CN101897668B - 一种奥沙利铂脂质体及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种奥沙利铂脂质体及其制备方法和用途。所述奥沙利铂脂质体含有奥沙利铂，磷脂，和胆固醇；所述磷脂以其总重量计，其中磷脂酰胆碱(PC)的重量百分含量为75-90％，磷脂酰甘油(PG)和磷脂酸(PA)的重量百分含量之和为10-25％；奥沙利铂和磷脂的重量比为1∶3-20，胆固醇和磷脂的重量比为1∶2-10。

Description

一种奥沙利铂脂质体及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及药物脂质体领域，尤其涉及一种奥沙利铂脂质体及其制备方法和用途。

背景技术

奥沙利铂是第三代铂类抗癌药，由瑞士Debiopharm公司研究开发，法国赛诺菲公司生产销售，1996年10月在法国率先上市。2004年FDA批准注射用奥沙利铂与5-氟脲嘧啶和亚叶酸联合用于进展期结肠直肠癌的一线治疗。现已上市的奥沙利铂制剂有水针和冻干粉针。奥沙利铂对中晚期结肠直肠癌疗效显著，但随着奥沙利铂在临床上的大量应用，其不良反应也被不断发现和报告。神经毒性是奥沙利铂最常见的剂量限制性毒性，约85％-95％的患者在使用后发生急性短暂的神经毒性，在剂量为130mg/m²时比85mg/m²更常发生。使用奥沙利铂的剂量累积到780-850mg/m²后，约10％-15％患者逐步发展为诱发的累积性神经毒性。此外，胃肠道反应、骨髓抑制也是奥沙利铂常见的不良反应。

脂质体是一种生物相容性好的给药系统，作为抗肿瘤药物的输送载体，可提高药物的肿瘤靶向性，降低药物毒性，因此受到人们的关注。将奥沙利铂制成脂质体输送至体内，可将药物更好的靶向至肿瘤部位，提高药物的抗肿瘤作用，降低其毒性反应。

奥沙利铂为水溶性药物，制备成脂质体之后，包封率不高且容易发生渗漏。既要保持脂质体较高的包封率，又不能因此降低脂质体中的药物浓度，这是制备奥沙利铂脂质体的一个难点。

普通脂质体进入体循环之后，会很快的被巨噬细胞识别并吞噬，以至于不能到达肿瘤组织。制备成长循环脂质体可避免这种吞噬，有助于实现药物的肿瘤靶向。目前，制备长循环脂质体的一个常用技术，是在脂质体的制备过程中加入PEG化磷脂(如聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，简称PEG2000-DSPE)，以使脂质体具备长循环的功效。

中国专利200310124776.6、200710025130.0和WO/2007/099377中公开了奥沙利铂长循环脂质体，它们都采用PEG2000-DSPE使脂质体具有长循环特性。其中WO/2007/099377用反相胶束法提高奥沙利铂脂质体的包封率：先将阳离子型药物奥沙利铂与带负电荷的酸性磷脂——二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)制成共轭物反相胶束，再与空白脂质体混合孵育，通过膜融合，将药物-磷脂共轭物反相胶束包封于脂质体内，减少药物向外水相渗漏。该专利所采用的酸性磷脂为合成磷脂，价格昂贵；制得的药物-磷脂共轭物反相胶束在50℃以上才能保持稳定，低于50℃会迅速产生大量沉淀；反相胶束与空白脂质体的膜融合过程条件苛刻，二者混合后极易产生沉淀。整个工艺流程的技术要求较高，普及性不强。此外，杨美燕的博士论文《奥沙利铂长循环热敏脂质体研究》采用冻融循环工艺试图提高脂质体的包封率，但结果仅将包封率提高至30％，未能很好的解决包封率低的问题。

因此，本领域迫切需要提供一种价廉、工艺简单的制备奥沙利铂脂质体的方法，并且要求所获得的脂质体包封率高、药物浓度高。

发明内容

本发明旨在提供一种奥沙利铂脂质体。

本发明的另一个目的是提供所述奥沙利铂脂质体的制备方法。

本发明的再一个目的是提供所述奥沙利铂脂质体的用途。

本发明的第四个目的是提供一种含有所述奥沙利铂脂质体的药物组合物。

在本发明的第一方面，提供了一种奥沙利铂脂质体，所述奥沙利铂脂质体含有奥沙利铂，磷脂，和胆固醇；

所述磷脂以其总重量计，其中磷脂酰胆碱(或称卵磷脂，phosphatidylcholine，简称PC)的重量百分含量为75-90％，磷脂酰甘油(phosphatidyl glycerols，简称PG)和磷脂酸(phosphatidic acid，简称PA)的重量百分含量之和为10-25％；

奥沙利铂和磷脂的重量比为1∶3-20，胆固醇和磷脂的重量比为1∶2-10。

在另一优选例中，以所述脂质体的总体积计，奥沙利铂的浓度为2-5mg/ml。

在另一优选例中，所述奥沙利铂脂质体的粒径为120-140nm。

在另一优选例中，奥沙利铂和磷脂的重量比为1∶3-20。

在另一优选例中，所述奥沙利铂脂质体还含有聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)；所述聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺占总脂质体的摩尔分数为5-9％。

在另一优选例中，所述奥沙利铂脂质体的粒径为130-150nm。

在另一优选例中，所述的磷脂是天然蛋黄磷脂。

在另一优选例中，所述奥沙利铂脂质体的包封率为85-99％；较佳地，包封率为91-95％。

本发明的第二方面，提供了一种如上所述的本发明提供的奥沙利铂脂质体的制备方法，所述方法包括步骤：

(1)将胆固醇、磷脂和有机溶剂混合，得到有机相；

(2)将奥沙利铂和缓冲液混合，得到水相；

(3)将步骤(1)和(2)得到的有机相和水相混合，得到反相胶束；和

(4)除去有机溶剂得到如上所述的本发明提供的奥沙利铂脂质体；

所述磷脂以其总重量计，其中磷脂酰胆碱(或称卵磷脂，phosphatidylcholine，简称PC)的重量百分含量为75-90％，磷脂酰甘油(phosphatidyl glycerols，简称PG)和磷脂酸(phosphatidic acid，简称PA)的重量百分含量之和为10-25％；

奥沙利铂和磷脂的重量比为1∶3-20，胆固醇和磷脂的重量比为1∶2-10；

所述的有机溶剂选自氯仿、乙醚、或其混合。

在另一优选例中，所述缓冲液pH5.0-7.4。

在另一优选例中，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、或醋酸-醋酸钠缓冲液；酸根离子的总浓度为0.05-1M。

在另一优选例中，所述有机溶剂是氯仿和乙醚的混合物，两者的体积比为1∶4-4∶1。

在另一优选例中，所述有机相和水相的体积比为3-10∶1。

在本发明的第三方面，提供了一种如上所述的本发明提供的奥沙利铂脂质体的用途，用于制备治疗癌症的药物。

在本发明的第四方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物中含有如上所述的本发明提供的奥沙利铂脂质体和药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的药物组合物是注射制剂。

据此，本发明提供了一种价廉、工艺简单的制备奥沙利铂脂质体的方法，并且要求所获得的脂质体包封率高、药物浓度高。

附图说明

图1显示了实施例11和实施例15得到的奥沙利铂脂质体III和长循环奥沙利铂脂质体III的体外释放情况。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现了一种与奥沙利铂有高度亲合力的、价廉易得的磷脂，通过所述磷脂和奥沙利铂之间的相互作用，可以得到稳定的反相胶束组合物，该组合物在0-40℃范围内可稳定存在至少30min，便于进一步处理；同时，在制得的反相胶束组合物的基础上，采用简单易控的工艺流程，反相胶束自发的转变为脂质体，避免了条件苛刻的膜融合过程，制备得到稳定的、具备较高浓度、高包封率的奥沙利铂脂质体。

具体地，所述磷脂中，以该磷脂的总重量计，必需含有重量百分比为75-90％的PC，同时，该磷脂中，以该磷脂的总重量计，其中的PG和PA的重量百分比之和必须在10-25％。所述的磷脂优选天然蛋黄磷脂。

如本文所用，“奥沙利铂”的结构如式I所示：

式I

如本文所用，“天然蛋黄磷脂”是指一种从蛋黄中分离得到的混合物，其中含有磷脂酰胆碱(或称卵磷脂，PC)、磷脂酰甘油(PG)和磷脂酸(PA)，可以使用本领域常规的方法制备得到，例如但不限于，超临界二氧化碳从蛋黄中提取；也可以通过商业渠道获得，例如但不限于，Lipoid公司，Degussa公司等。优选纯度为75-90％的天然蛋黄磷脂，其中PG和PA的重量百分含量之和为10％-25％。

如本文所用，“天然蛋黄磷脂的纯度”是指以其总重量计，其中PC的重量百分含量，这也是本领域所常用的。在本领域中，如果不指明纯度，一般表示天然蛋黄磷脂的纯度是99％或以上。

如本文所用，磷脂酰胆碱(或称卵磷脂，phosphatidylcholine，简称PC)的结构如式II磷脂酰甘油(phosphatidyl glycerols，简称PG)的结构如式III所示，磷脂酸(phosphatidic acid，简称PA)的结构如式IV所示：

式II

式III

式IV

如本文所用，“磷脂(phospholipid，PL)”是指具有由磷酸相连的取代基团(含氨碱或醇类)构成的亲水头(hydrophilic head)和由脂肪酸链构成的疏水尾(hydrophobic tail)的物质。可以含有一种或一种以上所述结构的物质。优选甘油磷脂(phosphoglyceride)。

奥沙利铂脂质体

本发明提供的奥沙利铂脂质体含有奥沙利铂，磷脂，和胆固醇；所述磷脂以其总重量计，其中PC的重量百分含量为75-90％，PG和PA的重量百分含量之和为10-25％；奥沙利铂和磷脂的重量比为1∶3-20，胆固醇和磷脂的重量比为1∶2-10。本发明提供的奥沙利铂脂质体中奥沙利铂的浓度为2-5mg/ml；粒径为120-140nm。

本发明还提供一种可称为长循环奥沙利铂脂质体的奥沙利铂脂质体，所述脂质体中还含有PEG化磷脂，优选PEG2000-DSPE；所述PEG2000-DSPE占总脂质体的摩尔分数为5-9％；所述长循环奥沙利铂脂质体的粒径为130-150nm。

本发明提供的奥沙利铂脂质体或长循环奥沙利铂脂质体的包封率为85-99％；较佳地，为91-95％。

如本文所用，“包封率(encapsulation rate；entrapment efficiency)”是指脂质体能包裹活性物质(或称药物)的程度，脂质体是药物载体，包封于其中的药量与脂质体系统(或称系统，或称脂质体)中总药量之百分比称为包封率。可以通过本领域熟知的方法进行测定，例如但不限于，凝胶柱层析、离心超滤法、和透析法等，通过分离和测定未包封药物的量，并测定脂质体系统中总药量，通过如下公式计算包封率。

制备方法

本发明提供奥沙利铂脂质体的制备方法，是在制备得到反相胶束组合物的基础上，通过去除其中的有机溶剂，使反相胶束自发转变为脂质体。

反相胶束的制备方法包括以下步骤：

(1)将胆固醇、磷脂和有机溶剂混合，得到有机相；

(2)将奥沙利铂和缓冲液混合，得到水相；和

(3)将步骤(1)和(2)得到的有机相和水相混合，得到反相胶束。

奥沙利铂和磷脂的重量比为1∶3-20；胆固醇和磷脂的重量比为1∶2-10；所述的有机溶剂选自氯仿、乙醚、或其混合；氯仿和乙醚的混合物中两者的体积比为1∶4-4∶1。

所述缓冲液pH5.0-7.4，浓度为0.05-1M。所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、或醋酸-醋酸钠缓冲液。

所述有机相和水相的体积比为3-10∶1。

可以使用本领域常规的方法除去反相胶束中的有机溶剂，例如但不限于，减压蒸发、常压蒸发；然后通过本领域熟知的方法挤出一定粒径的脂质体，并经过常规手段(如透析)去除游离药物得到本发明提供的奥沙利铂脂质体。如果在转变反相胶束的步骤(1)中还加入PEG化磷脂，便能得到长循环奥沙利铂脂质体。

用途

本发明提供的奥沙利铂脂质体可用于治疗癌症，可以将有效量的本发明提供的奥沙利铂脂质体和药学上可接受的载体混合得到药物组合物。

如本文所用，术语“含有”或“包括”包括了“包含”、“基本上由……构成”、和“由……构成”。

如本文所用，术语“基本上由……构成”指在组合物中，除了含有必要成分或必要组份之外，还可含有少量的且不影响有效成分的次要成分和/或杂质。例如，可以含有甜味剂以改善口味、抗氧化剂以防止氧化，以及其他本领域常用的添加剂。

如本文所用，术语“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、润湿剂或乳化剂、矫味剂、pH缓冲物质等。

本发明优选的药物组合物是注射剂。使用药物组合物时，是将安全有效量的奥沙利铂脂质体或长循环奥沙利铂脂质体施用于哺乳动物，其中该安全有效量通常至少约100mg/m²，而且在大多数情况下不超过约400mg/m²，较佳地该剂量是约100mg/m²-350mg/m²。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

本发明的主要优点在于：

1、本发明提供的奥沙利铂脂质体或长循环奥沙利铂脂质体包封率高，载药量高。

2、本发明提供了一种简便、价廉的奥沙利铂脂质体或长循环奥沙利铂脂质体的制备方法。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。

本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

下述实例中，奥沙利铂购自Lipoid公司或Degussa公司，胆固醇购自国药集团化学试剂有限公司，PEG2000-DSPE购自Lipoid公司；

下述实例中，天然蛋黄磷脂和天然大豆磷脂的纯度都是以其总重量计，其中PC的重量百分含量；

下述实例中，反相胶束的稳定性检测方法为：水相和有机相的混合物经冰浴超声后，观察是否形成澄清的单相分散体系或分散均匀的带有乳光的分散体系(Francis Szoka，JR.，Demetrios Papahadjopoulos，Procedure for preparation ofliposomes with large internal aqueous space and high capture by reverse-phaseevaporation，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75(1978)，4194-4198)；

下述实例中，包封率的测定方法为：透析法、离心超滤法

下述实例中，室温是25℃

实施例1

制备稳定的反相胶束I

奥沙利铂	4.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为90％，PG+PA 10％，Lipoid公司)	80.0mg
胆固醇	8.0mg
		氯仿/乙醚(4∶1，v/v)	10ml
醋酸-醋酸钠缓冲液(0.05M，pH5.0)	1ml

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为90％)、胆固醇，置于茄型瓶中，加入10ml氯仿/乙醚混合溶剂(4∶1，v/v)使其溶解；称取4.0mg奥沙利铂，用醋酸-醋酸钠缓冲液(0.05M，pH5.0)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束I，室温下稳定存在30min以上。

实施例2

制备稳定的反相胶束II

奥沙利铂	8.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为75％，PG+PA 25％，Degussa公司)	24.0mg
胆固醇	12.0mg
		氯仿/乙醚(1∶4，v/v)	3ml
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(1M，pH6.2)	1ml

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为75％)、胆固醇，置于茄型瓶中，加入3ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取8.0mg奥沙利铂，用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(1M，pH6.2)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束II，室温下稳定存在30min以上。

实施例3

制备稳定的反相胶束III

奥沙利铂	6.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为80％，PG+PA 20％，Lipoid公司)	50.0mg
胆固醇	12.5mg
		氯仿/乙醚(1∶4，v/v)	5ml
磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)	1ml

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为80％)、胆固醇，置于茄型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取6.0mg奥沙利铂，用磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束III，室温下稳定存在30min以上。

实施例4

制备稳定的反相胶束IV

奥沙利铂	6.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为80％，PG+PA 20％，Lipoid公司)	50.0mg
胆固醇	12.5mg
		PEG2000-DSPE	18.8mg
氯仿/乙醚(1∶4，v/v)	5ml
		磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)	1ml

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为80％)、胆固醇、PEG2000-DSPE，置于茄型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取6.0mg奥沙利铂，用磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束IV，室温下稳定存在30min以上。

对比例1

不稳定的反相胶束1

奥沙利铂	6.0mg
		天然大豆磷脂(纯度＞99％，PG+PA＜1％，Lipoid公司)	50.0mg
胆固醇	12.5mg
		氯仿/乙醚(1∶4，v/v)	5ml
磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)	1ml

制法：按处方量称取天然大豆磷脂(纯度＞99％)、胆固醇，置于茄型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取6.0mg奥沙利铂，用磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，得到的反相胶束1在室温下迅速分层、产生沉淀。

对比例2

不稳定的反相胶束2

奥沙利铂	6.0mg
		天然大豆磷脂(纯度为80％，PG+PA20％，Lipoid公司)	50.0mg
胆固醇	12.5mg
		氯仿/乙醚(1∶4，v/v)	5ml
磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)	1ml

制法：按处方量称取天然大豆磷脂(纯度80％)、胆固醇，置于茄型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取6.0mg奥沙利铂，用磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，得到的反相胶束2在室温下迅速分层、产生沉淀。

对比例3

不稳定的反相胶束3

奥沙利铂	6.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为50％，PG+PA 50％，Lipoid公司)	50.0mg
胆固醇	12.5mg
		氯仿/乙醚(1∶4，v/v)	5ml
磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)	1ml

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度50％)、胆固醇，置于茄型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取6.0mg奥沙利铂，用磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，得到的反相胶束在室温下迅速分层、产生沉淀。

实施例5-8

分别将实施例2-5中各种物质的用量按比例调整增加1-9倍，同样可得到稳定的反相胶束V-VIII。

实施例9

制备奥沙利铂脂质体I

奥沙利铂	4.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为90％，PG+PA 10％，Lipoid公司)	80.0mg
胆固醇	8.0mg

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为90％)、胆固醇，置于茄型瓶中，加入10ml氯仿/乙醚混合溶剂(4∶1，v/v)使其溶解；称取4.0mg奥沙利铂，用醋酸-醋酸钠缓冲液(0.05M，pH5.0)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束，室温下稳定存在30min以上。

室温减压旋转蒸发(控制真空度为-0.06--0.065MPa)，缓慢去除有机溶剂，反相胶束最终自发转变为脂质体。经聚碳酸酯膜挤出(孔径0.2um和0.1um的聚碳酸酯膜各挤出10次)，粒径达120nm，经透析去除游离药物，得到奥沙利铂脂质体I。药物浓度达2.0mg/ml，包封率达93％。

实施例10

制备奥沙利铂脂质体II

奥沙利铂	8.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为75％，PG+PA 25％，Degussa公司)	24.0mg
胆固醇	12.0mg

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为75％)、胆固醇，置于茄型瓶中，加入3ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取8.0mg奥沙利铂，用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(1M，pH6.2)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束，室温下稳定存在30min以上。

室温减压旋转蒸发(控制真空度为-0.06--0.065MPa)，缓慢去除有机溶剂，反相胶束最终自发转变为脂质体。经聚碳酸酯膜挤出(孔径0.2um和0.1um的聚碳酸酯膜各挤出10次)，粒径达120nm，经透析去除游离药物，得到奥沙利铂脂质体II。药物浓度达3.0mg/ml，包封率达95％。

实施例11

制备奥沙利铂脂质体III

奥沙利铂	6.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为80％，PG+PA 20％，Lipoid公司)	50.0mg
胆固醇	12.5mg

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为80％)、胆固醇，置于茄型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取6.0mg奥沙利铂，用磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束，室温下稳定存在30min以上。

室温减压旋转蒸发(控制真空度为-0.06--0.065MPa)，缓慢去除有机溶剂，反相胶束最终自发转变为脂质体。经聚碳酸酯膜挤出(孔径0.2um和0.1um的聚碳酸酯膜各挤出10次)，粒径达130nm，经透析去除游离药物，得到奥沙利铂脂质体III。药物浓度达4.0mg/ml，包封率达91％。

实施例12

制备奥沙利铂脂质体IV

奥沙利铂	8.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为90％，PG+PA 10％，Lipoid公司)	80.0mg
胆固醇	20.0mg

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为80％)、胆固醇，置于茄型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取8.0mg奥沙利铂，用磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束，室温下稳定存在30min以上。

室温减压旋转蒸发(控制真空度为-0.06--0.065MPa)，缓慢去除有机溶剂，反相胶束最终自发转变为脂质体。经聚碳酸酯膜挤出(孔径0.2um和0.1um的聚碳酸酯膜各挤出10次)，粒径达140nm，经透析去除游离药物，得到奥沙利铂脂质体IV。药物浓度达5.0mg/ml，包封率达91％。

实施例13

制备长循环奥沙利铂脂质体I

奥沙利铂	4.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为90％，PG+PA 10％，Lipoid公司)	80.0mg
胆固醇	8.0mg
		PEG2000-DSPE	24.0mg

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为90％)、胆固醇、PEG2000-DSPE，置于茄型瓶中，加入10ml氯仿/乙醚混合溶剂(4∶1，v/v)使其溶解；称取4.0mg奥沙利铂，用醋酸-醋酸钠缓冲液(0.05M，pH5.0)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束，室温下稳定存在30min以上。

室温减压旋转蒸发(控制真空度为-0.06--0.065MPa)，缓慢去除有机溶剂，反相胶束最终自发转变为脂质体。经聚碳酸酯膜挤出(孔径0.2um和0.1um的聚碳酸酯膜各挤出10次)，粒径达130nm，经透析去除游离药物，得到长循环奥沙利铂脂质体I。药物浓度达2.0mg/ml，包封率达93％。

实施例14

制备长循环奥沙利铂脂质体II

奥沙利铂	8.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为75％，PG+PA 25％，Lipoid公司)	24.0mg
胆固醇	12.0mg
		PEG 2000-DSPE	12.0mg

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为75％)、胆固醇、PEG2000-DSPE，置于茄型瓶中，加入3ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取8.0mg奥沙利铂，用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(1M，pH6.2)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束，室温下稳定存在30min以上。

室温减压旋转蒸发(控制真空度为-0.06--0.065MPa)，缓慢去除有机溶剂，反相胶束最终自发转变为脂质体。经聚碳酸酯膜挤出(孔径0.2um和0.1um的聚碳酸酯膜各挤出10次)，粒径达130nm，经透析去除游离药物，得到长循环奥沙利铂脂质体II。药物浓度达3.0mg/ml，包封率达95％。

实施例15

制备长循环奥沙利铂脂质体III

奥沙利铂	6.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为80％，PG+PA 20％，Lipoid公司)	50.0mg
胆固醇	12.5mg
		PEG2000-DSPE	18.8mg

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为80％)、胆固醇、PEG2000-DSPE，置于茄型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取6.0mg奥沙利铂，用磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束，室温下稳定存在30min以上。

室温减压旋转蒸发(控制真空度为-0.06--0.065MPa)，缓慢去除有机溶剂，反相胶束最终自发转变为脂质体。经聚碳酸酯膜挤出(孔径0.2um和0.1um的聚碳酸酯膜各挤出10次)，粒径达140nm，经透析去除游离药物，得到长循环奥沙利铂脂质体III。药物浓度达4.0mg/ml，包封率达93％。

实施例16

制备长循环奥沙利铂脂质体IV

奥沙利铂	8.0mg
		天然蛋黄磷脂(纯度为80％，PG+PA 20％，Lipoid公司)	80.0mg
胆固醇	20.0mg
		PEG2000-DSPE	30.0mg

制法：按处方量称取天然蛋黄磷脂(纯度为80％)、胆固醇、PEG 2000-DSPE，置于茄型瓶中，加入5ml氯仿/乙醚混合溶剂(1∶4，v/v)使其溶解；称取8.0mg奥沙利铂，用磷酸盐缓冲液(0.05M，pH6.5)1ml使其溶解，然后加至脂质溶液中。涡旋混匀后，短时冰浴超声，形成稳定的反相胶束，室温下稳定存在30min以上。

室温减压旋转蒸发(控制真空度为-0.06--0.065MPa)，缓慢去除有机溶剂，反相胶束最终自发转变为脂质体。经聚碳酸酯膜挤出(孔径0.2um和0.1um的聚碳酸酯膜各挤出10次)，粒径达150nm，经透析去除游离药物，得到奥沙利铂脂质体IV。药物浓度达5.0mg/ml，包封率达91％。

实施例17

奥沙利铂脂质体的体外释放特征

实施例11和实施例15分别制得奥沙利铂脂质体III和长循环奥沙利铂脂质体III，再另外配制相同浓度、相同溶剂的奥沙利铂水溶液。以5％葡萄糖为释放介质，考察上述三种制剂的体外释放特征。结果如图1所示。

结果表明，两种奥沙利铂脂质体均表现出缓慢释放的特征，而长循环奥沙利铂脂质体的药物释放更为缓慢。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims (15)

1.一种奥沙利铂脂质体，其特征在于，所述奥沙利铂脂质体含有奥沙利铂，磷脂，和胆固醇；

所述磷脂以其总重量计，其中磷脂酰胆碱的重量百分含量为75-90％，磷脂酰甘油和磷脂酸的重量百分含量之和为10-25％；

奥沙利铂和磷脂的重量比为1∶3-20，胆固醇和磷脂的重量比为1∶2-10；

所述的磷脂是天然蛋黄磷脂。

2.如权利要求1所述的奥沙利铂脂质体，其特征在于，以所述脂质体的总体积计，奥沙利铂的浓度为2-5mg/ml。

3.如权利要求1所述的奥沙利铂脂质体，其特征在于，所述奥沙利铂脂质体的粒径为120-140nm。

4.如权利要求1所述的奥沙利铂脂质体，其特征在于，所述奥沙利铂脂质体还含有聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺；所述聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺占总脂质体的摩尔分数为5-9％。

5.如权利要求4所述的奥沙利铂脂质体，其特征在于，所述奥沙利铂脂质体的粒径为130-150nm。

6.如权利要求1所述的奥沙利铂脂质体，其特征在于，所述奥沙利铂脂质体的包封率为85-99％。

7.如权利要求6所述的奥沙利铂脂质体，其特征在于，所述奥沙利铂脂质体的包封率为91-95％。

8.一种如权利要求1-7任一所述的奥沙利铂脂质体的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(1)将胆固醇、磷脂和有机溶剂混合，得到有机相；

(2)将奥沙利铂和缓冲液混合，得到水相；

(3)将步骤(1)和(2)得到的有机相和水相混合，得到反相胶束；和

(4)除去有机溶剂得到如权利要求1-7任一所述的奥沙利铂脂质体；

所述磷脂以其总重量计，其中磷脂酰胆碱的重量百分含量为75-90％，磷脂酰甘油和磷脂酸的重量百分含量之和为10-25％；

奥沙利铂和磷脂的重量比为1∶3-20，胆固醇和磷脂的重量比为1∶2-10；

所述的有机溶剂选自氯仿、乙醚、或其混合；

所述的磷脂是天然蛋黄磷脂。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液pH5.0-7.4。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、或醋酸一醋酸钠缓冲液；酸根离子的总浓度为0.05-1M。

11.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂是氯仿和乙醚的混合物，两者的体积比为1∶4-4∶1。

12.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述有机相和水相的体积比为3-10∶1。

13.一种如权利要求1-7任一所述的奥沙利铂脂质体的用途，其特征在于，用于制备治疗癌症的药物。

14.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物中含有如权利要求1-7任一所述的奥沙利铂脂质体和药学上可接受的载体。

15.如权利要求14所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物是注射制剂。

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