AT243433B - Verfahren zur Isolierung des α1-Antitrypsins aus menschlichen oder tierischen Körperflüssigkeiten - Google Patents
Verfahren zur Isolierung des α1-Antitrypsins aus menschlichen oder tierischen KörperflüssigkeitenInfo
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Description
<Desc/Clms Page number 1> Verfahren zur Isolierung des as-antitrypsin aus menschlichen oder tierischen Körperflüssigkeiten EMI1.1 <Desc/Clms Page number 2> Aus dieser Ausgangssubstanz wird nach dem erfindungsgemässen Verfahren das α1-Antitrypsin isoliert. Das zur Fällung der cel-Antitrypsin enthaltenden Fraktion verwendete Ammonsulfat wird zweckmässig durch Schlauchdialyse, Elektrodialyse oder Ultrafiltration abgetrennt. Ein besonderer Vorteil des angegebenen Verfahrens ist darin zu erblicken, dass die übrigen biologisch wertvollen Serumproteine, wie Gammaglobulin, Albumin u. a. ohne Beeinträchtigung durch das erfindungsgemässe Verfahren isoliert werden können. Ausserdem erlaubt das erfindungsgemässe Verfahren, grössere Mengen der Ausgangssubstanzen als nach den bekannten Verfahren zurIsolierungdesctl-Antitrypsins aufzuarbeiten und das α1-Antitrypsin in einer bisher nicht erreichten Ausbeute zu isolieren. Das Verfahren ist sehr schonend, die biologische Aktivität bleibt bei der Isolierung voll erhalten. Bestimmung der Antitrypsinaktivität Bei der Bestimmung der Antitrypsinaktivität wird die Umwandlung vom Fibrinogen in Fibrin als Indikator benutzt. Sie kann durch Trypsin und Thrombin hervorgerufen werden. Dieses System wird durch Antitrypsin gehemmt. Zur Bestimmung der Antitrypsinaktivität versetzt man 0, 2 ml frisch bereiteter Trypsinverdünnungen fallender Konzentration (Verdünnungsreihe) in Boratpuffer vom PH-Wert 7, 4-7, 6 mit 0, 1 ml Anti- trypsinlösung bekannter Konzentration, jedoch unbekannter Aktivität, oder zur Kontrolle mit 0, 1 ml Serum. EMI2.1 Das Röhrchen mit der Antitrypsinverdünnung, bei der gerade kein Gerinnsel mehr beobachtet wird, enthält Trypsin und Antitrypsin in äquivalenten Mengen. Beispiel1 :(vgl.Fliessscheme) 11 einer nach Schultze und Mitarbeitern (Z. Naturforschung 10b, 463,1955), aus Serum durch Ammonsulfat-Fraktionierung gewonnenen 2% gen Lösung L IV + VI, die mit 2n Salzsäure unter Rühren auf den PH-Wert 6, 0 eingestellt wurde, wird unter Rühren mit 50 ml einer 2% eigen Lösung von 2-Äthoxy- -6,9-diamino-acridinlactat versetzt und nach 5 h Stehen 10 min bei 3000 U/min zentrifugiert. Der Abguss wird mit 2n Natronlauge auf den pH-Wert 7,0 eingestellt, das 0'. - Antitrypsin durch Zugabe weiterer 150 ml einer 2% eigen Lösung von 2-Athoxy-6,9-diamino-acridinlactat ausgefällt und abzentrifugiert. Der das α1-Antitrypsin enthaltende Rückstand wird in 400 ml eiskaltem Wasser aufgenommen und durch Einstellen des PH-Wertes mit 2n Salzsäure auf 5, 0 in Lösung gebracht. Die verwendete 2-Äthoxy-6,9-diamino-acridinverbindung wird aus der Eiweisslösung durch Zugabe von 12 g festem Natriumchlorid während 10 min langem Rühren und anschliessender Filtration entfernt. Der Abguss (370 ml), in dem das α1-Antitrypsin enthalten ist, wird mit 2n Natronlauge auf den PH-Wert 5, 5 eingestellt und bei -1 bis -50C mit 462 ml 90% igem Methanol (50% Methanol im Milieu), das 10% 0, 5 molaren Acetatpuffer vom pH-Wert 5, 5 enthält, unter ständigem Rühren gefällt. Der entstandene Niederschlag wird bei -5 C abzentrifugiert und in 100 ml Eiswasser gelöst. Nach Einstellen des PH-Wertes mit 10% iger Natriumbikarbonat-Lösung auf 7, 0 wird sofort lyophilisiert. <Desc/Clms Page number 3> EMI3.1 <Desc/Clms Page number 4> EMI4.1 **WARNUNG** Ende DESC Feld kannt Anfang CLMS uberlappen**.
Claims (1)
- <Desc/Clms Page number 5> bekannte Weise, vorzugsweise nach Auflösen des Niederschlages durch Dialyse, entfernt und die erhaltene α1-Antitrypsinlösung in an sich bekannter Weise, vorzugsweise durch Ultrafiltration, konzentriert und/oder lyophil trocknet.2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man als organisches Eiweiss- fällungsmittel Methanol oder Äthanol verwendet.
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