CN102525927B

CN102525927B - 一种醋酸奥曲肽制剂及制备方法

Info

Publication number: CN102525927B
Application number: CN 201110456620
Authority: CN
Inventors: 邓意辉; 翟文君; 佘振南; 宋艳志
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2011-12-31
Filing date: 2011-12-31
Publication date: 2013-11-06
Anticipated expiration: 2031-12-31
Also published as: CN102525927A

Abstract

本发明属于药物制剂领域，公开了一种醋酸奥曲肽脂质体前体及制备方法。该前体脂质体中含有醋酸奥曲肽、负电磷脂、冻干保护剂，尚可以含有适量其它脂质，包括磷脂酰胆碱、胆固醇，也可以根据需要加入抗氧剂、pH调节剂等成分醋酸奥曲肽与负电磷脂的摩尔比小于1:1，负电磷脂与冻干保护剂的质量之比为1:1~1:10。发明所采用的工艺为叔丁醇-水共溶剂冷冻干燥法。将冻干品水化后得到的醋酸奥曲肽脂质体/胶束的包封率可达50%以上，并且冻干品和水化所得的醋酸奥曲肽脂质体/胶束都具有良好的稳定性，解决了蛋白质多肽类药物在制备成脂质体/胶束制剂时难以包载的问题。该制备方法简单易行，适合工业化大生产。

Description

一种醋酸奥曲肽制剂及制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种醋酸奥曲肽前体脂质体制剂及制备方法。

背景技术

蛋白质-多肽类药物与传统药物相比，不仅具有用药剂量小、疗效好、毒副作用低等突出优点，同时还具有一些不同于传统药物的新特点，如（1）蛋白质具有空间结构，并且完整的空间结构往往是其发挥活性的基础；（2）蛋白质类药物体内外均不稳定性。在体外，环境中的高温、光照、强酸、强碱等因素均可是蛋白质变性失活；在体内，易受酶、细菌及体液的破坏，导致其半衰期短、清除率高、非注射给药生物利用度低；（3）蛋白质类药物分子量大，通过生物屏障（如细胞膜）的能力较差，更加影响了其药效的发挥。因此，如何设计出安全、有效和稳定的转运蛋白质-多肽类药物的新型给药系统是当今制剂界面临的一个重大难题。

目前，蛋白质-多肽类药物脂质体传递系统的研究是一个十分活跃的领域。将蛋白质、多肽包载入脂质体内，具有众多优点：（1）脂质体的主要成份是磷脂和胆固醇，为哺乳动物细胞膜的天然成分，因此具有良好的生物相容性，有助于蛋白质-多肽类药物透过细胞膜，并在细胞内发挥药效；（2）脂质体可保护蛋白质和多肽免受外界环境因素及体内酶的破坏，提高了此类药物的体内外稳定性；（3）脂质体药物具有一定的靶向性和控释性。

然而，由于蛋白质-多肽类药物具有分子量大、容易变性失活等特点，所以在使用薄膜分散法、逆相蒸发法、钙融合法、表面活性剂处理法或挤出法等常规手段制备蛋白质-多肽类药物脂质体制剂时，常常存在包封率低，易泄露以及药物失活的问题。因此，寻找适合于蛋白多肽药物的脂质体制备方法迫在眉睫。

近年来，冷冻干燥技术广泛地应用于药物制剂的制备，通常情况下，水是唯一的溶剂。但在某些物质不溶于水的情况下，可采用有机溶剂-水共溶剂体系作为溶剂。在众多有机溶剂中，叔丁醇是最为理想的冻干溶剂，其具有多种优势：①凝固点高，纯的叔丁醇在室温下（25 ℃）就可以冻结，与水混合后也可以在零下几度冻结。②蒸汽压较高，有利于升华，缩短冻干时间。③叔丁醇可与水以任意比例混合，从而增大脂溶性药物在水中的溶解度，同时对一些水溶液中不稳定的药物，加入适量的叔丁醇可以抑制药物的分解，增强药物的稳定性。④叔丁醇在冻结过程中可以形成针状结晶，能改变溶质的结晶方式，利于升华。而当少量的叔丁醇加入到水中形成叔丁醇-水共溶剂后，能够改变水的结晶状态，在冻结过程中形成针状结晶，具有更大的表面积，同时冰晶升华后，留下了管状通道，使水蒸汽流动阻力大大减小，升华速率显著提高，因此可用叔丁醇来加快冷冻干燥过程中的传质过程。⑤叔丁醇毒性微弱并在冻干后在制剂中残留量很低，对药物制剂的安全性影响小。

应用叔丁醇-水共溶剂体系进行冷冻干燥可以制备固体分散体及胶束等制剂类型。将难溶于水的药物溶于叔丁醇中，水溶性物质溶解于水中，两者以适当的比例混合，得到可以共同溶解水溶性与脂溶性物质的澄明共溶剂，将此溶液冻干可以得到固体分散体。目前，采用此冻干工艺生产的前列腺素 E 无菌粉末制剂 CAVERJECT ?已在国外上市。

醋酸奥曲肽（Octreotide acetate , 以下简称OCT）是一种人工合成的八肽，与天然的内源性生长抑素有类似的作用，因而叫做生长抑素类似物（somotostatin analogue，SSA）。1982年，瑞士Sandoz公司首先合成了OCT，相比于天然生长抑素，其药理作用更强，半衰期更长，因而得到了广泛的应用。临床上OCT主要用于肢端肥大症、胰腺炎、上消化道出血以及类癌瘤，内分泌瘤等。近年来发现OCT对乳腺癌、大肠癌、肝癌、肺癌等普通实体瘤有良好的治疗效果，从而使其得到了更广泛的关注。自Sandoz公司首先合成了奥曲肽（善宁）后，其水溶液注射剂就开始广泛的应用于临床。1994年，诺华公司生产的醋酸奥曲肽注射液首先获准在我国上市，商品名为“善宁”(Sandostatin^?)，为短效皮下注射制剂。之后，诺华公司开发出一种长效微球制剂，即用 PLGA 包裹奥曲肽的醋酸奥曲肽微球，商品名为“善龙”（Sandostatin LAR^? Depot），2003年在我国上市（中国专利200380103249.5）。但“善龙”制备工艺中有二氯甲烷的引入，而二氯甲烷对生物体的中枢神经系统具有较大的毒性并且具有致突变性，所以必须对溶剂残留进行严格控制，增加了生产成本；此外，其工艺中还引入了硅油和普朗尼克F68，使得制剂的成分复杂，质量控制难度增加。而脂质体作为具有极佳生物相容性的药物载体，可显著改善药物的体内分布并降低毒性，已有Doxil^?等成功案例，所以若将其作为载体装载OCT，不仅可以大大增加药物的体内外稳定性，而且还可以借助实体瘤的EPR（enhanced permeability and retention effect）效应提升OCT的抗肿瘤效果。并且脂质体可以仅由单一磷脂构成，既保证了制剂的安全性，也降低了质量控制的难度。但作为多肽类药物，将醋酸奥曲肽包载入脂质体内亦存在诸多困难，使用常规制备方法难以实现高包封率，所以至今未见关于OCT的前体脂质体、脂质体或胶束的中国专利。

发明内容

发明人在对OCT制剂的研究中意外的发现：将含有醋酸奥曲肽、负电磷脂、冻干保护剂和叔丁醇等成分的混合溶液进行冻干后可得到前体脂质体制剂，其稳定性好、便于运输和储存。将此前体脂质体制剂进行水化后能够得到包封率高、粒径小且均匀的醋酸奥曲肽脂质体或者胶束。OCT前体脂质体、OCT脂质体或OCT胶束的制备工艺简单可控。如果使用薄膜分散法、挤出法、硫酸铵梯度法、乙二胺四乙酸铵梯度法等进行醋酸奥曲肽脂质体的制备均难以达到本发明所述方法的包封率。此外，如果处方中不含负电磷脂，则通过本发明所述的工艺亦无法实现较高的药物包封率。

本发明的具体内容如下：

一种醋酸奥曲肽前体脂质体制剂，其含有醋酸奥曲肽、负电磷脂、冻干保护剂和其他成分。其中醋酸奥曲肽与负电磷脂的摩尔比小于等于1：1；负电磷脂与冻干保护剂的质量之比为1:1~1:10；所述其它成分包括抗氧剂、pH调节剂或金属离子螯合剂中的一种或多种。作为优选，制剂中醋酸奥曲肽与负电磷脂的摩尔为小于等于1:15；负电磷脂与冻干保护剂的质量之比为1:2~1:5。尚可以含有适量其它脂质，包括磷脂酰胆碱、胆固醇，也可以根据需要加入抗氧剂、pH调节剂等成分。

本发明所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂，其中的负电磷脂来源可以是天然的与合成的。所述负电磷脂为磷脂酰甘油（PG）、磷脂酸（PA）、磷脂酰丝氨酸（PS）、磷脂酰肌醇（PI）、心磷脂（双磷脂酰甘油，cardiolipin）中的一种或多种；磷脂酰甘油（PG）具体优选为蛋黄磷脂酰甘油（EPG）、大豆磷脂酰甘油（SPG）、二硬脂酰磷脂酰甘油（DSPG）、二油酰磷脂酰甘油（DOPG）、二棕榈酰磷脂酰甘油（DPPG）、二月桂酰磷脂酰甘油（DLPG）、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油（DMPG）、二癸酰磷脂酰甘油、二辛酰磷脂酰甘油，也包括不对称结构的磷脂酰甘油类衍生物；双二硬脂酰磷脂酰甘油、双二棕榈酰磷脂酰甘油、双二月桂酰磷脂酰甘油、双二肉豆蔻酰磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇包括天然来源的磷脂酰肌醇，以及合成来源的二硬脂酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二月桂酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰磷脂酰肌醇。作为更优选，负电磷脂选自DSPG、DPPG、DOPG、DMPG和二硬脂酰磷脂酰肌醇。

本发明所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂处方中包括冻干保护剂、冻干保护剂选自蔗糖、甘露醇、海藻糖或乳糖中的一种或几种的组合。

本发明所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂的处方中尚可以加入磷脂酰胆碱、胆固醇、亲水性脂质衍生物中的一种或多种。

当在本发明所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂的处方中加入磷脂酰胆碱时，即处方中同时含有醋酸奥曲肽、负电磷脂、磷脂酰胆碱以及冻干保护剂。其中醋酸奥曲肽与负电磷脂的摩尔比小于等于1：1；磷脂酰胆碱与负电磷脂的总质量同冻干保护剂的质量之比为1:1~1:10。作为优选，制剂中醋酸奥曲肽与负电磷脂的摩尔为小于等于1:15；磷脂酰胆碱与负电磷脂的总质量同冻干保护剂的质量之比为1:2~1:5。此处所述的磷脂酰胆碱选自大豆卵磷脂（SPC）、蛋黄卵磷脂（EPC）、氢化大豆卵磷脂（HSPC）、二油酰基磷脂酰胆碱（DOPC）、二硬脂酰基磷脂酰胆碱（DPPC）中的一种或几种的组合。

本发明所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂的处方中还可以加入磷脂酰胆碱和胆固醇，即处方中同时含有醋酸奥曲肽、负电磷脂、磷脂酰胆碱、胆固醇以及冻干保护剂。其中醋酸奥曲肽与负电磷脂的摩尔比小于等于1：1；磷脂酰胆碱与负电磷脂的质量总和同冻干保护剂的质量之比为1:1~1:10，磷脂酰胆碱与负电磷脂的物质的量的总和同胆固醇的物质的量之间的比值为5:1~1:1。作为优选，制剂中醋酸奥曲肽与负电磷脂的摩尔为小于等于1:15；磷脂酰胆碱与负电磷脂的总质量同冻干保护剂的质量之比为1:2~1:5。

此外，本发明所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂的处方中还可以同时加入磷脂酰胆碱、胆固醇和亲水性脂质衍生物，即处方中同时含有醋酸奥曲肽、负电磷脂、磷脂酰胆碱、胆固醇、聚乙二醇脂质衍生物以及冻干保护剂。制剂中醋酸奥曲肽与负电磷脂的摩尔比小于等于1：1；磷脂酰胆碱与负电磷脂的质量总和同冻干保护剂的质量之比为1:1~1:10，磷脂酰胆碱与负电磷脂的物质的量的总和同胆固醇的物质的量之间的比值为5:1~1:1，亲水性脂质衍生物的质量是负电磷脂与磷脂酰胆碱质量总和的0.1~10%。作为优选，制剂中醋酸奥曲肽与负电磷脂的摩尔为小于等于1:15；磷脂酰胆碱与负电磷脂的总质量同冻干保护剂的质量之比为1:2~1:5；磷脂酰胆碱与负电磷脂的物质的量的总和同胆固醇的物质的量之间的比值为5:1~1:1。

本发明所述的醋酸奥曲肽前体脂质体的制备工艺含有以下步骤：

（a）在55~70℃下用叔丁醇溶解负电磷脂，以及可选择性加入的胆固醇、磷脂酰胆碱或聚乙二醇脂质衍生物中的一种或多种，之后加入含有冻干保护剂的醋酸奥曲肽水溶液直至完全溶解，即得到混合溶液；混合溶液中叔丁醇体积分数为5%~95%；

（b）将步骤（a）所得的混合溶液进行冻干，即得到醋酸奥曲肽前体脂质体。

作为优选，步骤（a）中溶解温度为60~65℃，混合溶液中叔丁醇体积分数为20%~75%，混合溶液中磷脂浓度为5~50 mg/mL 。

步骤（b）所述的冻干过程使用常规的冻干工艺，为了使本发明被更好的理解，发明人将典型且较优的冻干方案公开，本领域的技术人员可以根据所提供的的冻干参数容易地实现本发明，当然，只要能实现本发明的目的，对本冻干工艺中的参数可以进行调整，在本发明范围内选择组分都可以实现本发明。

按照设定的冻干曲线进行预冻-抽真空-升华干燥-解析干燥的冻干过程，其中冻干曲线中预冻温度可以是-70~ -85℃，时间可以是2~10小时；冻干曲线中干燥前真空度可以是5~20 Pa；冻干曲线中升华干燥的温度可以是-25~-30℃，时间可以是12~24小时；冻干曲线中解析干燥的温度可以是20~25℃，时间可以是3~5小时。

本发明优点是：按上述工艺制备得到的醋酸奥曲肽制剂外观饱满，进行水化后得到醋酸奥曲肽脂质体或者胶束，其带有明显蓝色乳光，粒径在50~500 nm之间，包封率大于50%。本发明所得醋酸奥曲肽制剂在4 ℃下放置6个月后水化，包封率与粒径均无显著性变化。水化后得到醋酸奥曲肽制剂可以静脉注射、皮下注射、肌肉注射。

具体实施方式

实施例中所用各成分的简称如下

HSPC 氢化大豆卵磷脂 780

DSPC 二硬脂酰磷脂酰胆碱

DPPC 二棕榈酰磷脂酰胆碱 740

DSPG 二硬脂酰磷脂酰甘油 801

DMPC 二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱

S100 大豆磷脂S100

SM 鞘磷脂

Cardiolipin 心磷脂

mPEG-DSPE 聚乙二醇单甲醚-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 2800

mPEG-CHEMS 聚乙二醇单甲醚-胆固醇半琥珀酸酯 2420

mPEG-DPPE 聚乙二醇单甲醚-二棕榈酰磷脂酰胆碱乙醇胺

mPEG-DMPE 聚乙二醇单甲醚-二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺

CH 胆固醇

TPGS d-α生育酚琥珀酸聚乙二醇酯

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但这些实施例不能被理解为限制了本发明的范围，本发明的保护范围由权利要求书所限定，任何在本发明权利要求基础上的改动都是本发明的保护范围。

实施例1 叔丁醇-水共溶剂冷冻干燥法制备醋酸奥曲肽脂质体（1:60）

处方

SPC 300 mg

DSPG 300 mg

制备方法：

1）溶解：称取处方量SPC和DSPG于容器中，加入8 mL叔丁醇，65℃水浴溶解，加入18 mL含10%蔗糖的醋酸奥曲肽溶液（浓度为0.33 mg/mL），继续水浴加入至完全溶解，至溶液呈澄清透明状，分装。

2）冻干：冻干曲线如下：-74℃预冻8小时→-35℃抽真空1小时，最后真空度达到约5 Pa→温度升高至-25℃，保持12小时（升华干燥）→温度升高至20℃，保持3小时（解析干燥），得到前体脂质体。

3）复溶：向前体脂质体中加入2.5 mL5%葡萄糖溶液，分散复溶，即得外观带有明显蓝色乳光的醋酸奥曲肽脂质体制剂。

测得该制剂包封率为98.86%，粒径为150 nm。

实施例2（1:15）

EPC 300 mg

DPPG 66.7 mg

制备方法：

1）溶解：称取处方量EPC、DPPG于容器中，加入4 mL叔丁醇，65℃水浴溶解，加入18 mL含有5%蔗糖（w/v）和5%乳糖（w/v）的醋酸奥曲肽溶液（浓度为0.33 mg/mL），继续水浴加入至完全溶解，至溶液呈澄清透明状，分装。

2）冻干：冻干曲线如下：-74℃预冻8小时→-35℃抽真空1小时，最后真空度达到约10 Pa→温度升高至-25℃，保持12小时（升华干燥）→温度升高至20℃，保持4小时（解析干燥），得到前体脂质体。

测得该制剂包封率为88.10%，粒径为138 nm。

实施例3

处方

EPC 260 mg

DPPG 30 mg

DOPG 30 mg

制备方法：

1）溶解：称取处方量EPC、DPPG和DOPG于容器中，加入4 mL叔丁醇，65℃水浴溶解，加入18 mL含有5%蔗糖（w/v）的醋酸奥曲肽溶液（浓度为0.33 mg/mL），继续水浴加入至完全溶解，至溶液呈澄清透明状，分装。

2）冻干：冻干曲线如下：-74℃预冻8小时→-35℃抽真空1小时，最后真空度达到约5 Pa→温度升高至-25℃，保持12小时（升华干燥）→温度升高至20℃，保持5小时（解析干燥），得到前体脂质体。

3）复溶：向前体脂质体中加入2.5 mL 5%葡萄糖溶液，分散复溶，即得外观带有明显蓝色乳光的醋酸奥曲肽脂质体制剂。

测得该制剂包封率为88.10%，粒径为124 nm。

实施例4

处方

DSPG 73 mg

制备方法：

1）溶解：称取处方量DSPG于容器中，加入1.5 mL叔丁醇，65℃水浴溶解，加入18 mL含有10%（w/v）乳糖的醋酸奥曲肽溶液（浓度为0.33 mg/mL），继续水浴加入至完全溶解，至溶液呈澄清透明状，分装。

2）冻干：冻干曲线如下：-80℃预冻8小时→-35℃抽真空1小时，最后真空度达到约5 Pa→温度升高至-25℃，保持12小时（升华干燥）→温度升高至20℃，保持3小时（解析干燥），得到前体脂质体。

3）复溶：向前体脂质体中加入2 mL5%葡萄糖溶液，分散复溶，即得外观带有明显蓝色乳光的醋酸奥曲肽脂质体制剂。

测得该制剂包封率为73.10%，粒径为115 nm。

实施例5

处方

DLPG 80 mg

制备方法：

1）溶解：称取处方量DLPG于容器中，加入2 mL叔丁醇，55℃水浴溶解，加入18 mL含有5%蔗糖（w/v）和5%乳糖（w/v）的醋酸奥曲肽溶液（浓度为0.33 mg/mL），继续水浴加入至完全溶解，至溶液呈澄清透明状，分装。

测得该制剂包封率为77.10%，粒径为128 nm。

实施例6 薄膜分散法制备醋酸奥曲肽脂质体

表1 脂质体膜材组成

Figure 2011104566202100002DEST_PATH_IMAGE001

注：水化介质为酒石酸盐缓冲液（pH为4.00，浓度为20 mmol/L）

制备方法：称取处方量（表1）膜材至于茄型瓶中，以1：20（w/w）的药脂比加入一定量OCT溶液及适量乙醇，65℃水浴溶解后，在65℃水浴下旋转蒸发除去溶剂，制得磷脂薄膜，将预热至65℃的水化介质以中速加入膜材中，65℃水浴搅拌20min，得脂质体初品，探头超声200×2min+400×4min（工作1S，间歇1S）。依次过0.8、0.45μm微孔滤膜，得OCT脂质体。测得该脂质体制剂包封率小于10%。

实施例7 乙醇注入法制备醋酸奥曲肽脂质体

表2 脂质体膜材组成

注：水化介质为含有OCT（浓度为1.0 mg/mL）的酒石酸盐缓冲液（pH为4.00，浓度为20 mmol/L）

制备方法：称取处方量（表2）膜材于25mL烧杯中，加适量无水乙醇，65℃水浴溶解，以1：20（w/w）的药脂比加入预热至同样温度的水化介质适量，65℃水浴下搅拌20 min，得到OCT脂质体初品。将初品探头超声，超声功率和时间为200 w×2 min +400 w×4 （工作1S，间歇1S），然后依次通过0.8、0.45 μm微孔滤膜，即得OCT脂质体。测得该脂质体制剂包封率小于10%。

实施例8 逆向蒸发法制备醋酸奥曲肽脂质体

表3 脂质体膜材组成

注：水化介质为PBS（pH为6.8，浓度为0.1 mol/L）

制备方法：称取处方量（表3）膜材于茄型瓶中，加入3.0 mL乙醚溶解后，以1：50（w/w）的药脂比加入1.0 mLOCT溶液，在温度小于10℃的水浴中超声3 min，至形成均匀分散体。将混合物置于旋转蒸发仪中，室温减压除去有机溶剂，加入一定量水化介质，继续减压蒸发15min，除去残余乙醚，即得OCT脂质体初品。探头超声200×2min+400×4min（工作1S，间歇1S）。依次过0.8、0.45μm微孔滤膜，得OCT脂质体。测得该脂质体制剂包封率为21.57%。

实施例9 硫酸铵梯度法制备醋酸奥曲肽脂质体

表4 脂质体膜材组成

注：水化介质为200 mmol·L-1 的(NH₄)₂SO₄溶液

制备方法：65 ℃水浴中，用10%乙醇（v/v）溶解处方量（表4）膜材，挥除乙醇后，以中速注入适量预热至相同温度的水化介质，孵育20 min，制得脂质体初品，探头超声200×2min+400×4min（工作1S，间歇1S），依次过0.8、0.45μm微孔滤膜，即得磷脂浓度为50 mg/mL的空白脂质体。以阴阳混合离子树脂柱除去外水相(NH₄)₂SO₄ ，制备梯度脂质体。以1：20（w/w）的药脂比将OCT溶液与梯度脂质体混合，60℃水浴搅拌10min，冰水浴停止载药，即得OCT脂质体。测得该脂质体包封率小于10%。

由实施例1~5可知，以薄膜分散法、乙醇注入法、硫酸铵梯度法制备的醋酸奥曲肽脂质体包封率均小于10%；以逆向蒸发法制备的脂质体包封率略高，但仍小于25%；而以叔丁醇-水共溶剂冷冻干燥法制备的醋酸奥曲肽脂质体包封率高达98.86%。

实施例10 加入胆固醇对醋酸奥曲肽脂质体包封率及粒径的影响

表5 脂质体膜材组成

Figure 2011104566202100002DEST_PATH_IMAGE005

注：CH为胆固醇

制备方法同“实施例1”。测得该制剂包封率为96.06%，粒径为180 nm。可知加入胆固醇后醋酸奥曲肽脂质体包封率无明显下降，粒径略增大。在本实施例中，将胆固醇的含量调整为30 mg或10 mg，所得包封率分别为85.12%和98.87%，粒径分别为160 nm和132 nm。

实施例11 不同磷脂种类对醋酸奥曲肽脂质体包封率及粒径的影响

表6 脂质体膜材组成

制备方法同“实施例1”，测得各脂质体制剂包封率及粒径见表7。

表7 不同磷脂对脂质体粒径及包封率的影响

处方	1	2	3	4
					平均粒径/nm	150	60	120	280
包封率/%	96.06	98.80	88.26	78.67

实施例12 加入聚乙二醇脂质衍生物对醋酸奥曲肽脂质体包封率及粒径的影响

处方

SPC 30 mg

DSPG 30 mg

CH 20 mg

PEG2000-DSPE 20 mg

制备方法同“实施例1”。

测定所得脂质体包封率及粒径，其平均粒径为160nm，包封率为57.57%。将处方中的mPEG2000-DSPE换成mPEG2000-CHEMS，其它不变，所得脂质体的平均粒径为160nm，包封率为56.95%。证明PEG衍生物降低包封率，mPEG-DSPE的负电基团被PEG屏蔽，对药物的结合影响小。

将处方中的mPEG2000-DSPE换成mPEG1000-DSPE、mPEG2000-DOPE、mPEG1000-DPPE、吐温80、吐温20、TPGS、RH40，其它不变，所得脂质体的平均粒径仍然约为150nm，包封率约为55%。

上述实验结果表明，加入聚乙二醇脂质衍生物后醋酸奥曲肽脂质体包封率明显下降，可能的原因是PEG链在磷脂表面形成空间位阻，阻碍了药物分子与磷脂的接触，从而造成包封率下降。

但我们发现，如果将聚乙二醇脂质衍生物的用量降低为占总脂质质量百分比小于10%时，包封率大于80%，特别是是小于5%时，包封率大于90%。

实施例13 不同药脂比的考察

脂质体处方由奥曲肽与DOPG组成，其比例见表9，制备工艺同“实施例1”。制得的醋酸奥曲肽脂质体，测定其包封率，结果见表8。

表8 不同药脂比下醋酸奥曲肽脂质体的包封率

药脂比/mol/mol	1:1	1：15	1：50	1：100	1：150
						包封率/%	56.12	89.67	96.33	98.81	98.20

奥曲肽的分子量按照1200计算，DOPG的分子量按照800计算。

结果可知，当药物与负电磷脂的比值小于1：15时，醋酸奥曲肽脂质体包封率大于89%；当药脂比为1：100时，脂质体包封率达98.81 %，继续减小药脂比，脂质体包封率无显著性提高。但即使药物与负电磷脂的比为1：1时，本发明所述方法制得的脂质体包封率也明显高于用逆相蒸发法、pH梯度法或硫酸铵梯度法制得的脂质体。

在此处方中加入吐温80、吐温20、TPGS，显微镜下观察到的结构为胶束，包封率大于50%。

冻干赋形剂可以更换为甘露醇、海藻糖或乳糖，或者与蔗糖组合。

采用蛋黄磷脂酰甘油（EPG）、大豆磷脂酰甘油（SPG）代替DOPG，或者多余一种磷脂酰甘油物质的组合，得到同样结果。

同样地，可以换成其他负电磷脂，如磷脂酸（PA）、磷脂酰丝氨酸（PS）、磷脂酰肌醇（PI）、心磷脂（双磷脂酰甘油，cardiolipin）中的一种或多种，也能够得到同样结果。

实施例14 长期稳定性实验

取三批实施例6中制备的醋酸奥曲肽脂质体冻干品，密封，在4±2℃条件下避光放置，分别于0、1、3、6个月复溶，观察各制剂的状态并测定制剂粒径及包封率，结果见表9。

表9 长期稳定性试验结果

Figure 2011104566202100002DEST_PATH_IMAGE007

注：+表示复溶后制剂状态均匀，带明显蓝色乳光，无沉淀。

结果表明，实施例6中的醋酸奥曲肽脂质体冻干品在4±2℃条件下下避光放置，6个月内复溶外观良好，粒径保持稳定，包封率无显著变化。

Claims

1.一种醋酸奥曲肽前体脂质体制剂，其特征在于，制剂中包括醋酸奥曲肽、负电磷脂、冻干保护剂和其它成分，醋酸奥曲肽与负电磷脂的摩尔比小于1:1，负电磷脂与冻干保护剂的质量之比为1:1~1:10，所述其它成分为抗氧剂、pH调节剂或金属离子螯合剂中的一种或多种，并通过以下步骤制备：

（a）在55~70℃下用叔丁醇溶解负电磷脂，以及加入的胆固醇、磷脂酰胆碱或亲水性脂质衍生物中的一种或多种，之后加入含有冻干保护剂的醋酸奥曲肽水溶液直至完全溶解，即得到混合溶液；混合溶液中叔丁醇体积分数为5%~95%，所述亲水性脂质衍生物选自聚乙二醇单甲醚-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇单甲醚-二棕榈酰磷脂酰胆碱乙醇胺、聚乙二醇单甲醚-二油酰磷脂酰胆碱乙醇胺、聚乙二醇单甲醚-胆固醇半琥珀酸酯、吐温80，吐温20或TPGS中的一种或多种；

（b）将步骤（a）所得的混合溶液进行冻干，即得到醋酸奥曲肽前体脂质体制剂。

2.如权利要求1 所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂，其特征在于，负电磷脂选自蛋黄磷脂酰甘油、大豆磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二癸酰磷脂酰甘油、二辛酰磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、心磷脂、磷脂酸、磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二月桂酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂，其特征在于，所述的冻干保护剂选自蔗糖、甘露醇、海藻糖或乳糖中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂，其特征在于，制剂中加入磷脂酰胆碱，磷脂酰胆碱与负电磷脂的总质量同冻干保护剂的质量之比为1:1~1:10。

5.如权利要求1 所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂，其特征在于，加入磷脂酰胆碱和胆固醇，磷脂酰胆碱与负电磷脂的质量总和同冻干保护剂的质量之比为1:1~1:10，磷脂酰胆碱与负电磷脂的物质的量的总和同胆固醇的物质的量的比值为5:1~1:1。

6.如权利要求1 所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂，其特征在于，含有磷脂酰胆碱、胆固醇和亲水性脂质衍生物，磷脂酰胆碱与负电磷脂的质量总和同冻干保护剂的质量之比为1:1~1:10，磷脂酰胆碱与负电磷脂的物质的量的总和同胆固醇的物质的量之间的比值为5:1~1:1，亲水性脂质衍生物的质量是负电磷脂与磷脂酰胆碱质量总和的0.1~10%。

7.如权利要求4-6任何一项所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂，其特征在于，所述的磷脂酰胆碱选自大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱中的一种或几种。

8.权利要求1所述的醋酸奥曲肽前体脂质体制剂水化后所得的醋酸奥曲肽脂质体或胶束。