AT228388B - - Google Patents
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Description
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Verfahren zur Gewinnung von Kallikrein
Es ist bekannt, dass man das Kreislaufhormon Kallikrein aus Pankreas, Submaxillarisdrüsen und Harn gewinnen kann. Es wird dabei in wechselnden Ausbeuten erhalten.
Es wurde nun gefunden, dass man hochgereinigte Kallikrein-Präparate in ganz besonders hohen Ausbeuten dadurch erhalten kann, dass man als Ausgangsmaterial Schweineharn verwendet. Dieser enthält etwa zehnmal soviel Kallikrein wie der Harn anderer Tiere.
Hochgereinigte Harn-Kallikrein-Präparate lassen sich in einfacher Weise dadurch herstellen, dass man Roh-Kallikrein durch eine fraktionierte Acetonfällung aus frischem Schweineharn anreichert und durch eine nochmalige Acetonfällung weiterreinigt und konzentriert. Das Konzentrat kann nahezu ohne Aktivitätsverluste weitgehend von Protein und von den Begleitfarbstoffen in einem Arbeitsschritt durch Säulenchromatographie getrennt werden.
Das Verfahren ermöglicht es, Kallikrein in besten Ausbeuten mit einem Reinheitsgrad von weniger als 10 ug Protein pro Kallikrein-Einheit (KE) zu erhalten.
Beispiel : 101 frischer Schweineharn werden mit 101 Aceton versetzt und dem Überstand nach Abtrennung der Fällung weitere 10 1 Aceton zugesetzt. Der erneut gebildete Niederschlag wird isoliert, in 100 - 150 ml Wasser aufgenommen, vom Unlöslichen abzentrifugiert und der Rückstand nochmals mit 50 ml Wasser gewaschen. Die vereinigten Überstände werden mit 2 Volumen Aceton gefällt und das Zentrifugat zweimal mit 40 bzw. 20 ml Wasser eluiert. Man erhält 60 ml Eluat mit zirka 270 KE/ml und einem Reinheitsgrad von 50 bis 80 mg Protein/KE. Dieses Eluat wird durch Säulenchromatographie weiter gereinigt.
Man erhält dabei in einer Gesamtausbeute von 65 bis 80%, bezogen auf die Ausgangsaktivität, farblose Präparate mit weniger als 10 jug Protein/KE, welche auch noch weiter gereinigt werden können.
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Claims (1)
- PATENTANSPRUCH : Verfahren zur Herstellung hochgereinigter Kallikrein-Präparate aus Harn, dadurch gekennzeichnet, dass man als Harn Schweineharn verwendet. **WARNUNG** Ende CLMS Feld Kannt Anfang DESC uberlappen**.
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