CN109568354A - 一种包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本申请提供了一种包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其包含1～50重量份灵芝孢子油和1～50重量份灵芝多糖；优选地，所述灵芝孢子油和灵芝多糖的重量比例为1:3‑6:1。本申请所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物具有良好的口服生物利用度，灵芝孢子油和灵芝多糖可协同发挥作用，增强免疫调节和抗疲劳疗效，因此可制备用于免疫调节和抗疲劳的药物或保健品。

Description

一种包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物及其用途

技术领域

本发明属于中药领域，涉及一种包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，所述组合物中灵芝孢子油和灵芝多糖具有良好的口服生物利用度，灵芝孢子油和灵芝多糖可协同发挥作用，增强免疫调节和抗疲劳疗效。

背景技术

免疫是人体识别和消灭外来侵入的异物(病毒、细菌等)，处理衰老、损伤、死亡的自身细胞，以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。机体免疫力低下易于受到细菌、病毒等感染或罹患癌症，免疫力超常也会引发过敏以及自身免疫系统疾病。另外，近年来研究表明，疲劳以及慢性疲劳综合症与免疫力低下或免疫失调相关。因此，调节机体免疫至正常水平是维持人体健康和缓解疲劳的基础。

灵芝在我国已有2000多年的历史，被历代医药家视为滋补强壮、扶正固本的神奇珍品。灵芝具有双向调节人体免疫的作用，可在整体上平衡人体机能，快速恢复免疫系统，使机体内脏和细胞达到标准化。灵芝含有多糖、三萜、氨基酸、多肽、蛋白质、真菌溶菌酶(fungal lysozyme)，麦角甾醇、香豆精苷、挥发油、硬脂酸、苯甲酸、生物碱、维生素B2及C等多种成分可，发挥良好的免疫调节作用。

灵芝孢子是多孔菌科灵芝属赤芝或紫芝的种子，其含有丰富的脂溶性化合物灵芝的三萜和麦角甾醇等(式1)。目前市售的破壁灵芝孢子粉，其三萜化合物的总含量为1-5％，且破壁后的灵芝孢子粉由于直接与空气接触，放置时其活性成分非常容易氧化变质，导致有效成分含量降低；而灵芝孢子油为灵芝孢子中脂溶性成分的总和，经破壁技术和超临界流体CO₂萃取得到的灵芝孢子油富含灵芝三萜类化合物，其三萜化合物的总含量可达15～30％，显著高于破壁灵芝孢子粉和灵芝子实体中的三萜化合物的含量。研究表明，灵芝三萜可通过提高巨噬细胞的吞噬能力，增强NK细胞的杀伤作用，提高ConA诱发的T细胞增殖反应发挥免疫调节作用。

式1：灵芝酸A和麦角甾醇的结构

灵芝多糖一般是由灵芝子实体中获得的提取物，具有良好的水溶性。研究表明，灵芝多糖可通过增强细胞的吞噬功能，促进T细胞活化增殖，增加TNF、IL-2的表达发挥免疫调节作用。灵芝多糖的分子量、糖苷键的结合形式和多糖的立体结构可影响其药理活性。分子量为1×(10⁴～10⁶)的灵芝多糖显示出较强活性，以β(1→3)糖苷键为主链的螺旋型葡聚糖生物活性较高。

灵芝孢子油与灵芝多糖的功效具协同和互补作用。灵芝孢子油中的三萜类化合物和麦角甾醇可直接抑制炎症因子或肿瘤细胞的生长，对中性粒细胞等释放的炎症介质有抑制作用。在哮喘的鼠模型中，富含灵芝三萜的提取物显著减弱了气道高反应性，减少了总体粒细胞和嗜酸性粒细胞的浸润，降低了IL-4、IL-5和嗜酸细胞活化趋化因子等炎性介质的水平，从而发挥抗炎症反应作用。在脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞的体外炎症模型中，灵芝三萜类化合物和麦角甾醇可对多种炎症介质，如NO、PEG2、TNF-α、IL-6、IL-1β等有明显抑制作用，说明其具有抗炎效果。而灵芝多糖可提高机体的免疫防御作用，不仅能增强正常小鼠的体液免疫和细胞免疫反应，具有免疫增强作用，而且还能拮抗免疫抑制药、抗肿瘤药、应激和衰老所致免疫功能抑制，使之回复正常或接近正常水平。其作用机制显示，灵芝多糖对免疫细胞具有广泛的作用，如激活T细胞、B细胞、巨噬细胞、NK细胞等免疫细胞；促进未分化的脾细胞在体外增殖，显著提高机体的体液免疫功能和网状内皮系统的吞噬功能；增强T淋巴细胞DNA多聚酶的活性，促进淋巴细胞DNA合成、促进T细胞增殖；促进白细胞介素等细胞因子的分泌、表达等，从而实现灵芝多糖的免疫增强作用和免疫恢复作用。总而言之，灵芝多糖可以通过对免疫系统的直接和间接影响，维持机体的免疫调节作用，提高机体的抗病能力。灵芝孢子油与灵芝多糖同时使用可以在提高机体免疫力的基础上发挥抗炎及抗肿瘤效果，具有协同和互补作用。有研究表明，灵芝的三萜化合物和灵芝多糖配伍使用可增强对小鼠体内Lewis肿瘤生长的抑制，且肝指数、胸腺指数、脾指数等动物免疫指标在给药后均有提高。因此，采用一定配比组合的灵芝孢子油和灵芝多糖对于灵芝提取物完整功效的发挥具有重要意义。

目前，临床使用的很多验方(如灵薏方、益元康方等)中均采用了灵芝多组份配伍使用以达到协同增效的目的。然而，复方多采用传统水煎煮的方法，由于灵芝中的三萜化合物和麦角甾醇等成份的水溶性差，口服难以吸收，影响其药效的发挥。此外，市售的破壁灵芝孢子粉产品中虽然同时含有灵芝三萜和灵芝多糖，但是灵芝三萜等脂溶性成分口服吸收差，灵芝酸和麦角甾醇的口服生物利用度低，仅为10-20％，影响二者协同发挥疗效，导致药效降低。目前已有的验方或灵芝孢子粉产品等仍无法良好发挥灵芝脂溶性成份和水溶性成份的协同作用。

中药的多成分决定了其治疗作用的多靶点与多层次，由于其具有在有效部位或有效成分层次上多种药理活性物质的特定组合、以及每种活性成分最佳的组分构成比例，才能多系统、多靶点和多层次发挥全方面的药效作用。不同产地的灵芝药材中灵芝三萜与灵芝多糖的比例范围在1:2.84-2.91:1之间，在该比例范围内，灵芝三萜和灵芝多糖可以协同发挥最优疗效，然而由于口服吸收受限，导致直接服用灵芝疗效不佳。因此，本发明意在通过制剂手段，以灵芝中两种成分的比例为优化的比例范围，开发一种包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，最大程度地提高其生物利用度，促进其口服吸收，协同发挥免疫调节作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种包含优化比例的灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其提高了灵芝孢子油和灵芝多糖的体内吸收和生物利用度，共同吸收发挥协同作用。

本发明的目的通过以下方案得以实现：

本发明目的是提供一种包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其包含1～50重量份灵芝孢子油和1～50重量份灵芝多糖。本发明所述的组合物形式可以为油状物、磷脂复合物、亚微乳、纳米乳、混悬液、脂质体、脂质微球、脂质微囊体、固体分散体、环糊精包合物等中的一种或两种以上形式存在，通过以优化配比包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，可以极大地增加肠细胞的吸收。另外，灵芝多糖具有降低肠细胞膜的外排蛋白(P-gp等)表达的作用，抑制外排蛋白对灵芝孢子油的外排作用，进一步提高了活性成分的生物利用度，使灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物协同促吸收，并协同发挥免疫调节作用。

优选地，所述包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物还可以进一步包含常规辅料和/或添加剂，例如，促吸收剂、稳定剂、抗氧剂、酸度调节剂、香精香料、稀释剂等。

在优选的实施方式中，本发明所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物包含：

1～50重量份，优选5～50重量份的灵芝孢子油；

1～50重量份，优选3～50重量份的灵芝多糖；

0～50重量份，优选0.1～50重量份的促吸收剂；

0～5重量份的抗氧化剂；

0～10重量份的稳定剂。

本发明所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物中，灵芝孢子油和灵芝多糖的优化重量比例为1:3-6:1，更优选的重量比例为1:2-5:1。

根据本发明，所述灵芝孢子油来自于选自灵芝菌丝体、灵芝孢子粉和破壁灵芝孢子粉中的一种或多种组合。所述灵芝孢子油的主要成分含有三萜化合物、麦角甾醇和不饱和脂肪酸等，一般地，相对于所述灵芝孢子油的总重量，三萜化合物的含量为10-30％，不饱和脂肪酸含量为30-80％，麦角甾醇含量为0.05％-10％。

其中，灵芝孢子油的三萜化合物包括灵芝酸A、灵芝酸甲酯、灵芝内酯、灵芝孢子酸、灵芝醇、灵芝甾酮等，是一类高度氧化的羊毛甾烷衍生物。

本发明所述灵芝多糖可来自于灵芝子实体、灵芝孢子和/或灵芝菌丝体，所述灵芝多糖分子量范围为4～20kDa，更进一步地，其中，相对于所述灵芝多糖的总质量，分子量范围为5～8kDa的灵芝多糖的含量为30～80％，分子量范围为18～20kDa的灵芝多糖的含量为10～35％；其余多糖的含量为5～50％。

本发明所述的灵芝多糖中单糖组成有D-葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖和岩藻糖。并且，组成灵芝多糖的单糖以β-(l→3)(l→6)连接或以β-(1→4)(1→6)连接的糖苷键形式链接。灵芝多糖主要活性成分为三螺旋体结构多糖，主链结构为β-(l→3)连接的D-吡喃型葡萄糖残基，侧链是在主链的6位C原子上连接有单糖、双糖及寡糖。

所述促吸收剂可以选自磷脂类、柠檬酸脂肪酸甘油酯类、脂肪酸甘油酯类、聚山梨酯类、脂肪酸山梨坦类、环糊精、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯蓖麻油类、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、聚乙烯吡咯烷酮类、聚乙二醇、泊洛沙姆、甲壳质、甲壳胺、胆酸及其盐类等中的一种和/或多种。

所述抗氧剂选自α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、Δ-生育酚、混合型生育酚、生育酚醋酸酯、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯和花青素等中的一种或多种。

所述稳定剂选自甘油、丙二醇、微晶纤维素、卡拉胶、瓜尔胶、明胶、油酸、PE、胆固醇等中的一种和/或多种。

在优选的实施方式中，本发明所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物还可以进一步包括，例如，酸度调节剂，如，柠檬酸、柠檬酸钾、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸钠、柠檬酸钾、磷酸、盐酸、柠檬酸一钠、磷酸盐、硫酸钙、乳酸钙、己二酸、乳酸、乙酸钠、L(+)-酒石酸和酒石酸、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化钠等；香精香料；稀释剂，如，水等。

本发明所述的包含灵芝三萜和灵芝多糖的组合物可显著提高灵芝有效成分的口服生物利用度。其中，灵芝酸A的生物利用度较灵芝孢子油软胶囊提高到2-6倍，麦角甾醇的生物利用度是市售灵芝孢子油胶囊的生物利用度的3-8倍。

另外，本发明提供了所述的包含灵芝三萜和灵芝多糖的组合物在制备用于免疫调节和抗疲劳的药物或保健品中的用途。

附图说明

图1为显示实验实施例1实验1中的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物中灵芝酸A的体内促吸收效果的线形图。

图2为显示实验实施例1实验1中的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物中麦角甾醇的体内促吸收效果的线形图。

具体实施方式

本发明将利用以下实施例来加以说明。

灵芝孢子油、灵芝多糖(杭州众菇善年生物技术有限公司)

柠檬酸脂肪酸甘油酯(郑州通化实业有限公司)

磷脂(德国Lipoid)

环糊精、聚乙烯吡咯烷酮(安徽山河药用辅料股份有限公司)

α-生育酚、抗坏血酸(DSM)

甘油、氢氧化钠(湖南尔康制药股份有限公司)

聚氧乙烯氢化蓖麻油(BASF)

制剂实施例1-5：包含灵芝孢子油和灵芝多糖的口服乳剂

将灵芝多糖溶于适量水中，搅拌溶解，形成水组分，接着将灵芝孢子油和柠檬酸脂肪酸甘油酯充氮混合，定子转子搅拌器分散，然后加入含水组分进行搅拌，最后加入其它添加剂，以及酸度调节剂调节pH值，后续在高压均质机内以300～500bar的压力进行均质乳化。再装入瓶内，在115℃，30min的条件下进行高压灭菌。

按照表中处方组分制备的口服液稳定性良好，乳品的液滴大小均值小于0.5μm。

制剂实施例6-7：包含灵芝孢子油和灵芝多糖的口服乳剂

采用制剂实施例1-5的制备方法，根据以下表格中各成分的量制备包含灵芝孢子油和灵芝多糖的口服乳剂。

按照表中处方组分制备的乳剂稳定性良好，乳品的液滴大小均值小于500nm。

制剂实施例8：包含灵芝孢子油和灵芝多糖的固体分散体

称取灵芝孢子油100g、灵芝多糖100g和200g促吸收剂聚乙烯吡咯烷酮K-30(PVPK30)溶于无水乙醇中，不断搅拌得澄明溶液，于60℃水浴上挥去溶剂，放入40℃烘箱平衡24h，粉碎过60目筛，得到包含灵芝孢子油和灵芝多糖的固体分散体。

制剂实施例9：包含灵芝孢子油和灵芝多糖的磷脂复合物

称取灵芝孢子油100g、灵芝多糖100g和200g促吸收剂大豆卵磷脂溶于无水乙醇中，不断搅拌得澄明溶液，减压蒸发除去乙醇，加入氯仿充分溶解磷脂复合物，然后抽滤，收集过滤液，再用氯仿洗涤沉淀物除去多余灵芝多糖成分，合并过滤液，再次减压蒸干，收集沉淀物。加入水溶解沉淀物，然后抽滤，收集滤液，再用水洗涤沉淀物除去多余灵芝三萜类成分，合并滤液，放入40℃烘箱烘干，即得包含灵芝孢子油和灵芝多糖的磷脂复合物，其中灵芝孢子油和灵芝多糖的含量范围为10-20％。

制剂实施例10：包含灵芝孢子油和灵芝多糖的脂质体

称取5g灵芝孢子油，10g大豆卵磷脂，1.25g膜稳定剂胆固醇和2.5g抗氧化剂抗坏血酸溶解于乙醇-氯仿(1:1)中，混匀后倒入圆底烧瓶，旋转蒸干有机溶剂，使其在圆底烧瓶壁上形成一层薄膜，将5g灵芝多糖溶解于50mL蒸馏水中，倒入圆底烧瓶中，在水浴条件下旋转水化至瓶壁上的磷脂膜完全洗脱下来为止。后续在高压均质机内以300～500bar的压力进行均质，得到粒径小于500nm的脂质体。

取制备得到的脂质体100μL用Zetasizer ZS粒径仪测定脂质体平均粒径为227.4nm。

制剂实施例11：包含灵芝孢子油和灵芝多糖的纳米乳

称取5g灵芝多糖加入到100mL蒸馏水中溶解，作为水相。取灵芝孢子油5g，加入27g促吸收剂聚氧乙烯氢化蓖麻油(RH40)和13.6g的聚乙二醇400(PEG 400)，搅匀，并逐滴加入水相，磁力搅拌器搅匀，得到澄明的纳米乳。

取制备得到的乳剂100μL用Zetasizer ZS粒径仪测定纳米复合物平均粒径为79.94nm。

实验实施例1(体内试验)

实验1：提高口服生物利用度研究

本实验实施例分为7个实验组：各组给药剂量，浓度以及给药途径具体如下所示：

(1)对照组1：市售灵芝孢子油胶囊(南京中科药业有限公司)，给药剂量为300mg/kg。

(2)对照组2：市售破壁灵芝孢子粉胶囊(北京同仁堂股份有限公司)，给药剂量为300mg/kg。

(3)对照组3：灵芝孢子油和灵芝多糖联合给药组：使用市售的灵芝孢子油胶囊(南京中科药业有限公司)；将灵芝多糖提取物(杭州众菇善年生物技术有限公司)溶于无菌水中，制成质量百分比为10％的灵芝多糖口服液；灵芝孢子油、灵芝多糖给药剂量分别为300mg/kg。

(4)灵芝孢子油口服乳剂组(制剂1)：取100g灵芝孢子油，10g柠檬酸脂肪酸甘油酯，250g甘油，在氮气保护下混合均匀，加入1000mL空白水相进行乳化，通过高压均质机反复均质乳化，制得粒径小于500nm的口服乳剂；灵芝孢子油给药剂量为300mg/kg。

(5)包含灵芝孢子油和灵芝多糖的口服乳剂组(制剂2)：使用制剂实施例4中制备的口服乳剂；灵芝孢子油、灵芝多糖给药剂量分别为300mg/kg。

(6)包含灵芝孢子油和灵芝多糖的固体分散体组(制剂3)：使用制剂实施例8中制备的固体分散体；灵芝孢子油、灵芝多糖给药剂量分别为300mg/kg。

(7)包含灵芝孢子油和灵芝多糖的脂质体组(制剂4)：使用制剂实施例10中制备的脂质体；灵芝孢子油、灵芝多糖给药剂量分别为300mg/kg。

将Wistar大鼠(上海西普尔-必凯实验动物有限公司)随机分为7组，每组6只，实验前禁食12h，不禁水。给大鼠分别灌胃七组制剂，在给药0.25h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h和12h后，眼眶静脉丛采血0.5mL，收集于肝素化试管中，37℃水浴保温30min后，冷冻离心10min(5000r/min)，分离血浆取上清液，于-20℃保存待测定其药物浓度。

灵芝酸A和麦角甾醇是灵芝中脂溶性成分，且已有报道两种成分的生物利用度较低，故本研究中以灵芝酸A和麦角甾醇为灵芝孢子油的指标成分，采用HPLC检测血浆中两种成分的含量。

实验结果：Wistar大鼠灌胃不同制剂的灵芝口服乳液，其血药浓度-时间曲线测定数据经“DAS”药动学计算(表1-灵芝酸A；表2-麦角甾醇)，结果表明，制剂组的生物利用度均高于市售的两种对照产品，并且本申请所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其生物利用度明显提高。制剂2、3、4组中灵芝酸A的生物利用度分别是制剂1的3.20倍、1.89倍和2.14倍，而麦角甾醇的生物利用度分别是制剂1的3.42倍、1.58倍、2.28倍。灵芝三萜生物利用度的提高促进组合物协调发挥作用，显著提高疗效。

对照组中采用灵芝孢子油和灵芝多糖联合给药，其生物利用度明显低于相同剂量的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物组，表明仅仅同时服用灵芝孢子油和灵芝多糖，其生物利用度仍较低。

三种剂型(口服乳剂、固体分散体、脂质体)中，制剂2(口服乳剂)的生物利用度最高，表明乳剂对灵芝孢子油的体内吸收更有利。

表1

表2

实验2：免疫调节作用研究

实验小鼠(上海西普尔-必凯实验动物有限公司)被随机分配为9组，各组给药剂量，浓度以及给药途径具体如下所示：

(1)橄榄油口服液(对照组)：橄榄油的质量百分比为10％，按照每天10ml/kg体重灌胃。

(2)包含灵芝孢子油和灵芝多糖口服乳剂低剂量组(制剂1)：使用制剂实施例4制备的包含灵芝孢子油和灵芝多糖口服乳剂，灵芝孢子油和灵芝多糖提取物的质量百分比均为10％，按照5ml/kg体重灌胃。

(3)包含灵芝孢子油和灵芝多糖口服乳剂高剂量组(制剂2)：使用制剂实施例4制备的包含灵芝孢子油和灵芝多糖口服乳剂，灵芝孢子油和灵芝多糖提取物的质量百分比均为10％，按照10ml/kg体重灌胃。

(4)包含灵芝孢子油和灵芝多糖口服乳剂(制剂3)：使用制剂实施例6中制备的包含灵芝孢子油和灵芝多糖口服乳剂，灵芝孢子油和灵芝多糖提取物的质量百分比分别为10％和0.5％，按照10ml/kg体重灌胃。

(5)包含灵芝孢子油和灵芝多糖口服乳剂(制剂4)：使用制剂实施例7中制备的包含灵芝孢子油和灵芝多糖口服乳剂，灵芝孢子油和灵芝多糖提取物的质量百分比分别为0.5％和10％，按照10ml/kg体重灌胃。

(6)包含灵芝孢子油和灵芝多糖的固体分散体组(制剂5)：使用制剂实施例8中制备的固体分散体；灵芝孢子油和灵芝多糖提取物的质量百分比均为10％，按照10ml/kg体重灌胃。

(7)包含灵芝孢子油和灵芝多糖的脂质体组(制剂6)：使用制剂实施例10中制备的脂质体；灵芝孢子油和灵芝多糖提取物的质量百分比均为10％，按照10ml/kg体重灌胃。

(8)低剂量灵芝孢子油和灵芝多糖联合给药组(制剂7)：使用市售的灵芝孢子油胶囊，按照灵芝孢子油0.5g/kg(与质量百分比10％的灵芝孢子油制剂，5ml/kg体重灌胃，剂量相等)体重灌胃；将灵芝多糖提取物溶于无菌水中，制成质量百分比为10％的灵芝多糖口服液，按照5ml/kg体重灌胃。

(9)高剂量灵芝孢子油和灵芝多糖联合给药组(制剂8)：使用市售的灵芝孢子油胶囊，按照灵芝孢子油1g/kg(与质量百分比10％的灵芝孢子油制剂，10ml/kg体重灌胃，剂量相等)体重灌胃；将灵芝多糖提取物溶于无菌水中，制成质量百分比为10％的灵芝多糖口服液，按照5ml/kg体重灌胃。

与对照组相比较(表3)，包含灵芝孢子油和灵芝多糖乳剂组低、高两个剂量组均能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力、小鼠NK细胞活性及ConA诱导的小鼠脾T淋巴细胞转化能力(P<0.05)，尤以包含灵芝孢子油和灵芝多糖口服乳剂的高剂量组最为明显。

与制剂1和2组相比，制剂3和4两个组对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力，小鼠NK细胞活性及ConA诱导的小鼠脾T淋巴细胞转化能力的提高效果不明显，表明经过优化比例的灵芝孢子油和灵芝多糖组合物的疗效更强。

三种剂型(口服乳剂、固体分散体、脂质体)中，口服乳剂对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力，小鼠NK细胞活性及ConA诱导的小鼠脾T淋巴细胞转化能力的提高效果更明显，表明乳剂可更好地协同发挥作用，显著提高疗效。

制剂7和制剂8的各指标水平相近，无明显差异；制剂7与制剂1给药剂量一致，但是制剂7的免疫调节作用显著低于制剂1，且提高孢子油剂量的制剂8的免疫调节作用并没有显著提高。表明低生物利用度的灵芝孢子油不能与灵芝多糖协同发挥免疫调节作用。

表3

注：制剂1、2与橄榄油口服液对照组相比，P<0.05。

与对照组相比较(表4)，灵芝孢子油和灵芝多糖乳剂组低、高两个剂量组均能提高小鼠脾单核细胞/巨噬细胞自发及经LPS诱生后分泌TNF-α的含量及小鼠脾细胞自发及经ConA诱生分泌IL-2的含量(P<0.05)，以包含灵芝孢子油和灵芝多糖口服乳剂的高剂量组最为显著。制剂3和4组与制剂2组比较，可以发现，经过优化配比的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的口服乳剂比优化配比范围外的口服乳剂，具有更好的疗效。

三种剂型(口服乳剂、固体分散体、脂质体)中，口服乳剂组的TNF-α和IL-2的含量显著高于固体分散体和脂质体组，表明乳剂的免疫调节作用更好。

制剂7、8与制剂1相比，TNF-α和IL-2的含量均较低，与对照组相差不大，表明低生物利用度的孢子油不能很好地与灵芝多糖协同发挥免疫调节作用，而提高灵芝孢子油的生物利用度后，低剂量的孢子油即可与多糖发挥协同作用。

表4

注：制剂1、2与橄榄油口服液对照组相比，P<0.05。

实验3：缓解体力疲劳作用研究

以实验实施例1实验2中的分组及给药方式，连续灌胃30天。

制剂1和2组能延长小鼠负重游泳时间，减少小鼠游泳时血清尿素的产生，减少游泳时血乳酸的产生，增加肝糖原储备(表5)，此判定，本实验剂量范围内可见本发明具有缓解体力疲劳功能。

制剂3和4组与橄榄油口服液组相比较，没有明显差异，表明灵芝孢子油和灵芝多糖配比不合适，疗效明显减弱。

三种剂型(口服乳剂、固体分散体、脂质体)中，口服乳剂组延长小鼠负重游泳时间、减少小鼠游泳时血清尿素的产生、减少游泳时血乳酸的产生、增加肝糖原储备的效果更好，表明乳剂可以更好地发挥灵芝孢子油和多糖的缓解体力疲劳作用。

制剂7和8的抗疲劳作用不明显，高生物利用度的孢子油(制剂1)和低生物利用度的孢子油(制剂7)相比，抗疲劳效果相差显著，表明孢子油的生物利用度对协同发挥孢子油和多糖的抗疲劳作用影响很大，提高孢子油的生物利用度可显著提高其抗疲劳作用。

表5

Claims (10)

1.一种包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其包含1～50重量份灵芝孢子油和1～50重量份灵芝多糖。

2.根据权利要求1所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其包含：

1～50重量份，优选5～50重量份的灵芝孢子油；

1～50重量份，优选3～50重量份的灵芝多糖；

0～50重量份，优选0.1～50重量份的促吸收剂；

0～5重量份的抗氧化剂；和

0～10重量份的稳定剂。

3.根据权利要求1或2所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其中，灵芝孢子油和灵芝多糖的重量比例为1:3-6:1，更优选的重量比例为1:2-5:1。

4.根据权利要求1或2所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其以选自油状物、磷脂复合物、亚微乳、纳米乳、混悬液、脂质体、脂质微球、脂质微囊体、固体分散体、环糊精包合物中的一种或两种以上形式存在。

5.根据权利要求1或2所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其中，所述灵芝孢子油来自于选自灵芝菌丝体、灵芝孢子粉和破壁灵芝孢子粉中的一种或多种组合，其包含三萜化合物、麦角甾醇和不饱和脂肪酸；优选地，相对于所述灵芝孢子油的总重量，三萜化合物的含量为10-30％，不饱和脂肪酸含量为30-80％，麦角甾醇含量为0.05％-10％。

6.根据权利要求1或2所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其中，所述灵芝多糖来自于灵芝子实体、灵芝孢子和/或灵芝菌丝体，其分子量范围为4～20kDa；优选地，相对于所述灵芝多糖的总质量，分子量范围为5～8kDa的灵芝多糖的含量为30～80％，分子量范围为18～20kDa的灵芝多糖的含量为10～35％；其余多糖的含量为5～50％。

7.根据权利要求2所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其中，所述促吸收剂选自磷脂类、柠檬酸脂肪酸甘油酯类、脂肪酸甘油酯类、聚山梨酯类、脂肪酸山梨坦类、环糊精、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯蓖麻油类、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、聚乙烯吡咯烷酮类、聚乙二醇、泊洛沙姆、甲壳质、甲壳胺、胆酸及其盐类中的一种和/或多种；

所述抗氧剂选自α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、Δ-生育酚、混合型生育酚、生育酚醋酸酯、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯和花青素中的一种或多种；以及

所述稳定剂选自甘油、丙二醇、微晶纤维素、卡拉胶、瓜尔胶、明胶、油酸、PE、胆固醇中的一种和/或多种。

8.根据权利要求2所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其进一步包括：选自酸度调节剂、香精香料以及稀释剂中的一种或多种。

9.根据权利要求7所述的包含灵芝孢子油和灵芝多糖的组合物，其中，所述酸度调节剂选自柠檬酸、柠檬酸钾、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸钠、柠檬酸钾、磷酸、盐酸、柠檬酸一钠、磷酸盐、硫酸钙、乳酸钙、己二酸、乳酸、乙酸钠、L(+)-酒石酸和酒石酸、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化钠；以及所述稀释剂为水。

10.根据权利要求1至8中任意一项所述的包含灵芝三萜和灵芝多糖的组合物在制备用于免疫调节和抗疲劳的药物或保健品中的用途。