CN101322682A - 难溶性药物纳米粒的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，涉及难溶性药物的纳米粒的制备方法。在此方法中，包括以下步骤：(1)将药物溶于第一溶剂(良溶剂)中形成溶液，(2)把溶液与第二溶剂(非良溶剂)混合形成预混悬液，(3)对预混悬液施加能量以形成平均有效粒径小于2μm纳米粒。本发明采用微沉淀和匀质联合技术，将药物以纯的纳米结晶悬浮于非良溶剂(一般为水)中，解决了药物在水中难溶，油中亦难溶而导致很难制成溶液剂的问题，与相应的静脉输注的注射液和片剂、胶囊等口服制剂相比，其不良反应降低，毒副作用减小，生物利用度提高，且有缓释作用，方便患者使用。

Description

难溶性药物纳米粒的制备方法

技术领域

本发明涉及到医药技术领域，涉及一种难溶性药物纳米粒的制备方法。

背景技术

近10年来，药物高通量筛选技术得到了广泛应用，但筛选出的活性化合物大多分子量高、疏水性强。据统计，目前至少有40％的药物因水溶解度问题使用受到限制，一些药物甚至难溶于有机溶剂。在制剂过程中，采用环糊精包合技术、表面活性剂增溶、乳剂、微乳、包合物、固体分散技术、聚合物纳米粒及脂质系统等可解决一些难溶性药物的低生物利用度问题，但均存在载药量低、制备工艺复杂及稳定性较差等问题。而本发明所提到的这种纳米粒给这些药物提供了重现自身价值的机会，近年来国外研究者对此种纳米粒给予了高度重视。该剂型是加入适宜表面活性剂的纳米级“纯药物”的稳定胶状分散体系，又叫作纳米混悬剂(nanosuspensions)。而传统意义上的纳米粒如聚合物纳米粒、固体脂质纳米粒等属基质骨架型，是由高分子聚合物或脂质材料裹载药物组成的固态胶状粒子，与纳米混悬剂的概念有别。此外，对纳米级药物进行表面修饰(如PEG化)后所得的粒子也属于纳米混悬剂的范畴。

近年来的研究发现，纳米混悬剂能增加药物溶出度、提高药物的生物利用度、增加药物稳定性及提高药效，这使得那些溶解性差的抗生素类药物、抗肿瘤药物和一些治疗窗窄的药物能发挥更好的作用。

纳米混悬剂的制备关键是纯药物的纳米粒的制备，美国专利2002/0168402A1、6951656 B2报道了一种通过微沉淀来制备药物亚微米粒的方法。另外美国专利2006/0280786 A1和其它文献报道有微乳法、溶剂蒸发沉淀法、熔融乳剂法、超临界流体法等方法制备药物亚微米粒。但是微沉淀法制备药物亚微米粒时，采用高速分散或加热来添加能量的过程，能量分散不均(导致粒径分布不均)或可能引起药物不稳定；采用微乳法、乳剂法制备药物亚微米粒时，需要的表面活性剂量较大，会带来较多的毒副作用；另外采用蒸发沉淀法制备药物亚微米粒时，也可能会引起药物的不稳定。以上这些问题影响了制剂的长期稳定性和给药途径，或者限制了待开发药物的适用性，从而影响了此制剂的推广。

发明内容

本发明目的在于提供一种简单、快速、耗能少、易规模化的制备难溶性药物纳米粒的方法，从而提供一种解决难溶性药物的低溶解度、高毒副作用、低生物利用度问题的制剂化方法和一种开发难溶性药物的新剂型。

本发明的制备方法采用如下技术方案：(1)将药物溶于第一溶剂(良溶剂)中形成溶液，(2)把溶液与第二溶剂(非良溶剂)混合形成预混悬液，(3)对预混悬液施加能量以形成平均有效粒径小于2μm纳米粒。(4)对此纳米混悬液作进一步的制剂加工。

药物溶液配制过程：稳定剂可以随药物一起加入到良溶剂中，也可以加入到非良溶剂中，或者将不同的稳定剂分别加入到良溶剂和非良溶剂中。另外，药物-稳定剂质量比范围为20∶1-2∶1。

预混悬液制备过程：两种溶液混合时，第一溶液加入到第二种溶液中的形态可以是细流和液滴形式，这一点能通过加入用的器具来控制，如滴管、注射器等。

其具体步骤为：

1)药物溶液的配制将药物加到良溶剂中，60℃，500rpm条件下加热并搅拌，至药物完全溶解，继续搅拌15min，放冷，0.22μm膜过滤，备用；

2)稳定剂溶液的配制把等渗调节剂加入水中，搅拌溶解，再加入稳定剂，搅拌或超声至溶解，最后加入助稳定剂，并超声溶解，0.22μm膜过滤，备用；

或把等渗调节剂加入水中，搅拌溶解，再加入稳定剂，搅拌或超声至溶解；0.22μm膜过滤，备用；

或把溶液分为两部分来配制；一部分是把等渗调节剂加入水中，搅拌溶解，再加入助稳定剂，搅拌或超声至溶解，调pH值至8.0±0.5，用0.22μm膜过滤；另一部分是将稳定剂通过超声或薄膜分散法分散于水中，再将以上两部分混合在一起，备用；

3)稳定剂替代溶液的配制方法同稳定剂溶液的配制，但总量为200ml；

或将稳定剂与等渗调节剂一同加入水中，其余同稳定剂溶液的配制，但总量为200ml；

4)微沉淀的制备将过滤好的药物溶液在200-5000rpm搅拌条件下以1-3ml/min的速度注入稳定剂溶液，同时保持稳定剂溶液的温度在0℃-10℃范围内，药液加完后，维持同样的条件继续搅拌30min，制成预混悬液；

5)高压匀质过程用高压均质机，将预混悬液加入均质机加料斗中，缓慢增加均质压力到操作压力600-1200bar，保持50℃以下，预混悬液均质15-25次，得纳米混悬液，用5ml安瓿取2ml样品测粒径，冷却其余样品至10℃以下；

6)洗涤和替换把上述纳米混悬液在8000-13000rpm的转速下，离心30min，并保持混悬液温度在10℃以下，测定上清液体积并弃去，用新鲜的替代液替换，用药勺将沉淀物定量转移到适当的容器中，用高速分散匀质机重新分散沉淀，分散速度为8000-12000rpm。上述得到的混悬液，再一次经过洗涤和替换操作；

7)第二次高压均质均质条件及过程同5)；

8)分装用5ml安瓿取最后产品2ml测粒径，其余样品冷却至1℃以下，向混悬液中充氮气10min，但其要经过0.22μm膜过滤，测粒径后将每10ml混悬液分装于分装于西林瓶中，备用；

9)冻干将样品在-20℃下预冻2h，快速冷冻到-40℃/24h，然后在-25℃下冻干24h，封装即可。

良溶剂可以选自：N-甲基吡咯烷酮、2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、乳酸、二甲基亚砜、甲醇、乙醇、异丙醇、丙醇、甘油、丙二醇、乙二醇、丁二醇、丙酮、二甲基甲酰胺、聚乙二醇、聚乙二醇酯、聚丙二醇等中的一种或一种以上的混合物；稳定剂可选自：如羟丙基纤维素、盐酸精氨酸、十二烷基硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、维生素E TPGS、羧甲基纤维素钠、吐温80、泊洛沙姆188、普朗尼克127、卵磷脂、羟基卵磷脂、大豆卵磷脂、大豆磷脂、胆固醇、胆酸钠、去氧胆酸钠、Transcutol中的一种或一种以上的混合物。

药物纳米粒制备技术：添加能量过程中，可以选择超声、高速分散匀质、高压匀质中的一种或一种以上的联合方法。

药物纳米粒制备技术：最后制成的剂型可以是注射剂、冻干粉针剂、片剂、丸剂、胶囊剂、凝胶剂、粘膜黏附剂等各种剂型。

本发明的优点在于：将难溶性药物制成“纯药物”纳米粒，可以提高药物的饱和溶解度，从而提高药物的血管外用药的生物利用度；本发明是以较少量的辅料来稳定高药物含量的制剂，因此可以大幅度降低药物制剂的使用体积，结果起到降低制剂中赋形剂、溶剂和增溶剂等辅料所引起的剂量依赖性毒副作用；另外，采本发明中研究的制备方法具有：工艺简单、制剂稳定性好的特点；本发明中的纳米粒具有被动靶向和缓控释作用。

具体实施方式：

下面的实例将为本发明作进一步阐明，并将作为本发明的内容。

实施例1伊曲康唑纳米混悬液的制备

本发明在每100ml伊曲康唑纳米混悬液中含有以下组分：

伊曲康唑1g，N-甲基吡咯烷酮6ml，稳定剂0.2g，助稳定剂0.05g，等渗调节剂2.2g，其余为水。所述的稳定剂为poloxamer 188，所述助稳定剂为脱氧胆酸钠，所述等渗调节剂为甘油。

制备方法：

1.药物溶液的配制将伊曲康唑加到N-甲基吡咯烷酮中，加热并搅拌(60℃，500rpm)，至药物完全溶解，继续搅拌15min，放冷，0.22μm膜过滤，备用。

2.稳定剂溶液的配制把甘油加入水中，搅拌溶解，再加入poloxamer 188，搅拌或超声至溶解，最后加入脱氧胆酸钠，并超声溶解。0.22μm膜过滤，备用。

3.稳定剂替代溶液的配制方法同“稳定剂溶液的配制”，但总量为200ml。

4.微沉淀的制备将过滤好的药物溶液在搅拌条件下(800rpm)以1ml/min的速度注入稳定剂溶液，同时保持稳定剂溶液的温度在0℃-10℃范围内。药液加完后，维持同样的条件继续搅拌30min，最后产品本发明称为“预混悬液”。

5.高压匀质过程用高压均质机，将预混悬液加入均质机加料斗中，缓慢增加均质压力到操作压力600bar，保持50℃以下，预混悬液均质20次，得纳米混悬液，用5ml安瓿取2ml样品测粒径，冷却其余样品至10℃以下。

6.洗涤和替换把上述纳米混悬液在10000rpm的转速下，离心30min，并保持混悬液温度在10℃以下，测定上清液体积并弃去，用新鲜的替代液替换，用药勺将沉淀物定量转移到适当的容器中，用高速分散匀质机重新分散沉淀，分散速度为8000rpm。上述得到的混悬液，再一次经过洗涤和替换操作。

7.分装用5ml安瓿取最后产品2ml测粒径，其余样品冷却至1℃以下。向混悬液中充氮气10min，但其要经过0.22μm膜过滤。粒径测定结果满意后(平均粒径为100-1000nm)，将每25ml混悬液分装于适当的容器中，封口前用氮气充满容器空间。

实施例2紫杉醇纳米混悬液的制备

本发明在每100ml紫杉醇纳米混悬液中含有以下组分：

紫杉醇0.17g，二甲基甲酰胺7ml，稳定剂0.85g，助稳定剂0.05g，等渗调节剂2.0g，其余为水。所述的稳定剂为PE-PEG2000，所述助稳定剂为Transcutol，所述等渗调节剂为甘油。

制备方法：

1.药物溶液的配制将PE-PEG2000加到二甲基甲酰胺中，搅拌溶解，再加入紫杉醇，加热并搅拌(60℃，500rpm)，至药物完全溶解，继续搅拌15min，放冷，0.22μm膜过滤，备用。

2.稳定剂溶液的配制把甘油加入水中，搅拌溶解，再加入Transcutol，搅拌或超声至溶解。0.22μm膜过滤，备用。

3.稳定剂替代溶液的配制将PE-PEG2000与甘油一同加入水中，其余同“稳定剂溶液的配制”，但总量为200ml。

4.微沉淀的制备将过滤好的药物溶液在搅拌条件下(400rpm)以2ml/min的速度注入稳定剂溶液，同时保持稳定剂溶液的温度在0℃-10℃范围内。药液加完后，维持同样的条件继续搅拌30min，最后产品本发明称为“预混悬液”。

5.高压匀质过程用高压均质机，将预混悬液加入均质机加料斗中，缓慢增加均质压力到操作压力1200bar，保持50℃以下，预混悬液均质15次，得纳米混悬液，用5ml安瓿取2ml样品测粒径，冷却其余样品至10℃以下。

6.洗涤和替换把上述纳米混悬液在13000rpm的转速下，离心30min，并保持混悬液温度在10℃以下，测定上清液体积并弃去，用新鲜的替代液替换，用药勺将沉淀物定量转移到适当的容器中，用高速分散匀质机重新分散沉淀，分散速度为12000rpm。上述得到的混悬液，再一次经过洗涤和替换操作。

7.第二次高压均质均质条件及过程同“5.高压匀质过程”。

8.分装用5ml安瓿取最后产品2ml测粒径，其余样品冷却至1℃以下。向混悬液中充氮气10min，但其要经过0.22μm膜过滤。粒径测定结果满意后(平均粒径为50-200nm)，将每10ml混悬液分装于西林瓶中，备用。

9.冻干将样品在-20℃下预冻2h，快速冷冻到-40℃/24h，然后在-25℃下冻干24h，封装即可。

实施例3羟基喜树碱纳米混悬液的制备

本发明在每100ml羟基喜树碱纳米混悬液中含有以下组分：

羟基喜树碱0.1g，二甲基亚酰胺10ml，稳定剂1.0g，助稳定剂0.05g，等渗调节剂2.0g，其余为水。所述的稳定剂为PVP K30，所述助稳定剂为mPEG-DSPE，所述等渗调节剂为甘露醇。

1.药物溶液的配制将羟基喜树碱加到二甲基亚酰胺中，加热并搅拌(70℃，500rpm)，至药物完全溶解，继续搅拌15min，放冷，0.22μm膜过滤，备用。

2.稳定剂溶液的配制把甘露醇加入水中，搅拌溶解，再加入PVP K30 188，搅拌或超声至溶解，最后加入mPEG-DSPE，，并超声溶解。0.22μm膜过滤，备用。

3.稳定剂替代溶液的配制方法同“稳定剂溶液的配制”，但总量为200ml。

4.微沉淀的制备将过滤好的药物溶液在搅拌条件下(600rpm)以2ml/min的速度注入稳定剂溶液，同时保持稳定剂溶液的温度在0℃-10℃范围内。药液加完后，维持同样的条件继续搅拌30min，最后产品本发明称为“预混悬液”。

5.高压匀质过程用高压均质机，将预混悬液加入均质机加料斗中，缓慢增加均质压力到操作压力1000bar，预混悬液均质20次，得纳米混悬液，用5ml安瓿取2ml样品测粒径，冷却其余样品至10℃以下。

6.洗涤和替换把上述纳米混悬液在8000rpm的转速下，离心30min，并保持混悬液温度在10℃以下，测定上清液体积并弃去，用新鲜的替代液替换，用药勺将沉淀物定量转移到适当的容器中，用高速分散匀质机重新分散沉淀，分散速度为8000rpm。上述得到的混悬液，再一次经过洗涤和替换操作。

7.第二次高压均质均质条件及过程同“5.高压匀质过程”。

8.分装用5ml安瓿取最后产品2ml测粒径，其余样品冷却至1℃以下。向混悬液中充氮气10min，但其要经过0.22μm膜过滤。粒径测定结果满意后(平均粒径为70-600nm)，将每2ml混悬液分装于西林瓶中，备用。

9.冻干将样品在-20℃下预冻3h，快速冷冻到-40℃/24h，然后在-25℃下冻干24h，封装即可。

实施例4多西他赛纳米混悬液的制备

本发明在每100ml多西他赛纳纳米混悬液中含有以下组分：

多西他赛纳2g，乙醇10ml，稳定剂1.2g，助稳定剂0.1g，等渗调节剂2.0g，其余为水。所述的稳定剂为卵磷脂，所述助稳定剂为mPEG-DSPE，所述等渗调节剂为聚乙二醇。

1.药物溶液的配制将多西他赛加到乙醇中，加热并搅拌(60℃，500rpm)，至药物完全溶解，继续搅拌15min，放冷，0.22μm膜过滤，备用。

2.稳定剂溶液的配制此溶液分为两部分来配制。一部分是把聚乙二醇加入水中，搅拌溶解，再加入mPEG-DSPE，搅拌或超声至溶解，调pH值至8.0±0.5，用0.22μm膜过滤。另一部分是将卵磷脂通过超声或薄膜分散法分散于水中，再将以上两部分混合在一起，备用。

3.稳定剂替代溶液的配制方法同“稳定剂溶液的配制”，但总量为200ml。

4.微沉淀的制备将过滤好的药物溶液在搅拌条件下(1000rpm)以3ml/min的速度注入稳定剂溶液，同时保持稳定剂溶液的温度在0℃-10℃范围内。药液加完后，维持同样的条件继续搅拌30min，最后产品本发明成为“预混悬液”。

5.高压匀质过程用高压均质机，将预混悬液加入均质机加料斗中，缓慢增加均质压力到操作压力800bar，预混悬液均质25次，得纳米混悬液，用5ml安瓿取2ml样品测粒径，冷却其余样品至10℃以下。

6.洗涤和替换把上述纳米混悬液在12000rpm的转速下，离心30min，并保持混悬液温度在10℃以下，测定上清液体积并弃去，用新鲜的替代液替换，用药勺将沉淀物定量转移到适当的容器中，用高速分散匀质机重新分散沉淀，分散速度为8000rpm。上述得到的混悬液，再一次经过洗涤和替换操作。

7.第二次高压均质均质条件及过程同“5.高压匀质过程”。

8.分装用5ml安瓿取最后产品2ml测粒径，其余样品冷却至1℃以下。向混悬液中充氮气10min，但其要经过0.22μm膜过滤。粒径测定结果满意后(平均粒径为80-800nm)，将每10ml混悬液分装于西林瓶中，备用。

9.冻干将样品在-20℃下预冻2h，快速冷冻到-40℃/24h，然后在-25℃下冻干24h，封装即可。

对于伊曲康唑纳米混悬液，其载药量为1％(w/v)，常用剂量下静注体积为25ml，最大耐受量为300mg/kg，给药频率为1次/2天，4℃储存24个月稳定保持稳定；紫杉醇纳米混悬液，其载药量为0.17％(w/v)，最高有效剂量为60mg/kg，4℃储存16个月稳定保持稳定；羟基喜树碱纳米混悬液，其载药量为0.1％，最大耐受量为15mg/kg，4℃储存18个月稳定保持稳定；多西他赛纳米混悬液，其载药量为2％，最大耐受量为10mg/kg，4℃储存12个月稳定保持稳定。

Claims (8)

1、难溶性药物纳米粒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)药物溶液的配制将药物加到良溶剂中，60℃，500rpm条件下加热并搅拌，至药物完全溶解，继续搅拌15min，放冷，0.22μm膜过滤，备用；

2)稳定剂溶液的配制把等渗调节剂加入水中，搅拌溶解，再加入稳定剂，搅拌或超声至溶解，最后加入助稳定剂，并超声溶解，0.22μm膜过滤，备用；

或把等渗调节剂加入水中，搅拌溶解，再加入助稳定剂，搅拌或超声至溶解；0.22μm膜过滤，备用；

或把溶液分为两部分来配制；一部分是把等渗调节剂加入水中，搅拌溶解，再加入助稳定剂，搅拌或超声至溶解，调pH值至8.0±0.5，用0.22μm膜过滤；另一部分是将稳定剂通过超声或薄膜分散法分散于水中，再将以上两部分混合在一起，备用；

3)稳定剂替代溶液的配制方法同稳定剂溶液的配制，但总量为200ml；

或将稳定剂与等渗调节剂一同加入水中，其余同稳定剂溶液的配制，但总量为200ml；

4)微沉淀的制备将过滤好的药物溶液在搅拌条件下以1-3ml/min的速度注入稳定剂溶液，同时保持稳定剂溶液的温度在0℃-10℃范围内，药液加完后，维持同样的条件继续搅拌30min，制成预混悬液；

5)高压匀质过程用高压均质机，将预混悬液加入均质机加料斗中，缓慢增加均质压力到操作压力600-1200bar，保持50℃以下，预混悬液均质15-25次，得纳米混悬液，用5ml安瓿取2ml样品测粒径，冷却其余样品至10℃以下；

6)洗涤和替换  把上述纳米混悬液在8000-13000rpm的转速下，离心30min，并保持混悬液温度在10℃以下，测定上清液体积并弃去，用新鲜的替代液替换，用药勺将沉淀物定量转移到适当的容器中，用高速分散匀质机重新分散沉淀，分散速度为8000-12000rpm，上述得到的混悬液，再一次经过洗涤和替换操作；

7)第二次高压均质均质条件及过程同5)；

8)分装用5ml安瓿取最后产品2ml测粒径，其余样品冷却至1℃以下，向混悬液中充氮气10min，但其要经过0.22μm膜过滤，测粒径后将每10ml混悬液分装于分装于西林瓶中，备用；

9)冻干将样品在-20℃下预冻2h，快速冷冻到-40℃/24h，然后在-25℃下冻干24h，封装即可。

2.根据权利要求1所述的难溶性药物纳米粒的制备方法，其特征在于：良溶剂选自N-甲基吡咯烷酮、2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、乳酸、二甲基亚砜、甲醇、乙醇、异丙醇、丙醇、甘油、丙二醇、乙二醇、丁二醇、丙酮、二甲基甲酰胺、聚乙二醇、聚乙二醇酯、聚丙二醇等中的一种或一种以上的混合物；稳定剂选自：羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素、盐酸精氨酸、十二烷基硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、维生素ETPGS、吐温80、泊洛沙姆188、普朗尼克127、卵磷脂、羟基卵磷脂、大豆卵磷脂、大豆磷脂、胆固醇、胆酸钠、去氧胆酸钠、Transcutol中的一种或一种以上的混合物；等渗调节剂选自：葡萄糖、甘油、氯化钠、山梨醇、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、1，2-丙二醇中的一种或一种以上的混合物。

3.根据权利要求1所述的难溶性药物纳米粒的制备方法，其特征在于：稳定剂可以跟药物一起加入到良溶剂中，也可以加入到非良溶剂中，或者将不同的稳定剂分别加入到良溶剂和非良溶剂中；药物-稳定剂质量比范围为20∶1-2∶1。

4.根据权利要求1所述的难溶性药物纳米粒的制备方法，其特征在于：预混悬液的制备中，药物溶液加入到稳定剂溶液中的形态可以是细流和液滴形式，速度控制在1ml/min-10ml/min范围内。

5、根据权利要求1所述的难溶性药物纳米粒的制备方法，其特征在于：预混悬液的制备中，稳定剂溶液应控制温度在0℃-10℃内，且搅拌速度应控制在200rpm-5000rpm。

6、根据权利要求1所述的难溶性药物纳米粒的制备方法，其特征在于：高压匀质过程中，可以选择超声、高速分散匀质、高压匀质中的一种或一种以上的联合方法。

7、根据权利要求1所述的难溶性药物纳米粒的制备方法，其特征在于：将混悬液用离心、超滤、透析、喷雾干燥、冷冻干燥中的一种或一种以上的联合方法除去良溶剂，最后在制备成各种剂型。

8、根据权利要求书7所述的难溶性药物纳米粒的制备方法，其特征在于：所述的剂型为注射剂、冻干粉针剂、片剂、丸剂、胶囊剂、凝胶剂、粘膜黏附剂。