DE1642612A1 - Die Verwendung von Erythrozyten zur Gewinnung bzw.Isolierung eines Plasminogen-Aktivators - Google Patents
Die Verwendung von Erythrozyten zur Gewinnung bzw.Isolierung eines Plasminogen-AktivatorsInfo
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Description
FARBENFABRIKEN BAYER AG 16A2612
-Bayerwerk 12. Dezember 1969
P 16 42 612.3 Patent-Abteilung Sx/Sc
Die Verwendung von Erythrozyten zur Gewinnung "bzw. Isolierung eines Plasminogen-Aktivators
: "■*■■ ' ι
Es ist bekannt, daß aus menschlichem urin ein Plasminogen-Aktivator,
die Frokinase, gewogen werfen kann. Durch Adsorption
und Fällung wird dieser Aktivator angereichert. Das bekannte Verfahren wird schon durch die Verwendung des
Ausgangsmaterials aufwendig. Überdies ist der Gehalt an Aktivator so gering, daß mehrere 100 Liter für eine therapeutische
Dosis aufgearbeitet werden müssen.
Es wurde nun gefunden, daß man zur Gewinnung bzw. Isolierung
eines Plasminogen-Aktivators Erythrozyten, vorzugsweise deren Stromata, verwenden kann, wenn man diese bei einem
pH-Wert von etwa 1 bis 4 extrahiert. ■ ; M
Die weitere Anreicherung des Aktivators besteht in der Beseitigung
von unlöslichen» festen Begleitstoffen, der sich ' ·
eine Dialyse zur Abtrennung von nieaermolekularen Begleitstoffen
anschließen kann.
Der Aktivator selbst ist wasserlöslich und nicht dialyeier- ;
bar. Zur Gewinnung des festen Plasminogen-Aktivators verwendet man vorzugsweise in an sich bekannter Weise (iefrier-
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trocknung oder Fällung.
Als Ausgangsmaterial verwendet man vorzugsweise Stromata
von menschlichen Erythrozyten, die "bei der Gewinnung von
Blutplasma als Nebenprodukt anfallen, oder auch menschliches Blut, das als Blutkonserve nicht mehr verwendbar
ist.
Als Extraktionsmittel dienen anorganische oder organische Säuren, mit denen es möglich ist, ein pH um 2 im wäßrigen
Medium zu erzeugen. Brauchbar ist z.B. wäßrige Salzsäure. Aus den wäßrigen sauren Lösungen läßt sich der Aktivator
durch Extraktion mit Phenolen, z.B. Phenol selbst oder Chlorphenolen, in die organische Phase überführen. Dabei
werden Begleitproteine abgetrennt, die entweder in der
wäßrigen Phase zurückbleiben oder in der Trennschicht
ausgefällt werden*
Man kann die Extraktion aus den Stromata und die Überführung in die organische Phase auch in. einem Schritt durchführen, wenn man die Stromata aus ihrer wäßrigen sauren
Suspension direkt mit Phenolen, die mit nichtwassermischbaren
organischen Lösungsmitteln verdünnt sein können, extrahiert.
. ·
Um den Aktivator aus der phenolischen Phase zu gewinnen,
wird diese mit einem Überschuß eines unpolaren organischen
Lösungsmittels versetzt und mit Wasser ausgeschüttelt.
Zur weiteren Reinigung kann die wäßrige Lösung des Aktivators durch Dialyse von dialysierbareft Begleitstoffen befreit
werden.
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Mr die weitere SeiiilgiMg körnnen Me üblicheiL Beinigungsi,
wie Adsorption, ■ Chromatographie,
BeIfnitration, angewendet werden»
Der erfxndungsgemäS erhaltene Plasminogen-Alctivator ist
wahrscheinlich der Urokinasechemisch nahe verwandt.
Er soll als Arzneimittel Eur ^Therapie und zur Prophylaxe
von jEhrombosen und Eaboliön verwendet werden. Seine Anerfolgt
dabei im der Fenn von Ingektionslösungen
Eine Suspension von ca, 30 g gewaschenen Erytlirszjten-Stromata
im ca· 150 ml Wasser isfird mit Ί.η Salasäixre bei Eaumtemperatisi*
auf pH'"1,9 getoactit und 1 Stande gerührt. Bas
TJnlöBlielxe wird €m?ßii Zeutrifugatiön beseitigt, der
Btand äialysiert. Bas FlmssigfceitsirolmEien «ird durch
Destillation im ITafoäuäi auf. etwa 50 aal reämsiert*
pend lidJrfi öle gelöste SiaJbBtana gefriergetr©eis©t^ Si«
geigt aifcf der Pibriiiplatte nach Astrup-HüllertB eine "heträsiitliche
Plasminogen-AktiTierung ohne eigsss p2*©teolytisciie
Aktivität.
Eine Suspension von ca- 30 g gewaselienen. Srjrtlip<j.z|rt;eii-Stromata
in ca* 150 ml Wasser wird mit In ^SO* bei laumtemperatiur
auf pH 1,9 geteaeht und 30 liimiten gerührt» .351« wäßrige
Phase wird mit ca- 350 ml Phenöl-Ciiiloroform {3i1} ansgeschüttelt,
die wäßrige Aase verworfen· Die phenolische
Phase siirel dreimal mit Je ca, Töö ml BUS gewaschen, das
iff if/
Waschwasser verworfen. Zu der phenolischen Phase werden
anschließend 700 ml einer Mischung aus Isopropyläther-Chloroform
(1:1) und ca. 150 ml Wasser gegeben und gründlich geschüttelt. Die Ausschüttelung wird mit weiteren
150 ml Wasser wiederholt. Die beiden wäßrigen Extrakte werden vereinigt, auf ca. 100 ml gebracht, in beschriebener Weise dialysiert und schließlich gefriergetrocknet.
i)er Trockenrückstand zeigt auf der Astrup-Müllertz-Platte starke Plasminogen-Aktivierung.
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Claims (2)
1. Die Verwendung von Erythrozyten zur Gewinnung bzw.
Isolierung eines Plasminogen-Aktivatorsduren Extraktion
bei einem pH-Wert von etwa 1 bis; 4.
2. Verfahren sur Anreicherung des durch Extraktion gemäß Anspruch 1 erhaltenen Plasminogen-Aktivatorsj dadurch gekennzeichnet, daß unlösliche festeBegleit*-
stoffe entfernt werden, gegebenenfalls niedermolekulare
Begleitstoffe durch Dialyse entfernt werden und der
nicht dialysierbare Anteil durch Gefriertrocknung gewonnen wird»
3« Verfahren nach Anspruch 1 * dadurch gekennzeichnet,
daß als Extraktionsmaterial wäßrige Lösungen von
anorganischen oder organischen Säuren verwendet werden* '
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