＵ．ＲｅｇｅｎａｓｓのＣａ
ｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２，５３５３−５３５
８（１９９２）に記載と類似の方法で、ウェスタンブロ
ット分析により実証した。この試験において、バルブ／
ｃ ネズミ細胞におけるリガンド刺激型ＰＤＧＦレセプ
ター自己リン酸化の阻害は抗ホスホチロシン抗体によっ
て測定した。式Ｉの化合物はＰＤＧＦレセプターのチロ
シンキナーゼ活性を０．００５〜０．０８μmol ／ｌの
濃度において阻害した。これらの化合物はＰＤＧＦ−依
存性細胞系、即ち、バルブ／ｃ ３Ｔ３ネズミ繊維芽細
胞も、１．０μmol ／ｌ以下の濃度で阻害した。

【００２３】上述した特性に基づいて、式Ｉの化合物は
腫瘍阻止活性成分としてのみ利用できるだけでなく、非
悪性増殖障害、例えばアテローム症、血栓症、乾癬、破
皮症及び線維症に対する薬剤としても利用できうる。そ
れらはタンパク質キナーゼＣ調節因子について前述した
その他の用途にとっても適切であり、そして特にＰＤＧ
Ｆレセプターキナーゼの阻害に応答性な障害の処置にお
いて利用できうる。

【００２４】式Ｉの化合物であってＲ₁ が水素又はオキ
ソ、Ｒ₂ が水素又はＣ_1-4 アルキル、そしてＲ₃ が水素
である化合物が好ましい。

【００２５】Ｒ₁ が水素又はオキソ、Ｒ₂ が水素又はメ
チル、そしてＲ₃ が水素である式Ｉの化合物が特に好ま
しい。

【００２６】Ｃ−Ｒ₂ 原子において（Ｄ）−配置を有す
る上述の式Ｉの化合物がより特に好ましい。

【００２７】実施例の中に記載した式Ｉの化合物、特に
Ｎ−〔０−（テトラヒドロピラン−４−イル）−Ｄ−ラ
クトイル〕−スタウロスポリンがもっと特に好ましい。

【００２８】式Ｉの化合物は周知の方法で調製できる。
本発明にかかわる方法は、式IIのアミンを

【化５】 （式中、Ｒ₁ は前記した通りであるが、ただしＲ₁ によ
り表わされるヒドロキシ基は必要ならば容易に除去可能
なヒドロキシ保護基により保護されている）式III のカ
ルボン酸

【化６】 （式中、Ｒ₂ 及びＲ₃ は前述した通りである）により、
又はその反応性カルボン酸誘導体によりアシル化し、次
いで式Ｉの所望の最終生成物に存在すべきでない保護基
を除去し、そして所望するならば、得られる異性体の混
合物を分けること、を含んで成る。

【００２９】上述の方法を実施するやり方は以降により
詳しく説明する：保護基並びにそれらの導入及び除去方
法は例えば「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉ
ｎＯｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」Ｐｌｅｎｕｍ
Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９
７３，及び「Ｍｅｆｈｏｄｅｎ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉ
ｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ」Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｉｌ，
第４版，Ｖｏｌ．１５／１，Ｇｅｏｒｇ−Ｔｈｉｅｍｅ
−Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ １９７４，及び
Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，「Ｐｒｏｔｅｃ
ｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ」Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ Ｓｏｎｓ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ １９８１に記載されている。保護基の
特徴はそれらが容易に除去できうること、即ち、所望さ
れない二次反応が生ずることなく、例えば可溶媒分解、
還元、光分解又は生理学的条件によっても除去できうる
ことにある。

【００３０】ヒドロキシ保護基は例えばアシル基、例え
ば未置換又は置換化、例えばハロゲン置換化低級アルカ
ノイル、例えば２，２ージクロロアセチル、又は炭酸半
エステルのアシル基、特にｆｅｒｔ−ブトキシカルボニ
ル、未置換又は置換化ベンジルオキシカルボニル、例え
ば４−ニトロベンジルオキシカルボニル、又はジフェニ
ルメトキシカルボニル、又は２−ハロー低級アルコキシ
カルボニル、例えば２，２，２−トリクロロエトキシカ
ルボニル、及びトリチルもしくはホルミル、又は有機シ
リルもしくはスタンニル基、そして更には容易に除去可
能なエーテル化性基、例えばｆｅｒｔ−低級アルキル、
例えばｆｅｒｔ−ブチル、２−オキサ−もしくは２−チ
アー脂肪族もしくは−還式脂肪族炭化水素基、特に１−
低級アルコキシ−低級アルキルもしくは１−低級アルキ
ルチオ−低級アルキル、例えばメトキシメチル、１−メ
トキシエチル、１−エトキシエチル、メチルチオメチ
ル、１−メチルチオエチルもしくは１−エチルチオエチ
ル、又は２−オキサ−もしくは２−チアーシクロアルキ
ルであって５もしくは６個の還原子を有するもの、例え
ばテトラヒドロフリルもしくは２−テトラヒドロピラニ
ル、又は関連のチア類似体、そして更には未置換又は置
換化１−フェニル−低級アルキル、例えば未置換又は置
換化ベンジルもしくはジフェニルメチルである（ここで
フェニル基にとっての適切な置換基は例えばハロゲン、
例えば塩素、低級アルコキシ、例えばメトキシ及び／も
しくはニトロである）。

【００３１】式Ｉの所望の最終生成物の構成要素ではな
い保護基の除去は周知の方法、例えば溶媒加水分解、特
に加水分解、アルコール分解もしくは酸分解、又は還
元、特に水添分解もしくは化学的還元によって実施され
る。未置換もしくは置換化１−フェニル−低級アルキ
ル、例えばベンジルにより保護されているヒドロキシは
好ましくは触媒水素化により、例えばパラジウム−炭素
触媒の存在下で遊離される。２，２−ジクロロアセチル
により保護されたヒドロキシ基は例えば塩基加水分解に
より遊離され、そしてｆｅｒｔ−低級アルキル又は２−
オキサーもしくは２−チアー脂肪族もしくは一還式脂肪
族炭化水素基によりエーテル化されているヒドロキシ基
は酸分解により、例えば鉱酸もしくは強カルボン酸、例
えばトリフルオロ酢酸による処理によって遊離される。
有機シリル基、例えばトリメチルシリルによりエーテル
化されているヒドロキシはフッ化物アニオン、例えばテ
トラブチルアンモニウムフルオリドを生じせしめるフッ
化水素酸塩により遊離もされうる。

【００３２】式III の化合物の反応性誘導体は特に反応
性（活性化）エステル、反応性無水物、又は反応性還式
アミドである。

【００３３】式III の酸の反応性（活性化）エステル
は、特に、そのビニルエステル型のそのエステル化性基
の連結炭素原子で不飽和のエステルであって、例えば、
ビニルエステル（例えば、対応するエステルと酢酸ビニ
ルとのエステル転移により得られうる；活性化ビニルエ
ステル法）、カルバモイルビニルエステル（例えば、そ
の対応する酸をイソキサゾリウム試薬により処理するこ
とにより得られうる；１，２−オキサゾリウム又はＷｏ
ｏｄｗａｒｄ法）、又は１−低級アルコキシビニルエス
テル（例えば、その対応する酸を低級アルコキシアセチ
レンにより処理することにより得られる；エトキシ−ア
セチレン法）、又はアミジノ型のエステル、例えば、
Ｎ，Ｎ′−ジ置換アミジノエステル（例えば、その対応
する酸を、好適なＮ，Ｎ′−ジ置換カルボジイミド、例
えば、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミドもし
くはＮ−エチル−Ｎ′（３−ジメチルアミノプロピル）
−カルボジイミド塩酸塩により処理することにより得ら
れる；カルボジイミド法）、又はＮ，Ｎ−ジ置換アミジ
ノエステル（例えば、その対応する酸を、好適なＮ，Ｎ
−ジ置換シアナミドにより処理することにより得られ
る；シアナミド法）、

【００３４】好適なアリールエステル、特に、求電子置
換基により適宜置換されたフェニルエステル（例えば、
その対応する酸を、好適に置換されたフェノール、例え
ば、４−ニトロフェノール、４−メチルスルホニルフェ
ノール、２，４，５−トリクロロフェノール、２，３，
４，５，６−ペンタクロロフェノール又は４−フェニル
ジアゾフェノールにより、縮合剤、例えば、Ｎ，Ｎ′−
ジシクロヘキシルカルボジイミドの存在中で、処理する
ことにより得られる；活性化アリールエステル法）、シ
アノメチルエステル（例えば、その対応する酸を、塩基
の存在中で、クロロアセトニトリルにより処理すること
により得られる；シアノメチルエステル法）、チオエス
テル、特に、置換されていないか又は置換された、例え
ば、ニトロ−置換されたフェニルチオエステル（例え
ば、その対応する酸を、置換されていないか又は置換さ
れた、例えば、ニトロ−置換されたチオフェノールによ
り処理することにより、とりわけその無水物又はカルボ
ジイミド法により得られる；活性化チオールエステル
法）、又は特に、アミノ若しくはアミド・エルテル（例
えば、その対応する酸を、Ｎ−ヒドロキシアミノ若しく
はＮ−ヒドロキシアミド化合物、例えば、Ｎ−ヒドロキ
シスクシニミド、Ｎ−ヒドロキシピペリジン、Ｎ−ヒド
ロキシフタリミド又は、１−ヒドロキシ−ベンゾチアゾ
ールにより処理することにより、例えば、無水物又はカ
ルボジイミド法により得られる；活性化Ｎ−ヒドロキシ
エステル法）又はシリルエステル（例えば対応の酸をシ
リル化剤、例えばヘキサメチルジシラザンにより処理す
ることにより得られるもの；これはアミノ基とではな
く、ヒドロキシ基と容易に反応する）である。

【００３５】式III の酸の無水物は、その酸の、対称の
又は好ましくは混合された無水物であって、例えば、無
機酸の無水物、例えば、酸ハライド、特に、酸クロライ
ド（例えば、その対応する酸を、塩化チオニル、５塩化
リン又はオギザリル・クロライドにより処理することに
より得られる；酸クロライド法）、アジド（例えば、そ
の対応する酸エステルから、その対応するヒドラジドを
介して、亜硝酸によりそれらを処理することにより得る
ことができる；アジド法）、炭酸セミエステルとの無水
物、例えば、対応のエステル、例えば炭酸低級アルキル
セミエステル（例えば、その対応する酸を、ハロギ酸低
級アルキルエステル、例えばクロロギ酸低級アルキルエ
ステルにより又は１−低級アルコキシ−カルボニル−２
−低級アルコキシ−１，２−ジヒドロキノリン、例えば
１−低級アルコキシカルボニル−２−エトキシ−１，２
−ジヒドロキノリンにより処理することにより得られ
る；混合０−アルキル炭酸無水物法）、又はジハロゲン
化、特にジクロロ化されたリン酸との無水物（例えば、
その対応する酸を、オキシ塩化燐により処理することに
より得られる；オキシ塩化燐法）、又は有機酸による無
水物、例えば、有機カルボン酸による混合無水物（例え
ば、その対応する酸を、置換されていないか又は置換さ
れた低級アルカン−若しくはフェニル−低級アルカン−
カルボン酸ハライド、例えば、フェニル酢酸クロライ
ド、ピヴァル酸クロライド又はトリフルオロ酢酸クロラ
イドにより処理することにより得られる；混合カルボン
酸無水物法）又は有機スルホン酸による混合無水物（例
えば、その対応する酸の塩、例えば、アルカリ金属塩
を、好適な有機スルホン酸ハライド、例えば、低級アル
カン−若しくはアリール−例えば、メタン−若しくはｐ
−トルエン−スルホン酸クロライドにより処理すること
により得られる；混合スルホン酸無水物法）並びに対称
無水物（例えば、その対応する酸をカルボジイミド又は
１−ジエチルアミノプロピンの存在中で縮合することに
より得られる；対称無水物法）である。

【００３６】好適な環状アミドは、特に芳香族性をもつ
５−員環のジアザ環をもつアミド、例えば、イミダゾー
ル、例えば（例えば、その対応する酸をＮ，Ｎ′−カル
ボニルジイミダゾールにより処理することにより得られ
る；イミダゾール法）イミダゾール、又はピラゾール、
例えば、３，５−ジメチルピラゾール（例えば、その酸
ヒドラジドを介して、アセチルアセトンによる処理によ
り得られる；ピラゾリド法）をもつアミドである。

【００３７】アシル化剤として使用される式III の酸の
誘導体は、その場で形成されることもできる。例えば、
Ｎ，Ｎ′−ジ置換アミジノエステルは、式Ｖの出発物質
とアシル化剤として使用された酸との混合物を、好適な
Ｎ，Ｎ′−ジ置換カルボジイミド、例えば、Ｎ，Ｎ′−
シクロヘキシルカルボジイミドの存在中で、反応させる
ことによりその場で形成されることができる。さらに、
アシル化剤として使用された酸のアミノ又はアミド・エ
ステルは、その対応する酸とアミノ出発物質との混合物
をＮ，Ｎ′−ジ置換カルボジイミド、例えば、Ｎ，Ｎ′
−ジシクロヘキシルカルボジイミドの存在中で、又はＮ
−ヒドロキシアミン又はＮ−ヒドロキシアミド、例え
ば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドの存在中で、適切に
は、好適な塩基、例えば、４−ジメチルアミノ−ピリジ
ンの存在中で反応させることにより、アシル化されるべ
き式Ｖの出発物質の存在中で形成されることができる。

【００３８】反応は周知の方法において実施することが
でき、反応条件は特に式III のアシル化剤のカルボキシ
基を活性化させるか及びどのようにして活性化させるか
に依存して、一般に適当な溶媒もしくは希釈剤又はそれ
らの混合物の存在下で、そして必要ならば、例えば反応
に関与するカルボキシ基が無水物の形態にあるときには
縮合剤の存在下で、冷却又は加熱しながら、例えば約−
３０℃〜約＋１５０℃、特に０℃〜＋１００℃、好まし
くは室温（約＋２０℃）〜＋７０℃の温度範囲におい
て、開放又は密閉反応槽の中で、及び／又は不活性ガ
ス、例えば窒素の雰囲気中で行われる。慣用の縮合剤は
例えばカルボジイミド、例えばＮ，Ｎ′−ジエチル−、
Ｎ，Ｎ′−ジプロピル−又はＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシ
ル−カルボジイミド、適当なカルボニル化合物、例えば
カルボニルイミダゾール、又は１，２−オキサゾリウム
化合物、例えば２−エチル−５−フェニル−１，２−オ
キサゾリウム−３′−スルホネート及び２−ｆｅｒｔ−
ブチル−５−メチル−イソキサゾリウムパーコレート、
又は適当なアシルアミノ化合物、例えば、２−エトキシ
−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン
である。水溶性カルボジイミド、例えばＮ−エチル−
Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミ
ドが有利である。慣用の酸結合縮合剤は例えばアルカリ
金属炭酸塩又は炭酸水素、例えば炭酸ナトリウムもしく
はカリウム又は炭酸水素（常用には硫酸塩と一緒）、又
は有機塩基、例えば慣用の立体障害型トリー低級アルキ
ルアミン、例えばＮ′Ｎ−ジイソプロピル−Ｎ−エチル
アミンである。

【００３９】異性体の混合物は周知の方法、例えば分別
結晶、クロマトグラフィー等によって個々の異性体に分
けることができる。

【００４０】式IIの出発材料は公知であるか、又は周知
の方法に従って調製されうる。Ｒ₁が水素である式IIの
出発材料、即ちスタウロスポリンは市販されており、そ
しストレプトマイシス スタウロスポレウスの発酵によ
って調製できうる。この株は日本国特許出願公告第５７
−５３，０７６号（１９８２年１１月１１日公開）に関
連して日本発酵研究所に番号ＦＥＲＭ Ｐ−３７２５の
もとで寄託されている〔Ｓ．Ｏｍｕｒａら、Ｊ．Ａｎｔ
ｉｂｉｏｔ，３０，２７５−２８１（１９７７）を参照
のこと〕。Ｒ₁ が水素以外である式IIのスタウロスポリ
ン誘導体は例えばＩ．Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｊ．Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２５５（３）（１
９９０）１２１８−１２２１及びＷＯ−Ａ−８９０７−
１０５−Ａ（出願人、協和発酵工業（株）、日本国優先
権 １９８８年４月２日の第０２４，５７１号）に記載
されている。Ｒ₁ がヒドロキシ又はオキソである式Ｉの
化合物はＲ₁ が水素である式Ｉの化合物の合成における
二次産物としても得られる。

【００４１】式III の出発材料は新規である。式III の
酸はテトラヒドロピラン−４−オールを式IVの酸

【化７】 （式中、Ｘは求核性脱離基であり、そしてＲ₂ 及びＲ₃
は前記した通りである）と反応させることにより得られ
る。求核性脱離基Ｘは特に、ヒドロキシであって適当な
鉱酸、例えば適当なハロゲン化水素酸、又は適当なスル
ホン酸、例えば４−トルエンスルホン酸、好ましくは塩
素によりエステル化されたものである。テトラヒドロピ
ラン−４−オルをまず適当な不活性非プロトン溶媒、例
えばアクリルエーテル又は環状エーテル、例えばジオキ
サンの中で、適当な塩基、例えば水素化ナトリウムと反
応させる。得られる懸濁物を、適当な非プロトン溶媒、
例えばアクリル又は環状エーテル、例えばジオキサン中
の式IVの化合物の溶液に滴下する。反応は０℃〜１５０
℃、好ましくは２０℃〜１００℃、例えば使用した溶媒
の還流温度で行う。

【００４２】本発明は更に、式Ｉの化合物の調製のため
の中間体としての、式III の新規な化合物及びその塩に
関連する。式III の化合物は驚くべきことに水及び有機
溶媒の中で可溶性である。２２℃での水溶解度は１００
ｇ〜５００ｇ／ｌである。従って、式III の化合物の対
応のアシル基が、他のＮ−アシル−スタウロスポリン誘
導体、例えばＮ−ベンゾイル−スタウロスポリンの溶解
度に比して、水及びその他の溶媒中での式Ｉの化合物の
実質的に高められた溶解度、例えば１０倍以上に高めら
れた溶解度に大きく寄与している可能性がある。

【００４３】Ｒ₂ が水素又はメチルであり、そしてＲ₃
が水素又はメチルである式III の化合物、特に実施例に
記載の式III の化合物及びそれらの塩が好ましい。

【００４４】式III の化合物の塩は特に、金属又はアン
モニウム塩、例えばアルカリ金属又はアルカリ土類金属
塩、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム又はカ
ルシウム塩、又はアンモニウムとの、又は適当な有機ア
ミン、例えば第三モノアミン、例えばトリエチルアミン
又はトリ−（２−ヒドロキシエチル）−アミン、又は複
素環式塩基、例えばＮ−エチル−ピペリジン又はＮ，
Ｎ′−ジメチル−ピペラジンとのアンモニウム塩であ
る。

【００４５】本発明は式III の新規な化合物の調製のた
めの上記の方法にも関連する。

【００４６】保護基を除去すること及び追加のプロセス
手段を含む上記の方法は、何らかのことわりのない限
り、周知の方法で、例えば、好適な不活性溶媒又は希釈
剤の存在下又は非存在下で、必要ならば縮合剤又は触媒
の存在下で、低温又は高温で、例えば約−２０℃〜約１
５０℃、特に約０℃〜約＋７０℃、好ましくは約＋１０
℃〜約＋５０℃の温度範囲で、主として室温で、適当な
槽の中で、そして必要ならば不活性ガス、例えば窒素の
雰囲気中で実施する。

【００４７】分子中の全ての置換基を考慮すると、必要
ならば、例えばもし容易に加水分解可能な基が存在して
いるならば、極めて温和な反応条件、例えば短い反応時
間、低濃度での温和な酸性又は塩基性試薬の利用、理論
的比率、並びに適切な触媒、溶媒、温度条件及び／又は
圧力条件の選択が利用される。本発明は更に、特に上記
の障害のケースにおけるヒト又は動物の身体の治療処置
における好ましくは薬理組成物の形態における式Ｉの化
合物の利用に関連する。本発明は更にかかる処置を必要
とする温血動物におけるタンパク質キナーゼＣを阻害す
る方法に関連し、この方法はその温血動物に、タンパク
質キナーゼＣを阻害するうえで有効な投与量において式
Ｉの化合物を投与することを含んで成る。該活性成分の
投与量はとりわけ障害の種類、処置すべき種のタイプ及
びサイズ、生体の耐久性及び投与の方法に依存する。例
えば、体重約７０kgの温血動物は毎日１mg〜１，５００
mg、主として１００mg〜１，０００mg、好ましくは２０
０mg〜８００mg、例えば５００mgの式Ｉの化合物を受容
する。その一日の総投与量は日に２又は３回の投与に分
けることが好ましい。経口投与についての投与量は非経
口投与に図するものよりほぼ２から３倍高く、即ち、こ
れは表示の投与量の上限域に近づく傾向にある。

【００４８】本発明は更に、有効量の、特に上記の障害
のいづれかの予防又は処置において有効な量の該活性成
分を、局所的、腸内的、例えば経口、経腸又は非経口投
与にとって適当であり、且つ無機又は有機系の固体又は
液体でありうる薬理学的に許容されている担体と一緒に
含んで成る薬理組成物に関連もする。経口投与にとって
は、特に該活性成分と、希釈剤、例えばラクトース、デ
キストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトー
ル、セルロール及びもしくはグリセロール、並びに／又
は潤滑剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸又はそ
れらの塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはカ
ルシウム、並びに／又はポリエチレングリコールと一緒
に含んで成る錠剤又はゼラチンカプセルが利用される。
錠剤は更に結合剤、例えばマグネシウムアルミニウムシ
リケート、デンプン、例えばトウモロコシ、コムギ、又
はコメのデンプン、ゼラチン、メチルセルロース、ナト
リウムカルボキシメチルセルロース及び／もしくはポリ
ビニルピロリドン、並びに所望するならば、崩壊剤、例
えばデンプン、寒天、アルギン酸、又はそれらの塩、例
えばアルギン酸ナトリウム、及び／又は発泡剤混合物又
は吸収剤、色素、風味料及び甘味料も含んで成りうる。
本発明の薬理活性化合物を非経口投与組成物の形態又は
点滴溶液の形態において利用することも可能である。か
かる溶液は好ましくは等張水性溶液又は懸濁物であり、
例えば該活性成分を単独で、又は担体、例えばマンニト
ールを一緒に含んで成る凍結乾燥組成物の場合、使用前
に用意されうる。該薬理組成物は滅菌されているもの、
並びに／又は補助剤、例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤及
び／もしくは乳濁剤、溶解剤、浸透圧を調節する塩及び
／もしくは緩衝剤を含んで成りうるものであってよい。
所望するならその他の薬理活性物質、例えば抗生物質を
含みうる本薬理組成物は周知の方法、例えば慣用の混
合、顆粒、糖衣化、溶解又は凍結乾燥プロセスにより製
造でき、そして約０．０１％〜９０％、凍結乾燥品の場
合１００％まで、特に約０．１％〜約５０％、特に１％
〜３０％の活性成分を含んで成り、局所的に塗布すべき
組成物にとっては１％以下の活性成分濃度が特に適切で
ある。

【００４９】下記の実施例は本発明を何ら限定すること
なく例示するものである。Ｒｆ値はシリカゲルの薄層プ
レート（Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍａｓｔａｄｔ，ドイツ）
で決定した。使用した溶離混合物中の溶離液の比は容量
（ｖ／ｖ）部で表示しており、そして温度はセッ氏で示
している。溶媒又は溶媒混合物（施光性の場合）中の化
合物の濃度Ｃはパーセンテーゼ（重量／容量）で表示し
ている。

【００５０】

【実施例】実施例１： ０℃で、１．１７ｇ（７．８mmol）の１−ヒ
ドロキシベンゾトリアゾール及び１．６１ｇ（７．８mm
ol）のＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミドを
１．１３ｇ（６．５mmol）の０−テトラヒドロピラン−
４−イル−Ｄ−乳酸（７５mlの無水Ｎ，Ｎ′−ジメチル
ホルムアミド中）の溶液に加え、そして得られる無色透
明な溶液を０℃で３時間攪拌した。次に２．３３ｇ
（５．０１mmol）のスタウロスポリンを加え、そして得
られる無色の懸濁物を０℃で１時間、そして室温で２０
時間攪拌した。次に、使用したスタウロスポリンが完全
に反応することを確実にするため、全体で２５mlの無水
Ｎ，Ｎ′−ジメチルホルムアミド中の０．３８ｇ（２．
１８mmol）の０−テトラヒドロピラン−４−イル−乳
酸、０．３９ｇ（２．６０mmol）の１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール及び０．５４ｇ（２．６０mmol）のＮ，
Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミドの活性エステル
溶液を再び加え、そしてそのバッチを０℃で１時間、次
いで室温で更に１８時間攪拌した。得られる黄色の懸濁
物を３００mlの水に注ぎ入れ、そして室温で１時間攪拌
し、次いで沈殿した結晶を吸引濾過し、そして水で洗っ
た。水性相は捨てた。濾過物質を１３０mlの塩化メチレ
ンの中に懸濁し、次いで室温で１．５時間攪拌した。沈
殿Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルウレアを吸引濾過し、次
いで塩化メチレンで洗い、そしてその濾液を３０℃で高
真空でのエバポレーションにより乾くまで濃縮した。そ
の残渣（黄色結晶）をクロロホルム中の３００ｇのシリ
カゲル（タイプＳｉ６０，Ｍｅｒｃｋ９３８５，０．０
４０〜０．０６３mm）でのカラムクロマトグラフィー
（２５mlの分画）により精製した。画分２２０〜３０５
を合わせ、そして３０℃で真空でのエバポレーションに
より乾くまで濃縮した。その残渣（黄色結晶）を酢酸エ
チルから２回再結晶化させてＮ〔０−（テトラヒドロピ
ラン−４−イル）−Ｄ−ラクトイル〕−スタウロスポリ
ンを得た。薄い黄色味を帯びた結晶；ｍ．ｐ．２２２−
２２３℃（２２０℃より焼結）；０．１９mol の水含
有；〔α〕_D ²⁰＝＋１６６．９±２．０°（ｃ＝０．４
９８；メタノール）。

【００５１】出発材料は下記の通りにして得た：工程１．１： 油（Ｆｌｕｋａ，ｐｒａｃｔ．）中の６０
％の水素化ナトリウム４．８ｇ（１２０mmol）を６５℃
において、１００mlの無水１，４−ジオキサン中の３．
０６ｇ（２．８５ml，ｄ＝１．０７４；２９．９６mmo
l）のテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−オール（Ｆｌ
ｕｋａ，ｐｒｏｃｔ．）の溶液に加えた。得られる灰色
の懸濁物を還流のもとで２時間攪拌し、再び６５℃に冷
やし、次いで６０mlの無水１，４−ジオキサン中の３．
２５ｇ（２．５９ml，ｄ＝１．２５；２９．９５mmol）
のＳ（−）−２−クロロプロピオン酸（Ｆｌｕｋａ，ｐ
ｕｒｉｓｓ．）の溶液を８分かけて滴下した。得られる
茶色の懸濁物を１００mlの無水１，４−ジオキサンで希
釈し、そしてそのバッチを還流のもとで３時間攪拌しな
がら熱した。攪拌を室温で更に１４時間続けた。次に４
０mlの水を得られる茶色の懸濁物に２分かけて滴下し、
そして得られた黄色溶液を高真空のもとでのエバポレー
ションにより乾くまで濃縮した。その残渣を２００mlの
水に含ませ、そしてその水性溶液を２５０mlの酢酸エチ
ルで１回、そして１５０mlのそれで１回抽出した。その
酢酸エチル抽出物を次に１００mlの水で１回洗った。全
ての水性相を合わせ、次いで４Ｎの塩酸で酸性化した
（pH１）。得られる溶液を塩化ナトリウムで飽和にし、
そして３００mlづつの酢酸エチルで２回抽出した。次に
有機相を１５０mlづつの飽和塩化ナトリウム溶液で３回
洗った。全ての酢酸エチル抽出物を合わせ、硫酸マグネ
シウムで乾かし、濾過し、そして３０℃での高真空での
エバポレーションにより乾くまで濃縮した。残渣（黄色
い油）をバルブ管蒸留により精製した（ｂ．ｐ．は０．
６mmHgで約１６０℃）。薄い黄色味を帯びた油状の０−
（テトラヒドロピラン−４−イル）−Ｄ−乳酸が得られ
た；〔α〕_D ²⁰＝＋４６．７±０．９°（ｃ＝１．０５
８：クロロホルム）。油は酢酸エチル／ヘキサン１：１
から、６８．７〜６９．５°の融点を有する無色結晶の
形態で結晶化した；〔α〕_D ²⁰＝＋４８．８±０．８°
（ｃ＝１；クロロホルム）。

【００５２】実施例２：実施例１の最終生成物の再結晶
の母液から、塩化メチレン／メタノール（９８：２；１
０mlの画分）中の９０ｇのシリカゲル（タイプＳｉ６
０，Ｍｅｒｃｋ９３８５，０．０４０−０．０６３mm）
での０．４ｂａｒでのフラッシュクロマトグラフィーに
より、画分２３〜２７の高真空でのエバポレーションに
よる乾くまでの濃縮を経て、黄色結晶のＮ−〔０−（テ
トラヒドロピラン−４−イル）−Ｄ−ラクトイル〕−７
−オキソ−スタウロスポリンが単離された。ｍ．ｐ．２
０６−２０８℃（再結晶なし）、（＋）ＦＡＢ，ＭＳ：
（Ｍ＋Ｈ）⁺ ＝６３７，〔α〕_D ²⁰＝１３８．７±１
０．８°（ｃ＝０．１８５；メタノール：クロロホルム
＝１：１）。

【００５３】実施例３：９．１６ｇ（６１．０mmol）の
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール及び１１．７ｇ（６
１．０mmol）のＮ−エチル−Ｎ′−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を０℃
でアルゴンのもとで、４００mlの無水Ｎ，Ｎ′−ジメチ
ルホルムアミド中の８．１６ｇ（４６．９mmol）の０−
テトラヒドロピラン−４−イル−Ｄ−乳酸の溶液に加
え、次いで得られる無色透明な溶液を０℃で３時間攪拌
した。次に１７．５０ｇ（３７．５mmol）のスタウロス
ポリンを加え、そして得られる黄色溶液を０℃で２時
間、そして室温で１９時間攪拌した。その黄色溶液を次
に高真空でのエバポレーションにより乾くまで濃縮し
た。その残渣を２５０mlの水と一緒に攪拌し、そのバッ
チを吸引濾過し、そして得られるベージュ色の結晶を水
で洗った。その結晶を塩化メチレン／メタノール（９
８：２；２５mlの画分）中での５００ｇのシリカゲル
（タイプＳｉ６０，Ｍｅｒｃｋ９３８５，０．０４０−
０．０６３mm）での０．４ｂａｒでのフラッシュクロマ
トグラフィーにより精製した。画分７０〜１４０を合わ
せ、そして３０℃での高真空でのエバポレーションによ
り濃縮した。その残渣を４００mlの酢酸エチルから結晶
化させ、そして薄層クロマトグラフィーによりほとんど
純粋であるとされたＮ−〔０−（テトラヒドロピラン−
４−イル）−Ｄ−ラクトイル〕−スタウロスポリンがベ
ージュ色の結晶状で得られた。上記のフラッシュクロマ
トグラフィーの画分４５〜６９と１４１〜１７０を同じ
ように合わせ、そして高真空でのエバポレーションによ
り濃縮した。このようにして得られた黄色結晶及び第一
再結晶の母液由来の黄色結晶を再び先記したのと同じ条
件のもとでの５００ｇのシリカゲルＳｉ６０のフラッシ
ュクロマトグラフィーにかけた。エバポレーションによ
る濃縮後、第二フラッシュクロマトグラフィー操作のＴ
ＬＣ−純粋画分を最初に得られたベージュ色の結晶と合
わせ、そして８００mlの酢酸エチルから再び再結晶化さ
せ、ベージュ色の結晶状のＮ−〔０−（テトラヒドロピ
ラン−４−イル）−Ｄ−ラクトイル〕−スタウロスポリ
ンを得た。ｍ．ｐ．２２０−２２２℃（２１４℃より焼
結）；０．４２mol の水含有；〔α〕_D ²⁰＝±１６６．
６±２５°（ｃ＝０．４０４；メタノール）。

【００５４】実施例４：実施例３に類似して、１５mlの
無水Ｎ，Ｎ′−ジメチルホルムアミド中の３１０mg
（１．７８mmol）の０−テトラヒドロピラン−４−イル
−乳酸、３４７mg（２．３１mmol）の１−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾール、４４３mg（２．３１mmol）のＮ−エ
チル−Ｎ′−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カ
ルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及び６６４mg（１．４２
mmol）のスタウロスポリンから、０℃で５時間及び室温
で１６時間にわたるアルゴン下での反応、並びにその後
の同様のフラッシュクロマトグラフィーを経て、Ｎ−
〔０−（テトラヒドロピラン−４−イル）−Ｌ−ラクト
イル〕−スタウロスポリンがベージュの結晶状で得られ
た：ｍ．ｐ．３０２−３０４℃（２８０℃より焼結；酢
酸エチルより）；〔α〕_D ²⁰＝＋１４５．６±１．８°
（ｃ＝０．５４４；クロロホルム）。

【００５５】出発材料は下記の通りである：段階４．１： 段階１．１に類似して、全体で５５mlの
１，４−ジオキサン中の１．０２１ｇ（０．９５１ml，
ｄ＝１．０７４；１０mmol）のテトラヒドロ−２Ｈ−ピ
ラン−４−オール（Ｆｌｕｋａ，ｐｒａｃｔ．），１．
６０ｇの水素化ナトリウム（油中６０％強、Ｆｌｕｋ
ａ，ｐｒａｃｔ．）及び１．０８ｇ（０．８６３ml，ｄ
＝１．２５８；１０mmol）のＲ（＋）−２−クロロプロ
ピオン酸（Ｆｌｕｋａ，ｐｒａｃｔ．）から、エバポレ
ーションによる酢酸エチル抽出物の濃縮及び得られる残
渣のバルブ管蒸留（ｂ．ｐ．は０．８mmHgで約１６０
℃）を経て、無色の油状の０−（テトラヒドロピラン−
４−イル）−Ｌ−乳酸が得られ、これは放置すると、無
色な結晶へと固形化、３３．７〜６７．６℃で融触し、
そしてまだ０．１３mol （１．３０％）の水を含んでい
た；〔α〕_D ²⁰＝−４６．７±１．０°（ｃ＝１．０３
５；クロロホルム）。

【００５６】実施例５：実施例３に類似して、１０mlの
無水Ｎ，Ｎ′−ジメチルホルムアミド中の２００mg
（１．２５mmol）の０−テトラヒドロピラン−４−イル
−グリコール酸、２４４mg（１．６２mmol）の１−ヒド
ロキシベンゾトリアゾール、３１１mg（１．６２mmol）
のＮ−エチル−Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）
−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及び４６６mg（１．
０mmol）のスタウロスポリンから、０℃で２時間及び室
温で１８時間の反応、フラッシュクロマトグラフィー
（実施例３と類似だが、２０mlつづの画分とし、生成物
は画分１５−２０の中にある）、並びに酢酸エチル／ヘ
キサン（１：１）からの精製した生成物の再結晶を経
て、ベージュ色結晶状のＮ−〔２−（テトラヒドロピラ
ン−４−イルオキシ）−アセチル〕−スタウロスポリン
が得られた。ｍ．ｐ．２２２−２２４℃（２１５℃より
焼結）；０．２９mol の水含有；〔α〕_D ²⁰＝＋８０．
０±２．０°（ｃ＝０．５１０；クロロホルム）；Ｒｆ
＝０．２６（塩化メチレン：エタノール＝９５：５）；
Ｒｆ＝０．４８（アセトン）；Ｒｆ＝０．６４（塩化メ
チレン：メタノール＝９：１）。

【００５７】出発材料は下記の通りにして得た：工程５．１： 油（Ｆｌｕｋａ，ｐｒａｃｔ．）中の６０
％の水素化ナトリウム３．２０ｇ（８０mmol）を６５℃
において、７０mlの無水１，４−ジオキサン中の２．０
４２ｇ（１．９０２ml，ｄ＝１．０７４；２０．０mmo
l）のテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−オール（Ｆｌ
ｕｋａ，ｐｒｏｃｔ．）の溶液に加えた。得られる灰色
の懸濁物を還流のもとで３時間攪拌し、再び６５℃に冷
やし、次いで４０mlの無水１，４−ジオキサン中の１．
８９ｇ（２０．０mmol）のクロロ酢酸（Ｆｌｕｋａ，ｐ
ｕｒｉｓｓ．）の溶液を２０分かけて滴下した。得られ
る灰−茶色の懸濁物を再び還流するように熱し、次いで
その温度で３時間攪拌した。室温で更に１４時間攪拌
後、１０mlの水を５分かけて滴下し、そして得られた黄
色溶液を高真空のもとでのエバポレーションにより乾く
まで濃縮した。その残渣を２０mlの水に含ませ、そして
その水性溶液を２０mlづつの酢酸エチルで２回抽出し
た。その酢酸エチル抽出物を次に１０mlの水で１回洗っ
た。その水性相を合わせ、次いで４Ｎの塩酸で酸性化し
た（pH１）。得られる溶液を塩化ナトリウムで飽和に
し、そして５０mlづつの酢酸エチルで２回抽出した。そ
の酢酸エチル相を２０mlづつの飽和塩化ナトリウム溶液
で２回洗った。全ての酢酸エチル抽出物を合わせ、硫酸
マグネシウムで乾かし、濾過し、そして３０℃での高真
空でのエバポレーションにより乾くまで濃縮した。残渣
（黄色い油）をバルブ管蒸留により精製した。（ｂ．
ｐ．は０．４mmHgで約１３０℃）。無色の油状の０−
（テトラヒドロピラン−４−イル）−Ｄ−グリコール酸
が得られた。それは放置する無色結晶へと固形化し、６
３．９〜７０．６℃（６０．２℃より焼結）で融解し、
そして０．０８mol （０．９１％）の水を含んでいた。

【００５８】実施例６：実施例５のフラッシュクロマト
グラフィーの画分９〜１１より、酢酸エチル／ヘキサン
１：１からの再結晶を経て、二次産物として、Ｎ−〔２
−（テトラヒドロピラン−４−イルオキシ）−アセチ
ル〕−７−オキソ−スタウロスポリンが得られた；黄色
結晶；ｍ．ｐ．１９０．７〜１９２．４℃（１８７℃よ
り焼結）；０．３５mol の水含有；〔α〕_D ²⁰＝＋１５
７．４±２．０°（ｃ＝０．４９１；クロロホルム）；
Ｒｆ＝０．３５（塩化メチレン：エタノール＝９５：
５）；Ｒｆ＝０．６３（アセトン）；Ｒｆ＝０．７３
（塩化メチレン：メタノール＝９：１）。

【００５９】実施例７：実施例５のフラッシュクロマト
グラフィーの画分２６〜３６より、二次産物として、溶
液中で不安定なＮ−〔２−（テトラヒドロピラン−４−
イルオキシ）−アセチル〕−７−ヒドロキシ−スタウロ
スポリン（立体異性体の混合物）が得られた；ベージュ
色結晶；ｍ．ｐ．２３５〜２３７℃（２２７℃より焼
結；酢酸エチル／ヘキサン１：１より）；０．６９mol
の水含有；〔α〕_D ²⁰＝＋２０９．６±２．０°（ｃ＝
０．１２５；クロロホルム）；Ｒｆ＝０．２４（塩化メ
チレン：エタノール＝９５：５）；Ｒｆ＝０．５５（ア
セトン）；Ｒｆ＝０．５５（塩化メチレン：メタノール
＝９：１）。

【００６０】実施例８：実施例３に類似して、５０mlの
無水Ｎ，Ｎ′−ジメチルホルムアミド中の１．３２７ｇ
（７．０５mmol）の２−メチル−２−（テトラヒドロピ
ラン−４−イルオキシ）−プロピオン酸、１．３７６ｇ
（９．１６mmol）の１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル、１．７５７ｇ（９．１６mmol）のＮ−エチル−Ｎ′
−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩
酸塩（ＥＤＣ）及び２．６３ｇ（５．６４mmol）のスタ
ウロスポリンから、アルゴン下で室温で２４時間の反
応、塩化メチレン／アセトン（９：１；画分１〜１０
０）及び塩化メチレン／アセトン（１：１；画分１００
〜２００）中の５００ｇのシリカゲル（タイプＳｉ６
０，Ｍｅｒｃｋ９３８５，０．０４０〜０．０６３mm）
での０．４ｂａｒ（２０mlの画分）でのフラッシュクロ
マトグラフィーを経て、Ｎ−〔２−メチル−２−（テト
ラヒドロピラン−４−イルオキシ）−プロピオニル〕−
スタウロスポリンが得られた。更なる精製のため、画分
１３４〜１７０を合わせ、次いで３０℃での真空でのエ
バポレーションにより乾くまで濃縮した。得られる残渣
を再び塩化メチレン／メタノール（９８：２；２５ml画
分）中の１００ｇのシリカゲル（タイプＳｉ６０，Ｍｅ
ｒｃｋ９３８５，０．０４０〜０．０６３mm）での０．
４ｂａｒでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製
した。画分２１〜２８を合わせ、次いで３０℃での高真
空でのエバポレーションにより濃縮した。１３mlの酢酸
エチル／シクロヘキサン（１：４）からの残渣の再結晶
はＮ−〔２−メチル−２−（テトラヒドロピラン−４−
イルオキシ）−プロピオニル〕−スタウロスポリンをも
たらした。淡いベージュ色の結晶；ｍ．ｐ．２０９〜２
１１℃（２０４℃より焼結）；０．３８mol （１．０７
％）の水含有；〔α〕_D ²⁰＝＋１５４．７±２．０°
（ｃ＝０．４９７；クロロホルム）。

【００６１】出発材料は下記の通りにして得た：工程８．１ａ： ２０mlの無水テトラヒドロフラン中の
３．４８ｇ（２０mmol）の０−（テトラヒドロピラン−
４−イル）−Ｄ−乳酸の溶液を０〜９℃にて、１５分か
けて、アルゴン下で、２０mlの無水テトラヒドロフラン
中の２０ml（４０mmol）のリチウムジイソプロピルアミ
ド溶液（テトラヒドロフラン／シクロヘキサン中の２モ
ラー溶液）に滴下した。次に、得られる赤色溶液を０℃
で１時間攪拌し、次いで−７５℃に冷やした。次に１０
mlの無水テトラヒドロフラン中の２．８４ｇ（１．２５
ml，ｄ＝２．２８０；２０mmol）のヨウ化メチルの溶液
を２分かけて滴下し、その間に温度は−６１℃にまで上
昇し、そして溶液の色は黄色に変った。その黄色溶液を
更に１４時間、室温に徐々に温めながら攪拌し、次いで
得られる黄色懸濁物を１００mlの氷冷水に注ぎ、そして
このバッチを１００mlづつの酢酸エチルで２回抽出し
た。その酢酸エチル相を次に５０mlの水で１回洗った。
その水性相を合わせ、４Ｎの塩酸で酸性化し、そして１
００mlづつの酢酸エチルで２回抽出した。その酢酸エチ
ル相を５０mlづつの水で２回洗い、合わせ、硫酸ナトリ
ウムで乾かし、そして３０℃での高真空でのエバポレー
ションにより乾くまで濃縮した。その粗精製物を３０ml
の酢酸エチルに溶かし、次いでその得られる溶液に２．
７３mlのジシクロヘキシルアミン（Ｆｌｕｋａ，ｐｕｒ
ｉｓｓ）を室温で加えた。ゆっくり沈殿させた結晶を吸
引濾過し、少量の酢酸エチルで洗い、そして３０mlづつ
の酢酸エチルから更に２回再結晶させて無色結晶状の２
−メチル−２−（テトラヒドロピラン−４−イルオキ
シ）−プロピオン酸が得られた；ｍ．ｐ．１３１．７〜
１３７．８℃（１２８℃より焼結）。

【００６２】この塩は更なる合成のために直接使用する
か、又は下記のように反応させて遊離の２−メチル−２
−（テトラヒドロピラン−４−イルオキシ）−プロピオ
ン酸を生成してよい。３．８ｇ（０．０１mol ）のジシ
クロヘキシルアンモニウム塩を５０mlの水に溶かした。
その溶液を４Ｎの塩酸でpH１に調整した。沈殿したジシ
クロヘキシルアンモニウムクロリドを吸引濾過し、そし
て少量の水で洗った。その水性相を５０mlづつの水で２
回洗い、合わせ、硫酸ナトリウムで乾かし、そして３０
℃で真空でのエバポレーションにより乾くまで濃縮し
た。その残渣をシクロヘキサンから再結晶させて、無色
結晶状のｍ．ｐ．９０．２〜９３．８℃（７９．５℃よ
り焼結）の２−メチル−２−（テトラヒドロピラン−４
−イルオキシ）−プロピオン酸を得た。

【００６３】他方、２−メチル−２−（テトラヒドロピ
ラン−４−イルオキシ）−プロピオン酸が、Ｈ．Ｇｉｌ
ｍａｎとＧ．Ｒ．ＷｉｌｄｅｒのＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ
Ｓｏｃ．７７，６６４４（１９５５）に記載の方法に従
い、下記のようにして得ることができる：

【００６４】工程８．１ｂ：４８．０ｇ（６０ml，ｄ＝
０．７９；８２６mmol）の無水アセトン（Ｆｌｕｋａ，
ｐｕｒｉｓｓ．）に５．１０ｇ（５０mmol）のテトラヒ
ドロ−２Ｈ−ピラン−４−オール（Ｆｌｕｋａ，ｐｒａ
ｃｔ．）を溶かした。８．１１ｇ（５．４５ml，ｄ＝
１．４９；６８mmol）のクロロホルム（Ｆｌｕｋａ，ｐ
ｕｒｉｓｓ．）及び９．６０ｇ（２４０mmol）の水酸化
ナトリウム（Ｍｅｒｃｋ，ｐ．ａ．）を室温でこの溶液
に攪拌しながら徐々に加え、１０分間でその反応混合物
の温度は２３℃から５８℃（還流）の温度にまで上昇し
た。５８℃で３０分後、得られる無色の懸濁物を自発的
に再びゆっくりと冷えた。それを再び還流し、そしてそ
の温度で更に５時間攪拌した。再度冷却後、そのバッチ
を３０℃での高真空でのエバポレーションにより乾くま
で濃縮した。その残渣を５０mlの水に含ませ、４Ｎの塩
酸で酸性化し（pH１）、そして１００mlづつの酢酸エチ
ルで２回抽出した。この抽出物を５０mlづつの飽和塩化
ナトリウム溶液で２回洗った。その酢酸エチル相を合わ
せ、硫酸ナトリウムで乾かし、濾過し、そして再びエバ
ポレーションにより濃縮した。その残渣を塩化メチレン
／メタノール／水７０：３０：５（２０mlの画分）中で
の５００ｇのシリカゲル（タイプＳｉ６０，Ｍｅｒｃｋ
９３８５，０．０４０〜０．０６３mm）でのカラムクロ
マトグラフィーにより精製した。画分４７〜８０を合わ
せ、そして３０℃での高真空でのエバポレーションによ
り濃縮した。その残渣（３．１０ｇ；グリース状結晶）
を３０mlのジエチルエーテルに懸濁した。その懸濁物を
室温で１／２時間攪拌した。得られる結晶を吸引濾過
し、そしてエーテルで洗った。その濾過物質を１５mlの
水と２０mlの酢酸エチルとの混合物に含ませ、そのpHを
４Ｎの塩酸で１に合わせ、そしてその酢酸エチル相を分
離させた。その酢酸エチル相を全部で２０mlの水で洗っ
た後、全ての酢酸エチル相を合わせ、硫酸ナトリウムで
乾かし、濾過し、そして３０℃での高真空でのエバポレ
ーションにより濃縮した。その残渣（０．４１ｇ）を１
０mlの酢酸エチルに溶かし、そしてその溶液に０．４３
７mlのジシクロヘキシルアミン（Ｆｌｕｋａ，ｐｕｒｉ
ｓｓ．）を加えて、無色結晶状の２−メチル−２−（テ
トラヒドロピラン−４−イルオキシ）−プロピオン酸の
ジシクロヘキシルアンモニウム塩が得られた。これは１
３６．６〜１３８．８℃（１３０℃より焼結）で融解
し、そして上記と同様に反応して遊離の２−メチル−２
−（テトラヒドロピラン−４−イルオキシ）−プロピオ
ン酸を生成しうる。

【００６５】他方、２−メチル−２−（テトラヒドロピ
ラン−４−イルオキシ）プロピオン酸のジシクロヘキシ
ルアンモニウム塩は下記の方法に従って得ることもでき
る：

【００６６】工程８．１ｃ：１０．２１ｇ（１００mmo
l）のテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−オール（Ｆｌ
ｕｋａ，ｐｒａｃｔ．）を３５０mlの無水１，４−ジオ
キサン（Ｆｌｕｋａ，ｐｕｒｉｓｓ．）に溶かした。得
られる溶液を６５℃に熱した。次に、１２．０ｇ（３０
０mmol）の水素化ナトリウム（油中で６０％強；Ｆｌｕ
ｋａ，ｐｒａｃｔ．）を６５℃で加えた。得られる灰色
の懸濁物を還流のもとで３時間攪拌し、その後再び６５
℃に冷やし、次いで１５０mlの無水ジオキサン中の１
６．７０ｇ（１００mmol）のα−ブロモイソ酪酸（Ｆｌ
ｕｋａ，ｐｒａｃｔ．）を２５分かけて滴下した。得ら
れる懸濁物を還流のもとで更に３時間、次いで室温で１
７時間攪拌した。次に２５mlの水を慎重に滴下し、そし
てその黄色の懸濁物を高真空のもとでのエバポレーショ
ンにより乾くまで濃縮した。その残渣を５０mlの水に含
ませ、そして１００mlづつの酢酸エチルで２回抽出し
た。次にその抽出物を５０mlの水で洗った。その水性相
を合わせ、４Ｎの塩酸でpH１に合わせ、飽和塩化ナトリ
ウムで洗い、そして５０mlづつの酢酸エチルで２回抽出
した。その抽出物を５０mlづつの飽和塩化ナトリウム溶
液で２回抽出した。全ての酢酸エチル相を合わせ、硫酸
ナトリウムで乾かし、濾過し、そして高真空でのエバポ
レーションにより濃縮した。その残渣（５．２２ｇ、黄
色油）を塩化メチレン／メタノール（９：１；画分１〜
５０）、塩化メチレン／メタノール（４：１；画分５１
〜１５０）及び塩化メチレン／メタノール（７：３；画
分１５１〜２２５）中での５００ｇのシリカゲル（タイ
プＳｉ６０，Ｍｅｒｃｋ９３８５；０．０４０〜０．０
６３mm）での０．４ｂａｒでのフラッシュクロマトグラ
フィー（全て２５mlの画分）により精製した。画分１６
〜２００を合わせ、そして高真空でのエバポレーション
により濃縮した。その残渣を２５mlのジエチルエーテル
で室温で１／４時間攪拌した。得られる結晶を吸引濾過
し、そしてジエチルエーテルで洗った。無色の結晶を１
０mlの水に含ませ、４Ｎの塩酸でpH１に合わせ、そして
２０mlづつの酢酸エチルで２回抽出した。その酢酸エチ
ル相を１０mlづつの水で２回洗い、次いで合わせ、硫酸
ナトリウムで乾かし、濾過し、そして高真空でのエバポ
レーションにより濃縮した。その残渣を１０mlの酢酸エ
チルに溶かし、そして０．３１７mlのジシクロヘキシル
アミンを加えて、１３６．５〜１３８．８℃（１３０℃
より焼結）で融解する無色の結晶状の２−メチル−２−
（テトラヒドロピラン−４−イルオキシ）−プロピオン
酸のジシクロヘキシルアンモニウム塩を得た。

【００６７】実施例９：活性成分、例えば先の実施例に
記載の式Ｉの化合物のいづれか２０mgをそれぞれが含ん
で成る錠剤を下記の組成により慣用の方法で調製した：

【００６８】

【００６９】調製法：該活性成分をコムギデンプンの一
部、ラクトース及びコロイド状シリカと混合し、そして
その混合物を篩にかけた。残りのコムギデンプンの一部
を湯浴上で５倍量の水でペースト状にし、そしてその粉
末混合物をそのペーストとややプラスチック状の塊がで
きるまでこねた。

【００７０】このプラスチック塊を約３mmのメッシュサ
イズを有する篩に通し、そして得られる乾燥顆粒を再び
篩に通した。残りのコムギ粉、タルク及びステアリン酸
マグネシウムを混ぜ合わせ、そしてその混合物を、それ
ぞれ１４５mgの重量及び破断ノッチを有する錠剤となる
ように圧搾した。

【００７１】実施例１０：Ｎ−〔０−（テトラヒドロピ
ラン−４−イル）−Ｄ−ラクトイル〕−スタウロスポリ
ンのインビボ抗腫瘍活性 該物質を下記のように製剤化した：１２５mgの活性成分
を０．２５mlのジメチルスルホキシドに溶かし、そして
５０μｌのツイーン８０と混合した。０．９％の塩化ナ
トリウム溶液４．７mlを次に加え、そしてこの混合物を
徹底的に混合した。

【００７２】ヒト膀胱腫瘍Ｔ₂₄細胞が皮下移植してある
雌のバルブ／ｃ無毛マウスを抗腫瘍活性を決定するため
に用いた。経口フォーレンナルコーシス下にある動物
に、約２５mgの固形腫瘍を動物の左側腹部上の皮膚の下
に０日目に置き、そしてその小さな切創を縫合クリップ
で閉じた。移植の６日後、マウスを６匹の動物のグルー
プにランダムに分け、そして処置を開始した。処置は、
様々な投与量におけるジメチルスルホキシド／ツイーン
８０／塩化ナトリウム溶液中の式Ｉの化合物の毎日の経
口又は腹膜腔内投与により１５日間にわたって実施し
た。腫瘍のノギスで週に２回測定し、そして腫瘍の容積
を計算した。その結果を表の中にまとめ、ここで「ｄｏ
ｓｅ」は毎日の投与量、「ａｄｍｉｎ．」は投与方法、
「ｅｘｐｅｒ」は実験、そして「Ｔ／Ｃ ％」は処置マ
ウス（Ｔ）と未処置のコントロールマウス（Ｃ）との値
の％商である。商が小さいほど、投与がより有効であ
る。

【００７３】 ｄｏｓｅ ａｄｍｉｎ． 平均腫瘍容積 〔mg／kg〕 〔Ｔ／Ｃ ％〕 Ｅｘｐｅｒ．１ Ｅｘｐｅｒ．２ ６．２５ ｐ．ｏ． １５ １２ ３．１３ ｐ．ｏ． １７ １４ １．５６ ｐ．ｏ． ３１ ０．７８ ｐ．ｏ． ５８ ３．００ ｉ．ｐ． ９ １１ １．５０ ｉ．ｐ． １４ １９ ０．７５ ｉ．ｐ． ３２ ０．３８ ｉ．ｐ． ６２ ０．１９ ｉ．ｐ． ７４

【００７４】実施例１１：Ｎ−〔０−（テトラヒドロピ
ラン−４−イル）−Ｄ−ラクトイル〕−スタウロスポリ
ンの最大寛容投与量（ＭＴＤ）の決定 ３匹の雌のバルブ／ｃマウスを投与当りジメチルスルホ
キシド／ツイーン８０／塩化ナトリウム溶液中のＮ−
〔０−（テトラヒドロピラン−４−イル）−Ｄ−ラクト
イル〕−スタウロスポリンによるｉ．ｐ．又はｐ．ｏ．
処置した（製剤化については実施例１０を参照のこ
と）。その投与量は動物が７日以内に死なない限り増や
していった。 ＭＴＤ（ｐ．ｏ．）：６２．５mg／kg ＭＴＤ（ｉ．ｐ．）：３１．２５mg／kg

【００７５】実施例１２：式Ｉの化合物によるタンパク
質キナーゼＣの様々なアイソタイプの活性の阻害化合物 Ａ：Ｎ−〔０−（テトラヒドロピラン−４−イル）−Ｄ
−ラクトイル〕−スタウロスポリン Ｂ：Ｎ−〔０−（テトラヒドロピラン−４−イル）−Ｄ
−ラクトイル〕−７−オキソ−スタウロスポリン Ｃ：Ｎ−〔０−（テトラヒドロピラン−４−イル）−Ｌ
−ラクトイル〕−スタウロスポリン Ｄ：Ｎ−〔２−（テトラヒドロピラン−４−イルオキ
シ）−アセチル〕−スタウロスポリン Ｅ：Ｎ−〔２−（テトラヒドロピラン−４−イルオキ
シ）−アセチル〕−７−オキソ−スタウロスポリン Ｆ：Ｎ−〔２−（テトラヒドロピラン−４−イルオキ
シ）−アセチル〕−７−ヒドロキシ−スタウロスポリン Ｇ：Ｎ−〔２−メチル−２−（テトラヒドロピラン−４
−イルオキシ）−プロピオニル〕−スタウロスポリン

【００７６】本明細書に記載の関連の生物学試験に従
い、上記の化合物について下記のＩＣ ₅₀値〔μmol ／
ｌ〕が得られた。

【００７７】化合物 α β-1 β-2 γ δ ε ζ η Ａ 0.004 0.023 0.014 0.008 0.15 0.25 54 0.47 Ｂ 0.005 0.014 0.012 0.008 0.085 0.29 >100 0.032 Ｃ 0.03 0.90 Ｄ 0.022 0.08 0.016 0.017 0.46 0.42 4.1 0.21 Ｅ 0.007 0.14 Ｆ 0.033 0.45 Ｇ 0.10 10

【００７８】実施例１３：ヒトＴ₂₄膀胱癌細胞の増殖に
対する式Ｉの化合物の阻害活性 本明細書に記載の関連の生物学試験に従い、下記のＩＣ
₅₀値（μmol ／ｌ〕が先の実施例に挙げた化合物Ａ〜Ｇ
について得られた：

【００７９】化合物 Ａ ０．１２ Ｂ ０．４１ Ｃ ０．１２ Ｄ ０．０３５ Ｅ ０．２６ Ｆ ０．９１ Ｇ ０．５３

【００８０】実施例１４：式Ｉの化合物によるＰＤＧＦ
刺激型レセプターチロシンキナーゼ活性の阻害 本明細書に記載の関連の生物学的試験に従い、下記のＩ
Ｃ₅₀値〔μmol ／ｌ〕が先の実施例に挙げた化合物Ａと
Ｃについて得られた：化合物 Ａ ＜０．０８ Ｃ ＜０．０８

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 309/12 9360−4Ｃ

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式ＩのＮ−（テトラヒドロピラン−４−
   イルオキシ−アルカノイル）−スタウロスポリン誘導体 【化１】 （式中、表示の配置は相対立体化学のみを表わすことを
   意図しており、ここでその絶対立体化学はスタウロスポ
   リンのそれに相当し、そしてここでＲ₁ は水素、ヒドロ
   キシ、低級アルコキシ又はオキソであり、 Ｒ₂ は水素又はＣ_1-4 アルキルであり、そしてＲ₃ は水
   素又はＣ_1-4 アルキルである）。
2. 【請求項２】 Ｒ₃ が水素である。請求項１に記載の式
   Ｉの化合物。
3. 【請求項３】 Ｒ₁ が水素、ヒドロキシ又はオキソであ
   り、Ｒ₂ が水素又はＣ_1-4 アルキルであり、そしてＲ₃
   が水素又はＣ_1-4 アルキルである、請求項１に記載の式
   Ｉの化合物。
4. 【請求項４】 Ｒ₁ が水素又はオキソであり、Ｒ₂ が水
   素又はＣ_1-4 アルキルであり、そしてＲ₃ が水素であ
   る、請求項１に記載の式Ｉの化合物。
5. 【請求項５】 Ｒ₁ が水素又はオキソであり、Ｒ₂ が水
   素又はメチルであり、そしてＲ₃ が水素である、請求項
   １に記載の式Ｉの化合物。
6. 【請求項６】 Ｒ₂ がＲ₃ とは異なるときに、Ｃ−Ｒ₂
   原子において（Ｄ）−配置を有している、請求項１〜５
   のいづれか１項に記載の式Ｉの化合物。
7. 【請求項７】 請求項１にかかわる、Ｎ−〔０−（テト
   ラヒドロピラン−４−イル）−Ｄ−ラクトイル〕−スタ
   ウロスポリン。
8. 【請求項８】 請求項１にかかわる、Ｎ−〔２−（テト
   ラヒドロピラン−４−イルオキシ）−アセチル〕−スタ
   ウロスポリン。
9. 【請求項９】 Ｎ−〔０−（テトラヒドロピラン−４−
   イル）−Ｄ−ラクトイル〕−７−オキソ−スタウロスポ
   リン、 Ｎ−〔０−（テトラヒドロピラン−４−イル）−Ｌ−ラ
   クトイル〕−スタウロスポリン、 Ｎ−〔２−（テトラヒドロピラン−４−イルオキシ）−
   アセチル〕−７−オキソ−スタウロスポリン、 Ｎ−〔２−（テトラヒドロピラン−４−イルオキシ）−
   アセチル〕−７−ヒドロキシ−スタウロスポリン及び Ｎ−〔２−メチル−２−（テトラヒドロピラン−４−イ
   ルオキシ）−プロピオニル〕−スタウロスポリン、より
   選ばれる、請求項１に記載の式Ｉの化合物。
10. 【請求項１０】 タンパク質キナーゼＣを阻害するうえ
    で有効な量における請求項１に記載の式Ｉの化合物を、
    薬理担体と一緒に含んで成る、タンパク質キナーゼＣの
    阻害のための薬理組成物。
11. 【請求項１１】 式III のテトラヒドロピラン−４−イ
    ルオキシ−アルカノン酸 【化２】 （式中、Ｒ₂ は水素又はＣ_1-4 アルキルであり、そして
    Ｒ₃ は水素又はＣ_1-4 アルキルである）。