KR101526266B1 - 해양심층수를 이용한 용매추출법 및 그 추출물, 및 이추출물이 포집된 나노입자를 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 수심 200m 보다 깊은 바다, 즉 심해(深海)에 있는 해양심층수를 용매로 이용하여 활성성분을 추출하는 용매추출법 및 이를 통하여 얻은 추출물, 및 상기 추출물에 나노유화 기술을 적용하여 다양한 미네랄 또는 활성성분을 함유하는 상기 추출물을 포집시킨 나노유화입자를 제조하고 이를 포함함으로써 경피흡수율을 크게 향상시킨 화장료 조성물에 관한 것이다.

해양심층수, 용매추출법, 화장료 조성물, 나노유화, 경피흡수율

Description

해양심층수를 이용한 용매추출법 및 그 추출물, 및 이 추출물이 포집된 나노입자를 함유하는 화장료 조성물{Extraction method using deep sea water and the extracts thereby, and the cosmetic composition containing nanoparticles encapsulated the extracts}

본 발명은 해양심층수를 용매로 이용하여 활성성분을 추출하는 용매추출법 및 그 추출물, 및 나노유화기술을 이용하여 다양한 미네랄 또는 활성성분을 함유하는 상기 추출물을 포집시킨 나노유화입자를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

일본의 수산심층수(水産深層水) 협의회에서는 ‘해양심층수’를 ‘광합성에 의한 유기물 생성이 일어나지 않고 분해가 탁월하며 겨울철 해수 수직 혼합(海水垂直混合)작용이 도달하는 심도(深度)의 이하에 있는 해수’로 정의를 내리고 있다. 이 정의에 따른 해양심층수의 존재 수역은 대략 200m 이하로 되어 있다.

해양심층수의 수온은 2∼6℃ 정도로 년 중 변화가 거의 없고 표층수와 20℃ 이상의 온도차이가 나기 때문에 물과 기름처럼 서로 섞이지 않는 특징을 갖고 있다. 수심 200m보다 더 깊은 곳에서는 유기물의 양이 동물을 부양하기에 심히 어려워 세균 등이 남은 유기물을 분해하는 정도이며, 깊이가 더욱 깊어질수록 유기물의 양도 더욱 줄어들어 세균이 잘 번식할 수 없으며 세균의 수도 아주 적게 된다. 태양광이 도달하지 않는 심해에서는 영양 물질을 소비하는 식물 플랑크톤이 없기 때문에 박테리아 등에 분해된 질소, 인, 규산 등의 무기영양염 영양물질이 풍부하다.

해양심층수는 인체에 필요한 미네랄이나 필수 미량원소를 많이 함유하고 있어 지구상의 모든 원소를 포함한다고 말해지기도 하는데, 그 중에서도 청정한 해양 심층수에 함유되어 있는 마그네슘：칼슘의 함량은 3：1의 비율을 유지하고 있어 사람의 혈액에 가까운 밸런스로 되어 있다. 또한 물 분자의 모양도 생체조직에서 발견되는 물 분자의 모양과 상당히 닮은 모습을 보이는데, 일반적인 광천수나 수돗물에서 발견되는 물 분자의 모습과는 많이 다르다고 알려져 있다.

또한 해양심층수는 수 천년 동안 형성된 물이기 때문에 오랜 시간에 걸쳐 성질이 안정되었고 아직 과학적으로 그 원인이 해명이 되지는 않았지만 숙성성도 있는 것으로 알려져 있다.

미네랄은 생체 내에서 삼투압과 산, 알칼리 평형 유지, 상처 회복과 체내에서의 대사 기능을 관장하고 산소 전달 및 세포 호흡에 중요한 작용을 한다.

따라서, 최근에는 해양심층수의 상기와 같은 특징을 이용하여 미네랄의 경피흡수율을 높일 수 있는 새로운 용매추출법에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.

종래의 용매추출법의 과정을 살펴보면 물; 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름 및 헥산 등의 유기용매; 또는 물을 포함한 유기용매를 넣고 상온에서 하루동안 방치하여 추출하는 공정을 2회 이상 반복하여 추출액을 얻으며, 추출액을 여과한 후 그 여과액을 진공 농축기에서 농축하여 1차 수득물을 얻는다.　

그 수득물에 물과 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트 및 클로로포름 등의 유기용매를 가하고 상온에서 2시간 이상 교반한 후 정치하여 층 분리를 시킨다. 층 분리가 된 후 물 층을 제거한 후 유기용매를 추가로 첨가한다. 위의 공정을 2회 이상 반복하여 충분히 세척하고 여과한 후 여과물을 진공오븐에서 건조하여 원하는 추출물을 얻는다.

그러나 이러한 종래의 용매추출법은 추출 수율이 낮고 유기용매의 잔존 여부 등으로 인하여 피부에 대한 안전성 문제, 화장료에 배합 시 나타나는 제형 및 안정성의 문제 등이 있어 새로운 용매추출법에 대한 필요성이 대두되었다.

따라서 안전성을 증대시키면서 미네랄 등의 유효 성분의 흡수를 배가시킬 수 있는 새로운 용매추출법을 개발할 필요가 있게 되었다.

이에 본 발명자들은 유기용매 잔존으로 인한 피부 안전성 등의 문제를 해결하기 위하여 유기용매를 대체할 수 있는 용매를 찾아내기 위하여 노력한 결과, 기존의 활성성분을 물이나 유기용매 대신에 해양심층수를 이용하여 추출할 경우, 피부 안전성이 우수하고 활성성분의 흡수를 배가시킬 수 있으며, 이를 통하여 얻은 추출물을 나노기술을 이용하여 나노유화입자 내로 포집한 다음 이를 함유함으로써 경피흡수율을 크게 향상시킨 화장료 조성물을 제공할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명은 피부 안전성이 우수하고 미네랄 또는 활성성분의 경피흡수율을 향상시킬 수 있는 용매추출법 및 그 추출물, 및 상기 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 추출용매로 해양심층수를 이용하여 활성성분을 추출하는 추출방법을 제공한다.

상기 추출방법은 1) 추출하고자 하는 원재료에 해양심층수를 넣고 얻은 추출액을 여과한 후 농축하여 1차 수득물을 얻는 단계; 및 2) 상기 1차 수득물에 해양심층수를 가하고 교반한 다음, 세척하고 여과한 후 여과물을 건조하여 최종 추출물을 얻는 단계;를 포함한다.

또한, 본 발명은 상기 추출방법으로 추출한 활성성분 및 레시틴을 포함하고 30~1000nm의 입경을 가지는 나노유화입자를 제공한다.

또한, 상기 나노유화입자를 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명이 제공하는 화장료 조성물은 해양심층수를 이용하여 추출한 추출물을 함유하고, 피부친화성 유화제 및 나노유화 기술을 사용함으로써 경피흡수율이 극대화시킬 수 있다.

본 발명은 해양심층수를 이용한 용매추출법 및 상기 용매추출법을 이용하여 얻은 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명의 해양심층수를 이용한 용매추출법은 하기의 단계들을 포함한다.

1. 1차 수득물을 얻는 단계.

추출하고자 하는 원재료에 해양심층수를 넣고 상온에서 하루 동안 방치하여 추출하는 공정을 2회 이상 반복하여 활성성분을 함유하는 추출액을 얻고, 상기 추출액을 여과한 후 그 여과액을 진공 농축기에서 농축하여 1차 수득물을 얻는다.

본 발명에서 용매로서 사용한 해양심층수는 670m 깊이의 바다에서 취수하고, 전기분해법에 의하여 탈염함으로써 준비되며, 해양심층수와 원재료는 부피비로 4~6:1의 비율로 하여 추출작업을 진행한다.

본 발명에 의한 용매추출법으로 추출할 수 있는 활성성분은 특별히 제한되지 않으며, 구체적으로는 베타-1,3-글루칸, 아스타크산틴(astaxanthin), 파파인 효소, 폴리페놀, 사포닌, 아데노신, 비타민C(ascorbic acid), 알부틴(arbutin), 니아신아미드(niacinamide) 및 아세틸글루코사민(acetyl glucosamine) 등을 들 수 있다.

상기 베타-1,3-글루칸은 특히, 치마버섯(Schizopyllum commune) 균사체를 배양하여 이로부터 순도 98% 이상의 고순도의 글루칸을 추출할 수 있으며, 이것은 피부 노화 방지, 손상된 피부치유 효과가 있다. 치마버섯 이외에도 영지버섯, 신령버섯, 표고버섯, 균핵균, 효모 및 보리 등을 배양하고 본 발명에 의한 용매추출법을 통하여 베타-1,3-글루칸을 얻을 수 있다.

또한, 상기 아스타크산틴(astaxanthin)은 헤마토코커스 등 미세 조류로부터 추출할 수 있고, 파파인 효소는 파파야의 과실 또는 나무로부터 추출할 수 있으며, 폴리페놀은 녹차, 커피, 딸기, 가지, 포도, 팥 등의 붉은 색이나 자색의 안토시아닌계 색소, 적포도주, 검은콩 또는 카카오로부터 추출할 수 있다.

또한, 상기 사포닌은 콩, 인삼 또는 마로부터 추출할 수 있고, 아데노신은 돌미나리 등의 식물체로부터 추출할 수 있으며, 비타민 C(아스코르빈산)는 복분자, 감잎, 로즈힙, 자몽 또는 피망으로부터 추출할 수 있고, 알부틴은 월귤나무로부터 추출할 수 있으며, 니아신아미드는 감자 또는 아보카도로부터 추출할 수 있고, 아세틸글루코사민은 황벽나무(Phellodendron amurense RUPR)와 황피수(Phellodendron chinense SCHNEID)의 수피를 건조한 약재인 황백으로부터 추출할 수 있다.

2. 최종 추출물을 얻는 단계.

상기 1차 수득물에 다시 해양심층수를 가하고 상온에서 2시간 이상 교반한 후 충분히 해양심층수로 세척하고 여과한 후 여과물을 진공오븐에서 건조하여　원하는 추출물을 얻는다.

종래의 방법에서는 1차 수득물을 유기용매로 층 분리하는 과정을 거쳐야 했지만, 본원발명의 해양심층수를 용매로 사용하여 추출하는 용매추출법에서는 여과하는 절차가 매우 간소화되어 추출물 수득이 용이하게 된다.

또한, 본 발명에서는 상기 해양심층수를 이용하여 추출한 활성성분을 함유하는 추출물에 나노유화기술을 적용하여 미세한 나노유화입자 내에 포집시킬 수 있다. 상기 나노유화입자는 나노에멀젼 또는 나노리포좀의 형태를 모두 포함한다.

나노유화입자는 피부와의 접촉면적을 상대적으로 증가시킴으로써 경피흡수 가능 면적도 증가시키므로, 상기 과정을 통하여 활성성분 및 해양심층수에 포함된 미네랄의 경피흡수율을 높여줄 수 있게 된다.

상기 해양심층수를 이용하여 추출한 추출물은 나노유화입자 총 중량에 대하여 0.001~50중량%의 양으로 함유된다. 추출물의 함량이 0.001중량% 미만일 경우는 제형 내에서 활성성분이 효과를 발휘하기 어려운 문제가 있고, 50중량%를 초과하는 경우에는 제형화에 어려움이 있다.

본 발명에서는 나노유화기술로서 500~1000bar의 압력에서 당업계에 잘 알려 진 통상적인 고압유화방법을 사용하여 상기 해양심층수를 이용한 추출방법으로 얻은 추출물을 함유한 나노유화입자를 제조할 수 있다. 고압유화방법은 나노유화입자의 제조에 고압유화장치로서 마이크로플루다이저(microfluidizer)를 사용하는 공지의 고압균질 혼합방법이며, 500~1000bar의 압력에서 이루어진다.

본 발명에 의한 나노유화입자는 그 입경이 30~1000nm 정도이고, 바람직하게는 50~300nm 정도가 적당하다. 이는 피부 각질층의 세포간 지질 사이의 틈이 약 50nm 내외라는 점과 유화입자의 유화막이 유연성을 가진다는 점을 감안한 것으로, 상기 범위의 입경을 가지는 본 발명의 나노유화입자가 세포간 지질 내로의 흡수, 확산이 가장 용이하였다. 즉, 나노유화 기술에 의하여 제조된 평균입경 30~1000nm의 나노유화입자는 피부와의 접촉면적의 증가, 세포간 지질로의 침투와 확산, 및 해양심층수를 이용한 용매추출법으로 추출된 추출물이라는 세가지 경로를 통해, 나노유화입자 자체 및 나노유화입자 내부의 추출물의 경피흡수율을 높여주게 된다.

한편, 본 발명에 의한 나노유화입자는 상기 추출물과 함께 유화제로서 레시틴 또는 레시틴 유도체를 함유할 수 있으며, 상기 레시틴은 유화입자 총 중량에 대하여 0.5~5중량%, 바람직하게는 2~4중량%의 양으로 함유된다. 상기 레시틴의 함량은 화장료 조성물을 제형화하는데 있어서 안정한 제형을 만들 수 있는 유효량이다. 상기 레시틴의 구성성분은 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine), 라이조포스파티딜콜린(lysophosphatidylcholine), 포스파티딜에탄올아민(phosphatidylethanolamine) 등의 불포화 콜린계, 세린계, 에탄올아민계 화합물 및 이들의 수소첨가물 형태를 포함하고 있다.

또한, 본 발명에 의한 나노유화입자는 보조유화제로서 다양한 비이온성 계면활성제를 폭 넓게 사용할 수 있고, 바람직하게는 지방알콜 혼합형 계면활성제 또는 고분자형 계면활성제를 포함한다. 구체적으로는 세테아릴 알코올(cetearyl alcohol), 글리세릴 스테아레이트(glyceryl stearate), C14-22 알코올/C12-2- 알킬 글루코사이드(C14-22 alcohols/C12-20 alkyl glucoside) 등을 사용할 수 있다. 상기 보조유화제의 함량은 사용되는 레시틴의 중량 및 구성성분에 따라 레시틴 중량 대비 0.1~5배, 바람직하게는 0.5~2배의 비율로 사용한다.

또한, 본 발명에서는 상기 해양심층수를 이용하여 추출한 추출물을 포집한 나노유화입자를 포함하는 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명에 의한 화장료 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 나노유화입자를 0.001~50중량%로 함유한다. 상기 나노유화입자의 함량이 0.001중량% 미만일 경우는 제형내에서 활성성분이 효과를 발휘하기 어려운 문제가 있고, 50중량%를 초과하는 경우에는 제형화가 어려운 문제가 있기 때문이다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없다. 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 메이크업 베이스, 파운데이션, 염모제, 샴푸, 린스, 바디 세정제, 치약, 구강청정액, 연고 또는 패치 등으로 제형화될 수도 있다.

하기 실시예 및 시험예를 들어 본 발명을 보다 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[참고예 1] 해양심층수의 제조

미국 하와이섬 코나수심 2000피트(약 670m)에서 해양심층수를 취수하고, 전기분해법을 사용하여 탈염한 것을 사용하였다. 본 발명에서는 Enzamin사제(미국, 상품명: 하와이해양심층수)를 사용하였다.

[참고예 2] 해양심층수 용매추출법에 의한 베타-1,3-글루칸 추출물의 제조

본 발명에서는 추출물로서 치마버섯으로부터 추출한 베타-1,3-글루칸 추출물을 사용하였다.

건조된 치마버섯 균사체 1kg에 해양심층수 5L를 넣고 상온에서 하루 동안 방치하여 추출하였다. 위 공정을 2회 반복하여 추출액을 얻고, 추출액을 여과한 후 그 여과액을 진공 농축기에서 농축하여 수득물 600g을 얻었다.　 수득물 600g에 해양심층수 1L를 가하고 상온에서 2시간 이상 교반한 후 충분히 세척하고 여과한 후 여과물을 진공오븐에서 치마버섯(Schizophyllum commune)이 70% 이상 함유된 베타-1,3-글루칸 추출물 약 30g을 건조하여　원하는 추출물 3g을 얻었다.

[참고예 3] 일반용매 추출법에 의한 베타-1,3-글루칸 추출물의 제조

건조된 치마버섯 균사체 1kg에 에탄올 4L를 넣고 상온에서 하루동안 방치하 여 추출하는 공정을 2회 이상 반복하여 추출액을 얻으며, 추출액을 여과한 후 그 여과액을 진공 농축기에서 농축하여 1차 수득물 400g을 얻었다.　상기 수득물에 물과 에탄올을 각각 1L씩 가하고 상온에서 2시간 이상 교반한 후 정치하여 층 분리시킨 다음 물 층을 제거한 후 에탄올 1L를 추가로 첨가하였다. 위의 공정을 2회 이상 반복하여 충분히 세척하고 여과한 다음 여과물을 진공오븐에서 건조하여 베타-1,3-글루칸 추출물을 얻었다.

하기의 실시예 1과 같이 본 발명의 해양심층수 용매추출법에 의한　베타-1,3-글루칸 추출물을 함유한 나노유화입자를 제조하고, 피부 탄력 효능 평가 비교를 위해 베타-1,3-글루칸 추출물을 함유하지 않은 비교예 1, 일반용매 추출법에 의한 베타-1,3-글루칸 추출물을 함유한 비교예 2를 제조하였다.　

[실시예 1]

수첨레시틴 4g, PEG-5 레이프씨드(rapeseed) 스테롤 4g, 폴리에틸렌글리콜 5g 및 펜틸렌글리콜 5g과 에탄올 10g에 참고예 2의 해양심층수 용매추출법으로 추출한 베타-1,3-글루칸 추출물 1g을 용해시키고 70~75℃까지 가열하여 완전히 용해한 다음, 미리 가열된 수상파트(증류수 65.95g, 글리세린 5g, EDTA 0.05g)와 혼합하고 일반 호모믹서로 3분간 3,000~6,000rpm에서 믹싱하여 선(pre)-유화를 시킨 다음, 고압유화기를 사용하여 800Bar/3cycles로 시행하였다. 상기 성분에 있어서, PEG-5 레이프씨드(rapeseed) 스테롤은 유화 안정도를 증가시키기 위하여 첨가한 보 조유화제이다.

[비교예 1]

수첨레시틴 4g, PEG-5 레이프씨드(rapeseed) 스테롤 4g, 폴리에틸렌글리콜 5g 및 펜틸렌글리콜 5g과 에탄올 10g을 70~75℃까지 가열하여 완전히 용해한 다음, 미리 가열된 수상파트(증류수 66.95g, 글리세린 5g, EDTA 0.05g)와 혼합하고 일반 호모믹서로 3분간 3,000~6,000rpm에서 믹싱하여 선(pre)-유화를 시킨 다음, 고압유화기를 사용하여 800Bar/3cycles로 시행하였다. 상기 성분에 있어서, PEG-5 레이프씨드(rapeseed) 스테롤은 유화 안정도를 증가시키기 위하여 첨가한 보조유화제이다.

[비교예 2]

수첨레시틴 4g, PEG-5 레이프씨드(rapeseed) 스테롤 4g, 폴리에틸렌글리콜 5g 및 펜틸렌글리콜 5g과 에탄올 10g에 참고예 3의 일반용매 추출법으로 추출한 베타-1,3-글루칸 추출물 1g(이 때 추출용매로서 에탄올을 사용)을 용해시키고 70~75℃까지 가열하여 완전히 용해한 다음, 미리 가열된 수상파트(증류수 65.95g, 글리세린 5g, EDTA 0.05g)와 혼합하고 일반 호모믹서로 3분간 3,000~6,000rpm에서 믹싱하여 선(pre)-유화를 시킨 다음, 고압유화기를 사용하여 800Bar/3cycles로 시행하였다. 상기 성분에 있어서, PEG-5 레이프씨드(rapeseed) 스테롤은 유화 안정도를 증가시키기 위하여 첨가한 보조유화제이다.

[시험예 1] 인간 피부세포에 대한 콜라겐 생합성 효능 측정

인간 섬유아세포를 24공 평판배양기에서 배양한 다음 하기 표 1에 기재된 농도를 갖는 각각의 조성물을 포함하는 배지로 교체하여 3일간 배양하고 10%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM 배지를 각 웰당 0.5㎖씩 첨가한 후 L[2, 3, 4, 5-3H]-프롤린 10μCi를 첨가하였다. 24시간 경과 후, 각 웰에 들어있는 배지와 세포들을 긁어 모아 5% 트리클로로아세트산(TCA; Trichloroacetic acid) 용액에 넣어 수세한 후, 각각 2개의 시험관에 분주하고 1개의 시험관에는 타입 I 콜라게나제(type I collagenase) 1유닛/㎕를 넣고 37℃에서 90분간 배양하였으며 다른 시험관은 4℃에서 보관하였다. 그 후, 모든 시험관에 50% 트리클로로아세트산을 0.05㎖씩 첨가하고 4℃에서 20분간 방치한 다음 각각 12,000rpm에서 10분간 원심분리하여 각각의 상등액과 침전물을 액체 신틸레이션 계수기(LSC; Liquid Scintillation Counter)로 씨피엠(CPM; counts per minute) 값을 얻어, 하기 수학식 1에 의거하여 대조군과 실험군에 대해 콜라겐 생합성 값(RCB; Relative Collagen Biosynthesis)을 구하였다. 그 결과는 대조군을 100으로 하여 비교치를 구한 다음 하기 표 1에 나타내었다.

경과시간에 따른 콜라겐 생합성 비율(RCB)(%)

농도(ppm)	실시예 1	비교예 1	비교예 2
20	138	102(대조군)	111
10	122	100(대조군)	107
1	105	100(대조군)	101

상기 표 1을 보면, 실시예 1 및 비교예 2의 콜라겐 생합성 비율이 비교예 1보다 더 높은 것으로부터 베타-1,3-글루칸의 콜라겐 생합성 효능을 확인할 수 있으며, 상기 콜라겐 생합성 효능은 농도 의존적으로 증가됨을 알 수 있다. 또한, 실시예 1이 비교예 2보다 콜라겐 생합성 비율이 훨씬 높은 것으로부터 해양심층수를 이용하여 추출한 경우가 유기용매를 사용한 경우보다 콜라겐 생합성 효능이 더 우수함을 알 수 있으며, 이를 통해 해양심층수를 용매로 이용한 경우가 피부에서의 흡수율이 더 좋다는 것을 알 수 있다.

[시험예 2] 동물에서의 콜라겐 생합성 효능

하기 표 2에 나타낸 바와 같이 제형예 및 비교제형예 1~3을 제조하였다.

영양화장수의 제조

조성	제형예 1	비교제형예 1	비교제형예 2	비교제형예 3
실시예 1	10.0	-	-	-
비교예 1	-	10.0	-	-
비교예 2	-	-	10.0	-
세틸에틸헥사노에이트	5.0	5.0	5.0	5.0
세토스테아릴알콜	1.0	1.0	1.0	1.0
친유형모노스테아린산 스테아레이트	0.8	0.8	0.8	0.8
스쿠알란	2.0	2.0	2.0	2.0
폴리솔베이트 60	1.5	1.5	1.5	1.5
솔비탄세스퀴올리에이트	0.5	0.5	0.5	0.5
폴리에틸렌글리콜	5.0	5.0	5.0	5.0
트리에탄올아민	0.2	0.2	0.2	0.2
카르복시비닐폴리머	0.2	0.2	0.2	0.2
방부제	미량	미량	미량	미량
색소	미량	미량	미량	미량
향료	미량	미량	미량	미량
정제수	to 100	to 100	to 100	to 100

본 발명에 따른 해양심층수로 추출한 베타-1,3-글루칸을 첨가하였을 때 피부 콜라겐 생합성 효능증진을 확인하기 위하여 무모생쥐의 등 부위에 상기 제형예 1 및 비교제형예 1~3의 조성을 갖는 영양화장수를 일주일 동안 도포한 후 생검하여 콜라겐 면역조직염색을 실시하였다. 그 결과는 실시예 또는 비교예 1~2를 함유하지 않은 비처리군인 비교제형예 3을 100으로 한 비교치로 구하여 하기 표 3에 나타내었다.

시험 물질	콜라겐 생합성(%)
제형예1	135
비교제형예 1	105
비교제형예 2	128
비교제형예 3	100

상기 표 3을 보면, 제형예 1을 도포한 군이 비교제형예 1~2를 도포한 군보다 각각 28.6%, 5.5%정도 콜라겐 생합성이 증가한 것을 확인할 수 있다. 이를 통하여, 용매로서 유기용매를 사용한 베타-1,3-글루칸 추출물의 나노유화입자를 함유한 비교제형예 2의 경우에도 콜라겐 생합성이 증가함을 알 수 있지만, 본 발명의 해양심층수 용매추출법에 의한 베타-1,3-글루칸 추출물을 사용하였을 때 경피흡수율이 더욱 높아져서 콜라겐 생합성 효과가 증가됨을 확인할 수 있다.

[시험예 3] 인체에서의 피부 탄력 개선 효과 측정

상기 표 2에서 제조한 영양화장수의 피부 탄력 개선 효과를 측정하였다. 온도 24∼26℃, 습도 75% 조건에서 30세 이상의 건강한 여성 24명을 12명씩 2개 군으로 나누고, 각 군 여성의 안면에 제형예 1과 비교제형예 1의 화장수를 매일 2회씩 12주간 도포한 후 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다.

그 결과는 Cutometer SEM 575의 R8[R8(왼쪽)-R8(오른쪽)] 값으로 구하여 하기 표 4에 나타내었다. 상기 R8값은 피부 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다.

시험 제품	피부탄력 효과
제형예 1	0.33
비교제형예 1	0.10

상기 표 4에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 해양심층수 용매추출법으로 추출한 베타-1,3-글루칸 추출물이 함유된 제형예 1의 물질을 도포한 군은 비교제형예 1을 도포한 군에 비해 피부 탄력성이 더 증가하였다.

이와 별도로, 시험을 종료한 시점에 시험 대상자들로 하여금 설문지를 작성하게 하여 기기적인 평가와 동시에 주관적인 효능 평가도 실시하였다. 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다.

도포군	응답자 수 (인)
	매우 양호	양호	보통	미흡
제형예1	4	8	1	0
비교 제형예1	1	3	3	5

상기 표 5에서 알 수 있는 바와 같이, 설문조사를 통해서도 본 발명에 따른 해양심층수 용매추출법으로 추출한 베타-1,3-글루칸 추출물을 함유한 제형예 1을 도포한 경우 피부탄력성이 개선됨을 확인할 수 있었다.

따라서, 상기 시험 결과로부터 해양심층수를 용매로 이용하여 추출한 추출물을 함유하고, 상기 추출물을 나노유화기술로 처리하면 일반용매추출법을 사용하여 추출한 추출물을 함유한 경우보다 경피흡수율이 우수함을 알 수 있다.

Claims (14)

1. 삭제
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 추출용매로서 해양심층수로 추출된 치마버섯 유래 베타 1,3-글루칸, 및 레시틴을 포함하고 30~1000nm의 입경을 가지는 나노유화입자로서,

   상기 해양심층수로 추출된 치마버섯 유래 베타 1,3-글루칸의 함량은 나노유화입자 총 중량에 대하여 0.001 내지 50 중량%이고,

   상기 레시틴의 함량은 나노유화입자 총 중량에 대하여 0.5~5중량%인, 나노유화입자.
6. 제 5항에 있어서, 상기 레시틴은 불포화 콜린계 화합물, 세린계 화합물, 에탄올아민계 화합물 및 이들의 수소첨가물 형태로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 구성성분으로 포함함을 특징으로 하는 나노유화입자.
7. 제 6항에 있어서, 상기 불포화 콜린계 화합물은 포스파티딜콜린, 라이조포스파티딜콜린 및 포스파티딜에탄올아민로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상임을 특징으로 하는 나노유화입자.
8. 제 5항에 있어서, 상기 나노유화입자는 500~1000bar의 압력으로 제조됨을 특징으로 하는 나노유화입자.
9. 제 5항에 있어서, 상기 나노유화입자는 보조유화제로서 비이온성 계면활성제를 더 포함함을 특징으로 하는 나노유화입자.
10. 제 5항에 있어서, 상기 레시틴의 함량은 나노유화입자 총 중량에 대하여 2~4중량%임을 특징으로 하는 나노유화입자.
11. 제 5항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 의한 나노유화입자를 포함하는 화장료 조성물.
12. 제 11항에 있어서, 상기 나노유화입자는 조성물 총 중량에 대하여 0.001~50중량%를 포함함을 특징으로 하는 화장료 조성물.
13. 삭제
14. 제 11항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 보디로션, 보디크림, 보디오일, 보디에센스, 메이컵 베이스, 파운데이션, 염모제, 샴푸, 린스, 보디 세정제, 치약, 구강청정액, 연고 또는 패치의 형태로 제형화됨을 특징으로 하는 화장료 조성물.