KR20170005534A

KR20170005534A - 천연배지를 이용한 잔나비걸상버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20170005534A
Application number: KR1020150095675A
Authority: KR
Inventors: 김선희; 류충현; 편새미; 김재원; 강현걸; 장정원; 유수경
Original assignee: 김선희; 류충현
Priority date: 2015-07-06
Filing date: 2015-07-06
Publication date: 2017-01-16

Abstract

본 발명은 천연배지를 이용한 잔나비걸상버섯 균사체의 대량생산 및 배양액 조성물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 감귤 착즙액, 삼나무 추출물, 사과농축액, 효모엑기스, 포도당, 정제수를 배지 구성물로 하여 500리터 배양발효조에서 4방향 공기폭기장치를 이용한 배양장치를 통해 배양기간이 단축되며, 다당체의 함량이 증가된 배양액 생산을 통해 활성성분의 효능이 기존 추출물 보다 뛰어난 배양액 추출물을 제조하는 것으로, 이를 활성성분으로 0.001~30.0중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백효과, 항산화 효과, 피부보습효과, 여드름 방지 및 개선효과의 우수한 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

천연배지를 이용한 잔나비걸상버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장료 조성물{The Cosmetic composition containing the culture medium of mycelium from Elfvingia applanata using natural medium}

본 발명은 잔나비걸상버섯 균사체 배양액으로부터 얻은 유효성분을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 잔나비걸상버섯 균사체를 천연배지에 접종하여 4방향 공기폭기장치를 이용해 기존 균사체 배양일보다 배양기간을 단축하며, 유효성분 함량이 높게 나타난 배양액을 0.001-30중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 미백 효과, 항산화 효과, 피부 보습 효과 및 여드름 방지의 효과가 우수한 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.

잔나비걸상버섯(Elfvingia applanata)은 담자균(basidiomycete)의 한 종으로서 활엽수의 고목에서 부착 생장하는 여러해살이의 부후균의 일종이며, 우리나라를 비롯하여 세계적으로 분포되어 있으며, 우리나라, 중국 등에서 항암치료 등의 목적으로 전통적 민간요법 및 한약제로 사용되어 왔다. 잔나비걸상의 약리작용은 항암작용, 다당체의 면역조정효과, 항인플루엔자 바이러스 효과 등이 알려져 있으며, 열수추출물의 생쥐에 대한 급성독성 시험결과 투여 가능량 최대용량에서 치사예나 혈액생화학적, 병리조직학적 병변을 보이지 않았음이 보고된 바가 있다. 또한, 잔나비 걸상 버섯의 추출물이 어떠한 독성이 없이도(Kim, Y. S. et al., Effect of Elfvingia applanata extracton the acute toxicity in mice. Yakhak Hoeji 38 756-762 (1994)) 항균활성을 가지고 있다고 보고되어 졌다(Kim,Y. S. et al., antimicrobial activity of Elfvingia applanata extract alone and in combination with some antibiotics. Yakhak Hoeji. 38 742-748, 1994; Rym K. H. et al. Antiviral activity of water soluble substance from Elfvingia applanata. Kor. J. Pharmacogn. 30, 25-33 1999).

버섯의 인공배양법으로는 고체 배양방법과 액체 배양법이 이용되고 있으나 전자는 노동력 소요비용이 높아 효율성이 낮은 반면, 후자는 효율성이 높으나 기반기술이 요구되는 문제점이 지적되고 있다. 표고버섯 균사체 배양의 최적조건으로 온도 25℃, pH 4.0, 교반속도 300rpm, 접종량 10%, 산소통기량 1.0 v/v/m을 제시하였다. (Lee, B.W, et al.,'Cultural characteristics and pilot scale fermentation for the submerged mycelial culture of Lentinus edodes'. Kor. J. Appl. Microbial Biotechnol. 21. 609-614. (1993))

새로운 생물자원의 개발 및 유용물질 생산연구의 일환으로 사상균 (filamentous fungi)류, 특히 버섯류의 이용에 대한 연구가 큰 관심의 대상이 되고 있다 (Smith et al. 1980; Wainwright ea al. 1992.). 이와 같은 버섯균의 생육특성을 이용하여 액체배양을 할 경우, 배지의 조성과 생육조건에 따라 항균활성 및 항산화력을 갖는 다양한 대사산물을 얻을 수 있다. 즉, 버섯균은 배지에 함유된 성분을 다양한 기능성을 갖는 물질로 생물 전환할 수 있거나, 배지에 함유된 특수한 기능을 갖는 2차 대사산물 자체도 배양액으로 유입시킬 수도 있다.

잔나비걸상버섯 균사체의 배양 목적은 높은 수율의 다당체 생산에 있으나, 상기와 같은 배양방법을 잔나비걸상버섯에 그대로 적용하는 데는 한계가 있었으며, 합성배지를 사용함에 따라 발생하는 위생상의 문제 및 균사체의 수율이 개선되지 않는 문제 등, 아직까지는 버섯 배양을 위한 최적의 배양방법이 개발되지 않은 실정이다.

대부분의 생물에 의한 바이오매스 및 물질 생산은 계절의 제한을 받지만 이와 같은 버섯균 배양물의 생산은 계절의 영향을 받지 않고, 값싸게 대량생산이 가능하여 원료공급이 용이하고, 산업화가 쉽다는 특징을 가지고 있다.

화장품은 인류의 문명이 발달하기 전에는 자연으로부터 신체를 보호하기 위한 수단이었으나, 과학과 문명의 발달과 더불어 신체를 청결하게 하고 아름답게 하며, 또한 노화를 지연시켜 아름답고 쾌적한 생활을 하게 하는 것으로 바뀌었다.

화장품의 기능은 청결과 미적뿐만이 아니라 공해물질과 스트레스, 자외선 등의 외적인 요인과 면역세포의 기능저하, 세포활성의 저하 등의 내적요인에 기인한 자유라디칼(free Radical), 활성산소, 과산화물 등에 의한 콜라겐, 핵산, 세포막 지질 파괴 등의 피부노화의 원인을 제거하거나 억제하는 것이다. 소비자들은 젊음을 유지하기 위해 피부 노화억제의 관심이 많으며 고기능 화장품에 대한 욕구를 충족시키기 위해 미백, 주름개선 및 억제, 자외선 차단 기능을 갖는 화장품들이 계속해서 개발되어지고 있는 상황이다. 대한민국 특허출원 1999-4497호에는 치마버섯(Schizophyllum commune) 다당체인 베타-1,6-분지 베타-1,3-글루칸을 함유하는 보습화장료 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 특허출원 2003-73323호에는 차가버섯(Inonotus obliquus) 추출물을 함유하는 주름개선 화장료 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 특허출원 2001-10171호에는 상황버섯(Phellinus linteus) 추출물을 함유하는 미백화장료가 개시되어 있다. 그 외에 대한민국 특허출원 2003-24042호에는 노루궁뎅이버섯(Hericium erinaceus) 자실체 추출물을 함유하는 피부노화 방지 및 미백, 피부손상완화용 외용제 조성물이, 10-2008-0090160에는 망목주름담홍버섯 액체배양 추출물을 함유하는 주름개선 화장료 조성물이 개시되어 있다.

인간의 피부색은 내적, 외적요인에 의해 달라지는데 그 중 피부색을 결정하는 근본적인 내적인자는 천연 피부 색소인 멜라닌 이다(Jeong MH et al. Korean For. Soc. 99. 470-478. (2005)). 멜라닌은 자외선으로부터 피부를 보호하는 역할을 하나 과도하게 생성될 경우 피부에 색소가 침착되어 기미, 주근깨를 형성하며, 이와 같은 병변은 나아가 피부암의 원인이 되기도 한다(Cabanes J et al. J. Pharm. Pharmacol. 46. 982-985. (1994)).

티로시나제(Tyrosinase)는 polyphenol oxidase의 일종이며 구리를 함유하는 효소로서 색소세포에서 tyrosine을 3,4-dihydroxyphenylalanine(DOPA)로 변환하고 효소적 산화 반응에 의해 단계적으로 dopachrome으로 변환하여 멜라닌을 생합성 한다. 이러한 생합성 과정은 멜라노좀 이라는 특수한 형태의 갈색 세포내 소기관에서 진행되며 멜라닌 과립을 포함한 멜라노좀은 핵 주변 부위에서 수지상 돌기 끝부분으로 이동, 케라티노사이트의 식세포작용에 의해 세포질 내로 이동하고 이들은 케라티노사이트의 핵 주변에 축적된다. 멜라닌의 합성과 멜라노좀의 수, 주위의 케라티노사이트로의 이동은 일차적으로는 유전적 영향을 크게 받으며 부분적으로는 호르몬과 자외선 등에 영향을 받는다.

피부학적으로 볼 때, 피부의 가장 중요한 역할은 보호막(barrier)기능으로 물, 전해질 등 생체성분의 손실을 방지하는 동시에 외부환경의 유해물질이 피부내로 침입하지 못하도록 하는 것이다. 외부환경과 직접 접촉하는 피부 최외각의 각질층은 물리적, 화학적인 유해성분의 침입을 방지하고, 생체내보다 건조한 외부환경으로의 내부수분 손실을 막아주는 역할을 한다. 이러한 각질층은 각질층 내부에 적당한 수분을 보유하여 유연성을 유지하기 위한 여러 작용을 하고 있다. 각질세포층의 수분함량이 10% 이하가 되면 피부는 거칠어지고 신체의 보호기능을 잃게 되어 노화현상이 일어난다.

피부노화는 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 활성산소종이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화 될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀 더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴, 프로테오글라이칸, 피브로넥틴 등이 절단되어 심한 과다 염증반응이 일어나고, 피부의 탄력에 지장을 주게 되고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다.

그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 활성산소종이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되는 활성산소종을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부가 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.

균사체 배양액의 생리 활성과 액체배양 등을 이용한 활용은 미흡한 실정이다. 이에 본 발명자들은 통상적으로 알려진 버섯 이외에 국내에서 자생하고 있는 다양한 버섯류를 활용하여 산업화 가능한 물질을 탐색하던 중에 잔나비걸상버섯 균사체를 천연액체배지에서 배양하는 경우에, 배양기간 단축 및 고농도의 유효성분을 함유한 배양액을 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

잔나비걸상버섯으로부터 분리된 균사체의 최적배양을 위한 균사체 천연 액체배지의 조성을 개발하고, 생물반응기에서 균사체 및 다당체를 포함하는 배양액을 신속하게 대량으로 생산하는 방법의 제공을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 천연 액체배지 배양액을 이용하여 우수한 티로시나제 억제효과로 인한 피부 미백 효과, 항산화 효과, 피부 보습 효과, 여드름 방지및 개선 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공함을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 정제수 1L당 감귤 착즙액 2%(v/v), 삼나무 추출물 1.5%(v/v), 사과농축액 2.5%(v/v), 포도당 4%(v/v), 효모엑기스 0.5%(v/v)를 포함하는 배지로 조성하고 이 배양액의 pH를 4.5로 일정하게 유지하였다.

천연 액체배지를 이용하여 잔나비걸상버섯 균사체를 배양하면, 균사체 수율도 좋아지고, 배양액 내 유리 아미노산 및 다당류의 함량도 증가하며, 합성배지로 인한 위생상의 문제도 발생하지 않음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

잔나비걸상버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액은 그대로 사용하거나, 건조(또는 동결건조)하여 분말 형태로 사용할 수 있다. 바람직하게는 배양액을 여과 하고 유효성분을 회수하여 사용할 수도 있다. 구체적으로 잔나비걸상버섯 균사체를 액체 배양한 후, 균사체를 원심분리를 통해 제거하여 배양 여액을 종이필터로 여과하여 수득된 여과액을 감압농축하고 에탄올 침전하여 침전물 회수후 동결건조 분말로 사용할 수 있는 것이다. 이때, 배양은 '발효'를 포함하는 의미이다.

본 발명의 조성물은 티로시나제 활성 억제효과와 활성산소 소거효과, 수분 보유능, β-glucan 함량, 여드름 방지 및 개선효과가 우수한 조성물을 제공하기 위해, 잔나비걸상버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 천연 액체배지는 잔나비걸상버섯 균사체를 대량 배양하여 생산함으로써 배양균사체로부터 배양액에 포함되어있는 다당체 및 기능성 성분을 경제적으로 생산할 수 있다.

또한 본 발명의 화장료 조성물은 멜라닌의 생성 및 이와 관련된 효소의 활성을 억제하여 우수한 피부 미백효과와 항산화 효과, 보습효과, 여드름 방지의 개선효과를 나타낸다.

본 발명은 천연 액체배지에 잔나비걸상버섯 종균을 접종하여 잔나비걸상 버섯 균사체를 배양하는 공정을 포함한다.

또한, 본 발명은 잔나비걸상버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명에서 화장료라 함은 피부에 적용하여 미백, 보습, 여드름 예방 및 치료 등의 목적으로 사용되는 화장품, 기능성 화장품을 포함하는 의미로 사용하였다.

본 발명의 잔나비걸상버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액은 열수추출물, 유기용매 추출물 또는 여과액에서 추출된 다당체일 수도 있다. 예를 들면, 잔나비걸상버섯 균사체 배양액에서 수득한 열수추출물, 또는 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 추출한 유기용매 추출물일 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 배양액 추출물이 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 상기 용매를 감압농축 또는 동결건조하여 얻은 것임을 특징으로 한다.

본 발명은 상기 잔나비걸상버섯 배양으로부터 얻은 배양액을 화장료 조성물 전체에 대해서 0.001중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 거의 없으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하여 경제적이지 못하다.

이하 제조예 및 실험예를 통해 본 발명을 좀 더 구체적으로 설명한다. 단, 이들 제조 예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 제조예 및 실시예에 국한되는 것은 아니다.

제조예1: 잔나비걸상버섯 자실체 추출물의 제조

경북 안동시 소재 농장에서 분양받은 잔나비걸상버섯 자실체로 추출물을 제조하였다. 2×2×2mm의 크기로 절단한 자실체 일정량을 에탄올이 30%~70%(v/v) 함유된 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조하여 분말상의 추출물을 제조하였다.

제조예2: 잔나비걸상버섯 균사체의 분리

잔나비걸상버섯 자실체로부터 담자균류 균사체를 분리하였다. 2×2×2mm의 크기로 절단한 자실체 일정량을 감자 2.0(w/v), 설탕 1.0(w/v) 및 펩톤 0.6(w/v)를 함유하는 배지에서 5.0%(w/v) 되도록 이식하여 10일간 150rpm으로 진탕 배양하였다. 전기 배양으로 생성된 각각의 담자균류 균사체를 PDB배지에 접종하고 30에서 5~6일간 배양하여 균사체를 확인 후, 15일 간격으로 계대배양하여 균주로 사용 하였다.

제조예2: 잔나비걸상버섯 균사체의 분리

제조예3: 천연 액체배지에 제조예2를 접종하여 배양하는 공정

잔나비걸상버섯 균사체를 생물반응기 내에서 대량 배양하기 위한 배양액은 정제수 1L당 감귤 착즙액 2%(v/v), 삼나무 추출물 1.5%(v/v), 사과농축액 2.5%(v/v), 포도당 4%(v/v), 효모엑기스 0.5%(v/v)를 포함하는 배지로 조성하고 이 배양액의 pH를 4.5로 일정하게 유지 하였다.

상기 배양액을 4방향 공기폭기장치 생물배양기에 첨가하고, 제조예2에서 얻은 균주를 배양액 중량대비 5%로 배양액에 접종한 후 공기 공급량은 0.025~0.2vvm으로 하여 7일 동안 배양하여 균사체 및 배양액을 생산하였다.

제조예4 : 잔나비걸상버섯 균사체 추출물의 제조

상기 제조예3에서 생산된 균사체 일정량을 에탄올이 30~70%(v/v) 함유된 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조하여 분말상의 추출물을 제조하였다.

제조예5: 잔나비걸상버섯 균사체 배양으로부터 얻은 배양액 추출물의 제조

상기 제조예3에서 생산된 잔나비걸상버섯 균사체의 배양액을 10,000 x g로 20분 동안 원심분리하고 상등액을 감압농축하여 에탄올 침전을(에탄올:배양액=4:1)시킨 후 10,000 x g로 20분간 원심분리후 침전물을 회수하여 동결건조하여 분말상의 추출물을 제조하였다.

배지에 따른 잔나비걸상버섯 균사체의 수율

측정	일반 액체배지	제조예3의 천연배지
균사체의 양 (건조물 함량, g/100g)	9.89±0.41 (0.59±0.02)	23.30±1.35 (2.33±0.12)

상기 표1에서 보듯이, 생균사체 양은 천연배지에서 23.30%(w/v), 일반 액체배지에서 9.89%(w/v) 수득되었으며, 건물량으로는 각각 2.33%(w/v), 0.59%(w/v)으로 일반배지에 비하여 천연배지가 약 4배가 높아 천연배지에서 균사체의 함량이 높은 것을 알 수 있다.

배지에 따른 잔나비걸상버섯 배양액의 점도 비교

잔나비걸상버섯 균사체배양 배지 배양액을 점도계(Brookfield model DV-Ⅱ, Stoughton, USA)를 사용하여, 회전속도 1~50 rpm 및 25℃ 조건에서 점도를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

측정	일반 액체배지	제조예3의 천연배지
배양액의 점도 (cP)	37±5.3	1,016±21

배양액의 점도는 일반 액체배지에서 37cP, 천연배지에서 1,016cP로 천연배지에서 다당류의 함유량이 많아 점도가 높은 것을 알 수 있다.

티로시나제 억제효과 측정 실험

본 실시예는 제조예 1, 4내지 5에서 수득한 시료의 미백효과를 확인하기 위해 티로시나제(tyrosinase) 효소의 기능이 억제되는 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.

티로시나제는 생체내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되게 도와주는 효소이다. 본 실험예 에서는 이 효소의 기능을 억제하여 티로신이 산화되어 멜라닌이라는 흑색의 고분자를 형성하는 것을 억제하는 정도를 측정하는 방법(Pomerantz S. H. et al., 24. 161-168. (1996))을 응용하여 미백효과를 판정하였다.

각 시료들의 티로시나제에 대한 저해활성은 시료 15μL를 넣고, 50mM 인산 완충액(pH 6.5) 150μL, 1.5mM L-티로신 용액 25μL를 넣은 후, 머쉬룸 티로시나제(1,500units/, Sigma사) 10μL를 첨가하여 37℃에서 20분간 반응 시킨 후, 마이크로플레이트 판독기(microplate reader, ELx800, 미국)를 사용하여 490nm에서흡광도를 측정하여 티로시나제에 대한 저해율을 측정하였다. 티로시나제에 대한 저해율(%)은 수학식 1에 따라 계산하였으며, IC₅₀값은 티로시나제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.

A : 시료를 넣은 웰의 반응 전 흡광도

B : 시료를 넣은 웰의 반응 후 흡광도

C : 시료를 넣지 않은 웰의 반응 전 흡광도

D : 시료를 넣지 않은 웰의 반응 후 흡광도

시료명	티로시나제 저해 효과 % ( )
제조예1의 잔나비걸상버섯(E.applanata) 자실체 추출물	0.45
제조예4의 잔나비걸상버섯(E.applanata) 균사체 추출물	0.41
제조예5의 잔나비걸상버섯(E.applanata) 배양액 추출물	0.36
알부틴(대조구)	0.47

티로시나제 활성 억제효과를 시험한 결과, 티로시나제 저해 효과는 시료의 IC₅₀값은 자실체에서 0.45%이며, 균사체 추출물과 비슷한 저해효과를 나타내었다. 또한 배양액 추출물에서 기존의 미백제인 알부틴 보다 높은 0.36%의 높은 티로시나제 저해 효과를 나타내었다.

자유라디칼 소거활성 측정 실험

제조예 1, 4내지 5에서 수득한 잔나비걸상버섯 추출물의 자유라디칼 소거활성을 측정하기 위해 실험실 조건에서 녹차추출물 같은 우수한 항산화활성을 갖는 추출물을 비교샘플로 하고 DPPH법을 이용하여 자유라디칼 소거 활성을 측정하였다.

DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical)라는 유리기를 사용하여 환원력에의한 자유라디칼 소거활성을 측정한다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다.

DPPH 자유라디칼 소거활성 측정을 위하여 0.2%, 0.1%, 0.05%, 0.005% 농도의 담자균류균사체 추출물을 준비하였다. 상기 농도의 추출물을 96웰 플레이트에 각각 넣고, 여기에 100uM 메탄올용액으로 제조된 DPPH를 첨가하여 용액의 총 부피가 200μL가 되도록 하였다. 이것을 37℃에서 30분간 방치한 후 560nm에서 흡광도를 측정하였다.

자유라디칼 소거활성(%)은 다음의 수학식 2으로 산출하였다.

A: 본 발명의 잔나비걸상버섯 균사체 추출물을 처리하지 않은 대조군의 흡광도

B: 본 발명의 잔나비겅상버섯 균사체 추출물을 처리한 실험군의 흡광도

시료명	항산화효과(%)
제조예1의 잔나비걸상버섯(E.applanata) 자실체 추출물	88.76
제조예4의 잔나비걸상버섯(E.applanata) 균사체 추출물	90.60
제조예5의 잔나비걸상버섯(E.applanata) 배양액 추출물	93.85
녹차 추출물(대조구)	94.84

표3에서 확인할 수 있듯이 잔나비걸상버섯 자실체 및 균사체는 비슷한 항산화 효과를 나타내며, 배양액 추출물의 경우 항산화활성이 우수한 녹차추출물과 비슷한 항산화 효과를 나타내어 항상화 효과가 우수함을 알 수 있었다.

수분 보유능 평가

하기 표5에 나타난 조성비로 A항의 수상파트와 B항의 유상파트를 각각 75~80℃ 까지 가열하여 완전히 용해시킨 후, 수상파트에 유상 파트를 서서히 투입하고 75~80℃에서 호모믹서 3000rpm으로 5분간 유화시켰다. 유화 도중 C항인 중화제를 투입하여 중화시킨 다음, 1차 유화가 끝나면 냉각하였다. 이어서, 50℃에서 제 D항인 향을 투입하고 호모믹서 3000rpm으로 3분간 2차 유화한 후 냉각하여 30℃에서 종료하여 크림을 제조하였다.

구분	원료명	제조예6 (중량%)	제조예7 (중량%)	제조예8 (중량%)
수 상 파 트 (A)	1.잔나비걸상버섯 자실체 추출물	0.5	-	-
	2.잔나비걸상버섯 균사체 추출물	-	0.5	-
	3.잔나비걸상버섯 배양액 추출물	-	-	0.5
	4.정제수	To 100	To 100	To 100
	5.카보머	0.3	0.3	0.3
	6.글리세린	7.0	7.0	7.0
	7.부틸렌글라이콜	5.0	5.0	5.0
	8.방부제	적량	적량	적량
유 상 파 트 (B)	9.카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	6.0	6.0	6.0
	10.스쿠알란	5.0	5.0	5.0
	11.세틸에칠엑사노에이트	5.0	5.0	5.0
	12.스테아릭애씨드	1.5	1.5	1.5
	13.세테아릴알코올	1.5	1.5	1.5
	14.비즈왁스	0.5	0.5	0.5
	15.자기유화형모노스테아린산글리세린	2.0	2.0	2.0
	16.모노스테아린산소르비탄	1.0	1.0	1.0
	17.글리세릴모노스테아레이트	1.5	1.5	1.5
중화제(C)	18.알지닌	0.3	0.3	0.3
첨가제(D)	19.향	적량	적량	적량

잔나비걸상버섯이 피부 보습력 증가에 미치는 효과를 측정하기 위하여 건조 피부로 분류된 40~50대 성인 남녀 60명을 각각 제조예6, 7내지 8의 3개의 군에 대해 20명씩 3조로 나누어 크림을 매일 2회씩 4주간 안면에 도포하게 하였다. 도포 개시 전과, 도포 후 1주, 2주, 4주 경과한 시점에 항온, 항습 조건(24℃, 상대습도 40%)에서 피부수분량측정기(Corneometer CM825, C+K Electronic Co., 독일)로 피부 수분량을 측정하였다.

구 분	수분 증가율 (%)
구 분	제조예6	제조예7	제조예8
도포개시 전	18	18	18
1주경과	24	25	28
2주경과	29	32	35
4주경과	34	36	42

상기 표의 결과를 보면, 제조예6을 도포한 경우에는 도포가 이루어진 4주까지는 약 34%의 수분 증가율을 보이며, 제조예7은 36%의 수분 보유능을 보였다. 한편 제조예8은 42%로 높은 피부보습력을 유지 할 수 있음을 알 수 있다.

잔나비걸상버섯 베타글루칸(β-glucan)함량 측정

잔나비걸상버섯 자실체, 균사체 및 배양액 추출물 100 mg을 정량하여 Megazyme kit (K-BGLU, Megazyme International Ireland Ltd, wicklow, Ireland)를 이용하여 베타글루칸 함량을 측정하였다. 총 글루칸 함량은 시료 100 mg에 37% 염산(hydrochloric acid)을 1.5 mL 첨가한 후, 30℃에서 45분간 반응시켰다. 반응액에 증류수 10 mL을 첨가하여 100℃에서 2시간 동안 가열한 다음, 2 M KOH 10 mL과 200 mM 소듐 아세테이트 완충액 (sodium acetate buffer; pH 5.0)를 이용하여 100 mL까지 부피를 조정하였다. 1,500g에서 10분간 원심분리한 후 회수한 상등액 중 0.1 mL을 취하여 β-글루코시다아제(β-glucosidase) 0.1 mL을 가하여 40℃에서 60분 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 후 GOPOD 시약 3 mL을 첨가하여 40℃에서 20분 동안 반응 후 510 nm에서 흡광도를 측정하였다. 알파글루칸 함량은 시료 100 mg에 2 M KOH 2 mL을 첨가하여 20분간 냉각상태에서 반응시킨 다음, 1.2mM 소듐 아세테이트 완충액(sodium acetater buffer; pH 3.8) 8 mL과 아밀로글루코시다아제(Amyloglucosidase; 1,630 U/mL) 0.2 mL을 첨가하여 40℃에서 30분간 반응시켰다. 1,500g에서 10분간 원심 분리하여 얻은 상등액중 0.1 mL을 취하고, 여기에 GOPOD 시약 3 mL을 첨가하여 40에서 20분 동안 반응하였다. 반응액의 흡광도를 510 nm에서 측정하였으며, 총 글루칸과 알파글루칸 함량의 차이를 베타글루칸 함량으로 계산하였다.

시료명	베타글루칸 함량(g/100g)
제조예1의 잔나비걸상버섯(E.applanata) 자실체 추출물	2.4
제조예4의 잔나비걸상버섯(E.applanata) 균사체 추출물	8.2
제조예5의 잔나비걸상버섯(E.applanata) 배양액 추출물	18.7

상기 표의 결과를 보면 자실체, 균사체, 배양액 추출물에서 β-glucan 함량은 각각 2.4, 8.2, 18.7 g/100g으로 배양액에서 가장 높은 베타 글루칸 함량을 나타낸 것을 알 수 있다.

잔나비걸상버섯 배양액 여드름 임상효과

상기 제조예 5에서 수득된 잔나비걸상버섯 배양액 성분을 1% 첨가하여 화장료로 제조 후 여드름을 가지고 있는 사람에게 7일간 도포하여 테스트하였다.


실시 전	7일 후

상기의 실시예7로부터 잔나비걸상버섯 배양액의 여드름 개선 및 예방 효과를 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 화장료 조성물의 우수한 여드름 개선, 예방 또는 치료 효과를 알 수 있었다.

Claims

정제수 1L당 감귤 착즙액 2%(v/v), 삼나무 추출물 1.5%(v/v), 사과농축액 2.5%(v/v), 포도당 4%(v/v), 효모엑기스 0.5%(v/v)를 포함여 조성된 배지임을 특징으로 하는 잔나비걸상버섯 균사체 배양방법.
제 1항에 의한 배양방법으로 제조된 잔나비걸상버섯 배양액 조성물.
제 2항의 잔나비걸상버섯 균사체 배양액 조성물을 유효성분으로 포함하는 화장료.
제 2항에 있어서, 상기 조성물은,
피부 미백용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 2항에 있어서, 상기 조성물은,
피부 항산화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 2항에 있어서, 상기 조성물은,
피부 보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 2항에 있어서, 상기 조성물은,
여드름 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징크림, 샴푸로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장품 조성물