CN101199530A - 伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物及其制备和使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种伊曲康唑注射用纳米混悬剂冻干组合物及其制备和使用方法。选择人血清白蛋白作为主要的制剂辅料，采用高压均质纳米乳化技术联合液中干燥技术和冷冻干燥技术，成功实现伊曲康唑纳米颗粒化，可过滤灭菌，并实现冻干粉储藏。将其配制在药学上可接受的水性稀释剂中，重建后伊曲康唑纳米混悬剂的平均粒径小于0.3um，可制成可供静脉注射的纳米混悬剂。它由以下成分组成：其中伊曲康唑与白蛋白的比例为1∶200－10∶1。还包括表面活性剂，支架剂，渗透压调节剂，其他注射剂添加剂等。本发明的纳米混悬剂载药量大，安全、低毒。制剂稳定性高；通针性好；没有溶血作用和静脉血管刺激性；制备方法简便易行，容易实现产品化。

Description

伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物及其制备和使用方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，确切的说是一种伊曲康唑注射用纳米混悬剂冻干组合物及其制备方法和使用方法。

背景技术

伊曲康唑(Itraconazole)为第二代三唑类合成广谱抗真菌药，由4种异构体按等比例组成，对真菌细胞色素P450具有高选择性作用，在皮肤、黏膜及指(趾)甲、头发等真菌易感染部位具有高聚集性，对于治疗由真菌感染引起的疾病具有很好的疗效。广泛用于浅表性和深部真菌感染，其抗菌谱广，耐受性好，主要代谢产物羟基伊曲康唑也有较高的抗真菌活性，该药在治疗曲霉菌、全身性念珠菌以及脑膜炎隐球菌感染上取得了较好疗效。随着广谱抗菌药的大量应用，骨髓或器官移植的开展，糖皮质激素与免疫抑制剂的广泛使用，各种导管介入治疗的普遍采用及艾滋病的出现，使得系统性真菌感染(systemic fungal infection，SFI)与日俱增。系统性真菌感染的特点是诊断困难，病情进展快，死亡率高，有效药物少，并且一般需要长期用药。市售伊曲康唑口服胶囊剂的生物利用度低，限制了它在难以吞咽(如患有粘膜炎)的重症患者及患有侵袭性感染、需尽快达到最低稳态药物谷浓度，且需维持高血药浓度的患者中的应用。目前可注射用抗真菌药物制剂十分缺乏，迫切需要开发安全、高效、稳定、可控的可注射的伊曲康唑制剂。

然而，伊曲康唑在水中的溶解度很低(约50ng/ml)，微溶于乙醇，易溶于二氯甲烷，为弱碱性化合物(pKa＝3.7)，油水分配系数为5.66，只有在低pH条件下，才可在胃液中被离子化。这些理化性质大大限制了其注射制剂的发展，难以采用传统增溶手段实现大剂量静脉输注。PCTWO85/02767和美国专利4,764,604报道了一种通过将伊曲康唑与羟丙基倍他环糊精包合来增加伊曲康唑溶解度的方法。中国专利公开号1596897报道了一种伊曲康唑注射剂及其制备方法，中国专利公开号1739519报道了一种伊曲康唑注射乳剂及其制备方法；中国专利公开号1969830报道了一种伊曲康唑脂质体及其制备方法；但是，伊曲康唑为油水两相皆不易溶解，临床用量每次200mg以上，且初始给药每天两次，一般需要长期用药，给伊曲康唑的注射制剂开发和临床使用带来巨大困难。至今为止，仅由伊曲康唑的环糊精包合物制备的注射液获得上市许可，通过进口现已在中国上市，价格昂贵，制备工艺复杂，且由于其大量使用羟丙基倍他环糊精作为增溶剂，不仅加剧了不良反应和毒副作用，同时也增大了制剂成本，运输和储藏不便，临床使用烦琐，不安全因素增加；静脉注射用乳剂和脂质体的载药性能和稳定性不佳，容易药物析出，也存在增大了制剂成本，运输和储藏不便的问题。中国专利公开号1041655和1970557将伊曲康唑和硫酸及甲磺酸成盐试图通过改变的伊曲康唑成盐属性，增加开发成本和疗效不确定性。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种可直接用于静脉注射的制备方便、稳定性好、效果显著的伊曲康唑注射用冻干纳米混悬剂。本发明还有一个目的是在于提供一种伊曲康唑注射用冻干纳米混悬剂组合物的制备和使用方法。

本发明基于这样的认识：白蛋白是主要的血清蛋白，可与许多内源及外源性化合物结合。药物在人体内代谢动力学数据显示：伊曲康唑在体内主要和蛋白结合，蛋白结合率达99.8％。而且人血清白蛋白具备良好的亲水胶体性质，含有丰富的巯基，具备一定的表面活性，是药剂学常用的冻干保护剂和混悬剂的亲水稳定剂。选择人血清白蛋白作为主要的制剂辅料，采用高压均质纳米乳化技术联合液中干燥技术，实现伊曲康唑纳米颗粒化，并实现冷冻干燥储藏，且复溶迅速、稀释稳定、使用期间稳定，且无毒，无刺激，不溶血，无溶剂残留，可过滤灭菌的实用化的伊曲康唑注射用冻干纳米混悬剂。从而减少环糊精包合制剂的不良反应和毒副作用；解决静脉注射用乳剂、脂质体载药容量小，易析出的问题；解决环糊精包合制剂、静脉注射用乳剂、脂质体等的生产、运输和储藏、临床使用烦琐和制剂成本高昂的问题。

我们对伊曲康唑纳米混悬剂的制备工艺进行了深入地研究，同时采用冷冻干燥技术制得所述产品，有效解决了伊曲康唑临床使用存在的问题。

本发明要解决的第一个技术问题是提供伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物，其中伊曲康唑和白蛋白是必须组分，伊曲康唑与白蛋白的比例为1∶200-10∶1。将其配制在药学上可接受的水性稀释剂中，重建后伊曲康唑纳米颗粒的粒径小于0.3um，制成可供静脉注射的纳米混悬剂。其冻干组合物包含以下组分和百分比：

伊曲康唑0.05-90％

白蛋白5-99.95％

表面活性剂0-5％

支架剂0-10％

渗透压调节剂0-10％

其他必要的注射添加剂诸如抗氧剂、抑菌剂等0-5％

其中所述的白蛋白为无病毒、无菌、无热原、无致免原性的合乎人体静脉输注质量标准的动物和人的血清白蛋白，本发明优选人血清白蛋白(HBA)，在临床常用于危重疾病的治疗。由于白蛋白具有表面活性剂作用和冻干支架剂作用，组合物中所含白蛋白的用量，在能够实现优良冻干成型和迅速复溶重建混悬剂，并实现胶体稳定时间超过6小时的前提下，支架剂、表面活性剂、渗透压调节剂都不是必须的。例如渗透压调节可以由复溶稀释的注射用糖水或生理盐水来提供。表面活性剂选自卵磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂等)，吐温80，泊洛沙姆188，去氧胆酸纳、聚氧乙烯蓖麻油中的一种或其任意混合物；所述的支架剂为多糖或者多元醇，选自蔗糖、乳糖、葡糖糖、海藻糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇中的一种或其任意混合物。本发明的伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物还可以包括渗透压调节剂，选自葡萄糖、氯化纳、甘油、山梨醇、木糖醇中的一种或其任意混合物。

本发明要解决的第二个技术问题是提供伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物的制备方法，第一步是利用高压均质机或高剪切搅拌机或者探针超声仪的高剪切和空化作用，表面活性剂和助表面活性剂的稳定作用下，将伊曲康唑溶于有机溶剂获得的油相和白蛋白溶于注射用水所得的水相，制备得到粒径小于500nm的纳米乳剂。上述有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、乙酸乙酯等或其任意混合物，选择的原则必须是伊曲康唑的良溶剂，并且在水中较少与水互溶，能够通过干燥技术从最终产品中完全除去。本发明优选氯仿或二氯甲烷或其任意混合物，更优选临床毒性小，溶剂残留少的二氯甲烷，其用量为0.5-20％(V/V)优选1-10％(V/V)，制备纳米乳剂时伊曲康唑在二氯甲烷中的浓度影响溶剂蒸发后药物颗粒的析出粒径，本发明优选伊曲康唑在二氯甲烷中的浓度大于25mg/ml，能够制备得到小于200nm的颗粒。上述助表面活性剂为小分子醇类，能减小纳米乳滴的粒径，乙醇为优选，可以在随后的蒸发干燥程序中除去，用量优选为乙醇(V/V)0.2-5％。制备纳米乳剂的乳化设备本发明优选高压均质机，优选先采用高剪切搅拌机混合油相和水相制备初乳，然后采用高压均质机，在低于70℃的制备温度下，50-1500bar的压力下，一次或多次循环，进行纳米乳化。本发明优选200-900bar，保持低于50℃，3-9次循环。为保证白蛋白在强烈的均质环境下不发生变性沉淀，还需调整水相酸碱度接近5-7之间，优选5.6，调节酸碱度可添加醋酸、柠檬酸、磷酸和氢氧化钠等注射剂常用添加剂。表面活性剂在本发明中起到加强乳化能力，减小乳剂粒径或稳定乳剂作用，选自卵磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂等)，吐温80，泊洛沙姆188，去氧胆酸纳、聚氧乙烯蓖麻油中的一种或其任意混合物。其他盐类和杂质保持控制，防止蛋白盐析。以上多项措施能使得冻干后复溶混悬液的稳定性提高到12小时以上。制备过程混合物中各组分用量或比例：

伊曲康唑(W/V)0.01-10％

白蛋白(W/V)0.1-40％

无菌二氯甲烷或氯仿(V/V)1-15％

乙醇(V/V)0.2-15％

其他乳化剂0-20％

注射用水100(pH 5.6)

第二步通过旋转蒸发、真空干燥、喷雾干燥或直接深度冷冻干燥制成稳定的粉末，所得的冻干制品经适量药用水或者等渗液稀释后可迅速重建成胶态分散体。本发明优选先在真空旋转薄膜蒸发器上，控制温度低于60℃，旋转蒸发除尽有机溶剂和乙醇，本发明优选低于45℃，真空1-4小时除去溶剂。然后添加冻干保护或渗透压调节剂等(不是必须的)，本发明优选不添加任何添加剂，以白蛋白实现冻干保护和重组辅组剂的双重作用。接着采用过滤灭菌(0.22um膜滤过或无菌操作)，然后通过超滤浓缩药液，达到装样范围，在无菌条件下冻干10-48小时，封装制得成品。本发明根据临床制剂的需求和具体生产设备，调整冻干的周期。通常可将均匀的制剂置于10至50ml的西林瓶中，预冻温度为-40至-60℃，预冻时间为3小时至24小时。冻干温度为-10至-20℃，冻干时间为10小时至48小时。冻干组合物的最终含水量一般低于3％，有机溶剂残留合格。另外，本发明组合物中不含乙醇等有机溶剂和环糊精等添加剂、吐温等增溶剂，因此避免了毒性和刺激性反应。

本发明要解决的第三个技术问题是提供伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物在制备注射剂中的应用，所述的注射剂包括注射液和无菌粉针。本发明伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物适合临床上应用。在使用前，可加入适量的无菌药用水稀释(例如注射用水、生理盐水、葡萄糖水等)，重建成供静脉滴注用的胶态分散体，本发明优选5％葡萄糖水作为重组稀释剂。参照市售制剂伊曲康唑环糊精包合注射剂的剂量和给药体积设计临床使用方案，优选200mg/20-100ml，静脉滴注或推注，或按临床疾病发展确定剂量，体积和次数。

本发明伊曲康唑注射用纳米混悬剂冻干组合物较之现有技术所具有的优点：1)由于本发明组合物不含环糊精和乙醇等有机溶剂，因此制成供静脉注射的注射剂时，避免了刺激反应，降低了毒副作用；纳米混悬剂粒径微小，不会堵塞毛细血管，载药量大，从而提高了安全性和疗效；2)本发明组合物含有白蛋白作为稳定剂，制成的冻干产品具有良好的储藏稳定性和重组分散稳定性，从而可以方便使用，有利于药物的运输和储存。3)本发明制备工艺简单，成份单纯，所选用标准化制药设备，易于生产控制，有广阔的产业化前景。

附图说明

图1、实施例1制备得到的样品，5％葡萄糖注射液复溶重建后的透射电镜照片。

具体实施方式

为阐明本发明的特征，现在描述它的一些非限定性的实施例。但应将处方和条件的变化理解为说明书的精神和权利要求的范围。以下通过实施例形式的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一步的详细说明，但不应就此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本发明的范围内。

实施例1

二氯甲烷为溶剂的制备过程

以注射用水将符合注射质量要求的人血清白蛋白(HAS)配置成3％(W/V)无菌水溶液，以柠檬酸将pH调节到5.6，柠檬酸与白蛋白中的一些碱性基团成盐，稳定白蛋白，搅拌并添加1.3％的二氯甲烷制备其饱和水溶液。将200ml预先除菌的所述白蛋白溶液，在强力搅拌下与4.0ml无菌二氯甲烷药物溶液，预先溶有0.6g(白蛋白重量的10％)粉末状无菌伊曲康唑(效价＞99％)，采用高剪切搅拌机搅拌混合物制备初乳，滴加无菌乙醇6.0ml，高速搅拌均匀。将混合物初乳在高压均质机内(适当地灭菌)控制制备温度于50℃，经50bar压力下循环1次，经200bar循环1次，经500bar循环3次，处理直至得到纳米乳剂(平均粒径＜0.2微米)，呈现蓝白色乳光。在无菌条件下将其导入旋转薄膜蒸发器的圆底烧瓶中，维持水浴温度40℃，启动真空泵，真空旋转蒸发2小时。采用0.22滤膜过滤、除菌，除去不溶物和大颗粒，在无菌操作条件下，超滤浓缩，测定含量，达到分装要求后，灌入至25ml西林瓶。快速冷冻到-40℃，冻结8小时，接着真空冻干24小时。将得到含有8.12％(W/W)伊曲康唑和2％(W/W)水的冻干疏松粉末，与0.5％葡萄糖水溶液复溶重建形成伊曲康唑浓度为2mg/ml的溶液。得到平均粒径0.185微米的纳米颗粒混悬液，pH＝5.6，4℃放置无任何沉淀和颜色变化，稳定性＞12小时，达到临床注射剂质量要求。

注：说明书附图，图1、为实施例1制备得到的样品，5％葡萄糖注射液复溶重建后的透射电镜照片。

实施例2

氯仿为溶剂的制备过程

以注射用水将符合注射质量要求的人血清白蛋白(HAS)配置成1.5％(W/V)无菌水溶液，将pH调节到7.0。将200ml的所述白蛋白溶液，在强力搅拌下与6.0ml无菌氯仿药物溶液，预先溶有0.3g(白蛋白重量的10％)粉末状无菌伊曲康唑。采用高剪切搅拌机搅拌混合物制备初乳，添加无菌乙醇2.0ml，搅拌均匀。将混合物初乳在高压均质机内(适当地灭菌)控制制备温度于50℃，经200bar循环2次，经500bar循环3次，900bar循环1次，处理直至得到纳米乳剂。在无菌条件下将其导入旋转薄膜蒸发器的圆底烧瓶中，维持水浴温度40℃，启动真空泵，真空旋转蒸发1小时。采用0.22滤膜无菌过滤，快速冷冻到-40℃/24小时，并真空冻干24小时。将得到含有5.74％(W/W)伊曲康唑和2％(W/W)水的冻干疏松粉末，与0.5％葡萄糖水溶液重制形成伊曲康唑浓度为5mg/ml的溶液。得到平均粒径约0.2微米的纳米颗粒混悬液，pH＝7，4℃放置稳定性大于12小时。与实施例1比较，乙醇的用量影响纳米乳剂的粒径，从而析出较大的颗粒，过滤损失较大，再则酸碱性不利于白蛋白稳定，导致混悬剂不能长时间稳定。药物在氯仿中的浓度较低也不利于迅速大量析出更为细小的纳米颗粒。

实施例3

增加氯仿用量的制备过程

以注射用水将符合注射质量要求的人血清白蛋白(HAS)配置成3％(W/V)无菌水溶液，以醋酸和氢氧化钠将pH调节到6.0，用1％的氯仿将水溶液饱和。将200ml所述白蛋白溶液，在强力搅拌下与8.0ml无菌氯仿药物溶液混合，氯仿溶液预先溶有0.6g(白蛋白重量的10％)粉末状无菌伊曲康唑(效价＞99％)，采用高剪切搅拌机搅拌混合物制备初乳，添加无菌乙醇2.0ml，搅拌均匀。将混合物初乳在高压均质机内(适当地灭菌)控制制备温度于50℃，经200bar循环2次，经500bar循环3次，处理直至得到纳米乳剂。在无菌条件下将其导入旋转薄膜蒸发器的圆底烧瓶中，维持水浴温度40℃，启动真空泵，真空旋转蒸发1小时。采用0.22滤膜无菌过滤，快速冷冻到-40℃/24小时，并真空冷冻干燥24小时。将得到含有4.26％(W/W)伊曲康唑和3％(W/W)水的冻干疏松粉末，与0.5％葡萄糖水溶液重制形成伊曲康唑浓度为2mg/ml的溶液。得到的制剂具有0.200微米的纳米颗粒混悬液，pH＝6，4℃放置稳定性＞12小时，过滤导致伊曲康唑相当大的损失，原因是乳剂油相中药物含量较低，氯仿乳剂颗粒大，不稳定，从而析出颗粒较大。

实施例4

含有其他添加剂的制备过程

以注射用水将符合注射质量要求的人血清白蛋白(HAS)配置成5％(W/V)无菌水溶液，滴加0.5ml吐温80，以柠檬酸将pH调节到5.6。将200ml所述白蛋白溶液，在强力搅拌下与6.0ml无菌二氯甲烷混合，再加入1.0g(白蛋白重量的20％)粉末状无菌伊曲康唑原料药物，采用高剪切搅拌机搅拌混合物搅拌30分钟，溶解药物制备初乳，添加无菌乙醇6.0ml，搅拌均匀。将混合物初乳在高压均质机内(适当地灭菌)控制制备温度于50℃，经50bar压力下循环1次，经500bar循环1次，经800bar循环5次，处理直至得到纳米乳剂，平均粒径小于200纳米，在无菌条件下将其导入旋转薄膜蒸发器的圆底烧瓶中，维持水浴温度40℃，启动真空泵，真空旋转蒸发2小时，采用0.22滤膜无菌过滤，添加甘露醇1.5％(W/W)快速冷冻到-40℃/8小时，并冻干24小时。将得到含有5.56％(W/W)伊曲康唑和3％(W/W)水的冻干疏松粉末，与0.5％葡萄糖水溶液重制形成伊曲康唑浓度为2mg/ml的溶液。得到平均粒径约0.2微米的纳米颗粒混悬液，pH＝5.6，4℃放置稳定性＞12小时，达到临床注射剂质量要求。提示白蛋白用量对制备小粒径乳剂和冻干复溶有重要意义，可使用甘露醇等支架剂，但不是必须的，吐温等表面活性剂可以作为乳化剂使用，如果白蛋白用量合适，这些表面活性剂表面活性剂、支架剂都可以节省或不用，为保证输液的安全性，应尽量减少不必要的辅料。

Claims (10)

1.伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物，其特征在于伊曲康唑与白蛋白的比例为1∶200-10∶1，其他组分包含以下组分和质量百分比：

伊曲康唑0.05-90％

白蛋白5-99.95％

表面活性剂0-5％

支架剂0-10％

其他注射剂添加剂0-10％。

2.根据权利要求1所述的伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物，其特征在于：采用5％葡萄糖输液或临床可接受的输液复溶重建，复溶重建后的胶体化纳米混悬体系中伊曲康唑纳米颗粒的平均粒径小于1微米，胶体体系稳定超过6小时。

3.根据权利要求1所述的伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物，所述的白蛋白为合乎人体静脉输注质量标准的动物和人的血清白蛋白，所述的表面活性剂选自卵磷脂、吐温80、泊洛沙姆188、脱氧胆酸纳、聚氧乙烯蓖麻油中的一种或其任意混合物。

4.根据权利要求1所述的伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物，所述的支架剂为多糖或者多元醇，选自蔗糖、乳糖、葡糖糖、海藻糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇中的一种或其任意混合物。

5.根据权利要求1所述的伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物，所述的其他注射剂添加剂为药学上可接受的抗氧剂、抑菌剂、离子络合剂、渗透压调节剂等中的一种或其任意混合物。

6.权利要求1所述的伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物的制备方法，包括如下步骤：

第一步是将伊曲康唑溶于有机溶剂获得的油相和将白蛋白溶于注射用水所得的水相相混合，控制混合体系温度低于60℃，采用药剂学使用的生物相容性酸将pH调节到4-8，先采用高剪切搅拌机混合油相和水相制备初乳，添加乙醇作为助乳化剂，然后采用高压均质机，制备温度低于60℃，均质压力在50-1500bar，一次或多次循环，进行纳米乳化，制备得到粒径小于500nm的纳米乳剂，

第二步通过在真空旋转薄膜蒸发器上，控制温度低于60℃，真空0.1-4小时旋转蒸发除尽有机溶剂和乙醇，

第三步可采用0.22um膜滤过灭菌或在全制备过程中实行无菌操作，通过滤过除去注射剂限制的大颗粒和不溶物，然后在无菌操作条件下，浓缩药液，达到装样范围，分装后真空冻干，得到伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物的疏松粉末，封装。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述的药剂学使用的生物相容性酸是盐酸、柠檬酸、磷酸或醋酸等。

8.根据权利要求6所述的方法，所述的有机溶剂是无菌氯仿或二氯甲烷或其任意混合物，占乳剂混合物的1-15％V/V，伊曲康唑占0.01-10％WN，白蛋白占0.1-40％WN，乙醇用量占0.1-15％V/V。

9.权利要求1所述的伊曲康唑纳米混悬剂冻干组合物在制备伊曲康唑注射剂中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，伊曲康唑注射剂为冻干组合物疏松粉末制备的无菌粉针，在加入选自氯化钠注射液或者葡萄糖注射液或临床可接受的等渗液或高渗输液，制成可直接静脉使用的制剂。

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