KR20120007170A

KR20120007170A - 닥나무 또는 그 추출물의 발효방법, 그 발효 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20120007170A
Application number: KR1020100067781A
Authority: KR
Inventors: 권순상; 이진영; 정한순; 김소연; 안성준
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2010-07-14
Filing date: 2010-07-14
Publication date: 2012-01-20
Also published as: KR101761771B1

Abstract

본 발명은 닥나무 또는 그 추출물의 발효방법, 그 발효 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 닥나무 또는 그 추출물을 자연발효시키거나, 발효 균주 또는 일정량의 소금을 첨가하여 발효시킨 후 이를 용매로 추출함으로써 인체에 유해한 부패균, 대장균 및 혐기성 세균 등의 잡균의 번식을 막고 악취 등을 없애고 기존의 추출물 보다 미백, 항노화, 항주름, 보습 또는 탄력 개선 효과를 높이는 닥나무 또는 그 추출물의 발효방법, 그 발효 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

닥나무 또는 그 추출물의 발효방법, 그 발효 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물{Method for fermenting Broussonetia plant or the extract thereof, the fermented extracts thereby and the cosmetic composition containing the same}

본 발명은 닥나무 또는 그 추출물의 발효방법, 그 발효 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 닥나무 또는 그 추출물을 자연발효시키거나, 발효 균주 또는 일정량의 소금을 첨가하여 발효시킨 후 이를 용매로 추출함으로써 인체에 유해한 부패균, 대장균 및 혐기성 세균 등의 잡균의 번식을 막고 악취 등을 없애고 기존의 추출물 보다 미백, 항노화, 항주름, 보습 및 탄력 개선 효과를 높이는 닥나무 또는 그 추출물의 발효방법, 그 발효 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

닥나무는 그 인피섬유가 제지의 원료로 사용되어 오고 있으며 또한 여러 가지 약효를 갖고 있어 강장, 명목(明目)작용, 음위, 수종, 익기 및 이뇨 등에 효과가 있고 풍을 제거하며, 피를 맑게 하고 시력감퇴 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

최근 전통 발효 식품에 대한 관심이 높아 지면서 이런 발효 기법들을 활용한 다양한 추출물의 제조 방법들이 개발되고 있다. 이에 따라 한약재 등을 발효시켜 기존 한약재의 성능 보다 우수한 성능을 가진 한약재 추출물을 활용한 기능성 식품, 화장품 등의 개발이 이어지고 있다.

염장법(소금 절임)은 전통적인 식품 저장법의 하나로서 동물성 식품 및 식물성 식품류 모두에 의해 응용이 되어 왔다. 염장법은 식품에 소금을 가함으로써 부패 및 오염을 방지하고 정상적인 발효를 돕는 방법으로 김치, 된장 및 젓갈류 등의 제조에 활용되고 있다.

본 발명자들은 닥나무 추출물 내 유효성분의 함량을 높이기 위한 방안을 연구한 결과, 닥나무 또는 그 추출물을 자연발효시키거나, 발효 균주 또는 일정량의 소금을 첨가하여 발효시킨 후 이를 용매로 추출한 닥나무 발효 추출물이 미백, 항노화, 항주름, 보습 및 탄력 개선 효과가 우수함을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 닥나무 추출물 내 유효성분의 함량을 높이기 위한 닥나무 또는 그 추출물의 발효방법 및 그 발효 추출물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 닥나무 또는 그 추출물을 자연발효, 균발효 또는 염장발효시키는 발효방법을 제공한다.

또한 본 발명에서는 상기 방법으로 얻은 닥나무 발효 추출물을 제공한다.

본 발명에 의한 방법으로 발효된 닥나무 발효 추출물은 유효성분의 증대로 인해 미백, 항노화, 항주름, 보습 및 탄력 개선 효과가 우수하였으며, 염장 발효 추출물의 경우 인체에 유해한 대장균 또는 혐기성 세균 등에 의한 부패 및 오염을 방지할 수 있었다.

도 1은 소금이 유해 미생물의 성장에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 대장균(Escherichia coli ATCC 8739), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027) 및 황색포도상 구균(Staphylococcus aureus ATCC 6538) 배양 시 천일염을 용액을 도말한 후 저해환 생성 여부를 확인한 결과를 보여준다.

본 발명은 닥나무 추출물 내 유효성분의 함량을 높이기 위하여 닥나무 또는 그 추출물을 발효시키는 방법에 관한 것이다.

본 발명에서는 닥나무 또는 그 추출물을 당업계에 잘 알려진 통상적인 방법으로 발효시킬 수 있다. 이때, 닥나무 추출물은 당업계에 잘 알려진 방법으로 물 또는 에탄올로 추출하여 제조할 수 있으며, 예를 들면, 닥나무의 뿌리, 줄기, 잎, 꽃 또는 열매에 물 또는 에탄올을 첨가하여 10∼90℃에서 4∼24시간 동안 추출하여 제조할 수 있고, 바람직하게는 물을 사용할 수 있으나, 이에만 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명은 닥나무 또는 그 추출물을 자연발효시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 일 실시예에서 상기 닥나무 또는 그 추출물은 당 성분과 혼합하여 옹기 등의 용기에 담아 인위적인 조작없이 자연 발효시켜 제조할 수 있다. 이때, 사용 가능한 당 성분은 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면, 자당, 자일리톨, 올리고당, 식이섬유, 에리스리톨, 포도당 또는 과당 등이 사용될 수 있다. 상기 당 성분은 전체 발효물 총 중량에 대하여 1 내지 10 중량%로 혼합되는 것이 바람직하고, 햇볕이 잘 드는 사계절의 자연환경에서 30일 내지 6년, 바람직하게는 6개월 이상 발효시킨다.

또한 본 발명은 닥나무 또는 그 추출물을 균발효시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 일 실시예에서 상기 닥나무 또는 그 추출물은 효모균, 버섯균, 유산균, 누룩균 또는 바실러스속균(고초균) 등 당업계에 잘 알려져 있는 유용한 발효 균주를 접종하여 10∼60℃에서 18시간 내지 100일 정도 발효시킬 수 있다. 이때, 닥나무에 직접 발효 균주를 접종하여 발효시킨 후 이를 다시 물 또는 에탄올 등으로 추출할 수도 있고, 기존 닥나무 추출물에 발효 균주를 접종하여 발효물을 얻을 수도 있다.

본 발명에서 사용하는 효모균은 사카로마이세스(Saccharomyces sp .), 스키조사카로마이세스(Schizosaccharomyces sp .), 토룰로프시스(Torulopsis sp .), 로도토룰라(Rhodotorula sp .) 또는 칸디다(Candida sp .) 등을 들 수 있으며, 버섯균은 식용으로 가능한 버섯균이라면 어느 것이나 가능하나, 바람직하게는 차가버섯(Inonnotus - obliquus), 동충하초균류(Cordyceps sinensis , Paecilomyces japonica), 송이버섯(Tricholomamatsutake), 상황버섯(Phellinus linteus) 또는 영지버섯(Ganoderma lucidum) 등을 사용할 수 있다. 또한 유산균은 락토바실러스(Lactobacillus sp .), 스트렙토코쿠스(Streptococcus sp .), 류코노스톡(Leuconostoc sp .) 또는 비피도박테리아(Bifidobacteria sp .) 등을 들 수 있으며, 누룩균은 라이조푸스(Rhyzopus), 우사미(Usami) 및 오리재(Oryzae), 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae) 또는 아스퍼질러스 소재(Aspergillus sojae) 등을 들 수 있고, 바실러스속균(고초균)은 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1017, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1232, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1267, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1268, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1200, 바실러스 푸미루스(Bacillus pumilus) F1337, 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) F1005, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1236 또는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1279 등을 들 수 있으나, 이에만 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에서 효모를 사용하여 발효시킬 경우, 닥나무 또는 그 추출물이 함유된 기본 배지에 일정한 농도(약 10⁵내지10⁷ cell/mL)로 효모를 접종하여, pH 5.5∼6.5, 온도 25∼50℃, 통기량 0.05∼0.5 VVM의 조건을 유지하면서 배양한 후, 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 효모균제를 제거함으로써 닥나무 발효 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 24 내지 120 시간이 바람직하다.

또한, 본 발명의 일 실시예에서 버섯균을 사용하여 발효시킬 경우, 닥나무 또는 그 추출물에 버섯균을 접종하여, 온도 18∼25℃, 습도 60∼80%의 조건을 유지하면서 배양한 후, 물이나 탄소수 1∼4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올 등), 상기 저급 알코올과 물의 혼합 용매, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 1,3-부틸렌글리콜, 헥산 또는 디에틸에테르 중 1종 이상을 이용하고, 50∼100℃, 1∼5시간 동안 가열하여 감압 농축하여 닥나무 발효 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 1일 내지 100일이 바람직하다.

또한, 본 발명의 일 실시예에서 유산균을 사용하여 발효시킬 경우, 닥나무 또는 그 추출물이 함유된 기본 배지에 일정한 농도(약 10⁵내지10⁷ cell/mL)로 유산균을 접종하여, pH 6.5∼7.5, 온도 25∼50℃, 통기량 1VVM의 조건을 유지하면서 배양한 후, 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 유산균제가 제거된 닥나무 발효 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 24 내지 120 시간이 바람직하다.

또한, 본 발명의 일 실시예에서 누룩균을 사용하여 발효시킬 경우, 닥나무 또는 그 추출물에 누룩균을 접종하여, 온도 15∼45℃의 조건을 유지하면서 배양한 후, 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 누룩균제가 제거된 닥나무 발효 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 18 내지 120 시간이 바람직하다.

또한, 본 발명의 일 실시예에서 바실러스속균을 사용하여 발효시킬 경우, 닥나무 또는 그 추출물이 함유된 기본 배지에 일정한 농도(약 10⁵내지10⁷ cell/mL)로 바실러스속균을 접종하여, 온도 10∼60℃의 조건을 유지하면서 배양한 후, 이 발효액을 원심분리하여 pH 5.5∼8.5, 고분자 침전물과 바실러스균제가 제거된 닥나무 발효 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 24 내지 96 시간이 바람직하다.

또한 본 발명은 닥나무 또는 그 추출물을 염장 발효시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 일 실시예에서 상기 닥나무 또는 그 추출물은 1) 닥나무 또는 그 추출물에 일정량의 소금을 첨가하여 장기 숙성 발효시키는 단계; 및 2) 상기 염장 발효물을 물 또는 유기용매로 추출하여 발효 추출물을 수득하는 단계;를 포함하는 염장 발효 방법에 관한 것이다.

상기 1) 단계에서, 염장에 사용되는 소금으로는 정제한 고순도 염화나트륨, 천일염, 암염 및 죽염 등이 바람직하며, 소금의 농도는 전체 발효물에 대하여 10∼30 중량%가 바람직하다. 소금의 함량이 10 중량% 미만에서는 기대하는 효과를 발휘하기가 어렵고, 30 중량%를 초과하면 효과의 변화가 미미하다.

본 발명의 발효공정은 4 내지 40℃ 사이에서, 충분한 발효가 일어날 수 있도록 30일에서 1년 정도, 바람직하게는 6개월 내지 1년 정도가 발효시키는 것이 좋다. 4℃ 미만에서는 유용 미생물의 성장이 잘 되지 않고 40℃를 초과할 경우 미생물의 성장이 너무 과하게 일어나 닥나무 또는 그 추출물의 성능에 영향을 미칠 수 있다.

상기 2) 단계에서 사용하는 추출 용매로는 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 그룹에서 선택된 1종을 단독으로 또는 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다. 이때, 추출온도는 10 내지 80℃가 바람직하며, 6시간 내지 24시간 동안 추출할 수 있다. 상기 추출온도 및 추출시간을 벗어나면 추출 효율이 떨어지거나 성분의 변화가 생길 수 있다.

본 발명에서는 상기 2) 단계 이후 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 얻어진 액상물 또는 추가로 용매를 증발, 분무건조 또는 동결건조하여 닥나무의 염장 발효 추출물의 제조할 수 있다.

또한 본 발명은 상기 방법에 의한 제조된 닥나무 발효 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001∼90 중량%, 바람직하게는 0.001∼50 중량%로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명에 의한 화장료 조성물은 미백, 항노화, 항주름, 보습 또는 탄력 개선용임을 특징으로 한다.

이하, 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 이들 실시예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니고, 당업계에서 통상적으로 주지된 변형, 치환 및 삽입 등을 수행할 수 있으며, 이에 대한 것도 본 발명의 범위에 포함된다.

[실시예 1] 닥나무 자연 발효 추출물 제조

세척한 닥나무 줄기 및 뿌리 1 kg을 올리고당 50 g과 혼합하여 옹기에 넣고, 옹기가 가득차면 위에서 압을 가하여 누르지 않고 자연 상태로 옹기의 뚜껑을 덮고 6개월간 자연 발효시켰다. 발효가 끝난 후, 발효된 원료를 여과 헝겊으로 걸러내어 찌꺼기를 제거함으로써 닥나무 자연 발효 추출물을 얻었다.

[비교예 1] 닥나무 추출물 제조

닥나무 줄기 및 뿌리 1 kg을 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 다음 물 10 ℓ에 넣고 냉각콘덴서가 달린 추출기에서 5시간 끓여서 추출한 후 300 메쉬 여과포로 여과하고, 5∼15℃에서 5일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과하였다. 이 추출물을 냉각콘덴서가 달린 증류장치에서 80℃로 감압농축하여 71.3 g(건조중량)을 얻었다.

[실시예 2] 효모를 이용한 닥나무 발효 추출물

상기 비교예 1의 닥나무 추출 분말을 1.5 ℓ의 정제수에 5 중량%가 되도록 첨가하여 탄소원, 질소원, 인삼염, 무기염류 및 미량영양성분 등을 기본 조성으로 하고, 수산화나트륨을 이용하여 적절한 pH 5.5∼6.5로 맞추었다. 상기 닥나무 추출 분말이 함유된 배양 배지에 사카로마이세스(Saccharomyces sp .)를 10⁶ cell/mL로 접종하고, pH 5.5∼6.5, 온도 25∼35℃, 통기량 0.5 VVM의 조건을 유지하면서 72시간 동안 배양하였다.

상기 발효액을 1.000×g에서 30분간 원심분리하여 고분자 침전물과 효모 균체가 제거된 최종 닥나무 발효 추출물을 얻었다.

[실시예 3] 버섯균을 이용한 닥나무 발효 추출물

상기 비교예 1의 닥나무 추출 분말에 동충하초균류(Paecilomyces japonica)를 5 중량%로 첨가하고, 18∼25℃, 습도 60∼70%에서 60일간 발효시킨 후 건조시킨 다음, 이를 분쇄하여 얻어진 분쇄물 100 g씩을 80% 메탄올 3 ℓ에 각각 넣고 냉각콘덴서가 달린 환류추출기에서 3시간 끓여 추출하였다. 그 다음 100 메쉬 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출액을 합하여 상온에서 와트만 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한 후, 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 60℃로 감압농축한 후 동결건조하여 최종 닥나무 발효 추출물을 얻었다.

[실시예 4] 유산균을 이용한 닥나무 발효 추출물

상기 비교예 1의 닥나무 추출 분말을 1.5 ℓ의 정제수에 5 중량%가 되도록 첨가하여 탄소원, 질소원, 인삼염, 무기염류, 미량영양성분 등을 기본 조성으로 하고, 수산화나트륨을 이용하여 적절한 pH 5.5∼6.5로 맞추었다. 상기 닥나무 추출 분말이 함유된 배양 배지에 락토바실러스(Lactobacillus sp.)를 10⁶ cell/mL로 접종하고, pH 6.5∼7.5, 온도 35∼38℃, 통기량 1 VVM의 조건을 유지하면서 72시간 동안 배양하였다.

상기 발효액을 1.000×g에서 30분간 원심분리하여 고분자 침전물과 유산균 균체가 제거된 최종 닥나무 발효 추출물을 얻었다.

[실시예 5] 누룩균을 이용한 닥나무 발효 추출물

상기 비교예 1의 닥나무 추출 분말에 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae)를 5 중량%로 첨가하고, 25℃에서 48시간 동안 발효시킨 후 건조시킨 다음, 이를 분쇄하여 얻어진 분쇄물 100 g씩을 80% 메탄올 3 ℓ에 각각 넣고 냉각콘덴서가 달린 환류추출기에서 3시간 끓여 추출하였다. 그 다음 100 메쉬 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출액을 합하여 상온에서 와트만 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한 후, 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 60℃로 감압농축한 후 동결건조하여 최종 닥나무 발효 추출물을 얻었다.

[실시예 6] 바실러스균을 이용한 닥나무 발효 추출물

상기 비교예 1의 닥나무 추출 분말을 1.5 ℓ의 정제수에 5 중량%가 되도록 첨가하여 탄소원, 질소원, 인삼염, 무기염류 및 미량영양성분 등을 기본 조성으로 하고, 수산화나트륨을 이용하여 적절한 pH 5.5∼6.5로 맞추었다. 상기 닥나무 추출 분말이 함유된 배양 배지에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1279를 접종하고, 45℃에서 72시간 동안 배양하였다.

상기 발효액을 1.000×g에서 30분간 원심분리하여 고분자 침전물과 바실러스균체가 제거된 최종 닥나무 발효 추출물을 얻었다.

[실시예 7] 닥나무 염장 발효 추출물 제조

닥나무 줄기 및 뿌리 1 kg을 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 후 10 중량% 농도의 소금 용액에 혼합한 다음 옹기에 담아 준비하고 4℃에서 약 30일간 발효시킨 후 여기에 80% 에탄올 수용액 5 ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 추출물을 물에 현탁한 다음, 에테르 1ℓ로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500 ㎖로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 감압농축하여 1-부탄올 추출물을 얻고, 이를 소량의 메탄올에 녹인 후, 대량의 에틸아세테이트에 추가하여, 생성된 침전물을 건조함으로써, 닥나무의 염장 발효 추출물 50.3 g을 수득하였다.

[시험예 1] 티로시나제 저해 효과

티로시나제 효소는 버섯류(Mushroom)로부터 추출된 것으로 시그마(SIGMA)사의 것을 사용하였다. 먼저 기질인 티로신을 증류수에 용해시켜 0.3 mg/ml의 용액으로 만들고 그 용액을 1.0 ml씩 시험관에 넣은 다음, 여기에 포타슘-포스페이트 완충용액(0.1 mol 농도, pH 6.8) 1.0 ml 및 증류수 0.7 ml를 첨가하였다.

실시예 1∼7 및 비교예 1의 추출물을 에탄올 용액에 적당농도로 혼합하여 준비한 각 추출물 시료액 0.2 ml를 반응액에 넣은 다음 37℃ 항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이때 대조군은 각 추출물 대신 용매만을 0.2 ml 넣은 것으로 준비하였고, 양성대조군으로는 아스코르브산을 사용하였다. 이 반응액에 2500 유닛/ml의 티로시나제 용액 0.1 ml씩을 넣고 다시 37℃ 항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음물속에 넣어서 급냉시켜 반응을 중지시키고 광전분광분석계로 파장 475 nm에서의 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 각 추출물의 티로시나제 저해 효과는 하기 수학식 1로 산출하였다.

시험물질	티로시나제 저해율(%)
대조군(무첨가)	0
아스코르브산	52
실시예 1	45
실시예 2	62
실시예 3	58
실시예 4	51
실시예 5	57
실시예 6	45
실시예 7	61
비교예 1	38

상기 표 1의 결과에서, 본 발명에 의한 닥나무 발효 추출물인 실시예 1∼7의 티로시나제 억제율이 높아 미백 효과가 우수함을 알 수 있었다.

[시험예 2] B16/F10 멜라노마 세포를 이용한 멜라닌 생성 억제능 평가

실시예 1∼7, 비교예 1 및 코지산을 각각 0.001 중량%로 함유한 시료를 시험물질로 하여 일정 농도로 B16/F10 멜라노마 세포(한국세포주은행)의 배양액에 첨가하여 3일간 배양한 후 배양액을 제거하고 PBS로 세척하고 1N NaOH로 세포를 녹여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시험물질을 첨가하지 않은 세포를 대조군으로 하여 대조군에서의 멜라닌 함량과 비교하여 각 시험물질의 멜라닌 생성 저해 정도를 측정하였다. 수학식 2에 따라 멜라닌 생성 억제율을 계산하여 그 결과를 표 2에 나타내었다.

시험물질	멜라닌생성 저해율(%)
대조군(무첨가)	0
코지산	44
실시예 1	50
실시예 2	61
실시예 3	57
실시예 4	47
실시예 5	49
실시예 6	39
실시예 7	47
비교예 1	35

상기 표 2의 결과에서, 본 발명에 의한 닥나무 발효 추출물인 실시예 1∼7의 멜라닌 생성 억제율이 높아 미백 효과가 우수함을 알 수 있었다.

[시험예 3] 유해 세균 생성 저해 실험

배지(Letheen Agar)를 샤알레에 1차 부어 굳힌 후 전배양시킨 대장균(Escherichia coli ATCC 8739), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027) 및 황색포도상 구균(Staphylococcus aureus ATCC 6538)을 전배양시키고 이 시험균을 40℃ 정도가 되도록 조절한 배지(Letheen Agar)에 최종적으로 균의 양이 10⁵마리/g이 되도록 희석하여 1차 배지 위에 부어 굳혔다. 멸균된 종이 디스크(paper disk)에 10%, 20% 및 30%의 천일염 용액을 0.02 ml 정도 주입하여 균이 도말된 배지에 얹고 상온에서 24시간 동안 용액이 충분히 확산되게 한 다음 각 32℃에서 최적시간 동안 배양한 후 샤알레에 나타나는 저해환 생성 여부를 확인하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1의 결과로부터, 소금이 유해 미생물의 성장을 저해하는 것을 확인하였다.

[제형예 1∼7 및 비교제형예 1∼2]

하기 표 3의 조성에 따라 통상적인 방법으로 제형예 1∼7 및 비교제형예 1∼2의 영양크림을 제조하였다(단위: 중량%).

배합성분	제형예 1	제형예 2	제형예 3	제형예 4	제형예 5	제형예 6	제형예 7
실시예 1	0.5	-	-	-	-	-	-
실시예 2	-	0.5	-	-	-	-	-
실시예 3	-	-	0.5	-	-	-	-
실시예 4	-	-	-	0.5	-	-	-
실시예 5	-	-	-	-	0.5	-	-
실시예 6	-	-	-	-	-	0.5	-
실시예 7	-	-	-	-	-	-	0.5
밀납	10	10	10	10	10	10	10
폴리솔베이트60	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
피이지 60 경화피마자유	2	2	2	2	2	2	2
솔비탄세스퀴올레이트	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
유동파라핀	10	10	10	10	10	10	10
스쿠알란	5	5	5	5	5	5	5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 (Estasan: Uniqema(제조사))	5	5	5	5	5	5	5
글리세린	5	5	5	5	5	5	5
부틸렌글리콜	3	3	3	3	3	3	3
프로필렌글리콜	3	3	3	3	3	3	3
트리에탄올아민	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
방부제, 색소 및 향료	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량

배합성분	비교제형예 1	비교제형예 2
비교예 1	-	0.5
밀납	10	10
폴리솔베이트60	1.5	1.5
피이지 60 경화피마자유	2	2
솔비탄세스퀴올레이트	0.5	0.5
유동파라핀	10	10
스쿠알란	5	5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 (Estasan: Uniqema(제조사))	5	5
글리세린	5	5
부틸렌글리콜	3	3
프로필렌글리콜	3	3
트리에탄올아민	0.2	0.2
방부제, 색소 및 향료	적량	적량
정제수	잔량	잔량

[시험예 4] 피부 보습 효과

본 발명에 의한 닥나무 발효 추출물이 피부 보습력 증가에 미치는 효과를 측정하기 위하여, 피부 건조증을 나타내는 40∼50대의 성인 남녀 180명을 9개 조로 나누어 각 조에 제형예 1∼7 및 비교제형예 1∼2를 매일 2회씩 4주간 안면에 도포하였다. 도포 개시 전과, 도포 후 1주, 2주, 4주 경과한 시점 및 도포를 중지한 2주 경과(총 6주 경과) 후에 항온, 항습 조건(24℃, 상대습도 40%)에서 코니오미터로 피부 수분량을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다. 코니오미터는 표피의 전기전도도 값을 측정하여 피부에 존재하는 수분량을 측정하는 피부 수분 측정기이다. 시험결과는 시험개시 직전에 측정한 코니오미터 값을 기준으로 하여 일정기간 처치한 후의 측정값의 증가분을 백분율로 표시한 것이다.

시험물질	수분 증가율(%)
시험물질	1주 경과	2주 경과	4주 경과	6주 경과
제형예 1	33	41	42	31
제형예 2	32	40	42	30
제형예 3	33	39	40	29
제형예 4	30	36	38	30
제형예 5	31	37	37	32
제형예 6	31	37	40	31
제형예 7	32	38	38	29
비교제형예 1	30	32	32	15
비교제형예 2	32	35	38	26

상기 표 5의 결과에서, 본 발명에 의한 발효과정을 거쳐 제조한 실시예 1∼7의 닥나무 발효 추출물을 포함하는 제형예 1∼7의 피부 수분 증가율이 우수함을 확인할 수 있었다. 또한, 제형예 1∼7의 영양크림의 도포를 중지한 후에도 피부 수분을 측정한 수치가 도포 후 1주와 유사하게 나타나, 실시예를 도포하지 않아도 일정 기간 동안 피부 수분이 지속적으로 유지됨을 알 수 있었다.

[시험예 5] 피부 주름 개선 효과

본 발명에 의한 닥나무 발효 추출물이 피부 주름 개선에 미치는 효과를 측정하기 위하여, 30∼50세의 안면주름이 있는 시험대상자 90명을 대상으로 피부 주름 개선 효과를 비교 평가하였다.

크림 사용 이전의 안면 양쪽부의 피부 상태를 측정해 놓은 다음 각 시험대상자들에게 제형예 1∼7 및 비교제형예 1∼2의 크림을 3개월간 사용하도록 한 후 동일 부위를 재측정하여 피부 주름의 변화량을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다. 24℃, 상대습도 40%의 항온항습실에서 눈꼬리 부위의 주름을 레플리카(replica)로 떠서 비시오메타 시스템(Visiometer system; C+K사)으로 피부 주름을 측정하였다. 피부 주름의 변화량은 하기 수학식 3에 따라 계산하였다.

상기 수학식 3에서, "Tdi"는 D90에서의 측정부위 값이며, "Tdo"는 D0에서의 측정부위 값이다.

시험물질	피부 주름 변화량(%)
제형예 1	15
제형예 2	20
제형예 3	17
제형예 4	17
제형예 5	18
제형예 6	16
제형예 7	17
비교제형예 1	2
비교제형예 2	12

상기 표 6의 결과에서, 본 발명에 의한 발효 과정을 거쳐 제조한 실시예 1∼7의 닥나무 발효 추출물을 포함하는 제형예 1∼7의 피부 주름 개선 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

[시험예 6] 피부 탄력 향상 효능 확인

피부 탄력 향상 효능 확인을 위하여 제형예 1∼7 및 비교제형예 1∼2의 크림을 30∼40대 여성 180명을 대상으로 20명을 1조로 하여 9개 조로 나누어 측정하였다. 실험 방법은 다음과 같다.

각 조에 제형예 1∼7 및 비교제형예 1∼2의 크림을 각각 나누어 주고 매일 1회씩 12주간 안면에 도포하게 한 후, 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 그 결과는 하기 표 7에 나타내었다. 표 7의 결과값은 Cutometer SEM 575의 ΔR8(R8(왼쪽)-R8(오른쪽)) 값으로 기재하였는데, R8 값은 피부 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다.

시험물질	피부 탄력 효과
제형예 1	0.42
제형예 2	0.41
제형예 3	0.37
제형예 4	0.37
제형예 5	0.40
제형예 6	0.35
제형예 7	0.36
비교제형예 1	0.12
비교제형예 2	0.32

상기 표 7의 결과를 보면, 본 발명에 의한 발효 과정을 거쳐 제조한 실시예 1∼7의 닥나무 발효 추출물을 포함하는 제형예 1∼7의 피부 탄력 개선 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

따라서, 본 발명의 닥나무 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 피부 탄력 향상에 매우 효과적임을 확인할 수 있다.

Claims

닥나무 또는 그 추출물을 자연발효, 균발효 또는 염장발효시키는 발효방법.
제 1항에 있어서,
상기 자연발효는 닥나무 또는 그 추출물을 당 성분과 혼합하여 발효시키는 것인 발효방법.
제 2항에 있어서,
상기 당 성분은 자당, 자일리톨, 올리고당, 식이섬유, 에리스리톨, 포도당 및 과당으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 발효방법.
제 1항에 있어서,
상기 균발효는 닥나무 또는 그 추출물에 발효 균주를 접종하여 10∼60℃에서 18시간 내지 100일간 발효시키는 것인 발효방법.
제 4항에 있어서,
상기 발효 균주는 효모균, 버섯균, 유산균, 누룩균 및 바실러스속균(고초균)으로 이루어진 군에서 선택된 것인 발효방법.
제 1항에 있어서, 상기 염장발효는
1) 닥나무 또는 그 추출물에 소금을 첨가하여 장기 숙성 발효시키는 단계; 및
2) 상기 염장 발효물을 물 또는 유기용매로 추출하여 발효 추출물을 수득하는 단계;
를 포함하는 것인 발효방법.
제 6항에 있어서,
상기 1) 단계에서 사용하는 소금은 고순도 염화나트륨, 천일염, 암염 및 죽염으로 이루어진 군에서 선택된 것인 발효방법.
제 6항에 있어서,
상기 1) 단계에서 소금의 사용량은 발효물 총 중량에 대하여 10∼30 중량% 인 발효방법.
제 6항에 있어서,
상기 2) 단계에서 사용하는 유기용매는 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 발효방법.
제 6항에 있어서,
상기 1) 단계의 발효 공정은 4∼40℃에서 30일 내지 1년간 발효시키는 것인 발효방법.
제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 의한 발효방법으로 제조된 닥나무 발효 추출물.
제 11항에 따른 닥나무 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물.
제 12항에 있어서,
상기 조성물은 미백, 항노화, 항주름, 보습 또는 탄력 개선용인 화장료 조성물.