KR102077708B1 - 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 조성물 - Google Patents

노루궁뎅이버섯 균사체를 이용한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 본 발명의 특정 혼합 비율로 제조한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물이 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효 단독 추출물보다 피부 미백 및 주름 개선 효과가 더 우수하므로, 피부 미백 또는 주름 개선을 위한 화장료, 건강기능식품 등에 더욱 유용하게 이용될 수 있다.

Description

노루궁뎅이버섯 균사체를 이용한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 조성물{Composition for skin-whitening and anti-winkle comprising extract of Poria cocos, Coix lachrymajobi and Stachys sieboldii fermented using Hericium erinaceum mycelium as effective component}
본 발명은 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 조성물에 관한 것이다.
피부는 신체조직 중 직접적으로 외부환경에 노출되어 있으며, 인체의 내부와 외부환경 사이의 방어벽 역할을 하여 화학물질이나 자외선을 포함한 외부 환경오염 물질 및 미생물의 침입을 방어함으로써 주위환경으로부터 생체를 보호한다. 또한 피부는 멜라닌, 헤모글로빈(hemoglobin), 카로틴(carotene) 등에 의해 색이 결정되는데 이 중에서도 멜라닌이 가장 중요한 역할을 한다. 멜라닌은 사람의 피부색을 결정하는 것 이외에도 자외선 흡수 작용, 자유 라디칼 소거제(free radical scavenger) 등과 같은 피부 보호 작용을 수행한다. 그러나 자외선의 과다 노출, 대기 오염, 스트레스 등과 같은 외부의 환경 변화에 의하여 멜라닌이 과다하게 생성되면 피부 내에서 색소 침착 현상을 일으켜 피부의 흑화(melanism) 또는 기미, 주근깨 등의 원인이 된다. 피부의 흑화는 내적 및 외적 요인에 대한 피부 세포의 반응에 의하여 발생하는 것으로, 대표적인 요인은 자외선 노출로 인한 것이다. 즉, 피부가 자외선에 노출되면 티로시나아제(tyrosinase)가 활성화되는데, 상기 티로시나아제가 피부조직에 존재하는 티로신에 작용하여 도파(DOPA) 및 도파퀴논(dopaquinone)을 생성시키는 산화 과정에 의하여, 피부 색소 세포인 멜라노사이트(melanocyte) 내의 멜라노좀(melanosome)에서 멜라닌이라는 중합체가 합성되며, 이러한 멜라닌이 피부의 각질 형성 세포인 케라티노사이트(keratinocyte)로 전달되고 각질화 과정에 의해 피부 표면에 도달하여 자외선으로부터 피부를 보호하게 된다. 따라서, 멜라닌은 우리 인체에 없어서는 안되는 자외선 방어제이며, 또한 단백질, 지질, 핵산 등과 같은 생체성분을 변형시키는 다양한 라디칼을 제거하는 효과적인 자유 라디칼 소거제의 역할을 담당하고 있다. 그러나 멜라닌이 국소적으로 과도하게 합성되거나, 피부 병변 및 노화에 따른 피부의 생리 기능이 떨어지게 되면, 멜라닌이 피부 표면에 침착되어 기미, 주근깨 및 다양한 색소 침착을 유발하게 된다. 상기한 바와 같이 피부 흑화의 원인과 기작이 밝혀지면서, 미백 화장료의 제조에 있어 피부 흑화 과정에 관여하는 효소인 티로시나아제의 활성 저해 효과를 갖는 물질들을 화장료에 배합하거나, 또는 멜라닌 생성 과정 중에서 일부 반응을 저해함으로써 멜라닌의 생성을 감소시키는 방법이 일반적으로 사용되고 있다. 이러한 목적을 위해 사용되고 있는 대표적인 물질로는 아스코르브산(ascorbic acid), 코지산(kojic acid), 하이드로퀴논(hydroquinone) 등의 화학 물질과 상백피 추출물, 감초 추출물 등의 식물 추출물이 있다. 하지만, 아스코르브산은 티로시나아제 활성 저해 효과가 부족할 뿐만 아니라 분자 자체의 안정성이 낮아서 멜라닌 생성 억제제로 적합하지 않으며, 코지산은 티로시나아제의 저해활성이 우수하지만, 화장료에 배합할 때 변색되고 경시 변화에 따라서 역가가 저하되는 등의 안정성에 문제가 있을 뿐만 아니라, 피부 자극이 커서 사용상 한계가 있고, 하이드로퀴논은 피부 자극 및 안전성 문제로 인하여 화장료에서의 사용이 제한되고 있다. 따라서, 신규하고 효과적인 미백 성분의 개발에 대한 관심이 집중되고 있다.
한편, 백복령(Poria cocos)은 베어 낸 지 여러 해 지난 소나무뿌리에 기생하여 혹처럼 자라는 것으로 속이 흰 것은 백복령이라 하고 분홍빛인 것은 적복령이라고 한다. 약효가 있는 약용작물로서 식품보다는 약재로의 쓰임새가 많았으나 동의보감에 의하면 곡식을 먹지 않아도 배가 고프지 않게 한다고 되어 있는 것을 보면 구황식품으로 이용하기도 하였을 것이다. 동의보감에 의하면 백복령의 맛은 달고 심심하며 성질이 평(平)하여 보(補)하는 작용이 있다고 한다. 그리하여 옛부터 강장제로 많이 사용되었으며 병 후 회복에도 이용하였다. 백복령의 주성분은 베타-파키만(β-Pachyman)이 함유되어 있고, 건조 중량의 약 93%를 차지한다. 트리테르페노이드(Triterpenoid) 화합물이 파킴산(Pachymic acid), 투물로스산(Tumulosic acid), 3-베타-히드록실라노스타-7,9(11),24-트리엔-21-오익산(3-β-Hydroxylanosta-7,9(11),24-trien-21-oic acid)을 함유한다. 이외에도 키틴(Chitin), 단백질, 지방, 스테롤(Sterol), 레시틴(Lecithin), 글루코오스(Glucose), 아데닌(Adenin), 히스티딘(Histidine), 콜린(Choline), 베타-파키만(β-Pachyman) 분해효소, 리파아제(Lipase), 프로테아제(Protease) 등이 함유되어 있다. 암 억제, 위장, 강장, 췌장, 신장에 탁월한 효능을 보이고 있다. 옛날부터 강장제로 사용되었다. 폐경(肺經)·비경(脾經)·심경(心經)·신경(腎經)·방광경(膀胱經)에 작용하여 비장을 보하고 가래를 삭이며 정신을 안정시킨다. 약리실험 결과에 의하면 이뇨작용과 혈당량을 낮추는 작용, 진정작용 등을 하는 것으로 밝혀졌으며 면역 부활작용을 하는 것으로도 알려져 있다.
율무(Coix lachrymajobi)는 차로도 끓여 마실 수 있는 곡식의 한 종류로 누구나 쉽게 접할 수 있으며 한의학에서는 의이인(薏苡仁)이라는 이름으로 사용하고 있는 약재의 한 종류이다. 한방에서는 피부에 좋은 식품으로 제일 먼저 율무를 꼽는다. 민간에서는 산후에 갑자기 주근깨가 늘어나면 날마다 율무죽을 쑤어 먹이기도 했다. ‘본초강목’에 따르면, 율무는‘비장을 튼튼하게 해준다’고 되어있다. 율무에 들어 있는 코이키세놀라이드(coixenolide) 성분은 항암 작용을 하며, 또 뿌리에 함유된 코익솔(coixol)은 진통, 진정, 해열 효과가 인정된다는 연구결과도 있다. 이는 코익솔의 항염 작용, 활성산소를 제거하는 항산화 작용, 항알레르기 작용및 항히스타민 작용과 관련이 있는 것으로 알려져 있다.
초석잠(Stachys sieboldii miq.)은 꿀풀과에 속하는 다년생 초본식물로 높이는 30~60cm로 자란다. 꽃은 자홍색이고 5월 중순 무렵부터 8월까지 가지와 줄기의 윗부분에 돌아가며 층층으로 핀다. 뿌리 부위는 구근처럼 보이는 괴경 부분으로 길이가 1~3cm로 고동모양이다. 뿌리 부위는 말갛고 우유빛을 띤다. 다른 이름으로 감로자, 적로, 감로아, 지잠, 토충초, 지고우초, 지유, 토용, 보탑채, 와아채 등으로 불린다. 효능으로는 해열, 해수, 폐렴, 태독, 활혈, 하혈, 종기, 염증, 진통, 경풍, 맹장염, 인후통, 미열, 붓기 등에 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 특히 최근에는 페닐에타노이드 배당체가 근무력증, 뇌경색, 노인성 치매 예방 및 기억력 증진에 효과가 있다고 알려져 있다.
노루궁뎅이 버섯(Hericium erinaceum)은 산호버섯과에 속하는 버섯으로 가을철 활엽수의 고목이나 생목에서 발생하며, 중국에서는 원숭이 머리버섯 및 곰머리 버섯으로 알려져 있으며, 일본에서는 야마부시타케(Yamabushitake), 우리 나라에서는 노루궁뎅이의 털모양과 비슷하다고 하여 노루궁뎅이 버섯으로 알려져 있다. 이러한 노루궁뎅이 버섯에는 탄수화물, 단백질, 아미노산, 효소, 무기염류 및 비타민 등이 풍부하고, 항암 및 면역기능을 증대시키는 효능이 있다고 알려져 있으며, 최근에는 항암효과를 가진 성분을 비롯하여 다양한 생리활성물질을 함유하고 있는 것으로 보고된 바 있다.
한편, 한국공개특허 제2016-0024525호는 초석잠 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 개시하고 있으며, 한국공개특허 제2004-0090114호는 노루궁뎅이버섯 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물을 개시하고 있다. 하지만, 본 발명의 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 조성물에 대해 아직까지 개시된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명에서는 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 제조하였으며, 이를 대상으로 멜라닌생성 저해활성, 엘라스타아제 활성 저해 및 콜라게나아제 활성 저해 효과를 확인한 결과, 특정 혼합 비율로 제조한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물이 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효 단독 추출물보다 피부 미백 및 주름 개선 효과가 현저하다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 피부 외용제를 제공한다.
또한, 본 발명은 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 특정 혼합 비율로 제조한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물이 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효 단독 추출물보다 피부 미백 및 주름 개선 효과가 더 우수하므로, 피부 미백 또는 주름 개선을 위한 화장료, 건강기능식품 등에 더욱 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 구현 예에 따른 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 제조한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 B16F10 세포에 처리하였을 때, 세포생존율을 통해 세포독성을 확인한 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 구현 예에 따른 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 제조한 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효 단독 추출물과 이를 다양한 혼합 비율에 따라 제조한 혼합물의 멜라닌생성 저해활성을 비교한 결과이다.
도 3은 본 발명의 일 구현 예에 따른 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 제조한 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효 단독 추출물과 이를 다양한 혼합 비율에 따라 제조한 혼합물의 엘라스타아제 활성 저해효과를 비교한 결과이다.
도 4는 본 발명의 일 구현 예에 따른 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 제조한 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효 단독 추출물과 이를 다양한 혼합 비율에 따라 제조한 혼합물의 콜라게나아제 활성 저해효과를 비교한 결과이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 화장료 조성물에서, 상기 발효는 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 발효시킨 것 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 혼합물은 총 100 중량부에 대하여 15~25 중량부의 백복령 발효 추출물, 25~35 중량부의 율무 발효 추출물 및 45~55 중량부의 초석잠 발효 추출물을 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 20 중량부의 백복령 발효 추출물, 30 중량부의 율무 발효 추출물 및 50 중량부의 초석잠 발효 추출물을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물은 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효물을 여과하고 남은 잔여물을 동결건조한 후, 열수 추출하여 제조된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물은
1) 배지 100 중량부에 대하여 7~12 중량부의 백복령, 17~22 중량부의 율무 및 12~17 중량부의 초석잠을 각각 첨가하여 110~130℃에서 10~20분 동안 멸균하는 단계;
2) 상기 단계 1)에서 멸균한 각 재료가 첨가된 배지에 노루궁뎅이버섯 균사체 배양액을 각각 접종하여 24~26℃에서 7~12일 동안 발효하는 단계;
3) 상기 단계 2)에서 획득한 각각의 발효물을 여과하고, 남은 잔여물을 동결건조하는 단계;
4) 상기 단계 3)의 동결건조한 각각의 발효물을 75~85℃에서 열수 추출하여 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물을 획득하는 단계; 및
5) 상기 단계 4)에서 획득한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물을, 총 100 중량부에 대하여 15~25 중량부의 백복령 발효 추출물, 25~35 중량부의 율무 발효 추출물 및 45~55 중량부의 초석잠 발효 추출물을 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계;를 포함하여 제조하는 것일 수 있으며,
바람직하게는
1) 배지 100 중량부에 대하여 10 중량부의 백복령, 20 중량부의 율무 및 15 중량부의 초석잠을 각각 첨가하여 121℃에서 15분 동안 멸균하는 단계;
2) 상기 단계 1)에서 멸균한 각 재료가 첨가된 배지에 노루궁뎅이버섯 균사체 배양액을 각각 접종하여 25℃에서 10일 동안 발효하는 단계;
3) 상기 단계 2)에서 획득한 각각의 발효물을 여과하고, 남은 잔여물을 동결건조하는 단계;
4) 상기 단계 3)의 동결건조한 각각의 발효물을 80℃에서 열수 추출하여 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물을 획득하는 단계; 및
5) 상기 단계 4)에서 획득한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물을, 총 100 중량부에 대하여 20 중량부의 백복령 발효 추출물, 30 중량부의 율무 발효 추출물 및 50 중량부의 초석잠 발효 추출물을 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계;를 포함하여 제조하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 단계 1)에서 배지는 버섯 균사 배양용 배지이며, PDB(potato dextrose broth) 배지를 일반적으로 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물은 피부외용 연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 유효성분 이외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 피부 미백 활성 성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 피부 미백 활성 성분으로는 코지산 및 이의 유도체, 알부틴, 아스코르브산 및 이의 유도체, 하이드로퀴논 및 이의 유도체, 레조르시놀, 사이클로알카논, 메틸렌디옥시페닐 알칸올, 2,7-디니트로인다졸 또는 덩굴귤 추출물, 쌀 추출물, 감초 추출물과 같은 식물 추출물 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 피부 외용제를 제공한다.
본 발명의 피부 외용제는 당업계의 공지기술을 참조하여 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 유연 화장수, 영양 화장수, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 에센스, 에멀전, 팩, 세안제, 겔, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 마스크팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
상기 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 피부 외용제로 이용하기 위하여 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
또한, 본 발명은 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예 1. 백복령 , 율무 및 초석잠 발효 단독 추출물과 이를 혼합한 혼합물의 제조
백복령, 율무 및 초석잠 발효물 제조에 사용할 노루궁뎅이버섯 균사체는 PDA 배지에 배양한 노루궁뎅이버섯 균사체가 5-6 cm로 자라면 가장자리의 균사체를 코르크 보러(Cork borer)를 이용하여 떼어낸 다음, 균사편 5개를 접종원으로 하여 PDB 배지 100㎖에 접종한 후 진탕배양기(25℃, 150 rpm)에서 7일간 배양하였다.
PDB 배지 1ℓ에 백복령 100g, 율무 200g 및 초석잠 150g을 각각 첨가한 후 오토클래이브를 이용하여 121℃에서 15분 동안 멸균하였다. 멸균한 배지에 상기 방법으로 배양한 노루궁뎅이버섯 균사체를 접종하여 진탕배양기(25℃ 및 150 rpm)에서 10일간 배양한 후 여과지를 사용하여 여과하고 남은 잔사를 동결건조기를 이용하여 동결건조하였다. 동결건조한 발효물을 에탄올, 열수 및 정제수로 각각 추출한 후 여과하여, 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용한 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효 추출물을 각각 제조하였다.
또한, 상기 제조된 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효 단독 추출물을 하기 표 1에 개시한 바와 같이 5종의 혼합 비율로 혼합하여 혼합물들을 제조하였다.
본 발명의 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 백복령, 율무 및 초석잠 발효 추출물의 혼합 비율
시료 혼합 비율(중량%)
노루궁뎅이 균사
발효 백복령		 노루궁뎅이 균사
발효 율무		 노루궁뎅이 균사
발효 초석잠
A 50 30 20
B 40 30 30
C 30 20 50
D 20 30 50
E 10 40 50
실시예 1. 백복령 , 율무 및 초석잠 발효 추출물의 제조 및 이의 최적조건 탐색
백복령, 율무 및 초석잠의 첨가량에 따른 표고, 눈꽃동충하초, 치마버섯, 노루궁뎅이 및 상황버섯의 균사 생장을 측정하기 위하여, 각각의 버섯 균사체를 15일간 배양하여 균사 밀도를 측정하였다. 그 결과, 하기 표 2에 개시한 바와 같이 표고, 치마버섯 및 상황 균사의 경우, 율무, 초석잠 및 백복령 순으로 균사 밀도가 높게 나타났으며, 눈꽃동충하초 균사는 백복령을 첨가한 배지에서는 균사 생장이 이루어지지 않았다. 노루궁뎅이 균사는 율무, 백복령 및 초석잠 순으로 나타났으며, 5종의 버섯 균사 중 가장 높은 균사 밀도를 나타내었다. 백복령과 율무는 전반적으로 첨가량이 증가할수록 균사 밀도가 높게 나타났으나, 초석잠은 첨가량이 증가할수록 균사 밀도가 전반적으로 낮아지는 것을 확인하였다(표 2).
또한, 상기 균사밀도가 가장 우수하였던 노루궁뎅이버섯 균주의 균주배양 최적 온도를 조사하기 위하여, 배양온도를 달리하여 25일간 배양한 균사 밀도를 측정하였다. 그 결과, 22∼28℃의 조건에서 균사 밀도가 높게 나타났으며, 그 중 24~26℃의 조건에서 각각 287.8mg 및 275.4mg으로 나타나 노루궁뎅이버섯의 최적 균사배양 온도는 24∼26℃가 적합한 것을 확인하였다(표 3).
또한, 백복령, 율무 및 초석잠의 첨가량에 따른 노루궁뎅이버섯의 균사 생장을 확인하기 위하여, 균사 밀도를 측정하였다. 그 결과, 하기 표 4에 개시한 바와 같이 율무 첨가가 노루궁뎅이버섯의 균사 생장에 가장 우수한 효과를 나타내는 것을 확인하였다. 율무 200g을 첨가하였을 때 노루궁뎅이버섯 균사 밀도가 304.1g으로 가장 높게 나타났으며, 약용식물 종류별 첨가 최적 함량으로는 백복령 100g, 초석잠 150g으로 균사밀도는 각각 224.4 mg, 246.8mg으로 확인되었다.
백복령, 율무 및 초석잠 발효 추출물의 첨가량에 따른 버섯 종류별 균사 밀도 측정결과
약용식물 첨가량
(g/L)		 균사밀도(mg/15일)
표고 눈꽃
동충하초		 치마버섯 노루궁뎅이 상황
백복령 50 41.2±4.1 - 141.2±7.4 194.3±6.1 44.2±5.1
100 64.4±5.6 - 131.1±3.2 224.4±7.7 57.1±6.2
율무 50 150.2±5.7 31.7±2.1 176.4±6.7 214.8±4.7 89.4±3.9
100 164.4±6.1 51.4±3.6 193.2±4.7 239.5±9.2 110.4±3.7
초석잠 50 145.2±2.4 12.1±1.4 167.2±2.6 192.1±3.4 72.3±2.6
100 131.3±4.4 17.4±2.6 152.1±6.1 192.1±3.4 64.1±1.6
발효온도에 따른 노루궁뎅이버섯의 균사밀도 측정결과
온도(℃) 균사밀도(mg/25일)
16 184.5±9.2
18 194.8±8.7
20 221.5±11.2
22 251.6±7.4
24 287.8±8.4
26 275.4±5.7
28 251.7±6.1
30 226.1±9.3
32 197.6±8.2
백복령, 율무 및 초석잠 발효 추출물의 첨가량에 따른 노루궁뎅이버섯의 균사 밀도 측정결과
약용식물 함량
(g/L)		 균사밀도(mg/25일)
백복령 율무 초석잠
30 181.7±7.2 191.2±5.4 175.4±7.2
50 194.3±6.1 214.8±4.7 192.1±3.4
100 224.4±7.7 239.5±9.2 225.7±8.7
150 213.1±4.7 278.8±4.2 246.8±9.7
200 180.8±4.5 304.1±8.6 205.1±11.7
300 154.3±3.6 286.7±6.9 164.5±12.5
실시예 2. 백복령 , 율무 및 초석잠 발효 추출물의 용매별 추출 수율 확인
상기 실시예 1을 통해 노루궁뎅이버섯 균사의 발효 최적 약용식물 첨가량은 백복령 100g/L, 율무 200g/L 및 초석잠 150g/L으로 확인되었다. 상기 발효 추출물들을 여과한 후 동결건조하여 최적 추출조건 탐색을 위하여 에탄올, 열수 및 정제수로 추출한 후 여과하여 고형분 함량을 계산하여 수율을 측정하였다.
그 결과, 하기 표 5에 개시한 바와 같이 노루궁뎅이버섯 균사를 이용하여 발효시킨 백복령, 율무 및 초석잠 모두 80℃ 조건의 열수 추출에서 6.7%, 7.4% 및 7.1%로 가장 높은 것을 확인하였다.
노루궁뎅이버섯 균사 발효물의 용매 추출에 따른 수율
용매 수율(%)
노루궁뎅이버섯균사 발효 백복령 노루궁뎅이버섯균사 발효 율무 노루궁뎅이버섯균사
발효 초석잠
에탄올 1.4±0.2 2.4±0.2 1.9±0.2
열수(60℃) 4.2±0.7 5.7±0.3 4.9±0.3
열수(80℃) 6.7±0.2 7.4±0.3 7.1±0.2
열수(100℃) 5.2±0.4 6.2±0.2 6.2±0.3
정제수 2.6±0.5 3.2±0.2 3.1±0.4
실시예 3. 백복령 , 율무 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물 제조 및 이의 세포 생존율(cell viability) 확인
B16F10 마우스 멜라노마(mouse melanoma) 세포를 배양하여 96-웰 플레이트에 각 웰당 1×105 세포수/㎖를 분주하고 배양하여 24시간 동안 안정화시킨 후, 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 제조한 백복령, 율무 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 각각 10, 30, 50, 10 및 200㎍/㎖의 농도로 처리하여 24시간 반응 후 MTT(3-(4,5-디메틸디아졸-2-일)-2,5-데펜테르라졸리움 프로미드) 시약을 10㎕ 첨가하여 4시간 동안 포르마잔(formazan)을 형성시켰다. 반응이 끝나면 배지를 제거하고 디메틸 설폭시드(dimethyl sulfoxide; DMSO)로 포르마잔을 용해시켜 ELISA 리더를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하고 그 결과를 아무것도 처리하지 않은 대조군 값에 대한 비율로 계산하였다. 그 결과, 도 1에 개시한 바와 같이 본 발명의 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 다양한 혼합 비율로 혼합하여 제조한 백복령, 율무 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물들은 모든 처리농도에서 100%의 세포생존율을 보여 세포 독성이 없는 것을 확인하였다.
실시예 4. 백복령 , 율무 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물 처리에 따른 멜라닌 생성 저해효과 확인
멜라닌 생성량 측정은 호세이 등의 방법(Hosei et al., 1985, Cancer Res., 45, 1474-1478)을 변형하여 사용하였다. B16/F10 멜라노 세포를 배양하여 24 웰 플레이트에 각 웰당 세포를 1×105 세포/웰에 본 발명의 백복령, 율무 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물(표 1)을 처리한 후 48시간 배양하였다. 48시간 배양한 후 각 웰을 PBS로 세척한 후 0.2N NaOH 용액 400㎕를 첨가하고 60℃에서 1시간 동안 용해하였으며, ELISA 리더(Molecular Devices, USA)를 이용하여 405㎚에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과, 도 2에 개시한 바와 같이 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 제조한 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효 추출물과 이를 다양한 혼합 비율에 따라 제조한 A, B, C, D 및 E 혼합물(표 1)들의 멜라닌생성 저해효과를 비교하였을 때, 100 및 200㎎/㎖의 D 혼합물 처리시 단독 발효 추출물과 A, B, C 및 E 혼합물보다 멜라닌생성 저해효과가 현저하다는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 5. 백복령 , 율무 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물 처리에 따른 엘라스타아제 및 콜라게나아제 활성 저해효과 확인
(1) 엘라스타아제 활성 저해
엘라스타아제 저해활성은 다음과 같이 측정하였다. 0.4M의 Tris-HCl 버퍼 (pH 8.6)을 50㎕, 농도별 백복령, 율무 및 초석잠 발효 단독 추출물과 이를 혼합한 혼합물을 50㎕, 50mM의 Tris-HCl 버퍼(pH 8.6)에 0.6 U/ml이 되도록 희석한 효소(ex-porcine pancreas) 50㎕을 넣고 37℃에서 30분간 반응시킨 후 기질(methoxysuccinyl-L-Ala-L-Val-5-nitroanilide)을 100㎕를 넣은 후 37℃에서 30 분간 반응시킨 후 다시 410 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과, 도 3에 개시한 바와 같이 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 제조한 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효 추출물과 이를 다양한 혼합 비율에 따라 제조한 A, B, C, D 및 E 혼합물(표 1)들의 엘라스타아제 활성 저해효과를 비교하였을 때, 200㎎/㎖의 D 혼합물 처리시 D 혼합물이 단독 발효 추출물과 A, B, C 및 E 혼합물보다 엘라스타아제 활성을 저해시키는 효과가 통계적으로 유의한 차이가 있다는 것을 확인할 수 있었다.
(2) 콜라게나아제 활성 저해
콜라겐은 피부 진피조직을 구성하는 ECM 원섬유 분자(fibrillar molecules)로써 피부의 견고성을 유지시켜주는 역할을 하며 5가지 유형(Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ 및 Ⅴ)이 있는데 콜라겐의 감소는 피부섬유아세포의 합성능 감소 또는 콜라게나아제에 의한 분해능 증가에 의한다. 4mM의 CaCl2를 첨가한 0.1M의 Tris-HCL 버퍼(pH 7.5)에 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg(0.3mg/mL)를 녹인 기질액 0.25㎖와 0.25%, 0.5% 및 1%로 희석한 농도별 백복령, 율무 및 초석잠 발효 단독 추출물과 이를 혼합한 혼합물 0.15㎖를 각각 혼합하여 20분간 반응시킨 후 6% 시트르산(citric acid) 0.5㎖을 첨가 후 반응을 정지시키고 에틸 아세테이트 1.5㎖을 첨가하여 원심분리 후 상층액을 취해 320nm에서 흡광도를 측정하였다. 콜라게나아제 저해활성은 시료용액의 첨가군과 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다. 그 결과, 도 4에 개시한 바와 같이 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 제조한 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효 추출물과 이를 다양한 혼합 비율에 따라 제조한 A, B, C, D 및 E 혼합물(표 1)들의 콜라게나아제 활성 저해효과를 비교하였을 때, 10㎎/㎖ 처리농도를 제외한 모든 농도의 D 혼합물을 처리한 경우, D 혼합물이 단독 추출물과 A, B, C 및 E 혼합물보다 콜라게나아제 활성 저해효과가 현저하다는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (7)

15~25:25~35:45~55의 중량비로 혼합한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 발효는 노루궁뎅이버섯 균사체를 이용하여 발효시킨 것을 특징으로 하는 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물은 백복령, 율무 및 초석잠 각각의 발효물을 여과하고 남은 잔여물을 동결건조한 후, 열수 추출하여 제조된 것을 특징으로 하는 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물은
1) 배지 100 중량부에 대하여 7~12 중량부의 백복령, 17~22 중량부의 율무 및 12~17 중량부의 초석잠을 각각 첨가하여 110~130℃에서 10~20분 동안 멸균하는 단계;
2) 상기 단계 1)에서 멸균한 각 재료가 첨가된 배지에 노루궁뎅이버섯 균사체 배양액을 각각 접종하여 24~26℃에서 7~12일 동안 발효하는 단계;
3) 상기 단계 2)에서 획득한 각각의 발효물을 여과하고, 남은 잔여물을 동결건조하는 단계;
4) 상기 단계 3)의 동결건조한 각각의 발효물을 75~85℃에서 열수 추출하여 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물을 획득하는 단계; 및
5) 상기 단계 4)에서 획득한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물을 15~25:25~35:45~55의 중량비로 혼합하는 단계;를 포함하여 제조하는 것을 특징으로 하는 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물.
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15~25:25~35:45~55의 중량비로 혼합한 백복령 발효 추출물, 율무 발효 추출물 및 초석잠 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 건강기능식품 조성물.
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