KR20160093427A - 발효된 미선나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명의 발효된 미선나무 추출물을 유효성분으로 포함하며 독성과 부작용이 없는 천연물 유래의 조성물로, 기존의 미선나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 비해 우수한 항산화 효과 및 미백 효과로 인한 피부 개선 효과를 가지는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

발효된 미선나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION COMPRISING THE FERMENTED EXTRACT OF ABELIOPHYLLUM DISTICHUM}
본 발명은 발효된 미선나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 미선나무로부터 추출한 추출물을 발효시켜 증강된 항산화 효과 및 미백 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.
미선나무는 물푸레 나무과에 속하는 화목관목으로 높이는 1m 내외이고, 가지는 사방으로 펴져서 밑으로 처지고 자줏빛이 돌며 4각형이고, 골속은 계단모양이다. 잎은 마주나고 난형 또는 타원상난형으로 양끝이 좁고 가장자리가 밋밋하며 짧은 대가 있다. 꽃은 잎보다 먼저 피고 총상화서에 달린다. 흰색ㆍ분홍색ㆍ상아색의 꽃이 피는데, 분홍꽃이 피는 것은 분홍미선, 상아색 꽃이 피는 것은 상아미선이라고 한다, 전세계적으로 1속 1종의 식물이면서 우리나라에서만 자생하는 희귀식물이며 미선나무의 자생지는 천연기념물로 지정되어 있다.
산화는 생물체의 생물학적 과정에서 연료를 공급하는 에너지 생성에 있어 필수적인 과정이나, 생체 내에서 끊임없이 생성되는 자유 라디칼 및 활성산소종(Reactive Oxygen Species, ROS)은 세포사멸과 조직의 손상을 가져온다(Turkoglu, Duru, Mercan, Kivrak, & Gezer, 2007). 산화적 스트레스는 활성산소종의 생성과 세포의　항산화　방어 시스템 사이의 불균형으로 나타난다. 과도한 활성산소종 생성은 산화적 스트레스, 세포 기능의 손실, 최종적으로 세포자살(apoptosis)이나 괴사(necrosis)를 야기하며, 활성산소종에 의한 산화적 스트레스는 만성 질병을 유발하므로　항산화　활성 또는 자유 라디칼 억제는 산화적 스트레스에 의해 야기되는 독성 물질로부터 세포를 보호하는데 있어 매우 중요하다.
항산화제에 대한 연구는 1969년 McCord와 Fridovich가 수퍼옥사이드 라디칼을 소거하는 효소인 SOD를 발견한 것을 계기로 본격적으로 진행되었으며, 최근에는 노화나 성인병 등의 질환이 활성산소와도 관련된 것으로 밝혀져 활성산소를 조절할 수 있는　항산화제에 대한 연구가 활발히 진행 중에 있고, 합성　항산화제의 잠재적인 부작용 위험으로 인해 식물 추출물을 이용한 천연　항산화제의 연구가 많은 관심을 받고 있다.
피부 미백에 있어 가장 중요한 요인 중 하나는 피부의 멜라닌 형성세포(melanocyte)에서의 멜라닌(melanin) 형성이다. 멜라닌은 멜라닌 형성세포 내에 존재하는 티로시나제(tyrosinase) 작용에 의해 티로신(tyrosine)으로부터 도파(dopa), 도파퀴논(dopaquinone)으로 변환되어 도파크롬(dopachrome) 등을 거쳐 생성된다. 이 멜라닌은 피부에 존재하여 자외선 등으로부터 신체를 보호하고 체내 호르몬 분비 조절에 중요한 기능을 가지고 있다. 그러나 멜라닌이 과잉 생산됨으로써 기미, 주근깨 등을 형성하고, 피부노화를 촉진하며, 피부암 유발에 중요한 작용을 하는 것으로 알려져 멜라닌 과잉생산을 예방하는 연구개발이 활발히 진행되고 있다. 피부 미백에 효과적이라고 알려진 물질로는 코직산(kojic acid), 알부틴(arbutin), 하이드로퀴논(hydroquinone) 등이 있다. 코직산은 발암성 물질로 알려져 실험 외에는 화장품 성분으로 사용이 금지된 사례가 있으며, 하이드로퀴논은 멜라닌 형성세포에 대한 독성이 있고, 생체 내 실험(invivotest) 결과 영구 탈색의 위험성이 있으며 발암물질로도 알려져 국내에서 화장품 성분으로 수입이 금지된 상태이다.
상기와 같이 공지된 화학물질은 미백 효과는 있더라도 피부에 대한 독성 내지 부작용의 문제가 수반되어 그 이용에는 한계가 있는 실정이다. 따라서 한국 공개 특허 제2014-0026188호와 같은 미선나무 추출물을 포함하는 화장료 조성물로써, 피부에 대한 부작용을 최소화할 수 있는 천연 유래, 생체 친화적인 피부 미백 성분을 개발하고자 하는 연구가 활발히 이루어지고 있다.
본 발명은 발효된 미선나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 목적은 미선나무 추출물을 발효시킨 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 우수한 항산화 및 미백효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 또 다른 목적은 인체에 안전하며 장기간 사용하여도 부작용이 없는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 양태로서, 발효된 미선나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 및 미백용 화장료 조성물에 제공된다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 발효된 미선나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 및 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 상기 미선나무 추출물은 미선나무의 가지 또는 잎의 추출물에 관한 것이다.
본 발명에서 미선나무의 가지 또는 잎은 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있다.
일반적인 발효의 방법은 ⅰ) 산소가 없거나 부족한 상태에서 효모가 포도당을 분해하여 에탄올과 이산화탄소를 생성하는 알코올 발효 ⅱ) 김치, 요구르트, 치즈 등의 생산에 이용되는 젖산 발효 ⅲ) 산소가 있는 상태에서 아세트산균이 에탄올을 아세트산으로 변화시키고, 식초의 제조에 주로 사용되는 아세트산 발효로 구별되며, 본 발명에서 사용된 발효의 방법은 예시에 한정되는 것은 아니지만, 가장 바람직하게는 알코올 발효에 의해 발효 시킨다.
본 발명의 일 구체예에서, 발효는 효모에 의해 일어나게 되며, 사용 가능한 효모로는 상면효모(Sacch. cerevisiae), 하연효모(Sacch, carlsbergensis), 스키조 폼베(Schizo pombe), 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 엘립소이더스(Saccharomyces ellipsoideus), , 한세눌라 폴리모파(Hansenula polymorpha) 및 피치아 패스토리스(Pichia pastoris)로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 효모에 의해 발효되는 것을 특징으로 하고, 바람직하게는 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae), 한세눌라 폴리모파(Hansenula polymorpha) 및 피치아 패스토리스(Pichia pastoris)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 효모에 의해 발효된다.
본 발명의 일 구체예에서, 발효는 10 내지 40℃의 온도에서 발효된 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 30 내지 37℃의 온도에서 발효된 것을 특징으로 한다. 상기의 온도는 효모가 생육하기 좋은 온도로써, 40℃를 초과할 경우에는 효모의 생장이 억제되며 50℃이상일 경우에는 세포가 파괴된다. 10℃ 미만의 경우에는 효모의 생장이 멈추는 문제가 발생한다. 예를 들어 상기의 한세눌라 폴리모파(Hansenula polymorpha) 및 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)는 30℃, 피치아 패스토리스(Pichia pastoris)는 37℃에서 최적의 생육조건이다. 발효 시간은 24시간 내지 48시간 동안 배양되며, 24시간 미만 동안 배양될 경우에는 충분한 발효가 일어나지 않아 효모 발효액을 충분히 생산하지 못하며, 48시간을 초과하여 배양할 경우에는 발효 생성물에 변화가 없기에 이 시간을 초과하여 배양하는 것은 바람직하지 않다.
아울러, 상기 배양은 회분식 배양(batch culture), 연속배양(continuous culture), 유가배양(fed-batch culture)을 이용할 수 있다. 회분식 배양(batch culture)는 초기에 한 번 배지를 채운 후 더 이상의 영양물질을 공급하지도 생산물을 제거하지도 않으면서 세포를 발효시키는 방식이다. 연속배양(continuous culture)은 새로운 영양배지가 반응기에 연속적으로 공급되면서 세포가 발효조에 유출되며 생장과 물질생산이 장기간 유지되는 방식이다. 유가배양(fed-batch culture)은 균체 성장이 저해 받지 않도록 초기 당 농도를 낮게 하여 배양을 시작한 후 발효가 진행되면서 필요한 양 만큼의 당을 추가로 첨가해 줌으로써 전 발효과정 중 당 농도를 낮게 유지하면서 미생물을 배양하는 방법이다. 이는 기질 저해를 적게 받아 발효공업(제빵 효모, amino acid antibiotics)에 널리 이용된다. 본 발명은 유가배양을 이용하여 발효액을 생산하는 것이 좋으나, 반드시 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 추출물(extract)은 천연물로부터 분리된 활성성분을 의미하며, 여기서는 미선나무로부터 분리된 물질을 의미한다. 상기에서 추출물을 제조하는 방법은 초음파 추출법, 초임계 추출법, 용매 추출법, 여과법 및 환류 추출법 등 당업계의 통상적인 추출방법일 수 있다. 바람직하게는 세척 및 건조로 이물질이 제거된 미선나무의 가지 및 잎을 물, C1-C4의 알코올 (예컨대, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물일 수 있다. 더 바람직하게는, 본 발명에서 사용되는 추출물은 에탄올 추출물이며, 가장 바람직하게는 80%의 에탄올 추출물이다. 추출용매는 미선나무의 가지 및 잎의 건조중량의 2 내지 20 배로 하는 것이 바람직하다. 용매로 추출한 이후에는 농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가로 수행할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형, 수중유(O/W)형 또는 유중수(W/O)형의 제형 또는 연고로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예를 들어 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명에 따른 발효된 미선나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 독성과 부작용이 없는 천연물 유래의 조성물로 항산화 효과 및 미백 효과로 인한 우수한 피부 개선 효과를 가질 수 있다.
도 1은 미선나무 가지의 에탄올 추출물과 상기 에탄올 추출물의 시료 양을 달리한 발효된 추출물의 HPLC 데이터에 관한 것이다.
도 2는 미선나무 잎의 에탄올 추출물과 상기 에탄올 추출물의 시료 양을 달리한 발효된 추출물의 HPLC 데이터에 관한 것이다.
도 3은 미선나무 잎의 에탄올 추출물과 발효된 추출물의 HPLC 데이터에 관한 것이다.
도 4는 미선나무 가지의 에탄올 추출물과 발효된 추출물의 HPLC 데이터에 관한 것이다.
도 5는 미선나무 잎 및 가지의 각각의 에탄올 추출물과 각각의 발효된 추출물의 전자 공여능을 측정한 그래프이다.
도 6은 미선나무 잎 및 가지의 각각의 에탄올 추출물과 각각의 발효된 추출물의 라디칼 소거능을 측정한 그래프이다.
도 7은 는 미선나무 잎 및 가지의 각각의 에탄올 추출물과 각각의 발효된 추출물의 티로시나제 억제능을 측정한 그래프이다.
도 8은 미선나무 잎의 추출물과 이를 DPPH와 반응시킨 샘플의 HPLC 데이터에 관한 것이다.
도 9는 미선나무 잎의 발효된 추출물과 이를 DPPH와 반응시킨 샘플의 HPLC 데이터에 관한 것이다.
도 10은 미선나무 가지의 추출물과 이를 ABTS와 반응시킨 샘플의 HPLC 데이터에 관한 것이다.
도 11은 미선나무 가지의 발효된 추출물과 이를 ABTS와 반응시킨 샘플의 HPLC 데이터에 관한 것이다.
이하, 본 발명의 구체적인 구성 및 작용을 실시예 및 실험예에 의하여 내용을 더욱 상세하게 설명하기로 한다. 다만, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 위한 예시일 뿐 이에 한정되는 것은 아니다.
제조예
발효된 미선나무 추출물의 제조
1) 시료의 추출
곱게 분쇄한 미선나무 가지 및 잎에 대한 각각의 시료를 200g씩 정확히 무게를 측정하여 80% 주정 2L의 에탄올에 넣고 실온(30℃)에서 48시간 동안 추출을 진행하였다. 상기 추출물을 각각 농축을 한 후 동결건조 하였다.
2) 발효된 추출물의 제조
동결 건조된 각각의 시료를 쉐이커를 사용하여 온도는 30℃에서 8시간 동안 발효하였다. 동결건조 된 각각의 에탄올 추출물을 시료량에 따른 성분의 변화 정도를 알아보기 위해 무게를 다르게 하여 발효하였다.
시료 시럽 효모 증류수
미선나무 가지 추출물 300mg 5ml 500mg 95ml
미선나무 가지 추출물 500mg 5ml 500mg 95ml
미선나무 가지 추출물 1200mg 5ml 500mg 95ml
미선나무 잎 추출물 300mg 5ml 500mg 95ml
미선나무 잎 추출물 500mg 5ml 500mg 95ml
미선나무 잎 추출물 1200mg 5ml 500mg 95ml
도 1은 미선나무 가지의 추출물과 추출물의 시료양을 달리하여 발효시킨 발효액의 HPLC 데이터이다. 상기 HPLC 데이터에 따르면, 미선나무 가지의 추출물을 300mg을 발효시킨 것에서 유의 피크의 변화가 가장 크게 나타났다. 피크의 변화 정도로 발효가 효과적으로 일어났는지 여부에 대한 판단할 수 있는 바, 미선나무 가지의 추출물을 300mg, 시럽 5ml, 효모 500mg 및 증류수 95ml를 넣고 발효 시켰을 때, 발효가 가장 효율적으로 일어났다.
도 2는 미선나무 잎의 추출물과 추출물의 시료양을 달리하여 발효시킨 발효액의 HPLC 데이터이다. 상기 HPLC 데이터에 따르면, 미선나무 가지의 추출물을 300mg을 발효시킨 것에서 유의 피크의 변화가 가장 크게 나타났다. 피크의 변화 정도로 발효가 효과적으로 일어났는지 여부에 대한 판단할 수 있는 바, 미선나무 잎의 추출물을 500mg, 시럽 5ml, 효모 500mg 및 증류수 95ml를 넣고 발효 시켰을 때, 발효가 가장 효율적으로 일어났다.
상기의 도 1 및 도 2에 따른 분석 결과를 바탕으로, 미선나무 가지의 추출물은 300mg, 미선나무 잎의 추출물은 500mg을 넣고 발효시킨 발효물은 동결건조를 시킴에 따라 수분은 증발했지만 시럽성분(당)이 남아 있다. 이러한 당 성분은 항산화 활성 실험에 영향을 줌으로 인해 효과적인 항산화 활성 실험을 위해 당의 제거가 필요하고 이에 다이아이온(diaion) HP-20 컬럼크로마토그래피를 진행하였다. 다이아이온(Diaion) HP-20 레진 400ml를 증류수 및 메탄올로 세척을 하고 다시 증류수로 치환을 한 뒤 시료를 로딩하고 증류수로 컬럼 볼륨의 3배를 가하여 당을 제거하였고, 메탄올도 컬럼 볼륨의 3배를 가하여 당을 제외한 물질을 얻었다. 얻은 물질은 농축하였다.
대조군의 제조
대조군은 상기 제조예에 의해 제조된 시료, 즉 미선나무 가지 및 잎을 동일한 방법으로 추출한 추출물이다.
실시예 1
추출물과 발효물의 성분 변화 확인
고성능 액체 크로마토그래피(High-performance-liquid-chromatography, HPLC)(Agillent 1200)를 사용하여 추출물과 발효물의 성분 변화를 알아 보았다. HPLC 분석 조건은 하기의 표 2 및 표 3와 같다.
항목 조건
주입량 10ul
칼럼 온도 30℃
이동상 A : H2O (0.1% 트리플루오로아세틱산(trifluoroacetic acid)의 첨가)
B : 메탄올
유속 0.7ml/min
컬럼 애질런트 이클립스(Agilent Eclipse) XDB-페닐(Phenyl) (4.6 X 150mm, 3.5um)
검출기 254nm
시간(분) A용액(%) B용액(%)
0 90 10
15 50 50
30 0 100
35 0 100
40 90 10
45 90 10
HPLC 분석 결과는 도 1 및 도 2에 나타내고 있는 부분에서 미선나무 가지 및 잎의 각각의 추출물과 각각의 발효된 추출물에서 피크의 차이가 나타났다. 이러한 결과에 비추어 미선나무 가지 및 잎의 각 추출물과 각 발효된 추출물은 발효에 의해 성분의 변화가 발생하였다고 할 것이다.
실시예 2
항산화 활성 및 미백활성 실험
1) 전자공여능 측정 (DPPH)
미선나무 가지 및 잎의 각 추출물 및 각 발효된 추출물의 농도별 용액 30ul에 0.32mM 농도의 DPPH(1-1-다이페닐-2-피크릴-히드라질(1-1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl)) 180ul를 넣고, 빛을 차단한 후 실온(30℃)에서 20분간 반응시킨 후, 마이크로플레이트 계수기를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다.
DPPH는 짙은 자색을 띄는 비교적 안정한 자유 라디칼(free radical)로서 항산화제, 방향족 아민류 등에 의해 환원되어 색이 탈색되는데, 이것은 항산화 물질을 탐색하는데 활용된다. 측정 결과는 ug/ml의 단위로 표현되고 그 수치가 낮을수록 전자공여능이 높다고 할 것이다.도 3에 나타난 바와 같이, 미선나무 가지의 추출물 및 미선나무 잎의 추출물의 전자 공여능을 측정한 결과, 미선나무 가지의 추출물은 580.000ug/ml이고, 미선나무 잎의 추출물은 540,000ug/ml로 측정된 반면, 미선나무 가지의 발효된 추출물은 190,000ug/ml이고, 미선나무 잎의 발효된 추출물은 250,000ug/ml로 측정된 점에 비추어 미선나무 가지 추출물과 그 발효물의 전자 공여능을 비교할 경우, 미선나무 가지의 추출물에 비해 그 발효 된 추출물이 67%정도 우수한 효과를 나타내고 있고, 미선나무 잎의 추출물과 그 발효된 추출물을 비교할 경우, 발효된 추출물이 54%정도 우수한 효과를 나타냈다.
2)라디칼 소거능 측정 (ABTS)
미선나무 가지 및 잎의 각 추출물 및 각 발효된 추출물의 농도별 용액 10ul와 ABTS 라디칼 용액 290ul를 넣어 실온(30℃)에서 10분간 반응시킨 후 마이크로 플레이트 계수기를 이용하여 750nm에서 흡광도를 측정하였다.
추출물의 항산화력에 의해 ABTS가 제거되어 라디칼 특유의 색인 청록색이 탈색되고, 이와 같은 탈색반응은 이미 생성된 자유 라디칼의 제거 정도를 흡광도 값으로 나타낼 수 있다. 측정 결과는 ug/ml의 단위로 표현되고 그 수치가 낮을수록 ABTS 소거 활성이 높다고 할 것이다. 도 4에 나타난 바와 같이, 미선나무 가지의 추출물 및 미선나무 잎의 추출물의 라디칼 소거능을 측정한 결과, 미선나무 가지의 추출물은 320.000ug/ml이고, 미선나무 잎의 추출물은 300,000ug/ml로 측정된 반면, 미선나무 가지의 발효된 추출물은 210,000ug/ml이고, 미선나무 잎의 발효된 추출물은 90,000ug/ml로 측정되었다. 이는, 미선나무 가지의 추출물과 그 발효된 추출물을 비교할 경우, 발효된 추출물이 34%정도 우수한 효과를 나타내고 있고, 미선나무 잎의 추출물과 그 발효된 추출물을 비교할 경우, 70%정도 우수한 효과를 나타냈다.
3)미백 활성 (Tyrosinase inhibition)
티로시나제 측정은 0.1M 인산칼륨(potassium phosphate) 완충용액 (pH6.6) 120ul에 미선나무 가지 및 잎의 각 추출물 및 각 발효된 추출물의 농도별 용액 20ul를 혼합한 뒤 티로시나제 20ul(500unit)를 넣고, 기질로서 1.5mM L-티로신 40ul를 첨가하여 37℃ 항온기에서 15분간 반응시켜 150nm의 흡광도로 측정하였다.
도 5에 나타난 바와 같이, 미선나무 가지의 추출물 및 미선나무 잎의 추출물의 미백 활성을 측정한 결과, 미선나무 가지의 추출물에 비해 미선나무 가지의 발효된 추출물 및 미선나무 잎의 발효된 추출물이 더욱 좋은 미백활성을 나타내고 있으며, 미선나무 잎의 추출물과 유사한 정도의 미백 활성을 나타내고 있다.
4) 오프-라인-커플링-HPLC(off-line-coupling-HPLC) 실험
오프-라인-커플링-HPLC(off-line-coupling-HPLC) 실험은 샘플과 활성 테스트 시료(ABTS, DPPH)를 처리해 반응시킨 후, HPLC로 분석하는 것이다. 상기의 활성 테스트 시료와 반응 한 피크는 면적 값이 줄어드는 것으로 활성을 확인 할 수 있다. 즉 상기의 활성 테스트 시료와 혼합물 상태인 샘플에서 면적 값이 줄어든 피크는 활성을 나타내는 것이고, 이는 활성 물질 판단을 쉽게 하기 위한 방법이다.
가)전자공여능(DPPH)
미선나무 잎의 추출물 및 미선나무 잎의 발효된 추출물의 농도별 용액 30ul에 0.32mM 농도의 DPPH 180ul를 넣고, 빛을 차단한 후 실온(30℃)에서 20분간 반응시킨 후, HPLC(Agillent 1200)를 사용하여 분석하였다.
도 6 내지 7에 나타난 바와 같이, 미선나무 잎의 추출물과 그 발효된 추출물의 분석 결과는, 박스로 표시된 부분에서 발효된 추출물에서의 피크가 면적 값이 줄어든 것으로 나타나고 있고, 이는 미선나무 잎의 추출물과 비교하였을 때, 발효된 추출물에서 전자 공여능의 활성이 크게 나타났다고 할 것이다.
나)라디칼 소거능(ABTS)
각 추출물의 농도별 용액 10ul와 ABTS 라디칼 용액 290ul를 넣어 실온에서 10분간 반응시킨 후, HPLC(Agillent 1200)를 사용하여 분석하였다.
도 8 내지 9에 나타난 바와 같이, 미선나무 가지의 추출물과 그 발효된 추출물의 분석 결과는, 박스로 표시된 부분에서 발효된 추출물에서의 피크가 면적 값이 줄어든 것으로 나타나고 있고, 이는 미선나무 가지의 추출물과 비교하였을 때, 발효된 추출물에서 라디칼 소거능의 활성이 크게 나타났다고 할 것이다.

Claims (12)

  1. 발효된 미선나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 미선나무 추출물은 미선나무의 가지 또는 잎의 추출물인 항산화용 화장료 조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 추출물은 ⅰ) 물, 탄소수 1 내지 3의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법 ⅱ) 초임계 추출법 또는 ⅲ) 초음파 추출법을 이용하여 추출한 것인 항산화용 화장료 조성물.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 발효는 상면효보(Sacch. cerevisiae), 하연효모(Sacch, carlsbergensis), 스키조 폼베(Schizo pombe), 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 엘립소이더스(Saccharomyces ellipsoideus), 한세눌라 폴리모파(Hansenula polymorpha) 및 피치아 패스토리스(Pichia pastoris)로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 효모에 의해 발효된 것인 항산화용 화장료 조성물.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 발효는 10 내지 40℃의 온도에서 발효된 것인 항산화용 화장료 조성물.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 또는 유중수(W/O)형의 제형 또는 연고 중에서 선택되는 것인 항산화용 화장료 조성물.
  7. 발효된 미선나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물.
  8. 제 7항에 있어서,
    상기 미선나무 추출물은 미선나무의 가지 또는 잎의 추출물인 미백용 화장료 조성물.
  9. 제 7항에 있어서,
    상기 추출물은 ⅰ) 물, 탄소수 1 내지 3의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법 ⅱ) 초임계 추출법 또는 ⅲ) 초음파 추출법을 이용하여 추출한 것인 미백용 화장료 조성물.
  10. 제 7항에 있어서,
    상기 발효는 상면효보(Sacch. cerevisiae), 하연효모(Sacch, carlsbergensis), 스키조 폼베(Schizo pombe), 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 엘립소이더스(Saccharomyces ellipsoideus), 한세눌라 폴리모파(Hansenula polymorpha) 및 피치아 패스토리스(Pichia pastoris)로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 효모에 의해 발효된 것인 미백용 화장료 조성물.
  11. 제 7항에 있어서,
    상기 발효는 10 내지 40℃의 온도에서 발효된 것인 미백용 화장료 조성물.
  12. 제 7항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 또는 유중수(W/O)형의 제형 또는 연고 중에서 선택되는 것인 항산화용 화장료 조성물.
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EP4043005A1 (fr) * 2021-02-12 2022-08-17 Chanel Parfums Beauté Composition cosmétique comprenant un hydrolysat de levure

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