KR102254389B1

KR102254389B1 - 참당귀 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102254389B1
Application number: KR1020190032113A
Authority: KR
Inventors: 김정욱; 박규림
Original assignee: 주식회사 이앤사이언스
Priority date: 2019-03-21
Filing date: 2019-03-21
Publication date: 2021-05-21
Also published as: KR20200112130A

Abstract

본 발명은 참당귀 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 홍국균을 이용하여 제조한 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물의 혼합물은 티로시나아제 저해 활성이 현저하게 우수하므로, 이를 유효성분으로 포함하는 피부 미백을 위한 기능성 화장품의 소재로 유용하게 사용될 수 있을 것이다.

Description

참당귀 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물{Cosmetic composition for skin whitening comprising fermented Angelica gigas extract mixture as effective component}

본 발명은 참당귀 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

당귀는 산형과에 속하는 다년생 초본식물로서, 주로 한국, 일본 및 중국 등지에서 약용을 목적으로 재배되고 있다. 당귀는 그 산지에 따라 한국에서 생산되는 참당귀(Angelica gigas Nakai), 일본에서 생산되는 일당귀(Angelica acutiloba Kitagaw), 그리고 중국에서 생산되는 중국당귀(Angelica sinensis Diels)로 구분되나, 그 성분과 약리적 효과는 상이한 것으로 알려져 있다. 예로부터 당귀는 어린 순을 나물로 식용하고, 뿌리를 진통, 항암, 신장 독성경감, 간 기능 개선, 당뇨성 고혈압 치료, 혈액순환 개선 등 다양한 질환에 대한 약재로 사용하고 있다. 당귀의 함유 성분으로는 데커신(decursin), 데커시놀 안젤레이트(decusinol angelate), 노다케닌(nodakenin), 엄벨리페론(umbelliferon), β-시토스테롤(β-sitosterol), α-피넨(α-pinene), 리모넨(limonene) 등이 알려져 있다.

홍국 균주인 모나스커스 속(Monascus sp.) 곰팡이는 쌀에 번식시켜 홍국(Red yeast rice, Red koji)이라는 붉은 누룩으로 오래전부터 발효 식품으로 사용되어 왔고, 천연의 적색계 색소를 함유하고 있어 착색료로 활용되고 있다. 홍국은 모나콜린(monacolin) A, J 및 K와 이의 유도체, GABA(γ-aminobutyric acid), 산화방지물질(dimerumic acid) 색소와 미지의 성분 등을 유도할 수 있으며, 혈당 및 혈압 강하, 항혈전, 항산화 및 방부 작용 등의 역할을 하여 각종 기능성 소재로 활용이 가능하다.

한편, 발효는 미생물의 효소작용을 이용하여 식품 내 성분을 분해 또는 변화시켜 특유의 최종 산물을 만들어내는 현상을 이용한 가공기술로 식품에 널리 이용되고 있고, 발효 과정을 통해 독성물질 파괴, 소화 증진 효과 및 필수 비타민 등이 생성되어 영양학적 가치가 높아질 뿐만 아니라, 식용 가능한 유용한 균으로 탄수화물, 지질, 단백질 등을 가수분해하는 가수분해 효소 및 기타 효소를 생성한다.

천연식물 소재는 다양한 생리활성 물질과 항산화 물질을 함유하고 있지만 인체에 독성을 가지거나, 고분자 형태로 존재하여 인체에 흡수가 잘되지 않는 경우가 간혹 있어 이러한 소재를 안정화시키거나 독성을 경감시키기고 저분자화를 통해 피부의 흡수율을 증대시키기 위한 수단으로 미생물이나 효소 등을 이용한 생물학적 전환 방법을 이용하고 있으며 대표적으로 발효를 많이 활용하고 있다.

한편, 한국등록특허 제1216151호에는 '자초와 당귀의 추출 혼합물을 함유하는 피부노화 방지 및 미백용 화장료 조성물'에 대해 개시하고 있으며, 한국등록특허 제0966835호에는 '자외선에 대한 피부 보호 효과와 미백 및 항주름 효과를 가지는 감초, 승마, 하수오, 흑임자, 상황버섯, 당귀, 상백피, 백작약, 고삼, 황금으로 구성되어진 식물 혼합물의 추출물을 함유한 화장료 조성물 및 그의 제조 방법'에 대해 개시하고 있다. 하지만, 본 발명의 '참당귀 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물'에 대해서는 아직까지 개시된 바가 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 홍국균인 모나스커스 푸르푸레우스(Monascus purpureus)를 이용하여 발효된 참당귀를 물 및 에탄올로 각각 추출하여 획득한 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 1:1의 중량비로 혼합하였을 때, 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물 단독 뿐만 아니라, 추출 전의 참당귀 발효물 및 발효과정 없이 제조한 참당귀 에탄올 추출물에 비해 티로시나아제 저해활성이 현저하게 우수한 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 1) 참당귀 분말을 홍국균을 이용하여 발효한 참당귀 발효 분말에 물 및 에탄올을 각각 첨가하여 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 제조하는 단계; 및 2) 상기 제조된 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 혼합하는 단계;를 포함하여 제조된 참당귀 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 홍국균을 이용하여 제조한 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물의 혼합물은 티로시나아제 저해 활성이 현저하게 우수하므로, 이를 유효성분으로 포함하는 피부 미백을 위한 기능성 화장품의 소재로 유용하게 사용될 수 있을 것이다.

도 1은 추출 조건별로 제조한 참당귀 발효 추출물의 DPPH 라디칼 소거능을 확인한 결과이다. BHT(butylated hydroxytoluene)는 양성 대조군이며, W5-50은 물에 5%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; W10-50은 물에 10%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; W15-50은 물에 15%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; W5-100은 물에 5%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 100℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; W10-100은 물에 10%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 100℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; W15-100은 물에 15%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 100℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; E5-37은 에탄올에 5%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; E10-37은 에탄올에 10%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; E15-37은 에탄올에 15%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; E5-50은 에탄올에 5%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; E10-50은 에탄올에 10%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; 및 E15-50은 에탄올에 15%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미한다.
도 2는 추출 조건별로 제조한 참당귀 발효 추출물의 티로시나아제 저해 활성을 확인한 결과이다. Arbutin은 양성 대조군이며, W5-50은 물에 5%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; W10-50은 물에 10%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; W15-50은 물에 15%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; W5-100은 물에 5%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 100℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; W10-100은 물에 10%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 100℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; W15-100은 물에 15%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 100℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; E5-37은 에탄올에 5%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; E10-37은 에탄올에 10%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; E15-37은 에탄올에 15%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; E5-50은 에탄올에 5%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; E10-50은 에탄올에 10%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; 및 E15-50은 에탄올에 15%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미한다.
도 3은 본 발명의 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물의 혼합물의 티로시나아제 저해 활성을 확인한 결과이다. Arbutin은 양성 대조군이며, F는 참당귀 발효물을 의미하며; E는 참당귀 에탄올 추출물을 의미하며; W10-50은 물에 10%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; E10-50은 에탄올에 10%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 50℃에서 1시간 동안 추출하여 제조한 추출물을 의미하며; FA55는 상기 W10-50 및 E10-50 추출물을 1:1의 중량비로 혼합하여 제조한 혼합물을 의미한다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은

1) 참당귀 분말을 홍국균을 이용하여 발효한 참당귀 발효 분말에 물 및 에탄올을 각각 첨가하여 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 제조하는 단계; 및

2) 상기 제조된 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 혼합하는 단계;를 포함하여 제조된 참당귀 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 홍국균은 모나스커스 속(Monascus sp.)일 수 있으며, 바람직하게는 모나스커스 푸르푸레우스(Monascus purpureus)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에서, 상기 참당귀 발효 추출물의 혼합물은

1) 찹쌀, 설탕 및 참당귀(Angelica gigas Nakai) 분말이 포함된 배지에 홍국균을 접종시켜 배양하는 단계;

2) 찐 찹쌀에 상기 배양한 홍국균을 접종시켜 배양하여 홍국누룩을 제조하는 단계;

3) 상기 단계 2)에서 제조한 홍국누룩과 참당귀 분말을 혼합하여 참당귀를 발효한 후, 건조 및 분쇄하여 참당귀 발효 분말을 획득하는 단계;

4) 상기 단계 3)에서 획득한 참당귀 발효 분말에 물 및 에탄올을 각각 첨가하여 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 제조하는 단계; 및

5) 상기 단계 4)에서 제조된 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 1~10:1~10의 중량비로 혼합하는 단계;를 포함하여 제조된 것일 수 있으며,

보다 바람직하게는

1) 0.5~2%(w/v)의 찹쌀, 0.5~2%(w/v)의 설탕 및 0.05~0.2%(w/v)의 참당귀 분말이 포함된 배지에 모나스커스 푸르푸레우스(Monascus purpureus)를 접종시켜 25~35℃에서 5~10일 동안 배양하는 단계;

2) 찐 찹쌀에 상기 배양한 홍국균을 접종시켜 25~35℃에서 5~10일 동안 배양하여 홍국누룩을 제조하는 단계;

3) 상기 단계 2)에서 제조한 홍국누룩과 참당귀 분말을 0.5~6:0.5~6의 중량비로 혼합하여 25~35℃에서 5~12일 동안 발효한 후, 건조 및 분쇄하여 참당귀 발효 분말을 획득하는 단계;

4) 물 및 에탄올에 상기 단계 3)에서 획득한 참당귀 발효 분말을 각각 3~20(w/v)의 농도가 되도록 첨가한 후 30~100℃에서 0.5~24시간 동안 추출하여 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 제조하는 단계; 및

보다 더 바람직하게는,

1) 0.5~2%(w/v)의 찹쌀, 0.5~2%(w/v)의 설탕 및 0.05~0.2%(w/v)의 참당귀 분말이 포함된 배지에 모나스커스 푸르푸레우스(Monascus purpureus)를 접종시켜 25~35℃에서 5~10일 동안 배양하는 단계;

4) 물 및 에탄올에 상기 단계 3)에서 획득한 참당귀 발효 분말을 각각 5~15(w/v)의 농도가 되도록 첨가한 후 45~55℃에서 0.5~5시간 동안 추출하여 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 제조하는 단계; 및

5) 상기 단계 4)에서 제조된 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 1~5:1~5의 중량비로 혼합하는 단계;를 포함하여 제조된 것일 수 있으며,

가장 바람직하게는,

1) 1%(w/v)의 찹쌀, 1%(w/v)의 설탕 및 0.1%(w/v)의 참당귀 분말이 포함된 배지에 모나스커스 푸르푸레우스(Monascus purpureus)를 접종시켜 25~30℃에서 7일 동안 배양하는 단계;

2) 찐 찹쌀에 상기 배양한 홍국균을 접종시켜 25~30℃에서 7일 동안 배양하여 홍국누룩을 제조하는 단계;

3) 상기 단계 2)에서 제조한 홍국누룩과 참당귀 분말을 4:1의 중량비로 혼합하여 25~30℃에서 7일 동안 발효한 후, 건조 및 분쇄하여 참당귀 발효 분말을 획득하는 단계;

4) 물 및 에탄올에 상기 단계 3)에서 획득한 참당귀 발효 분말을 각각 10%(w/v)의 농도가 되도록 첨가한 후 50℃에서 1시간 동안 추출하여 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 제조하는 단계; 및

5) 상기 단계 4)에서 제조된 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 1:1의 중량비로 혼합하는 단계;를 포함하여 제조된 것일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.

또한, 본 발명의 일 구현 예에서 상기 화장료 조성물은 스킨, 스킨 소프트너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 아이 크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 로션, 클렌징 크림, 바디로션, 바디클렌져, 비누 및 파우더로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형으로 제조되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 중에서 선택된 하나 이상의 보조제를 추가로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

이하, 본 발명의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

제조예 1. 홍국균을 이용한 참당귀 발효

1) 전배양

참당귀(Angelica gigas Nakai)는 건조 후 분쇄하여 사용하였으며, 발효 균주인 홍국균(Monascus purpureus KCCM 12002)은 PDA 아가 배지에 백금이를 이용하여 포자를 1%(w/v)의 찹쌀, 1%(w/v)의 설탕(sucrose) 및 0.1%(w/v)의 참당귀 분말이 포함되어 있는 배지에 접종시켜 25~30℃에서 7일 동안 100~150 rpm의 조건하에서 배양을 진행하였다.

2) 홍국누룩

찹쌀을 물에 불린 후 갈아 체로 물기를 제거하고, 고압멸균기를 이용하여 찹쌀의 잡균을 제거하고, 찹쌀을 찐 다음, 멸균된 찹쌀을 식히고 상기 전배양한 홍국균을 접종시켜 설탕물 및 멸균수를 적절히 분주하여 잘 혼합시켜 준 후 25~30℃에서 7일 동안 배양시켰다. 배양하는 동안에 수분이 충분하게 유지되도록 하였으며, 배양이 완료된 배양물을 홍국누룩이라 한다.

3) 참당귀 발효

참당귀 분말에 상기 홍국누룩을 1:4의 중량비로 접종하여 설탕물 및 멸균수를 적절히 분주하여 혼합시킨 후 25~30℃에서 7~10일 동안 발효시키고, 발효가 완료되면 40~50℃의 조건에서 열풍건조 후 분쇄하여 하기 실시예에 사용하였다.

제조예 2. 홍국균을 이용한 참당귀 발효 추출물

상기 제조예 1에서 획득한 홍국균을 이용한 참당귀 발효 분말을 대상으로 추출하기 위하여, 물 또는 에탄올에 5, 10 및 15%(w/v)의 농도가 되도록 참당귀 발효 분말을 첨가하여 하기 표 1에 개시한 조건으로 각각의 추출물을 제조하였다.

추출 조건

시료명	참당귀 발효 분말(%, w/v)	추출용매	추출온도(℃)	추출시간(h)
W5-50	5	물	50	1
W10-50	10	물	50	1
W15-50	15	물	50	1
W5-100	5	물	100	1
W10-100	10	물	100	1
W15-100	15	물	100	1
E5-37	5	95% 에탄올	37	24
E10-37	10	95% 에탄올	37	24
E15-37	15	95% 에탄올	37	24
E5-50	5	95% 에탄올	50	1
E10-50	10	95% 에탄올	50	1
E15-50	15	95% 에탄올	50	1

실시예 1. 홍국균을 이용한 참당귀 발효 추출물의 항산화 활성

사람의 피부는 항산화 방어막으로 구축되어 있지만 지속적인 자외선 노출로 활성산소가 과잉 생성된다. 활성산소종 중에서 초과산화 이온(O₂ ^-) 및 수산화 라디칼(OH^-)은 피부 광 손상에 있어서 중요한 역할로 알려져 있다. 이들은 피부 항산화제 파괴, 단백질의 산화, DNA 산화, 결합조직 성분인 콜라겐, 히아루론산 등의 사슬 절단 및 비정상적인 교차결합에 의한 주름생성, 멜라닌 생성 과정 등에 참여하여 피부 노화를 가속화시킨다.

항산화 활성 측정방법 중 DPPH(α,α-diphenyl-ß-picrylhydrazyl) 라디칼을 이용한 소거활성 측정은 DPPH를 소거시키는 항산화 물질의 활성을 측정하는 것으로 DPPH는 짙은 자색을 띄는 비교적 안정한 자유 라디칼로서, 방향족 아민류 등에 의해 환원되어 색이 탈색되는 것을 이용한 방법이다. DPPH라는 산화제로 산화를 개시시킨 후 실험하고자 하는 시료에 의해서 자유 라디칼에 대한 소거능을 측정하는 실험이다. 생체 내에서 생성되는 활성산소(Reactive oxygen species, ROS)로 만들게 되는데 이 활성산소는 자유 라디칼을 지닌 산소를 의미한다. 활성산소가 문제가 되는 이유는 세포의 지질이나 DNA 및 RNA를 파괴하고 여러 가지 효소가 기능하는 것을 방해하여 각종 질병이나 노화를 촉진하게 된다. 이러한 활성산소를 제거할 수 있는 물질을 항산화 물질이라고 하며, 일반적으로 식물체의 폴리페놀류 등의 성분이 항산화 활성을 가진다.

본 실시예 1에서는 Blois 방법(Nature, 1958, 26, 1199-1204.)에 따라 상기 제조예 2에서 획득한 홍국균을 이용한 참당귀 발효 추출물을 대상으로 항산화 활성을 측정하였다. 대조구는 시료 대신 용매를 가하여 상기 동일한 방법으로 측정하였고, 양성대조구로 합성 항산화제인 BHT(Butylated hydroxytoluene)를 이용하여 참당귀 발효 추출물과의 항산화능을 비교하였다. 또한, 시료 자체의 색에 대한 흡광도 값을 보정해주기 위해 DPPH 시약 대신 물을 사용하였다. 그 결과, 도 1에 개시한 바와 같이 참당귀 발효 에탄올 추출물의 경우(E5-37, E10-37, E15-37, E5-50, E10-50 및 E15-50)에는 참당귀 발효 분말의 첨가 농도가 증가함에 따라 항산화 활성이 증가한 반면, 참당귀 발효 물 추출물의 경우에는 농도에 상관없이 대등한 항산화 활성(W5-50, W10-50 및 W15-50)을 나타내거나 농도의존적으로 오히려 감소하는 경향(W5-100, W10-100 및 W15-100)을 나타내었다.

실시예 2. 홍국균을 이용한 참당귀 발효 추출물의 티로시나아제 저해 활성

피부가 산소와 접촉하고 태양광에 노출되면서 수분 손실과 피부노화가 촉진되고, 자외선이 강해지면서 멜라닌 색소가 침착되어 기미와 주근깨 같은 피부 질환을 증가시키고 있다. 멜라닌은 자연계에 널리 분포하는 페놀류의 생체고분자 물질로 물과 대부분의 유기 용매에는 녹지 않으며, 화학적으로는 극히 비활성을 나타낸다. 검은 색소와 단백질의 복합체이며 사람의 머리카락과 피부색을 이루는 색소 중 하나로 그 양이 많으면 피부색이 황갈색에서 흑갈색을 띠고, 적을수록 색이 엷어진다. 멜라닌 전구물질들에 의한 독성으로 세포사멸을 촉진하거나 피부 노화 촉진, 피부암 유발 등에 관여하는 것으로 알려져 있다. 멜라닌은 티로시나아제(tyrosinase)라는 효소 작용에 의해 생합성 되고 이 효소의 작용으로 L-티로신을 기질로 하여 표피 기저층에 존재하는 멜라노사이트(melanocyte)라는 색소 세포 내의 소기관인 멜라노좀(melanosome)에서 생합성되며 멜라닌의 생합성은 TRP-1(tyrosinase related protein-1), TRP-2(tyrosinase related protein-2) 등의 멜라닌 생성 효소들에 의해 이루어진다.

본 발명의 티로시나아제 저해 활성은 0.1ml의 시료에 0.1M 인산완충용액(pH 6.5)을 혼합한 후, 1.5mM L-티로신 0.1ml 및 250mM 티로시나아제 0.1ml을 첨가하고 37℃의 배양기에서 7~10분간 반응시켜 490nm에서 흡광도를 측정하였다. 티로시나아제 저해 활성은 하기식으로 계산하여 백분율로 나타내었다.

티로시나아제 저해활성(%)=(1-시료첨가구의 흡광도/무첨가구의 흡광도)×100

그 결과, 도 2에 개시한 바와 같이 참당귀 발효 물 추출물의 경우에 참당귀 발효 분말의 첨가 농도가 증가함에 따라 티로시나아제 저해 활성이 증가되었고, 전반적으로 참당귀 발효 에탄올 추출물(E5-37, E10-37, E15-37, E5-50 및 E15-50)이 참당귀 발효 물 추출물에 비해 높은 미백 효능을 나타내었으며 특히 E10-37 및 E10-50의 에탄올 추출물에서 가장 높은 티로시나아제 저해 활성을 나타내었다.

실시예 3. 홍국균을 이용하여 제조한 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물의 혼합물의 티로시나아제 저해 활성

상기 실시예 1 및 2의 결과와 경제성 및 생산 효율성을 중점으로 발효 추출물을 선별하였으며, 최종적으로 선별된 W10-50(10% 참당귀 발효 분말, 50℃에서 물 추출) 및 E10-50(10% 참당귀 발효 분말, 50℃에서 에탄올 추출)의 발효 추출물을 1:1의 비율로 혼합하여 혼합물(FA55)을 제조한 후, 티로시나아제 저해 활성을 비교하였다. 비교대조군으로 추출과정 없이 제조한 참당귀 발효물(F)과 발효과정 없이 제조한 참당귀 에탄올 추출물(E; 50℃에서 에탄올 추출)을 사용하였다.

그 결과, 도 3에 개시한 바와 같이, W10-50 및 E10-50의 각 발효 추출물에서는 약 65% 및 75%의 티로시나아제 저해 활성을 나타내어, 추출 전 참당귀 발효물(F, 36%) 뿐만 아니라, 발효과정 없이 추출한 참당귀 에탄올 추출물(E, 23%) 보다 W10-50 및 E10-50 참당귀 발효 추출물의 미백 활성이 우수한 것을 확인하였으며, 특히 참당귀 발효 물 추출물(W10-50)과 에탄올 추출물(E10-50)을 1:1의 비율로 혼합하였을 때, 티로시나아제 저해 활성(98%)이 현저하게 증가되는 것을 확인할 수 있었다.

Claims

1) 0.5~2%(w/v)의 찹쌀, 0.5~2%(w/v)의 설탕 및 0.05~0.2%(w/v)의 참당귀 분말이 포함된 배지에 모나스커스 푸르푸레우스(Monascus purpureus)를 접종시켜 25~35℃에서 5~10일 동안 배양하는 단계;
2) 찐 찹쌀에 상기 배양한 모나스커스 푸르푸레우스를 접종시켜 25~35℃에서 5~10일 동안 배양하여 홍국누룩을 제조하는 단계;
3) 상기 단계 2)에서 제조한 홍국누룩과 참당귀 분말을 0.5~6:0.5~6의 중량비로 혼합하여 25~35℃에서 5~12일 동안 발효한 후, 건조 및 분쇄하여 참당귀 발효 분말을 획득하는 단계;
4) 물 및 에탄올에 상기 단계 3)에서 획득한 참당귀 발효 분말을 각각 3~20(w/v)의 농도가 되도록 첨가한 후 30~100℃에서 0.5~24시간 동안 추출하여 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 제조하는 단계; 및
5) 상기 단계 4)에서 제조된 참당귀 발효 물 추출물 및 에탄올 추출물을 1:1의 중량비로 혼합하는 단계;를 포함하여 제조된 참당귀 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.

삭제

제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨, 스킨 소프트너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 아이 크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 로션, 클렌징 크림, 바디로션, 바디클렌져, 비누 및 파우더로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.