KR101749657B1 - 황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 불용성이 황칠나무 수액에 미생물을 접종하여 발효함으로써, 친수성으로 전이되는 황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 화장료 조성물은 불용성에서 친수성으로 전이된 황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 함유함에 따라 다양한 화장 제형 적용이 가능하면서 콜라겐 합성 증진, 피부 재생, 주름 개선 및 항산화 효과를 가져, 화장료로서의 높은 가치를 확보할 수 있다.

Description

황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic Composition Comprising Fermented product of Dendropanax morbifera Sap as Active Ingredient}
본 발명은 미생물을 이용하여 얻은 황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 함유하여 다양한 화장료 제형 적용이 가능하면서 콜라겐 합성 증진, 피부 재생, 주름 개선 및 항산화 효과를 가질 수 있는 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 외부의 환경, 자외선, 자극, 나이가 들어감에 따라 프리 라디칼이 활성화되어, 피부 조직의 손상 및 노화 현상이 발생된다. 이러한 현상으로 인해, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포 외 기질의 합성이 저하되어 피부의 탄력이 낮아지고 주름이 형성된다.
상기 콜라겐은 피부 아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질로서 세포 외 간질에 존재한다. 이러한 콜라겐은 피부의 기계적 견고성, 결합 조직의 저항력과 결합력, 세포 접착의 지탱, 세포의 분할과 분화 유도 등의 역할을 한다.
이러한 다양한 효능을 가지는 콜라겐을 함유한 화장품 또는 연고 등과 같은 피부 외용제 조성물이 출시되었으나, 이들 제품은 콜라겐 자체를 피부 표면에 도포하는 것으로서 고분자 물질인 콜라겐의 경피 흡수가 어려워 피부 개선 또는 상처 치유의 효능을 기대할 수 없다.
이러한 문제점을 해결하기 위해, 콜라겐 합성 촉진 물질에 대한 관심이 높아지게 되었다. 종래에는 콜라겐 합성 촉진 물질로써, 비타민 C, 레티노익산(retinoic), 동물 태반 유래의 단백질(일본공개특허공보 평8-231370), 베툴린산(평8-208424), 클로렐라 추출물(일본공개특허공보 평9-40526)등을 사용하였다.
그러나, 콜라겐 합성 촉진 유도 효과를 가지는 상기 물질은 피부 자극 및 발적을 일으키며, 그 효능이 미미하여 피부 개선 및 상처 치유의 효과를 기대할 수 없는 문제점이 있다.
또한, 일례로 대한민국 등록특허 제10-0984531호에서는 콜라겐 합성 유도 물질로 병풀 추출물을 이용하는 것을 제시하는데, 상기 병풀 추출물은 상처치유 촉진, 세포 증식, 콜라겐 합성 등의 효능을 가지나, 고가라는 문제점이 있다.
두릅나무과 식물 중 황칠나무속(Dendropanax)는 자연의 금색을 나타내는 공예품에 사용되는 도료의 원료로 사용가능하며, 항산화, 간세포 재생, 당뇨 치료, 경조직 세포 재생 등과 방향 성분의 신경계에 대한 진정 및 강장 작용 효능이 있다.
이러한 다양한 효능을 갖는 황칠나무 추출물을 화장료 조성물에 함유하고자 하는 기술이 다양하게 개발되고 있는데, 일례로 대한민국 등록특허 제10-1176529호에서는 황칠나무 추출물, 좀 더 바람직하게는 황칠나무 줄기로부터 얻은 수추출물을 이용하여 주름 개선, 자외선에 의한 피부 자극 완화, 콜라겐 합성 증진 및 피부 노화 방지의 효능을 갖는 것을 제시하고 있다.
황칠나무 수액의 주요 구성 성분은 황금색의 도막을 형성하는 도료 성분인 비휘발 성분과 방향성 성분이 약 77%를 차지하고, 그 나머지는 수분과 고형분으로 되어 있다.
이러한 황칠나무 수액은 주름 개선, 콜라겐 합성 증진, 피부 재생 및 항산화 효능 등의 다양한 효능을 가지나, 불용성의 특징으로 인해 통상적인 화장료 제형 적용에 한계가 있는 문제점이 있다.
KR 10-0984531 R KR 10-1176529 R
이에 본 발명자들은 불용성인 황칠나무 수액이 다양한 화장료 제형에 적용 가능하도록 다각적으로 노력한 결과, 불용성인 황칠나무 수액에 미생물을 접종하여 발효할 경우, 상기 황칠나무 수액이 발효를 통해 불용성 물질의 특이적인 합성 및 결합이 유도되어 친수성으로 전이됨을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명은 다양한 화장료 제형 적용이 가능하면서, 콜라겐 합성 증진, 피부 재생, 주름 개선 및 항산화 효과를 가질 수 있는 황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물 제공을 목적으로 한다.
상기 목적을 해결하기 위해, 본 발명은 황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물은 다양한 화장료 제형 적용이 가능하면서도, 콜라겐 합성 증진, 피부 재생, 주름 개선 및 항산화 효과를 가져 화장료로서의 높은 가치를 확보할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 실시예 1 내지 실시예 4 황칠나무 수액의 발효 전후 이미지이다.
도 2는 본 발명에 따른 황칠나무 수액 발효물의 농도에 따른 콜라겐 합성 정도 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 황칠나무 수액 발효물의 농도에 따른 피부 진피 재생 정도 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 황칠나무 수액 발효물의 농도에 따른 피부 표피 재생 정도 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 황칠나무 수액 발효물의 항산화 정도를 나타내는 이미지이다.
이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명에서는 다양한 화장료 제형 적용이 가능하면서, 콜라겐 합성 증진, 피부 재생, 주름 개선 및 항산화 효과를 가지는 황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제시한다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 불용성인 황칠나무 수액에 미생물을 접종하여 발효함으로써, 불용성 물질의 특이적인 합성 및 결합이 유도되어 친수성으로 전이됨에 따라 다양한 화장료 제형 적용이 가능하며, 다양한 효능을 갖게 된다.
황칠나무 수액은 황칠나무 수피에 상처를 내어 나오는 황금빛의 수지액을 말하며, 황칠이라고도 일컫는다.
상기 황칠나무 수액의 구성 성분은 크게 나누어 황금색의 도막을 형성하는 도료 성분인 비휘발 성분과 방향성 성분이 약 77%를 차지하고 그 나머지는 수분과 고형분으로 되어 있다. 또한, 상기 황칠나무 수액을 이루고 있는 주요 성분으로는 알파-큐버빈(α-Cubebene), 베타-엘리민(β-Elemene), 베타-세스퀴터펜(β-Gurjunene), 게르마크린 디(Germacrene D), 엘릭센느(Elixene), 베타-쿠버빈(β-Cubebene), 베타-셀리닌(β-Selinene), 감마-셀리닌(γ-Selinene), 감마-무로렌(α-Muurolene), 감마-카디넨(γ-Cadinene), 델타-카디넨(δ-Cadinene), 주니퍼 캠퍼(Juniper camphor) 등과 같은 세스퀴테르펜(sesquiterpenoid) 화합물과 스테로이드(steroid)인 베타-시토스테롤(β-sitosterol) 등으로 구성되어 있으며, 세스퀴테르펜류의 베타-큐버빈(β-Cubebene(30.1%)), 감마-셀리닌(γ-Selinene(16.1%)), 델타-카디넨(δ-Cadinene (13.5%))이 주성분을 이루고 있다.
이러한 성분을 함유하는 황칠나무 수액은 불용성 성질을 가짐에 따라, 상기 황칠나무 수액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물의 경우, 화장료 제형의 적용이 제한을 받게 된다.
따라서, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 미생물을 이용하여 상기 황칠나무 수액을 발효시킴에 따라, 상기 황칠나무 수액의 불용성 물질을 특이적인 합성 및 결합을 유도하여 수층으로 전이시킴으로써 친수성을 갖는 발효물의 제조가 가능하여, 종래의 화장료 제형 적용의 제한을 개선할 수 있다.
상기 발효는 미생물이 가지고 있는 효능을 이용하여 유기물을 분해시키는 과정을 말한다. 발효와 부패는 비슷한 과정에 의해 진행되지만 분해 결과 우리의 생활에 유용하게 사용되는 물질이 만들어지면 발효라고 하고, 악취가 나거나 유해한 물질이 만들어지면 부패라고 한다. 따라서, 한약재를 미생물을 이용하여 발효시키면 한약재의 독성이 감소되거나, 저분자화되어 소화가 용이하거나, 피부에 도포시 경피 흡수 등이 용이하게 되어 생체 이용률이 향상된다. 또한, 천연성분들은 그 자체로도 약리 작용을 나타낼 수 있지만, 발효를 통해 약리효과가 더욱 강화되거나 미생물의 대사에 의해 기존 발효 전의 한약재에 없던 약리 작용을 발휘할 수 있다.
본 발명에 따른 상기 황칠나무 수액을 발효시킬 경우 사용되는 미생물은 제한되지 않으나, 슈도자이마 (Pseudozyma sp.), 락토바실러스(Lactobacillus sp.), 바실러스(Bacillus sp) 및 류코노스톡(Leuconostoc sp.) 속으로 이루어진 군에서 선택되는 미생물 1종을 접종하는 것이 바람직하다.
본 발명은 불용성의 황칠나무 수액에 상기와 같은 미생물들 중 1종을 접종시킴으로써, 상기 미생물에 의해 생산되는 효소군을 통해 상기 황칠나무 수액의 불용성 물질을 특이적인 합성 및 결합을 유도한다. 이에 따라, 상기 불용성 황칠나무 수액은 친수성 성질을 갖는 황칠나무 수액 발효물로 전이됨으로써, 다양한 화장 제형 적용이 가능해진다.
또한, 화장료 조성물에 상기 황칠나무 수액 발효물을 함유함에 따라 주름 개선, 콜라겐 합성 증진, 피부 재생 및 항산화 효능등의 다양한 효능을 가져 화장료로서의 높은 가치를 확보할 수 있게 된다.
상기 미생물을 통해 얻게 되는 상기 황칠나무 수액 발효물은 본 발명에 따른 전체 화장료 조성물 내에서 0.1 ~ 90 중량%로 함유되는 것이 바람직하다. 이는 상기 황칠나무 수액 발효물의 함량이 0.1 중량% 미만일 경우 피부 개선의 효과를 기대할 수 없으며, 함량이 90 중량%를 초과하더라도 큰 효과상의 개선이 없으며, 제형의 안정성이 저하되는 문제점이 발생되기 때문이다.
이와 같은 본 발명의 화장료 조성물은 미생물을 이용함으로써 친수성 성질을 갖는 황칠나무 수액 발효물을 함유함에 따라 다양한 화장료 제형 적용이 가능하며, 주름 개선, 콜라겐 합성 증진, 피부 재생 및 항산화 효능 등의 다양한 효능을 갖게 된다.
본 발명에 따른 황칠나무 발효여과물의 제조방법은 한정되지 않으며, 통상적으로 사용하는 미생물을 이용한 발효법을 사용할 수 있다.
구체적으로는,
제조된 배지에 황칠나무 수액을 첨가하여 살균하는 단계;
상기 살균된 배지에 미생물을 접종하여 발효하는 단계; 및
상기 발효물을 원심분리 후 여과하는 단계 를 수행하여 본 발명에 따른 황칠나무 수액 발효물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물을 제조한다.
이하 각 단계별로 상세히 설명하면,
먼저, 제조된 배지에 황칠나무 수액을 첨가하여 살균한다.
상기 배지는 상기 접종되는 미생물의 종류에 따라 적절하게 선택되는 것이 바람직하며, 포도당, K2HPO4, KH2PO4, NaCl, 이스트 추출물, 말트 추출물, 펩톤, 올리브오일, 글루탐산(Glutamic acid), DMEM(동물세포배양 배지), EpiLife(캐스케이드 체액) 중 선택되는 하나 또는 이들의 혼합물로 제조된 배지를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 배지에 첨가하는 상기 활칠나무 수액은 황칠나무의 수피로부터 추출된 수지액이면 제한되지 않으며, 0.1 ~ 3 %, 바람직하게는 1%로 첨가한 다음 살균한다.
다음으로, 상기 살균된 배지에 미생물을 접종하여 발효하는 단계를 수행한다.
상기 사용된 배지에 따라 적절한 미생물을 선택하여 사용하는 것이 바람직하며, 상기 배지에 선택된 미생물을 접종 후 20 ~ 40℃, 바람직하게는 25 ~ 35℃에서 100 ~ 200rpm, 바람직하게는 130 ~ 150rpm으로 교반하면서 60 ~ 80시간, 바람직하게는 72시간 동안 발효를 진행하는 것이 바람직하다. 상기 발효 단계를 수행함에 따라, 상기 불용성의 황칠나무 수액은 친수성의 성질을 갖는 황칠나무 수액 발효물로 전이가 이루어진다.
다음으로, 상기 발효된 발효물을 원심분리 후 여과하는 단계를 수행한다.
이는 상기 발효물을 원심분리를 통해 분리함으로써, 균체 등 불용성 물질 제거 및 상등액을 회수하고, 0.3 ~ 0.5㎛, 바람직하게는 0.45㎛의 paper filtration을 한 후 제균 여과하여 본 발명에 따른 황칠나무 수액 발효물을 제조한다.
이와 같은 공정을 수행하여 제조되는 황칠나무 수액 발효물을 화장료 조성물의 유효성분으로 함유할 경우 다양한 화장료 제형에 적용이 가능할 뿐만 아니라, 주름 개선, 콜라겐 합성 증진, 피부 재생 및 항산화 효능 등의 다양한 효능을 가져 화장료로서의 높은 가치를 확보할 수 있게 된다.
본 발명에 따른 조성물은 상기의 유효성분 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분을 함유할 수 있다.
또한 본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 상기의 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 함유하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 불용성에서 친수성으로 전이된 황칠나무 수액 발효물을 함유함에 따라 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들면 용액, 현탁액, 유탁액, 겔, 로션, 에센스, 크림, 파우더, 비누, 팩마스크, 클렌징, 오일, 파운데이션 등의 화장료로 제형화 될 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 알루미늄 메타히드록시드, 미소결정성 셀룰로오스, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 왁스, 파라핀, 트라칸트, 동물성유, 전분, 셀룰로오스 유도체, 실리콘, 벤토나이트, 폴리에틸렌 글리콜, 실리카, 산화아연 또는 탈크 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 실리카, 탈크, 알루미늄 히드록시기, 락토스, 칼슘 실리케이트, 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이미다졸리늄 유도체, 이세티오네이트, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 지방족 알코올, 알킬아미도베타인, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 더욱 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 내지 실시예 4: 미생물을 이용한 황칠나무 수액 발효액 제조
아래 표 1과 같은 배지를 제조하고, 상기 배지에 황칠나무 수액 1%를 첨가한 후 살균하였다. 그 후 표 1과 같은 다양한 종류의 미생물을 각각 접종하여 30℃에서 140rpm으로 교반하고, 72시간 동안 발효하였다. 얻어진 발효물을 원심분리를 통하여 균체 등 불용성 물질을 제거하고 상등액을 회수한 후 0.45㎛의 paper filtration을 한 후 제균 여과하여 실시예 1 내지 실시예 4 황칠나무 수액 발효물을 제조하였다.
실시예 1 실시예 2 실시예 3 실시예 4
배지 포도당 2%
+ K2HPO4 1%
+ NaCl 0.5%
포도당 2% 포도당 + 펜톤
+ 이스트추출물
+ 말트 추출물
+ 올리브오일
포도당 2%
+ Glutamic acid
+ K2HPO4 1%
+ KH2PO4 0.5%
미생물 Leuconostoc sp. Lactobacillus sp. Pseudozyma
Sp.
Bacillus sp.

실험예 1: 접종된 미생물에 따른 황칠나무 수액 발효물의 안정도 확인
상기 실시예 1 내지 실시예 4의 배지에 상기 미생물의 접종 전후에 따른 변색 및 변취의 광 안정성 정도를 확인하기 위해 광 안정성 SUN TEST기 4시간 후 황칠나무 수액 발효물의 변색 및 변취 결과를 아래 표 2 및 도 1에 나타내었다.
광안정성 pH
접종 전 접종 후
실시예 1 변색 양호 변취 심함 6.78
실시예 2 변색 양호 변취 보통 4.12
실시예 3 변색 심함 변취 심함 5.82
실시예 4 변색 양호 변취 양호 5.42
표 2 및 도 1에서 보여지는 바와 같이, Bacillus sp. 미생물을 사용하여 발효한 실시예 4 황칠나무 수액 발효물의 경우 광안정성이 우수함을 알 수 있다.
이는 기질 대사로부터 생산된 펩타이드 또는 친수성 물질이 Bacillus sp.가 생산하는 효소 군을 통해 황칠나무 수액의 불용성 물질에 합성 및 결합이 유도되어, 수층으로 전이된 것으로 해석할 수 있다.
실험예 2: TypeⅠ 콜라겐 생합성 촉진 효과
인간 피부 섬유 아세포 (human dermal fibroblast)를 10%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM 배지가 들어 있는 48-웰 마이크로 플레이트에 접종시키고(1× 105세포/웰), 5% 농도(CO2)의 CO2 배양기에서 37℃로 24시간 배양하였다. 상기 실시예 4황칠나무 수액 발효물을 최종농도 0.1, 1, 10, 100, 500, 1000㎍/㎖로 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 황칠나무 수액 발효물이 첨가되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 24시간 동안 추가 배양한 후, 세포 배양액을 채취하였다.
타카라사(Takara Shuzo Co., Ltd. 일본국)의 콜라겐 단백질 측정키트를 사용하여, 채취한 세포 배양액에서 생성된 콜라겐 양을 측정하였고, 그 결과를 도 2에 도시하였다.
도 2에 도시된 바와 같이, 본 발명에 따른 황칠나무 수액 발효물이 첨가되지 않은 대조군에 비해 황칠나무 수액 발효물을 첨가하여 처리한 조건에서 콜라겐 생합성율이 증가되는 것을 알 수 있다.
실험예 3: 피부 진피 재생 효과
1. 인간 피부 섬유 아세포의 배양
인간 피부 섬유 아세포 (Human dermal fibroblast)는 Gibco사 (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA)로부터 구입하였다.
세포들은 상기 DMEM 배지(Gibco) 중에서 37℃에서 배양하였다. 배지는 부착된 세포들이 80% 합류(confluence) 때까지 유지하고 80 % 합류시기에 계대 배양을 수행하였다. 합류 때까지 배지는 2일 마다 교체하였다. 상기 계대 배양은 배양액을 제거한 플라스크를 인산완충식염수(phosphate buffer saline, PBS)로 세척하고 0.25 % 트립신-EDTA (Gibco BRL, Grand Island, NY, USA)로 세포를 떨어뜨린 후 세포 부유액을 원심분리한 후, 세포 수를 측정하고, 배양액에서 다시 3 배로 계대 배양하였다.
2. 피부 섬유 아세포의 이주능(migration) 측정
6 웰 플레이트(well plate)에 10% 혈청이 첨가된 DMEM 배지 (Gibco 사)를 각각 넣고, 인간 피부 섬유 아세포 1×106를 접종하여, 24시간 동안 5% CO2 및 37 ℃ 조건에서 배양하여 세포를 배양 접시에 부착시켰다. 각각의 웰을 혈청을 제거한 배양액으로 2회 세척한 다음, 마이크로 팁(micro tip)을 이용하여 세포에 상처를 만들어 긁힘 손상을 유도하였다.
세포층을 실시예 4황칠나무 수액 발효물을 각 농도별(1, 10, 100, 1000)로 처리한 배양 배지, 아무것도 첨가하지 않은 대조군 배양 배지 및 병풀잎 추출물을 처리하여 첨가한 양성 대조군 배양 배지에서, 24시간 배양한 후 긁힘 상처가 회복되는 정도를 마이크로이미지 비디오 카메라(Boyertown, PA)가 장착된 현미경으로 확인하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에 도시된 바와 같이, 병풀잎 추출물을 처리한 양성 대조군 조건은 아무것도 첨가하지 않은 대조군에 비해 진피 재생 효과가 향상됨을 알 수 있다. 그러나 병풀잎 추출물을 첨가한 양성 대조군 조건보다, 본 발명에 따른 황칠나무 수액 발효물을 농도별로 처리한 조건은 모든 농도에서 HDF 세포 이동능이 뛰어났으며, 병풀잎 추출물을 처리한 양성 대조군 조건에 비해 진피 재생 효과가 40% 향상됨을 알 수 있다.
실험예 4: 피부 표피 재생 효과
1. 피부 상피 각질형성세포의 배양
인간 피부상피 각질형성세포(human epidermal keratinocyte)는 Gibco사 (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA)로부터 구입하였다. 세포들은 EpiLife 배지 (Gibco사) 중에서 37℃에서 배양하였다. 배지는 부착된 세포들이 80% 합류(confluence) 때까지 유지하고 80 % 합류시기에 계대 배양을 수행하였다. 합류 때까지 배지는 2일 마다 교체하였다. 상기 계대 배양은 배양액을 제거한 플라스크를 인산완충식염수(phosphate buffer saline, PBS)로 세척하고 0.25 % 트립신-EDTA(Gibco BRL, Grand Island, NY, USA)로 세포를 떨어뜨린 후 세포 부유액을 원심분리한 후, 세포 수를 측정하고, 배양액에서 다시 3 배로 계대 배양하였다.
2. 피부 각질 형성세포의 이주능(migration) 측정
6웰 플레이트(well plate)에 10% 혈청이 첨가된 Epilife 배지(Gibco사)를 각각 넣고, 인간 피부 각질형성세포 1×106를 접종하여, 24시간 동안 5% CO2 및 37 ℃ 조건에서 배양하여 세포를 배양 접시에 부착시켰다. 각각의 웰을 혈청을 제거한 배양액으로 2회 세척한 다음, 마이크로 팁(micro tip)을 이용하여 세포에 상처를 만들어 긁힘 손상을 유도하였다.
세포층을 실시예 4 황칠나무 수액 발효물을 각 농도별(1, 10, 100, 1000)로 처리한 배양 배지, 아무것도 첨가하지 않은 대조군 배양 배지 및 병풀잎 추출물을 처리하여 첨가한 양성 대조군 배양 배지에서, 24시간 배양한 후 긁힘 상처가 회복되는 정도를 마이크로이미지 비디오 카메라(Boyertown, PA)가 장착된 현미경으로 확인하였으며, 그 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에 도시된 바와 같이, 병풀잎 추출물을 처리한 양성 대조군 조건은 아무것도 첨가하지 않은 대조군에 비해 표피 재생 효과가 향상됨을 알 수 있다. 그러나 병풀잎 추출물을 첨가한 양성 대조군 조건보다, 본 발명에 따른 황칠나무 수액 발효물을 농도별로 처리한 조건은 모든 농도에서 HEK 세포 이동능이 뛰어났으며, 병풀잎 추출물을 처리한 양성 대조군 조건에 비해 표피 재생 효과가 23% 향상됨을 알 수 있다.
실험예 5: 항산화 효과 (세포 내 활성 산소종(ROS) 소거활성 측정)
UV에 의해 생성되는 피부 상피 각질 형성 세포(human epidermal keratinocyte)내의 세포 내 활성 산소종(ROS)의 레벨을 검사하기 위해, DCF-DA 방법을 사용하여 검사하였다. 이때, UV처리한 세포의 ROS를 검출하기 위해, 세포를 1.5 × 105 세포/웰의 밀도로 분주하였다. 그 후 플레이팅을 하고 16시간 뒤에, 세포를 실시예 4황칠나무 수액 발효물로 전처리하였다. 전처리 24시간 후, 세포를 30mJ/㎠의 UV에 노출시켰으며, 세포는 추가적으로 24시간 동안 37°C에서 배양하였다. 다음으로 추가적으로 DCF-DA 용액(25μM)을 첨가한 후 30분 동안 배양하였고, 상기 방법과 같이 분석하여 그 결과를 도 5에 도시하였다.
도 5에 도시된 바와 같이, 본 발명의 황칠나무 수액 발효물을 처리한 조건은 아스코르빅애씨드와 유사하게 활성 산소종(ROS) 생성을 억제함으로써, 뛰어난 황산화 효과를 가지는 것을 알 수 있다.
이하, 상기한 실험예들을 근거로 하여 황칠나무 수액 발효물을 함유하는 화장료를 조성하여 제시하는 것이나 본 발명의 제형이 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.
제조예 1. 스킨
하기 표 3과 같이 실시예 4의 황칠나무 수액 발효물을 함유하는 스킨을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
성분 함량(중량%)
정제수 77.08
황칠나무수액 발효여과물 10.00
글리세린 3.00
디프로필렌글라이콜 2.00
피이지-400 0.30
판테놀 0.50
디소듐이디티에이 0.02
소듐히아루로네이트 0.05
1,2-헥산디올 1.50
피이지-60하이드로제네이티드캐스터오일 0.50
에탄올 5.00
0.05

제조예 2. 로션
하기 표 4과 같이 실시예 4의 황칠나무 수액 발효물을 함유하는 로션을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
성분 함량(중량%)
정제수 66.53
황칠나무수액 발효여과물 10.00
글리세린 5.00
부틸렌글라이콜 5.00
피이지-400 0.30
판테놀 0.50
디소듐이디티에이 0.02
카보머 0.30
소듐히아루로네이트 0.05
1,2-헥산디올 2.00
세라마이드 0.10
글리세린 스테아레이트 2.80
소르비탄 스테아레이트 1.20
세테아릴 스테아레이트 1.70
스테아릭 애씨드 1.00
비즈왁스 0.80
트리에칠헥사노인 3.00
스쿠알란 3.00
싸이클로메치콘 1.50
디메치콘 0.50
트리에탄올아민 0.30
0.10

제조예 4. 에센스
하기 표 5와 같이 실시예 4의 황칠나무 수액 발효물을 함유하는 에센스를 통상의 방법에 따라 제조하였다.
성분 함량(중량%)
황칠나무수액 발효여과물 10.00
글리세린 3.00
디프로필렌글라이콜 5.00
피이지-400 0.30
판테놀 0.50
디소듐이디티에이 0.02
소듐히아루로네이트 0.05
아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.10
1,2-헥산디올 1.50
세라마이드 0.50
트리에탄올아민 0.10
0.05

제조예 5. 마스크팩
하기 표 6과 같이 실시예 4의 황칠나무 수액 발효물을 함유하는 마스크팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
성분 함량(중량%)
정제수 66.53
황칠나무수액 발효여과물 10.00
글리세린 5.00
부틸렌글라이콜 5.00
피이지-400 1.50
판테놀 0.50
디소듐이디티에이 0.02
카보머 0.30
잔탄검 0.10
소듐히아루로네이트 0.05
1,2-헥산디올 2.00
세테아릴 알코올 1.50
글리세린 스테아레이트 2.80
소르비탄 스테아레이트 1.20
세테아릴 스테아레이트 1.70
스테아릭 애씨드 0.50
비즈왁스 0.80
트리에칠헥사노인 3.00
스쿠알란 3.00
싸이클로메치콘 3.00
디메치콘 5.00
트리에탄올아민 0.30
0.10

Claims (9)

  1. 황칠나무 수액의 미생물에 의한 발효 여과물인 황칠나무 수액발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 황칠나무 수액 발효물은 조성물 전체 중량에 대하여 0.1 ~ 90 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 화장료 조성물.
  3. 삭제
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 황칠나무 수액 발효물은 황칠나무 수액에 슈도자이마 스피시스(Pseudozyma sp.), 락토바실러스 (Lactobacillus sp.), 바실러스 (Bacillus sp) 및 류코노스톡 (Leuconostoc sp.) 속으로 이루어진 군에서 선택되는 미생물 1종을 접종하여 얻은 액체 발효물을 여과하여 얻는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 화장료 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 황칠나무 수액 발효물은
    제조된 배지에 황칠나무 수액을 첨가하여 살균하는 단계;
    상기 살균된 배지에 미생물을 접종하여 발효하는 단계; 및
    상기 발효물을 원심분리 후 여과하는 단계;를 수행하여 제조되는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 화장료 조성물.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 제 1 항, 제 2 항, 제 4 항 및 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 겔, 로션, 에센스, 크림, 파우더, 비누, 팩마스크, 클렌징, 오일, 파운데이션, 스프레이로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종의 제형을 갖는 피부 재생용 화장료 조성물.
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