WO2019066381A1 - 친환경 추출 기술을 이용한 영지 추출물의 제조 방법과 그에 의해 제조된 영지 추출물 및 이를 함유하는 항노화 화장료 조성물 - Google Patents

친환경 추출 기술을 이용한 영지 추출물의 제조 방법과 그에 의해 제조된 영지 추출물 및 이를 함유하는 항노화 화장료 조성물 Download PDF

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extract
ganoderma lucidum
aqueous solution
triterpenoid
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심진섭
이은정
박녹현
최소웅
김용진
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주식회사 아모레퍼시픽
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Definitions

  • the present invention relates to a method for preparing ginseng extract using an eco-friendly extraction technique, a ginseng extract prepared thereby and a cosmetic composition containing the ginseng extract. More particularly, the present invention relates to a method for inhibiting MMP-1 activity, inhibiting collagen degradation, and the like by preparing a ginseng extract containing a high concentration of triterpenoid component using an extraction technique using an aqueous solution of cyclodextrin or an extraction technique combining ultrasonic extraction with an aqueous solution of cyclodextrin And a ganoderma extract prepared by the same, and a cosmetic composition containing the ganoderma extract.
  • the present invention also relates to a method for improving the skin wrinkles and skin elasticity of the Ganoderma extract-containing cosmetic composition, a method for improving skin wrinkles using the composition, and a skin elasticity improving method.
  • Ganoderma lucidum is a mushroom of the bacillus subtilis and is a kidney, semicircular, or fan shaped, 5 to 20 cm in diameter, with an annular groove on the surface of the brownish gland and with fine wrinkles in the radial direction. Widely distributed in the temperate zone of the northern hemisphere, it is a year-old mushroom which grows mainly in the root of the hardwood root and dead wood stump from early summer to autumn.
  • the gonads which are also referred to as mushrooms or mushrooms, have been used as herbal medicines because of their efficacy in mental and physical stability, supplementation of mere blood, and cough sedation. They are effective for hypertension, hypercholesterolemia, hepatitis, gastritis, diabetes, bronchitis and cardiovascular diseases Recently, studies related to chemotherapy have been actively conducted. In addition, fruity body extract of Ganoderma lucidum is used for health functional food, and there is an attempt to utilize manure as antioxidant cosmetic material.
  • the chemical composition of the ganoderma is ganoderan A ⁇ B ⁇ C, ganoderic acid, ganoderol A ⁇ B, lucidenic acids, ergosterol, mannitol, hemicellulose, ⁇ -D-glucan, mannoglucan, peptidoglucan, coumarin, 5'- -ADP and the like are known.
  • ⁇ -D-glucan a polysaccharide
  • Triterpenoid components of ganoderic acid and lucidenic acids are also pharmacologically active And a physiologically active ingredient useful for immunological function.
  • ganoderic acid has been known to have pharmacological activity in a wide range of diseases including cytotoxicity of liver cancer cells.
  • Extraction methods for preparing Ganoderma lucidum extract generally include hot water and organic solvents.
  • Extraction method using hot water is mainly used for easily extracting the polysaccharide component from the manure or to use the manure extract as a functional ingredient in general food.
  • Extraction with an organic solvent is preferred when obtaining pharmacologically active ingredients from the manure. This is for easily separating the non-water soluble active ingredient using an aqueous organic solvent such as ethanol, methanol, or a lower alcohol or extracting the active ingredient at a high concentration.
  • an aqueous organic solvent such as ethanol, methanol, or a lower alcohol or extracting the active ingredient at a high concentration.
  • the organic solvent itself is toxic, there is a problem in safety, and since the foreign substances are mixed and extracted, there is a disadvantage that they must be further purified.
  • the present invention proposes a method of extracting a high concentration of triterpenoid component from a manure using the potency of cyclodextrin.
  • Cyclodextrin is a cyclic maltooligosaccharide which is circularly bound by a-1,4-glucosidic bonds as a natural biomaterial.
  • cyclodextrin has a hydrophobic cavity inside the donut structure. It has a unique characteristic of forming an inclusion compound by inserting various compounds into the inner cavity. Since the constituent unit is glucose, it is not toxic and is known as a very safe substance in the living body.
  • the extraction method using cyclodextrin has been used in the production of shiitake mushroom powder extract of US Pat. No. 5,7800,900, the production of chlorella extract of US Pat. No. 5,780,096, and the extraction of isoflavone from plants of Korean Patent Application No. 10-2003-0074765.
  • Patent Document 1 Korean Patent Application No. 10-2003-0074765 (published on Apr. 29, 2005)
  • Patent Document 2 U.S. Patent No. 5780097 (published on July 14, 1998)
  • Patent Document 3 U.S. Patent No. 5780096 (published on July 14, 1998)
  • the prior art was prepared by using a simple hydrothermal extraction method or an organic solvent such as ethanol, methanol or ethyl acetate to obtain a Ganoderma lucidum extract.
  • an organic solvent such as ethanol, methanol or ethyl acetate
  • the yield of the active ingredient is low in the simple hydrothermal extraction method.
  • the organic solvent extraction method has a higher yield than the hot water extraction, but has complicated processes such as removal of the organic solvent after extraction, and the toxicity of the organic solvent itself causes problems such that the safety and environment-friendly factors are not satisfied when the human body is applied.
  • An object of the present invention is to provide a method for producing an extract of Ganoderma lucidum, which is free from the use of an organic solvent, and which is capable of containing an anti-aging effective ingredient at a high concentration, while being safe and complicated. And also to provide a ganoderma extract and an anti-aging cosmetic composition containing the ganoderma extract.
  • the present invention provides a method for preparing a gingival extract containing a high concentration of triterpenoid using an eco-friendly extraction technique, a gingival extract prepared thereby, and an anti-aging cosmetic composition containing the gingival extract as an active ingredient .
  • a method for producing a ganoderma extract containing a high concentration of triterpenoid by using an extraction method using a cyclodextrin aqueous solution or a method combining an aqueous solution of cyclodextrin and ultrasonic extraction, And a ginseng extract.
  • the method for preparing a Ganoderma extract of the present invention is characterized in that the cyclodextrin, the cyclodextrin derivative, or the cyclodextrin polymer is added to the aqueous solution of the cyclodextrin, the cyclodextrin derivative, or the cyclodextrin polymer, And then extracts them.
  • the present invention also provides a method for extracting the gentle triterpenoid component at a high concentration as much as possible by optimizing the kind and mixing ratio of the cyclodextrin constituting the cyclodextrin aqueous solution.
  • the present invention also provides a method for enhancing the extraction yield of triterpenoid by combining an ultrasonic treatment with an extraction process using the cyclodextrin aqueous solution.
  • the present invention provides a cosmetic composition containing a ganoderma extract containing triterpenoid at a high concentration, for improving skin wrinkles and improving skin elasticity. Also provided are a skin wrinkle improving method and a skin elasticity increasing method using the composition.
  • the method of extracting gentle triterpenoid according to the present invention is advantageous in that the process is simple in comparison with the conventional organic solvent extraction method and thus the cost of separation and purification is considerably reduced and the use of an organic solvent which can be harmful to the environment and human body It is safe and environmentally friendly.
  • the Ganoderma extract prepared by the method for preparing Ganoderma extract according to the present invention can be easily used as a cosmetic and health functional food material since it contains a high concentration of effective ingredients of the Ganoderma l, has no toxicity and is safe for human body.
  • the anti-aging cosmetic composition containing the Ganoderma lucidum extract is excellent in the effect of inhibiting MMP-1 and collagenase by containing triterpenoid at a high concentration, and can be used in cosmetics for improving skin wrinkles and skin elasticity, Therefore, it is possible to provide high-performance and safe products to consumers.
  • FIG. 1 shows a process for producing a high-concentration triterpenoid-containing Ganoderma lucid extract according to the present invention.
  • FIG. 2 is a graph showing the absorbance of triterpenoid contained in the Ganoderma lucidum extract after preparing a ganoderma extract using a cyclodextrin aqueous solution according to various mixing ratios of? -CD,? -CD and? -CD, Respectively.
  • the present invention relates to a method for producing a triterpenoid-containing gingival extract using a cyclodextrin aqueous solution, comprising the step of adding a gland containing a triterpenoid component to an aqueous solution of cyclodextrin to form a conjugate of the cyclodextrin and the triterpenoid component
  • the method comprises the step of forming a gentle extract of gentle pennoide.
  • the present invention relates to a method for producing a triterpenoid-containing Ganoderma lucidum extract, which comprises forming the complex by addition of an ultrasonic treatment in the step of forming a triterpenoid component conjugate of the cyclodextrin and Ganoderma lucidum.
  • the present invention also relates to a triterpenoid-containing Ganoderma lucidum extract prepared according to the method for preparing an extract using the cyclodextrin aqueous solution.
  • the ginseng extract preparation method according to the present invention is characterized by adding a ganoderma containing a triterpenoid component to an aqueous solution of cyclodextrin to form a complex of the cyclodextrin and the triterpenoid.
  • the method for preparing a Ganoderma lucidum extract according to the present invention can further enhance the formation efficiency of the conjugate by adding an aqueous solution of cyclodextrin to the Ganoderma lucidum and extracting it with ultrasonic treatment.
  • the present invention is characterized in that an aqueous solution of cyclodextrin is used instead of an organic solvent in extracting an effective ingredient of a manure, and preferably, ordinary or hot water containing a cyclodextrin in an appropriate concentration is used.
  • Ganoderma lucidum Ganoderma sinensis , Ganoderma atrum , Ganoderma neojaponicum , and the like can be used as the gonad fragments containing the triterpenoid component, Can be used as a raw material.
  • the cyclodextrin used in the aqueous solution of cyclodextrin according to the present invention may be? -Cyclodextrin,? -Cyclodextrin or? -Cyclodextrin, and may be a polymer of cyclodextrin derivatives or cyclodextrin.
  • the cyclodextrin, the cyclodextrin derivative, and the cyclodextrin polymer may be a mixture of two or more selected from the cyclodextrins, the cyclodextrin derivatives, and the cyclodextrin polymers listed above.
  • the concentration of the triterpenoid component contained in the ganoderma extract may vary.
  • Cyclodextrin,? -Cyclodextrin and? -Cyclodextrin may be used as the cyclodextrin in the aqueous solution of cyclodextrin, and a derivative of cyclodextrin such as (2-Hydroxypropyl) -? -Cyclodextrin, (Molecular weight about 1180, CAS 128446-33-3), hydroxypropyl-beta-cyclodextrin, molecular weight about 1400, CAS 128446-35-5, hydroxypropyl?
  • -Cyclodextrin (2-Hydroxypropyl) - ⁇ -cyclodextrin, molecular weight about 1580, CAS 128446-34-4), methyl ⁇ -cyclodextrin (molecular weight about 1310, CAS 128446-36-6) .
  • at least one selected from the above-mentioned polymers of cyclodextrin, polymers of cyclodextrin derivatives, and polymers of cyclodextrin and cyclodextrin derivatives may be used.
  • cyclodextrin aqueous solution an aqueous solution of a-cyclodextrin,? -Cyclodextrin,? -Cyclodextrin, hydroxypropyl? -Cyclodextrin, hydroxypropyl? -Cyclodextrin or methyl? Cyclodextrin, hydroxypropyl [beta] -cyclodextrin, hydroxypropyl [gamma] -cyclodextrin, or methyl [beta] -cyclodextrin, It is preferable to use cyclodextrin.
  • two kinds of? -Cyclodextrin and? -Cyclodextrin are mixed at a mixing ratio of 1: 1 on the weight basis, rather than using? -Cyclodextrin,? -Cyclodextrin or? -Cyclodextrin alone in the aqueous solution of cyclodextrin It is preferable to use them.
  • the mixing ratio of? -Cyclodextrin,? -Cyclodextrin and? -Cyclodextrin is 1: 1 to 2: 0.5 to 2, and it is most preferable to mix ⁇ -cyclodextrin, ⁇ -cyclodextrin and ⁇ -cyclodextrin in a mixing ratio of 1: 1: 1.
  • any of the cyclodextrins described above may be used, and the materials used in the process of the present invention are not limited thereto.
  • the concentration of the cyclodextrin aqueous solution is preferably 0.01 to 30% by weight, and more preferably 0.5 to 5% by weight, relative to the total volume of the aqueous solution, in the step of forming the triterpenoid conjugate with the cyclodextrin and the gonad Weight / volume).
  • concentration of the cyclodextrin aqueous solution is less than 0.01% (weight / volume)
  • the binding efficiency is significantly lowered and the extraction efficiency is lowered.
  • the concentration exceeds 30% (weight / volume) the extraction efficiency is not increased any more and is saturated.
  • the extraction time for forming the complex is preferably 10 minutes to 24 hours. If the extraction efficiency is less than 10 minutes, the extraction efficiency is lowered. Even if the extraction is performed for more than 24 hours, the extraction efficiency is not increased in proportion to time, and is almost saturated. More preferably, the extraction time for forming the complex is from 30 minutes to 240 minutes. At this time, the extraction temperature for the formation of the complex is preferably 15 ° C to 100 ° C.
  • ultrasonic extraction is to be performed in the course of forming the complex
  • ultrasound (20 kHz to 25 MHz) extraction is performed at a temperature of 15 to 35 ° C for 10 to 120 minutes. And it is most preferable to perform ultrasonic extraction at a temperature of 15 to 35 DEG C for 15 to 60 minutes.
  • the present invention relates to a cosmetic composition containing as an active ingredient, a high concentration of triterpenoid-containing Ganoderma lucidum prepared by an extraction method using an aqueous solution of cyclodextrin.
  • the cosmetic composition according to the present invention contains 0.0001 to 30% by weight, preferably 0.001 to 10% by weight, of the triterpenoid-containing ginseng extract, based on the total weight of the composition. Most preferably 0.01 to 1% by weight.
  • the present invention relates to a cosmetic composition containing the triterpenoid-containing Ganoderma lucidum extract, and to a method for improving skin wrinkles and skin elasticity, and a method for improving skin wrinkles and skin elasticity.
  • the cosmetic composition according to the present invention is excellent in anti-aging effects such as inhibition of MMP-1 and collagenase by containing the triterpenoid component at a high concentration, and thus can be used for skin wrinkle improvement and skin elasticity enhancement.
  • the cosmetic composition according to the present invention can be used for cosmetics such as softening longevity, convergent lotion, nutritional lotion, nutritional cream, massage cream, essence, eye cream, eye essence, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, powder, body lotion, shampoo, A body cleanser, a toothpaste, or a mouthwash, and can be used in cosmetics.
  • Extraction with water (distilled water) as a control group was carried out in the same order, except for the step of dissolving cyclodextrin in water in the extraction process using the cyclodextrin aqueous solution.
  • 10 g of Ganoderma lucidum was suspended in 200 ml of water and extracted under the same reaction conditions and times as the extraction process using the cyclodextrin aqueous solution to obtain the extract of Comparative Example 1, which was used for analysis.
  • the cyclodextrin aqueous solution-ultrasonic extraction was performed by using an ultrasonic wave extraction device (Branson Ultrasonic Sonifier TM S-450D) at room temperature (20 ° C.) for 15 minutes at 60 KHz Ultrasonic extraction was performed.
  • an ultrasonic wave extraction device Branson Ultrasonic Sonifier TM S-450D
  • HPLC analysis was carried out on a Waters Alliance system, model 2965 and photodiode array (PDA, model 2996).
  • PDA photodiode array
  • ginseng extract containing a high concentration of triterpenoid which is an effective ingredient of Ganoderma lucidum
  • the concentration of triterpenoid (ganoderic acid, etc.) extracted from Ganoderma lucidum in the case of Examples 2 to 4 extracted with 1% aqueous solution of ⁇ -CD, aqueous 1% HP- ⁇ -CD or aqueous 1% ⁇ - Compared to the water extraction method, by about 30% to 40%.
  • Example 1 which was extracted with a 1% aqueous solution of? -CD, it was rather lower than that in Comparative Example 1 in the case of simple water extraction.
  • This test was performed by using ultrasonic extraction in an extraction method using an aqueous solution of cyclodextrin.
  • the aqueous solution of cyclodextrin was prepared by diluting cyclodextrin with 1% (weight / volume) of water in water, wherein the cyclodextrin was one or two selected from the group consisting of? -CD,? -CD, or? Or more. Thereafter, 10 g of the ground gelatin was added to 200 ml of the aqueous solution, and the extract was sonicated to obtain an extract. Ultrasonic extraction was carried out at room temperature (20 ° C) at 40 KHz for 30 minutes using an ultrasonic extractor (Branson Ultrasonics CPX952838R).
  • Extraction with water (distilled water) as a control group was carried out in the same order, except for the step of dissolving cyclodextrin in water in the extraction process using the cyclodextrin aqueous solution.
  • 10 g of Ganoderma lucidum was suspended in 200 ml of water and extracted at the same reaction conditions and times as those of the extraction using the cyclodextrin aqueous solution to obtain an extract.
  • the extracts were analyzed by 5% valline-acetic acid and perchloric acid, and then absorbance of triterpenoid was measured at 550 nm using Biotek TM Synergy 2.
  • Example 1 Composition number Cyclodextrin 1% Mixing Ratio Absorbance alpha -CD ⁇ -CD ⁇ -CD
  • Example 2 0.0% 100.0% 0.0% 0.0383 4
  • Example 4 0.0% 0.0% 100.0% 0.0383 5
  • Example 5 66.7% 0.0% 33.3% 0.0367 6
  • Example 6 50.0% 0.0% 50.0% 0.0273 7
  • Example 7 33.3% 0.0% 66.7% 0.0333 8
  • Example 8 0.0% 66.7% 33.3% 0.0350 9
  • Example 9 0.0% 50.0% 50.0% 0.0397 10
  • Example 10 0.0% 33.3% 66.7% 0.0377 11
  • Example 11 50.0% 25.0% 25.0% 0.0337 12
  • Example 12 40.0% 40.0% 20.0% 0.0387 13
  • Example 13 40.0% 20.0% 40.0% 0.0303 14
  • Example 14 33.3% 33.3% 33.3% 0.0407 15
  • Example 15 25.0% 50.0% 25.0% 0.0393 16
  • Example 16 25
  • ⁇ -CD, ⁇ -CD and ⁇ -CD are mixed and used at a mixing ratio of 1: 1 to 2: 0.5 to 2 .
  • the absorbance was higher than that of the single use, and when the mixture of ⁇ -CD, ⁇ -CD, and ⁇ -CD was mixed at a mixing ratio of 1: 1: 1, the absorbance was the highest and the highest concentration of the gonadal triterpenoid As a result.
  • fibroblast HSV
  • RA retinoic acid
  • 1, 10 and 50 ppm of the extract of cyclodextrin extracted with an aqueous solution were treated twice for 48 hours as a positive control, and the amount of released MMP-1 in the medium was measured with a kit (Amersham, RPN2610 ).
  • the gingival extract was extracted with a 1% aqueous solution of? -CD cyclodextrin and ultrasonic extraction, and the data were corrected to a control group containing no test substance.
  • the results are shown in Table 3.
  • the Ganoderma extracts extracted with the cyclodextrin aqueous solution according to the present invention inhibited the expression of MMP-1 as the concentration increased.
  • the effect of inhibiting the expression of MMP-1 was better than that of gingival extracts extracted with water without using cyclodextrin aqueous solution.
  • the inhibitory effect on the collagenase production of the Ganoderma lucidum extract extracted with the aqueous solution of cyclodextrin according to the present invention was compared with that of retinoic acid.
  • Human fibroblasts were plated at 5,000 cells / well in a 96-well microtiter plate containing 2.5% fetal calf serum-containing DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Media) And cultured in a CO 2 5%, 37 incubator until it grew to about 80%. Then, the gingival extract extracted with 1% ⁇ -CD cyclodextrin aqueous solution and ultrasonic extraction was treated at a concentration of 100 ⁇ g / ml for 24 hours, and the cell culture fluid was collected.
  • the collected cell culture medium was measured for collagenase production using a commercially available collagenase measuring apparatus (GE Healthcare Life Sciences).
  • the cell culture medium which had been plated on a 96-well plate uniformly coated with primary collagenase antibody, was added and the antigen-antibody reaction was performed in a thermostatic chamber for 3 hours.
  • the second collagen antibody bound to the chromophore was placed in a 96-well plate and reacted for another 15 minutes.
  • the color development inducing substance was added to induce the coloration at room temperature for 15 minutes.
  • the reaction color development
  • the reaction was stopped by adding 1 M sulfuric acid again, the color of the reaction solution became yellow and the degree of yellow was different according to the progress of the reaction.
  • the absorbance of a yellow 96-well plate was measured at 405 nm using a spectrophotometer and the degree of expression of collagenase was calculated by the following equation (1). At this time, the reaction absorbance of the cell culture medium of the test group-untreated (non-treated group) was regarded as the absorbance of the control group.
  • Collagenase expression level (%) A / B x 100
  • the collagenase expression level of the test substances in the fibroblasts of the human is shown in Table 4 below.
  • the degree of collagenase expression is shown in Table 4 below.
  • the degree of collagenase expression in the untreated group was 100, It is.
  • Control group (untreated group) 100% The positive control (Retinoic acid) 5 [mu] M 75.0% Ganoderma extracts extracted with water (distilled water) 50 ppm 83.7% Cyclodextrin aqueous solution and gingival extract (1% ⁇ -CD aqueous solution * Ultrasonic Assisted extraction) 1 ppm 93.5% 10 ppm 82.7% 50 ppm 74.0%
  • the ganoderma extract extracted with the aqueous solution of cyclodextrin according to the present invention effectively inhibited collagenase expression. Especially, it showed higher inhibition of collagenase expression than water extract of Ganoderma lucidum without using aqueous solution of cyclodextrin.
  • the Ganoderma extract prepared according to the method of the present invention contained a high concentration of triterpenoid component.
  • the Ganoderma extract prepared according to the present invention had excellent MMP-1 inhibition and collagenase inhibitory effect.
  • the extract of Ganoderma containing high concentration of triterpenoid prepared according to the method of the present invention has an anti-aging effect and can be used for skin wrinkle improvement and skin elasticity enhancement.

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Abstract

본 발명은 친환경 추출 기술을 이용한 영지 추출물의 제조 방법과 그에 의해 제조된 영지 추출물 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 기술 또는 사이클로덱스트린 수용액에 초음파 추출을 결합한 추출 기술을 이용하여 효능 성분인 트리테르페노이드가 고농도로 함유된 영지 추출물을 제조함으로써 MMP-1 활성 억제, 콜라겐 분해 억제와 같은 항노화 효과를 높이는 영지 추출물의 제조 방법과, 그에 의해 제조된 영지 추출물, 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 또한, 상기 영지 추출물 함유 화장료 조성물의 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진 용도, 그리고 상기 조성물을 이용한 피부 주름 개선 방법 및 피부 탄력 증진 방법에 관한 것이다.

Description

친환경 추출 기술을 이용한 영지 추출물의 제조 방법과 그에 의해 제조된 영지 추출물 및 이를 함유하는 항노화 화장료 조성물
관련 출원의 상호참조
본원은 한국 특허출원 제10-2017-0126385호(출원일: 2017년 9월 28일)에 대한 우선권을 주장하며, 상기 한국출원 명세서는 참조를 위해 전체로서 본원에 포함된다.
기술 분야
본 발명은 친환경 추출 기술을 이용한 영지 추출물의 제조 방법과 그에 의해 제조된 영지 추출물 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 기술 또는 사이클로덱스트린 수용액에 초음파 추출을 결합한 추출 기술을 이용하여 고농도의 트리테르페노이드 성분이 함유된 영지 추출물을 제조함으로써 MMP-1 활성 억제, 콜라겐 분해 억제와 같은 항노화 효과를 높이는 영지 추출물의 제조 방법과, 그에 의해 제조된 영지 추출물, 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 또한, 상기 영지 추출물 함유 화장료 조성물의 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진 용도, 그리고 상기 조성물을 이용한 피부 주름 개선 방법 및 피부 탄력 증진 방법에 관한 것이다.
영지(Ganoderma lucidum)는 담자균류 민주름목 불로초과의 버섯으로, 콩팥, 반원, 또는 부채 모양이고, 지름이 5 내지 20cm이며, 갈색의 갓 표면에는 고리 모양 홈이 나 있고 방사상으로 미세한 주름이 있다. 북반구의 온대 지역에 널리 분포하며, 1년생 버섯으로 초여름부터 가을에 걸쳐 활엽수 뿌리 밑동이나 고사목 그루터기에서 주로 자란다.
불로초 또는 만년버섯으로도 불리는 영지는 심신 안정, 기혈 보충, 기침 진정 등의 효능이 있어 한방의 약재로 사용되어 왔으며, 고혈압, 고콜레스테롤혈증, 간염, 위염, 당뇨병, 기관지염 및 심혈관 질환 등에 효과가 있고, 최근에는 항암 치료와 관련된 연구가 활발히 행해지고 있다. 또한 영지버섯 자실체 추출물이 건강기능식품에 활용되고 있으며, 영지를 항노화 화장품 소재로서 활용하고자 하는 시도도 생겨나고 있다.
영지의 화학성분은 ganoderan A·B·C, ganoderic acid류, ganoderol A·B, lucidenic acid류, ergosterol, mannitol, hemicellulose, β-D-glucan, mannoglucan, peptidoglucan, coumarin, 5'-GMP, 5'-ADP 등이 알려져 있다.
이 중에서 다당류인 β-D-glucan은 영지버섯 자실체 추출물을 함유한 건강기능식품에 필수로 포함되는 주요 생리활성성분이며, ganoderic acid류와 lucidenic acid류의 트리테르페노이드(triterpenoid) 성분 또한 약리 작용 및 면역 기능에 유용한 생리활성성분임이 밝혀졌다. 특히 ganoderic acid는 간암 세포의 세포 독성을 비롯한 광범위한 질환에서 약리학적 활성을 갖는 것으로 알려졌다.
영지 추출물을 제조하기 위한 추출 방법에는 일반적으로 열수를 이용한 방법과 유기용매를 이용한 방법이 있다.
열수를 이용한 추출 방법은 영지로부터 다당류 성분을 용이하게 추출하거나, 일반적인 식품에 영지 추출물을 기능 성분으로 활용하고자 할 때 주로 사용된다. 그러나 현재 행해지고 있는 단순 열수 추출법으로는 트리테르페노이드와 같은 항노화 성분이 고농도로 함유된 영지 추출물을 얻기 힘들다.
유기용매를 이용한 추출법은 영지로부터 약리학적 활성 성분을 얻고자 할 때 더 선호된다. 이는 에탄올, 메탄올, 또는 저급알코올 등의 수성 유기용매를 이용하여 수용성이 아닌 활성 성분을 용이하게 분리하거나 유효성분을 고농도로 추출하기 위함이다. 그러나, 유기용매 자체에 독성이 있어 안전성에 문제가 있고, 이물질이 섞여 추출되므로 이를 제거하기 위한 정제 과정을 더 거쳐야 하는 단점이 있다.
따라서 영지의 항노화 성분을 활용함에 있어서, 유기용매를 사용하지 않아 인체에 안전하면서도 영지에 들어 있는 유효성분을 고농도로 추출할 수 있는 방법의 개발이 필요한 실정이다.
그러한 방법의 하나로, 본 발명에서는 사이클로덱스트린(Cyclodextrin)의 포접능을 이용하여 영지로부터 고농도의 트리테르페노이드 성분을 추출하는 방법을 제시하고자 한다.
사이클로덱스트린은 천연 생물 소재로서 a-1,4-글루코시드 결합에 의해 원형으로 결합된 고리 모양의 말토올리고당이며, D-글루코스의 중합도에 따라 α-사이클로덱스트린(6개), β-사이클로덱스트린(7개), γ-사이클로덱스트린(8개) 등이 있다. 또한 사이클로덱스트린은 도넛 구조의 내측에 소수성 공동을 갖는데, 내측 공동에 각종 화합물을 삽입하여 포접 화합물을 형성하는 독특한 특성이 있으며, 구성단위가 글루코스이므로 독성이 없고 생체에 매우 안전한 물질로 알려져 있다.
사이클로덱스트린을 이용한 추출법은 미국 특허 제5780097호의 표고버섯 분말 추출물 제조, 미국 특허 제5780096호의 클로렐라 추출물 제조, 대한민국 특허 출원 제10-2003-0074765호의 식물체로부터 이소플라본 추출 등에서 사용된 바 있다.
그러나 영지의 트리테르페노이드 성분을 항노화 화장료에 이용하기 위해 영지 추출물을 제조하는 데 있어서 사이클로덱스트린의 포접능을 적용한 사례는 아직 보고되고 있지 않다. 또한 사이클로덱스트린을 이용하여 효능 성분 추출 시 효능 성분의 추출 효율을 더욱 높이기 위한 방법에 대해서도 추가로 제시되고 있지 않은 실정이다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
(특허문헌 1) 대한민국 특허출원 제10-2003-0074765호(2005년 04월 29일 공개)
(특허문헌 2) 미국 특허 제5780097호(1998년 07월 14일 공개)
(특허문헌 3) 미국 특허 제5780096호(1998년 07월 14일 공개)
종래 기술은 영지 추출물을 얻기 위해 단순 열수 추출법을 이용하거나, 에탄올, 메탄올, 에틸아세테이트 등의 유기용매를 사용하여 제조하였다. 그러나, 단순 열수 추출법은 유효성분의 수율이 낮다. 유기용매 추출법은 열수 추출보다 수율이 높지만 추출 이후 유기용매를 제거하는 등 공정이 복잡하고, 유기용매 자체의 독성 때문에 인체 적용 시 안전성과 친환경적 요소를 충족시키지 못하는 등의 문제가 있다.
본 발명은 영지 추출물의 제조 방법에 있어서, 유기용매를 사용하지 않아 안전하고 공정이 복잡하지 않으면서도, 항노화 유효성분을 고농도로 함유할 수 있도록 하는 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. 또한 그에 의해 제조된 영지 추출물 및 이를 함유하는 항노화 화장료 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 상기 문제점을 해결하기 위하여, 친환경 추출 기술을 이용한 고농도의 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법과, 그에 의해 제조된 영지 추출물, 그리고 이를 유효성분으로 함유하는 항노화 화장료 조성물을 제공한다. 구체적으로, 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 방법, 또는 사이클로덱스트린 수용액과 초음파 추출을 결합한 방법을 이용하여, 트리테르페노이드가 고농도로 함유된 영지 추출물의 제조 방법을 제공하며, 또한 상기 방법에 의해 제조된 영지 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
더욱 구체적으로 본 발명의 영지 추출물 제조 방법은 영지를 사이클로덱스트린, 사이클로덱스트린 유도체, 또는 사이클로덱스트린 중합체의 수용액에 첨가함으로써, 상기 사이클로덱스트린, 사이클로덱스트린 유도체, 또는 사이클로덱스트린 중합체에 영지의 트리테르페노이드 성분을 결합시켜 추출하는 것이다. 또한 상기 사이클로덱스트린 수용액을 구성하는 사이클로덱스트린의 종류와 혼합비를 최적화하여 영지의 트리테르페노이드 성분을 최대한 고농도로 추출할 수 있는 방법을 제공한다. 그리고 상기 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 공정에 초음파 처리를 결합하여 트리테르페노이드의 추출 수율을 더욱 높이는 방법도 제공한다.
나아가, 본 발명은 트리테르페노이드가 고농도로 함유된 영지 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진 용도를 제공한다. 또한 상기 조성물을 이용한 피부 주름 개선 방법 및 피부 탄력 증진 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 영지의 트리테르페노이드 추출 방법은 기존의 유기용매 추출법과 비교하여 공정이 간단하여 분리 정제의 비용이 상당히 절감되는 효과가 있으며, 환경 및 인체에 유해할 수 있는 유기용매의 사용을 줄일 수 있어서 안전하고 환경 친화적이라는 장점이 있다.
또한, 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 공정에 있어서 가장 적합한 사이클로덱스트린의 종류와 혼합비, 공정 조건들을 설정함으로써 저비용으로도 고효율로 영지의 항노화 성분을 추출할 수 있으며, 이에 초음파 추출을 결합함으로써 더 높은 효율을 제공할 수 있다.
본 발명에 따른 영지 추출물 제조 방법으로 제조된 영지 추출물은 영지의 효능 성분을 고농도로 함유하고, 독성이 없고 인체에 안전하므로 화장품 및 건강기능식품 소재로 쉽게 활용될 수 있다.
또한 상기 영지 추출물을 함유한 항노화 화장료 조성물은 트리테르페노이드를 고농도로 함유함으로써 MMP-1 억제 및 콜라게네이즈 억제 효과가 우수하여 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진을 위한 화장품에 사용될 수 있으며, 그에 따라 소비자들에게 높은 성능을 지니면서도 안전한 제품을 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 고농도 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 공정을 나타낸 것이다.
도 2는 α-CD, β-CD, γ-CD의 다양한 혼합 비율에 따른 사이클로덱스트린 수용액을 이용하여 영지 추출물을 제조한 후, 상기 영지 추출물에 포함된 트리테르페노이드에 대한 흡광도를 측정하여 그래프로 비교해 나타낸 것이다.
본 발명은 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법으로서, 트리테르페노이드 성분이 포함된 영지를 사이클로덱스트린 수용액에 첨가하여 상기 사이클로덱스트린과 상기 영지의 트리테르페노이드 성분의 결합체를 형성시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법에 관한 것이다.
또한, 상기 사이클로덱스트린과 영지의 트리테르페노이드 성분 결합체 형성 단계에서 초음파 처리를 추가하여 상기 결합체를 형성하는 것을 특징으로 하는, 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 상기 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출물 제조 방법에 따라 제조된 트리테르페노이드 함유 영지 추출물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 영지 추출물의 제조 방법은, 트리테르페노이드 성분이 포함된 영지를 사이클로덱스트린 수용액에 첨가하여 상기 사이클로덱스트린과 상기 트리테르페노이드의 결합체를 형성하는 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 따른 영지 추출물의 제조 방법은, 영지에 사이클로덱스트린 수용액을 첨가한 후 초음파 처리와 함께 추출하여 상기 결합체의 형성 효율을 더욱 높일 수 있다.
본 발명은 영지의 유효성분을 추출함에 있어서, 유기용매 대신 사이클로덱스트린 수용액을 사용하는 것을 특징으로 하며, 바람직하게는 적정 농도의 사이클로덱스트린이 함유된 상온수 또는 열수를 사용한다.
상기 트리테르페노이드 성분이 포함된 영지는 영지(Ganoderma lucidum), 자지(Ganoderma sinensis), 흑영지(Ganoderma atrum), 자흑색불로초(Ganoderma neojaponicum) 등을 사용할 수 있으나 이에 국한되지 않으며, 시중 약재상 등에서 판매하는 영지버섯을 원료로 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 사이클로덱스트린 수용액에 사용되는 사이클로덱스트린은 α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린 또는 γ-사이클로덱스트린일 수 있고, 사이클로덱스트린 유도체 또는 사이클로덱스트린의 중합체일 수 있다. 또한 상기 나열된 사이클로덱스트린, 사이클로덱스트린 유도체 및 사이클로덱스트린 중합체 중에서 선택된 2종 이상의 혼합물일 수 있으며, 이들의 조합과 혼합비에 따라, 영지 추출물에 함유되는 트리테르페노이드 성분의 농도가 달라질 수 있다.
상기 사이클로덱스트린 수용액에서 사이클로덱스트린은 α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린, γ-사이클로덱스트린을 사용할 수 있으며, 사이클로덱스트린의 유도체인 하이드록시프로필 α-사이클로덱스트린((2-Hydroxypropyl)-α-cyclodextrin, 분자량 약 1180, CAS 128446-33-3), 하이드록시프로필 β-사이클로덱스트린((2-Hydroxypropyl)-β-cyclodextrin, 분자량 약 1400, CAS 128446-35-5), 하이드록시프로필 γ-사이클로덱스트린((2-Hydroxypropyl)-γ-cyclodextrin, 분자량 약 1580, CAS 128446-34-4), 메틸 β-사이클로덱스트린(Methyl-β-cyclodextrin, 분자량 약 1310, CAS 128446-36-6) 등을 사용할 수 있다. 또한 상기 사이클로덱스트린의 중합체, 사이클로덱스트린 유도체의 중합체, 또는 상기 사이클로덱스트린 및 사이클로덱스트린 유도체의 중합체로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다.
상기 사이클로덱스트린 수용액에서 α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린, γ-사이클로덱스트린, 하이드록시프로필 α-사이클로덱스트린, 하이드록시프로필 β-사이클로덱스트린, 하이드록시프로필 γ-사이클로덱스트린, 또는 메틸 β-사이클로덱스트린을 단독 사용 시에는, α-사이클로덱스트린을 단독 사용하는 것은 바람직하지 않으며, β-사이클로덱스트린, γ-사이클로덱스트린, 또는 하이드록시프로필 β-사이클로덱스트린, 하이드록시프로필 γ-사이클로덱스트린, 또는 메틸 β-사이클로덱스트린을 사용하는 것이 바람직하다.
또한 상기 사이클로덱스트린 수용액에서 α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린 또는 γ-사이클로덱스트린을 단독 사용하는 것보다, β-사이클로덱스트린 및 γ-사이클로덱스트린의 2종을 중량 기준으로 1:1의 혼합비로 혼합하여 사용하는 것이 바람직하다.
상기 사이클로덱스트린 수용액에서 α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린 및 γ-사이클로덱스트린의 3종을 혼합하여 사용 시, α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린 및 γ-사이클로덱스트린의 혼합비는 중량 기준으로 1:1 내지 2:0.5 내지 2인 것이 바람직하며, α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린 및 γ-사이클로덱스트린을 1:1:1의 혼합비로 혼합하여 사용하는 것이 가장 바람직하다. 그러나 앞서 소개한 모든 종류의 사이클로덱스트린을 사용할 수 있으며, 본 발명의 제조 방법에 사용된 물질을 이로 한정하는 것은 아니다.
상기 사이클로덱스트린과 영지의 트리테르페노이드 결합체 형성 단계에서, 상기 사이클로덱스트린 수용액의 농도는 수용액 총 부피 대비 사이클로덱스트린의 중량이 0.01 내지 30%(중량/부피)인 것이 바람직하고, 0.5 내지 5%(중량/부피)인 것이 더욱 바람직하다. 사이클로덱스트린 수용액의 농도가 0.01%(중량/부피) 미만인 경우에는 결합률이 현저히 떨어져 추출 효율이 낮아지며, 30%(중량/부피)를 넘으면 더 이상 추출 효율이 증가하지 않고 포화된다.
상기 결합체 형성을 위한 추출 시간은 10분 내지 24시간인 것이 바람직하다. 10분 미만인 경우에는 추출 효율이 떨어지며, 24시간 넘게 추출하여도 추출 효율이 시간에 비례하여 증가하지 않고 거의 포화하므로 비용 면에서 24시간을 초과하지 않는 것이 바람직하다. 더욱 바람직한 상기 결합체 형성을 위한 추출 시간은 30분 내지 240분이다. 이때 상기 결합체 형성을 위한 추출 온도는 15℃ 내지 100℃임이 바람직하다.
상기 결합체 형성 과정에서 초음파 추출을 병행하고자 할 경우, 10분 내지 120분 동안 15℃ 내지 35℃의 온도에서 초음파(20㎑ 내지 25㎒) 추출을 하는 것이 바람직하며, 15분 내지 60분 동안 15℃ 내지 35℃의 온도에서 초음파 추출을 하는 것이 가장 바람직하다.
본 발명은 상기 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 방법에 의해 제조된 고농도의 트리테르페노이드 함유 영지 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 트리테르페노이드 함유 영지 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 30 중량% 함유하며, 바람직하게는 0.001 내지 10 중량% 함유할 수 있다. 가장 바람직하게는 0.01 내지 1 중량% 함유할 수 있다.
본 발명은 상기 트리테르페노이드 함유 영지 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진 용도, 그리고 이를 이용한 피부 주름 개선 방법 및 피부 탄력 증진 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 트리테르페노이드 성분을 고농도로 함유함으로써 MMP-1 억제 및 콜라게네이즈 억제 등의 항노화 효과가 뛰어나며, 이에 따라 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진 용도로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 보디로션, 샴푸, 린스, 보디세정제, 치약 또는 구강청정액 등의 제형으로 제형화되어 화장품에 사용될 수 있다.
이하, 실시예 및 시험예를 통해 본 발명을 좀 더 상세히 설명한다. 그러나, 하기 실시예 및 시험예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 예시일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.
[시험예 1: 사이클로덱스트린 이용 시 영지 트리테르페노이드의 추출 효율]
본 시험에서 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출은 물에 α-사이클로덱스트린(α-CD), β-사이클로덱스트린(β-CD), 하이드록시프로필 베타 사이클로덱스트린(HP-β-CD), 또는 γ-사이클로덱스트린(γ-CD)을 1%(중량/부피) 농도로 용해한 수용액 200ml에, 분쇄한 영지 10g을 첨가한 뒤 95에서 60분 동안 추출하는 공정을 거쳐 진행하였다. 이를 통해 실시예 1 내지 4의 추출액을 얻었으며, 이 추출액을 분석에 사용하였다.
대조군인 물(증류수)을 이용한 추출은 상기 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 공정에서 물에 사이클로덱스트린을 용해하는 과정을 제외하고 동일한 순으로 진행하였다. 영지 10g을 200ml의 물에 현탁시킨 후 상기 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 공정과 동일한 반응 조건 및 시간에서 추출하여 비교예 1의 추출액을 얻었으며, 이를 분석에 사용하였다.
또한 본 시험에서 사이클로덱스트린 수용액-초음파 추출은 상기 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출에 초음파 추출 공정을 결합한 것으로, 초음파 추출기(Branson Ultrasonics SonifierTM S-450D)를 사용하여 상온(20℃)에서 60KHz로 15분간 초음파 추출을 진행하였다.
얻어진 추출액들은 0.45㎛의 필터로 여과한 뒤 HPLC 샘플로 사용하였으며, HPLC - PDA system을 통해 분석하였다. HPLC 분석은 Waters Alliance system, model 2965 및 photodiode array(PDA, model 2996)로 진행하였고, 분석용 컬럼은 Luna® 5㎛ C18(2) 100Å, LC Column 250x4.6mm를 사용하였으며, 이동상으로는 물과 아세토나이트릴을 사용하였다.
그 결과는 표 1에 나타내었다.
Cyclodextrin 수용액 추출 Cyclodextrin 수용액* Ultrasonic Assisted extraction
Area Control대비 Area Control대비
비교예 1 물(증류수) 318486 100% 281655 100%
실시예 1 1% α-CD 수용액 290482 94% 321539 114%
실시예 2 1% β-CD 수용액 416196 131% 466576 166%
실시예 3 1% HP-β-CD 수용액 425589 134% 410915 146%
실시예 4 1% γ-CD 수용액 438854 138% 456253 162%
상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 방법을 사용하면 영지의 효능 성분인 트리테르페노이드가 고농도로 함유된 영지 추출물을 얻을 수 있음을 확인하였다. 1% β-CD 수용액, 1% HP-β-CD 수용액, 또는 1% γ-CD 수용액으로 추출한 실시예 2 내지 4의 경우, 영지에서 추출된 트리테르페노이드(ganoderic acid 등)의 농도가 기존 물 추출 방식 대비 약 30 내지 40% 증가했다. 그러나 1% α-CD 수용액으로 추출한 실시예 1의 경우에는 오히려 단순 물 추출의 경우인 비교예 1보다 감소했다.
또한, 본 발명에 따른 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 방법에 초음파 추출을 결합하여 추출한 경우에는 1% α-CD 수용액, 1% β-CD 수용액, 1% HP-β-CD 수용액, 또는 1% γ-CD 수용액 모두의 경우(실시예 1 내지 4에 초음파 추출을 결합한 경우)에, 대조군(비교예 1에 초음파 추출을 결합한 경우)에 비해 영지에서 추출된 트리테르페노이드의 농도가 증가했다. 특히 1% β-CD 수용액 또는 1% γ-CD 수용액을 이용한 추출에 초음파 추출을 결합한 경우, 대조군에 비해 트리테르페노이드의 추출 농도가 60% 이상 증가하여 매우 우수한 추출 효율을 나타내었다.
[시험예 2: 사이클로덱스트린의 종류 및 혼합 사용에 따른 영지 트리테르페노이드의 추출 효율]
본 시험은 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 방법에 초음파 추출을 병행하여 이루어졌다. 사이클로덱스트린 수용액은 물에 사이클로덱스트린을 1%(중량/부피) 농도로 희석한 수용액을 사용하였고, 이때 사이클로덱스트린은 α-CD, β-CD, 또는 γ-CD로 이루어진 군에서 선택된 1종이거나 2종 이상의 혼합물이다. 이후, 해당 수용액 200ml에 분쇄한 영지 10g을 첨가한 뒤 초음파 추출하여 추출액을 얻었으며, 이를 여과하여 분석에 사용하였다. 초음파 추출은 초음파 추출기(Branson Ultrasonics CPX952838R)를 사용하여 상온(20℃)에서 40KHz로 30분간 진행하였다.
대조군인 물(증류수)을 이용한 추출은 상기 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 공정에서 물에 사이클로덱스트린을 용해하는 과정을 제외하고 동일한 순으로 진행하였다. 영지 10g을 200ml의 물에 현탁시킨 후 상기 사이클로덱스트린 수용액을 이용한 추출 공정과 동일한 반응 조건 및 시간에서 추출하여 추출액을 얻었으며, 이를 여과하여 분석에 사용하였다.
얻어진 추출액들은 5% valline-acetic acid와 perchloric acid에 반응시킨 후 BiotekTM Synergy 2를 이용하여 550nm에서 트리테르페노이드에 대한 흡광도를 측정하여 분석하였다.
그 결과는 표 2 및 도 2에 나타내었다.
조성물 번호 Cyclodextrin 1% 혼합 비율 흡광도
α-CD β-CD γ-CD
1 비교예 1 0.0% 0.0% 0.0% 0.0270
2 실시예 1 100.0% 0.0% 0.0% 0.0227
3 실시예 2 0.0% 100.0% 0.0% 0.0383
4 실시예 4 0.0% 0.0% 100.0% 0.0383
5 실시예 5 66.7% 0.0% 33.3% 0.0367
6 실시예 6 50.0% 0.0% 50.0% 0.0273
7 실시예 7 33.3% 0.0% 66.7% 0.0333
8 실시예 8 0.0% 66.7% 33.3% 0.0350
9 실시예 9 0.0% 50.0% 50.0% 0.0397
10 실시예 10 0.0% 33.3% 66.7% 0.0377
11 실시예 11 50.0% 25.0% 25.0% 0.0337
12 실시예 12 40.0% 40.0% 20.0% 0.0387
13 실시예 13 40.0% 20.0% 40.0% 0.0303
14 실시예 14 33.3% 33.3% 33.3% 0.0407
15 실시예 15 25.0% 50.0% 25.0% 0.0393
16 실시예 16 25.0% 25.0% 50.0% 0.0380
17 실시예 17 20.0% 40.0% 40.0% 0.0390
상기 표 2 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 사이클로덱스트린 1% 수용액을 이용하여 추출할 때, α-CD를 단독으로 사용한 경우를 제외한 모든 실시예에서, 단순 물 추출 방법을 이용한 비교예 1에 비해 흡광도가 더 높게 나타남을 확인하였다. 즉 실시예 2와 실시예 4 내지 17은 영지로부터 추출된 트리테르페노이드의 농도가 비교예 1에 비해 높았으며, 그에 따라 추출 효율도 높음을 확인하였다.
또한 상기 사이클로덱스트린 1% 수용액에서, α-CD, β-CD, 또는 γ-CD를 단독으로 사용할 때보다 β-CD 및 γ-CD의 2종을 1:1의 혼합비로 혼합하여 사용할 경우, 또는 α-CD, β-CD, 및 γ-CD의 3종을 일정 비율로 혼합하여 사용할 경우에 더 높은 흡광도를 나타내어 영지 트리테르페노이드의 추출 농도가 더욱 높아짐을 알 수 있었다. 특히 α-CD, β-CD, 및 γ-CD의 3종을 혼합하여 사용할 경우에는 α-CD, β-CD, 및 γ-CD를 1:1 내지 2:0.5 내지 2의 혼합비로 혼합하여 사용할 때 흡광도가 단독 사용 시보다 더 높았으며, α-CD, β-CD, 및 γ-CD를 1:1:1의 혼합비로 혼합하여 사용했을 때 흡광도가 가장 높아 영지 트리테르페노이드를 가장 높은 농도로 추출할 수 있음을 확인하였다.
[시험예 3: 사이클로덱스트린 수용액으로 추출한 영지 추출물의 MMP-1 억제 효과]
본 발명에 따른 사이클로덱스트린 수용액으로 추출한 영지 추출물의 자외선에 의해 증가되는 매트릭스 메탈로프로테아제-1(Matrix metalloprotease-1; MMP-1) 발현 억제 효과를 확인하기 위하여, 섬유아세포(HS68)를 12웰 플레이트의 각 웰에 0.75*10 5개씩 심고 24시간 동안 기아 상태(starvation)로 한 후에, 인산염 완충 식염수로 세척하고 UV(30mJ)를 조사하였다. 이어서, 양성 대조군으로 레티노익산(Retinoic Acid; RA) 5μM과 사이클로덱스트린 수용액으로 추출한 영지 추출물 1, 10, 50ppm을 48시간 동안 두 번씩 처리하고, 배지 중에 유리된 MMP-1의 양은 키트(Amersham, RPN2610)를 사용하여 측정하였다.
상기 영지 추출물은 1% β-CD 사이클로덱스트린 수용액을 이용하고 초음파 추출을 병행하여 추출한 것이며, 데이터 값은 시험물질을 포함하지 않은 대조군으로 보정하였고, 그 결과를 표 3에 나타내었다.
농도 Extracellular MMP-1 (% of control)
대조군 0%
양성대조군(Retinoic acid) 5μM 66.2%
물(증류수)을 이용하여 추출한 영지 추출물 50 ppm 37.1%
사이클로덱스트린 수용액으로 추출한 영지 추출물 (1% β-CD 수용액 * Ultrasonic Assisted extraction) 1 ppm 26.5%
10 ppm 47.1%
50 ppm 51.3%
표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 사이클로덱스트린 수용액으로 추출한 영지 추출물은 농도가 증가함에 따라 MMP-1의 발현을 억제하였다. 또한 사이클로덱스트린 수용액을 이용하지 않고 물을 이용하여 추출한 영지 추출물에 비해 MMP-1의 발현 억제 효과가 더 우수하였다.
[시험예 4: 사이클로덱스트린 수용액으로 추출한 영지 추출물의 콜라게네이즈 억제 효과]
본 발명에 따른 사이클로덱스트린 수용액으로 추출한 영지 추출물의 콜라게네이즈 생성 저해능을 레티노익산과 비교하여 측정하였다. 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 들어있는 96공 평판배양기(96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 5,000 세포/공(well)이 되도록 넣고, 70~80% 정도 자랄 때까지 CO2 5%, 37 배양기(incubator)에서 배양하였다. 그리고 1% β-CD 사이클로덱스트린 수용액과 초음파 추출을 이용하여 추출한 영지 추출물을 100 ㎍/ml 농도로 24시간 동안 처리한 다음, 세포배양액을 채취하였다.
이후, 채취한 세포배양액을 상업적으로 이용 가능한 콜라게네이즈 측정기구(GE Healthcare Life Sciences)를 이용하여 콜라게네이즈 생성 정도를 측정하였다. 먼저 1차 콜라게네이즈 항체가 균일하게 도포된 96-공 평판(96-well plate)에 채위된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다. 3시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-공 평판(96-well plate)에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1M 황산을 넣어 반응(발색)을 중지시키면 반응액의 색깔은 노란색을 띠며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다.
노란색을 띠는 96-공 평판(96-well plate)의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405nm에서 측정하였고, 하기 수학식 1에 의해 콜라게네이즈의 발현 정도를 계산하였다. 이때 상기 시험물질을 처리하지 않은 군(비처리군)의 채위된 세포배양액의 반응 흡광도를 대조군의 흡광도로 하였다.
콜라게네이즈 발현 정도(%)= A/B × 100
A: 상기 시험물질 처리 세포군의 흡광도
B: 대조군의 흡광도
한편, 상기 인간의 섬유아세포에서 상기 시험물질들의 콜라게네이즈 발현 억제 효능을 측정한 결과를 콜라게네이즈 발현 정도로 하기 표 4에 나타내었으며, 이는 비처리군의 콜라게네이즈 발현 정도를 100으로 하여 대비한 것이다.
농도 콜라게네이즈 발현 정도 (%)
대조군(비처리군) 100%
양성대조군(Retinoic acid) 5μM 75.0%
물(증류수)을 이용하여 추출한 영지 추출물 50 ppm 83.7%
사이클로덱스트린 수용액과 초음파 추출로 추출한 영지 추출물 (1% β-CD 수용액 * Ultrasonic Assisted extraction) 1 ppm 93.5%
10 ppm 82.7%
50 ppm 74.0%
상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 사이클로덱스트린 수용액으로 추출한 영지 추출물은 콜라게네이즈 발현을 효과적으로 억제하였다. 특히, 사이클로덱스트린 수용액을 이용하지 않고 물을 이용하여 추출한 영지 추출물보다 더 높은 콜라게네이즈 발현 억제 효능을 나타내었다.
상기 시험예 1 및 2의 결과를 통해, 본 발명의 추출물 제조 방법에 따라 제조된 영지 추출물은 트리테르페노이드 성분을 고농도로 함유함을 확인하였다. 또한, 상기 시험예 3 및 4의 결과에서, 본 발명에 따라 제조된 영지 추출물은 MMP-1 억제 및 콜라게네이즈 억제 효과가 뛰어남을 확인하였다. 이에 따라 본 발명의 추출물 제조 방법에 따라 제조된 고농도 트리테르페노이드 함유 영지 추출물은 항노화 효과를 가지며, 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진 용도로 사용될 수 있음을 알 수 있다.

Claims (11)

  1. 사이클로덱스트린(cyclodextrin) 수용액을 이용한 트리테르페노이드(triterpenoid) 함유 영지(Ganoderma lucidum) 추출물의 제조 방법으로서,
    트리테르페노이드 성분이 포함된 영지를 사이클로덱스트린 수용액에 첨가하여 상기 사이클로덱스트린과 상기 영지의 트리테르페노이드 성분의 결합체를 형성시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 사이클로덱스트린과 영지의 트리테르페노이드 성분 결합체 형성 단계에서 초음파 처리를 추가하여 상기 결합체를 형성하는 것을 특징으로 하는, 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 사이클로덱스트린은 α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린 및 γ-사이클로덱스트린 중에서 선택되는 사이클로덱스트린; 사이클로덱스트린의 유도체로서 하이드록시프로필 α-사이클로덱스트린, 하이드록시프로필 β-사이클로덱스트린, 하이드록시프로필 γ-사이클로덱스트린, 및 메틸 β-사이클로덱스트린 중에서 선택되는 사이클로덱스트린의 유도체; 및 상기 사이클로덱스트린의 중합체, 사이클로덱스트린 유도체의 중합체, 또는 상기 사이클로덱스트린 및 사이클로덱스트린 유도체의 중합체;로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상임을 특징으로 하는, 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 사이클로덱스트린 수용액은 중량 기준으로 β-사이클로덱스트린 및 γ-사이클로덱스트린을 1:1로 혼합한 혼합물; 또는 α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린, 및 γ-사이클로덱스트린을 1:1 내지 2:0.5 내지 2로 혼합한 혼합물임을 특징으로 하는, 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 사이클로덱스트린 수용액의 농도는 수용액 총 부피 대비 사이클로덱스트린의 중량이 0.01 내지 30%(중량/부피)임을 특징으로 하는, 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 추출물 제조 시 추출 온도는 15℃ 내지 100℃임을 특징으로 하는, 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 추출물 제조 시 추출 시간은 10분 내지 24시간임을 특징으로 하는, 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법.
  8. 제 2항에 있어서, 상기 초음파 처리 시 추출 온도는 15℃ 내지 35℃이며, 추출 시간은 10분 내지 120분임을 특징으로 하는, 트리테르페노이드 함유 영지 추출물의 제조 방법.
  9. 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따라 제조된 트리테르페노이드 함유 영지 추출물.
  10. 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따라 제조된 트리테르페노이드 함유 영지 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
  11. 제 10항에 있어서, 상기 조성물은 피부 주름 개선 및 탄력 증진용인 화장료 조성물.
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